Tcnicas de Assepsia e preparo de meios de cultura PCA

1. Introduo
Os micro-organismos so universais. As correntes de ar carregam os
micro-organismos das superfcies terrestres para a atmosfera, e de continente
para continente. (PELCZAR JR., 1996)
A aula prtica da matria de microbiologia foi realizada no dia 12 de
setembro de 2013, a qual foi ministrada pela mestranda Jaqueline Wobeto
juntamente com o professor Dr. Emerson Chamb.
A aula consistiu em informar aos acadmicos as tcnicas de assepsia e
quo importncia elas tem no laboratrio de microbiologia.
Depois de aprender e praticar as tcnicas de assepsia; foi mostrado
alguns materiais e instrumentos usados para a confeco de placas de petri e
tambm aqueles usados no cotidiano, como por exemplo: bquer, erlenmeyer,
entre outros.
Com todos os conhecimentos de assepsia, materiais e instrumentos, foi
realizado por ltimo um meio de cultura PCA para micro-organismos.
2. Objetivos
O objetivo da aula prtica foi informar s tcnicas de assepsia aos
acadmicos; os materiais e equipamentos utilizados e o preparo de um meio de
cultura PCA para micro-organismos.
3. Material
Dentre os materiais utilizados e apresentados em aula podemos citar:
Erlenmeyer;
Bquer;
Tubo de ensaio;
Bico de Bunsen;
Placas de Petri;
Pipeta graduada;
Pipeta automtica;
Ala de platina;
Ala de Drigalski;
Pina;
Lmina;
Lamnula;
Tubo de Durham;
Swabs;
Autoclave;
Balana Analtica;
4. Metodologia

Em Microbiologia importante a esterilizao de meios, solues e

material de vidro ou metal que se utiliza, pois tudo fonte de contaminao e
consequentemente faz com que ocorram alteraes na amostra ou pesquisa
que est se realizando.
A finalidade da esterilizao tornar inactivos ou remover todos os
micro-organismos vivos. (LIGHTFOOT; MAIER, 2003)
Podemos obter essa assepsia atravs de gestos e atitudes tendentes a
manterem o estado de ausncia de micro-organismos contaminantes no meio
em que actua.
Por isso a Mestranda Jaqueline Wobeto aconselhou-nos algumas
tcnicas de assepsia tais como:
Ao entrar no laboratrio a roupa deve estar sempre bem protegida por
um jaleco;
Antes de iniciar qualquer trabalho devemos lavar e desinfectar as mos,
assim como tambm na sada. Jaqueline destacou a importncia dessa
assepsia destacando que as mos so portadoras de microorganismos, por isso vrios laboratoristas devido ao contato das mos
contaminadas com o organismo podem obter uma diarria, conjuntivite,
ect., devido a mal esterilizao.
O acadmico com os cabelos longos deve mante-los amarrados, ainda
mais quando o trabalho exige a utilizao do bico de Bunsen, de forma
a no os queimar. Ela tambm ressaltou que o cabelo uma fonte de
contaminao, por isso, toda vez que passar a mo no cabelo, mas no
s neste, como tambm a pele ou no rosto; devemos esteriliz-las com
lcool.
Todos os materiais usados devem ser esterilizados, ou como no caso
das alas serem flambados.
A bancada do laboratrio deve ser esterilizada. Os acadmicos
esfregaram a bancada com a bucha e o detergente, logo aps esta foi
limpa com o pano e por fim esterilizada com lcool. Para que assim,
possamos diminuir as fontes de contaminao.
Entre outros mtodos de assepsia.
Aps destacar alguns mtodos de assepsia importantes, a mestranda nos
mostrou alguns materiais e equipamentos utilizados no laboratrio de
microbiologia e qual a funo desempenhada por cada um deles. Dentre todos
os materiais podemos citar:

Erlenmeyer e Bquer Usado para dissolver solues e misturas.

Basto Serve para agitar/misturar as solues.
Tubo de ensaio Recipiente de vidro e alongado, usado para
experincia de pouco volume.
Bico de Bunsen Chama de fogo/ queimador de gs.
Placas de Petri um recipiente cilndrico, achatado que serve para
colocar os meios de cultura slidos para obter o crescimento de microorganismos.
Pipeta graduada e automtica Usado para transportar quantidades
precisas de material liquido.

 Ala de platina uma ala de transferncia.

Ala de Drigalski Usado para espalhar/distribuir o meio de cultura na

placa.
Pina utilizada para no pegar com a mo os objetos, para que evite
a contaminao.
Lmina Usada para quando no se consegue identificar o microorganismo na placa, ento retira-se a colnia e coloca-se na lmina para
analisar em microscpico.
Lamnula uma fina placa de vidro, que se coloca em cima do
material na lmina para sua observao ao microscpio.
Tubo de Durham Tubo de vidro, parecido com um tubo de ensaio s
que em miniatura que servem para aprisionar o gs produzido pelos
micro-organismos, em meio lquidos.
Swabs Material parecido com um cotonete, porm maior. Usado para
coletar amostras de micro-organismos, como por exemplo, superfcies
de equipamentos, bebedouros, tetos de vacas, etc.
Autoclave Equipamento destinado esterilizao de materiais e meios
de cultura utilizados em microbiologia, por vapor de gua sob presso.
Balana Analtica Para pesar com mais preciso.

Aps apresentados os materiais e equipamentos, os acadmicos

prepararam um meio de cultura, existem vrios, mas o preparado em aula
foi o meio de cultura PCA para micro-organismos. E este foi feito da
seguinte maneira:
1) Cada meio de cultura possui o seu mtodo de preparar; cada mtodo
tem a sua receita. Assim o primeiro passo que os acadmicos tiveram que
realizar, foi calcular a quantidade necessria do meio de cultura PCA para
100 ml de gua destilada.
Para descobrir, utilizamos a bsica regra de trs:
No rtulo do meio de cultura PCA constava que para cada 23,5g deveria
se utilizar 1000 ml de gua destilada.
23,5 g de PCA ------ 1000 ml de gua destilada
X g de PCA -------- 100 ml de gua destilada
23,5 X 100 / 1000 = X: 2,35 g
Logo, para 100 ml de gua destilada deveremos usar 2,35g de meio de cultura
PCA.
2) Aps descobrir a quantidade exata do meio de cultura PCA para
100ml; foi pesado na balana analtica 2,35g de PCA.
3) Em um bquer foi colocado 100 ml de gua destilada e acrescentado
2,35g de meio de cultura PCA. Esta soluo deve ser agitada, para isso
utilizamos um basto de vidro para agitar at que a soluo fique totalmente
diluda. A soluo foi colocada em uma garrafinha de vidro (chocomilk).
No laboratrio de microbiologia da Unioeste de Marechal Cndido
Rondon, foi adotada as garrafinhas de vidro do achocolatado chocomilk em
vez de usar o bquer. Estas foram lavadas e esterilizadas para o uso. A
primeira justificativa para o uso dessas garrafinhas, que a utilizao de

garrafinhas ou bquer dar os mesmos resultados, por os ambos ter a funo

de um copo. Foi adotada essa tcnica devido ao nmero pequeno de bquer
existentes na faculdade, assim garrafinhas de chocomilk so de baixo custo e
fceis de serem adquiridas.
Mesmo que a soluo aparentemente ficou totalmente diluda, com o
passar dos segundos, esta comeou a decantar e formar grumos no fundo. Por
tal razo, esta foi colocada em um forno micro-ondas para aquecer e assim
formar uma soluo homognea.
Ao colocar a garrafinha no forno micro-ondas leva-se em torno de 4
minutos para terminar esta etapa; porm de minuto em minuto deve-se abrir o
forno micro-ondas e retirar a garrafinha de vidro e agitar. Somente deve-se
parar com esse processo quando ferver e no conter mais grumos.
4) Aps esses processos a garrafinha vai para o aparelho autoclaveequipamento destinado esterilizao de materiais e meios de cultura
utilizados em microbiologia, por vapor de gua sob presso. O meio de cultura
permanece por 15 minutos nesse equipamento.
Mestranda Jaqueline, salientou novamente nessa etapa que cada meio
de cultura tem o seu meio de preparo, e h meios que no precisam de
autoclavagem, por isso na hora de preparar um meio de cultura sempre ler
antes a bula.
Quando desligamos a autoclave, devemos esperar at que saia toda a
presso contida dentro (mesmo funcionamento de uma panela de presso)
para ento abri-la.
Retirada da autoclave o meio de cultura PCA ser esfriado e este se
tornara slido.
5. Resultados e discusso
Os resultados ocorrem de forma como o esperado, obtivemos uma soluo
homognea de 100 ml de gua destilada com 2,35g de meio de cultura PCA.
Tudo ocorreu da forma programada, sem nenhum acidente laboratorial.
6. Concluso
Convivemos com os micro-organismos praticamente em todos os
ambientes naturais como o ar, solo, gua, entre outros. Para evitar a
contaminao do meio devemos utilizar tcnicas de assepsia e esterilizao, os
quais so fundamentais ao se realizar uma amostra ou linha de pesquisa, pois
devemos evitar aquilo que possvel, pois sempre haver o inevitvel.
A aula prtica teve como o objetivo principal o ensino aos acadmicos das
metodologias de esterilizao, materiais e equipamentos utilizados em um
laboratrio de microbiologia; como tambm o preparo de um meio de cultura
PCA. Creio eu, que este objetivo foi alando com sucesso.