SOOO TOUT TSS RESO ORO R EURO URL L UU U RRR R URE AVALIACAO DE IMPACTOS AMBIENTAIS 2. CATEGORIA - LABORATORIAL 2,3. Método: biomarcadores 2.3.1, Técnica: molecular 2.3.2. Técnica: celular A. Explicar biomarcadores. B. Quais as vantagens do uso de biomarcadores molecular (celular na avaliagao de qualidade ambiental, sobre niveis mais altos de organizacao biolégica? C. Quais as limitagdes do uso de biomarcadores na medida do estresse ambiental? MATERIAL DiDATICo: 0 Ecologia Brasiliensis 12 (3) 347 ~ 354, 2008MORO P RST SH SPH SORE RARE RRR ER ARH RU RRR RR REL aae vee Ff légicos ow biomarcadores - pode ser Gil para deter- lagos, nascentes € oceanos contendo uma infinidade (oes Entre os numerosos biomar- de produtos quimicos em diversas concentragdes. cadores €CorUxiESlOgicds propostos nos tillimos anos, Podeaios somar a estas formas de contaminacéo das aqueles baseados na tesposta a0 nivel molecular ¢ ‘iguas os derramamentos de dleo, gasolina etc, que celular trazem respostas sobre os primeiros sinais de representam outa importante fonte de poluigso das pertucbagdo ambiental e vém sendo comumente usa- gua$ (Feht 2004). Tal fonte de poluicao€extremamente dos em programas de biomonitoramento (Nigro e ddanosa aos ecossistemas aquiticos uma vez que muitos a. 2006)( 0 uso de biomarcadores medidos 30 wivel ) dos poluentes que atingem estes ecossistemas sio extremamente toxicos para os organismas vives sendo uma séria ameaga @ biodiversidade destes ambientes. Cabe ressaltar que muitos dos compostos langados nos ambientes aquticos podem soffer biomagnificar3o cis teficos através da cadeia alimentar, celular Ou molecular tem sido proposto como uma ferramenta sensivel de alerta para os efeitos biologi- cos medidos em avaliages da qualidade ambiental (Cajaraville e¢ al. 2000). Como os aspectos comuns entre organismos diferentes se acentuam ptincipal- nos distintos mente 20 nivel molecular, muitos biomarcadores mole-| culares possuetn a vantagem de poderem ser aplicados a uma ampla variedade de organismos vivos (Lam & Gray 2003). Uma das caracteristicas mais importantes dos biomarcadores molecular/celular & que sua avalia- atingindo, desta Forma, locais distantes de seu ponto inicial de descarga em dreas onde nao ha atividade fhumana significativa (Sarkar er af. 2006), como as Bifenilas Policloradas (PCBs) encontradas em ursos "a mudangas nos altos hiveis de organizagao tes haturais € necessério que seja reali ramento destas Areas © que possibilitaria a fomada de ages corretivas (Mousermat et al. 2007). Entretanto| o monitoramento e a avaliago do risco dos ambientes impactados oo podem ser baseados a. Antes da morte ou de doenga manifesta, organis- Fos podem respander a0 sites, através de allerapbes imoleculares, celulares etc. (Monserrat e7 al 2003). “Desta forma, 05 biomarcadotes podem ser usados de| forma preditiva, permitindo que sejam tomadas agdes| de biorremediagao antes que ocorram danos ambien-| {ais irevarsiveis com conseqliéncias ecoldgicas seve fas (Cajaraville e¢ al. 2000). Estes biomarcadores sa de grande importancia na avaliago da exposigao e do: efeitos de diferentes contaminantes, tais como metais, exclusivamente em andlisés quimicas de -amostras| ainbientais, pois estas anilises 030 so apropriadas tna indicagdo e predigao dos efeitos deletérios causa- dos por contaminantes na biota (Barsiene et al. 2006, Cajaraville er af. 2000). Desta forma, para avaliar os impactos dos poluentes na qualidade ambiental & peitinente que sejami mensurados os efeitos que estas substncias causam nos otganismos vivos destes ecos- sistentas (Wells e¢ al. 2001). Neste contexto, um grupo apropriado de respostas bioldgicas ~ marcadares bio- xenobiéticos organticos ¢ compostos organometalicos, | podendo ser medidos através de diferentes abordapens| moleculares. (Ross er al. 2002). Podem, entio, ser uti- iizados em estudos de campo que objetivam caracte- rizar éreas impactadas, onde wna complexa mistura) lde poluentes est4 normalmente preseute (Monserrat e |al. 2007). Outra catacteristica importante dos biomay [cadores é que estes podem detectar exposi¢ao aos of os ef efeitos toxicos dos compostos e ‘seus e seus metabdlitos) que ve et ‘af? alguns casos so rapidameate metabolizados dos (OPS) (Sarkar er a-2006). oss [Em estudos: ecotoxicoldgicos é recomendada a ‘minar 0 grau de impacto na saiide da biota, além de identificar os estressores ou. poluentes responsiveis por estes efeitos (Puentes-Rios trat=2005). Os bio- marcadores podem ser definidos como alteragdes bio- quimicas, celulares, moleculares ou mudangas fisiolé- agicas nas células, fluidos corporeos, tecidos ou érgos de um organismo que sfo indicativos da exposicao ou efeito de um xenobiético (Lam & Gray 2003). A necessidade de se detectar_e avaliar o impacto das ubstincias poluentes, especialmente em_concentra- ‘g5e8_baixas, subletais, no monitoramenta da_quali- ‘dade ambiental, Jevou & avaliacdo ¢ tnedigao de wma gama de respostas bioldgicas em diversas espécies ulilizagio dé uitia bateria de biomarcadores, uma vez que apetia’ avaliago de uma tinica resposta biolégica pode nao refletir de forma ampla os datios & satide dos organismos vivos de determinado ambiente impactado (Zorita et al. 2008). Além disso, 0 uso eco, Bras. 12 (3): 347-354, 2008concomitante de varios biomarcadores € importa para minimizar interpretagbes erréneas nos casos de situagdes complexas de poluigao (Minier er al. 2000, Flammarion et al. 2002, Pacheco & Santos 2002, Deviller 2005). Nestes estudos ¢ importante que seja feita a escolha mais apropriada da espécie indicadors j celular generalizado de estresse & poluigo (Nicholsox & Lam 2005). Lisossomas sao organelas subcelulares circundadas por uma membrana semipermeavel que contém muitas efizimas hidroliticas envolvidas numa série de processos celulares, incluindo digestao, defesa e reprodugao (Pipe 1993, Ferreira & Dolder daqualidade daambienteemestudo,Peixesemoluscos | 2003), além de serem as organelas responsaveis tém ambos sido empregados como organist -sentinelas em programas de biomonitoramento de rotina, tanto em nivel nacional como intemmacional Neste contexto, os moluscos costumnam ser escolhidos, como dora, devido a sua ampla distribuigdo geogréfica, a possibilidade de facil aquisigao no campo e através da aqiticultura, Por outro| lado, a utilizagao de peixes nestes estudos € de grande| importancia devido & posicao-chave destes organismos na cadeia trofica ¢ seu elevado valor comercial, dentre, ‘outras coisas (Viarengo et al. 2007). Cabe ressaltar que o uso de_biomarcadores. a | monitoramento ambiental exige um profundo conhe: Gimento das fungbes biol6gicas dos organismos utili zados. Além disso, & necessério identificar todas as| possiveis variagdes naturais que possam influenciar essas respostas, para padronizar 0 proceso anal ‘tico (Ricciardi er al. 2006). Além da pertinéncial das respostas biolégicas estudadas como potenciais biomascadores de estresse_ambiental, é de impor iacja_primordi luéncia exercida pelas variagbes:naturais causadas por fatores intsinsecos e extrinse6es, pari diferenciar os efeitos da poluicéo da influéncia de outeps:fatores ambientais ¢ das varia- ‘es-fisioldgicas-sazonais nortnais de um_possivel biomarcadof (Gerlet et-al-2007)——__—/— Alguns biomarcadores vém 'sendo usados com freqdéncia em programas de avaliagsio do_ impacto em _coossistemas aquaticos, por possuirem metodo- | pela remog3o de compostos txicos do citosol (Stefanoni & Abessa 2008). Mui cumulam nos 'Bossomas (ions metalicos, substancias A integridade da membrana lisossomal ¢ sua estabilidade costumam ser afetadas por substincias estressoras sendo, a estabilidade destas membranas, | ‘considerada_um indicador_de “bem estar” celulat! (Moore er al. 2006). Embora a capacidade de| seqiiestrar_contaminantes_de_locais_intracelulares} Sensiveis seja um mecanismo protetor essencial, toma ‘4 membrana lisossomal particularmente suscetivel 4) “clevadas concentragses de compostos t6xicos. Com! “txcesso de substincias exégenas, a armazenagem| intralisossomal pode aumentar a permeabilidade da, membrana levando ao efluxo de enzimas bidroliticas, aumento da atividade autolitica da célula (Viarengo 1989, Nicholson 2001). A fragilidade das membranas, lisossomais é quantitativamente relacionada ao nivel de estresse induzido por xenobisticos (Moore 1985).! A estabilidade destas membranas pode ser avaliads aftavés do método chamado de “tempo de retencio do vermelho neutro” (NRRT). De acordo com este inétodo, o corante é seqiiestrado para o compaitimento| lisossomal quando as células vivas so pré incubadas, com vermnelho neutro (NR). Através da visualizagao por microscépio podera ser avaliado se 0 corante vazou para 0 citosol da célula, 0 que caracterizara logia bem fundamentada e de facil desenvolvimento, gerarem repostas em curto espaco de tempo, possu- ‘irem baixo custo de andlise € serem altamente sensi- veis. Nesfe artigo dairemos déstaque a biomiaréadores que vém sendo ulilizados, de forma rotinciré © com”] SuCess0, em programas de avaliacio de ecossistemas Aquaticos. ere es {_MEMBRANA LISOSSOMAL -} eee are A. avaliagio da estabilidade da _membranal Tisossomal vem sendo utiizada como um biomarcador| dano nas membranas lisossomais. O terapo que 0 corante leva para atingir 0 citosol esta relacionado com 0 grau de dano nas membranas (Lowe & Pipe 1994). Muitos estudos tém demonstrado que a favaliagao da permeabilidade da membratialisossomal| é um biomarcador itil, robust, generalizado ¢ Ps asta gama de poluentes ¢ estéo preseates em todas, células nucleadas ndo sendo, desta forma, espécie-| pecificas. Além disso, os lisossomas so facilmente! sualizados em oflulas saugtiineas com ansilia de | microsoSpio (Viarengo et af. 2007). ico uma vez que os lisossomas s4o alvo de uma Oecol. Bras., 12 (3): 347-354, 2008 PPHKHKKKRKKRKKRKRRARRRARARRAARARRARRARARREKKLLLSCKCKLRRRARREDPUTT T PTT T TURP R TSU U RRO RRR R RRR U UU R RRO R RRR RU Uae ON valor deste método come biomarcador geral de poluigao foi demonstrado em varios estudos (Rank lal, 2007). Muitos estudes utilizam as MTs comp ‘ndicadoras do estresse de organismos aquaticos @ et al, 2007) seado congiderado um eusaio de alia. fnetais (Linde ef al. 1999, Linde etal. 2001), demons _ Seasibilidade ¢ robustez| Em conclusio, 3 avaliagao| ‘ug @slabilidade da membrana lisossomal pode ser cousiderada um eficiente indicador inespecifico do estresse celular. Teton ae i ata i | As metalotioneinas (MTs) so proteinas primor- j dialmente citosdticas de baixo pfgso molecular, carac- Terizadas por posstirem altos ‘Diveis de cisteina ¢ ‘de aminodcidos_aromaticos_e bist bistidina ‘Apresentam estabilidade ao calor e possuem alta| afinidade por ions metélicos do grupo IB © IB da tabela periédica (Viarengo et al. 2007, Satkar et al. 2006). Como fungao bioldgica, podemos destacar importantes metais € 2 detoxicago de metais tanto_essenciais quanto_nao_essenciais (Monserrat et al. 2006, Viarengo et al. 2007). A presenga dos grupos tidis (SH) permite que estas | proteiad oe lin ao excoto do cis cana eal FACdis NSERC pr oMeeidT distas Coral ‘drganismo da toxicidade destes compostos inorgainicos restringindo a disponibilidade destes cations a li Tadesejavels do organismo (Monserrat er al. 2006). ‘A_produgio de melalotinneinas 4 induzida pelo aumento da entrada de melais na célula, 0 que torn Sor HAGE DREN Gey exposi¢ao & conlaminagio por_metais (Nicboison & Lam 2005, Viarengo é al. 2007). Sao protein: expressas normalmente nos tecidos de animais j foramidtotificadasemmuitosinvertebrados, incluind. 0s peixes, e em aproximadamente 50 diferent espécies de invertebrados aquiticos, principalment moluscos ¢ crustéceos (Sarkar ef al. 2006). Por essa cais Wa acctilcolinesterase é a enzima tesponsavel Tirando que de fato, o aumento nas concentragées desta proteina esta associado a diminuicao da sensibilidade| | dos.organismos aos metais (Pavicic er al. 1994). _, Cabe ressaltar que a expres MT pode set influeuciada por fatores naturais que afetam a especiagio € biodisponibitidade dos metais, como a salinidade. Desta forma, esta avaliagao deve ser levada em conta na quantificagao € uso da MT' como biomarcador especifico da contaminaco por metais. ‘Além disso, muitos estudos tecentes vém sendo conduzides com intuito de entender de forma mais ampla os papéis das MTs. Neste contexto, estudos focando a estrutura dos promotores dos genes de “MT tém trazido informagdes mais especificas sobre a resposta dos organisms a metais. Evidéncia de indugdo metal-especifica a diferentes isoformas de MT possivelmente aumentaré a especificidade das MTs como biomarcadotas da exposic’o a metais (Monserrat ef al. 2006, Viarengo er al. 2007). ACETILCOLINEST wRease (ace) -| an hidrétise do neurotransmissoracetilcolina presente n} /fendas sindpticas durante a transmissdo colinérgi Esta enzima é inibida por dois grupos de pesticidas, los organofosforados (Ps) e 0s carbamiatos, os quais se combinam covalentemente a residuos de aminodcidos espe et al. 2007).JEstes composts Si0 aiiplamente tutilizados, principalmente na agricultura, e atingem os ecossistemas aquiiticos através de despejos agricolas € turbanos (Viarengo ef al. 2007). Desta forma, estes lcompostos chegam aos tios e ao mat cattsando a {raofo, as MTs se tomaram ferramentas extremamente_ontay tes ecossistemas (Monserrat et al. Steis ud avaliagdoda poluicéo aquifica pormetais(Em 2606) Embora estes pesticidas sejam hidrolizm _eisnd avaligea0 a poluigioaqulica por meta “organismios aqquaticos, as guclas, digestiva esto diretamente envolvidos na entrada, eslocagem eexcrecao de metaise por isso possuem alta al. 1993) -capacidade de sintetizar MTs (Bet A quantificaga eletroqui Oecol. Bras. 12 (3): 347-354, 2008 rim ea afin ‘apidamente no meio ambiente, o atimento ho uso € despejo destes’ compostos € 0 conseqiiente humento de sua concentrag3o no ambiente ocasiona efeitos} téxicas nos organismos destes ecossistemas. Diante/ disso, a avaliagdo da inibigao da atividade da enzima| ACHE se mostra um biomarcador adequado no estudo eeitos-aa-contamTinaGao por pesticidas OP e “areigo ef al. 2007). A metodologia ago espectrofotométrica da atividadeaziméiea € simples, ber Fundamentada ¢ de also usto, © que toma esta eazima um biomarcador} xtremamente ‘itil em biomonitoramentos. PivETsos._| “abathos tem demonstrado 4 relagao entre a atividade cidual de AChE e 03 aiveis destes compostos no acio ambiente. Como exemplo, podemos citar 0 studo realizado por Linde-Arias ef al. (2007) no qual Jo estudadas trés regides da bacia do rio Paraiba do sul, Rio de Janeiro, utilizando, para tanto, uma bateria | le biomarcadores, dentre eles a atividade de ACE. A wnalise desta enzima, em misculo de duas espécies de yeixes, se mostrou eficaz na avaliagao dos efeitos de smpostos OP € carbamatos, além de caracterizar as treas estudas, fornecendo respostas sobre os diferentes rraus de contaminago destas regides. Porém, deve ‘er ressaltado que existe grande diversidade nas jropriedades bioquimicas © na sensibilidade desta sazima 2 agentes anticolinesterdsicos entre diversos yeixes e espécies de invertebrados (Habig ef al. 1988). Estudos in vitro demonstraram uma tendéncia Je espécies de peixes possuirem maior sensibilidade 1 agentes anticolinesterdsicos em comparago com 1 baixa sensibilidade-de espécies de invertebrados 1 estes compostos (Monserrat ef al. 2006) fato que eve ser levado em consideraggo na escolha da sspécie indicadora em trabalhos de monitoramento 4a poluigdo de ecossistemas aqudticos por pesticidas anticolinesterdsicos. MICRONUCLEOS Microniicleos (MN) sao formados por fragmentos) te cromossomos Keen Keéntricos (efeito clastogénice)| 5u por cromossomos inteiro® que 880 completaram| 1 migragdo anafisica da _divisio_celular_(efeito| ineugénico) (Pantaledo er al. 2006) deixando de se incorporados ao niicleo das células filhas durante a ‘nitose. Estes pequenos fragmentos de cromatina} ‘parades do nicleo principal, permanccerdo durante] ‘oda a vida da célula ¢ indicamn quebra cromossmica) Jacdisfungées do fuso_mitdtico, que podem ser] deasionadas por compostos (Oxicos (Bolognesi «7 a. 2006). Muitos dos compostos quimicos langados es Gan peixes geralmente possuem os cramos: fe em grande namero (Al-Sabti & Metcalfe 1995), Por outro lado, 0 teste de microniicleo, que avalia as frequéncia de formagao destes pequenos fragmentos somos pequenos lie cromatina, € uma_técnica_citogenética_bem |eoahecida e facitmente aplicével para avaliar danos is em diferentes cus Saude metodologia utilizada para av aliar os microniicleos ¢ facil e requer apenas o uso de um microscépio. Este teste consiste nz contagem de células que contenhar um ou mais microniicleos citoplasmiticos (Viarengo et al. 2007) ¢ em peixe pode ser analisado em diferentes tipos de células, como por exemplo, eritrécitos petiféricos, células das guelras, rins, figado e até de barbatana. Os eritrécitos periféricos t&m sido mais comumente uilizados, pois evitam a complexidade associada aos procedimentos de preparagao celular ¢ sacrificio do animal. Além disso, a elevada taxa hematopoiéticos revela_uma mitética dos. tecido: resposta rapida & ex danos cromossOmicos causados por esta exposi (Bolognesi e al. 2006). O teste de microniicleo igo genot6xica, revelando os: tem sido amplamente utilizado cm programas de biomonitoramento sendo uma valiosa ferramenta para avaliar exposigdes de organismos aquaticos a substincias genotdxicas, uma vez que genotoxinas podem induzir mudangas no DNA que passam para eragdes seguintes, sendo, o teste de micronicleo, festa forma, um importante sinalizador precoce de| fanos com consequéncias irreversiveis. CITOCROMO P 450 (EROD) ° 1 pie | (MFO) tem papel central no metabolismo oxidative ena detoxicagao de uma gama de substancias de tema monooxigenase de funglio mista ‘ocoméncia natural e xenobidticas (Bonacci ef al 2007). O Citocromo P 450 é uma familia de enzimas componente deste sistema que apresenta muilas isoformas, com diferentes fungdes no mhetabolismo ie compostos endégenos € xenobisticos (Goksoyr & Forlin 1992). Muitas subfamilias do citocromo P-450 2m ambientes aquiticos so genot6xicos, ee ‘so conhecidas por terem seu metabolismo oxidative vausar mutagénese € até mesmo_carcinogénese (Ohe alivado por distintos substratos ¢ dentre clas podemos Hal. ge ai destes efeitos genotéxicos WW bieteaduatica através da andlise de aberragdes somossamiais € dificil pois organismos como os destacar'a subfamilia CYPIA ¢ em especial a enzima | O- desetilase (EROD) devido ao seu srmagao de compostos organicos, etoxicesorufi Oecol Bras. 12 3): 347-354, 2008 reePUREST TOOTS STS C UGG RAT U RRR R UR UU incluindo HPA ‘quimicos €31a0 entre os mais perigosos liberados nos ambientes marinhos (Safe & Phil 1990), podendo impactar de forma severa a biodiversidade aquitica. A enzima EROD, presente tanto em orgonismos vertebrados quanto em jovertel je_transfor “xenobidticos lipofilices ent compostos mais hidrofilicos favorecendo a excreca se ciatincias. Enteatlo, ites metabélites desias_substancias. formados durante este processo de detoxicagao, sio| _penotdxicos € causar| aTtamente reatives podendo s danos ao DNA que emt iiltima instancia podem levar ‘Apés a exposicdo da biola aquatica jo uso desta enzima como Piomarcadordosefeitosdacontaminaciodeambientes jor poluentes orpnicos (Cajaraville et Este biomarcador é talvez um dos mais é considerado extremamente estudados © bem eficaz para deteclar os efeitos de compostos organicos principalmente em peixes (Pacheco ef al 2005). Entretanto, embora em muitos estudos seja eincontrada boa correlacao entre a atividade de EROD cos niveis de compostos organicos no ambiente, uo se pode esperar uma relagio dose — resposta linear centre a atividade da enzima e a concentracio destes xenobiéticos, uma vez que no meio ambiente muitas vezes esto presentes distinlos indutores e inibidores desta enzima. Além disso, outros fatores como temperatura, sazonalidadee horm®nios exuais podem alterar a resposta de EROD, devendo desta forma, serem levados em consideraglo na interpretagio dos resultados. oriundos da avaliagio desta enzima (Cajarabitte et af. 2000). CONCLUSAO © aporte crescente, em corpos d’aguas, de Scustincias téxicas, como os metais ¢ compostos Jprginicos, traz A tonaa necessidade de que os efeitos ‘desles compostos ba biota sejam avaliados com intuito de analisar os danos causados ¢ evitar que estas conseqiiéncias atinjam niveis mais alto de organizagao ccolégica. Junto a isso, somente com a avaliagao do impacto que estes xenobidticos causam nos ecossistemas aquiticos podem ser realizadas medidas corretivas ¢ tomada de aces que limitem 6 uso destes compostos. Neste conlexto, 0 uso de biomarcadores ‘OsCo!. Bras., 12 (3): 347-354, 2008 dos, tem 0 pape s. Estes compustos| é uma ferramenta bastante dil para esta fi Como os biomarcadores téin especificidades distintas ¢ em ambieates aquiticos normalmente podem ser encontrados diversos contaminantes, em programas de biomonitoramento, 0 uso de uma bateria de biomarcadores tem se mostrado mais eficaz que a avaliagao de apenas um indicador de poluigao. Para tum bom resultado de monitoramento é importante que sejam pré-determinados quais biomarcadores serao tilizados € também qual espécie seré indicadora dos danosy levando em consideragao as particularidades da and em estudo além das caracteristicas inerentes de caga biomarcador e da espécie sentinela. Deve- se também considerar os fatores extiinsecos e intrinsecos do processo que possam causar alteragBes tna avaliagdo, para que no sejam tiradas conclusdes erréneas. Em conclusdo, 0 uso de biomarcadores em avaliagdes do impacto da contaminagao de ambientes aquaticos € fortemente recomendado para que se possa produzir dados confidveis que possibilitardo 2 implementagao de medidas adequadas pata a prote¢ao efou recuperacio dos ecossistemas aquaticos REFERENCIAS ALSABTI, K: & METCALFE, C.D. 1995. Fish micronuclei forassessing genotoxicity in water. Mutation Research, 343: 121-138. BARSIENE, J: LEHTONEN, KK; KOEHLER, A; BROEG. K; VUORINEN, PJ; LANG, T; PEMPKOWIAK, 3! SYVOKIENE, J; DEDONYTE, V; RYBAKOVAS. A. REPECKA, R; VUONTISIARVI H. & KOPECKA J. 2006: Biomarker tesponses in flounder (Plavichthys flsus) and museel (Mjcilus edulis) ia she Klaipeda-BBtinge area (Baltic Sea). Morine Pollution Bulletin, 33: 422-836. BOLOGNESI, C; PERRONE, E.; ROGGIERI, P; PAMPANTN, DM. & SCIUTTO, A. 2006. Assessment of micronuclei induction in peripheral erythrocytes of fish exposed to xenobidtics under coatolled conditions. Aguatie Toxicology, 78 Suppl 1: S93-98. BEBIANNO, MJ; NOTT, JA. & LANGSTON, Wa. 1993. (Cid tnetaboism in the clam Ruditopes decussata: the role Of rctallothioneins. Aquatic Toxicology, 27: 315-334 BONACCI, S;IACOCCA; A; FOSSIL, S; LANCIM, Ls CARUSO,T;CORSI,1.& FOCARDI’S. 2007. Biomonitoring aquatié envircimental quality in a marine protected area: 2 biomarker approacl. Amba, 36(4): 308-315, DEVILLER, G.; PALLUEL, 0; ALIAUME, C; ASANTHIsag SANCHEZ, is FRANCO, Ns BEANCHETON J & caSel LAS, C 2005. lmgact assessment of various eaing Terns on fh beat wing mores respnse and a accumsan. Ecotoiology and Erronmenlo Sey 61: 99°97 CAIARAVILLE, MP: BEBIANNO, M4; BLASCO. FORTE, (Cz SARASQUETE, C. & VIARENGO, A. 2000, The ust Sc omakers co assess the ingact of pollution in coastal ervirnment oft eran Peninsula practical approach Thrice of the Total Enviconment, 247(2-3). 295-311 esogical fet at contaminated ses 23240 PERRE(EA,AL & DOLDER, H. 2003, Cyrochemical study ar aphiogeness and cae spermalocos in the land EB ember Repilin,Squamats) Acta itochomico, tos.as9.ase ELAMMARION, Ps DEVAUX, As NEHILS, S; MIGEON, 8: TNOURY;P. GARRIC, J. 002. Mulibiomarker responses aemetaaiie (eee A pervert Sfp St 1S FAMENTES RJ0S.D ;ORREGO,R:RUDOLPHA: MENDOZA. Elana Strat tests ote ay es alee cae cae ere ree tease vast coe cates a GOKSOVR. A. & FORLIN,L. 1992. The ocrome P50 See en saa eee Tesbeing agus Tcfgy 2.20730 GoLDEARD, P, LIVINGSTONE, D. & BIRMELIN, C198 a ee eae eee frases. Bucket! Secey Ponectons, 28): 0- = t GUERTET, E; LEDY, K; MEYER, A. & GIAMBERINI, L Bi owt again of mse ara wal Soe ae es 4 stdy of seasonal and pollution invced variations + Auaiic Toxicology, 818): 37738. HERIGesC; DIGIULIO, RT; ABOU-DONIA, MB. 1988 EBLPRLAUIvepropertiesofchannel catish(foraluruspunctons) FERAL crab, (Collinctes spite) acetylbolinserses. SEGRE Biechemisry and Physiology. 91C: 293-300. i #L15D0, 1; CLAUDE, R; DEBACKER, V;ALLLB5 2 oROOSEPATRIGE.Ns GOBERT, LPS; BOUQUEGNEAU, SteHHOSSICARDM. 1999. Heavy metas organchloioes ‘int polyeyeio aromatic ydeicarbons in sperm whales ‘Stranded in the southem North Sea during the 1994/1995 “Seee Morne Politon Bulletin, 38(8): 304-313 JUNG, .1;ADDISON,RF & SHIM, WJ 2007 Charecterzation of cholinesterases in marbled sole. Limande yatuhormee, and their inhibition in vitro by the fongicide iprobenfos. Marine Environmental Research, 63(5): $71-478. LAM, PKS. & GRAY, 1S. 2003. The use of biomarkers in eaviconmental monitoring programmes. Marine Pollution Bulletin, 46(2): 182-186. “TINDE-ARIAS, A.R; BUSS, DF; ALBURQUERQUE, C. INACIO, A.F:: FREIRE, MM; EGLER, M.; MUGNAL R & BAPTISTA, D.F, 2007. Usilizaeao de bioindicadores na avaliagio de impacto ¢ a0 manitoramento da contaminagio de ios © cémegos por agrotoxicos. Ciéncia .e Sarde Coletiva, 12(1): 61-72, LINDE, A.R; SANCHEZ-GALAN, S, KLEIN, Ds VAZQUEZ, E. & SUMMER, K.H. 1999. Metallothionein and heavy metas ia brown trout (Salmo iruta} and european GaRcia- eel (Anguilla anguilla): a comparative study. Ecotoxicology and Environmental Safety, 44: 168-173 LINDE, AR, SANCHEZ-GALAN. S., 4p. & GARCIA-VAZQUEZ, E. 2001, bioindicator of frestwvater pollution: european eel and brown VALLES-MOTA, Meallothionein as trout Ecotoxicology and Environmental Safery,49(1): 60-73 LOWE,D.M. & PIPE,R.K. 1994, Contaminant induced lysosomat membrane damage in marine mussel digestive cells; sn in vitro stady. Aquatic Toxicology, 30: 357-368. MINIER, C: LEVY, F; RABEL, D; BOCQUENE. G. GODEFROY, D; BURGEOT, T & LEBOULENGER, F ker 2000. FlounderhealthstanusintheSeine Bay. Amultibion sudy, Marine Environmental Research, 50: 373-3 MONSERRAT, J.M.; MARTINEZ, PE; GERACITANO, L.A; AMADO, L.L; MARTINS, C.M; PINHO, G:L; CHAVES, 1S; FERRETRA-CRAVO, M; VENTURA-LIMA, J. & BIANCHINI, A. 2007. Pollution biomarkers in estuarine animals: critical review and new perspectives. Comparative Biochemistry ond Physiology part C: Toxicology and Pharmacology, 146(1-2): 221-34 MONSERRAT, JM; GERACITANO, LA. BIANCHIN, ‘A. 2003. Current and fituce perspectives using biomarkers to assess pollution in aquatic ecosystems. Comments on Toxicology, 9: 255-269, MOORE, M.N. 1985, Cellular responses to pollutants. Morine Pollution Bulletin, 16: 134-138. MOORE, MN; ALLEN, 115 MCVEIGH, A. & SHAW, 5.2006, Lysosomal and autophagic reactions as predictive indicators of environmental impact in aquatic aieal.Aucophagy, 23) 217.220 NICHOLSON, S. 2001. Ecocytological and toxicological espon- to copper in Perma viride (L) (Bivalvia: Myrilide) hac mocyte lysosomal membranes. Chemosphere, 45: 399-407, Qeeo!, Bras, 12 (3): 347-354, 2008 eet