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THSE

En vue de l'obtention du

DOCTORAT DE LUNIVERSIT DE TOULOUSE


Dlivr par lInstitut National Polytechnique de Toulouse
Discipline ou spcialit : Sciences des Agroressources

Prsente et soutenue par Chaker EL KALAMOUNI


Le 13 Dcembre 2010

Caractrisations chimiques et biologiques dextraits de


plantes aromatiques oublies de Midi-Pyrnes

JURY
Mme. Isabelle FOURAST
M. Brahim MARZOUK
Mme. Chantal MENUT
Mme. Christine RAYNAUD
M. Thierry TALOU
M. Roland VEHR
M.P.Rimantas VENSKUTONIS

Professeur, Universit de Toulouse III


Professeur, Centre de Biotechnologie, Tunisie
Professeur, Universit Montpellier II
Ingnieur de recherche, INP de Toulouse
Ingnieur de recherche, INP de Toulouse
Professeur, Ghent University, Belgique
Professeur, Kaunas Univ of Technology, Lituanie

Prsident
Rapporteur
Rapporteur
Membre
Membre
Membre
Membre

Ecole doctorale : Sciences de la Matire


Unit de Recherche : Laboratoire de Chimie Agro-Industrielle
Directeurs de Thse : Thierry TALOU et Christine RAYNAUD

A la mmoire de ma grand mre que dieu repose son me en paix


A mes parents que dieu protge
En tmoignage de ma profonde affection. Quils sachent que ce travail est en
partie le fruit de leur soutien ; je leur suis trs reconnaissant. Leur fiert mon
gard aujourdhui est pour moi la meilleure des rcompenses
A Salma mon pouse qui ma toujours encourag

Madame Elisabeth BORREDON, je vous remercie pour votre accueil chaleureux


au sein de votre laboratoire de recherche.
Christine, merci pour votre disponibilit tout au long de ma thse et pour tout ce
que vous mavez appris en chimie analytique notamment sur techniques
chromatographiques. Merci de mavoir consacr du temps pour corriger ma thse,
Vous mavez guid pendant ces quatre annes et clair sur les voies les plus
intressantes prendre.
Ce travail naurait pas t le mme sans votre encadrement.
Thierry, merci de mavoir encourag afin de prendre des dcisions importantes
dans ma vie professionnelle. Merci de mavoir fait autant voyager durant ma
thse, Autriche, Lituanie et Grce et de mavoir fait participer des congrs
internationaux, cela ma permis dchanger sur mes travaux de recherche.
Jai apprci beaucoup votre amiti, votre dynamisme et votre bonne humeur
tout au long de ma thse.
Je tiens remercier le Professeur Rimantas VENSKUTONIS, de mavoir
accueilli au sein de son laboratoire en Lituanie pour effectuer une bonne partie
de ce travail. Je le remercie vivement pour sa collaboration et sa prsence parmi
les jurys.
Je remercie Professeur Isabelle FOURAST pour son aide botanique, et pour les
sorties que nous avons effectu ensemble pour ramasser les plantes. Je la remercie
pour sa prsence parmi les jurys.
Je remercie Madame Chantal MENUT Professeur lUniversit de Montpellier,
qui a bien voulu examiner ce manuscrit et juger ce travail.
Je remercie Monsieur Brahim MARZOUK Professeur au centre de
Biotechnologie de Borj-cdria en Tunisie, qui a bien voulu examiner ce manuscrit
et pour sa prsence parmi les jurys.
Je remercie Madame An ADAMS Professeur lUniversit de Gand, davoir
accept notre invitation pour participer ce jury de thse.

Merci Graldine GIACINTI pour sa patience et ses conseils concernant la


partie analytique. Jai beaucoup apprci sa disponibilit et ses conseils aviss.
Merci Laure CANDY de mavoir aid durant les moments difficiles
Je tiens remercier lensemble du personnel du laboratoire pour leur convivialit,
Mireille, Isabelle, Karine, Marie-Christine, Emmanuelle, Didier et Anne pour
leur disponibilit.
Aux autres doctorants et collgues, bon courage pour la suite
Merci mes proches notamment mes parents, ma belle famille, mes deux surs
Abir et Stphanie, mes deux frres Nasser et Omar
Sans vous, rien naurait possible, merci de votre soutien moral et de votre
amour
Enfin mes remerciements sont particulirement adresss Salma, mon pouse,
qui est la personne la plus importante mon cur, de mavoir soutenu et
patiemment rconfort et encourag durant ces quatre annes, qui ne pourront
que rester inoubliables pour nous.

Caractrisations chimiques et biologiques dextraits de plantes aromatiques oublies de


Midi-Pyrnes

Table des matires


INTRODUCTION GENERALE .........................................................................................2
CHAPITRE I ........................................................................................................................5
ETUDE BIBLIOGRAPHIQUE ...........................................................................................5
Introduction........................................................................................................................................................... 7
I . Plantes aromatiques mdivales de la rgion de Midi-Pyrnes .................................................................. 9
I.1 . Historique.................................................................................................................................................... 9
I.2 . Les Milieux relictuels.................................................................................................................................. 9
I.3 . Notion de raret..........................................................................................................................................10
I.4 . Distribution botanique et mondiale des plantes aromatiques mdivales. .................................................10
I.4.1 . Famille des Astraces : morphologie, date dintroduction et distribution. .......................................10
I.4.2 . Famille des Lamiace : morphologie, date dintroduction et distribution ..........................................11
I.4.3 . Famille des Apiaces : morphologie, date dintroduction et distribution...........................................11
I.5 . Dmarche bibliographique de slection des plantes...................................................................................12
II . Etude bibliographique des cinq plantes aromatiques mdivales slectionnes.......................................22
II.1 . Achillea millefolium : informations botaniques, structurales et culturales................................................22
II.1.1 . Noms et origine.................................................................................................................................23
II.1.2 . Distribution nationale........................................................................................................................23
II.1.3 . Usage tonique stomachique ..............................................................................................................23
II.1.4 . Usage hmostatique ..........................................................................................................................24
II.1.5 . Usage emmnagogue ........................................................................................................................24
II.1.6 . Autres usages ....................................................................................................................................24
II.1.7 . Proprits physicochimiques et biologiques .....................................................................................25
II.2 . Tanacetum balsamita : informations botaniques, structurales et culturales..............................................26
II.2.1 . Noms et origine.................................................................................................................................27
II.2.2 . Distribution nationale........................................................................................................................27
II.2.3 . Diverses proprits............................................................................................................................27
II.2.4 . Usage pharmacologique....................................................................................................................28
II.2.5 . Usages divers ....................................................................................................................................28
II.2.6 . Cultures.............................................................................................................................................29
II.2.7 . Proprits physicochimiques et biologiques .....................................................................................29
II.3 . Calamintha grandiflora : informations botaniques, structurales et culturales ..........................................32
II.3.1 . Noms et origine................................................................................................................................33
II.3.2 . Distribution nationale........................................................................................................................33
II.3.3 . Historique de la dcouverte du Th dAubrac dans les Pyrnes .....................................................34
II.3.4 . Ecologie ............................................................................................................................................34
II.3.5 . Proprits physicochimiques et biologiques .....................................................................................35
II.4 . Myrrhis odorata : informations botaniques, structurales et culturales......................................................36
II.4.1 . Noms et origine.................................................................................................................................37
II.4.2 . Distribution nationale........................................................................................................................37
II.4.3 . Diverses proprits............................................................................................................................38
II.4.4 . Usages divers ....................................................................................................................................38
II.4.5 . Proprits physicochimiques et biologiques .....................................................................................38
II.5 . Monarda didyma : informations botaniques, structurales et culturales ....................................................40
II.5.1 . Noms et origine.................................................................................................................................41
II.5.2 . Distribution nationale........................................................................................................................41
II.5.3 . Diverses proprits............................................................................................................................41
II.5.4 . Usages divers ....................................................................................................................................41
II.5.5 . Proprits physicochimiques et biologiques .....................................................................................42

Caractrisations chimiques et biologiques dextraits de plantes aromatiques oublies de


Midi-Pyrnes
III . Techniques dextraction des fractions volatiles .........................................................................................43
III.1 . Techniques dextraction des huiles essentielles ......................................................................................43
III.1.1 . Hydrodistillation..............................................................................................................................43
III.1.2 . Hydrodistillation-extraction simultane ..........................................................................................44
III.2 . Techniques dextraction des composs organiques volatils (COV) .......................................................45
III.2.1 . Espace de tte statique (atmosphre confine) ................................................................................45
III.2.2 . Espace de tte dynamique................................................................................................................46
III.2.3 . Espace de tte pseudo-dynamique ...................................................................................................46
IV . Composition chimique des plantes aromatiques ........................................................................................47
IV.1 . Fraction volatile des plantes aromatiques ...............................................................................................48
IV.1.1 . Localisation et structure histologique des huiles essentielles ..........................................................49
IV.1.2 . Phnomnes physico-chimiques et facteurs produisant laltration des huiles essentielles ............50
V . Mthodes didentification chimique des huiles essentielles ........................................................................51
V.1 . Chromatographie en phase gazeuse monodimensionnelle .......................................................................52
V.2 . Chromatographie en phase gazeuse couple lolfactomtrie (CPG/O)..................................................52
V.3 . Chromatographie en phase gazeuse deux dimensions ...........................................................................53
V.3.1 . Chromatographie deux dimensions heart-cutting CPG/SM ...........................................................53
V.3.2 . Chromatographie totale CPG-2D......................................................................................................54
VI . Activits biologiques des plantes aromatiques ...........................................................................................54
VI.1 . Gnralits ..............................................................................................................................................54
VI.2 . Technique dextraction des antioxydants ................................................................................................56
VI.3 . Activits antioxydantes des plantes aromatiques : huiles essentielles, extraits aromatiques...................56
VI.3.1 . Oxydation et auto oxydation ...........................................................................................................56
VI.3.2 . Les antioxydants..............................................................................................................................58
VI.3.3 . Division des antioxydants par rapport leur mcanisme daction ..................................................59
VI.3.4 . Division des antioxydants suivant la nature chimique (naturel et synthtique)...............................60
VII . Mthodes dvaluation de lactivit antioxydante ....................................................................................63
VII.1 . Gnralits .............................................................................................................................................63
VII.2 . Quelques mthodes dvaluation de lactivit antioxydante..................................................................64
VIII . Huiles essentielles comme agents antimicrobiens ...................................................................................69
VIII.1 . Gnralits............................................................................................................................................69
VIII.2 . Mode daction contre les bactries .......................................................................................................70
IX . Mthode dvaluation de lactivit antibactrienne...................................................................................70
IX.1 . Technique en milieu solide (mthode de la diffusion en disque) ............................................................70
IX.2 . Technique en milieu liquide (mthode de dilution) ................................................................................71
IX.2.1 . La dilution en bouillon ....................................................................................................................71
IX.2.2 . La dilution en glose .......................................................................................................................71

CHAPITRE II.....................................................................................................................72
CARACTERISATION DES COMPOSES ORGANIQUES VOLATILS DE CINQ
PLANTES AROMATIQUES MEDIEVALES ; EVALUATION DE LACTIVITE
BIOLOGIQUE
DES
HUILES
ESSENTIELLES
ET
DES
RESIDUS
DHYDRODISTILLATION ..............................................................................................72
Rsum ..................................................................................................................................................................74
Introduction..........................................................................................................................................................75
I . Composition chimique des huiles essentielles................................................................................................76
I.1 . Achillea millefolium : caractrisation de la fraction volatile des parties ariennes ....................................76

Caractrisations chimiques et biologiques dextraits de plantes aromatiques oublies de


Midi-Pyrnes
Etude cintique de lextraction par hydrodistillation dAchillea millefolium ....................................................76
I.1.1 . Composition chimique de lhuile essentielle dAchillea millefolium et discussion............................77
I.2 . Calamintha grandiflora : caractrisation des extraits des tiges et des feuilles...........................................82
I.2.1 . Composition chimique de lhuile essentielle de Calamintha grandiflora et discussion.....................82
I.3 . Tanacetum balsamita : caractrisation des extraits des tiges et des feuilles ..............................................85
I.3.1 . Composition chimique de lhuile essentielle de Tanacetum balsamita et discussion ........................86
I.4 . Myrrhis odorata : caractrisation chimique des tiges et des feuilles .........................................................93
I.4.1 . Composition chimique de lhuile essentielle de Myrrhis odorata et discussion ................................93
I.5 . Monarda didyma : caractrisation chimique des tiges et des feuilles ........................................................96
I.5.1 . Composition chimique de lhuile essentielle de Monarda didyma et discussion ..............................96
II . Caractrisation sensorielle des huiles essentielles des cinq plantes aromatiques : Achillea millefolium,
Tanacetum balsamita, Calamintha grandiflora, Myrrhis odorata et Monarda didyma.....................................99
II.1 . Pyramides Olfactives ................................................................................................................................99
II.1.1 . Les notes de tte................................................................................................................................99
II.1.2 . Les notes de cur..............................................................................................................................99
II.1.3 . Les notes de Fond .............................................................................................................................99
II.2 . Ralisation des Pyramides Olfactives.....................................................................................................100
II.2.1 . Pyramides Olfactives des 5 huiles essentielles des plantes aromatiques selectionnes ..................100
II.3 . Activit odorante des composs organiques volatils value par CPG-Olfactomtrie ...........................101
II.3.1 . Rsultats de lanalyse sensorielle en CPG-O de lHE dAchillea millefolium ................................102
II.3.2 . Rsultats de lanalyse sensorielle en CPG-O de lHE de Calamintha grandiflora.........................103
II.3.3 . Rsultats de lanalyse sensorielle en CPG-O de lHE de Tanacetum balsamita.............................104
II.3.4 . Rsultats de lanalyse sensorielle en CPG-O de lHE de Myrrhis odorata.....................................105
II.3.5 . Rsultats de lanalyse sensorielle en CPG-O de lHE de Monarda didyma ...................................106
III . Activits biologiques des huiles essentielles et des rsidus de lhydrodistillation..................................107
III.1 . Introduction sur lactivit antioxydante.................................................................................................107
III.2 . Evaluation de lactivit antioxydante des huiles essentielles ................................................................108
III.2.1 . Evaluation de lactivit antioxydante des HE en utilisant la mthode Oxipress............................108
III.2.2 . Evaluation de lactivit antioxydante des HE via des mthodes spectrophotomtriques (dines et
trines conjugues) .....................................................................................................................................115
III.3 . Evaluation de lactivit antioxydante des rsidus dhydrodistillation des 5 plantes aromatiques par la
mthode de DPPH ...........................................................................................................................................120
III.3.1 . Principe de la mthode de DPPH...................................................................................................120
III.3.2 . Comparaison des activits antioxydantes des rsidus dhydrodistillation mesures par la mthode
de DPPH. ....................................................................................................................................................123
III.4 . Evaluation de lactivit antibactrienne des huiles essentielles.............................................................126
III.4.1 . Evaluation de lactivit antibactrienne en utilisant la mthode de diffusion sur Agar.................127
III.4.2 . Evaluation de lactivit antibactrienne en utilisant la mthode de plaque de micro titrage. ........130

CHAPITRE III :...............................................................................................................132


MISE EN PLACE DUNE METHODOLOGIE INSTRUMENTALISEE DE
CARACTERISATION RAPIDE DES HUILES ESSENTIELLES NATIVES ;
APPLICATION PRE-INDUSTRIELLE A LAROMATISATION DES HUILES
VEGETALES PAR LES PLANTES AROMATIQUES .................................................132
Rsum :..............................................................................................................................................................134
Partie I. Voie analytique ....................................................................................................................................135
Introduction : .....................................................................................................................................................135
(A) Premire approche analytique base sur une technique dchantillonnage classique couple un
systme de sparation/dtection sophistiqu....................................................................................................136

Caractrisations chimiques et biologiques dextraits de plantes aromatiques oublies de


Midi-Pyrnes
I . Analyses des COVs mis par les feuilles par lintermdiaire de la CPG bidimensionnelle. ...................136
I.1 . Principe de la CPG bidimensionnelle ......................................................................................................136
I.1.1 . Sparations orthogonales..................................................................................................................137
I.2 . Matriels et mthodes ..............................................................................................................................138
I.2.1 . Echantillons......................................................................................................................................138
I.2.2 . Extraction des COV par SPME ........................................................................................................138
I.2.3 . Analyses chromatographiques des COVs par CPG-2D....................................................................138
II . Rsultats de lextraction et de lanalyse des COVs des feuilles de Tanacetum balsamita par
SPME/CPG-2D...................................................................................................................................................139
(B) Deuxime approche analytique base sur un systme dchantillonnage coupl un systme de
sparation/dtection classique...........................................................................................................................142
I . Description du systme..................................................................................................................................142
II . Comparaison du profil aromatique de lhuile essentielle de Tanacetum balsamita et du profil CFDDHS/GC de la plante..........................................................................................................................................143
II.1 . Matriel et Mthodes ..............................................................................................................................143
II.1.1 . Concentration des COV par Headspace dynamique .......................................................................143
II.1.2 . Concentration des COV dune feuille non froisse par Headspace dynamique..............................144
II.1.3 . Isolement de lhuile essentielle de Tanacetum balsamita ...............................................................144
II.1.4 . Analyses chromatographiques des extraits .....................................................................................144
II.2 . Rsultats de la comparaison entre une huile essentielle extraite par hydrodistillation et une huile
essentielle native .............................................................................................................................................144
III . Conception dune cellule dextraction ddie CFD couple un systme de pigeage Headspace
dynamique et semi-statique ...............................................................................................................................148
IV . Application du systme CFD lanalyse de la fraction volatile de Calamintha grandiflora ................149
IV.1 . Analyses chromatographiques...............................................................................................................149
IV.2 . Optimisation des conditions dextractions par CFD-SPME ou CFD-DHS...........................................149
IV.2.1 . Choix des fibres SPME : cintique dadsorption et dabsorption de la pulegone..........................149
IV.2.2 . Optimisation du froissement du vgtal ........................................................................................151
IV.2.3 . Observation microscopique au niveau du limbe des feuilles.........................................................151
IV.2.4 . Comparaison des fractions volatiles extraites par CFD-SPME et CFD-DHS et de lhuile essentielle
....................................................................................................................................................................152
Conclusion Partie I.............................................................................................................................................154
Partie II : Approche prindustrielle de laromatisation des huiles vgtales par les plantes aromatiques155
Introduction........................................................................................................................................................155
I . Matriels et mthodes....................................................................................................................................156
I.1 . Huile de tournesol ....................................................................................................................................156
I.2 . Prparation des chantillons feuilles fraches infuses dans lhuile de tournesol : HI.FF........................157
I.2.1 . Optimisation du temps dexposition de lhuile infuse et soumise aux ultrasons ............................158
I.2.2 . Prparation des infusions de plantes aromatiques fraches dans lhuile de tournesol ......................161
I.3 . Prparation dinfusions de plantes aromatiques sches dans lhuile de tournesol : HI.FS .....................161
I.4 . Prparation des infusions de plantes aromatiques sches et dhuile essentielle HI.HE.FS ....................163
I.5 . Analyses de lespace de tte des huiles infuses......................................................................................163
I.5.1 . Fibre SPME, choix de la fibre et conditionnement ..........................................................................163
I.5.2 . Prparation des huiles infuses analyser : extraction des COVs ...................................................163
I.5.3 . Analyse chromatographique des chantillons des huiles infuses ou aromatises...........................164
II . Rsultats et interprtations .........................................................................................................................164
II.1 . Evolution de la concentration des COVs mis des huiles aromatises ou infuses en fonction du temps
.........................................................................................................................................................................164

Caractrisations chimiques et biologiques dextraits de plantes aromatiques oublies de


Midi-Pyrnes
II.1.1 . Evolution de la quantit de tanacetone dans l'espace de tte de l'huile de tournesol infuse par les
feuilles sches de la Balsamite et son HE .................................................................................................164
II.1.2 . Evolution de la quantit du camphre (exprime par laire du pic ) dans d'espace de tte de l'huile de
tournesol aromatise par les feuilles schs dA. millefolium et son HE ....................................................165
II.1.3 . Evolution, de la quantit de tanacetone dans lespace de tte de lhuile de tournesol aromatise par
les feuilles fraches de Balsamite................................................................................................................165
II.1.4 . Evolution de la quantit de tanactone dans l'espace de tte de l'huile de tournesol infuse par les
feuilles sches de la Balsamite..................................................................................................................166
II.2 . Rsultats de laromatisation par infusion de matire vgtale et par ajout dHE dans les huiles vgtales
.........................................................................................................................................................................167
II.2.1 . Huile de tournesol aromatise par lHE dAchillea millefolium .....................................................168
II.2.2 . Huile de tournesol aromatise par lHE de Calamintha grandiflora ..............................................170
II.2.3 . Huile de tournesol aromatise par lHE de Tanacetum balsamita ..................................................172
II.2.4 . Huile de tournesol aromatise par lHE de Myrrhis odorata ..........................................................174
II.2.5 . Huile de tournesol aromatise par lHE de Monarda didyma.........................................................175
Conclusion Partie II ...........................................................................................................................................177

CONCLUSION GENERALE ..........................................................................................179


PARTIE EXPERIMENTALE .........................................................................................187
I . Techniques dextraction des huiles essentielles...........................................................................................189
I.1 . Diffrentes techniques dextraction des huiles essentielles......................................................................189
I.1.1 . Entranement la vapeur..................................................................................................................189
I.1.2 . Hydrodistillation ..............................................................................................................................192
Calcul de la teneur en matire sche et du rendement en huile essentielle.................................................192
I.1.3 . Hydrodistillation dAchillea millefolium..........................................................................................194
I.1.4 . Hydrodistillation de Calamintha grandiflora...................................................................................194
I.1.5 . Hydrodistillation de Tanacetum balsamita ......................................................................................195
I.1.6 . Hydrodistillation de Myrrhis odorata ..............................................................................................195
I.1.7 . Hydrodistillation de Monarda didyma .............................................................................................195
I.2 . Extraction des composs organiques volatils (COVs) .............................................................................195
I.2.1 . Microextraction en phase solide (SPME).........................................................................................195
I.2.2 . Choix de la fibre SPME ...................................................................................................................197
II . Analyses chimiques et sensorielles des huiles essentielles et des COVs ...................................................197
II.1 . Analyse par chromatographie phase gazeuse .........................................................................................197
II.1.1 . Dtecteurs .......................................................................................................................................198
II.2 . Les mthodes couples ...........................................................................................................................199
II.2.1 . Chromatographie en phase gazeuse / spectromtrie de masse ........................................................199
II.2.2 . Protocoles des analyses quantitatives et qualitatives des huiles essentielles...................................199
II.2.3 . Chromatographie en phase gazeuse / olfactomtrie (CPG/O).........................................................200
II.3 . Etablissement des pyramides olfactives..................................................................................................200
III . Extraction des antioxydants partir des rsidus dhydrodistillation ....................................................201
III.1 . Principe dextraction par soxhlet...........................................................................................................201
III.2 . Extraction des antioxydants...................................................................................................................202
IV . Evaluation de lactivit antioxydante des rsidus dhydrodistillation par la mthode de DPPH ........202
IV.1 . Prparation des chantillons doser .....................................................................................................202
IV.2 . Dosage spectrophptomtrique par la mthode du DPPH des solutions issues des rsidus
dhydrodistillation ...........................................................................................................................................203
IV.2.1 . Calcul du pourcentage dinhibition (%I) et de la concentration inhibitrice minimale (IC50).........203
V . Evaluation de lactivit antioxydante des huiles essentielles ....................................................................204
V.1 . Evaluation de lactivit antioxydante des huiles essentielles par la mthode Oxipress..........................204

Caractrisations chimiques et biologiques dextraits de plantes aromatiques oublies de


Midi-Pyrnes
V.2 . Evaluation de lactivit antioxydante de lhuile essentielle par des mthodes spectroscopiques (dines et
trines conjugus)............................................................................................................................................206
VI . Evaluation de lactivit antimicrobienne ..................................................................................................207
VI.1 . Evaluation de lactivit bactricide par la mthode de diffusion sur Agar............................................207
VI.2 . Evaluation de lactivit antimicrobienne par la mthode de micro dilution..........................................207

RFRENCES BIBLIOGRAPHIQUES ........................................................................209


Liste des Tableaux..............................................................................................................................................225
Publications et participation des congrs......................................................................................................227

Introduction

Introduction Gnrale

Introduction

Introduction
La rgion franaise de Midi-Pyrnes possde une flore riche et peu valorise. Les
environs dune grande rgion comme la rgion Midi-Pyrnes sont soumis de fortes
pressions foncires comme le dveloppement de lhabitat rsidentiel, la progression et le
renforcement des infrastructures et labandon de certaines pratiques agricoles. Les espaces qui
abritaient traditionnellement une vgtation riche et diversifie ont tendance rgresser.
Parmi cette vgtation qui se rarfie, on trouve les plantes aromatiques mdivales
traditionnellement utilises par nos anctres pour laromatisation des aliments, les arts
culinaires et les vertus mdicinales. Ces plantes ne sont pas valorises dun point de vue de
leur potentiel chimique sensoriel ou biologique.
Les plantes aromatiques sont prometteuses et constituent une grande source
dantioxydants et dantibactriens naturels pour lindustrie agroalimentaire. En effet,
loxydation des lipides dans les produits alimentaires induit non seulement une diminution de
la valeur nutritive de laliment, mais aussi des effets reconnus nuisibles pour le consommateur
et qui peuvent tre associs des risques de cancer chez lhomme. La prsence dantioxydants
dans lalimentation est devenue essentielle pour la qualit et la scurit de laliment. Les
effets ngatifs des antioxydants synthtiques encouragent leur substitution par des agents
naturels.
Diffrentes plantes aromatiques sont caractrises par la biosynthse de molcules
odorantes qui constituent ce quon appelle les huiles essentielles (HE) connues depuis
longtemps pour leur activit antiseptique et thrapeutique dans la mdecine populaire. La
composition chimique des HE est assez complexe, les composs terpniques et aromatiques
reprsentant les principaux constituants. On y trouve galement, et en faibles concentrations
des acides organiques, des ctones et des coumarines volatiles. La nature de la fonction
chimique du compos majoritaire (phnol, alcool, aldhyde, ctone) joue un rle
prpondrant dans lefficacit de leurs activits biologiques.
Les plantes mdicinales et aromatiques sont utilises depuis longtemps dans le
processus de stress oxydatif et la lutte contre les maladies infectieuses. Mais la dcouverte des
antioxydants synthtiques et des antibiotiques a provoqu le dclin de la mdecine base de
plantes et la relgue un rang secondaire.
Ceci nous a amen nous pencher sur ltude des activits odorante, antioxydante et
antimicrobienne dextraits de plantes aromatiques oublies de la rgion de Midi-Pyrnes. Ce
sujet nous a sembl dautant plus intressant que la flore des Pyrnes est extrmement riche
en plantes aromatiques riches en huiles essentielles.

Introduction
Dans le premier chapitre de ce manuscrit, nous avons recens une centaine de plantes
aromatiques rgionales, partir desquelles nous avons slectionn, selon diffrents critres,
cinq plantes aromatiques mdivales : Achillea millefolium, Calamintha grandiflora,
Tanacetum balsamita, Myrrhis odorata et Monarda didyma.
Le deuxime chapitre est consacr lappliation du principe dagro-raffinage sur les 5
plantes. Pour cela, des extractions de fractions volatiles (huile essentielle) et de fractions non
volatiles (rsidu dhydrodistillation) ont t effectues. Des tudes physico-chimiques,
sensorielles et biologiques des extraits obtenus ont t ralises pour caractriser les
mtabolites secondaires prsents et juger de lintrt des fractions.
Dans le troisime chapitre, du fait de la raret du vgtal tudi, nous nous sommes
intress deux approches dvaluation rapide du potentiel aromatique des plantes huile
essentielle ; dans un premier temps, au moyen dun chantillonnage classique coupl un
dtecteur forte sensibilit comme la chromatographie bidimensionnelle et dans un second
temps par un chantillonnage spcifique coupl un dtecteur classique pour lequel nous
avons dvelopp un appareillage novateur dnomm Crushing Finger Device .
Enfin, nous avons tudi la faisabilit dune application prindustrielle agroalimentaire
des cinq plantes aromatiques. Des tudes doptimisation dinfusion et daromatisation
dhuiles vgtales par leurs huiles essentielles ont t dveloppes dans cette dernire partie
du chapitre.

Chapitre I : Etude Bibliographique

Chapitre I
Etude bibliographique

Chapitre I : Etude Bibliographique

Chapitre I : Etude Bibliographique

Introduction
La rglementation REACH met diffrents textes en vigueur pour les substances et
prparations chimiques. Ces textes comprennent les rgles qui ont prvalu pour les
propositions de classement de l'EFFA (European Flavor and Fragrance Association) en
collaboration avec l'EFEO (European Federation of Essential Oils). L'industrie propose donc
une harmonisation des classements pour qu'il n'y ait pas de facteur de concurrence sur des
lments de scurit. Les huiles essentielles sont classes sur la base de rsultats de tests
directs sur leurs proprits physiques, chimiques, toxicologiques et cotoxicologiques.
Cependant, de nombreux rsultats ne sont pas disponibles ou trop anciens ou imprcis pour
tre valables.
En 2002, le comit du Codex alimentaire a transmis des normes de catgorie I concernant les
additifs alimentaires ainsi que les aromatisants la Commission afin quelles soient adoptes en
tant que normes consultatives du Codex. Sur 60 normes dadditifs alimentaires, 42 normes dantiagglutinants (6), dexhausteurs darmes (17), ddulcorants (11) ainsi que dpaississants (8) ont
t transmises afin dadopter de nouvelles limites concernant des mtaux lourds spcifiques
comme le plomb et larsenic.

En 2009, ce mme comit a mis 342 spcifications, dont 317 pour des aromatisants et 25
pour des additifs alimentaires; 2 spcifications ont t retires. De plus, 50 additifs
alimentaires ont t rviss (anti-agglomrants, aromatisants, dulcorants, paississants) pour
leur teneur en mtaux lourds.
Les consquences de ces classements vont conduire d'aprs l'EFFA la disparition force de
20% des formulations aromatisantes existantes, voire la remise en cause du concept
d'aromatisant Identique-Nature. Ceci va donc accrotre la demande industrielle pour les
aromatisants naturels, en particulier ceux labelliss WONF (With Other Natural Flavor),
conomiquement plus rentables.
Les agents aromatisants sont des molcules chimiquement dfinies pouvant tre naturelles
lorsquextraites de plantes ou identiques aux naturelles lorsquon synthtise chimiquement
une substance dj prsente dans une source naturelle. Enfin, elles peuvent aussi tre
artificielles lorsquon synthtise des molcules qui ne sont pas prsentes dans la nature.
Dautres procds sont mis en uvre dans la cration de nouveaux armes tels que les armes
de Maillard et les armes de fume.

Chapitre I : Etude Bibliographique


Prparations aromatisantes procd physique ou biotechnologique

Substances aromatisantes isoles & chimiquement dfinies

Naturels

Naturelles procd physique ou biotechnologique


Identiques aux naturelles

Synthse
chimique

Artificielles

Armes de transformation Armes de Maillard

Armes de fume Extraits de fume (Rglement 2065/2003)


Dans le cadre de la recherche de nouveaux aromatisants naturels type WONF
(Identiques aux naturelles), et afin de combler la diminution rglementaire des aromatisants
naturels prsents sur le march, il existe deux diffrentes voies de prospection. La premire
voie concerne lexploitation du potentiel aromatique des plantes exotiques rares. Par exemple,
les socits de secteur de lindustrie aromatique ont depuis quelques annes entrepris
plusieurs expditions en Amrique du Sud ainsi quen Afrique occidentale (Neblina, IFF,
Yves Rocher et TasteTrek, Givaudan) la recherche de nouvelles fragrances et saveurs
La deuxime voie est la valorisation des plantes aromatiques mdivales ; ces dernires
ne sont plus cultives et poussent ltat sauvage. Rares sont les tudes scientifiques ayant
mis en vidence leurs potentiels aromatiques ou biologiques afin de favoriser leur culture
parce quelles sont devenues menaces voire rares en fonction des rgions.
Lobjectif de cette thse est l'application du concept dAgroRaffinage aux plantes
aromatiques mdivales du patrimoine vgtal de Midi-Pyrnes. Ceci dans le but de valoriser
de manire squence les diffrents constituants de la plante. Dans une premire tape, une
tude bibliographique a t ralise partir danciens ouvrages botaniques ainsi que de
rfrences bibliographiques afin de remonter des plantes rgionales utilises par nos
anctres pour leurs activits odorantes, culinaires ou mdicinales. Dans une deuxime tape,
des tudes physicochimiques, sensorielles et biologiques des fractions volatiles et non
volatiles des plantes mdivales slectionnes ont t ralises pour juger de leurs proprits
aromatiques et biologiques et de leur intrt dans le cadre des nouvelles rglementations
europennes.

Chapitre I : Etude Bibliographique

I. Plantes aromatiques mdivales de la rgion de Midi-Pyrnes


La rgion Midi-Pyrnes possde une flore riche et non valorise, ceci concerne tout
particulirement les plantes aromatiques. Cette thse sinscrit dans le programme
AROMATIC, qui vise la conception d'une nouvelle gnration daromatisants naturels
labelliss WONF. Lexpdition MIPAROM (Midi-Pyrnes-Aromatique) a t conduite dans
le cadre de cette thse afin de collecter et danalyser des varits de plantes aromatiques
mdivales rgionales.
I.1. Historique
A la fin des annes 60, G.Bosc publiait son Guide dherborisation et de
dtermination des vgtaux vasculaires de la rgion Toulousaine . Selon lauteur, cet
ouvrage portait sur un rayon de 20 30 Km autour de Toulouse (Nature Midi-Pyrnes, 2004)
.
Les environs dune grande rgion comme la rgion Midi-Pyrnes sont soumis de fortes
pressions foncires (dveloppement de lhabitat rsidentiel, progression et renforcement des
infrastructures...) ou bien labandon de certaines pratiques agricoles. De nombreux espaces
naturels sont dtruits au profit de zones industrielles ou rsidentielles proximit dune
grande agglomration. Les espaces qui abritent traditionnellement une vgtation riche et
diversifie ont tendance rgresser.
I.2. Les Milieux relictuels
Cette volution cre des milieux alors qualifis de relictuels (Nature Midi-Pyrnes, 2004)
quil est possible de distinguer en deux types :
1. Des milieux naturels ou cologiquement riches qui ont pu perdre de leur intrt par
rduction de leur superficie.
La progression de lagglomration et de ses infrastructures laisse subsister des lambeaux
boiss, quelques prairies humides isoles et de faibles surfaces, quelques pelouses sches
sur des coteaux et quelques zones humides : ce sont alors des milieux rsiduels.
2. Des milieux qui ont t artificiellement crs par les activits de lhomme
Des zones refuge se crent avec les diffrents amnagements tels que le talus routiers,
les bords de routes et les fosss.

Chapitre I : Etude Bibliographique

I.3. Notion de raret


La notion de raret dune plante est dfinie de la manire suivante:
Ce sont des plantes qui ont un statut national de protection (Arrt Ministriel fixant la liste
des plantes protges sur le territoire national) ou qui sont inscrites sur le livre rouge de la
flore menace de France. Ces plantes ont t limines lors de la premire slection. Ce sont
des plantes rares ou peu frquentes localement. Il sagit de plantes menaces dans la zone
tudie. Elles peuvent cependant tre plus frquentes et plus rpandues dans les zones
voisines moins urbanises et moins agricoles.
I.4. Distribution botanique et mondiale des plantes aromatiques mdivales.
Les plantes aromatiques mdivales sont par dfinition des plantes sauvages en majorit
non cultives, poussant en Europe, en Asie de lEst et en Amrique du Nord. La recherche
bibliographique sur ces plantes mdivales montre quelles appartiennent essentiellement aux
3 familles botaniques suivantes : Astraces, Lamiaces et Apiaces.
I.4.1. Famille des Astraces : morphologie, date dintroduction et distribution.
La famille des Astraces (Composes) est la plus vaste famille de la division des
spermatophytes, avec plus de 900 genres et au moins 12 000 espces rpandues sur toute la
plante. Les composes sont relativement moins abondantes dans l'ancien monde que dans
l'Amrique du Nord o elles forment environ un huitime de la flore vasculaire.
Elles sont probablement apparues la fin du Ctac ou au dbut de l'Eocne, et le point
d'origine parat tre la rgion andine de l'Amrique du Sud o elles constituent aujourd'hui un
quart de la flore vasculaire. Les traits saillants de la distribution gographique de cette
immense famille ont une grande porte biologique. Les tribus des Astres et des sneciones
sont toutes cosmopolites ou peu prs. Les Cichories, les Cynares et les Anthmides
appartiennent surtout l'hmisphre nord. Les Calendules et les Arctotides sont africaines.
Les Vernonies, les Eupatories, les Hlianthes, les Hlnies et les Mutisies sont
essentiellement amricaines. La grande tribu des Inules appartient surtout l'ancien monde.
Les espces extra-tropicales communes aux deux hmisphres ne sont gure plus d'une
quarantaine (Moreau, 1960). L'Afrique, l'Australie et l'Amrique occidentale paraissent
possder les reprsentants les plus anciens du groupe. L'Afrique offre la plus grande varit

10

Chapitre I : Etude Bibliographique


de tmoins isols des types teints. L'Amrique andine possde quelques espces qui se
rapprochent du type que l'on peut considrer comme le type primitif de la famille entire.
La majorit des plantes mdivales que nous avons choisies est rpartie surtout en Europe,
Asie et lAmrique du Nord. Une distribution gographique sauvage importante de cette
famille existe aussi en Turquie, Canada, Inde, Iran et les pays Baltes (Ivancheva et al., 2003).
I.4.2. Famille des Lamiace : morphologie, date dintroduction et distribution
La deuxime famille botanique constituant les plantes mdivales est celle des
Lamiaces (Labie). La forme de la fleur et la prsence dhuiles essentielles signent cette
famille (Kaufmann et al., 1994). Cette famille de plantes angiospermes dicotyldones fleurs
gamoptales irrgulires qui regroupe surtout des plantes herbaces et sous-arbustives
rparties dans le monde entier. Les Lamiaces herbaces, annuelles ou vivaces, sont trs
nombreuses et trs rpandues en France, exemple les Thyms, les Lavandes, les Romarins sont
surtout

abondants

dans

les

rgions

mditerranennes

(Moreau,

1960).

Les Lamiaces comptent plus de trois mille cinq cents espces, quelque deux cents genres,
rpartis en sept sous-familles.
I.4.3. Famille des Apiaces : morphologie, date dintroduction et distribution
La troisime famille constituant les plantes aromatiques mdivales est la famille des
Apiaces (Apiaceae), appele anciennement Ombellifre (Umbelliferae). Elle comprend prs
de 3000 espces rparties en 420 genres qui sont surtout prsentes dans les rgions tempres
du monde. C'est une famille relativement homogne, caractrise notamment par
son inflorescence typique, l'ombelle.
C'est une vaste famille complexe regroupant des plantes herbaces annuelles, bisannuelles ou
vivaces, et parfois des arbustes. Les feuilles sont alternes, souvent grandes et pennatifides
(dcoupes en lobes profonds) mais aussi simples. Leur base est souvent engainante et largie
(Moreau, 1960). La forme des fleurs a valu cette famille son ancien nom; ce sont des
ombelles composes le plus souvent d'une ombelle primaire, avec ou sans bractes, dont
chaque branche ou rayon porte une ombelle secondaire (ombellule) avec ou sans bractes
secondaires (bractoles). Les fleurs sont souvent petites, cinq parties; les ptales toutes de
mme taille ou nettement irrgulires, les fleurs externes d'une ombelle pouvant avoir des
ptales externes nettement plus grands que les autres. Les fruits sont souvent dterminants
pour identifier genres et espces se ressemblents. Du fait de leurs groupes de petites fleurs en

11

Chapitre I : Etude Bibliographique


ombelles qui offrent un abondant nectar et une bonne plate-forme datterrissage, les
ombellifres sont particulirement apprcies par les insectes pollinisateurs.
Cette famille riche en mtabolites secondaires prsente des intrts conomiques et
mdicinaux, comportant des coumarines, flavonodes, composs actylniques et des lactones
sesquiterpniques, ainsi quune grande richesse en huile essentielle. Cette famille de plantes
est bien connue pour avoir une quantit importante dhuile essentielle dans la quasi-totalit de
ses organes anatomiques. A nos jours, 760 constituants dhuiles essentielles ont t isols des
apiaces (Moreau, 1960).
I.5. Dmarche bibliographique de slection des plantes
Une premire liste (I) comprenant une centaine de plantes aromatiques oublies de la rgion
de Midi-Pyrnes a t tablie (Tableau 1), grce une recherche bibliographique faite
partir danciens et nouveaux ouvrages botaniques et de quelques sites internet (Pailleux et al.,
1899; Lieutaghi, 1966; De Gubernatis, 1976; De Gubernatis, 1976; Richard, 1992; Veyrat et
al., 1997; Saule, 2002; Bertrand, 2003; Bertrand, 2004; Nature Midi-Pyrnes, 2004;
Teuscher et al., 2005).
Afin de limiter le nombre de plantes, les critres de rejets suivants ont t choisis :

Espce protge

Existence dans lhuile essentielle de molcules toxiques ayant fait lobjet de peu
dtudes

Plante ayant fait lobjet de nombreuses tudes scientifiques

Absence dhuile essentielle dans la plante

Existence sous forme arborescente

19 plantes ont alors t slectionnes (liste II) lors de cette seconde slection. Elles sont
reprsentes en gras dans le Tableau 1.

12

Tableau 1: Liste I des plantes aromatiques mdivales slectionnes, (*) : plantes correspondent la deuxime srie de slection

Nom Latin
* Achillea millefolium

Achyranthes Aspera
* Acinos alpinus
Adiantum pedatum

Nom Franais

Achille millefeuille Plante vivace de taille moyenne ou assez leve (jusqu' 1m20),
rhizome mettant des stolons, tige dresse simple ou rameuse,
plus ou moins velue. Les feuilles rpandent un parfum agrable
lgrement menthol
Herbe des jeunes
On conoit aisment que cette herbe ait pu devenir aprs une origine
pareille un Talisman puissant
Calament des Alpes Plante vivace de taille modeste (moins de 30cm) tiges couches
ou redresses, rameuses la base
Adiante
L'adiante annonce la gurison

* Agastache foeniculum

Agastache

* Agnus-castus

Poivre des moines

Agrimoinia eupatoria

Aigre moine

Alliaria officinalis

Alliaire

Amaranthus retroflexus

Caractristiques

Auelle odorante

* Angelica archangelica

Anglique

* Angelica silvestris

Anglique des bois

Absence dhuile essentielle


Retenue
Absence dhuile essentielle

Cette plante dgage un fort arme d'anis.

Retenue

Lodeur des branches de cette arbre combattait les penss


impudiques
Elle a une varit l'agrimoine odorante qui ressemble l'agrimoine
eupatoire mais ses feuilles et ses fleurs sont odorantes
Plante vivace odeur alliace surtout au froissement

Retenue

Amaranthe rflchie Une saveur "carne", inimitable

Anethum graveolens

Motif de slection non slection


Retenue

Elle est distingue par son odeur forte. l'auelle tait un aromate chez
les romains parfume agrablement les parfums
Famille Apiace, pays dorigine : Amrique et Europe, odeur
typique aromatique, saveur : sucre puis pice voir musque,
amre et mme piquante
Une saveur frache et un parfum "tendre" loin des canons
habituels

13

Absence dhuile essentielle


Toxicit de lhuile essentielle
Absence dhuile essentielle
Nombreuses tudes scientifiques
Retenue
Retenue

Nom Latin

Nom Franais

* Anthriscus sylvestris

Cerfeuil sauvage

Apium graveolens

Ache

Arbutus unedo

Gardien des portes

Areca catechu

Palmier btel

* Artemisia vulgaris

Armoise

Arnica montana

Arnica

* Artemisia abrotanum

Aurone

Asipatra vana

Armes

Asperula odorata

Asperule odorante

Attahasaka
Ballota nigra

Ballote ftide

Borago officinalis

Bourrache

Brassica nigra

Moutarde

Caractristiques
Plante vivace de taille moyenne ou assez leve (jusqu' 1,50m)
tige dresse, rameuse, nuds peu renfls. Feuille infrieures 3
fois divises. Fleurs blanches, trs aromatiques
Son odeur est bien connue qui la diffrencie des autres, saveur lui a
fait ses vertus mdicinales
Plante vivace de taille moyenne ou assez leve (jusqu' 1,30m)
Une espce de noisette parfume indienne
Absinthium maximum, mre de toutes les herbes indiquant sa
ressemblance avec labsinthe
Les fleurs une fois dtach, on les fait scher le plus vite possible pour
quils gardent leur couleur el leur parfum
Odeur aromatique, lgrement poivre intensifie aprs
frottement
Une espce de roseau
La plante frache est quasi inodore alors qu'aprs dessiccation elle
acquiert une odeur trs fine due la coumarine
Elle n'est autre que les cheveux hrisss, elle dsigne en sanscrit
Jasminum hirsutum
elle a une odeur repoussante et dsagrable
Feuille et fleur qui offre des gots d'iode, d'esprit marin. tranges
armes pour cette plante si loin de la mer.
les graines reforment une huile aromatique

14

Motif de slection non slection


Retenue

Nombreuses tudes scientifiques


Absence dhuile essentielle
Absence dhuile essentielle
Retenue
Protge
Retenue
Absence dhuile essentielle
Absence dhuile essentielle
Absence dhuile essentielle
Absence dhuile essentielle
Nombreuses tudes scientifiques
Absence dhuile essentielle

Nom Latin

Nom Franais

Caractristiques

* Calamintha grandiflora

Th dAubrac

Capsicum frutescens

Poivre de cayenne

Une saveur menthole et florale. Une plante que tout laguiolais se


doit d'avoir en provision pour aborder la saison hivernale
Odeur cre lgrement animale

Cardamine pentaphyllos

Dentaire digite

Carlina acanthifolia

Carline artichaut

Carum carvi

Cumin des prs

Cedrus

Cdre

Chelidonium majus

Chelidoine

Terminalia tomentora

Oreille de chvre

*Chrysanthemum balsamita
ou Tanacetum balsamita
Cistus salviifolius

Balsamite

Convallaria majalis

Ciste feuilles de
Sauge
Muguet

Motif de slection non slection


Retenue
Nombreuses tudes scientifiques

Belle espce vivace de taille, moyenne (70cm au plus) rhizome


Protge
couvert de grosses cailles triangulaires caractristiques, tige simple,
nue la partie infrieure, dresse, munie dans le haut de feuilles
luisantes d'un beau vert
Belle plante vivace dont le gros capitule se dveloppe mme le sol
Protge
au centre d'une rosette de feuilles tales, larges, dcoupes en
segments garnis de fortes pines
Lors de la cueillette, les parfums des feuilles sont particulirement
Nombreuses tudes scientifiques
prometteurs. Quant aux semences, elles explosent en saveurs anises
Le cdre est un genre de conifre de la famille des pinaces, originaire
Protge
du Moyen-Orient, d'Afrique du Nord et de l'Himalaya, acclimat en
Europe, comprenant des espces d'arbres majestueux, bois odorant,
cime conique ou tale
La plante entire exalte une odeur dsagrable
Absence dhuile essentielle
Odeur de la chvre

Absence dhuile essentielle

Nomme communment au Moyen Age menthe coq, cette plante


l'odeur de menthe
Arbuste assez bas qui peut atteindre 80cm, pratiquement inodore,
rameaux velus non visqueux, munis de feuilles court ptiole
Inutile de prsenter l'inflorescence, ni de vanter son parfum, Le
rhizome allong, solidement ancr au sol par plusieurs faisceaux de
racines adventives, portant des fleurs odorantes en clochettes blanches

15

Retenue
Forme arbrescente
Toxicit de lhuile essentielle

Nom Latin

Nom Franais

Crataegus oxyacantha

Aubpine

Cucurbita pepo

Courge de sweet

Discordia

Herbe de haine

Galium verum

Gaillet vrai

Juniperus communis

Genevrier

Geum urbarum

Benote

Glechoma hederacea

Lierre terrestre

Geum urbanum

Helichrysum stoechas

La Benote
bndiction
tonique
Immortelle

Heracleum sphondylium

Berce commune

Caractristiques
Les fleurs sont sches en un lieu bien ar pour jaunir et
conserver leur odeur dlicate
Petite courge aux armes de
chtaigne
Indienne

Motif de slection non slection


Nombreuses tudes scientifiques
Absence dhuile essentielle
Absence dhuile essentielle

Espce vivace de taille moyenne (1m au plus) glabre ou velue dont les
Absence dhuile essentielle
tiges gnralement dresses, simples ou ramifies, sont munies de
verticilles comptant 6 12 feuilles troites, allonges, bords
enrouls, saveur du miel
Odeur un peu camphre
Nombreuses tudes scientifiques
Les racines dgagent un fort parfum de girofle

Absence dhuile essentielle

Plante vivace dont les longues tiges rampantes s'enracinent aux


noeuds et donnent naissance des tiges florifres redresses de taille
modeste (30cm au plus), feuille aromatique dont la saveur pics
Plante de 50 60 cm de hauteur, sa racine contient une huile
essentielle dont lodeur aromatique rappelle celle du clou de girofle,
parfume plusieurs boissons, sche, elle perd ses armes
Plante trs dcorative de taille mdiocre (50cm au plus) qui
constitue des touffes denses avec des tiges ligneuses la base, tales
ou redresses, trs rameuses, blanches-cotonneuses, odeur de curry
Grande plante ombellifre vivace atteignant 50cm 1m50
dcouvrirez des armes de mandarine sur les jeunes tiges crues.
L'odeur et la saveur des graines rappellent celles des feuilles de
coriandre exotique dagrume de mandarine et de noix de coco

Absence dhuile essentielle

16

Absence dhuile essentielle

Nombreuses tudes scientifiques

Nombreuses tudes scientifiques

Nom Latin

Nom Franais

Caractristiques

Humulus lupulus

Houblon

Hypericum perforatum

Millpertuis

Hyssopus officinalis

Hysope

Motif de slection non slection


Longue liane (jusqu' 8m) qui se renouvelle tous les ans partir d'une Nombreuses tudes scientifiques
souche ligneuse vivace. Sur des sujets distincts, se dveloppent les
fleurs mles 5 tamines en grappes rameuses et les fleurs femelles
servent aromatiser les bires
Les feuilles, les fleurs soignent les "brlures" L'huile issue de la
Nombreuses tudes scientifiques
macration des sommits fleuries d'un rouge fonc est trs aromatique
Trs aromatique
Nombreuses tudes scientifiques

Inula helenium

Aune

Les racines prennent au schage une odeur d'Iris

Nombreuses tudes scientifiques

Laurus nobilis

Laurier

Parfum balsamique et pic

Nombreuses tudes scientifiques

Levisticum officinale

Liveche ou Ache

Nombreuses tudes scientifiques

Lilium sp

Lis orang, safran

Une puissance aromatique, elle est recommande pour restaurer


l'apptit
Connue par le nom : la fleur des fleurs

Matricaria recutita

Camomille sauvage

Nombreuses tudes scientifiques

Melissa officinalis

Mlisse

Plante annuelle glabre, odeur prononce de camomille, de taille


mdiocre (60cm au plus)
sche perd rapidement son huile essentielle

* Meum athamanticum

Cistre

* Monarda didyma

Monarde

* Myrrhis odorata

Cerfeuil musqu

Absence dhuile essentielle

Nombreuses tudes scientifiques

Un got anis si mystrieux. Pour nous, qui l'avons choisie pour


illustrer notre image, elle est source de souvenirs, d'histoire et de
sagesse
Ses corolles dclinent des parfums citronns, des gots pics

Retenue

Tiges sucres et anises

Retenue

17

Retenue

Nom Latin

Nom Franais

Myrtus communis

Myrte

Narcissus pseudonarcissus

Narcisse jaune

Ocimum basilicum

Basilic

Origanum majorana

Marjolaine

Origanum vulgare

Marjolaine sauvage

Pastinaca sativa

Panais

Phragmites australis

Roseau

Robinia pseudacacia

Acacia

Rosmarinus officinalis

Caractristiques
Prince des vgtaux odorants, menthol

Motif de slection non slection


Forme arborescente

Ds la fin de l'hiver jusqu'au dbut de juin en altitude, la floraison des


Absence dhuile essentielle
Narcisses relaie celle du Galanthe des neiges. Issu d'un bulbe assez
gros, accompagn par 2 4 feuilles d'un vert un peu glauque, parfume
des valles entires
La multitude de varits propose aujourd'hui est phnomnale. Des
Nombreuses tudes scientifiques
parfums de citron, de rglisse, en passant par le camphre, l'anis, et leur
usage offre une palette de saveurs inestimable
agrable odeur parfume, voir pice
Nombreuses tudes scientifiques

Romarin

Plante vivace dont les tiges rameuses dresses, munies de feuilles


ptioles ovales, peuvent atteindre 60cm. Les fleurs roses
accompagnes de bractes lancoles d'un rouge violac Odeur trs
aromatique
Exemple types de lgumes oublis, ses feuilles parfument les potages
et ses petits fruits aplatis
Espce vivace dont la taille peut atteindre 6m. A partir d'un rhizome
ramifi et trs allong, s'lvent les tiges paisses, mais peu
rsistantes, car non ligneuses
un arbre plein de vie, le bourdonnement des abeilles et il embaume
l'atmosphre. Un parfum, un got tout en finesse utilis pour les
sucreries.
Parfum agrable lgrement camphr

Nombreuses tudes scientifiques

Rosa canina

Eglantier

Parfum brod d'insecte

Nombreuses tudes scientifiques

Ruta graveolens

Rue

Odeur particulire aromatique voir pice

Nombreuses tudes scientifiques

18

Nombreuses tudes scientifiques

Toxicit de lhuile essentielle


Forme arbrescente

Forme arbrescente

Nom Latin

Nom Franais

Caractristiques

Salvia officinalis

Sauge

Salvia pratensis

Sauge commune

* Sambucus nigra

Sureau noir

Sanguisorba minor

Pimprenelle

Satureia hortensis

Sariette

Spiraea ulmaria

Reine des prs

* Stachys sylvatica

Epiaire des bois

Syzygium aromaticum

Girofle

odeur fortement pice et camphre avec de rminiscences de thym et Nombreuses tudes scientifiques
d'origan
Plante herbace vivace au port lgant do son nom de "Reine",
Nombreuses tudes scientifiques
rhizome rampant noueux et aux racines fibreuses, dont la taille
va de 1 1,50 m.
A force de se terrer au fond des bois, on jurerait quelle en a pris
Retenue
lodeur, lorsquon froisse entre les doigts ses feuilles velues sent
fortement lhumus avec cependant une nuance menthole
Odeur caractristique chaude pice, sucre, fortement aromatique
Nombreuses tudes scientifiques

Tagetes tenuifolia

Tagette

Petites fleurs de couleur jaune au parfum de citron et d'orange

* Tanacetum vulgare

Tanaisie commune

Teucrium scorodania

Germandre

Feuilles aromatiques voir camphr


Plante vivace de taille moyenne (80cm au plus) tige simple ou peu
ramifie. Les feuilles ne sont pas odorantes mais la hampe florale est
recouverte dune substance collante qui dgage un parfum plaisant
lgrement citronn la fois frais.
Parfum de musc, ses fleurs donnent leur arme de muscat, vins
parfums
Exalte des armes de noisettes.

Belle espce vivace, glabre, de taille assez leve (jusqu' 1m50)


tiges droites, dresses, anguleuses, ramifies au niveau de
l'inflorescence, munies de feuilles profondment dcoupes,
feuillage trs aromatique
Aromatique discrte, odeur trs lgrement alliaces, couleur blanc
jauntre

19

Motif de slection non slection


Nombreuses tudes scientifiques
Nombreuses tudes scientifiques

Retenue
Absence dhuile essentielle

Nombreuses tudes scientifiques


Retenue

Toxicit de lhuile essentielle

Nom Latin

Nom Franais

Thlapsi arvense

Tabouret

* Thymus serpyllum

Urtica dioica

Valeriana officinalis

* Tussilago farfara
Viola sp
Zingiber officinale

Caractristiques

Motif de slection non slection


Absence dhuile essentielle

Plante annuelle glabre, de 60cm au plus, qui met une odeur d'ail au
froissement. La tige simple ou rameuse, dresse, est munie la base
de feuilles ptioles, saveur piquante, odeur forte
Thym pilosit
Plante vivace basse (15cm au plus) longs stolons rampants sans
Retenue
variable, serpolet faisceaux de feuilles ; rameaux florifres velus sur 2 faces
opposes seulement (hors entre-nud suprieur), feuilles plus
grandes prs de l'inflorescence, trs aromatique.
Grande ortie
C'est une des espces les plus banales et les mieux connues cause de
Absence dhuile essentielle
ses feuilles et tiges hrisses de poils rigides qui provoquent des
irritations douloureuses, got dharicot vert
Valriane des collines Espce vivace souche courte trs odorante qui produit des stolons
Nombreuses tudes scientifiques
termins par des rosettes de feuilles. Les stolons sont souterrains avec
des feuilles nombreux segments troits, trs odorants
Tussilage
Particularit de fleurir avant de produire ses feuilles, saveur
Retenue
aromatique proche de celle de la marguerite
Violette
Un parfum de sucrerie
Absence dhuile essentielle
Gingembre

Plante herbace vivace besoin de beaucoup de soleil renferme


plusieurs poils piquants

20

Nombreuses tudes scientifiques

Chapitre I : Etude Bibliographique


Une tude bibliographique gnrale a t effectue sur les 19 plantes aromatiques
slectionnes dans la liste II, suite la volont de travailler sur le plus grand nombre possible
de plantes pendant la thse, nous avons pu choisir 5 plantes aromatiques (Tableau 2) en
suivant les critres de slection suivants : (I) les plantes peu tudies jusqu prsent et (II) la
diversit des notes odorantes.
Tableau 2: Liste des 5 plantes aromatiques selectionnes

Nom Latin

Caractristiques

Nombre de

organoleptiques

publications
scientifiques

Achillea millefolium

Tanacetum balsamita

Calamintha
grandiflora

Myrrhis odorata

Monarda didyma

Feuilles : parfum
lgrement menthol

Feuilles : odeur de
menthe forte

21

17

Feuilles : saveur
lgrement menthole

dominante florale

Tiges : sucre et

anise

Corolles : parfum
citronn, got pic

21

Image

Chapitre I : Etude Bibliographique

II. Etude bibliographique des cinq plantes aromatiques mdivales


slectionnes
II.1. Achillea millefolium : informations botaniques, structurales et culturales

Figure 1: Planche botanique dAchillea millefolium L. (Wilhelm, 1885)

Famille : Asteraceae
Genre: Achillea
Espce: Achillea millefolium L.
Sous-espce: Achillea millefolium subsp. millefolium
Varit : Achillea millefolium var. millefolium

22

Chapitre I : Etude Bibliographique


II.1.1. Noms et origine
Achillea millefolium L. (Asterace), qui est connue comme lachille millefeuille est
distribue de faon sauvage en Amrique du nord et en Europe. Elle comprend plusieurs types
ttraplode, hexaplode et plusieurs hybrides. Le genre Achillea est reprsent par 85 espces
majoritairement rpandues en Europe, Asie et Amrique du Nord. LAchille millefeuille a
t utilise comme herbe mdicinale (Orav et al., 2006), Le nom dAchille dsigne le hros
grec Achille, qui a utilis dit on, cette plante sur le champ de bataille pour tancher le
saignement des blessures de ses hommes.
Elle panouit de mai la fin de lautomne ses fausses ombelles blanches, parfois roses, au
long des chemins, des voies ferres, dans les terrains vagues, les cultures, les friches. Cette
Astrace se distingue des Apiaces, avec lesquelles les non botanistes pourraient la
confondre, par lexamen de ses petites fleurs qui sont en ralit des capitules et par le fait
que leurs pdoncules communs ne partent pas dun mme point sur la tige principale. Ces
caractres, joints ceux des feuilles, troites, bords presque parallles, folioles disposes
sur deux rangs, et trs finement dcoupes, la rendent aisment reconnaissable.
II.1.2. Distribution nationale

(Le rseau de la botanique francophone)

II.1.3. Usage tonique stomachique


Herbe Militaire, Herbe Coupures, Herbe aux charpentiers, ces noms disent assez que
lAchille millefeuille fut autrefois tenue en estime par ceux que leur profession exposait au
coup de sabre ou au coup dherminette. Lusage interne de lAchille Millefeuille a fait lobjet
23

Chapitre I : Etude Bibliographique


dun grand nombre de travaux qui ont montr son utilit comme tonique amer, hmostatique,
emmnagogue (AFSSAPS, 2009). On emploie les sommits fleuries dont la rcolte est
possible tout lt. Linfusion 5% est utile dans les maux destomac aigus et chroniques.
Linfusion et la macration ont aussi une heureuse influence sur la circulation sanguine.
II.1.4. Usage hmostatique
Employe lextrieur en topique sur les hmorrodes (Lieutaghi, 1966), les fissures anales,
lachille se montre fort efficace et particulirement sur les hmorrodes en agissant non
seulement par astringence mais aussi dune manire spciale et directe sur les vaisseaux et
les nerfs du rectum et cette action est tout la fois astringente, tonique et sdative.
II.1.5. Usage emmnagogue
Dans les rgles douloureuses (Lieutaghi, 1966), insuffisantes ou supprimes par une cause
accidentelle passagre (froid, motion, etc..) ou mme plus profonde (chlorose,
affaiblissement etc..), lusage de linfusion concentre de lAchille millefeuille est dune
efficacit reconnue et le flux menstruel peut se produire parfois une demi-heure seulement
aprs labsorption.
II.1.6. Autres usages
LAchille millefeuille est une bonne plante de gazons que lon mle avantageusement aux
Gramines. Des tontes frquentes doivent cependant lempcher de monter en fleur. Sa
prsence est trs souhaitable dans les prairies temporaires quelle contribue enrichir, la
prsence de plantes aromatiques et mdicinales dans les herbages ayant le meilleur effet sur la
sant du btail (Lieutaghi, 1966).
Aujourdhui, lAchille est utilise principalement dans le domaine mdicinal, parfois dans
laromatisation de certaines bires.

24

Chapitre I : Etude Bibliographique


II.1.7. Proprits physicochimiques et biologiques
Dans les 200 annes passes, lhuile essentielle dAchille millefeuille a t un sujet
intressant pour plusieurs investigateurs. Les premires productions de lhuile essentielle
furent en 1719 par Hoffman (Hoffman, 1935). Cependant Bley (Bley, 1928) est officiellement
considr comme tant le premier qui a produit cette huile. Plusieurs recherches ont t
cibles vers ltude de lazulne dans lhuile essentielle depuis la dcouverte de sa
responsabilit dans la coloration bleue de lhuile essentielle (Weber et al., 2007).
Oswiecimska (Oswiecimska, 1974) a dmontr que la prsence de lazulne ou des
prcurseurs dazulne dans les diffrentes varits de lAchille est relie au nombre de
chromosomes. Les ttraplodes produisent de lazulne ; par contre, les octaplodes et les
hexaplodes nen produisent pas. Les auteurs ont concentr leurs travaux sur Achillea
millefolium L. qui est une varit hexaplode donc ne produisant pas dazulne. La
composition chimique de lhuile essentielle de lAchille millefeuille dpend du nombre de
chromosomes de lespce, lhuile distille dune espce ttraplode, octaploide et hexaplode
est caractrise par la prsence de chamazulne. Les di et ttraplodes contiennent des proazulnes, qui se transforment leur tour en azulne color. Lhuile distille de lEstonie et de
Grce est riche en chamazulne (jusqu'au 25%) (Orav et al., 2006).
Leffet du temps dhydrodistillation sur la formation de chamazulne et sur la variation de %
des monoterpnes, monoterpnes oxygns, et les autres familles de terpnes a t tudi par
Orav et al. (Orav et al., 2001).
En effet, les auteurs ont remarqu que le pourcentage de monoterpnes diminue avec
laugmentation de temps de lhydrodistillation (0,5, 1, 2 et 3 heures), par contre le
pourcentage des monoterpnes oxygns reste stable. Le pourcentage de chamazulne
augmente 3 fois plus en passant de 0,5 3heures dhydrodistillation (Orav et al., 2001).
Orav et al. ont analys lhuile essentielle de lAchille millefeuille provenant de France
(partie traite non prcise) leur rsultats montrent une quantit leve des monoterpnes
oxygns (53,9-76,1%), principalement le camphre (jusquau 24,5%), ainsi les et -thujone
(jusquau 26.8%), 1,8-cinole (jusqu'au 20,3%) et artemisia ctone (jusquau 10,1%).

25

Chapitre I : Etude Bibliographique


II.2. Tanacetum balsamita : informations botaniques, structurales et culturales

Figure 2 : Planche botanique de Tanacetum balsamita (Le rseau de la botanique francophone)

Famille : Asteraceae
Genre : Tanacetum
Espce : Tanacetum balsamita L.

26

Chapitre I : Etude Bibliographique

II.2.1. Noms et origine


Dorigine d'Asie occidentale. C'est une plante de climat tempr, largement naturalise
en Europe, en Afrique du Nord et en Amrique du Nord. Le chrysanthme balsamique, figure
2 est originaire des rgions sud de l'Europe mais est maintenant cultiv un peu partout
jusquen Amrique du Nord. Cette plante connue sous diffrents noms : herbe Sainte-Marie,
Balsamita mas, maudin, Balsamita foemina, menthe-coq, et menthe de Notre-Dame.
II.2.2. Distribution nationale

(Le rseau de la botanique francophone)


II.2.3. Diverses proprits
Cette grande compose vivace, parfois cultive dans les jardins, forme des
peuplements souvent denses dans les terrains vagues, sur les dcombres, au long des voies
ferres, des berges des chemins, dans une grande partie de la France (elle est rare dans
lOuest, le Sud-ouest et le Midi (Lieutaghi, 1966). La balsamite fleurit tout lt ; on rcolte
ses sommits au dbut de la floraison, les semences la maturit des capitules.
Dtroits liens de parent unissent, dans la famille des astraces, la balsamite et la
tanaisie. Lune originaire du Midi est cultive dans les jardins comme plante dornement,
lautre abondante dans lle de France o on la rencontre sur les berges des rivires, le long
des routes, dans les lieux pierreux (Leclerc, 1949). On pourrait mme les confondre
nobserver que leurs nombreux capitules disposs en corymbes terminaux qui charment le
regard par la teinte dun beau jaune dor de leurs fleurons, particulirement clatants chez la
Tanaisie. Mais il suffit de comparer les feuilles des deux espces pour que devienne
impossible toute erreur de confusion : presque glabre et dun vert fonc, pennatipartites. C'est-

27

Chapitre I : Etude Bibliographique


-dire profondment divises en segments rguliers disposs comme les barbes dune plume
et dents sur leur bords. Chez la Tanaisie, elles sont, chez la Balsamite, dun vert cendr,
pulvrulentes, de forme elliptique, les radicales portes par un long ptiole, celles qui
garnissent la tige, sessiles. Au niveau de lolfaction, la fragrance si agrable de menthe ne
permet pas de confondre avec celle de Tanaisie.
II.2.4. Usage pharmacologique
Aux dires du capitaine Bontemps quelle drle dide, on bon toubib, davoir
assaisonn cette salade deau de dentifrice et de chicotin ! , en effet, son odeur de menthe
sajoute une saveur dune agressive amertume (Leclerc, 1949). Cest ce que la plante
renferme, surtout lpoque de la floraison, un principe amer qui sy trouve associ une
huile essentielle obtenue par distillation.
Quelques 200 ans plus tard, Murray et al. sexprimaient en ces termes sur le compte
dune plante si merveilleuse : elle est inusite, bien que son odeur semble promettre quelque
activit : je lis quelle fortifie lestomac, calme les coliques, favorise la menstruation, toutes
choses qui nont rien de contraire la raison : on peut la prescrire dans les affections
hystriques (Murray, 1792). Cette esquisse pharmacologique nous montre dans la balsamite
un mdicament utile lestomac, au foie en le rendant plus apte remplir le rle capital qui
lui est dvolu dans les actes fondamentaux du mtabolisme (Leclerc, 1949).
Tanacetum balsamita L. est bien connue comme une herbe mdicinale. Elle a t
utilise depuis des sicles par les gyptiens, les romains, et les grecs. Le nom de la balsamite
est d au balsam herb c'est--dire la lgret et le plaisir de lodeur aromatique balsamique
de lhuile, qui est prsent dans des poils scrteurs de la surface infrieure de la feuille
(Leclerc, 1949).
II.2.5. Usages divers
Les semences de la Balsamite sont condimentaires ; on peut les rajouter faibles doses
sur les viandes, les gibiers, dans les pts, dans les gteaux. Par macration dans lalcool, elles
donnent une liqueur assez voisine de la chartreuse mais peu recommandable en raison des
proprits convulsivantes de la plante (Leclerc, 1949). C'est une plante qui a dj t utilise
dans le procd de brassage de la bire pour la conservation et pour y transmettre un got
d'amertume. Les feuilles ont une senteur de menthe citronne qui se conserve trs longtemps
mme une fois sches.

28

Chapitre I : Etude Bibliographique


II.2.6. Cultures
La balsamite, rustique et vivace, vit trs facilement en terres fraches et fertiles, assez lgres.
On la multiplie par clats de pieds ou par semis de graines en place au printemps. C'est une
plante vivace, assez grande, jusqu' 1,2 m, exhalant un parfum agrable rappelant celui des
menthes. Les feuilles sont simples, ovales, d'une consistance ferme et bords crnels. Les
feuilles infrieures sont longuement ptioles, alors que les feuilles suprieures sessiles
embrassent la tige. Les fleurs sont groupes en petits capitules, de 5 6 mm de diamtre, euxmmes groups en corymbes sur une tige dresse. La plante est vivace par sa tige souterraine
rampante qui met des bourgeons.
II.2.7. Proprits physicochimiques et biologiques
Jaimand et al. ont travaill sur lhuile essentielle de la balsamite provenant de lIran
(Jaimand et al., 2005) en sparant les diffrents organes (feuille, fleur et tige), les composs
majoritaires qui constituent la composition des trois diffrentes huiles obtenues sont : actate
de bornyle, pinocarvone, camphre et terpinolne, avec des variations quantitatives

non

significatives en fonction de lorgane tudi.


En 1968, Gockeritz a dfini 2 chmotypes de Tanacetum balsamita en fonction de la
dominance du terpne (type camphre: Balsamita major (L.) Desf. Asch) et type carvone:
Tanacetum balsamita (L.) Desf. var. tanacetodes (Boiss) Fiori (Goeckeritz, 1968). Dans la
littrature de Bestman et al. en 1984, on a propos un 3me chmotype avec la dominance des
deux composs carvone et camphre dans lhuile essentielle (Bestmann et al., 1984). En 1968,
Gockeritz et al. ont analys lHE des feuilles de la Balsamite de type camphre (91%)
(Goeckeritz, 1968). En 1938, Voight et al. ont analys la composition chimique de lHE de la
balsamite type carvone (Voigt et al., 1938). En 1973, Juknevicien et al. ont tudi la variation
de la composition chimique de lHE en fonction de phase de croissance de la plante ainsi que
lorgane anatomique trait. Trois ans aprs, Paris et al. en 1976, ont identifi 1,3% de lHE
dans les fleurs et 0,7% dans la partie arienne.
Zielincka-Sowicka et al. ont identifi dans les feuilles 13 composs constituant 91% de la
composition totale (camphre, bornol, isobornol, camphne, carvone, limonne et alphapinne) (Zielinska-Sowicka et al., 1970).
Mounfared et al. ont analys lhuile essentielle de la partie arienne sche de la Balsamite
provenant dIran (Tanacetum balsamita, L. ssp. balsamitodes (schultz Bip) Grierson [syn.

29

Chapitre I : Etude Bibliographique


Chrysantemum balsamita (L.) Wild], 31 composs ont t identifis parmi lesquels la carvone
(68%) constitue le compos majoritaire (Monfared et al., 2002).
Baser et al. ont identifi la composition de lhuile essentielle ainsi que la distribution
nantiomrique de plusieurs espces de Tanacetum parmi lesquelles Tanacetum
balsamita(Baser et al., 2001)
En 2000 Bylaite et al. ont tudi la variation de la composition de lhuile essentielle de
Balsamita major (L.). Desf en fonction des diffrentes phases de croissance et de la partie
hydrodistille (feuilles et fleurs) o le rendement en huile essentielle lev a t dtect durant
la phase de floraison (Bylaite et al., 2000). On a remarqu quil ny a pas de variation
considrable de la composition selon la phase de croissance lexception du dbut de la phase
(mai) o le % de carvone est plus faible que celui de la bta thujone.
En 2001, Gallori et al. ont analys la composition chimique de lHE et de leau aromatique
des feuilles de la Balsamite dorigine Italienne (Gallori et al., 2001), et la carvone a t
dtecte comme le compos majoritaire dans les deux parties.
Il existe galement des travaux concernant lactivit insecticid de la Balsamite. Une vingtaine
de composs actifs ont t identifis dans lHE pour leur forte activit insecticide contre les
aphides (Bestmann et al., 1984). Todorova et al. en 1989, ont focalis leurs travaux sur la
recherche des flavonodes dans la fraction O-dihydroxyphnolique de Balsamita major o on
a identifi 5 composs comprenant les acides cafique, chlorognique et frulique (Todorova
et al., 1989).
7 espces de Tanacetum de diffrentes origines gographiques parmi lesquelles
Tanacetum balsamita, ont t analyses pour leur potentiel lev en flavonodes lipophiliques
et polaires. La partie traite de la balsamite tait les feuilles o on a identifi 5 flavonodes
(Williams et al., 1999).
Dun autre ct, en 1996, Kubo et al. ont isol partir des fleurs sches de Tanacetum
balsamita (Catinga-de-mulata) dorigine brsilienne un compos actif antimicrobien qui
sappelle la Tanabaline (Kubo, 1995).
En 2003, Nickavar et al. ont isol partir de la partie arienne de la balsamite dorigine
Iranienne un flavonol (Nickavar et al., 2003) dont la structure est prsente dans la figure 7.

30

Chapitre I : Etude Bibliographique

Figure 3: structure chimique de 3',4',5,7-Tetrahydroxy flavonol

En se basant sur la nature du terpne dominant on peut identifier 4 chmotypes : type


camphre, type carvone, type camphre-thujone et type carvone-thujone.

31

Chapitre I : Etude Bibliographique


II.3. Calamintha grandiflora : informations botaniques, structurales et culturales

Figure 4: Planche botanique de Calamintha grandiflora (Le rseau de la botanique francophone)

Famille : Lamiaceae
Genre : Calamintha
Espce : Calamintha grandiflora (L.) Moench

32

Chapitre I : Etude Bibliographique


II.3.1. Noms et origine
Utilis en infusion comme une tisane, le Th dAubrac est la plante la plus rare parmi
les plantes slectionnes, Calamintha grandiflora (L.) Moench (Syn.Satureja grandiflora (L.)
Scheele) voir les synonymes Melissa grandiflora L., Thymus grandiflorus Scop., Satureja
grandiflora (L.) Scheele, Calamintha mariae, le Th dAubrac est une plante connue dans la
rgion dAubrac au Massif Central en France. Elle appartient la famille des Labies, de
taille (20-60 cm) et dune odeur forte et pntrante particulirement en juillet. Plante vivace
de 20-50 cm., verte, poils pais, odeur agrable, souche stolonifre ; tige simple ; feuilles
grandes, ovales, long ptiole, limbe plus long que large, fortement dent en scie dents
profondes, triangulaires, tales ; fleurs rouge pourpre, trs grandes, peu nombreuses en
verticilles carts, pdoncules communs plus courts que les feuilles ; calice long de 12-16
mm., vert, glabrescent, tube droit, poils de la gorge inclus, dents ingales, cilies ;
corolle dpassant de 18 mm. La gorge du calice, tube arqu-ascendant ; carpelles ovodes,
noirs. Avant les annes 1990 il nexistait pas dtudes chimiques dans la littrature concernant
la composition chimique de son huile essentielle (Souleles et al., 1990).

II.3.2. Distribution nationale


La distribution gographique de cette labie couvre l'Europe centrale et mridionale. D'aprs
Grualbo, il s'agit d'une espce frquente dans le sud-est de la France (Grualbo et al., 1993),
depuis le Massif Central jusqu'aux Alpes occidentales, tant aussi prsente dans les Pyrnes
orientales et la Corse. Rcemment, Galland et al. ont aussi mentionn une sous espce comme
tant prsente en Afrique du Nord (Rif et Atlas moyen) sous le nom de Calamintha
grandiflora (L.) Moench subsp. Baborensis (Bali) Galland; les plantes nord-africaines
prsenteraient la mme allure que celles d'Europe, mais seraient plus rduites, c'est dire,
avec des feuilles, calice et corolle un peu plus courts.

33

Chapitre I : Etude Bibliographique

(Le rseau de la botanique francophone)

II.3.3. Historique de la dcouverte du Th dAubrac dans les Pyrnes


Calamintha grandiflora est une espce rare aux Pyrnes, notamment sur le versant
mridional. Sa dcouverte prolonge son aire de rpartition d'environ 200 km vers l'Ouest.
Peut-tre d'autres citations pninsulaires telles Torrecilla de Alcafiiz (Teruel), Moncayo
(Zaragoza), montagnes de Santander, etc. doivent se rapporter des confusions avec les
espces du mme genre (Calamintha sylvatica) ou de la mme famille (Melissa
officinalis)(Grualbo et al., 1993).
II.3.4. Ecologie
A peu prs tous les ouvrages consults indiquent la prfrence cologique de l'espce pour les
forts ombrages et fraches des tages montagnard et subalpin, surtout htraies; cependant, la
plante semble avoir t trouve dans les sapinires et mme les forts de pin crochets.
Calamintha grandiflora est une espce rare aux Pyrnes (Grualbo et al., 1993) notamment
sur le versant mridional. La dcouverte de cette labie dans les Pyrnes aragonaises autorise
l'espoir de sa prsence possible dans des diffrentes enclaves de la valle de Boucharo. Si, au
contraire, elle n'existait que dans cette population isole, elle courrait un risque de disparition
au cas d'un largissement de la route forestire.

34

Chapitre I : Etude Bibliographique


II.3.5. Proprits physicochimiques et biologiques
Dans la Littrature, il existe peu dtudes concernant la composition chimique de lhuile
essentielle de Calamintha grandiflora. Deux espce et sous-espces de Calamintha ont t
tudies dans la littrature ; les rsultats montrent une diffrence remarquable dans la
composition chimique des deux huiles essentielles. La premire sappelle Calamintha nepeta
(L.) Savi et a comme composs majoritaires : la pulgone, la menthone et lisomenthone.
Lautre espce sappelle Calamintha nepeta (L.) Savi. Ssp. Glandulosa (Souleles et al.,
1990) ; cette dernire contient dans son huile loxyde de pipritone, loxyde de pipritnone et
le limonne comme composs majoritaires.
Baser et al. ont travaill sur les feuilles de la Calamintha grandiflora (L) Monech [syn.
Satureja grandiflora (L.) Scheele, Melissa grandiflora L., Clinopodium grandiflora (L.)
Kuntze], le compos majoritaire de lhuile essentielle tait lisopinocamphone (52,59%)
(Baser et al., 1993).

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Chapitre I : Etude Bibliographique


II.4. Myrrhis odorata : informations botaniques, structurales et culturales

Figure 5: Planche botanique de Myrrhis odorata (Le rseau de la botanique francophone)

Famille : Apiaceae
Genre : Myrrhis
Espce : Myrrhis odorata (L.) Scop.

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Chapitre I : Etude Bibliographique


II.4.1. Noms et origine
Plusieurs noms communs ont t attribus cette plante : cerfeuil perptuel, cerfeuil
d'Espagne, fougre musque et cerfeuil musqu.
Plante vivace de 50 cm 1 mtre, velue, odeur d'anis ; tige robuste, creuse, cannele ;
feuilles grandes, molles, bi-tripennatisques, segments lancols, inciss-pennatifides ;
fleurs blanches, en ombelles 6-15 rayons pubescents, dresss la maturit ; involucre nul ;
involucelle 5-8 folioles lancoles, membraneuses, cilies, rflchies ; ptales obovales,
margins, pointe courbe ; styles courts, rflchis ; fruit grand, oblong, long de 20 30
mm., comprim par le ct, acumin d'un noir luisant la maturit ; mricarpes 5 ctes
gales, fortement carnes, tranchantes, creuses en dedans, spares par ds vallcules
profondes, sans bandelettes.
Prairies et bois des montagnes ; Vosges ; Jura ; Alpes ; Forez, Auvergne et Plateau central ;
Corbires et Pyrnes. Europe centrale et mridionale.
Le cerfeuil musqu est une plante indigne en Europe; son utilisation a connu du succs au
XVme sicle puis elle a disparu des jardins, pour revenir la mode de nos jours, malgr sa
difficult de multiplication. Les anciens attribuaient dj cette plante des proprits
mdicales extraordinaires ; daprs Apule, elle tait un remde infaillible contre les
blessures, la sciatique, lhypochondrie et autres maladies. Mais le cerfeuil musqu tait
surtout une plante sacre dans les croyances populaires.
II.4.2. Distribution nationale

(Le rseau de la botanique francophone)

37

Chapitre I : Etude Bibliographique


II.4.3. Diverses proprits
Le cerfeuil musqu est une plante herbace vivace de la famille des Apiaces cultive pour
ses feuilles et ses graines au got sucr et anis, utilises comme condiments alimentaires
(Hussain et al., 1990). Toutes les parties de la plante possdent le parfum et le got sucr de
l'anis. Myrrhis odorata possde des proprits expectorante, diurtique et tonique. Elle
contient une huile essentielle riche en anthole(Kudrzycka-Bieloszabska et al., 1970).
Le cerfeuil musqu est une herbe vivace qui crot jusqu' 1 m de hauteur. Tiges dresses,
creuses, trs ramifies. Les grandes feuilles, jusqu' 30 cm, molles, sont trs dcoupes, bi- ou
tripennes, et ressemblent celle des fougres. Petites fleurs blanches groupes en ombelles
larges et tales avec des rayons de 10 12 cm. Graines assez grandes, 25 mm. La plante se
ressme facilement.
II.4.4. Usages divers
Le cerfeuil musqu est souvent confondu avec le cerfeuil dne (Anthriscus silvestris) qui est
toxique. Le simple froissement des feuilles de Myrrhis odorata dgage une forte odeur anise
rappelant la rglisse. Myrrhis odorata permet de diminuer la quantit de sucre utilis dans les
plats sucrs (diabtiques) (Sawicka et al., 1999). Elle a une action digestive. Les feuilles
fraches, crues, odeur anise caractristique, peuvent servir aromatiser les salades et
crudits, omelettes et potages. Les graines sont utilises pour parfumer les desserts.
II.4.5. Proprits physicochimiques et biologiques
En 1982, Kubeczka et al. ont analys lhuile essentielle de la partie arienne de Myrrhis
odorata et ont dtect 76,8 % danthole en compos majoritaire (Kubeczka et al., 1982). En
1990, Hussain et al. ont fait des tests organoleptiques afin de dcouvrir des agents sucrs issus
des plantes. Parmi les plantes slectionnes se trouvait Myrrhis odorata o lon a identifi
85,48% de trans-anthole et 9,08% de mthyl eugnol (Hussain et al., 1990).
En 1993, lHE des feuilles de Myrrhis odorata dorigine russe a t analyse par Tkachenko
et al. o lanthole constitue le compos majoritaire (82-85%) (Tkachenko et al., 1993).
En 1999, lHE des feuilles de cerfeuil musqu rcoltes en aot en Finlande a t analyse
par Usitalo et al. ; La composition chimique est marque par la prsence de mthyl chavicol
(2,64%), labsence de limonne, de caryophyllne et de germacrne. La prsence de
monoterpnes oxygns tait remarquable (Uusitalo et al., 1999).

38

Chapitre I : Etude Bibliographique


En 2005, Rancic et al. ont analys lHE de Myrrhis odorata en priode de floraison ; le paracymne tait le compos majoritaire (62,0%) (Rancic et al., 2005).
En gnral, la composition de lhuile essentielle de Myrrhis odorata est relativement
semblable qualitativement lexception de lespce provenant de Finlande. Nanmoins, des
diffrences quantitatives sont prsentes en fonction de lorigine gographique et de lorgane
trait.

39

Chapitre I : Etude Bibliographique


II.5. Monarda didyma : informations botaniques, structurales et culturales

Figure 6: Planche botanique de Monarda didyma (Le rseau de la botanique francophone)

Famille : Lamiaceae
Genre : Monarda
Espce : Monarda didyma L.

40

Chapitre I : Etude Bibliographique


II.5.1. Noms et origine
La Monarde ou Monarda (bergamote en anglais) est une plante vivace originaire d'Amrique
du Nord ; elle constitue l'quivalent de notre menthe ; elle appartient la famille des
Lamiaces, douce au toucher, elle dgage une forte odeur aromatique rappelant celle de la
menthe et du citron.
II.5.2 . Distribution nationale

(Le rseau de la botanique francophone)


II.5.3. Diverses proprits
Elle produit des tiges quadrangulaires, raides et dresses, vert rougetre. Les feuilles opposes
sont d'un vert assez sombre ; elles ont une forme allonge, voire lancole et leur bordure
prsente de petites dents. De mi-juin septembre, la floraison vient illuminer cette plante. Il
existe une douzaine d'espces de monade ; les plus cultives sont Monarda didyma qui
demande un sol humide et dont il existe de nombreuses varits fleurs blanches, roses,
rouges ou violaces et Monarda fistulosa, plus grande (1,5 m) plus rsistante la scheresse
et aux fleurs dans les tons pourpres, rouges ou violacs.
II.5.4. Usages divers
La Monarde est utilise pour aromatiser les plats et en infusion. On lui attribue des
vertus mdicinales : diurtique, antifbrile, sudorifique, carminative et antiseptique grce au
thymol qu'elle contient.

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Chapitre I : Etude Bibliographique


II.5.5. Proprits physicochimiques et biologiques
Monarda didyma dorigine franaise analyse en 1991 par Carnat et al. avait le linalol (64,574,2%) comme compos majoritaire. Ils ont analys lHE des feuilles et des fleurs sparment
(Carnat et al., 1991). Un an plus tard Mazza et al. ont analys lhuile essentielle de plusieurs
hybrides de lespce Monarda provenant de lhybridation entre deux espces M. fistulosa et
M. didyma (Mazza et al., 1992). Une distribution de terpnes cycliques dans la majorit de ces
hybrides a t rapporte.
Rcemment Fraternale et al. ont analys lhuile essentielle de Monarda didyma dorigine
italienne ; lhuile essentielle a t obtenue partir des tiges et feuilles ainsi que des fleurs. La
composition de lHE provenant de la partie arienne (tiges et feuilles) est quasi semblable
quantitativement et qualitativement celle obtenue partir des fleurs (Fraternale et al., 2006).
En gnral, la composition chimique de lespce Monarda didyma, diffre selon lorigine
gographique de la plante ; par contre, lorgane trait na pas dinfluence sur cette
composition.

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Chapitre I : Etude Bibliographique

III. Techniques dextraction des fractions volatiles


De manire gnrale, la distillation est un procd de sparation bas sur la diffrence de
composition entre un liquide et la vapeur engendre (Garnero, 1996). La technique implique
la condensation de la vapeur et la rcupration des fractions liquides rsultantes. On parle de
distillation simple ou fractionne lorsquil sagit de liquides miscibles. On peut galement
procder la distillation de liquides non miscibles. Cest le cas de lhydrodistillation des
huiles essentielles.

III.1. Techniques dextraction des huiles essentielles


III.1.1. Hydrodistillation
Lhydrodistillation consiste immerger la matire premire dans un bain deau. Lensemble
est port bullition et lopration est gnralement conduite pression atmosphrique. La
distillation peut seffectuer avec ou sans recyclage communment appel cohobage.
Lors de la distillation des huiles essentielles, plusieurs phnomnes sont la base dchanges
de matire entre les phases solide, liquide et vapeur, do linfluence dun grand nombre de
paramtres sur la qualit et le rendement de la production (Hajji et al., 1985). Les
exprimentations conduites jusqu puisement du substrat en essence montrent que la dure
de la distillation est plus longue pour les organes de plantes ligneuses que pour les herbaces.
Cette diffrence est fortement lie la localisation des structures dlaboration ou de stockage
des huiles essentielles pouvant tre superficielles ou internes. De ce fait, elles ont une
influence sur le droulement de lhydrodistillation, c'est--dire sur les mcanismes successifs
mis en jeu, et par consquent sur la dure.
Dans le cas o ces structures sont superficielles, la membrane externe ou la cuticule qui
constituent les seules barrires la libration de lhuile essentielle, est vite rompue
bullition, les composs volatils sont aussitt vapors. Lorsque les HE sont sous-cutanes,
elles doivent dabord diffuser travers lpaisseur du tissu vgtal avant dentrer en contact
avec leau ou sa vapeur. Elles sont alors vapores comme dans le cas des secrtions
superficielles.
Ainsi durant la distillation, leau bouillante pntre dans les cellules vgtales et solubilise
une partie de lHE de lappareil scrteur interne. La solution aqueuse charge de composs
terpniques, diffuserait ensuite travers une paisseur de tissu, plus ou moins dense, selon

43

Chapitre I : Etude Bibliographique


lorgane, vers la surface extrieure o lhuile essentielle serait vaporise et entrane sous
forme dazotrope.
Cependant, on attribue le terme dhydrodiffusion ce type de transport contrl par la polarit
des constituants. Elle serait responsable de la vitesse relative de la distillation des diffrents
composs aromatiques, dpendant davantage de leurs solubilits dans leau que de leurs
points dbullition. Si lhydrodiffusion constituait ltape limitante de lhydrodistillation,
alors lordre de sortie des composs serait dict par leur polarit et non par leur volatilit
(Acquaronne et al., 1998). Dans le cas de composs de volatilit et de polarit intermdiaires
tels que les esters mono terpniques, ni la vitesse dhydrodiffusion ni la vitesse de
vaporisation ne seront ngligeables. Lhydrodiffusion et la vaporisation ne constituent pas les
seuls mcanismes mis en jeu lors de lhydrodistillation ; il faut leur associer la dcantation qui
fait intervenir une vitesse de transfert de matire entre deux phases liquides. Lisolement de
composs volatils aprs leur distillation est dtermin dans une large mesure par leur degr de
solubilit dans leau.
Par consquent, leau rsiduelle peut tre plus ou moins sature en constituants polaires selon
la difficult de sparation des phases. Celle-ci peut avoir trois origines ventuellement
combines :
une partie de lhuile essentielle est dissoute dans leau, soit 1% environ de la fraction
dcante, rarement plus de 2% et exceptionnellement suprieure 5% dans le cas de certains
composs polaires phnoliques ;
Une autre fraction est mulsionne le plus souvent dans 10% deau ;
Enfin, une quantit est fortement mlange avec de leau et des molcules organiques tierces.
A linterface huile/eau, elle peut tre suprieure 10%.
Dans ces conditions, les pertes dues une mauvaise dcantation peuvent atteindre 25% et
plus, de lessence recueillie.
III.1.2. Hydrodistillation-extraction simultane
La distillation la vapeur (Likens-Nickerson) combine les avantages de lhydrodistillation et
de lextraction au solvant. Lhydrodistillation permet dviter lextraction des composs non
volatils, et lutilisation en faible quantit dun solvant non miscible leau facilite lextraction
des composs organiques (Pollien et al., 1998).
Ce procd trs efficace, repose sur le chauffage en parallle de la matrice (dans leau) et du
solvant. Les vapeurs sont diriges vers un extracteur central et se condensent sur un doigt

44

Chapitre I : Etude Bibliographique


froid. Les liquides sont collects et dcants dans la partie basse de lappareil, puis retournent
dans leurs ballons respectifs.
Lavantage principal de cette mthode rside dans ce recyclage, qui assure une faible
consommation de solvant et la prconcentration de lextrait. Bien que tout solvant organique
non miscible dans leau puisse tre utilis (en ajustant lappareil en fonction de sa densit),
linconvnient majeur de cette mthode, tout comme pour lentranement la vapeur, rside
dans la formation possible dartefacts dus au chauffage de la matrice en milieu aqueux
(Chaintreau, 2001). Nanmoins, cette limite a conduit dvelopper des extractions sous
pressions rduites des tempratures proches de la temprature ambiante (Pillonel et al.,
2002).
III.2. Techniques dextraction des composs organiques volatils (COV)
Facilement automatisables, simples, les techniques de lespace de tte ou Headspace ne
requirent pas de grandes quantits dchantillon (Kolb, 1999). La possibilit davoir des
artfacts et de contaminations est trs faible si on manipule avec soin. La mthode consiste
extraire les composs organiques volatils mis par un chantillon liquide ou solide (Pillonel et
al., 2002; Pawliszyn, 2003). Pour cela, une petite quantit de lchantillon est place dans un
flacon hermtiquement clos par un septum en PTFE/silicone. Un quilibre entre lchantillon
et la phase gazeuse est ncessaire, une partie de cette dernire est prleve pour tre analyse,
le plus souvent par Chromatographie en phase gazeuse (CPG). Pour les matrices peu
odorantes, un chauffage lger peut tre appliqu pour atteindre plus rapidement lquilibre.
Ces techniques sont complmentaires des mthodes dextraction aux solvants organiques.
Cependant, la concentration relative des composs dans lespace de tte ne reflte pas leur
concentration relle dans lchantillon (Matich et al., 1999).
III.2.1. Espace de tte statique (atmosphre confine)
Dans la technique de lespace de tte statique ou Static HeadSpace (SHS), la phase gazeuse en
quilibre avec lchantillon est prleve laide dune seringue gaz ou dune boucle
dinjection et injecte directement dans un chromatographe. Cette technique est parfaitement
automatise, reproductible et trs utile pour un criblage rapide de nombreux chantillons
(Kolb, 1999). Linconvnient majeur de cette mthode est la discrimination des composs
selon leur volatilit, les composs les plus volatils saturant trs rapidement lespace de tte.

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Chapitre I : Etude Bibliographique


Lespace de tte statique est gnralement utilis pour extraire et quantifier des composs trs
volatils de matrices alimentaires (Fleming Jones et al., 2003).
III.2.2. Espace de tte dynamique
La mthode de lespace de tte dynamique ou Dynamic Headspace (DHS) (Da Costa et
al., 2005) consiste entraner les composs volatils dun chantillon laide dun gaz vecteur
inerte (azote ou hlium) et de les piger dans un tube en verre dsactiv ou en acier
inoxydable rempli de carbone ou dun polymre organique poreux. Les polymres utiliss
(Porapak, Carboxen, Tenax, Chromosorb) ont une grande surface spcifique et
possdent tous la proprit de retenir faiblement les composs polaires de masse molaire peu
leve. Le Tenax est le polymre le plus employ ; trs stable thermiquement et
hydrophobe, il est peu slectif ce qui en fait un pige de choix pour extraire les COVs, puis
les analyser par CPG (Pillonel et al., 2002). Pour faciliter la saturation de lespace de tte, les
chantillons sont frquemment chauffs et/ou agits pendant lextraction. Les composs
organiques retenus par le pige sont ainsi concentrs. Cependant, il est possible de dpasser la
capacit du pige, ce qui peut conduire la perte de nombreux composs lors de lextraction.
III.2.3. Espace de tte pseudo-dynamique
Les techniques dadsorption ou dsorption sont trs utilises pour lanalyse des
Composs Organiques Volatils (COV). Elles permettent lextraction et la concentration des
composs volatils sans solvant. Elles sont bases sur la partition des composs organiques
entre une phase aqueuse ou gazeuse et un film polymrique de faible paisseur. Dans ce
groupe, on peut distinguer trois grandes techniques : la microextraction en phase solide
(SPME), lextraction par adsorption en espace de tte (Headspace Sorptive Extraction, HSSE)
et lextraction dynamique en phase solide (Solid Phase Dynamic Extraction, SPDE).

Microextraction en phase solide (SPME)


Cette mthode dextraction prsente lavantage de regrouper toutes les tapes de la
prparation dun chantillon (extraction, concentration, drivation et transfert au
chromatographe) en un seul procd. En particulier, elle peut se rvler une meilleure
mthode pour les analyses qui requirent des extractions longues et coteuses et ncessitent
une grande consommation de solvants. Elle utilise une fibre de silice (1 2 cm de long)
recouverte dun film polymrique pour extraire les composs organiques dun chantillon
(Burgot et al., 2003). La SPME est une technique dextraction sans solvant trs simple et

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Chapitre I : Etude Bibliographique


rapide qui est maintenant parfaitement automatise. Les fibres peuvent tre rutilises une
cinquantaine de fois, ce qui en fait une technique peu onreuse. Cependant, loptimisation des
conditions dextraction peut se rvler assez longue.
En effet, il est ncessaire de dterminer la fibre la plus efficace, les temps et les tempratures
dincubation et dchantillonnage, pour chaque chantillon. De plus, une fois ces conditions
obtenues, il peut savrer difficile dobtenir des rsultats rpttitifs et reproductifs ce qui
pourrait tre d un manque dhomognit entre certains lots de fibres. De par sa simplicit
et son cot modr, la SPME est une bonne technique pour lidentification et la comparaison
rapide et efficace darmes (Schmitt et al., 2005); elle est utilise pour lanalyse de
nombreuses matrices alimentaires comme les produits laitiers (Lubbers et al., 2004), les fruits
et lgumes (Wang et al., 2000).
En effet, la quantit du compos cible adsorbe dpend fortement des conditions
dextraction : temprature, temps dincubation et dextraction, agitation, volumes de
lchantillon et de la phase gazeuse. Elle dpend galement de la nature, de lusure de la
phase dextraction (perte de sa capacit dadsorption ou de sorption au cours du temps) et de
la nature des autres constituants caractrisant le mlange.

IV. Composition chimique des plantes aromatiques


La composition chimique des plantes aromatiques est complexe et est constitue de
deux fractions. La premire fraction dite volatile (COV) est prsente dans diffrents organes
de la plante selon la famille ; cette fraction est compose de mtabolites secondaires qui
constituent lhuile essentielle.
Les plantes aromatiques ont la particularit de renfermer au sein de leurs organes scrteurs,
des cellules gnratrices de mtabolites secondaires o il apparat clairement comment les
molcules trs volatiles sont synthtises partir dunits mthyl-2-buta-1,3-dine (isoprne)
et o les ractions daddition de ces units conduisent aux terpnes, sesquiterpnes, diterpnes
et leurs produits doxydation tels que les alcools, aldhydes, ctones, thers et esters
terpniques. Lensemble de ces produits sont accumuls dans des cellules scrtrices offrant
la plante une odeur caractristique (Heinrich et al., 1983).
La deuxime fraction dite non volatile de la plante, composs organiques non volatils
(CONV), est compose essentiellement de coumarines, flavonodes (Cisowski, 1985),
composs actylniques ainsi de lactones sesquiterpniques phnols ou polyphnols jouant un
rle fondamental dans lactivit biologique de la plante (Kubeczka et al., 1982)

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Chapitre I : Etude Bibliographique


IV.1. Fraction volatile des plantes aromatiques
Les huiles essentielles sont des substances odorantes concentres, obtenues partir de plantes
par entranement la vapeur deau, hydrodistillation ou expression (pression froid). Le
terme huile essentielle a t invent au 16ime sicle par le mdecin suisse Parascelsus von
Hohenheim afin de dsigner le compos actif dun remde naturel. Il existe aujourdhui
approximativement

3000

huiles

essentielles,

dont

environ

300

sont

rellement

commercialises, destines principalement lindustrie des armes et des parfums (Essawi et


al., 2000).
La norme AFNOR NF T 75-006 dfinit lhuile essentielle comme: un produit obtenu
partir dune matire premire vgtale, soit par entranement la vapeur deau, soit par
hydrodistillation. Lhuile essentielle est spare de la phase aqueuse par des procds
physiques . La majorit des huiles essentielles sont des liquides trs peu colors, volatils
temprature ambiante. Les huiles essentielles dgagent une odeur caractristique et sont, en
gnral plus lgres que l'eau tout en possdant des caractristiques hydrophobes.
Ce sont des molcules lgres qui sont entranes par la vapeur d'eau lors de la distillation,
l'huile se spare de l'eau du distillat mais une petite partie persiste dans l'eau et lui
communique une odeur, on parle alors d'eau aromatique, rapprocher de l'hydrolat, eau
distille aromatise (parfois artificiellement) laquelle on ajoute parfois de l'alcool, des
stabilisants chimiques ou des conservateurs. L'utilisation par les humains des plantes
aromatiques et donc des huiles essentielles est trs ancienne et assez universelle ; on s'en sert
traditionnellement pour conjurer le mauvais sort, se soigner, se dtendre, aromatiser la
nourriture, conserver les aliments.
Les huiles essentielles contenues dans les herbes aromatiques sont responsables des
diffrentes senteurs que dgagent les plantes. Elles sont trs utilises dans lindustrie des
cosmtiques, de la parfumerie et aussi de laromathrapie. Cette dernire se veut une
technique thrapeutique par le massage, les inhalations ou les bains en utilisant les huiles
essentielles des plantes. Les huiles essentielles vont servir de signaux chimiques permettant
la plante de contrler ou rguler son environnement (rle cologique): attraction des insectes
pollinisateurs, action rpulsive sur les prdateurs, inhibition de la germination des graines,
voire communication entre les vgtaux (mission de signaux chimiques signalant la prsence
d'animaux herbivores par exemple). Ces huiles sont stockes dans des structures cellulaires
spcialises (cellules huile essentielle, poils scrteurs (comme dans la menthe), canaux
scrteurs) et ont vraisemblablement un rle dfensif : protection du bois contre les insectes et

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Chapitre I : Etude Bibliographique


les champignons, action rpulsive contre les animaux herbivores (Heinrich et al., 1983). La
concentration dans les plantes est en gnral faible, aux alentours de 0,1 2%, mais il y a des
exceptions comme le clou de girofle avec 15% d'huile essentielle ou la noix de muscade, 515%. Parmi les familles vgtales les plus productrices dhuiles essentielles, on distingue les
Lamiaces (famille du Thym, de la lavande, de la menthe, du basilic etc..), les Astraces
(camomille, absinthe), les Myrtaces (Cannelle, Laurier), les Apiaces (coriandre).
IV.1.1. Localisation et structure histologique des huiles essentielles
Toutes les parties des plantes aromatiques peuvent contenir de l'huile essentielle.

les fleurs bien sur, exemples : oranger, rose, lavande ; le bouton floral (girofle) ou les
bractes (ylang-ylang)

les feuilles le plus souvent, exemples : eucalyptus, menthe, thym, laurier, sarriette,
sauge, aiguilles de pin et sapin

les organes souterrains, exemples : racines (vtiver), rhizomes (gingembre, acore)

les fruits, exemples : fenouil, anis, picarpes des Citrus

les graines : noix de muscade, coriandre.

le bois et les corces, exemples : cannelle, santal, bois de rose.


Les huiles essentielles sont produites par diverses structures spcialement diffrencies

dont le nombre et les caractristiques sont trs variables.

les poils scrteurs pidermiques rencontrs souvent chez les Lamiaces, Graniaces
et Verbnaces. Ils produisent les essences dites superficielles.

les organes scrteurs sous-cutans comprenant des cellules et des poches scrtrices
qui sont gnralement dissmines au sein du tissu vgtal chez les Myrtace,
Rutaces, ainsi que des canaux scrteurs chez les Apiaces.

La composition chimique d'une huile essentielle peut varier considrablement :

dans une mme plante selon les organes (feuille, fleur, fruit, bois)

dans l'anne selon la saison pour une mme plante,

selon les conditions de culture pour une mme espce vgtale (ensoleillement,
humidit, longueur du jour, fertilit du sol),

selon les races chimiques (ou chemotypes) pour une mme espce (l'exemple
classique est le thym avec 7 races chimiques).

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Chapitre I : Etude Bibliographique


IV.1.2. Phnomnes physico-chimiques et facteurs produisant laltration des huiles
essentielles
Au cours de lhydrodistillation, le milieu aqueux possdant un pH compris entre 4 et 7
(rsultant de limmersion du matriel vgtal), atteint occasionnellement des valeurs
infrieures 4 pour certains fruits. Les constituants de lessence native sont soumis aux effets
combins de lacidit et de la chaleur, et peuvent subir des conversions chimiques (Morin et
al., 1985). Lhuile essentielle rcupre est un produit qui diffre sensiblement de lessence
originelle, dautant plus que lbullition est longue et le pH faible.
La matire chimique prsente dans le vgtal fait lobjet de ractions chimiques diverses :
hydrolyses, dprotonations, hydratations et cyclisations pouvant tre catalyses par des
mtaux prsents ltat de traces dans la plante, provoquant des transformations chimiques
des constituants (Koedam, 1982).
Lhydrolyse desters est souvent la premire raction qui se produit durant le chauffage du
vgtal. Elle conduit la formation dacides organiques qui leur tour catalysent les ractions
de cyclisation et de dshydratation. La dgradation du sabinne donne un exemple des
transformations chimiques de lhuile essentielle lors de lhydrodistillation.
Les frquentes modifications chimiques du sabinne ont t tudies par Koedam et al.
(Koedam et al., 1980). Ils constatrent quen milieu acide dilu ce compos se transforme en
terpinn-4-ol, raction dj signale par Wallach et al. (Wallach, 1907).

Figure 7: Principales conversions chimiques du sabinne lors de l'hydrodistillation

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Chapitre I : Etude Bibliographique


Divers auteurs ont confirm ce rsultat et montr que le rarrangement du sabinne produit en
plus du terpinn-4-ol, de l-terpinne, du -terpinne, et du terpinolne reprsents dans la
figure 7.
Pour limiter les artfacts, Richard et al. prconisent de maintenir le pH proche de la
neutralit et de minimiser la dure dhydrodistillation, quand bien mme, il est bien connu que
la dgradation de la matire vgtale induit la formation dun milieu acide fortement
tamponn.
En rsum, parmi les constituants sujets aux artefacts, les auteurs signalent
particulirement :
les monoterpnes (mono et bicycliques),
les alcools monoterpniques,
les amino-acides soufrs et les oxydes sesquiterpniques.
Les tapes successives conduisant lisolement dune essence et les diverses
transformations susceptibles de laccompagner se traduisent par la modification de la teneur
en certains constituants ou par la formation de nouveaux composs, do une grande
variabilit de sa composition. De profondes modifications de lhuile essentielle peuvent
intervenir lors de lexploitation des vgtaux depuis leur collecte jusqu leur transformation
industrielle.
La priode de rcolte, les conditions de transport, de schage et de stockage peuvent
engendrer des dgradations enzymatiques. Les changements les plus importants interviennent
lors de lhydrodistillation sous linfluence des conditions opratoires, notamment du milieu
(pH, temprature) et de la dure dextraction.
Dautres facteurs tels que les traitements survenus avant ou pendant lhydrodistillation
(broyage, dilacration, dgradation chimique, pression, agitation) contribuent la variation du
rendement et de la qualit de lhuile essentielle.
Les variations de la composition des huiles essentielles provenant dun mme phnotype se
dveloppant dans le mme environnement sont lexpression de diffrences gnotypiques.
Elles peuvent tre attribues des hybridations, un polymorphisme gntique ou des
mutations.

V. Mthodes didentification chimique des huiles essentielles


Une fois lextrait le plus reprsentatif obtenu, lanalyse permet didentifier et de
quantifier les produits qui le composent. Les progrs des mthodes analytiques permettent
didentifier rapidement un trs grand nombre de constituants.
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Chapitre I : Etude Bibliographique


V.1. Chromatographie en phase gazeuse monodimensionnelle
La sparation et lidentification des constituants volatils dun extrait prsente bien
moins dalternatives que sa prparation. En effet, la CPG est la mthode de rfrence dans
lanalyse des huiles essentielles et des COVs (Lehotay et al., 2002) ; elle permet lanalyse de
mlanges, qui peuvent tre trs complexes, de nature et de volatilit trs varies (Arpino et al.,
1995).
V.2. Chromatographie en phase gazeuse couple lolfactomtrie (CPG/O)
Les huiles essentielles obtenues renferment trs souvent des centaines de composs volatils.
Le couplage CPG/O combine la sparation des composs volatils par CPG avec lvaluation
olfactive. En sortie de colonne, une partie des composs lus est envoye vers un cne de
dtection nasale qui permet lvaluation olfactive en mme temps que lenregistrement du
chromatogramme.
Tous les types de dtecteurs peuvent tre utiliss en parallle au port dolfaction, mais ce sont
les dtecteurs FID ou de masse qui sont les plus frquemment utiliss.
Afin dviter linconfort d aux effluents chauds et la dshydratation de la muqueuse nasale
qui conduit une perte de sensibilit, de lair humide est ajout en sortie de cne (Hanaoka et
al., 2000). Loprateur enregistre ses donnes olfactives grce divers dispositifs de saisie
(bouton pressoir, curseur, enregistrement vocal) relis un ordinateur. La CPG/O trouve de
nombreuses applications tant en Recherche et Dveloppement quen Contrle Qualit.
En effet, un certain nombre de composs odeurs ngatives (off flavour) ne sont pas
dtects par les instruments classiques. Dans ce cas, la CPG/O est un moyen trs efficace pour
les mettre en vidence grce au faible seuil de perception du nez humain.
Deux types de donnes peuvent tre obtenus lors dune analyse CPG/O. Tout dabord la
sensation perue par lvaluateur qui est dcrite laide dun descripteur et lintensit de la
perception.

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Chapitre I : Etude Bibliographique


V.3. Chromatographie en phase gazeuse deux dimensions
La chromatographie bidimensionnelle consiste coupler deux colonnes de polarits
diffrentes pour avoir une sparation parfaite. Cette mthode est applique aux mlanges
complexes prsentant de nombreuses co-lutions. Parmi les mthodes de chromatographie
deux dimensions, on distingue la mthode dite par pigeage heart-cutting , note CPGCPG (Dunn et al., 2004), de la chromatographie totale, note GCGC (Dugo et al., 2005).
V.3.1. Chromatographie deux dimensions heart-cutting CPG/SM
La CPG-CPG tait la premire mthode de chromatographie bidimensionnelle (Dunn et al.,
2004). Cette mthode consiste slectionner une fraction du chromatogramme qui est mal
rsolu sur la premire colonne pour la sparer sur la seconde colonne (Schomburg, 1995)
Cette mthode consiste utiliser deux colonnes, deux dtecteurs et un systme de pigeage
(figure 8). Le plus souvent, la premire colonne est une colonne apolaire (PDMS) de
dimensions classiques. La seconde colonne est alors polaire (PEG), mais bien plus courte et
de plus faible diamtre pour permettre une lution rapide. Il est galement frquent dutiliser
une colonne chirale comme seconde colonne (Marriott et al., 2003). Les deux colonnes
peuvent tre places dans le mme four ou non. Le pigeage dune fraction la sortie de la
premire colonne se fait le plus souvent laide dune trappe cryognique. Elle permet de
stocker les composs lus de la fraction jusqu ce que la seconde colonne soit disponible
pour lanalyse.

Figure 8: Sparation par une Chromatographie en phase gazeuse deux


dimensions CPG-CPG

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Chapitre I : Etude Bibliographique


V.3.2. Chromatographie totale CPG-2D
La chromatographie totale, ou Chromatographie comprhensive GCGC, permet
dtudier tous les composs lus de la premire colonne sur la seconde, non pas comme la
CPG-CPG o une fraction subit une sparation sur la deuxime colonne.
Elle a pour principe linjection continue de petites fractions lues de la premire colonne
dans la seconde (Beens et al., 2005). Tout comme dans la CPG-CPG, on utilise deux colonnes
de polarits diffrentes, la seconde ayant une dimension beaucoup plus faible (0,5 1,5 m,
diamtre interne compris entre 0,1 et 0,25 mm, paisseur de film de 0,1 m) (Dalluge et al.,
2003). Ainsi, les diffrentes fractions sont analyses et conduisent chacune de petits
chromatogrammes. Lensemble des chromatogrammes enregistrs au cours de lanalyse est
reprsent dans un diagramme deux dimensions, communment nomm contour plot, sur
lequel labondance des composs dtects est traduite par des couleurs variables.
lheure actuelle, le seul dtecteur de masse parfaitement adapt au couplage la CPG-2D
est le dtecteur de masse temps de vol (GCGC/TOF-MS). Ce spectromtre possde la
vitesse dacquisition des spectres (> 500 Hz), autorisant lenregistrement de 10 20 spectres
par pic, ncessaire au couplage la CPG-2D.

VI. Activits biologiques des plantes aromatiques


VI.1. Gnralits
Les aliments lipidiques ne peuvent tre stocks que pendant des priodes courtes cause de la
rsistance insuffisante loxydation par loxygne. Dans les aliments schs, loxygne peut
pntrer trs facilement dans la phase lipidique et la stabilit de ces aliments devient donc
plus faible en prsence deau. Ainsi, la stabilit des aliments schs doit tre teste, et si
ncessaire, la fraction lipidique doit tre prserve en rajoutant des antioxydants dans la
formulation du produit alimentaire.
Loxydation des lipides est une cause majeure de la dtrioration de la qualit des aliments
contenant des matires grasses, do lutilisation devenue de plus en plus frquente des
antioxydants. Les antioxydants synthtiques les plus utiliss sont le hydroxyanisol butyl
(BHA) et lhydroxytolune butyl (BHT), ces deux composs sont assez volatils et se
dcomposent rapidement des tempratures leves (Branen, 1975). Il existe de srieux
problmes concernant lutilisation et la toxicit de ces deux produits synthtiques, tant au
niveau de leur mtabolisme que de leur accumulation dans les tissus de lorganisme humain

54

Chapitre I : Etude Bibliographique


(Linderschmidt et al., 1986) ; ainsi les prparations dantioxydants naturels sont vivement
recherches.
Depuis lantiquit, les plantes aromatiques furent utilises le plus souvent par les parfumeries.
Cependant, durant ces dernires dcennies, elles sont devenues sources dantioxydants
naturels et dagents antimicrobiens (Bandoniene et al., 2000).
Les huiles essentielles quant elles, ainsi que les extraits aromatiques ont t utilises pour
leurs proprits antiseptiques. Dans lEgypte ancienne, les techniques de lembaumement
utilisant les rsines aromatiques, ainsi que lHE, produisaient une inhibition puis une
destruction de tous les microorganismes prsents, en assurant une conservation pratiquement
infinie du corps. Dans les vieux ouvrages de mdecine, les rsines aromatiques ou lHE
taient les principes actifs quon peut retrouver dans les diffrentes drogues vgtales ayant
des proprits antiseptiques significatives. Dans les ouvrages les plus rcents, lutilisation des
huiles essentielles dans laromathrapie laisse entrevoir une perspective dalternative aux
mdicaments de synthse.
Les plantes aromatiques possdent plusieurs activits biologiques, parmi lesquelles on peut
citer les activits suivantes :
* Fongistatique

* Insecticide

* Nmaticide

* Herbicide

* Bactriostatique

* Antioxydante

Les huiles essentielles possdent de nombreuses activits biologiques. En


phytothrapie, elles sont utilises pour leurs proprits antiseptiques contre les maladies
infectieuses dorigine bactrienne. Cependant, elles possdent galement, des proprits
cytotoxiques qui les rapprochent donc des antiseptiques et dsinfectants en tant quagents
antimicrobiens.
Dans des prparations pharmaceutiques, les terpnes phnoliques, comme le thymol et
le carvacrol, sont souvent utiliss comme antiseptiques antibactriens et antifongiques. Le
thymol est trs irritant, astringent et caustique.
Dans les domaines phytosanitaires et agro-alimentaires, les huiles essentielles ou leurs
composs actifs pourraient galement tre employs comme agents de protection contre les
champignons phytopathognes et les microorganismes envahissant les denres alimentaires.
Les huiles essentielles les plus tudies dans la littrature pour leurs proprits
antibactriennes et antifongiques appartiennent la famille des Lamiaces : thym, origan,

55

Chapitre I : Etude Bibliographique


lavande, menthe, romarin, sauge, etcLHE de thym dEspagne (Thymus capitatus) est
souvent rapporte comme tant parmi les huiles les plus actives.
Dans notre tude, nous nallons nous intresser qu deux activits biologiques : les activits
antioxydantes et antibactriennes
VI.2. Technique dextraction des antioxydants
Un extracteur de Soxhlet est une pice de verrerie utilise en chimie analytique et en
chimie organique permettant de faire lextraction continue par solvant dune espce chimique
contenue dans une poudre ou dans une matrice vgtale.
VI.3. Activits antioxydantes des plantes aromatiques : huiles essentielles, extraits
aromatiques.
VI.3.1. Oxydation et auto oxydation
Loxygne est le premier lment essentiel pour la vie, responsable du fonctionnement
normal de tout le systme arobie (Namiki, 1990). Par contre lO2 est responsable dun
nombre de processus doxydation suivi de mauvaises consquences comme le stress oxydatif
(Dalton, 1995; Garcia-Plazaola et al., 1999), la dtrioration de la qualit des aliments (Finely
et al., 1993; Hiramatsu et al., 1994; Frankel, 1996) ainsi que le dsordre de la sant humaine
qui est reli loxydation des molcules biologiques (Bermond, 1990; Ramarathnam et al.,
1995).
Les substances doxydation peuvent avoir diffrentes structures chimiques que sont
les protines, ADN, acides gras non saturs, cholestrol, phospholipide, etc.Aprs leau et
lair, la nutrition est le troisime lment essentiel de la vie. Les lipides constituent les
composs majeurs de notre nutrition, leur tude est donc un sujet trs important pour la
protection contre loxydation puisquils sont des lments constitutifs des membranes
cellulaires.
En raison de leur insaturation, les lipides naturels sont trs sensibles loxydation. Le
mcanisme doxydation le plus connu des lipides dans les aliments est lauto-oxydation. Ce
mcanisme comprend trois phases, initiation, propagation et terminaison. La plupart des
aliments contiennent des traces de mtaux rsultant de lemballage ou de stockage ou mme
de la composition alimentaire. Des traces de mtal dans laliment avec des concentrations
infrieures 0,5ppm sont suffisantes pour catalyser loxydation des lipides (Labuza, 1971;
Larson, 1997). Le mtal le plus actif est celui qui est capable de subir une raction de transfert
dlectron (Redox).

56

Chapitre I : Etude Bibliographique


RH + M R. + MH
La consquence des mcanismes dinitiation est la formation de radicaux lipidiques et ce
stade du processus sappelle Initiation de loxydation figure 9. La raction est lente et la
concentration du radical au dbut est faible. Le mcanisme dtaill dans lequel le radical libre
est form partir dun lipide est pour linstant en tude.
La phase de propagation commence aprs que linitiation soit finie. Le radical libre gnr
ragit trs facilement avec loxygne bi radicalaire pour produire le radical peroxyd (ROO),
cette raction est rapide et la concentration en radicaux peroxyds augmente trs rapidement.
Le radical peroxyd attaque dautres molcules lipidiques afin de produire des lipides hydro
peroxyds (ROOH) et la prolifration des radicaux libres dans le systme. Le radical
peroxyd (ROO) est considr comme la molcule cl dans la raction doxydation des
lipides. Selon le degr de saturation du lipide, le radical peroxyd peut tre dissocier en des
hydroxyles radicalaire (HO.) et alkoxyl (RO.) ; cette phase sappelle liaison (Branching) le
radical hydroxyl est extrmement ractif (demie Vie 10-9s) (Pietta, 2000). Il attaque toute
espce dans son entourage, ce qui va produire des milliers de radicaux libres et acclrer le
processus doxydation.
La dcomposition des hydroperoxydes donne lieu la formation de produits volatils faible
poids molculaire, comme les aldhydes, les ctones, les hydrocarbures et les acides. Ces
produits doxydation secondaire sont trs importants dans le domaine alimentaire, cause de
lodeur quils produisent. Une trs faible quantit de lordre du ppb est capable de donner une
odeur inacceptable pour laliment (Labuza, 1971). Les produits doxydation secondaires
participent plusieurs ractions, comme loxydation, dcomposition, polymrisation, etc. Les
produits obtenus partir de ces ractions affectent ngativement la couleur, la texture, et la
qualit de laliment (Bermond, 1990). Ils peuvent ragir avec des protines et produire une
dsactivation des enzymes (Decker, 1998).
La prsence de ces radicaux instables dans notre organisme est en grande partie responsable
du vieillissement prmatur de nos cellules et de la pathogense de nombreuses maladies
telles que les tches sur la peau, le cancer, les maladies dgnratrices (sclrose en plaques et
la maladie dAlzheimer).

57

Chapitre I : Etude Bibliographique


Raction dinitiation : Formation des radicaux peroxy (ROO), alkoxy (RO) ou alkyl (R).
RH + O2 R + HOO
Raction de propagation
R + O2 ROO (Rapide)
ROO + RH ROOH + R (Lente)
RO + RH ROH + R
Raction de Liaison
ROOH RO + OH
2ROOH ROO + RO + H2O
Raction de Terminaison

R + R produits stables non radicalaire


R + ROO produits stables non radicalaire
ROO + ROO produits stables non radicalaire
Figure 9 : Prsentation schmatique du processus d'auto oxydation

VI.3.2. Les antioxydants


Loxydation des lipides est un processus qui fait intervenir plusieurs types de ractions, une
varit dintermdiaires chimiques et une multitude de facteurs. Cependant, plusieurs
approches permettant de contrler loxydation sont possibles.
En termes de protection et de prservation des aliments, diffrentes mesures pour
contrler et minimiser loxydation de lipides sont recherches par les industries. Ceci
implique le remplacement des acides gras polyinsaturs avec plus de lipides monoinsaturs et
stables ; une hydrognation partielle des lipides polyinsaturs, le contrle du paramtre de
stockage comme la limite daration, la minimisation des traces de mtaux, ainsi que des
conditions de stockage appropris (Decker, 1998; Frankel, 1998). Nanmoins il est quasi
impossible de maitriser pratiquement tous les facteurs qui provoquent loxydation. Cependant
lajout des antioxydants peut prvenir ou ralentir le processus doxydation.
Un antioxydant est un rducteur, mais un rducteur nest pas ncessairement un antioxydant
(Prior et al., 1999). Le terme antioxydant a t formul comme une substance qui en
faibles

concentrations,

significativement

en

loxydation

prsence
des

du

substrat

substrats

58

oxydable,

matriels

ralentit

(Halliwell,

ou
1995).

empche
Food

Chapitre I : Etude Bibliographique


antioxydant est spcialement formul comme une substance qui, en faible quantit, est
responsable du ralentissement de loxydation des composs facilement oxydables comme les
acides gras. (Frankel et al., 2000). Cependant, derrire cette simple description se cache un
phnomne trs complexe qui est celui de loxydation-antioxydation.
Les antioxydants exercent leur protection diffrents stades de loxydation lipidique et par
lintermdiaire de mcanismes diffrents. Une distinction doit tre prvue entre une courte et
une longue protection de lantioxydant par rapport la cintique de raction (Antolovich et
al., 2002). La classification de tous les antioxydants connus est difficile, ils sont classs
gnralement par leur mcanisme daction ou par leur nature chimique.
VI.3.3. Division des antioxydants par rapport leur mcanisme daction
(i) Groupe I. Plusieurs noms ont t attribus ce groupe par exemple, antioxydants
primaires, chain-breaking, pigeur des radicaux libres. Ce genre dantioxydants peut inhiber
la raction dinitiation et la propagation de loxydation en participant au processus
doxydation et en convertissant les radicaux libres vers leurs formes inactives.
Les antioxydants primaires sont gnralement des composs phnoliques (AH) capables
de donner un atome dhydrogne au radical libre et le convertir en un compos stable non
radicalaire.
Les antioxydants de ce groupe ragissent de faon prdominante avec les radicaux
peroxyls, pour deux raisons : la concentration leve de ces radicaux et la faible nergie du
groupement (ROO), en comparaison avec les autres radicaux comme le (RO) et la faible
concentration du pigeur du radical libre dans laliment. Un pigeur du radical libre, mme
des concentrations faibles, entre en comptition avec les lipides pour rendre le radical libre
inactif par lintermdiaire dune raction de libration dun lectron, suivie dune
dprotonation (Frankel et al., 2000).
(ii) Groupe II. Les composs de ce groupe sont catalogus comme prventifs ou antioxydants
secondaires. Ils englobent une large gamme de diffrentes substances chimiques qui inhibent
loxydation des lipides par diffrents mcanismes et ne transfrent pas le radical libre sous sa
forme non-radicalaire. Avec quelques exceptions, les antioxydants secondaires sont
gnralement relis linhibition de facteurs initiant loxydation. Le groupe II inclut : des
chlateurs de mtaux pro-oxydatifs, des dsactivateurs de loxygne singulet, des pigeurs de
la molcule doxygne, inhibiteurs des enzymes pro-oxydative, enzymes antioxydantes et
destructeurs des hydroperoxides.
59

Chapitre I : Etude Bibliographique


Parfois, quelques antioxydants peuvent exercer plusieurs fonctions anti-oxydatives, par
exemple, lacide ascorbique peut tre un pigeur du radical libre, dsactivateur des oxygnes
singulets dans une solution aqueuse et effectivement rgnrer du tocophrol. Plusieurs
flavonodes sont des pigeurs de radicaux libres et chlateurs de mtaux (Miller et al., 1996).

VI.3.4. Division des antioxydants suivant la nature chimique (naturel et synthtique)


Dans lalimentation, les antioxydants les plus utiliss sont des composs phnoliques (chainbreaking). Plusieurs antioxydants synthtiques [BHT, BHA], hydroquinone de butyle tertiaire
(TBHQ) et gallate de propyle (PG) (figure 10-1, 2, 3, 4) et quelques composs naturels
[tocophrol, acide ascorbique, Bta-carotne] (figure 11-5, 6, 7) sont officiellement autoriss
pour lutilisation dans lalimentation.
Cependant, des tudes toxicologiques ont jug certains antioxydants synthtiques comme
sources de danger (Barlow, 1990; Evans et al., 1992). La recherche de nouveaux antioxydants
naturels est lobjectif de nombreux industriels et scientifiques. Dans la littrature, des milliers
de publications ayant pour sujet les antioxydants naturels ainsi que leur effet sur lorganisme
humain peuvent tre consultes (Namiki, 1990; Wanasundara et al., 1994; Larson, 1997;
Pietta, 2000; Moure et al., 2001).
Quelques produits naturels sont dj exploits dans le march (Schuller, 1990). Par exemple
lacide ascorbique, le tocophrol, lhuile de ssame, lhuile dolive (Pratt, 1980; Taga et al.,
1984; Altarejos et al., 2005; Perez-Bonilla et al., 2006).
Des recherches intensives sur plusieurs plantes on t entreprises, plusieurs composs actifs
ont t isols et valus comme tant des antioxydants. Dans la majorit des cas le compos
actif est un compos phnolique (Cuvelier et al., 1992; Marinova et al., 1992; Chen et al.,
1997), des isoflavones, ou phenylpropanoides, de lacide phnolique (figure 11-8, 12)
(Cuvelier et al., 1992; Marinova et al., 1992; Rice-Even et al., 1994; Chen et al., 1997),
flavonodes (figure 11-14, 15) (Rice-Even et al., 1994; Heilman et al., 1995; Pietta, 2000),
isoflavones (figure 11-16), catechine (figure 11-17) (Kanner et al., 1994), phenylpropanoide
(figure 11-19), anthocyanidine (Wang et al., 1998), et chalcones.
La proprit antioxydante des composs phnoliques est dtermine par sa richesse en
lectrons libres, ce qui implique une libration facile de cet lectron suivie de la dprotonation
de son groupe hydroxyle (Frankel et al., 2000).
Chez les plantes, les substances naturelles se trouvent sous forme de mlange
complexe, qui assure la protection de la plante contre le stress oxydatif d aux effets
60

Chapitre I : Etude Bibliographique


synergiques ou additifs (Pratt, 1980; Moure et al., 2001). Lutilisation des extraits de plantes
ou de fractions enrichies est devenue aujourdhui une faon trs attractive pour prserver les
aliments. De plus, il a t dmontr que plusieurs produits naturels (antioxydants) avaient des
proprits mdicinales, par exemple : anti cancrigne, anti-inflammatoire (Madhavi et al.,
1995). Cependant il faut contrler le fait que le produit naturel soit inoffensif. Par
exemple, on a dmontr in vitro que quelques flavonodes peuvent tre mutagnes (Sahu et
al., 1993).

Figure 10: Structures chimiques de quatre antioxydants synthtiques

Dun point de vue gnral, un antioxydant est une molcule qui diminue ou empche
loxydation dautres substances chimiques en rompant la chane des ractions radicalaires. Et
dun point de vue chimique, un antioxydant nest quun compos rducteur ; il va donc
pouvoir ragir avec un oxydant pour le neutraliser. Les antioxydants vont alors rduire les
radicaux libres en annihilant ainsi leur action. Les antioxydants sont capables de stopper les
ractions en chane dcrites prcdemment et empchent donc la formation de molcules trs
ractives ou provoquent llimination de ces espces avant lendommagement des
constituants de la cellule.

61

Chapitre I : Etude Bibliographique

Figure 11: structures chimiques des antioxydants naturels

Tout organisme vivant possde un systme dantioxydants et denzymes qui agissent


ensemble pour empcher lendommagement des composants des cellules comme lADN, les
lipides et les protines. Par exemple, notre organisme est capable de produire, partir de
lacide amin cystine, un antioxydant puissant, lacide alpha-lipoique, conduisant aux sels
encore appels lipoates. De nombreux extraits de plantes, en particulier ceux qui sont riches
en composs polyphnoliques, montrent certains effets antioxydants. Les plantes produisent
de nombreux antioxydants pour se protger, tels le glutathion, la vitamine C, la vitamine E, ou
des enzymes telles que la catalase, la superoxyde dismutase et certaines peroxydases. Les
fruits et les lgumes sont bien connus pour tre riches en antioxydants. Les fruits notamment
ceux dits rouges, tels les airelles, du fait de la prsence conjugue de vitamine C et de
polyphnols, et pour les lgumes ayant la plus forte concentration en antioxydants ; on trouve
la tomate, le cresson, lail, le chou vert, lpinard, la betteraveIl faut savoir que lors de la
cuisson de ces aliments, certains antioxydants tels que la vitamine C sont inactivs, alors que
dautres se transforment pour devenir plus actifs ou plus facilement absorbables par le
systme digestif.

62

Chapitre I : Etude Bibliographique

VII. Mthodes dvaluation de lactivit antioxydante


VII.1. Gnralits
Dans la littrature, plusieurs mthodes et techniques ont t trouves pour suivre ltat
doxydation des lipides et ainsi valuer lactivit antioxydante (Shervin, 1968; Ragnarsson et
al., 1977; Namiki, 1990; Frankel, 1996). En principe, si un compos montre une faible
activit antioxydante in vitro, il est trs rare quil prsente une activit meilleure in vivo
(Hanasaki et al., 1994). Les mcanismes doxydation et de prvention in vivo sont diffrents
cause de la permabilit cellulaire et le processus de transport (Antolovich et al., 2002) et ne
sont pas discuts dans cette thse.
La majorit de ces mthodes contient des phnomnes chimiques, des processus physiques et
des instrumentations incluant : Chromatographie GC, HPLC, ainsi que plusieurs techniques ;
spectroscopies UV/Visible, IR, Fluorimtrie, SM, RMN. La plupart des procds analytiques
exigent un prtraitement avant la mesure proprement dite. Ces mthodes couvrent les
antioxydants primaires et secondaires.
La plupart des mthodes mesure un paramtre particulier en fonction du temps, dautres
mthodes enregistrent la vitesse doxydation (bombe oxygne, gain de poids, mesure des
radicaux libres par EPR). Pour diminuer le temps danalyse, des tempratures leves sont
appliques. Le stockage temprature ambiante est toujours utilis ; ainsi il est plus
reprsentatif des circonstances de la vie relle de laliment. Pour simplifier le protocole
exprimental et pour faciliter les tudes thoriques, des systmes modles ont t labors
comme le -carotne bleaching test (Bocco et al., 1998).
Quelques analyses permet de mesurer la quantit du produit intermdiaire ou final gnr par
une oxydation (dines conjugus, TBARS). A cause de la proprit essentielle de
lantioxydant (pigeur des radicaux libres), plusieurs mthodes ont t mises en place pour
valuer lefficacit de lantioxydant piger les radicaux libres (ABTS, DPPH).
Afin de choisir la bonne mthode, il faut savoir ce que lon va mesurer et valuer. Par
exemple, la quantit des hydroperoxydes accumule doit tre mesure avant quils ne
commencent diminuer ; aprs la dcomposition des hydroperoxydes, le degr doxydation
de lchantillon doit tre mesur en se basant sur la formation des produits doxydation
secondaire.

63

Chapitre I : Etude Bibliographique


VII.2. Quelques mthodes dvaluation de lactivit antioxydante
Les avantages et les limites des mthodes dvaluation de lactivit antioxydante ainsi que les
rfrences sont prsentes dans le tableau 3. Il est clair quil serait difficile de dvelopper une
mthode qui prenne en compte tous les paramtres et qui soit applicable sur tous les substrats
et les antioxydants.

64

Tableau 3: Les avantages et les limites de quelques mthodes destimation de la stabilit des lipides et d'valuation de l'activit antioxydante

Mthodes

limites

avantages

rfrence

Test de stabilit huile/graisses


Gain de poids

+ simple performance

faible sensibilit

formations des composs volatils qui affectent les

quipement commun

+ reproductibilit satisfaite

rsultats

(Wanasundara et
al., 1994;
Pokorny et al.,
1997; Frankel,
1998)

Bombe

+ reproductibilit excellente

TC trs leves

oxygne

+ mesure la vitesse doxydation

Contamination provenant du tissu en papier

+ faible quantit dchantillon

(Huang et al.,
2005)

couvrant lchantillon

Mthodes dvaluation des antioxydants


HPLC

+ trs sensible

Analyse de

+ reproductible

changement de
la composition

+ information quantitative et qualitative sur

besoin de connaissance sur la nature et la rtention


des composs analyss
instruments coteux

les acides gras impliqus dans loxydation

en acide gras

65

(Gebicki et al.,
1989; Frankel,
1998)

Valeur du
peroxidation

+ Information sur les hydroperoxydes forms Non adaptable avec ltude avance de

(Gebicki et al.,

+ Adaptable dans le milieu huileux

1989; Takao et

loxydationhydro peroxyde commence se


dcomposer

al., 1994;
Frankel, 1996;
Zhang et al.,
1996)

Titration
iodometrique

+ Protocole analytique commun

non adaptable avec le matriel biologique

(Gebicki et al.,

+ Prcise

possibilit doxydation diode

1989; Takao et

+ sensible

al., 1994; Yen et


al., 1995; Zhang
et al., 1996)

Dines
conjugus

+ sensible

Prsence dautre chromophore qui absorbe

(Kanner et al.,

+ reproductible

exige une oxydation douce pour viter la formation

1994; Frankel,

+ rsultats ne dpend pas de la ractivit


chimique

dhydroperoxide
Non adaptable avec les huiles hydrognes qui

+ rapide
+ mesure une courte priode doxydation

contiennent des dines


Absence dinformation sur la structure des

+ faible quantit dchantillon

composs

+ utilisation de mthode spectroscopique


simple
+ adaptable avec les mulsions et lhuile.

66

1998; Madsen et
al., 1998; Prior et
al., 1999;
Antolovich et al.,
2002)

TBARS
(Thiobarbituric
Acid Reactive
Substances)

+ Simple

pas trop sensible pour les lipides mono et di

+ Sensible, surtout pour les lipides poly


insaturs

insaturs
les conditions de la raction affectent le

+ Prcise
+ utilisation de mthodes spectroscopiques

dveloppement
grande influence des paramtres de la raction
(lumire, temprature, temps de chauffage, prsence

simples
+ bonne corrlation avec lanalyse
sensorielle des huiles vgtales

(Moller et al.,
1991; Yang et
al., 1991;
Jacobson, 1993;
Miura et al.,
1998)

des ions mtalliques ou des amines)


protocole exprimental provoque parfois des
artfacts

B-carotne

+ simple

non spcifique

bleaching test

+ rapide

influence des conditions exprimentales

+ sensible

les donnes obtenues ne sont pas relies directement

+ utilisation des mthodes spectroscopiques


simple

ltat doxydation actuel


mcanisme doxydation pas clair

(Marco, 1968;
Miller et al.,
1993;
Dapkevicius,
1998; Fukumoto
et al., 2000)

Autres mthodes dvaluation des antioxydants


ORAC
(capacit
dabsorbance du

+ spcifique

ncessite un dtecteur fluorimtrique

+ adaptable plusieurs antioxydants

non linaire en fonction du temps


longue

radicale
oxygn)

67

(Pieri et al.,
1994; Cao et al.,
1998)

RPE
(Rsonnance

+ la seule technique analytique qui dtecte


les radicaux libres dans lauto oxydation

ncessite des instruments sophistiqus


lapplication directe sur loxydation des lipides est

Paramagntique + slective
Electronique)

(Yang et al.,
1991)

limite cause de la courte dure de vie des

+ dtecte et value mme les radicaux de

radicaux libres

courtes dures de vie


IR (infrarouge)

+ enregistre la formation et la disparition des


produits doxydation

non spcifique

(Frankel, 1998)

non sensible

+ trs faible quantit dchantillon


+ simple
+ rapide
H-RMN

+ non destructive

le changement de profils des acides gras a un effet

+ trs faible quantit dchantillon


+ rapide

sur loxydation primaire et secondaire


non spcifique
non sensible

68

(Wanasundara et
al., 1994)

Chapitre I : Etude Bibliographique

VIII. Huiles essentielles comme agents antimicrobiens


VIII.1. Gnralits
Depuis lAntiquit, les extraits aromatiques des plantes ont t utiliss dans diffrentes
formulations, comme pour les mdicaments et la parfumerie (Heath, 1981). Les huiles
essentielles ont t considres comme les agents antimicrobiens les plus efficaces prsents
dans ces plantes.
Les qualits antimicrobiennes des plantes aromatiques et mdicinales sont connues depuis
lantiquit. Toutefois, il aura fallu attendre le dbut du 20ime sicle pour que les scientifiques
commencent sy intresser. Ces proprits antimicrobiennes sont dues la fraction des
huiles essentielles contenue dans les plantes. Il existe aujourdhui approximativement 3000
huiles, dont environ 300 sont rellement commercialises, destines principalement
lindustrie des armes et des parfums. Mais la tendance actuelle des consommateurs
rechercher une alimentation plus naturelle, a entran un regain dintrt des scientifiques
pour ces substances (Essawi et al., 2000). Depuis deux dcennies, des tudes ont t menes
sur le dveloppement de nouvelles applications et lexploitation des proprits naturelles des
huiles essentielles dans le domaine alimentaire.
Les effets antimicrobiens de diffrentes espces dherbes et dpices sont connus depuis
longtemps et mis profit pour augmenter la dure de vie des aliments. Ainsi, les huiles
essentielles, actuellement employs comme armes alimentaires sont galement connus pour
possder des activits antimicrobiennes et pourraient donc servir dagents de conservation
alimentaires, et ce dautant plus quils sont pour la plupart classs gnralement reconnus
comme sains (Generally Recognized As Safe GRAS), ou approuvs comme additifs
alimentaires par la Food and Drug Administration. Ils nont, par consquent, pas besoin
dautorisation demploi dans les aliments ; cependant, des tudes pralables sont ncessaires
afin de mieux cerner leur activit antimicrobienne.
Les huiles essentielles ont un spectre daction trs large puisquelles inhibent aussi bien la
croissance des bactries que celle des moisissures et des levures. Leur activit
antimicrobienne est principalement fonction de leur composition chimique, et en particulier
de la nature de leurs composs volatils majeurs (Sipailiene et al., 2006). Elles agissent en
empchant la multiplication des bactries, leur sporulation et la synthse de leurs toxines.
Pour les levures, elles agissent sur la biomasse et la production des pseudomycliums alors
quelles inhibent la germination des spores, llongation du myclium, la sporulation et la
production de toxines chez les moisissures.

69

Chapitre I : Etude Bibliographique

VIII.2. Mode daction contre les bactries


Lactivit antimicrobienne des HE a fait lobjet dun grand nombre de publications
lchelle internationale. Cependant, la majorit des travaux cits dans ces publications
sarrtent au niveau de la mise en vidence de lactivit antimicrobienne de ces HE. Les
tudes sur les mcanismes daction de cette activit sont en nombre ngligeable. Jusqu
prsent, il nexiste pas dtude pouvant nous donner une ide claire et prcise sur le mode
daction des HE. Etant donn la complexit de leur composition chimique, tout laisse penser
que ce mode daction est assez complexe et difficile cerner du point de vue molculaire. Il
est trs probable que chacun des constituants des HE ait son propre mcanisme daction
Dune manire gnrale, leur action se droule en trois phases :
* attaque de la paroi bactrienne par lhuile essentielle, provoquant une augmentation de la
permabilit puis la perte des constituants cellulaires.
* acidification de lintrieur de la cellule, bloquant la production de lnergie cellulaire et la
synthse des composants de structure.
* destruction du matriel gntique, conduisant la mort de la bactrie.

IX. Mthode dvaluation de lactivit antibactrienne


La technique utilise pour dterminer le pouvoir antimicrobien des HE a une grande influence
sur les rsultats. Des difficults pratiques viennent de linsolubilit des constituants des HE
dans leau, de leur volatilit et de la ncessit de les tester faibles concentrations. A lheure
actuelle, lactivit antimicrobienne in vitro dune substance peut tre mise en vidence par un
grand nombre de techniques classiques, aussi bien en milieu solide quen milieu liquide.
IX.1. Technique en milieu solide (mthode de la diffusion en disque)
La diffusion de lagent antimicrobien dans le milieu de culture ensemenc rsulte dun
gradient de lantimicrobien. Quand la concentration de lantimicrobien devient si dilue quil
ne peut plus inhiber la croissance de la bactrie teste, la zone dinhibition est dmarque. Le
diamtre de cette zone dinhibition autour du disque de lantimicrobien est corrle avec la
concentration

minimale

inhibitrice

(CMI)

pour

la

combinaison

particulire

bactrie/antimicrobien, la zone dinhibition correspond inversement la CMI de lessai.


Gnralement, plus la zone dinhibition est importante, plus la concentration dantimicrobien
ncessaire pour inhiber la croissance bactrienne des organismes est faible.

70

Chapitre I : Etude Bibliographique


La mesure manuelle des zones dinhibition peut prendre du temps. Les dispositifs automatiss
avec zone de lecture sont disponibles et peuvent tre intgrs avec le rapport de laboratoire et
les systmes de manipulation de donnes. Les disques devraient tre distribus galement de
sorte que les zones dinhibition autour des disques antimicrobiens dans lessai de diffusion en
disque ne se chevauchent pas et quainsi la zone dinhibition puisse tre dtermine.
Gnralement cela peut tre effectu si les disques sont distants dau moins 24 mm de centre
centre, bien que cela dpende de la concentration du disque et de la capacit de
lantimicrobien diffuser dans la glose.
IX.2. Technique en milieu liquide (mthode de dilution)
Le but des mthodes de dilution en bouillon et en glose est de dterminer la concentration la
plus faible de lantimicrobien test qui inhibe la croissance de la bactrie teste (la CMI,
habituellement exprime en mg/mL ou mg/litre). Cependant, la CMI ne reprsente pas
toujours une valeur absolue. La vritable CMI est un point entre la plus basse
concentration qui empche la croissance de la bactrie et la concentration infrieure
immdiate.
IX.2.1. La dilution en bouillon
La dilution en bouillon est une technique dans laquelle une suspension bactrienne ( une
concentration optimale ou approprie prdtermine) est teste contre des concentrations
variables dun agent antimicrobien

dans un milieu liquide. La mthode de dilution en

bouillon peut tre effectue dans des tubes contenant un volume minimum de 2 ml
(macrodilution) ou dans de plus petits volumes laide de plaques de microtitration
(microdilution). Lutilisation de ces plaques avec un protocole document, y compris les
prcisions sur les micro-organismes de rfrence appropri, peut faciliter la comparaison des
rsultats entre analyses.
IX.2.2. La dilution en glose
La dilution en glose implique lincorporation dun agent antimicrobien dans un milieu glos
des concentrations variables, en gnral une dilution en srie de 2 en 2, suivie de
lensemencement dun inoculum bactrien dfini la surface de la glose de la bote.

71

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

Chapitre II
Caractrisation des composs organiques volatils de cinq
plantes aromatiques mdivales ; Evaluation de lactivit
biologique des huiles essentielles et des rsidus
dhydrodistillation

72

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

73

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

Rsum
Les huiles essentielles obtenues par hydrodistillation des plantes aromatiques selectionnes
ont t caractrises par analyse chimique puis sensorielle. Une pyramide olfactive a t
tablie en dfinissant les notes de tte, de cur et de fond. Des analyses sensorielles par CPGSM-O ont permis de dcrire le profil aromatique des extraits.
Lactivit antioxydante des huiles essentielles mais galement des rsidus dhydrodistillation
a t value par trois mthodes diffrentes : Oxipress, mthode spectroscopique et DPPH.
Enfin lactivit antibactrienne des huiles essentielles a t value par deux mthodes
diffrentes : diffusion sur Agar et plaque de microtitration. Les rsultats de ces travaux
montrent une activit antioxydante et une activite antibactrienne significative pour
lensemble des cinq plantes.

74

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

Introduction
Chacune des cinq plantes aromatiques slectionnes va tre fractionne par hydrodistillation.
Les diffrentes fractions obtenues seront ensuite caractrises par des analyses chimiques,
biologiques et sensorielles (voir schma ci-dessous).

Schma rprsentatif des diffrentes tudes effectues dans le chapitre II.

75

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

I. Composition chimique des huiles essentielles


I.1. Achillea millefolium : caractrisation de la fraction volatile des parties ariennes
LAchille millefeuille utilise dans cette tude est de nature sauvage. Elle a t rcolte par
cueillette dans la banlieue sud-est de Toulouse durant le mois de mai 2008. Lidentification
botanique a t effectue par le Pr. Isabelle FOURAST. Un chantillon d'herbier a t
dpos l'herbier du Laboratoire de pharmacognosie de la Facult de Pharmacie de Toulouse
(Universit Toulouse III) sous le numro Ast 251 (2008) (I.F) . La partie arienne frache
comprenant les sommits blanches fleuries a t hydrodistille pendant 3 heures afin dobtenir
une huile essentielle de couleur jaune tendance verte. Le rendement dhydrodistillation est
de 0,07 0,01 % par rapport la matire sche. La mthodologie ainsi que les diffrentes
quantits utilises sont dcrites dans la partie exprimentale (cf. I.1.3). Lextraction de lhuile
essentielle a t rpte six fois.
Etude cintique de lextraction par hydrodistillation dAchillea millefolium
Dans le but doptimiser la dure dextraction, nous avons tudi la cintique du rendement en

rendement % matire sche

huile essentielle par rapport la matire sche (figure 12).

0.08
0.07
0.06
0.05
0.04
0.03
0.02
0.01
0
0

dure de l'hydrodistillation (h)

Figure 12: Cintique d'hydrodistillation de l'Achille millefeuille en fonction du temps

76

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

La vitesse dextraction augmente progressivement jusqu 3h pour atteindre un plateau. Le


temps optimum de cette hydrodistillation est denviron 3h. En accord avec la bibliographie
nous proposons de fixer la dure dhydrodistillation des plantes 3 heures.
I.1.1. Composition chimique de lhuile essentielle dAchillea millefolium et
discussion
Aprs extraction par hydrodistillation des parties ariennes, la composition de lhuile
essentielle est analyse par chromatographie en phase gazeuse ionisation de flamme couple
la spectromtrie de masse (CPG-SM-DIF) (Clarus MS 500, Perkin Elmer). Le mode
opratoire est dtaill dans la partie exprimentale (cf. II.2.2). Les rsultats analytiques sont
regroups dans le tableau 6.

Lidentification est ralise laide des indices de rtention calculs sur la base des n-alcanes
C5-C18, des spectres de masse obtenus en ionisation par impact lectronique (EI, 70eV)
compares aux bases de donnes NIST 2005, Wiley 275 et des donnes de la littrature
(Mclafferty, 2005).
A partir de lAchille millefeuille poussant sous forme sauvage Toulouse, nous avons
pu obtenir une huile essentielle par hydrodistillation de la partie arienne frache. Cette huile
essentielle possde une odeur caractristique et forte de choux menthol. Le rendement de
lhydrodistillation varie de manire significative selon lorigine de la plante et apparait
relativement faible par rapport ceux obtenus par dautres auteurs (Kalinkina et al., 2000;
Orav et al., 2001; Todorova et al., 2001). Il se rvle tre nanmoins similaire celui obtenu
avec des espces indiennes (Shawl et al., 2002). Lintensit de la couleur dpend de la
quantit de chamazulne prsent dans lextrait, ce dernier provient de la dgradation de la
matricine durant lhydrodistillation (Orav et al., 2001).

Lhuile essentielle est un complexe mixte de 50 composs, parmi eux 45 composs ont t
identifis constituant 96% de la quantit totale de lHE (Tableau : 4). La fraction de
monoterpnes oxygns comme le camphre (12,6%), le sabinne (6,7%), le trans-actate de
chrysantnyle (6,6%), le 4-terpinol (5%), lisocyclocitral (4,5%), leucalyptol (4%) et le
bta-pinne (3,3%) constituent la majorit de la composition de lhuile essentielle, puis
viennent les sesquiterpnes et les sesquiterpnes oxygns qui sont prsents 19%, comme le

77

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

germacrne-D (11,73%) et le (E)-nrolidol (7,2%). La structure chimique des composs


majoritaires est reprsente dans la figure 13.

Tableau 4: Rsultats

des analyses par CPG-DIF-SM de lhuile essentielle dAchillea


millefolium issues de lhydrodistillation des parties ariennes

Pics

IRa (TIC)

IRa (FID)

IRthb

Identificationc

%d

CVe

801

800

790

Hexane-2,3-dione

0,05

8,05

848

849

854

3-hexne-1-ol

0,22

16,67

923

926

927

hexanoate de mthyle

0,18

13,84

931

935

939

alpha-pinne

1,70

8,05

947

952

954

camphne

1,60

8,09

970

974

975

sabinne

6,72

10,46

976

981

979

bta-pinne

3,28

8,69

1015

1018

1017

alpha-terpinne

0,70

8,29

1022

1025

1026

para-cymne

0,82

10,09

10

1030

1034

1031

1,8-cinole

4,03

9,28

11

1055

1058

1060

gamma-terpinne

1,71

10,55

12

1083

1086

1089

terpinolne

0,35

6,82

13

1099

1099

1097

linalol

1,78

12,09

14

1103

1103

1101

nonanal

0,61

11,49

15

1115

1119

isocyclocitral

4,48

10,36

16

1122

1126

bta-terpinne

0,39

4,26

17

1134

1138

ni

0,28

22,57

18

1138

1144

1139

trans-pinocarvol

0,55

22,18

19

1146

1151

1146

camphre

12,64

11,38

20

1160

1163

2,4,6-trimthyl-3-

1,76

11,37

cyclohexne-1carboxaldhyde,
21

1170

1175

1169

bornol

2,25

10,20

22

1179

1183

1189

4-terpinol

4,70

3,90

23

1193

1198

1196

cis-para menthane-2-one

1,46

7,66

24

1228

1228

1236

trans-actate de

6,55

13,32

chrysanthnyle

78

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

a
c

25

1280

1285

1289

actate de bornyle

1,17

15,28

26

1317

1321

1,3,8 p-menthatrine

0,31

3,19

27

1355

1355

actate de linalol

0,31

1,37

28

1370

1377

1377

copane

0,52

6,75

29

1382

1385

isoldne

0,12

15,64

30

1422

1415

1419

bta-caryophyllne

1,42

7,45

31

1447

1462

cis-alpha-bisabolne

0,54

1,31

32

1474

1483

1485

germacrne-D

11,73

13,09

33

1487

1496

1492

mthyl-isognol

0,98

9,24

34

1505

1513

1514

gamma-cadinne

0,35

1,10

35

1509

1517

1523

delta-cadinne

1,22

21,02

36

1532

1542

1546

alpha-calacorne

0,35

38,73

37

1547

1553

1550

lemol

1,57

13,48

38

1555

1559

1563

(E)-nrolidol

7,23

15,84

39

1567

1574

ni

0,84

17,21

40

1572

1584

1572

alcool caryophyllnique

1,97

28,78

41

1584

1596

1583

oxyde de caryophyllne

1,88

11,18

42

1594

1603

ni

1,21

13,17

43

1598

1610

1596

viridiflorol

1,41

14,41

44

1616

1625

1623

cderne-epoxide

0,46

4,42

45

1626

1638

ni

1,14

12,58

46

1631

1641

ni

0,54

35,58

47

1644

1654

1651

bta-eudesmol

1,09

37,66

48

1653

1659

1652

cedr-8(15)-en-10-ol

0,19

28,94

49

1661

1669

1658

alcool patchoulique

0,79

26,38

50

1674

1683

1686

alpha-bisabolol

1,49

33,77

indice de rtention calcul partir des n-alcanes C5-C18.

identification ralise partir des bindices de rtention thoriques (IRth) des librairies Adams,

NIST, Agilent France, Wiley, Hewlett Packard France et de la littrature


d

pourcentage moyen sur 6 rplicats

coefficient de variation (%)

79

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

Sabinne

(E)-nrolidol

Camphre

Germacrne-D

Figure 13 : Structures chimiques de quelques composs majoritaires de l'huile essentielle de lAchille


millefeuille

En comparant la composition de lhuile essentielle dAchille millefeuille provenant de


la rgion toulousaine avec dautres huiles issues de diffrentes origines gographiques
(Tableau : 5), nous avons observ que la plupart des composs majoritaires de lhuile
essentielle ont t identifis par Orav et Shawl (Orav et al., 2001; Shawl et al., 2002).
Lespce dAchille provenant du Canada possde la bta-thujone comme compos
majoritaire (Hachey et al., 1990). La plupart des constituants de lhuile essentielle dAchille
dorigine Iranienne sont des alcools sesquiterpniques comme le spathulnol, (Z) nrolidol,
alpha-bisabolol et (E, E) farnsol. Lalpha-bisabolol est en faible pourcentage (1,49%) dans
notre extrait. (Tableau 4, 5). Les pourcentages leves en germacrne-D, sabinne et actate
de trans-chrysantnyle montrent une huile essentielle diffrente de celles tudies jusqu
prsent et provenant de rgions gographiques diffrentes.
Orav et al. (Orav et al., 2006) ont analys lhuile essentielle de lAchille millefeuille
provenant de France (partie traite non prcise) qui contenait un pourcentage lev en
monoterpnes oxygns (53,9-76,1%), principalement de camphre (jusqu 24,5%), ainsi que
d et de la -thujone (jusqu 26,8%), dartemisia ctone (jusqu 10,1%) et de 1,8-cinole
(jusqu' 20,3%) alors que seulement 4,0% de ce dernier a t dtect et identifi dans notre
extrait.

80

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation
Tableau 5: Variation des pourcentages des composs majoritaires des huiles essentielles de lAchille
millefeuille provenant de diffrentes rgions du monde
Composs

France

USA

Canada

Grce Cuba

Iran

Lituanie
I

Estonie

II

III

IV

alpha-pinne

1,7

8,2

1,31-1,9

0,4

0,4

2,3-4,7

2,7-5,3

1,9-6,9

2,1-5,1

0,7-4,1

camphne

1,6

6,0

1,7-2,5

1,1-2,5

0,8-1,43

tr-2,8

0,4-1,6

0,1-2,2

sabinne

6,7

0,4

5,4

1,5-4,3

3,2-5,2

0,9-8,6

2-8,5

tr-11,7

bta-pinne

3,3

5,5

4,9-8,8

0,3

4-12,6

9,7-26,5

7,3-30,2

5,5-12

0-20,3

alpha-terpinne

0,7

0,94-0,99

7,0

tr-0,7

0,2-0,7

tr-1,5

0,2-1,4

0-1,5

para-cymne

7,3

7,4

0,6

0,7-1,5

tr-1,9

tr-4

0,7-1,3

0,2-5,6

limonne

10,7

1,3-1,9

0-1,0

para-cymne

0,8

1,8 cinole

4,0

9,7

9,4-19,5

10,5

5,7

5,3-12,5

5,3-10,6

3,1-16,8

4,4-8,8

0,8-20,3

gamma-terpinne

1,7

2,1-3,01

0,2-2,1

0,2-1,7

0,3-3,4

0,8-3,8

0-2,2

terpinolne

0,4

0,2-0,4

tr-0,3

tr-0,6

0,1-0,9

linalol

1,8

0,5

1,0

tr-9,5

0-26,6
0-11,0

alpha-thujone
bta-thujone

isocyclocitral

4,5

camphre

12,6

20,6

9,7-24,7

8,1

1,2

4,1-13,1

0,3-1,6

tr-5,9

0,6-4,4

0,1-24,5

bornol

2,3

0,4

3,2-5,4

9,8

11,5-13,2

0,4-3,8

tr-7,6

0,4-6,6

0-9,2

5,0

cis-carvol

alcool furfurilique

11,4

4,7

4,3

5,8-6,8

1,1

2,8

1,9-4,5

1,2-2,3

0,9-7,6

0,9-5,5

0,2-4,0

47,2

4-terpinol
ascaridole
Trans actate de chrysanthnyle

6,6

0-0,8

bta-caryophyllne

1,4

1,8-2,1

1,9

5,2

0,9

0,7-3,5

4,5-8

3-8,7

3,2-7,5

0-12,5

cis-alpha-bisabolne

0,5

germacrne-D

11,7

0,8

0,3-1,8

2,1-4,9

0,5-4,2

2,1-6,3

0-6,0

(E)-nrolidol

7,2

tr

5,7

2,6-4,8

tr-0,4

tr-9,5

5,5-13,5

12,4

tr-1,3

0,6-1,5

0,3-5,7

0,5-2,7

1,2-1,5

1,4

20,0

1,9-4,7

1,1-2,5

0,3-3,3

2,8-6,3

0,2-5,2
0-5,1

spathulnol
alcool caryophyllnique

2,0

oxyde de caryophyllne

1,9

alpha-bisabolol

1,5

22,9

(E,E) Farnsol

4,0

tr-0,8

0,4-0,5

tr-1,7

0,2-2,8

chamazulne

tr

1,63-2,19

1,6

0,7-1,3

9,8-20,1

tr-12,6

0,1-4,8

0-42,0

tr : Traces

81

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

I.2. Calamintha grandiflora : caractrisation des extraits des tiges et des feuilles
Calamintha grandiflora [syn. Satureja grandiflora (L.) Scheele, Melina grandiflora L.,
clinopodium grandiflora (L.) Kuntze] ou encore th dAubrac est une plante de la famille des
Lamiaces qui possde une odeur pntrante trs forte, particulirement en juillet.
Calamintha grandiflora a t cultive sous serre pendant lanne 2007-2008 et rcolte en
juillet 2008. La partie arienne frache comprenant les tiges et les feuilles a t hydrodistille
pendant 3 heures afin dobtenir une huile essentielle de couleur jaune claire. Le rendement de
lhydrodistillation est de 0.35 0,02 % par rapport la matire sche. Le mode opratoire est
dtaill dans la partie exprimentale (cf. I.1.4). Lextraction de lhuile essentielle a t rpte
trois fois.
I.2.1. Composition chimique de lhuile essentielle de Calamintha grandiflora et
discussion
Lhuile essentielle a t dilue dans le pentane (10%v/v) et analyse par chromatographie en
phase gazeuse couple la spectromtrie de masse et lionisation de flamme (CPG-DIFSM) (Clarus MS 500, Perkin Elmer). Le mode opratoire est dtaill dans la partie
exprimentale (cf. II.2.2). Lidentification ainsi que la quantification de lhuile essentielle a
t ralise de la mme manire que celle dcrite pour lAchille millefeuille.
29 composs organiques volatils ont t identifis dans les extraits du th dAubrac. Ils
constituent 93 % de la composition chimique totale de lhuile essentielle (Tableau : 6).

82

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation
Tableau 6: Composition chimique de l'huile essentielle de Calamintha grandiflora

Pics

IRa (TIC)

IRa (FID)

IRthb

Identificationc

%d

CVe

931

934

939

alpha-pinne

0,03

6,39

970

973

975

sabinne

0,19

7,15

976

980

979

bta-pinne

0,21

5,68

987

986

991

bta-myrcne

0,09

6,93

995

993

991

3-octanol

0,25

8,35

1027

1029

1029

limonne

0,71

7,31

1032

1033

1037

bta-trans-ocimne

0,08

9,66

1068

1070

1089

terpinolne

0,03

6,43

1100

1099

1091

linalol

0,04

8,20

10

1148

1150

1150

para-Menth-8-en-3-ol

0,24

8,89

11

1155

1158

1153

menthone

4,40

7,93

12

1168

1169

1162

isomenthone

34,07

1,73

13

1181

1181

1183

isomenthol

7,65

8,24

14

1191

1193

1187

no-isomenthol

19,83

7,72

15

1240

1243

1237

pulgone

19,54 16,60

16

1251

1255

1253

pipritone

1,28

8,99

17

1284

1290

ni

0,03

18,38

18

1301

1304

actate disomenthyle

0,03

10,03

19

1335

1331

ni

0,14

14,12

20

1370

1362

1377

copane

0,04

9,85

21

1378

1369

1388

bta-bourbonne

0,13

9,95

22

1413

1397

1409

caryophyllne

1,99

9,53

23

1448

1443

1447

santalne

0,37

9,62

24

1474

1477

1485

germacrne-D

3,55

10,14

25

1487

1495

1500

bicyclogermacrne

1,78

10,10

26

1499

1501

1506

alpha-farnesne

0,11

13,07

27

1510

1518

1514

gamma-cadinne

0,12

10,34

28

1568

1578

1568

actate disognol

0,93

11,11

29

1572

1584

1583

oxyde de caryophyllne

0,43

12,19

30

1599

1611

ni

0,06

11,13

31

1605

1615

ni

0,28

13,62

1305

83

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

32

1646

1655

33

1781

34

alpha-cadinol

0,20

11,31

1786

ni

0,15

19,02

1786

1790

ni

0,07

11,00

35

1790

1795

ni

0,08

11,56

36

1802

1803

ni

0,16

8,20

37

1806

1806

ni

0,05

19,76

38

1810

1812

ni

0,18

10,06

39

1830

1835

ni

0,04

12,69

40

1850

1855

ni

0,14

14,77

41

1860

1862

ni

0,17

13,96

a
c

1654

indice de rtention calcul partir des n-alcanes C5-C18,

identification ralise partir des bindices de rtention thoriques (IRth) des librairies Adams,

NIST, Agilent France, Wiley, Hewlett Packard, France et de la littrature


d

pourcentage moyen sur 3 rplicats

coefficient de variation (%)

Les principaux composs chimiques qui constituent la fraction majoritaire de lhuile


essentielle du th dAubrac, obtenue partir de lhydrodistillation des tiges et de feuilles
(Tableau 8), sont lisomenthone (34,07%), le noisomenthol (19,83%), la pulgone (19,54%),
lisomenthol (7,65%), la menthone (4,40%) et le germacrne-D (3,55%). La structure
chimique de quelques composs majoritaires de lHE est reprsente dans la figure 14.
Peu dtudes, ce jour, concernent la composition chimique de lhuile essentielle de
Calamintha grandiflora. La composition chimique de lhuile essentielle de lespce dorigine
grecque (Calamintha grandiflora (L). Moench) tudie par Souleles et al. est la plus similaire
la ntre (Tableau 7). En effet cette espce (Souleles et al., 1990) prsente un extrait
compos en majorit de pulgone (35,2%), de menthone (20,2%) et diso-menthone (15,2%),
Nos extraits se distinguent galement de ceux tudis partir de lespce dorigine turque
(Baser et al., 1993) (Calamintha grandiflora (L.) Monech) par Baser et al. majoritairement
riches en isopinocamphone (52,59%) et actate de terpinyle (8,4%)

84

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation
Tableau 7: Comparaison des composs majoritaires des extraits des feuilles de C. grandiflora France vs
Turquie, Grce et C. Nepeta

COV

isomenthone

Origine
France
Grce

C. grandiflora

Turquie
Serbie

C. nepeta

neoisomenthol

pulgone

menthone

Iso-

Oxyde de

pinocamphone pipritone

34,07

19,83

19,54

4,4

15,2

35,2

20,2

tr

52,59

1,45

75,5

5,3

6,0

Une autre espce cependant de Calamintha a t trouve dans la littrature, il sagit de la C.


nepeta (L.) Savi. ssp. nepeta var. suhisodonda (Borb) Hayek. Kitic et al. montrent que cette
espce dorigine Serbe (Kitic et al., 2005) contient majoritairement de la pulgone (75,5%),
de loxyde de pipritone (6,0%), de la menthone (5,3%) et du menthol (4,3%). Cette
composition est trs diffrente de celle de notre extrait (Tableau : 6, 7)

Figure 14 : Structures chimiques de quelques composs majoritaires de l'huile essentielle du th dAubrac

I.3. Tanacetum balsamita : caractrisation des extraits des tiges et des feuilles
Tanacetum balsamita [syn, Chrysanthemum balsamita L, Balsamita major (L,) Desf,] est une
plante de la famille des Astraces, dodeur menthole.
Pour cette tude, nous avons utilis deux origines diffrentes de matire vgtale. La premire
est une espce sauvage rcolte Toulouse pendant le mois de Juin 2007. La deuxime
origine de Tanacetum balsamita a t cultive sous serre doctobre 2007 juillet 2008. La
partie arienne frache comprenant les tiges et les feuilles a t hydrodistille pendant 3
heures afin dobtenir une huile essentielle de couleur jaune. Les rendements dextraction pour
lespce sauvage et pour lespce cultive sous serre sont respectivement 0,65 0,02 % et

85

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

0,53 0,02 % par rapport la matire sche. Le mode opratoire est dcrit dans la partie
exprimentale. Lextraction de lhuile essentielle a t ralise trois fois.

I.3.1. Composition chimique de lhuile essentielle de Tanacetum balsamita et


discussion
34 COVs ont t dtects dont 27 ont t identifis dans lhuile essentielle de lespce
sauvage, correspondant 96% de la composition totale de lextrait. Les composs majoritaires
de lextrait sauvage sont la carvone (56,72%), la tanactone (9,08%), le germacrne-D
(2,43%), le limonne (2,51%), et le bta-bisabolne (2,46%) (Tableau 8).
45 composs organiques volatils ont t dtects dont 38 sont identifis dans lhuile
essentielle de lespce cultive sous serre correspondant 96% de la composition totale de
lextrait. Les composs majoritaires sont la tanactone ou bta-thujone (83,57%), le 1,8
cinole (3,97%) et lalpha-thujone (3,3%) voir (Tableau 9). La structure chimique de quelques
composs majoritaires de lHE est reprsente dans la figure 15.
Plusieurs chimiotypes ont t identifis dans la littrature. En 1968, Gockeritz a dfini deux
chmotypes de la Balsamita major en fonction de la nature du terpne prdominant :
type camphre: Balsamita major (L.) Desf Asch et type carvone: Balsamita Major (L.) Desf.
var. tanacetodes (Boiss) Fiori (Goeckeritz, 1968).
Bestmann et al. en 1984, ont mis jour un troisime chimiotype possdant la double
prdominance en carvone et camphre (Bestmann et al., 1984). Quelques auteurs (Voigt et al.,
1938) ont analys la composition chimique de lhuile essentielle de Balsamite type carvone.
En 1976, Paris et al. ont valu 1,3% lhuile essentielle des fleurs et 0,7% celle de la
partie arienne, rendements proches de ceux de nos extraits. La carvone est le compos
majoritaire et constitue 65 80% de la composition totale de lhuile essentielle.
Un autre chimiotype camphre dorigine polonaise a t identifi par Zielincka-Sowicka et al.
13 composs ont t identifis dont le camphre hauteur de 91%. Le bornol, lisobornol, le
camphne, la carvone, le limonne et lapha-pinne ont galement t identifis (ZielinskaSowicka et al., 1970).

Ces chimiotypes ont t galement identifis dans trois espces iraniennes :


Jaimand et al. ont travaill sur lhuile essentielle de Balsamite provenant dIran (Tanacetum
balsamita L. ssp. Balsamitodes (schultz_Bip.) Grierson) en sparant les diffrents organes

86

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

(feuilles, fleurs et tiges). Les composs majoritaires des trois diffrentes huiles obtenues sont
lactate de bornyle (47,7% dans les feuilles), la pinocarvone (27,1% dans les feuilles), le
camphre (9,3% dans les feuilles) et le terpinolne, (5,4% dans les feuilles) avec des variations
quantitatives non significatives en fonction de lorgane anatomique tudi (Jaimand et al.,
2005). Parmi ces 4 composs majoritaires seul le terpinolne est prsent dans nos extraits en
trs faible proportion (0,09%) (Tableau 10).
Mounfared et al. ont analys lhuile essentielle de la partie arienne sche de la
Balsamite provenant galement dIran (Tanacetum balsamita L. ssp. Balsamitodes (schultz
Bip) Grierson [syn, Chrysantemum Balsamita, pyre balsamita (L.) Wild], 31 composs ont t
identifis (Monfared et al., 2002), o la carvone reprsente 68% (Tableau : 12)
Enfin une troisime tude a t ralise en 2009, par Yousefzadi et al. sur une espce
iranienne Tanacetum balsamita subsp. balsamita collecte durant la phase de floraison riche
en carvone (51,0%), bta-thujone (20,8%) et alpha-thujone (3,2%) (Yousefzadi et al., 2009).

En 2001, Gallori et al. ont tudi la composition chimique de lhuile essentielle et de


leau aromatique des feuilles de Balsamite (Balsamita suaveolens Pers. [syn. Chrysanthemum
balsamita L. ; Tanacetum balsamita L.] dorigine italienne, o le carvone apparait comme le
compos majoritaire des deux extraits (Gallori et al., 2001).

La variation de la composition chimique de lhuile essentielle de Tanacetum balsamita (L.).


Desf., dorigine lituanienne a t tudie en fonction des diffrentes phases de croissance de
la plante et de la partie anatomique hydrodistille (feuilles et fleurs) par Bylaite et al. Le
rendement optimal en huile essentielle a t obtenu pendant la phase de floraison (Bylaite et
al., 2000).

87

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

Tableau 8: Composition chimique de l'HE de Tanacetum balsamita sauvage rcolte Toulouse pendant la
priode de floraison

Pics

IRa (FID)

IRthb

Identificationc

%d

CVe

917

939

alpha-pinne

0,18

3,6

932

954

camphne

0,12

3,95

954

975

sabinne

0,52

4,34

959

979

bta-pinne

0,14

4,62

1009

1025

para-cymne

0,11

6,11

1013

1029

limonne

2,51

22,31

1016

1031

1,8-cinole

1,99

5,07

1086

ni

0,20

6,362

1092

1102

cis-thujone

0,88

2,33

10

1103

1114

trans-thujone

9,08

9,54

11

1108

ni

2,10

3,68

12

1121

cis-p-mentha-2,8-dien-1-ol

1,12

2,86

13

1128

1145

trans-verbnol

1,76

1,39

14

1140

1165

pinocarvone

1,43

3,67

15

1146

985

trans-isolimonne

1,37

9,46

16

1152

1169

bornol

1,31

3,56

17

1161

1189

4-terpinol

1,18

6,74

18

1169

ni

1,33

6,98

19

1174

myrthnal

1,21

2,37

20

1179

cis-dihydrocarvone

0,41

5,86

21

1180

1229

cis-carvol

0,64

8,33

22

1203

1217

trans carvol

0,72

9,32

23

1227

1243

carvone

56,72

9,36

24

1159

cis-actate de carvyle

1,52

6,54

25

1165

ni

1,10

6,88

26

1483

1485

germacrne-D

2,43

5,36

27

1488

1561

bicyclogermacrne

0,22

6,33

28

1489

ni

0,57

21,36

29

1495

bta-bisabolne

2,46

8,36

1196

1531

88

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

30

1496

1514

delta-cadinne

2,19

12,35

31

1502

1515

trans-gamma-bisabolne

0,58

32,21

32

1516

ni

0,14

14,32

33

1593

ni

0,30

25,32

34

1613

cadinol

1,04

26,34

1654

indice de rtention calcul partir des n-alcanes C5-C18,

identification ralise partir des bindices de rtention thoriques (IRth) des librairies Adams, NIST,

Agilent France, Wiley, Hewlett Packard, France et de la littrature


d

pourcentage moyen sur 3 rplicats

coefficient de variation (%)

Tableau 9: Composition chimique de l'huile essentielle de la partie arienne de Tanacetum balsamita


cultive sous serre

Pics IRa (TIC)

IRa (FID)

IRthb

Identificationc

%d

CVe

933

934

939

alpha-pinne

0,05

4,12

973

973

975

sabinne

0,19

3,97

979

981

979

bta-pinne

0,04

3,72

987

985

984

mentha-2,8-dine

0,05

3,31

991

991

991

myrcne

0,09

4,17

1010

1006

butyrate disoamyle

0,06

3,60

1017

1017

1017

alpha-terpinne

0,14

3,95

1025

1025

1026

para-cymne

0,26

3,36

1033

1034

1031

1,8-cinole

3,97

4,00

10

1058

1058

1060

gamma-terpinne

0,53

3,80

11

1072

1072

1072

bta-terpinne

1,55

4,34

12

1086

1086

1089

alpha-terpinolne

0,09

4,31

13

1099

1095

1100

2-mthyl-butyrate disoamyle

0,07

4,62

14

1109

1110

1102

cis-thujone

3,33

2,51

15

1128

1122

1114

trans-thujone

83,57

0,82

16

1140

1138

1138

3-isothujanol

0,23

6,11

17

1144

1147

1150

para-menth-3-en-8-ol

0,39

22,31

18

1148

1152

ni

0,05

8,12

19

1151

1158

ni

0,05

5,07

89

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

20

1157

1161

21

1165

1167

1165

22

1172

1173

23

1183

24

bicyclo[4,1,0] heptan-3-one,7,7

0,03

6,70

pinocarvone

0,28

4,58

1175

actate de santolinyle

0,16

45,27

1184

1184

pinocarvol

1,48

4,62

1198

1197

1186

ocimne

0,16

0,89

25

1251

1252

carvotanacetone

0,15

7,81

26

1260

1259

4-carne

0,14

4,94

27

1288

1287

0,11

5,30

28

1296

1296

3-carne,10-actylmthyl

0,04

4,85

29

1303

1302

1307

actate de dihydrocarvol

0,18

4,83

30

1323

1324

ni

0,03

4,10

31

1329

1329

ni

0,14

4,56

32

1336

1337

ni

0,02

1,76

33

1352

1351

ni

0,02

5,60

34

1385

1369

1388

alpha-bourbonne

0,02

6,27

35

1395

1393

1394

isobutanoate de phenylthyle

0,02

24,34

36

1421

1427

1419

caryophyllne

0,02

6,37

37

1474

1478

1477

gamma-gurjunne

0,07

4,92

38

1482

1488

1485

germacrne-D

1,50

5,65

39

1496

1502

1500

bicyclogermacrne

0,19

4,44

40

1518

1521

1523

delta-cadinne

0,02

5,24

41

1560

1563

ni

0,05

5,98

42

1578

1583

ni

0,03

31,46

43

1656

1663

1663

dihydro eudesmol

0,38

8,19

44

1733

1715

pirtrinal

0,03

41,86

45

1788

1790

ni

0,03

4,24

a
c

dimthyl-4 mthylne

bicyclo[3,1,0] hex-2-ne,4-mthylne1-(1-mthylthyl)

indice de rtention calcul partir des n-alcanes C5-C18,

identification ralise partir des bindices de rtention thoriques (IRth) des librairies

Adams, NIST, Agilent France, Wiley, Hewlett Packard, France et de la littrature


d

pourcentage moyen sur 3 rplicats

coefficient de variation (%)

90

1,8-cinole

pinocarvol

Bta-thujone

Bta-terpinne

Figure 15: Structures chimiques des principaux composs majoritaires de l'huile essentielle de Tanacetum balsamita
Tableau 10: Comparaison entre les principaux composs majoritaires de lhuile essentielle de Tanacetum balsamita de diffrentes origines : France vs Iran, Italie,
Lituanie et Turquie

Origine
COV
Terpinolne
Alpha-thujone
Bta-thujone
Camphre
Pinocarvone
Carvone
Actate de bornyle

France
Espce
sauvage
0,88
9,08
1,43
56,72

Espce
cultive
0,09
3,33
83,57
0,28
-

Iran
Jaimand et al.

Iran
Mounfared et al.

Iran
Yousefzadi et al.

Italie

Lituanie

Turquie

5,4
9,3
27,1
47,7

1,1
68,0
-

3,2
20,8
0,7
51,0
-

tr
15,61
2,10
1,00
43,54
-

289,8-1261,6
15,7-225,4
tr-16,1
932,9-7637,2
tr

11,7
1,2
0,5
52,4
tr

91

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

En complment des tudes ralises sur la composition chimique de lhuile essentielle, il


existe quelques travaux concernant lactivit insecticide de la balsamite pour laquelle on a
identifi et quantifi dans lhuile essentielle une vingtaine de composs actifs qui prsentent
une forte activit insecticide contre les aphides (Bestmann et al., 1988).
Ainsi 7 espces de Tanacetum de diffrentes origines gographiques dont Tanacetum
balsamita ont t analyses pour leur potentiel lev en flavonodes lipophiles. (Williams et
al. 1999). Cinq flavonodes ont t identifis dans les feuilles de T. balsamita L. : apignine,
6-mthyle ther scutellareine, 6-mthyl ther-hydroxy-lutoline, 6,3-dimthyle ther-6hydroxy-lutoline et le 6,7,4-trimthyle ther-6-hydroxy-lutoline (Williams et al., 1999).
Dautre part, en 1996, Kubo et al. ont isol et dtermin la structure dun compos actif
antimicrobien, le Tanabaline partir des fleurs sches de Tanacetum balsamita (Catinga-demulata) dorigine brsilienne (Kubo, 1995).

En se basant sur la nature des terpnes dominants on peut identifier quatre chimiotypes :
type camphre, type carvone, type camphre-thujone et type carvone-thujone.
La comparaison de nos rsultats avec ceux de la littrature, permet de conclure que lespce
sauvage franaise et spcifiquement celle rcolte dans la rgion de Midi-Pyrnes se
rapproche de lespce turque (voir tableau 10). Par contre, la prdominance de la tanactone
et labsence de carvone dans les huiles essentielles des parties ariennes suggrent quil
pourrait sagir dun cinquime chimiotype : le type tanactone. Ce chimiotype pourrait tre
induit par les conditions de culture sous serre.

92

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

I.4. Myrrhis odorata : caractrisation chimique des tiges et des feuilles


Les plantes appartenant la famille des apiaces sont riches en mtabolites secondaires.
La plante, Myrrhis odorata, ou encore cerfeuil musqu a t cultive sous serre doctobre
2007 Mai 2008 et rcolte en juin 2008. La partie arienne frache comprenant les tiges et
les feuilles a t hydrodistille pendant 3 heures afin dobtenir une huile essentielle de couleur
jaune clair. Le rendement dextraction est de 0,48 0,02 % par rapport la matire sche. Le
mode opratoire est dcrit dans la partie exprimentale (cf. I.1.6). Lextraction de lhuile
essentielle a t rpte trois fois.

I.4.1. Composition chimique de lhuile essentielle de Myrrhis odorata et discussion


20 composs organiques volatils ont t identifis partir de lhuile essentielle de la
partie arienne du cerfeuil musque. Ils constituent 96% de la composition totale de lextrait.
Les composs majoritaires sont lanthole (75,12%), le germacrne-D (6,19%) le limonne
(4,42%), le bicyclogermacrne (3,18%), lestragole (3,04%) et le caryophyllne (2,71%)
(Tableau : 11). La structure chimique de quelques composs majoritaire de lHE est
reprsente dans la figure 16.
Ces rsultats danalyse sont proches de ceux trouvs dans la littrature par Kubeczka et al. en
1982 sur le taux danthole valu 76,8 % bien que lorigine de lespce analyse ne soit
pas prcise (Kubeczka et al., 1982). Nos extraits sont lgrement plus riches en estragole,
3,04% contre 1,2% et dpourvu de bicyclogermacrne. En 1990, Hussain et al. quantifient
85,48% danthole et 9,08% deugnol mthylique dans des extraits de Myrrhis odorata
Scop. (sweet cicely) cultive Chicago aux USA(Hussain et al., 1990) (Tableau : 12).
Tableau 11: Composition chimique de l'huile essentielle obtenue partir de la partie arienne de Myrrhis
odorata

Pics

IRa (TIC)

IRa (FID)

IRthb

Identificationc

%d

CVe

934

936

939

alpha-pinne

0,03

25,53

973

974

975

sabinne

0,02

21,05

979

982

979

bta-pinne

0,02

8,25

987

986

991

bta-myrcne

0,63

3,12

1030

1031

1029

limonne

4,42

3,90

1047

1045

1050

cis-ocimne

0,32

1,03

93

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

1059

1060

1060

gamma-terpinne

0,24

6,03

1088

1088

1089

terpinolne

0,04

8,46

1199

1200

1196

estragole

3,04

1,01

10

1229

1228

cis-3 hexenyl isovalerate

0,01

18,30

11

1253

1255

ni

0,06

10,77

12

1290

1292

1285

trans-anthole

75,12

0,03

13

1376

1382

ni

0,05

10,15

14

1388

1393

ni

0,10

1,40

15

1404

1403

ni

0,17

6,21

16

1420

1428

1419

bta-caryophyllne

2,71

1,36

19

1457

1464

1457

bta-farnesne

0,22

1,96

22

1482

1490

1485

germacrne-D

6,19

0,19

23

1489

1498

ni

0,01

29,95

24

1496

1503

1500

bicyclogermacrne

3,18

3,11

25

1504

1510

1506

alpha-farnesne

0,48

13,54

26

1518

1523

ni

0,10

8,52

27

1562

1561

ni

2,74

2,95

indice de rtention calcul partir des n-alcanes C5-C18,

identification ralise partir des bindices de rtention thoriques (IRth) des librairies Adams, NIST,

Agilent France, Wiley, Hewlett Packard, France et de la littrature


d

pourcentage moyen sur 3 rplicats

coefficient de variation (%)

Limonne

Caryophyllne

Estragole

Bicyclogermacrne

Anthole

Figure 16: structures chimiques des composs majoritaires de l'huile essentielle de Myrrhis odorata

En 1993, lhuile essentielle des feuilles de Myrrhis odorata (L.) Scop. dorigine russe a t
analyse par Tkachenko et al. Dans ces extraits lanthole constitue le compos majoritaire

94

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

(82-85%) avec le germacrne-D (2-2,9%) ; les quantits rencontres de ces molcules varient
selon que la plante est en priode de floraison ou non (Tkachenko et al., 1993).
Notre espce se rapproche le plus de lespce finlandaise identifie par Usitalo et al.
Elle se distingue nanmoins par la prsence du germacrne et sa richesse en sesquiterpnes
(Uusitalo et al., 1999) (Tableau 12).
Finalement, Rancic et al. ont analys lhuile essentielle de Myrrhis odorata dorigine
Serbe rcolte en priode de floraison. La composition est totalement diffrente de celle de
nos extraits ainsi que de celles des autres huiles essentielles tudies dans diffrentes rgions
gographiques o le p-cymne (62,0%) a remplac lanthole comme compos majoritaire
(Rancic et al., 2005).

Tableau 12: Comparaison entre les principaux composs majoritaires de l'HE de Myrrhis odorata de
diffrentes origines : France vs Serbie, Finlande, Russie et Amrique du Nord

Origine
COV
para-cymne

France

Amrique du Nord

Russie

Finlande

Serbie

62,0

Limonne

4,42

0,26

0,08

2,10

Estragole

3,04

1,71

2,64

Anthole

75,12

85,48

82,0

83,10

Bta-caryophyllne

2,71

1,70

1,01

0,70

Eugnol mthylique

9,08

Germacrne-D

6,19

2,9

Bicyclogermacrne

3,18

Alpha-farnesne

0,48

95

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

I.5. Monarda didyma : caractrisation chimique des tiges et des feuilles


La plante Monarda didyma appartient la famille des Lamiaces.
Dans le cadre de notre tude, elle a t cultive sous serre doctobre 2007 jusqu' juin 2008 et
rcolte en juillet 2008. La partie arienne frache comprenant les tiges et les feuilles a t
hydrodistille pendant 3 heures afin dobtenir une huile essentielle de couleur jaune clair. Le
rendement de distillation est de 0,70 0,02 % par rapport la matire sche. Les conditions
exprimentales sont dcrites dans la partie exprimentale (cf. I.1.7). Lextraction de lhuile
essentielle a t rpte trois fois.
I.5.1. Composition chimique de lhuile essentielle de Monarda didyma et discussion
26 composs organiques volatils ont t identifis dans lhuile essentielle obtenue partir de
la partie arienne de la plante comprenant les tiges et les feuilles. Les principaux composs
majoritaires sont le thymol (47,06%), leucalyptol (9,68%), le germacrne (4,04%), le
limonne (3,46%), le p-cymne (2,78%) et le gamma-terpinne (2,68%) comme indiqu dans
le Tableau 13. La structure chimique de quelques composs majoritaire de lHE est
reprsente dans la figure 17.
Tableau 13: Composition chimique (%) de lhuile essentielle de Monarda didyma

Pics

IRa (TIC)

IRa (FID)

IRthb

Identificationc

%d

CVe

925

929

930

alpha-thujne

0,35

2,2

933

939

939

alpha-pinne

0,88

3,0

951

957

954

camphne

1,39

2,8

973

978

975

sabinne

5,53

1,2

979

985

979

bta-pinne

1,05

2,0

987

989

991

bta-myrcne

1,10

0,9

1008

1012

1003

alpha-phellandrne

0,10

1,6

1017

1022

1017

alpha-terpinne

1,04

2,0

1025

1029

1026

para-cymne

2,78

0,8

10

1030

1034

1029

limonne

3,46

0,9

11

1033

1039

1031

eucalyptol

9,68

1,3

12

1058

1062

1060

gamma-terpinne

2,68

1,2

13

1072

1076

1073

hydrate de sabinne

0,55

1,2

96

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

14

1086

1091

1089

alpha-terpinne

1,02

0,8

15

1100

1101

1102

linalol

1,83

1,1

16

1120

1124

1128

chrysantnone

0,44

0,4

17

1174

1181

1180

bornol

1,13

0,3

18

1182

1188

1189

alpha-terpinol

0,47

0,4

19

1197

1201

1199

gamma-terpinol

8,52

1,3

20

1238

1241

1235

thymol-mthyl ether

3,20

0,9

21

1290

1291

1290

thymol

47,06

1,0

22

1376

1385

1388

bta-cubebne

0,09

2,7

23

1389

1396

ni

0,14

5,0

24

1421

1431

1419

caryophyllne

0,89

1,7

25

1482

1492

1485

germacrne-D

4,04

0,7

26

1507

1507

1506

alpha-farnesne

0,54

23,3

27

1518

1525

1523

delta-cadinne

0,04

0,5

indice de rtention calcul partir des n-alcanes C5-C18,

identification ralise partir des bindices de rtention thoriques (IRth) des librairies Adams, NIST,

Agilent France, Wiley, Hewlett Packard, France et de la littrature


d

pourcentage moyen sur 3 rplicats

coefficient de variation (%)

Sabinne

Para-cymne

1,8-cinole

Thymol

Figure 17 : structures chimiques des principaux composs majoritaires de l'HE de la M. didyma

La composition chimique de nos extraits, compare celle de Monarda didyma dorigine


franaise analyse, en 1991, par Carnat et al. est totalement diffrente car la teneur en linalol
de cette dernire est prdominante avec 64,5 74,2%. Ces auteurs ont montr quil ny avait
pas de diffrence qualitative entre lhuile essentielle des feuilles et celle des fleurs (Carnat et
al., 1991). Nanmoins, une lgre diffrence quantitative apparait sur les teneurs en

97

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

eucalyptol et limonne relativement faibles, 0,6% et 0,3% respectivement. Un an plus tard,


Mazza et al. ont analys lhuile essentielle de plusieurs hybrides Monarda provenant du
croisement entre deux espces M. fistulosa et M. didyma dorigine Canadienne dont la
composition chimique a t identifie. Une distribution de terpnes cycliques dans la majorit
des hybrides a t identifie (linalol, graniol, thymol et carvacrol). Parmi les hybrides
analyss, lhybride 75-1B riche en thymol (31,11%) (Mazza et al., 1992) possde la
composition chimique la plus proche de nos extraits o la prsence en eucalyptol est aussi
bien marque (14,11%) (Tableau 14).
Notre extrait se rapproche de lextrait obtenu partir de lespce italienne analyse par
Fraternale et al. Nos extraits se distinguent par une teneur en thymol lgrement diffrente
(47,06% contre 57,3%), la prsence deucalyptol (9,68%) et une faible concentration en paracymne (2,8% contre 10,5% dans lextrait de Fraternale et al.) (Fraternale et al., 2006)
(Tableau 14).
Les rsultats de notre tude compars aux diffrentes donnes de la littrature confirment que
la composition chimique de Monarda didyma varie selon lorigine gographique de la plante.
Tableau 14 : Comparaison entre les principaux composs majoritaires de l'HE de M. didyma provenant de
diffrents pays

Origine
COV
Sabinne
Para-cymne
Limonne
Eucalyptol
Gamma-terpinne
Linalol
Thymol
Germacrne-D

France
Midi-Pyrnes
5,53
2,78
3,46
9,68
2,68
1,83
47,06
4,04

France
Clermont Ferrand
5,0
11,0
0,3
0,6
5,3
64,5
3,2

98

Canada
(hybride 75-1B)
1,41
3,01
14,11
1,46
31,11
0,49

Italie
10,5
1,3
9,3
0,6
57,3
1,1

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

II. Caractrisation sensorielle des huiles essentielles des cinq plantes


aromatiques : Achillea millefolium, Tanacetum balsamita, Calamintha
grandiflora, Myrrhis odorata et Monarda didyma
II.1. Pyramides Olfactives
Lanalyse sensorielle des huiles essentielles peut se faire par diverses mthodes. Avant
danalyser les huiles essentielles par lintermdiaire dune chromatographie en phase gazeuse
couple un dtecteur olfactomtrique, des tests sensoriels sont ncessaires afin dtablir les
pyramides olfactives relatives chaque extrait.
Ltablissement dune pyramide olfactive consiste rprer les diffrentes notes dominantes
dans lhuile essentielle comme on le ferait pour un parfum. On suit lvolution au cours du
temps de lodeur des extraits aromatiques dposes sur une mouillette afin de dterminer les
notes de tte, de cur et de fond. La procdure est dtaille dans la partie exprimentale (cf.
II.3).
II.1.1. Les notes de tte
Elles sont constitues des notes olfactives les plus lgres, les plus volatiles, qui vont
ressortir ds le dpart de lapplication, et disparatre rapidement entre quelques minutes et 2
heures.
Exemple : les notes agrumes, les notes menthes.
II.1.2. Les notes de cur
Les molcules volatilit moyenne sont les notes de cur, elles ont une dure de vie de
2 10h et ont un rle tampon : prolonger la fracheur des notes de tte et annoncer la chaleur
des notes de fond.
Exemple : les notes florales, pices et aldhydes.
II.1.3. Les notes de Fond
Les notes de fond correspondent auxs molcules les plus lourdes, elles ont une dure de
vie beaucoup plus longue de 8h plusieurs jours.
Exemple : notes vanilles, boises, musques et ambres.

Les notes odorantes perues pourraient tre associes certaines molcules odorantes
identifies dans les huiles essentielles.
99

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

II.2. Ralisation des Pyramides Olfactives


Les pyramides olfactives ont t effectues par deux exprimentateurs. Une mouillette est
trempe dans chaque huile essentielle dilue au 1/10 (v/v) dans de lthanol anhydre, puis
flaire pour valuer les diffrentes notes de tte, de fond et de cur des temps dtermins :
au temps 0, c'est--dire immdiatement aprs trempage, aprs 2 heures, 4 heures puis 24
heures.

II.2.1. Pyramides Olfactives des 5 huiles essentielles des plantes aromatiques


selectionnes

Achillea millefolium

Tanacetum balsamita

Calamintha grandiflora

Myrrhis odorata

Monarda didyma
100

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

II.3. Activit odorante des composs organiques volatils value par CPG-Olfactomtrie
Les huiles essentielles ont t analyses par chromatographie en phase gazeuse couple un
dtecteur de masse et un dtecteur olfactomtrique (CPG-SM-O). La mthodologie, la
programmation du four ainsi que les diffrents facteurs de dilution sont dcrits en dtail dans
la partie exprimentale (cf. II.2.3).
Le couplage CPG-Olfactomtrie combine la sparation des composs volatils par CPG avec
lvaluation olfactive. En sortie de colonne, une partie des composs lus est envoye vers
un cne de dtection nasale qui permet lvaluation olfactive en mme temps que
lenregistrement du chromatogramme. Afin dviter la dshydratation de la muqueuse nasale
qui conduit une perte de sensibilit de lexprimentateur, de lair humide est inject en
entre du cne. Les donnes olfactives sont enregistres grce un bouton pressoir type
potentiomtre qui envoie un signal un logiciel dacquisition (systme Gerstel).
Afin de limiter toute subjectivit, il est ncessaire dutiliser un vocabulaire normalis pour
dcrire les odeurs mais trs souvent les laboratoires utilisent un vocabulaire interne. Le
Champs des odeurs introduit par J.N. Jaubert (Jaubert et al., 1987; Jaubert et al., 1987)
trouve son intrt dans la formation des oprateurs et est bien adapt aux tudes CPG/O.
Lanalyse en CPG-O a t effectue pour chaque huile essentielle en 3 rptitions au moyen
de 2 juges avec 20 minutes environ danalyse sensorielle chaque fois. Les huiles essentielles
ont t dilues au 1/10 dans le pentane, et 0,1L de cette dilution a t injecte. La
programmation de la CPG est dcrite dans la partie exprimentale (cf. II.2.3).

101

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

II.3.1. Rsultats de lanalyse sensorielle en CPG-O de lHE dAchillea millefolium


TR (min)

Notes

Frquence de

Composs

dtection [%], n=3


6,94

Bois pin

100

alpha-pinne

7,46

Bois piquant

100

camphne

8,17

Bois citronn

33

sabinne

8,36

Bois fort

67

bta-pinne

10,28

Eucalyptus

100

eucalyptol

11,23

Floral anis

100

gamma-terpinne

13,15

Bergamote

100

linalol

13,75

Citron lger

100

cyclocitral, isomre1

14,87

Citron lger

67

cyclocitral, isomre 2

15,21

Camphre

100

camphre

15,87

Citron

100

cyclocitral, isomre 3

16,24

Poussire

100

bornol

16,56

Agrume floral

100

4-terpinol

26,59

Bois pic

100

bta-caryophyllne

29,22

Floral Anis

100

germacrne-D

32,66

Floral jasmin

100

(E)-nrolidol

33,76

Bois pic

100

viridiflorol

Menthole,
Boise

Camphre,
Boise

Florale

On remarque aussi que le nez ne dtecte pas lensemble des notes de lhuile essentielle. En
effet, certaines odeurs peuvent tre masques par dautres odeurs intenses qui seraient lues
avant, ou bien, le compos na pas dodeur dtectable, ou encore, il est une concentration en
dessous du seuil de perception du nez humain.

102

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

II.3.2. Rsultats de lanalyse sensorielle en CPG-O de lHE de Calamintha


grandiflora
TR (min)

Notes

Frquence de

Composs

dtection [%], n=3


6,05

Bois pin

100

alpha-pinne

7,05

Bois citronne

100

sabinne

7,20

Bois piquant

100

bta-myrcne

7,44

Champignon

100

3-octanol

8,27

Agrumes

100

limonne

11,77

Floral bergamote

100

bta-linalol

12,01

Menthol lger

67

menthone

12,23

Menthol lger

100

isomenthone

12,53

Menthe poussire

100

isomenthol

12,84

Menthol camphr

100

no-isomenthol

14,14

Bois pic

100

pulgone

14,49

Menthe poivre

100

pipritone

17,76

Vert pic

67

bta-bourbonne

18,72

Bois

100

caryophyllne

19,60

Vert

100

santalne

20,28

Floral anis

100

germacrne-D

20,62

Bois

100

gamma-cadinne

Boise,
Citronne

Menthole,
Epice

Florale

La majorit des composs identifis dans les extraits du Th dAubrac ont t perus par
olfactomtrie. Ces rsultats danalyse sensorielle coupls ceux de lanalyse chimique
permettent de mieux caractriser la pyramide olfactive des extraits de Calamintha
grandiflora.

103

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

II.3.3. Rsultats de lanalyse sensorielle en CPG-O de lHE de Tanacetum


balsamita
Frquence de

TR (min)

Notes

6,03

Bois pin

75

alpha-pinne

6,96

Bois citronn

100

sabinne

8,49

Eucalyptus

100

1,8-cinole

9,25

Floral citron

100

gamma-terpinne

10,52

Th bois

100

alpha-thujone

11,24

Th fort

100

tanactone

12,56

Vert camphr

75

pinocarvone

14 ,15

Fruit citron

100

4-carne

14,98

Floral

75

ni

16,42

Citron bois

50

alpha-bourbonne

20,2

Bois

25

caryophyllne

20,33

Floral

100

germacrne-D

22,19

Bois soufr

75

delta-cadinne

24,36

Sucr

100

dihydro eudesmol

dtection [%], n=3

Composs

Menthole,
citronne

Menthole,
herbace

Th sec
(doux,
infusion)

Le pic majoritaire est la tanactone, compos odeur caractristique de th et dpice. Pour


cette huile essentielle, on observe aussi un retard de dtection de 30 secondes et un compos
non identifi dtect environ 15 min.

104

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

II.3.4. Rsultats de lanalyse sensorielle en CPG-O de lHE de Myrrhis odorata


Frquence de

TR (min)

Notes

4,50

Bois

100

alpha-pinne

5,30

Bois citron

67

sabinne

7,42

Vert piquant

67

bta-myrcne

8,42

Agrumes

100

limonne

12,80

Anis vert

100

estragole

15,67

Anis fort

100

trans-anthole

18,56

Bois

100

bta-caryophylne

20

Floral

100

germacrne-D

20,29

Anis

100

alpha-farnesne

20,69

Bois

100

ni

22,09

Bois

67

ni

dtection [%], n=3

Compos

Frais,
herbace

Anise,
boise

Boise

Le compos majoritaire de cette HE est lAnthole. Son odeur est tellement forte quelle
persiste tout le long de lanalyse (aprs son lution). Elle cache ainsi certains composs qui le
suivent. Cest pour cela que peu de composs odorants sont dtects chez Myrrhis odorata.
Lcart de temps de rtention entre le pic chromatographique et la detection olfactive de la
molcule est galement de 30 secondes.

105

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

II.3.5. Rsultats de lanalyse sensorielle en CPG-O de lHE de Monarda didyma


Frquence de

TR (min)

Notes

6,10

Bois

100

alpha-pinne

7,15

Bois vert

67

bta-pinne

7,30

Bois piquant

100

bta-myrcne

8,05

Citronne

67

alpha-terpinne

8,58

Eucalyptus

100

eucalyptol

9,83

Floral citronn

67

gamma-terpinne

10,25

Bergamote

100

linalol

12,53

Floral

67

alpha-terpinol

13,03

Citron vert

100

gamma-terpinol

14,03

Epice (thym lger)

100

thymol-mthyl ether

15,90

Thym

100

thymol

18,84

Bois

33

caryophyllne

20,40

Floral

100

germacrne-D

21,10

Bois soufr

100

delta-cadinne

dtection [%], n=3

Composs

Citronne,
menthole

Thym

Boise

Ces rsultats danalyse sensorielle coupls ceux de lanalyse chimique permettent de mieux
caractriser les pyramides olfactives des 5 huiles essentielles tudies.

106

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

III. Activits biologiques des huiles essentielles et des rsidus de


lhydrodistillation
III.1. Introduction sur lactivit antioxydante
Lutilisation des antioxydants synthtiques est un sujet trs tudi du fait de leur impact
ngatif sur la sant humaine (Branen, 1975; Barlow, 1990). Plusieurs limites et restrictions
ont t mises en place concernant leur utilisation, et leur substitution par des antioxydants
naturels est devenue un enjeu scientifique. Les antioxydants bien connus et traditionnels sont
ceux provenant du th, du vin, des fruits, des pices et dautres vgtaux (Kanner et al., 1994;
Cao et al., 1998; Madsen et al., 1998; Wang et al., 1998). Plusieurs espces de plantes ont t
impliques dans la recherche des nouveaux antioxydants (Economou et al., 1991). Quelques
antioxydants naturels issus du romarin et de la sauge par exemple sont dj exploits et
commercialiss en tant quadditifs nutritionnels antioxydants (Schuller, 1990).
Loxydation des lipides est un processus complexe en chane produisant plusieurs types de
radicaux libres. Loxydation est influence par la temprature, la lumire, lair, les proprits
physiques et chimiques du substrat, ainsi que par la prsence de catalyseurs doxydation ou
dinitiateurs tels que les mtaux dont une trace infrieure 0,5ppm est suffisante pour
catalyser la raction doxydation (Chapitre I, paragraphe VI.3.1)
Les antioxydants peuvent exercer leurs proprits de protection lors des diffrents stades du
processus doxydation et par diffrents mcanismes. Il existe deux grandes types
dantioxydants : les primaires et les secondaires ou prventifs (voir Chapitre 1, paragraphe
VI.3.2).
Plusieurs systmes modles doxydations acclres sont utiliss et diffrentes mthodes ont
t dveloppes afin dvaluer lactivit antioxydante (Ragnarson, 1977 ; Frankel, 1993 ;
Moure, 2001) (voir Chapitre 1, partie VII).
Loxydation des lipides dans les produits alimentaires induit non seulement une diminution de
la valeur nutritive de laliment, mais aussi des effets reconnus nuisibles pour le consommateur
qui peuvent tre associs des risques de maladies cancrignes chez lhomme (Papas, 1999).
La prsence dantioxydants dans lalimentation est devenue de plus en plus essentielle pour la
qualit et la scurit de laliment. Limportance des antioxydants naturels comme additifs
alimentaires est dj tablie. Les effets ngatifs des antioxydants synthtiques donnent lieu
linterdiction de leur utilisation par les consommateurs et poussent les intrts scientifiques
vers leur substitution par des agents naturels. Cependant, les produits naturels y compris les

107

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

antioxydants peuvent tre toxiques sous certaines conditions. Parfois certains dentre eux
possdent des proprits fonctionnelles additionnelles : antibactrienne, antimutagne, etc
Les plantes aromatiques sont prometteuses et constituent une grande source dantioxydants
naturels pour lindustrie agroalimentaire (Yen et al., 1995; Kim et al., 2001)
III.2. Evaluation de lactivit antioxydante des huiles essentielles
Lobjectif de la prsente tude est de comparer lactivit antioxydante des huiles essentielles
des plantes aromatiques oublies ainsi que de leurs rsidus dhydrodistillation en utilisant les
mthodes suivantes : la mthode Oxipress, la mthode dvaluation des dines et trines
conjugus et la mthode de dtermination de loxydation du radical 2,2-diphnyl-1picrylhydrazyl dite DPPH. La sensibilit, la rapidit, lapplicabilit ainsi que la mise en
relation des rsultats sont discuts.

III.2.1. Evaluation de lactivit antioxydante des HE en utilisant la mthode


Oxipress
Les parties ariennes dAchillea millefolium, de Tanacetum balsamita L., de Calamintha
grandiflora (L.) Moench, de Myrrhis odorata (L.) Scop, et de Monarda didyma ont t
utilises dans cette tude. Ces plantes ont t cultives sous serre pendant lanne 2008 et
collectes en juillet 2008 durant leurs stades de floraison. Les huiles essentielles ont t
isoles par hydrodistillation et la composition chimique de chaque huile essentielle a t
analyse (cf. chapitre 2, paragraphe II).
Lactivit antioxydante des huiles essentielles a t dtermine dans lhuile de tournesol au
moyen de lappareil Oxipress (Mikrolab Aarhus, Denmark). Cette mthode consiste valuer
la consommation doxygne en mesurant la variation de pression dans une enceinte
hermtiquement ferme et renfermant lchantillon doser ainsi que de loxygne. La
technique exprimentale ainsi que les diffrentes valeurs exprimentales sont bien dtailles
dans la partie exprimentale (cf.V.1)
La priode dinduction (PI) de loxydation a t value au moment o la pression commence
chuter (voir partie exprimentale cf. V.1). Le facteur de protection (FP) ainsi que lactivit
anti-oxydante (AA) sont calculs partir des formules suivantes :
FP = PIX / PIK

AA = (PIX PIK) / PIBHT PIK

108

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

O : PIX est la priode dinduction de lchantillon avec additif ;


PIK est la priode dinduction de lchantillon sans additif ;
PIBHT est la priode dinduction de lchantillon contenant la rfrence BHT (hydroxy
tolune buthyl) ;
huile de tournesol

Pression (bars)

6.8
6.6

A.millefolium

6.4

T.balsamita

6.2

M.didyma
M.odorata

6
5.8

C.grandiflora

5.6

BHT

5.4
5.2
5
0

T emps (h)

Figure 18: Oxydation de l'huile de tournesol 110C, 5 bars, en prsence de diffrentes huiles essentielles

La mthode Oxipress est une procdure avantageuse et performante pour laquelle aucun
compos chimique na t utilis. Les courbes doxydation typiques obtenues sont prsentes
dans la figure (18). La variation de la pression ainsi que la priode dinduction ont t
mesures avec prcision.
Dans le cas de lajout de lhuile essentielle dans lhuile de tournesol (huile vecteur), la chute
de pression a t retarde dun temps T, indiquant leffet antioxydant de la substance ajoute
dans lhuile vecteur.
Les effets des huiles essentielles valus pour diffrentes concentrations de celles-ci (0,05% ;
0,1% et 0,2%) sont prsents dans le tableau (15). Lhuile essentielle de M. didyma montre
une activit antioxydante plus efficace, en comparaison des autres huiles essentielles. Les
huiles essentielles de M. didyma et dA. millefolium ont t les plus efficaces pour la
stabilisation de lhuile de tournesol. Lefficacit des huiles essentielles diminue en fonction de
lordre suivant : M. didyma > A. millefolium > C. grandiflora >M. odorata >T. balsamita
pour des concentrations de 0,05%, 0,1% et 0,2%.

109

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation
Tableau 15: Activit antioxydante (AA) des huiles essentielles compare l'efficacit du BHT

Espces

[]%

Facteur de

Activit

priode

protection

antioxydante

dinduction

(FP)

(AA)

(PI)

CV
(%)

Sans additif

0,00

1,00

BHT

0,02

1,47

1,00

4,26

0,04

M. didyma

0,2

1,73

1,55

5,02

0,01

M. didyma

0,1

1,37

0,79

3,97

0,01

M. didyma

0,05

1,29

0,62

3,74

0,01

A. millefolium

0,2

1,71

1,51

4,96

0,05

A. millefolium

0,1

1,29

0,62

3,74

0,05

A. millefolium

0,05

1,17

0,36

3,39

0,05

C. grandiflora

0,2

1,63

1,34

4,73

0,02

C. grandiflora

0,1

1,22

0,47

3,54

0,02

C. grandiflora

0,05

1,18

0,38

3,42

0,02

M. odorata

0,2

1,61

1,30

4,67

0,12

M. odorata

0,1

1,2

0,43

3,48

0,12

M. odorata

0,05

1,17

0,36

3,39

0,12

T. balsamita

0,2

1,41

0,87

4,09

0,04

T. balsamita

0,1

1,2

0,43

3,48

0,04

T. balsamita

0,05

1,1

0,21

3,19

0,04

PI : priode dinduction
FP : facteur de protection
CV : coefficient de variation (%), (n=3)

Lefficacit des huiles essentielles dans les conditions appliques (TC: 110C, P: 5 bars)
est dans lordre dcroissant suivant : M. didyma (0,2%) > A. millefolium (0,2%) > C.
grandiflora (0,2%) > M. odorata (0,2%) > T. balsamita (0,2%) > M. didyma (0,1%) > A.
millefolium (0,1%) > C. grandiflora (0,1%) > M. odorata (0,1%) > T. balsamita (0,1%) > M.
didyma (0,05%) > C. grandiflora (0,05%) > A. millefolium (0,1%) > M. odorata (0,1%) > T.
balsamita (0,1%)
Lhuile essentielle est un complexe mixte de composs naturels volatils. Ainsi, lactivit
antioxydante totale de lhuile essentielle va dpendre de la prsence du compos actif dans
cette huile ainsi que de sa concentration. Certains composs phnoliques comme le thymol
110

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

qui est prsent dans plusieurs huiles essentielles, particulirement celles isoles des plantes
contenant le gne Thymus, prsentent une activit antioxydante leve cause de la prsence
du radical hydroxyle libre dans sa structure chimique (figure 19).
Cest le cas chez M. didyma qui contient 47,06% de thymol dans la composition de son huile
essentielle (voir Tableau 13). Lactivit antioxydante de M. didyma a t teste via la mthode
de DPPH par Fraternal et al. pour laquelle lHE a montr une activit antioxydante
comparable celle du Trolox (Fraternale et al., 2006) (figure 19). Ce dernier est une molcule
drive de la vitamine E et de rfrence pour la mesure du pouvoir antioxydant de mlanges
complexes.

Figure 19: structures chimiques du Trolox et du Thymol

Lactivit antioxydante des huiles essentielles dpend galement de la concentration de cellesci. Dans le cas dune dose leve (0,2%) de M. didyma, dA. millefolium, de C. grandiflora et
de M. odorata, lactivit de leurs huiles est comparable celle du BHT ajout une
concentration de 0,02%.
Dans la littrature, lactivit antioxydante dA. millefolium a t value par des
mthodes autres que lOxipress, comme la DPPH (Candan et al., 2003) o il a t dmontr
que lextrait mthanolique

(fraction hydrophile) de lAchille millefeuille prsente une

activit (IC50 : 45,60g/ml) deux fois plus faible de celle du BHT (IC50 : 19,30g/ml). Par
contre, lactivit antioxydante de lHE sest rvle tre plus efficace (IC50 : 1,56g/ml) que
celle du BHT (IC50 : 19,30g/ml).
Il faut se placer une concentration de 0,2% pour avoir une activit antioxydante dA.
millefolium (FP=1,71) plus efficace que celle de la rfrence synthtique (BHT) utilise
0,02% (voir tableau 15). Ceci pourrait tre reli la prsence de composs phnoliques (voir
Tableau 4). Il a t dmontr que l'efficacit antioxydative dans des sources naturelles, tait

111

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

en particulier lie la prsence de composs phnoliques. Ces derniers ont un rle important
dans linhibition de lauto-oxydation des huiles (Ramarathnam et al., 1995).
Dans le but de dtecter les composs bioactifs parmi les composs majoritaires identifis
dans lhuile essentielle dA.millefolium, des tests dactivit individuelle ont t effectus par
Candan et al sur les molcules suivantes : eucalyptol, camphre, bta-pinne, bornol,
terpinne-4-ol et alpha-pinne. Aucune activit in-vitro na t dtecte pour ces composs.
En conclusion, ces rsultats montrent quil existe une synergie entre les composs majoritaires
de lhuile essentielle offrant cette huile une activit antioxydante globale efficace.
Daprs la Figure 20, on peut conclure que lajout de 0,2% de lhuile essentielle
dAchille millefeuille permet de prserver lhuile de tournesol et de retarder loxydation de
celle-ci de deux heures 110C et sous 5 bars. Cela correspond une augmentation de la
rsistance de lhuile de tournesol de 71%.
huile de tournesol
huile de tournesol aromatise avec 0,2% HE

pression (bar)

7
6.5
6
5.5
5
0

Temps (h)

Figure 20: courbe d'oxydation de l'huile de tournesol en prsence de l'HE d'Achillea millefolium

Lactivit antioxydante du th dAubrac est trs semblable celle de Myrrhis odorata


pour les diffrentes doses (0,05%, 0,1% et 0,2%). Sachant que le compos majoritaire du
cerfeuil musqu est lanthole et quil est prsent 75%, on peut relier de faon quasi
vidente lactivit antioxydante modeste de cette plante la prsence de ce terpne ou theroxyde apolaire (figure 21). Ceci est en accord avec les travaux de Freire et al. dans lequel
lanthole rvle une activit anti-oxydante modeste (Freire et al., 2005).

112

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

Figure 21: structure chimique du Trans-anthole

Dans le cas du th dAubrac, les composs majoritaires de lHE sont : lisomenthone,


lisomenthol et le no-isomenthol. Ces composs aromatiques par la prsence dun groupe
hydroxyle (voir figure 22) sont responsables de

lactivit antioxydante de Calamintha

grandiflora.

Figure 22: structure chimique de l'isomenthol (trans) et du no-isomenthol (cis)

Daprs la figure 23, on remarque que la priode dinduction de lhuile de tournesol


aromatise par lHE de C. grandiflora a t augmente de 30 minutes. La prsence de 0,1%
de cette HE a t suffisante pour augmenter la rsistance de lhuile de tournesol dune valeur
de 16% face loxydation.
Ces rsultats montrent une activit antioxydante non ngligeable de Calamintha grandiflora
alors quaucune tude nen a fait tat jusqu prsent dans la littrature.

113

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

huile de tournesol aromatis


avec 0,1% de l'HE

Pression (bars)

7
6.5

Huile de Tournesol

6
5.5
5
0

Temps (h)

Figure 23: Courbe d'oxydation de l'huile de tournesol en prsence de l'HE de la Calamintha grandiflora

Il existe un nombre trs faible dtudes scientifiques qui font tat de lactivit antioxydante de
Tanacetum balsamita. En 2000, Bandonienne et al. ont compar lactivit antioxydant de
lextrait actonique de Balsamite avec dautres extraits des autres plantes aromatiques en
utilisant diffrentes mthodes dont lOxipress (Bandoniene et al., 2000). Les facteurs de
protection de lextrait actonique de la Balsamite ont t calculs partir des priodes
dinductions. Si on compare ces rsultats ceux obtenus partir de lespce dorigine
franaise, on remarque que lactivit antioxydante une concentration donne (0,2%) est
lgrement plus leve (FP : 1,66) dans le cas de lextrait actonique que dans le cas de notre
huile essentielle (FP : 1,41). Lextrait actonique contient galement des composs non
volatils dont certains sont certainement susceptibles davoir une activit antioxydante. Dautre
part, le facteur de protection est dpendant de la concentration pour lhuile essentielle, et dose
indpendant pour lextrait actonique de la Balsamite tudie par Bandoniene et al. pour
lequel le facteur de protection est relativement stable dans la gamme de concentration tudie.
Il est ncessaire de signaler que lespce utilise par Bandonienne et al. possde la carvone
comme compos majoritaire la diffrence de notre espce o la tanactone (bta-thujone)
constituait 83,57% (voir Tableau 9).

114

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

III.2.2.

Evaluation

de

lactivit

antioxydante

des

HE

via

des

mthodes

spectrophotomtriques (dines et trines conjugues)


Aujourdhui, la recherche se concentre sur l'extraction d'antioxydants naturels qui
seraient moins toxiques et plus efficaces que les antioxydants synthtiques gnralement
utiliss pour combattre le " stress oxydant ", qui possde priori un effet fortement
pathologique. Dans des organismes vivants, la protection contre des radicaux libres et l'espce
d'oxygne ractive est ralise par des enzymes antioxydatives, comme la glutathion
peroxydase ou bien les vitamines, les pigments, les phnols et polyphnols. Des antioxydants
synthtiques, comme le butylhydroxytolune (BHT) et le butylhydroxyanisole (BHA), sont
bien connus pour la capacit quils ont d'arrter les ractions en chane de peroxydation dun
lipide.
Malheureusement, il a t montr qu'ils sont capables d'augmenter le risque des maladies
cancrignes, de causer des dgts pulmonaires chez les souris, une ncrose du foie, des
hmorragies ainsi que la mort des rats (Branen, 1975). cet gard, les flavonodes et d'autres
polyphnols ont capt l'attention en raison de leur non toxicit et de leur potentialit pour la
mise en uvre dans les rgimes alimentaires chez lhomme.
Loxydation des lipides, autrement dit la peroxydation des acides gras polyinsaturs (PUFA)
gnre une grande quantit de produits drivs comme les dines conjugus dont la coupure
des doubles liaisons gnre des aldhydes. Le stress oxydant correspond une perturbation
dans le fonctionnement du statut oxydatif intracellulaire. Cest un dsquilibre entre les
systmes de dfense antioxydants et la production des radicaux libres oxygns. Les
marqueurs du stress oxydant sont surtout les produits de loxydation des lipides : dines
conjugus, hydroperoxydes, aldhydes, TBARS (tiobarbituric acid reactive substances).
Lestimation des dines conjugus est dtermine partir de labsorption diffrentielle 234
nm. Les molcules comportant un dine conjugu sont caractrises par une absorption
intense de lumire ( = 27000 mol-1 l.cm-1) entre 215 nm et 250 nm (max = 232 nm). La
mesure de la quantit de dines conjugus dans les acides gras donne une indication sur le
degr dinsaturation des acides contenus dans lhuile. Ainsi il existe plusieurs paramtres qui
permettent de contrler lvolution de loxydation des huiles (voir chapitre 1, paragraphe
VII.2), parmi eux, la valeur des acides gras (FFA, Free Fatty Acid Value), la valeur de
peroxydation (PV, peroxidation value), les dines conjugus (CD) et les trines conjugus
(CT). Les dines et les trines conjugus constituent de bonnes sources de mesures pour ltat
doxydation des huiles (Dapkevicius, 1998).

115

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

Lobjectif de ce travail est dtudier limpact des huiles essentielles des plantes aromatiques
oublies dans le retardement du processus doxydation de lhuile de tournesol. Lhuile de
tournesol a t utilise comme huile vecteur. Nous avons prpar 5 chantillons de lhuile de
tournesol aromatise par les cinq huiles essentielles deux concentrations diffrentes. Les
quantits exactes ainsi que la procdure exprimentale et les paramtres sont dcrits en dtail
dans la partie exprimentale (cf. V.2).
Par la suite, laide de la mthode des dines conjugus, qui mesure le coefficient
dextinction en fonction du temps et en fonction de chaque huile essentielle, on a pu
distinguer limpact de chaque huile essentielle dans linhibition de la formation des dines ou
des trines conjugus en travaillant deux longueurs dondes diffrentes (232nm et 268nm).
Aprs 15 jours dincubation 80C des chantillons dhuiles aromatises, on remarque
que lhuile essentielle de M. didyma a t la plus efficace comparativement aux autres huiles
essentielles. Ainsi lordre defficacit de lactivit antioxydante des huiles essentielles
tudies est le mme que celui observ en utilisant la mthode Oxipress.

huile de tournesol

M.didyma

A.millefolium

C.grandiflora

M.odorata

T.balsamita

BHT
2.5
2

%E

1.5
1
0.5
0
0

10

12

14

16

Temps (jours)
Figure 24: Contrle de l'volution de l'oxydation de l'huile de tournesol en fonction de la quantit de
trines conjugus mesurs 268nm, (% de lHE dans lhuile de tournesol = 0,1%)

116

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

On peut remarquer quen aromatisant lhuile de tournesol avec 0,1% dhuile essentielle on a
retard la formation des produits doxydation secondaire (trines conjugus). Lhuile de
tournesol utilise a rsist loxydation secondaire pendant 8 jours. Au-del, les produits
doxydation secondaire ont commenc se former (figure 24). En fonction de lactivit
antioxydante de chaque huile essentielle, un retardement de la progression de loxydation est
observ, sachant que toutes les huiles essentielles tudies ont t plus efficaces que la
rfrence synthtique utilise (BHT).
Si on travaille une concentration plus faible en huiles essentielles soit 0,05% (figure
25), lefficacit antioxydante diminue. Cependant lordre defficacit est le mme que celui
obtenu dans les cas dajout de 0.1% de lHE. Toujours au-del de 8 jours, lvolution de
loxydation dans les huiles aromatises commence progresser de plus en plus rapidement,
contrairement lhuile de tournesol pour laquelle la formation des produits doxydation
secondaire (trines conjugus) commence au-del dune journe 80C.

huile de tournesol
C.grandiflora
BHT

M.didyma
M.odorata

A.millefolium
T.balsamita

2.5

%E

2
1.5
1
0.5
0
0

10

12

14

16

Temps (jours)
Figure 25: Contrle de l'volution de l'oxydation de l'huile de tournesol en fonction de la quantit de
trines conjugus mesurs 268nm, (% de lHE dans lhuile de tournesol = 0,05%)

En mesurant labsorption la longueur donde de 232nm, on dtecte cette fois-ci les dines
conjugus (figure 26). On remarque que la formation des dines conjugus a t plus rapide
que celle des trines. Ds les premires heures, la concentration en produits doxydation
primaire a augment dune faon trs rapide 80C. Cependant, la diffrence dactivit
antioxydante entre les huiles essentielles est trs faible pour 0,05% dHE. La concentration en

117

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

dines conjugus forms lors de loxydation primaire est trs leve par rapport celle des
trines conjugus.

huile de tournesol
C.grandiflora

M.didyma
M.odorata

A.millefolium
T.balsamita

%E

BHT
16
14
12
10
8
6
4
2
0
0

10

12

14

16

Temps (jours)

Figure 26: Contrle de l'volution de l'oxydation de l'huile de tournesol en fonction de la quantit de


dines conjugus mesurs 232nm, (% de lHE dans lhuile de tournesol = 0,05%)

En appliquant une dose dhuile essentielle deux fois plus leve (0,1%), on arrive
distinguer des activits antioxydantes distinctes pour chacune des huiles essentielles. Par
exemple, partir de la figure 27 on peut conclure que lhuile essentielle de M. didyma est la
plus efficace en retardant le plus longtemps la formation des produits doxydation primaire, et
lordre defficacit antioxydante est le mme que celui obtenue via la mthode Oxipress.
En gnral, la mthode spectrophotometrique est trs performante, elle donne une ide trs
rapide sur lvolution du processus doxydation, et permet de distinguer les deux stades
doxydation primaire et secondaire. Cette mthode est plus avantageuse car on travaille dans
des conditions plus proches des conditions de stockage des aliments (pression atmosphrique,
T : 80C), que celles utilises pour lOxipress o les conditions sont acclres (T :110C,
Pression : 5 bars). En outre, la mthode Oxipress permet de comparer dune faon plus fine la
diffrence entre les activits antioxydantes, grce aux valeurs des facteurs de protection que
lon peut calculer.

118

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

huile de tournesol

M.didyma

A.millefolium

C.grandiflora

M.odorata

T.balsamita

BHT
16
14
12

%E

10
8
6
4
2
0

10

12

14

16

Temps (jours)
Figure 27: Contrle de l'volution de l'oxydation de l'huile de tournesol en fonction de la quantit de
dines conjugus mesurs 232nm, (% de lHE dans lhuile de tournesol = 0,1%)

En appliquant ces deux mthodes de mesure nous avons pu observer que les cinq huiles
essentielles possdaient une activit antioxydante significative avec des variations qui
dpendent de plusieurs facteurs, comme ; le taux des composs phnoliques, les groupements
fonctionnels donneurs dlectrons, les fonctions hydroxyles, ainsi que des synergies entre les
composs actifs qui constituent chaque huile essentielle.

Ces rsultats positifs sur lactivit antioxydante des huiles essentielles suggrent des
tudes plus approfondies de leur activit biologique, afin dlaborer des produits naturels de
valeur pouvant tre commercialiss et substitus aux antioxydants existants.

Ces proprits antioxydantes obtenues partir des fractions volatiles des plantes
aromatiques oublies, peuvent tre compltes et renforces par des activits biologiques des
rsidus dhydrodistillation. Nous avons alors dcid de faire des extractions de ces rsidus par
diffrents solvants pour valuer leur potentiel antioxydant.

119

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

III.3. Evaluation de lactivit antioxydante des rsidus dhydrodistillation des 5 plantes


aromatiques par la mthode de DPPH
III.3.1. Principe de la mthode de DPPH
Loxydation des lipides contenus dans les aliments est responsable de la formation des
mauvaises odeurs (off-odors) et des composs chimiques indsirables nocifs pour la sant
humaine. Les antioxydants sont utiliss dans les industries alimentaires pour retarder le
processus doxydation. Plusieurs tests ont t utiliss pour mesurer la rsistance des lipides
face loxydation en prsence dantioxydants (cf. Chapitre I, paragraphe V.3.2). Ces tests
sont gnralement adapts pour des milieux sous forme dmulsion lipidique. Lautooxydation est un phnomne lent, le processus de formation radicalaire inclut les ractions en
chane, induction, propagation et terminaison. Pendant la priode dinduction, des radicaux
alkyles sont forms et ragissent avec les molcules doxygne pour gnrer les
hydroperoxydes et les peroxydes durant la phase de propagation. La phase de terminaison
consiste lassociation des deux radicaux afin de former un produit stable. La majorit des
tests consiste rduire la priode dinduction, en utilisant des tempratures hautes, et, ou des
pressions fortes. A partir de ces tests, lactivit antioxydante de plusieurs extraits de plantes a
t value en mesurant la consommation doxygne ou la production des hydroperoxydes ou
autres produits de dgradations.
La mthode de DPPH, consiste utiliser un radical stable, le 2,2-diphnyl-1-picrylhydrazyl
(DPPH, figure 28) dans du mthanol (dans la plupart des cas) (Dvaranauskaite et al., 2008).
La rduction du DPPH est contrle en mesurant labsorbance de la solution une longueur
donde caractristique (515 nm). A cette longueur donde le radical absorbe, mais aprs sa
rduction par lantioxydant (AH) ou un autre radical, labsorption diminue.
DPPH + AH DPPH-H + A
DPPH + R DPPH-R
Brand-Williams et al. ont mis trois hypothses qui expliqueraient lefficacit anti-radicalaire
de plusieurs composs phnoliques (Brand-Williams, 1995).
La premire hypothse consiste en une raction de donation dun hydrogne suivie de la
dlocalisation du groupe substitu en para (voir figure 28, Raction 1). Le modle tait
leugnol ; cette hypothse est valable pour tous les phnols qui possdent deux ou trois
atomes dhydrogne sur le carbone en position para du groupe aromatique.

120

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

La deuxime hypothse consiste une dimrisation entre deux radicaux phenoxyles (figure
28, raction 2), comme dcrite par Pokorny et al. pour le phnol avec la position ortho et
para.

Aprs dimrisation,

deux groupements hydroxyles rgnrent un transfert

intramolculaire de H, ce dernier peut ragir avec le DPPH.

Figure 28: Ractions proposes par Brand-Williams et al, de l'eugnol avec le DPPH

La troisime hypothse consiste en la complexation du DPPH avec un radical aryle (figure


28, raction 3)
Il est connu que les polyphnols ont une activit antioxydante plus efficace que les
monophnols, par exemple lacide cafique possde une activit antiradicalaire plus efficace
que lacide coumarique (monophnol). Lacide gallique, un triphnol est plus actif que lacide
protocatechique (ARP : anti radical power = 12,5 et 7,15 respectivement) (Brand-Williams,
1995)

121

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

Figure 29 : Mcanisme de rgnration de l'ortho-diphnol

La position du groupement hydroxyle est trs importante. Les composs qui possdent le
groupement hydroxyle en position ortho et para ont une activit antioxydante trs forte en
comparaison avec ceux qui possdent un groupement hydroxyl en position meta. Lefficacit
des diphnols (position ortho et para) est due la stabilisation du radical (aryloxyle) par une
liaison hydrogne ou par rgnration des autres diphnols comme il est indiqu dans la
figure 29.
Au dpart le DPPH est sous sa forme 2,2-diphnyl-1-picrylhydrazyl radicalaire. Ce radical a
une couleur violette en raison de llectron non appari et de lazote. Aprs raction avec
l'atome d'oxygne d'un capteur de radicaux, le DPPH-H rduit (2,2-diphnyl-1picrylhydrazin) qui est form est jaune (figure 30).
Le changement de couleur peut tre suivi par spectrophotomtrie 517 nm.

Figure 30: Schma de transformation du DPPH de sa forme active celle inactive

122

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

III.3.2. Comparaison des activits antioxydantes des rsidus dhydrodistillation


mesures par la mthode de DPPH.
Les rsidus de chaque hydrodistillation, ont t extraits par lintermdiaire dun Soxhlet en
utilisant trois solvants diffrents : le mthanol, lthanol, et lactone (figure 31). Lobjectif de
cette tude tait de tester lactivit antioxydante des rsidus, de les comparer pour chaque
plante et dvaluer lefficacit des diffrents solvants sur lextraction des composs
antioxydants des rsidus dhydrodistillation. Le protocole exprimental de lextraction, les
quantits et les diffrents paramtres utiliss sont dcrits en dtails dans la partie
exprimentale (Cf. III.2).

Figure 31: Schma exprimental du protocole d'analyse chimique des HE et d'evaluation des activits
antioxydantes et antibactriennes

Lactivit antioxydante des extraits de rsidus des plantes a t examine en comparant cette
activit avec celle du rsidu dhydrodistillation du Romarin (Rosmarinus officinalis) connu
comme rfrence antioxydant naturel et trait dans les mmes conditions.

123

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

Pourquoi la comparaison avec le Romarin ?


Le 30 juin 2008, lAutorit Europenne de Scurit des Aliments (E.F.S.A.) a rendu un avis
indiquant que lutilisation dextraits de romarin en tant quantioxydant dans les aliments ne
prsentait pas de risque pour la sant des consommateurs. Cet avis ouvre la voie ladoption
officielle des extraits de Romarin dans la rglementation sur les additifs alimentaires,
permettant de les tiqueter antioxydant : extrait de romarin . Cela rpond parfaitement aux
exigences croissantes des consommateurs pour la naturalit des produits alimentaires.

Linhibition du DPPH radicalaire a t value pour chaque rsidu et pour chaque solvant et
les rsultats sont prsents dans le Tableau16. Une valeur faible dIC50 indique une activit
antioxydante forte. Le pourcentage dinhibition (% I) pour chaque rsidu a t calcul, les
essais ont t raliss en triplicata et les rsultats sont exprims en ET (Ecart type), la valeur
dIC50, la concentration de lchantillon ncessaire pour inhiber 50% du DPPH radicalaire a
t calcule par rgression linaire des pourcentages dinhibition calcul en fonction de quatre
concentrations diffrentes dchantillons prpars. (Cf. Partie Exprimentale, paragraphe
IV.2.1).

Tableau 16: Activit antioxydante des extraits de rsidus d'hydrodistillation

IC50 (mg/mL) ET (n=3)


Extraits

Extraits

Mthanoliques

Ethanoliques

Extraits Actoniques

Achillea millefolium

0.45 0.09

1.17 0.08

1.22 0.13

Monarda didyma

1.54 0.12

1.85 0.11

2.01 0.12

Tanacetum balsamita

1.84 0.1

2.53 0.15

2.6 0.12

Calamintha grandiflora

2.54 0.12

2.69 0.16

2.9 0.21

Myrrhis odorata

2.60 0.13

2,70 0.14

2.95 0.13

Rosmarinus officinalis

0.95 0.08

1.19 0.08

1.25 0.14

Plante

ET : cart type

124

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Daprs le tableau 16, on remarque que lactivit antioxydante du rsidu dAchillea


millefolium a t la plus efficace parmi les autres. Lordre defficacit est le suivant Achillea
millefolium > M. didyma > T. balsamita > C. grandiflora > M. odorata.
Les extraits mthanoliques ont t lgrement plus efficaces que les extraits thanoliques et
actoniques. Lactivit du rsidu dA. millefolium (0 .45mg/mL) a t plus efficace que celle
de la rfrence naturelle Romarin (0.95 mg/mL).
En 2003, Candan et al. ont montr que lactivit antioxydante de la phase polaire de lhuile
essentielle tait plus intense (IC50 : 1,56g/ml) que celle de lextrait mthanolique (IC50 :
45,60 g/ml) de la plante entire, Achillea millefolium. Lactivit antioxydante de notre
extrait mthanolique des rsidus dhydrodistillation dAchille millefeuille possde une
activit 10 fois moins intense que lextrait mthanolique de la plante entire dorigine turque
tudie par Candan et al. en 2003 (Candan et al., 2003). Nanmoins, nos rsidus
dhydrodistillation possdent une activit antioxydante six fois suprieure celle du thymol
(IC50 :13,3 mg/ml 0.19) test dans les travaux de Cavar et al. sur la plante Sariette en
utilisant le thymol comme contrle (Cavar et al., 2008).
A notre connaissance, aucune donne n'a t publie sur l'activit antioxydante utilisant le
DPPH sur les rsidus dhydrodistillation de ces cinq plantes. La littrature dcrit des
approches diffrentes pour la dtermination des activits antioxydantes des extraits de plantes.
Ces approches mthodologiques diffrentes mnent des rsultats disperss, qui ne sont pas
toujours comparables.
Nous avons choisi la mthode DPPH en raison de sa simplicit, rapidit, sensibilit et de sa
reproductibilit, mais aussi parce que les mesures IC50 exprimes en mg/mL sont comparables
entre elles et non pas seulement celle dune rfrence.

125

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

III.4. Evaluation de lactivit antibactrienne des huiles essentielles


La dcomposition des denres alimentaires est un problme srieux en termes de scurit
sanitaire, de valeur nutritive et de perte conomique pour lindustrie agroalimentaire. Depuis
lantiquit, les aliments ont toujours t prservs par chauffage, schage, refroidissement ou
fermentation. Depuis quelques annes, les conservateurs alimentaires synthtiques sont
devenus largement utiliss et des techniques ont t dveloppes pour augmenter la dure de
vie des produits. Cependant des conservateurs chimiques synthtiques, comme le benzoate,
les nitrites et les sulfites posent des problmes en termes de scurit et de sant humaine. La
recherche de nouveaux agents antibactriens dorigine naturelle soriente alors de plus en plus
vers les acides organiques, les huiles essentielles ou bien les extraits vgtaux. Les plantes
restent la source la plus commune d'agents antimicrobiens. Leur utilisation comme remdes
traditionnels est la plus populaire pour 80 % de la population mondiale. En Asie, Amrique
Latine et Afrique, plus de 35000 espces de plantes sont utilises des fins mdicinales. Les
huiles essentielles, les pices ainsi que les plantes mdicinales sont connues depuis des sicles
pour leur activit biologique, en particulier antifongique, antibactrienne et antioxydante. Ces
proprits dpendent du chmotype de la plante qui dtermine la composition chimique de ses
propres substances de rserve (Rauha et al., 2000). Ces dernires annes, les laboratoires
pharmaceutiques ont beaucoup investi dans le dveloppement dextraits de produits naturels
base de plantes pour contrecarrer la rsistance des microorganismes pathognes vis--vis
dagents antimicrobiens classiques.
Plusieurs tudes concernant les proprits antimicrobiennes des extraits de plantes, que ce soit
dans un systme modle ou dans un produit commercialis peuvent tre trouves dans la
littrature. Par exemple, Hao et al. en 1998 ont tudi lefficacit dextraits de plantes dans
linhibition de lactivit pathogne de Aeromonas hydrophilia et Listeria monocytogenes dans
les volailles cuisines et rfrigres (Hao et al., 1998). Friedman et al. en 2002 eux, ont tudi
lactivit antibactrienne du thym, de lorigan et de la cannelle, vis--vis dEscherichia coli.
Ils ont attribu lactivit antibactrienne de ces pices la prsence du thymol, du carvacrol,
du cinnamaldehyde, de leugnol, du graniol, du citral et du mthyle chavicol (Friedman et
al., 2002). Les terpnes, para-cymne et gamma-terpinne qui sont abondants dans la
composition chimique de lhuile de Thym nont cependant pas deffet contre la Salmonella
typhimurium.
Jusqu prsent, il nexiste pas dtude qui puisse nous donner une ide claire et prcise sur le
mode daction des HE. Etant donn la complexit de leur composition chimique, tout laisse

126

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

penser que ce mode daction est assez complexe et difficile cerner du point de vue
molculaire. Il est trs probable que chacun des constituants des HE ait son propre mcanisme
daction.
Shapiro et al. en 1994 ont dmontr que le thymol inhibe la voie de gnration de lATP
(adnosine tri-phosphate) (Shapiro et al., 1994). Ulte et al. en 2000 ont montr que le
carvacrol provoque galement un effet inhibiteur chez Bacillus cereus de lATP intracellulaire
(Ulte et al., 2000), comme dans le cas du thymol. Une rduction du potentiel membranaire et
du pH intracellulaire impacte sur le flux de potassium (intra et extracellulaire) qui
endommage la membrane cytoplasmique.
Lobjectif de cette dernire tude prsent dans ce chapitre est dvaluer lactivit
antimicrobienne des cinq huiles essentielles via deux mthodes diffrentes. La premire est la
mthode de diffusion sur Agar. Le taux defficacit de lHE vis--vis de chacune des bactries
utilises est alors mesur par le diamtre dinhibition. La deuxime mthode est la Plaque de
Microtitrage qui permet de calculer la concentration minimale inhibitrice (CMI) en huile
essentielle ncessaire pour inhiber 50% des bactries.
III.4.1. Evaluation de lactivit antibactrienne en utilisant la mthode de diffusion sur
Agar
Neuf bactries pathognes, cinq Gram positif, Bacillus subtilus, Bacilus cereus,
Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis et quatre Gram ngatif, savoir
Salmonella typhymurium, Salmonella typhymurium D338, Salmonella enteritidis, Salmonella
agona et Escherichia coli, ont t utilises dans cette tude. Lactivit antibactrienne a t
value par la mthode de diffusion sur agar.
10 L de solution mthanolique dHE 1,0 % et 0,5 % ont t ajouts dans les puits dagar.
Le mthanol pur a t utilis comme un contrle dans des chantillons blancs. Aprs
incubation, les diamtres d'inhibition ont t mesurs au moyen dun pied coulisse avec une
exactitude de 0,1 mm. L'activit antibactrienne a t calcule en une moyenne de trois
rptitions, pour chaque HE et pour chaque bactrie. Le protocole ainsi que les diffrentes
quantits sont dcrites en dtail dans la partie exprimentale (cf. VI.1).

127

Tableau 17: Activit antibactrienne des huiles essentielles mesure diffrentes concentrations et exprime en diamtre d'inhibition

M. didyma

Bactries

C. grandiflora

A. millefolium

M. odorata

T. balsamita

Antibiotique

1%

0,5%

1%

0,5%

1%

0.5%

1%

0,5%

1%

0,5%

DI ET

DI ET

DI ET

DI ET

DI ET

DI ET

DI ET

DI ET

DI ET

DI ET

sensi-disc

Bacillus subtilis

16,5 0,1

12,8 0,2

19,1 0,1

8,5 0,2

11.0 0,2

8.6 0,1

9,2 0,2

8,5 0,2

10,2 0,1

8,2 0,1

16,8 0,1

Bacillus cereus

40 0,0

13,1 0,1

9,8 0,2

10,6 0,3

13.6 0,2

10.7 0,2

10,6 0,5

9,9 0,1

11,4 0,1

8,8 0,2

29,0 0,2

13,1 0,1

10,2 0,3

9,7 0,3

na

12.8 0,1

8.8 0,2

8,8 0,2

na

9 0,2

na

21,0 0,3

14,7 0,2

11,5 0,3

10 0,5

na

na

na

9,1 0,3

na

8,5 0,2

na

25,8 0,1

15 0,3

11 0,2

8,9 0,2

na

9.2 0,2

na

8,1 0,3

na

8,4 0,2

na

31,2 0,3

D338

16,2 0,2

12,2 0,3

9,3 0,2

8,8 0,4

na

na

9 0,5

na

9,7 0,1

na

34,0 0,1

Salmonella enteritidis

15,2 0,1

11,5 0,2

10,1 0,4

9,1 0,1

na

na

8,1 0,5

na

8,9 0,1

na

32,2 0,3

Salmonella agona

13,8 0,3

10,7 0,2

8,4 0,3

na

10.4 0,4

9.1 0,3

na

na

na

na

20,8 0,3

Esherichia coli

18,9 0,4

14,4 0,4

10,3 0,1

na

na

na

10,2 0,4

na

9,7 0,2

na

26,4 0,2

Staphylococcus aureus
Staphylococcus
epidermidis
Salmonella typhimurium
Salmonella typhymurium

DI : Diamtre dinhibition en mm, ET : ecartype, na : non active

128

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
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Un disque d'antibiotique de rfrence appropri a t appliqu sur chaque boite de ptri


(ceftazidine/ l'acide clavulanique, 30/10 g; BBL, CAZ/CLA, 231753); ces disques ont servi
de contrle positif efficace contre toutes les espces bactriennes utilises dans ltude.
L'activit antimicrobienne des solutions mthanoliques d'HE a t value in vitro contre ces
neuf espces bactriennes (Tableau 17). Les bactries Gram positif ont t plus sensibles
que celles Gram ngatif, particulirement Bacillus cereus, qui tait l'espce la plus sensible
vis--vis de lHE de M. didyma. Cette dernire, a montr une efficacit leve contre toutes
les cultures microbiennes pour une concentration de 1%. Trs probablement le pourcentage
lev de thymol dans la composition chimique de lHE de M. didyma a t le facteur
favorable son activit antimicrobienne. Ces rsultats sont en accord avec ceux
prcdemment publis sur les huiles essentielles riches en thymol, comme Thymus vulgaris
aux proprits antimicrobiennes reconnues fortes contre des bactries pathognes diverses
(Loziene et al., 2007).
Les HEs de T. balsamita et M. odorata 0.5 % possdent les activits antimicrobiennes les
plus faibles contre la majorit des bactries en comparaison avec les autres huiles appliques
la mme concentration. Elles montrent une activit antibactrienne seulement contre Bacillus
cereus et Bacillus subtilus.
Lhuile essentielle de C. grandiflora a t la plus efficace contre Bacillus subtilus, cette huile
sest montre plus active que lantibiotique utilis.
La majorit des huiles essentielles tudies, prsentent une faible activit inhibitrice marque
sur les deux espces de Salmonella.
L'effet inhibiteur de lHE de M. didyma (1%) contre Escherichia coli, Salmonella enteritidis,
Salmonella typhymurium et Staphylococcus epidermidis tait aussi bas que l'effet de
l'antibiotique de rfrence; cependant, dans le cas de Bacillus subtilus, l'effet de lHE de M.
didyma tait quivalent celui de lantibiotique.
Lactivit antimicrobienne de lhuile essentielle dA. millefolium a t plus efficace contre
Staphylococcus aureus et Bacillus cereus. Par contre, lhuile essentielle dA. millefolium nest
pas active vis--vis dEscherichia coli. Ces rsultats sont trs cohrents avec la littrature et
en particulier avec les travaux de Candan et al (Candan et al., 2003).

129

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

III.4.2. Evaluation de lactivit antibactrienne en utilisant la mthode de plaque de


micro titrage.
Trois bactries pathognes ont t utilises dans cette tude, deux bactries Gram Positif,
Bacilus cereus, et Staphylococcus aureus et une Gram ngatif, Salmonella typhimurium.
Les huiles essentielles ont t dissoutes au 1/1000 (v/v) dans de lthanol. Des plaques de
micro-titrage ont t utilises pour la dtermination de la CMI. La procdure exprimentale
est dcrite en dtail dans la partie exprimentale (cf. VI.2 ).
Le tableau 18 montre que lhuile essentielle de C. grandiflora est la plus efficace contre
Bacillus cereus (CMI : 0,08 g/mL), rsultat cohrent avec les expriences de diffusion sur
Agar. Par contre Bacillus cereus est la bactrie la plus rsistante vis--vis des quatre autres
huiles essentielles. Salmonella typhimurium est la moins sensible parmi les trois bactries. Les
activits antibactriennes des cinq huiles essentielles vis--vis de Salmonella sont presque
quivalentes, mise part lhuile essentielle de M. didyma qui est lgrement plus forte (CMI :
0,12 g/mL). La rsistance de Staphylococcus aureus est plus forte vis--vis de lHE de T.
balsamita comparativement aux quatre autres huiles essentielles.
Tableau 18: Concentration inhibitrice minimale (CMI) des huiles essentielles

Matriels

Bactrie/ CMI, g/mL


Salmonella typhimurium

Staphylococcus

Bacillus cereus

ATCC14028

aureus ATCC25923

ATCC10876

A. millefolium

0.15

0.12

0.31

T. balsamita

0.15

0.31

0.31

M. odorata

0.15

0.15

0.15

M. didyma

0.12

0.12

0.31

C. grandiflora

0.15

0.15

0.08

Ethanol

0.31

0.47

0.31

130

Chapitre II : Caractrisation des composs organiques volatils de cinq plantes aromatiques mdivales ;
Evaluation de lactivit biologique des huiles essentielles et des rsidus dhydrodistillation

En comparant nos travaux avec ceux de Yousefzadi et al. dans lesquels la CMI de lhuile
essentielle de T. balsamita a t dtermine vis--vis de Staphylococcus aureus, on remarque
que notre espce est bien plus efficace vis--vis de cette bactrie que celle tudie par ces
auteurs (CMI : 7,5 g/mL) (Yousefzadi et al., 2009). Lespce Iranienne tudie dans ces
travaux possde la carvone comme compos majoritaire alors que dans notre cas, cest la
bta-thujone.
On remarque que lespce sauvage dorigine franaise, fournit une huile essentielle beaucoup
plus efficace vis--vis des deux souches bactriennes, Staphylococcus aureus (CMI : 0,117
g/mL) et Bacillus cereus (CMI : 0,313 g/mL), par rapport lespce sauvage dorigine
turque tudie par Candan et al. o la concentration inhibitrice minimale de cette espce vis-vis de ces deux bactries est gale 72mg/mL (Candan et al., 2003).

Ces travaux montrent que les huiles essentielles des plantes aromatiques oublies
slectionnes dans la rgion de Midi-Pyrnes possdent des activits antioxydantes non
ngligeables ainsi que des activits antibactriennes remarquables vis--vis de nombreuses
bactries pathognes. Ces rsultats confirment lutilisation potentielle de ces 5 huiles
essentielles dans le domaine agroalimentaire pour la conservation des aliments. Nanmoins, il
faudra prendre en compte limpact organoleptique que pourraient amener les proprits
aromatiques marques de ces huiles sur le produit final.

131

Chapitre III : Mise en place dune mthodologie instrumentalise de caractrisation rapide des huiles essentielles
natives ; Application pr-industrielle laromatisation des huiles vgtales par les plantes aromatiques

Chapitre III :
Mise en place dune mthodologie instrumentalise de
caractrisation rapide des huiles essentielles natives ;
Application pr-industrielle laromatisation des huiles
vgtales par les plantes aromatiques

132

Chapitre III : Mise en place dune mthodologie instrumentalise de caractrisation rapide des huiles essentielles
natives ; Application pr-industrielle laromatisation des huiles vgtales par les plantes aromatiques

133

Chapitre III : Mise en place dune mthodologie instrumentalise de caractrisation rapide des huiles essentielles
natives ; Application pr-industrielle laromatisation des huiles vgtales par les plantes aromatiques

Rsum :
Ce chapitre est compos de deux parties distinctes. La premire partie (Partie I) concerne
lexploitation de deux voies analytiques de COVs pour contrecarrer la faible disponibilit de
la matire vgtale, et accder une valuation rapide du potentiel aromatique de la plante.
Pour cela, deux approches ont t envisages. La premire concerne lutilisation dun
chantillonnage classique coupl un dtecteur forte sensibilit comme la chromatographie
bidimensionnelle et la seconde concerne un chantillonnage spcifique ddi lanalyse des
effluves mis par le froissement du vgtal dans un systme dnom Crushing Finger
Device , CFD.
La deuxime partie de ce chapitre (Partie II) est lapplication dans le domaine
agroalimentaire des 5 plantes une tude de faisabilit daromatisation de lhuile de tournesol
par macration.

134

Chapitre III : Mise en place dune mthodologie instrumentalise de caractrisation rapide des
huiles essentielles natives

Partie I. Voie analytique


Introduction :
Lors de ltude de la composition chimique des huiles essentielles des plantes
aromatiques oublies et lvaluation de leurs activits biologiques, nous avons souvent t
confront au problme de raret. Ainsi donc, nous devions faire face la difficult
dapprovisionnement en plantes, except pour Achillea millefolium qui a t rcolte sous sa
forme sauvage Toulouse. Nous avions des problmes pour obtenir des quantits suffisantes
de matire vgtale ncessaire afin de pouvoir faire non seulement les exprimentations
dhydrodistillation mais aussi les tests de bio-activit. Suite ce problme, nous avons dcid
de dvelopper deux approches analytiques A et B. La premire (A) est base sur une
technique dchantillonnage classique (SPME) couple un systme de sparation/dtection
sophistiqu (CPG-2D/TOF), la deuxime (B) quant elle fait appel un systme
dchantillonnage sophistiqu (CFD-DHS) coupl un systme de sparation/dtection
classique (CPG-SM).
Les plantes huiles essentielles dsignent des vgtaux odorants utiliss en parfumerie,
cosmtique, culinaire et en mdecine douce dont les extraits aromatiques peuvent tre obtenus
par entranement la vapeur ou par hydrodistillation de leurs feuilles ou de leurs fleurs. Cette
phase d'extraction provoque la destruction par clatement des vsicules de stockage
surfaciques qui contiennent les huiles essentielle ; nous avons imagin quune pr-valuation
du potentiel aromatique des plantes pourrait tre ralise en mimant le froissement de la
feuille entre les doigts pour librer les substances volatiles qui seront analyses par "sniffing".
Nous nous sommes donc intress la mise au point d'un systme instrumental
d'valuation rapide du potentiel aromatique de plantes huile essentielle bas sur l'analyse des
effluves (HeadSpace). Un appareillage novateur dnomm "Crushing Finger Device" (CFD)
(EL Kalamouni et al., 2010) bas sur le concept de "Scratch'n Sniff" a t mis au point afin de
mimer instrumentalement le froissement de la feuille entre les doigts suivi du pigeage des
composs volatils odorants mis en vue de leur analyse chromatographique ultrieure.
Tanacetum balsamita a t choisie comme plante modle pour la mise au point du CFD.
Dans ce chapitre nous avons dune part procd la comparaison du profil
chromatographique de l'huile essentielle de feuilles fraches de la plante modle, obtenue par
hydrodistillation avec celui des effluves de feuilles fraches et natives extraites par CFD et

135

Chapitre III : Mise en place dune mthodologie instrumentalise de caractrisation rapide des
huiles essentielles natives

analys dautre part les effluves de feuilles fraches entires, concentres par SPME puis
analyses en CPG-2D/TOF-SM.

(A) Premire approche analytique base sur une technique


dchantillonnage classique couple un systme de sparation/dtection
sophistiqu

I. Analyses des COVs mis par les feuilles par lintermdiaire de la CPG
bidimensionnelle.
La premire approche aborde dans ce chapitre, est lutilisation dune technique
dextraction en Headspace classique (SPME), couple un systme de sparation/dtection
sophistiqu (CPG-2D/TOF).
I.1. Principe de la CPG bidimensionnelle
La CPG bidimensionnelle est une technique de sparation de chromatographie en phase
gazeuse dans laquelle tous les composs lus dune premire colonne sont successivement
soumis une sparation dans une deuxime colonne de slectivit diffrente. Les deux
colonnes sont connectes en srie au moyen dun modulateur (figure 32) qui chantillonne
leffluent de la premire colonne sous forme dimpulsions chimiques et les transfre en
continu vers la deuxime colonne. La dure requise pour effectuer cette opration, appele
priode de modulation, impose une deuxime sparation trs rapide (quelques secondes). Afin
que chaque impulsion soit spare dans un temps inferieur la priode de modulation, on
choisit une colonne courte et de faible diamtre interne (typiquement 1 m 0,1 mm d.i.). Le
pic dlution issu de la premire colonne (A) est chantillonn par le modulateur. Chaque
fraction est focalise puis injecte en continu dans la deuxime colonne. Le signal dtect
correspond donc une succession de sparations ralises dans la deuxime dimension (B). En
accolant ces chromatogrammes, le signal est reconstruit dans un plan de rtention deux
dimensions qui sapparente une cartographie de lchantillon dans laquelle lintensit des
pics chromatographiques est traduite par une dgradation de la couleur.
Pour que la sparation CPG-2D soit effective, deux contraintes sont fixes pour le choix
de la priode de modulation. On considre quun minimum de trois chantillonnages par pic
lu de la premire dimension est ncessaire. Par ailleurs, si le temps de rtention dun
136

Chapitre III : Mise en place dune mthodologie instrumentalise de caractrisation rapide des
huiles essentielles natives

compos dans la seconde dimension est suprieur la priode de modulation, alors son pic
dlution appartient au cycle(s) de modulation suivant(s), ce qui entraine une mauvaise
reprsentation du chromatogramme 2D conduisant a des problmes didentification et a une
baisse de la rsolution.

Figure 32: Schma reprsentatif du modulateur d'une CPD-2D

I.1.1. Sparations orthogonales


La sparation est dite orthogonale si les mcanismes de rtention dans chaque dimension
sont indpendants lun de lautre. Cette condition est ralise par la mise en uvre de
colonnes dont les phases stationnaires sont de natures chimiques diffrentes pour une
sparation en programmation de temprature. Gnralement, les systmes de CPG-2D
associent une premire colonne de type apolaire (dimethylpolysiloxane) une seconde
colonne de type polaire (polyethyleneglycol, phenylmethylpolysiloxane ou cyclodextrine). La
polarite dune phase stationnaire dsigne sa facult dvelopper des interactions spcifiques
par effets lectroniques, striques ou chiraux. En CPG, le facteur de rtention dun solut est
inversement proportionnel sa tension de vapeur. Si la premire sparation est ralise dans
une colonne de type apolaire, les coefficients dactivit sont tous proches de lunit car il ny
a pas dinteractions spcifiques. La rtention est gouverne uniquement par la tension de
vapeur et les composs sont spars par temprature dbullition croissante. Dans la seconde
137

Chapitre III : Mise en place dune mthodologie instrumentalise de caractrisation rapide des
huiles essentielles natives

colonne, polaire, la sparation est trs rapide (< 10 secondes) et a donc lieu dans des
conditions pratiquement isothermes, compte tenu de la faible rampe de temprature (~
2C/min). Les soluts injects dans la deuxime colonne tant lus de la premire dimension
la mme temprature (TC), leur temprature dbullition na plus dinfluence sur la
deuxime sparation et leur rtention est donc uniquement gouverne par leur coefficient
dactivit. Le chromatogramme est donc structur selon les proprits physico-chimiques des
constituants du mlange sparer : tension de vapeur dans un premier temps puis la polarit.
Ainsi, lorganisation en bandes dlution spcifiques chaque famille chimique facilite
lidentification des composs par la combinaison de deux informations indpendantes.
I.2. Matriels et mthodes
I.2.1. Echantillons
Les feuilles de Tanacetum balsamita utilises pendant le pigeage en mode HeadSpace
semi statique ont t coupes dlicatement partir des pots obtenus pendant la priode de
fvrier 2008.
I.2.2. Extraction des COV par SPME
Une feuille de Tanacetum balsamita a t mise dans un vial serti avec un septum en
tflon. Lclatement des vsicules a t induit par agitation par lintermdiaire dun barreau
aimant. Les COVs mis par la feuille ont t pigs pendant 2 minutes par lintermdiaire de
la fibre SPME de type Carb/PDMS (75m).
I.2.3. Analyses chromatographiques des COVs par CPG-2D
Les analyses des COVs pigs par la fibre SPME ont t faites par un CPG-2D/TOF
Agilent 6890, aprs 2 minutes de dsorption de la fibre la temprature de linjecteur
(280C). Le gaz vecteur est lhlium (Dbit 1ml/min) et la programmation de temprature
pour la premire colonne (DB-5, 30m, 320m de diamtre intrieur et de 1m dpaisseur de
film) est la suivante : 40C durant 5 minutes, un gradient de 4C/min jusqu'au 230C et 10
minutes disotherme 230C. La programmation de temprature pour la seconde colonne
(DB-17 2.290m de longueur, 178 m de diamtre intrieur et de 0.30 m dpaisseur) quant
elle est de 55C durant 5 minutes avec un gradient de 4C/min jusqu'au 245C et 10 minutes
en isotherme 245C.

138

Chapitre III : Mise en place dune mthodologie instrumentalise de caractrisation rapide des
huiles essentielles natives

II. Rsultats de lextraction et de lanalyse des COVs des feuilles de


Tanacetum balsamita par SPME/CPG-2D
Lanalyse par CPG-2D de lextrait SPME des feuilles de la Balsamite conduit
plusieurs milliers de composs organiques volatils, environ 4000 dans le cas dune feuille
crase et 2000 dans le cas dune feuille entire non crase (voir figure 34 et 35).
La coloration rouge dans la figure 33, rvle la concentration de la tanacetone. La CPG2D permet de dtecter les composs qui possdent les mmes temps de rtention en CPG
classiques (mmes tempratures dbullition) et qui par la suite seront spars sous une
deuxime dimension par ordre de polarit comme cest le cas pour le thymol et de lactate
bornyle. Ces deux derniers composs obtenus ltat de trace dans le cas de la sparation sur
une CPG, ont t dtects et spars en CPG-2D.

Figure 33: Coupe en 3D du profil chomatographique des effluves mis d'une feuille de Balsamite non crase

Lavantage de la CPG-2D, est davoir une facilit de classification aise par famille chimique,
par ions communs mais aussi une diffrenciation en une seule tape de composs, mme
ltat de traces, ayant les mmes points dbullition mais des polarits diffrentes.

139

Monoterpnes

Sesquiterpnes

Figure 34: profil chromatographique en CPG-2D des effluves mis partir d'une feuille de Balsamite crase

140

Figure 35: Profil chromatographique en CPG-2D des effluves mis partir d'une feuille de Balsamite non crase

141

Chapitre III : Mise en place dune mthodologie instrumentalise de caractrisation rapide des
huiles essentielles natives

(B) Deuxime approche analytique base sur un systme dchantillonnage


coupl un systme de sparation/dtection classique
I. Description du systme
Dans un premier temps, les essais ont t mis au point sur un systme de simulateur de
mastication commercial, (Mouth model equipment) en mode DHM (Dynamic Headspace and
Mastication) (Wageningen University and research center, Dept. Agrotechnology and Food
Sciences), Le racteur est une cellule en verre double enveloppe permettant une rgulation
de la temprature (voir figure 36). La cellule peut tre balaye par un gaz vecteur (N2). Le gaz
N2 entre via une connexion GL14 en bas du systme. Les COVs mis durant le froissement
des feuilles et lclatement des vsicules sont entrans par le gaz inerte et piges sur le
pige tenax.
Le mouvement du piston lintrieur du systme, est rotatif et longitudinal, ce mouvement est
contrl par une unit dalimentation stabilise variable, compacte tension continue ayant
les caractristiques suivantes :
Tension de sortie ..0-30 Vdc
Courant de sortie...0-2,5A

76,8 rpm max

Afin dtudier l'huile essentielle native (quivalent l'odeur mise par la plante) et pour
que le dispositif puisse mimer le froissement des feuilles entre les doigts, la base du piston a
t modifie et dentele. Par explosion des vsicules de stockage situes sur la partie abaxiale
des feuilles, une valuation rapide du contenu en huile essentielle native avec seulement deux
ou trois feuilles peut tre effectue.

142

Chapitre III : Mise en place dune mthodologie instrumentalise de caractrisation rapide des
huiles essentiells natives

Figure 36: Stimulateur de mastication mode DHM (Wageningen University and Research Centre)

II. Comparaison du profil aromatique de lhuile essentielle de Tanacetum


balsamita et du profil CFD-DHS/GC de la plante
II.1. Matriel et Mthodes
II.1.1. Concentration des COV par Headspace dynamique
Deux feuilles fraches de Balsamite sont places dans le racteur du DHM thermostat
25C et balay par un courant dazote (100mL/min). Les feuilles sont ensuite froisses
pendant 5 minutes au moyen dun piston tte en tflon ayant un dplacement linaire et
rotatif. Les COV sont pigs par lintermdiaire dun pige Tenax situ dans la partie
suprieure du DHM (figure 36). 3 rplicatas ont t effectus.

143

Chapitre III : Mise en place dune mthodologie instrumentalise de caractrisation rapide des
huiles essentiells natives

II.1.2. Concentration des COV dune feuille non froisse par Headspace dynamique.
Le piston a t enlev du dispositif pour se retrouver en condition dHeadspace
dynamique. Des feuilles fraches ont t soigneusement places en vitant tous crasement
des tissus. La cellule est balaye par un courant dazote 100mL/min pendant 5 minutes et
thermo-state 25C. Ces expriences ont t reproduites trois fois.
II.1.3. Isolement de lhuile essentielle de Tanacetum balsamita
100g de feuilles ont t hydrodistilles pendant 3 heures 100C au moyen dun
hydrodistillateur de 6 litres. Une huile essentielle jaune a t obtenue avec un rendement de
0,53%. Ces expriences ont t reproduites trois fois.
II.1.4. Analyses chromatographiques des extraits
Les piges Tenax ont t analyss au moyen dun CPG-SM-DIF (Perkin Elmer Clarus
500) quip dun thermodsorbeur TurboMatrix TD et dune colonne capillaire en silice
fondue DB5 (0,25 mm x 30m, 0,25 m paisseur de film). Le gaz vecteur est de lhlium (1.3
mL/min) et la programmation de temprature: 30C durant 5 minutes, puis 5C/min jusqu'au
200C et 10 minutes 200C. Lidentification des composs est base sur les comparaisons
des indices de rtention exprimentaux et bibliographiques et des spectres de masse
exprimentaux et contenus dans les bases de donnes NIST 2005 et WILEY.
Le gamma-terpinne a t utilis comme un standard interne pour valuer la concentration de
composs organiques volatiles en g/Kg de matire sche mis dans le DHM. Les
concentrations des COVs ont t estimes par rapport ltalon interne. La courbe
dtalonnage a t effectue partir de 5 solutions mthanoliques de gamma-terpinne des
concentrations diffrentes (2100, 420, 84, 16,8 et 3,3 g/L). 1 mL de chaque solution prpare
a t directement inject par une seringue dans des piges Tenax. Les conditions de
thermodsorbtion et de lanalyse chromatographique taient identiques celles appliques
dans le cas des chantillons CFD-DHS/GC.
II.2. Rsultats de la comparaison entre une
hydrodistillation et une huile essentielle native

huile essentielle extraite

par

La composition de l'huile essentielle de Tanacetum balsamita de couleur jaune obtenue avec


un rendement de 0,53 % sur une base de poids sec de matire vgtale. La bta thujone

144

Chapitre III : Mise en place dune mthodologie instrumentalise de caractrisation rapide des
huiles essentiells natives

(tanacetone), est le compos principal tant dans l'huile essentielle (63,3 %) que dans le profil
de COVs mis des feuilles non froisses (82,5 %) et froisses (67,7 %). Le rendement de
COVS mis par les feuilles de costmary fraches augmente en suivant l'ordre suivant: DHM/
DHS > > DHS. La consquence du froissement des feuilles par DHM est l'explosion des
vsicules de stockage de lhuile essentielle et la libration des composs volatils principaux de
la plante dans le systme. La comparaison des profils chromatographiques de feuilles
froisses (figure 38) et de feuilles non froisses (figure 39) a montr une augmentation du
nombre de composs de notes de tte (4 20) (voir Tableau 19). Les composs volatils
majeurs mis pendant le froissement de feuilles par DHM taient le 1,8-cinole (21 %),
lalpha-thujone (3,3 %), le bta-terpinne (2,4 %), l'alpha-pinne (0,7 %), le gamma-terpinne
(0,5%), le bta-pinne (0,4 %), 3-mthyle hexanal (0,3 %), l'alpha-thujne (0,2 %), et le pmentha-1,4 (8)-dine (0,2 %). Dans le cas de l'huile essentielle, les composs majoritaires
taient le 1,8-cinole (27,5 %), lalpha thujone (4,2 %), germacrne-D (0,9 %), bta eudesmol
(0,4%), terpinol-4 (0,6 %), l'alpha terpinol (0,2 %), le gamma-terpinne (0,1 %) et le
bicyclogermacrne (0,1 %).

bta-thujone

alpha-thujone

1,8 cinole

Germacrne-D

Figure 37: Profil chromatographique de l'huile essentielle de Tanacetum balsamita obtenue par
hydrodistillation

Ces rsultats prliminaires ont montr que les profils chromatographiques de lhuile
essentielle (figure 37) et des composs volatils mis partir de feuilles froisses (figure 38) en

145

Chapitre III : Mise en place dune mthodologie instrumentalise de caractrisation rapide des
huiles essentiells natives

utilisant le DHM prsentent des similitudes au niveau des notes de tte et de cur ; par contre,
labsence des sesquiterpnes (notes de fond) a t bien marque.

Figure 38: Profil chromatographique des COVs des feuilles froisses de Tanacetum baslamita mis par
DHM

Figure 39: Profil chromatographique des COVs des feuilles non froisses de Tanacetum balsamita mis par
DHM

La bta thujone et le 1,8-cinole sont les composs majoritaires dans les deux extraits. Les
notes de fond sont diffrentes, ceci tant li la technique d'extraction utilise :
hydrodistillation ou espace de tte dynamique.

146

Chapitre III : Mise en place dune mthodologie instrumentalise de caractrisation rapide des
huiles essentiells natives

Tableau 19: Principaux composs organiques volatils identifis partir de l'huile essentielle, des feuilles
froisses et des feuilles non froisses de Tanacetum balsamita
Pics

IR

1
2
3
4
5
6
7

738
742
791
857
879
926
933

Composs Volatils

HE
(n=4)
%

DHSa
(n=3)
%

DHMb
(n=4)
%

DHMc
[c]
g/kg/5min

DHM
CVd

3-mthyl-hexanal
0.3
0.5
11
2-mthyl-1-butanol
0.1
0.2
23
1-octne
0.4
0.5
15
3-hexn-1-ol
0.3
0.4
34
1-butanol, actate, 3-mthyl
0.1
0.1
17
alpha-thujne
0.2
0.1
23
alpha-pinne
0.6
0.7
0.9
12
bicyclo[3.1.0]hex-2-ne, 48
944
0.1
0.1
18
mthylne-1-(1-mthylthyle)
9
950
camphne
0.1
0.2
7
10
973
bta-terpinne
1.7
2.4
3.7
26
11
978
bta-pinne
1.5
0.4
0.5
9
12
989
cis-pinne-3-ol
0.1
0.3
25
13
1004
actate-3-hexne-1-ol
0.4
0.3
22
14
1012
ni
0.2
0.6
21
15
1017
ortho-cymne
0.4
0.5
18
16
1023
para-cymne
tr
17
1031
1,8-cinole
21.3
4
27.5
12.6
21
18
1057
gamma-terpinne
0.1
0.5
0.6
13
19
1071
ni
0.3
20
1072
ni
0.2
21
1086
p-mentha-1,4(8)-dine
0.2
0.2
19
acide butanoique, 2-mthyl22
1100
0.2
0.3
49
3mthyl butyl ester
23
1107
alpha -thujone
4.9
9
4.2
1.1
3.3
24
1121
bta -thujone
103.8
27
63.3
82.5
67.7
25
1166
4-terpinol
0.6
26
1185
alpha-terpinol
0.2
27
1282
actate de sabinyle
tr
28
1476
germacrne-D
0.9
29
1489
bicyclo-germacrne
0.1
30
1650
bta-eudesmol
0.4
ni : non identifi , acomposs volatils mis des feuilles non froisses , bcomposs volatils mis des feuilles
froisses par DHM, cconcentrations des COVs mis en g/Kg/5min calcules par rapport ltalon externe
(gamma terpinne), dcoefficient de variation %

Cette tude prliminaire a permis de dmontrer que le systme DHM modifi possde de
relles potentialits pour une pr-valuation rapide du potentiel aromatique de plantes huiles
essentielles.

147

Chapitre III : Mise en place dune mthodologie instrumentalise de caractrisation rapide des
huiles essentiells natives

III. Conception dune cellule dextraction ddie CFD couple un


systme de pigeage Headspace dynamique et semi-statique
Suite aux rsultats positifs obtenus par le systme DHM modifi, deux cellules
dextraction CFD ont t spcifiquement conues pour ces analyses. La premire est
couple un systme de Headspace semi statique ddi, pour concentrer les effluves mis par
le froissement des feuilles sur une fibre SPME, la deuxime est couple un systme de
Headspace dynamique. Dans les deux cas, la position des piges ou des fibres SPME est plus
proche de la chambre de froissement que dans le systme DHM modifi (voir figure 40).
Dans ce travail, nous avons compar le profil chromatographique de lhuile essentielle des
feuilles de Th dAubrac (Calamintha grandiflora) obtenue par hydrodistillation non
seulement avec celui des effluves de feuilles fraches traites et non traites par CFD,
concentres sur pige tenax puis analyses en CPG-SM mais aussi avec celui des effluves de
feuilles fraches entires extraites par SPME (PDMS, CAR/PDMS, DVB/CAR/PDMS).
Les techniques dadsorption ou dabsorption sont trs utilises pour lanalyse des
COVs. Elles permettent lextraction et la concentration des composs volatils sans solvant.
Elles sont bases sur la partition des composs organiques entre une phase aqueuse ou
gazeuse et un film polymrique de faible paisseur.

Figure 40: schma du CFD, le prlvement des COVs est effectu au niveau de la chambre de froissement
(a) par une pige tenax ou (b) par une fibre SPME

148

Chapitre III : Mise en place dune mthodologie instrumentalise de caractrisation rapide des
huiles essentiells natives

IV. Application du systme CFD lanalyse de la fraction volatile de


Calamintha grandiflora
IV.1. Analyses chromatographiques
Les piges tenax ont t dsorbs et analyss au moyen dun CPG-SM-FID (Perkin Elmer
Clarus 500) quip dun thermodsorbeur TurboMatrix TD et dune colonne capillaire en
silice fondue DB5 (0,25 mm x 30m, 0,25 m paisseur de film). Tandis que les fibres SPME
ont t analyses au moyen dun Varian CP 3800 CPG-FID, et un Agilent 5973 Network
CPG-SM. Le gaz vecteur est de lhlium (1.3 mL/min) et la programmation de temprature:
30C pendant 5 minutes, puis 5C/min jusqu'au 200C et 10 minutes disotherme 200C.
Lidentification des composs est base sur les comparaisons des indices de rtention
exprimentaux et bibliographiques et des spectres de masse exprimentaux et contenus dans
les bases de donnes NIST 2005 et WILEY

IV.2. Optimisation des conditions dextractions par CFD-SPME ou CFD-DHS


Trois paramtres ont t optimiss durant ce travail, la nature de la fibre SPME, le nombre de
coups de froissement des feuilles ainsi que le temps de pigeage.

IV.2.1. Choix des fibres SPME : cintique dadsorption et dabsorption de la pulegone


Pour tester le systme CFD sur la plante modle, Th dAubrac, nous avons utilis 3 types de
fibres SPME (Carb, Carb/PDMS et DVB/Carb/PDMS), afin de savoir laquelle est la plus
efficace ou la plus adapte aux composs organiques volatils mis lors du froissement des
feuilles de la plante.

149

Chapitre III : Mise en place dune mthodologie instrumentalise de caractrisation rapide des
huiles essentiells natives

8.E+05

PDMS

7.E+05

CAR/PDMS

air du pic

6.E+05

DVB/CAR/PDMS

5.E+05
4.E+05
3.E+05
2.E+05
1.E+05
0.E+00
0

10

15

20

Temps de pigeage (min)

Figure 41: Aire du pic de la pulegone en fonction du temps de pigeage et de la nature de la fibre SPME
20C

Les courbes dabsorption (cas du PDMS) ou dadsorption et dabsorption (CAR/PDMS et


DVB/CAR/PDMS) obtenues par les diffrentes fibres en fonction de laire de la pulgone
montrent quau bout de 10 minutes les fibres PDMS et DVB/CAR/PDMS atteignent leur seuil
de saturation, alors quil faut 15 minutes pour la fibre CAR/PDMS. On saperoit que pour un
temps de pigeage de 10 minutes la fibre DVB/CAR/PDMS a une capacit dabsorption plus
leve que les deux autres fibres.
Daprs la figure 41, on peut remarquer que la fibre SPME possdant trois phases tait la plus
efficace vis--vis de la pulgone, mais aussi que le temps optimum de pigeage pour cette
fibre est de 10 minutes. Cette fibre sera choisie pour la concentration des COVs mis par le
froissement des feuilles.

150

Chapitre III : Mise en place dune mthodologie instrumentalise de caractrisation rapide des
huiles essentiells natives

IV.2.2. Optimisation du froissement du vgtal


Un couple de feuilles de Calamintha grandiflora a t dpos dlicatement dans la cellule,
la fibre SPME est mont au dessus de la cellule (en position ferm), aprs froissement par 0,
10 et 15 coups de piston, la fibre SPME est mise en position ouverte pour piger dans la
chambre de prlvement pendant 10 minutes temprature ambiante. La fibre
DVB/Carb/PDMS est la plus efficace (figure 42).

1.6E+07
1.4E+07
1.2E+07
1.0E+07
8.0E+06
6.0E+06
4.0E+06

DVB/Carb/PDMS

2.0E+06

PDMS

0.0E+00
0 coups

Carb/PDMS
10 coups
15 coups

Figure 42: concentration en pulegone en fonction de la nature de fibre utilise et du nombre de coups de
piston effectus

IV.2.3. Observation microscopique au niveau du limbe des feuilles

Figure 43: Micrographie (x400) dun fragment de limbe de la feuille de Calamintha grandiflora froisse
gauche et non froisse droite.

151

Chapitre III : Mise en place dune mthodologie instrumentalise de caractrisation rapide des
huiles essentiells natives

Daprs les figures 43, on peut remarquer que suite au traitement des feuilles de la
Calamintha grandiflora par le CFD, les poils scrteurs ainsi que les vsicules ont t clats,
favorisant ainsi la libration des COVs dans la cellule du CFD.

IV.2.4. Comparaison des fractions volatiles extraites par CFD-SPME et CFD-DHS et de


lhuile essentielle
Quarante COVs ont t identifis dans lhuile essentielle du Th dAubrac. Ils constituent 93
% de la composition chimique totale de cette huile. Les principaux composs de lhuile
essentielle du Th dAubrac, obtenue par hydrodistillation des tiges et de feuilles sont
prsents dans le Tableau 20. Lisomenthone (34,07%), le noisomenthol (19,83%), la
pulgone (19,54%), lisomenthol (7,65%), La menthone (4,40%), le germacrne-D (3,55%),
le bicyclogermacrne (1,78%) et le caryophyllne-Z (1,99%) sont les molcules les plus
abondantes.
Tableau 20: Comparaison entre la composition chimique de lhuile essentielle extraite par
hydrodistillation et celle de lhuile essentielle native extraite par CFD-SPME et CFD-DHS

Pics

Composs

IRa

%b HE

%c CFD-SPME

%d CFD-DHS

hexanal

853

2.53

cis-3-hexnol

870

0.18

alpha-thujne

930

1.46

alpha-pinne

931

0,03

2.38

3.32

sabinne

970

0,19

4.17

6.12

bta-pinne

976

0,21

2.06

4.02

bta-myrcne

987

0,09

2.07

3.56

3-octanol

995

0,25

0.54

0.89

limonne

1027

0,71

0.86

1.37

10

bta-trans-ocimne

1032

0,08

11

terpinolne

1068

0,03

1.37

12

linalol

1100

0,04

13

para-Menth-8-en-3-ol

1148

0,24

14

menthone

1155

4,40

152

0.25

2.57

Chapitre III : Mise en place dune mthodologie instrumentalise de caractrisation rapide des
huiles essentiells natives

15

isomenthone

1168

34,07

25.63

27.81

16

isomenthol

1181

7,65

5.75

5.38

17

no-isomenthol

1191

19,83

27.94

19.58

18

pulgone

1240

19,54

20.73

22.06

19

pipritone

1251

1,28

0.38

20

ni

1284

0,03

21

actate disomenthyle

1301

0,03

22

ni

1335

0,14

23

copane

1370

0,04

24

bta-bourbonne

1378

0,13

25

caryophyllne

1413

1,99

0.67

1.66

26

santalne

1448

0,37

27

germacrne-D

1474

3,55

0.58

1.33

28

bicyclogermacrne

1487

1,78

0.32

0.70

29

alpha-Farnesne

1499

0,11

30

gamma-cadinne

1510

0,12

0.13

31

actate disognol

1568

0,93

32

oxyde de caryophyllne

1572

0,43

33

ni

1599

0,06

34

ni

1605

0,28

35

alpha-cadinol

1646

0,20

36

ni

1781

0,15

37

ni

1786

0,07

38

ni

1790

0,08

39

ni

1802

0,16

40

ni

1806

0,05

41

ni

1810

0,18

42

ni

1830

0,04

43

ni

1850

0,14

44

ni

1860

0,17

ni : non identifi, a indice de rtention calcul partir des n-alcanes C5-C18, b % des composs volatils de lhuile
essentielle, c % des COVs mis par le froissement des feuilles et concentrs sur la fibre SPME
(DVB/Carb/PDMS), d % des COVs mis par le froissement des feuilles et concentrs sur un pige Tenax

153

Chapitre III : Mise en place dune mthodologie instrumentalise de caractrisation rapide des
huiles essentiells natives

Parmi les 40 composs organiques volatils identifis dans lhuile essentielle extraite par
hydrodistillation, 21 composs ont t identifis dans le cas de CFD-SPME tandis que 15
composs ont t identifis dans le cas de CFD-DHS. On remarque la prsence de composs
trs volatils, comme lhexanal, le cis-3-hexnol et lalpha thujene, ces trois derniers composs
nont pas t identifis dans lhuile essentielle. Daprs le tableau 20 on peut remarquer
labondance des notes de tte ainsi que les composs majoritaires de notes de cur. Labsence
des sesquiterpnes (notes de fond) a t bien marque dans le cas des huiles essentielles
natives.

Conclusion Partie I
Le "Crushing Finger Device" (CFD) montre de relles potentialits pour une valuation
qualitative rapide des huiles essentielles contenues dans les feuilles de plantes aromatiques.
La richesse des rsultats obtenus par SPME/CPG-2D permet dtablir un Finger Print complet
des COV mis par les feuilles mais lutilisation complexe et coteuse de cette technologie
limite son domaine dapplication dans la recherche.

154

Chapitre III : Application pr-industrielle laromatisation des huiles vgtales par les plantes
aromatiques

Partie II : Approche prindustrielle de laromatisation des huiles vgtales


par les plantes aromatiques

Introduction
Laromatisation des huiles peut tre une des voies possibles pour largir le march des huiles
vgtales. Pendant le processus daromatisation de lhuile, les volatils des pices incorpors
diffusent dans lhuile et lui donnent un got et une odeur (Moldao-Martins et al., 2004).
Un faible nombre dtudes scientifiques sont trouves dans la bibliographie traitant
laromatisation des huiles vgtales par des plantes aromatiques (Kruma et al., 2006), sous les
diffrents tats de la matire vgtale, frache ou sche infuses dans lhuile ou sous forme
dhuiles essentielles.
Dans ltude ralise dans le chapitre II sur les activits antioxydantes des huiles essentielles
o lhuile de tournesol a t utilise comme huile vecteur, nous avons dmontr que les huiles
essentielles tudies taient capable de protger lhuile de tournesol contre loxydation par
loxygne (Somogyi, 2008). Au-del de cette activit biologique, nous avons voulu tudier
limpact sensoriel de lincorporation de ces huiles essentielles ou de la matire vgtale
entire sur les huiles vgtales notamment sur lhuile de tournesol.
Lobjectif gnral de ces travaux est dlargir le champ dapplication des plantes aromatiques,
via leur utilisation comme ingrdient darme dans les huiles vgtales assurant une activit
biologique notable associe.
Lobjectif spcifique a t de comparer trois diffrentes mthodes daromatisation des huiles
vgtales notamment lhuile de tournesol. La premire en infusant la matire vgtale sous sa
forme sche, la deuxime en infusant la matire vgtale sous sa forme frache, la troisime
en aromatisant lhuile de tournesol directement par ajout de lhuile essentielle.
Les feuilles ou les fleurs sches ou les feuilles fraches seront mlanges lhuile de
tournesol pour obtenir deux essais dhuiles dites infuses qui seront compares un essai
dhuile dite aromatise contenant de lhuile de tournesol et lhuile essentielle obtenue partir
de chacune des plantes. Il faut signaler que peu dinformations sur les protocoles des
diffrentes mthodes utilises dans lindustrie ont t trouves.

155

Chapitre III : Application pr-industrielle laromatisation des huiles vgtales par les plantes
aromatiques

La comparaison des trois mthodes se fera sur la base des composs volatils de lhuile de
tournesol aromatise extraits par micro-extraction en phase solide (SPME) puis analyss en
CPG/SM.
tant donn que la finalit de ce projet est denvisager la production dune huile infuse ou
aromatise un niveau industriel, ces analyses nous permettront dvaluer la mthode la plus
avantageuse conomiquement et la plus transfrable lindustrie agroalimentaire.

I. Matriels et mthodes
Loptimisation des mthodes en termes de quantit de matire vgtale infuse et de temps de
sonification appliqu, a t tout dabord teste sur le Basilic, puis transfre sur les autres
plantes aromatiques slectionnes, Achillea millefolium, Calamintha grandiflora, Tanacetum
balsamita, Myrrhis odorata et Monarda didyma.
I.1. Huile de tournesol
Cette huile vgtale, obtenue partir des graines de tournesol, est compose 98% de
triesters dacides gras, le reste contenant entre autres des strols et des tocophrols.
La composition en acides gras de lhuile de tournesol utilise pour lalimentation humaine est
la suivante (en pourcentage massique) :
Acide linolique (C18:2 -6 polyinsatur) 70%
Acide olique (C18:1 -9 mono insatur) 20%
Acide palmitique (C16:0 satur) 6%
Acide starique (C18:0 satur) 5%
Autres : 2%
Lhuile de tournesol est une huile vgtale riche en acide gras essentiel omga-6 mais on note
cependant sa pauvret en acide gras essentiel omga-3.

156

Chapitre III : Application pr-industrielle laromatisation des huiles vgtales par les plantes
aromatiques
Tableau 21: Proprits physicochimiques de l'huile de tournesol

Huile de tournesol
Gnral
N CAS

8001-21-6

N EINECS

232-273-9

Proprits chimiques
Indice diode

125 144 ; Hydrogne : 70 75

Indice de saponification

188 194

Matires non saponifiables

0.4 1.4 %

Proprits physiques
Temprature de fusion

Hydrogne : 32 35 C

Proprits optiques
Indice de rfraction

ND40 1.466 1.468

Lhuile de tournesol utilise est une huile commerciale conserve 4C afin dviter lautooxydation et la formation des composs volatils de dgradation.

I.2. Prparation des chantillons feuilles fraches infuses dans lhuile de tournesol :
HI.FF
Avant de raliser les chantillons qui seront utiliss pour les analyses, un chantillon modle
a t prpar avec des feuilles de Basilic afin de trouver le temps optimum dexposition aux
ultrasons. La mthode ultrasons favorise et intensifie le procd dclatement des vsicules
tout en librant les COVs qui vont diffuser dans lhuile de tournesol et permettre son
aromatisation.
Aprs exposition aux ultrasons, lensemble est filtr afin denlever les feuilles. Lhuile ainsi
aromatise est transfre dans des bouteilles hermtiquement fermes et stockes 4C avant
les analyses chromatographiques.

157

Chapitre III : Application pr-industrielle laromatisation des huiles vgtales par les plantes
aromatiques

I.2.1. Optimisation du temps dexposition de lhuile infuse et soumise aux ultrasons


Aprs avoir dtach les feuilles fraches de la tige, on les immerge dans un bcher contenant
lhuile de tournesol. Lensemble est plac dans une cuve ultrasons de capacit de 3 litres et
de frquence de 20 25 Khz, rempli avec un litre deau. (Voir figure 44).
Pour dterminer le temps dexposition aux ultrasons le plus adquat, un chantillon 1% de
feuilles fraches de basilic et de balsamite a t ralis avec les donnes suivantes :

Volume dhuile dans le bcher : 100 mL

Masse dhuile dans le bcher : 81,787 g

Masse de feuilles fraches thorique : 81,787 * 1/100 = 0,81787 g

Masse de feuilles fraches incorpores rellement : 0,835 g

Figure 44 : Cuve ultrasons de capacit 3 Litres

Une fois le bcher plac dans la cuve, il va tre successivement expos aux ultrasons de
frquence 20 Khz, pendant 10, 20, 30 et 40 minutes. A chaque fois, une feuille prsente dans
lchantillon sera prleve pour tre observe au microscope optique (Nikon Eclipse E600),
afin de suivre lvolution de la structure des vsicules au cours du temps.

158

Chapitre III : Application pr-industrielle laromatisation des huiles vgtales par les plantes
aromatiques

Aprs 10 minutes dexposition aux ultrasons, la feuille prsente quelques lsions, reprables
par certains endroits noircis. On suppose que les endroits noircis reprsentent le contenu de
certaines vsicules qui auraient clat. (Figure 45)

Figure 45: Micrographie d'une feuille de Balsamite aprs son exposition 10 min aux ultrasons (20khz),
avec un grossissement x 100

Daprs la figure 46, on peut remarquer que la feuille de Balsamite prsente un nombre plus
important de lsions suite son exposition 10 minutes de plus aux ultrasons.

Figure 46: Micrographie d'une feuille de Balsamite aprs son exposition 20 minutes aux ultrasons (20khz),
grossissement x 100

159

Chapitre III : Application pr-industrielle laromatisation des huiles vgtales par les plantes
aromatiques

Aprs 30 minutes aux ultrasons, on remarque que la majorit de la feuille est noircie laissant
supposer lclatement de nombreuses vsicules. (Figure 47)

Figure 47: Micrographie d'une feuille de Balsamite aprs son exposition 30 minutes aux ultrasons (20khz),
grossissement x 100

Aprs 40 minutes aux ultrasons (figure 48) lobservation microscopique ne montre pas de
diffrence significative avec celle ralise aprs 30 minutes dexposition aux ultrasons.

Figure 48: Micrographie d'une feuille de Balsamite aprs son exposition 40 minutes aux ultrasons (20khz),
grossissement x 100

Au vue des rsultats des observations microscopiques, le temps optimal est considr entre 30
et 40 minutes. Les extractions des 5 plantes seront donc exposes 35 minutes aux ultrasons.

160

Chapitre III : Application pr-industrielle laromatisation des huiles vgtales par les plantes
aromatiques

I.2.2. Prparation des infusions de plantes aromatiques fraches dans lhuile de tournesol
Des chantillons des huiles infuses prpares partir de la matire vgtale ont t mis en
place.

Prparation des chantillons partir : Th dAubrac, Balsamite, Myrrhis et


Monarde 1 % de feuille fraiches (35 min aux ultrasons)

Une infusion 1% a t prpare partir des feuilles de plantes aromatiques dans l'huile de
tournesol avec les quantits suivantes :
-

Volume dhuile de tournesol : 1 L

Masse dhuile : 906, 7 g

Masse de feuille incorpore : 9, 0 g

Masse de feuille thorique : 9, 067 g

Frquence des ultrasons : 20 Khz

Temps de sonification : 35 minutes

Lhuile de tournesol aromatise est filtre et conserve 4C dans des bouteilles


hermtiquement fermes pour les analyses chromatographiques ultrieures

I.3. Prparation dinfusions de plantes aromatiques sches dans lhuile de tournesol :


HI.FS
La meilleure faon de commercialiser lhuile de tournesol aromatise est de faire apparaitre
les feuilles immerges dans lhuile, qui vont offrir au fur et mesure leurs armes lhuile de
tournesol en donnant un effet esthtique au produit.
Pour prparer ces chantillons, les feuilles des 4 plantes aromatiques (Calamintha
grandiflora, Tanacetum balsamita, Myrrhis odorata et Monarda didyma) et les fleurs
dAchillea millefolium ont t pralablement dessches dans un dshydrateur alimentaire
(figure 49) pendant environ 3 heures.

161

Chapitre III : Application pr-industrielle laromatisation des huiles vgtales par les plantes
aromatiques

Figure 49 : Dshydrateur alimentaire

Le dshydrateur envoie de lair chaud (environ 65C) partir du centre du plateau le plus
bas et se propage sur tous les niveaux desschant ainsi les feuilles. Une petite aration situe
au centre du plateau le plus haut permet dviter la condensation. Les feuilles et fleurs une
fois sches sont conserves dans des petits bocaux en verre.
Plusieurs chantillons dhuile de tournesol ont t prpars diffrentes concentrations en
feuilles/fleurs sches (de 0,8 2%) et analyss intervalles de temps rguliers. Les
chantillons sont prpars dans des bouteilles en verre de capacit de 100 ou 200 mL.

162

Chapitre III : Application pr-industrielle laromatisation des huiles vgtales par les plantes
aromatiques

I.4. Prparation des infusions de plantes aromatiques sches et dhuile essentielle


HI.HE.FS
Les chantillons sont raliss en rajoutant 2% des feuilles sches et 0,1% de lhuile essentielle
de chaque plante aromatique dans lhuile de tournesol
Volume dhuile : 200 mL
Masse dhuile : 174,06 g
Masse de feuilles thorique pour 2 % : 174,06 * 2/100 = 3,4812 g
Masse de feuilles relle incorpore dans lhuile : 3,48 g
Masse dhuile essentielle thorique incorpore : 174,06 * 0,1/100 = 0,17406 g
Masse dhuile essentielle incorpore rellement : 0,18 g
I.5. Analyses de lespace de tte des huiles infuses
I.5.1. Fibre SPME, choix de la fibre et conditionnement
Les analyses en espace de tte ont t effectues par lintermdiaire dune fibre SPME
trois phases DVB/CAR/PDMS (Divinylbenzne/Carboxen/Polydimthylsiloxane) possdant
un revtement de 50/30 m, cette fibre bipolaire extrait les composs volatils et semi-volatils
la fois. Le choix de cette fibre a t bas sur les rsultats obtenus dans la premire partie de
ce chapitre sur le dveloppement du systme (CFD).
Le conditionnement de cette fibre a t effectu via linjecteur de la CPG Varian (CP
3800), dans lequel on expose la fibre pendant 1 heure 250C.
I.5.2. Prparation des huiles infuses analyser : extraction des COVs
On prlve via une seringue 4 grammes dchantillon dhuile aromatise ou infuse (stock
dans des bouteilles capacit 100 ou 200 mL). On dpose lchantillon prlev dans un vial
de 5 ml qui sera clos par un septum et mis agiter pendant 5 minutes TC ambiante.
On fait passer laiguille de la fibre (en position ferme) travers le septum ; par la suite, on
fait descendre le piston (fibre en position ouverte) de faon exposer la fibre lespace de
tte. On veillera ce que la fibre se retrouve toujours au mme niveau dans lespace de tte
pour toutes les rptitions.
Le temps optimum dadsorption est estim 10 minutes (rsultats obtenus dans la premire
partie de ce Chapitre). Une fois ladsorption termine, la fibre est rtracte dans laiguille et
injecte dans le chromatographe immdiatement. Les analyses ont t effectues en triplicata.

163

Chapitre III : Application pr-industrielle laromatisation des huiles vgtales par les plantes
aromatiques

I.5.3. Analyse chromatographique des chantillons des huiles infuses ou aromatises


Le chromatographe utilis est le CP 3800 Varian quip dune colonne capillaire DB5-MS
(30m x 0,25 mm D.I, 0,25 m paisseur de film). Le gaz vecteur est lhlium (1.3 mL/min).
Le temps de dsorption de la fibre dans linjecteur est de 3 minutes la temprature de
linjecteur (250C). La programmation du four est la suivante : 30C durant 5 minutes, puis
5C/min jusqu'au 200C et 10 minutes 250C. La TC du dtecteur DIF est de 250C.

II. Rsultats et interprtations


II.1. Evolution de la concentration des COVs mis des huiles aromatises ou infuses en
fonction du temps
Dans le but de suivre lvolution de la concentration en COVs dans lespace de tte de lhuile
aromatise, nous avons effectu des analyses de lespace de tte de lhuile aromatise tous les
2 jours. La concentration du compos majoritaire a t suivie dans lhuile aromatise au cours
du temps. Les graphiques ci-dessous ont t raliss en se basant sur la moyenne des aires de
pics par 3 rptitions dchantillonnage.

aire du pic de la tanacetone

II.1.1. Evolution de la quantit de tanacetone dans l'espace de tte de l'huile de tournesol


infuse par les feuilles sches de la Balsamite et son HE

1,6E+05
1,4E+05
1,2E+05

1,2E+05
1,0E+05

9,3E+04

1,0E+05

9,1E+04

9,1E+04

8,0E+04
6,0E+04
4,0E+04
2,0E+04
0,0E+00
5

11
Te mps (jours)

13

21

Figure 50: Evolution de la quantit de tanactone prsente dans l'espace de tte de l'huile de tournesol
infuse par 2 % de feuilles sches et aromatise par 0,1% de l'HE de la Balsamite en fonction du temps

164

Chapitre III : Application pr-industrielle laromatisation des huiles vgtales par les plantes
aromatiques

Daprs la figure 50, on peut remarquer que la concentration de tanacetone en fonction du


temps est relativement stable et aprs 3 semaines daromatisation lespace de tte de lhuile de
tournesol garde une concentration quasi stable en tanacetone.
II.1.2. Evolution de la quantit du camphre (exprime par laire du pic ) dans d'espace
de tte de l'huile de tournesol aromatise par les feuilles schs dA. millefolium et son
HE
3,0E+03
aire du pic du camphre

2,5E+03
2,0E+03

2,3E+03
1,8E+03

1,9E+03

2,0E+03

2,0E+03

1,5E+03
1,0E+03
5,0E+02
0,0E+00
1

10

Temps (jours)

Figure 51: Evolution de la quantit de camphre dans d'espace de tte de l'huile de tournesol aromatise
par 0,1 % d'HE d'Achillea millefolium et par 0,2% des ses feuilles sches en fonction du temps

Daprs la figure 51, on remarque que la concentration en camphre dans lhuile aromatise
par lhuile essentielle dAchille reste quasi stable en fonction du temps, ainsi mme aprs 10
jours daromatisation.

aire du pic de la tanacetone

II.1.3. Evolution, de la quantit de tanacetone dans lespace de tte de lhuile de


tournesol aromatise par les feuilles fraches de Balsamite
7,0E+02
6,0E+02
5,0E+02

4,8E+02

5,0E+02

5,0E+02

5,2E+02

12

14

4,0E+02

4,0E+02
3,0E+02
2,0E+02
1,0E+02
0,0E+00
4

Temps (jours)

Figure 52: Evolution de la quantit de tanactone dans lespace de tte de lhuile de tournesol aromatise
par les feuilles fraches de Balsamite en fonction du temps

165

Chapitre III : Application pr-industrielle laromatisation des huiles vgtales par les plantes
aromatiques

Daprs la figure 52 on remarque que la concentration en tanactone dans lespace de tte


varie peu en fonction du temps ; ainsi, lhuile aromatise par les feuilles fraches de la
Balsamite nest pas stable.
II.1.4. Evolution de la quantit de tanactone dans l'espace de tte de l'huile de tournesol
infuse par les feuilles sches de la Balsamite

aire du pic de tanactetone

2,5E+02
1,8E+02

2,0E+02
1,3E+02

1,5E+02
1,0E+02

8,2E+01

8,0E+01

8,9E+01

5,0E+01
0,0E+00
11

13

17

Temps (jours)

Figure 53: Evolution de la quantit de tanactone dans l'espace de tte de l'huile de tournesol infuse par
2% des feuilles sches de la Balsamite en fonction du temps

Daprs la figure 53, on remarque que la concentration en tanactone volue en fonction du


temps. Aprs environ 3 semaines, la concentration a t double. Cette reprsentation montre
la cintique de libration des COVs partir des feuilles sches macres dans lhuile de
tournesol.

166

Chapitre III : Application pr-industrielle laromatisation des huiles vgtales par les plantes
aromatiques

II.2. Rsultats de laromatisation par infusion de matire vgtale et par ajout dHE
dans les huiles vgtales
Les rsultats des analyses des huiles infuses partir de la matire frache (HI.FF) nont
pas t positifs. En utilisant 1 % de matire frache infuse, on observe la prsence des 2
composs majoritaires de lhuile essentielle. Si on augmente le taux de matire frache 2%
lhuile de tournesol devient trouble. Les molcules deau prsentes dans les feuilles passent
dans lhuile vecteur et crent une mulsion. Lhuile ainsi obtenue nest pas stable. Nous avons
alors abandonn cette mthode daromatisation qui conduit une huile aromatise non
commercialisable.
Dans le cas de lhuile infuse 1% de matire sche, aucun compos aromatique nest dtect
dans lhuile. En doublant le taux de matire sche 2%, on observe la prsence dans lhuile
de 2 3 composs majoritaires de lhuile essentielle. Une tentative daugmentation du taux
dinfusion 3% a t effectue mais dans ce cas la quantit de matire vgtale par rapport
la quantit de lhuile est trop importante et lhuile devient de couleur vert.
Finalement lhuile a t aromatise par 0,1% dhuile essentielle pour chacune des
plantes aromatiques et 2% de matire vgtale sche correspondante.
Les rsultats daromatisation de lhuile de tournesol par lhuile essentielle sont prsents dans
les tableaux ci-aprs. Pour chacune de ces huiles, les principales notes odorantes des huiles
essentielles ont t perues.

167

Chapitre III : Application pr-industrielle laromatisation des huiles vgtales par les plantes
aromatiques

II.2.1. Huile de tournesol aromatise par lHE dAchillea millefolium


12 COVs ont t identifis dans lespace de tte de lhuile aromatise par lAchille
millefeuille dans les conditions SPME choisies. Les composs identifis sont 6 monoterpnes,
4 monoterpnes oxygns, 2 sesquiterpnes et un sesquiterpne lactone. Les composs
majoritaires sont le camphre (31,23%), le germacrne D (17,73%), le sabinne (16,51%),
lactate de chrysanthnyle (10,25%), le nrolidol (10,20%), la bta-pinne (9,28%),
leucalyptol (9,35%) et le 4-terpinol (7,65%) (Voir tableau 22).
Tableau 22: Identification des COVs dans l'espace de tte de l'huile de tournesol aromatise par l'huile
essentielle d'Achille millefeuille et par ses feuilles sches
IRa
(TIC)
801

IRthb
790

0,05

%c
HI/HE/FS
nd

3-hexne-1-ol

848

854

0,22

nd

hexanoate de mthyl

923

927

0,18

nd

alpha-pinne

931

939

1,70

3,51

12,89

camphne

947

954

1,60

3,48

14,29

sabinne

970

975

6,72

16,51

8,98

bta-pinne

976

979

3,28

9,28

11,36

alpha-terpinne

1015

1017

0,70

1,87

12,98

para-cymne

1022

1026

0,82

nd

1,8-cinole

1030

1031

4,03

9,35

14,87

gama-terpinne

1055

1060

1,71

3,48

17,36

terpinolne

1083

1089

0,35

nd

linalol

1099

1097

1,78

3,69

nonanal

1103

1101

0,61

nd

isocyclocitral

1115

4,48

nd

bta-terpinne

1122

0,39

nd

ni

1134

0,28

nd

trans-pinocarvol

1138

1139

0,55

nd

camphre

1146

1146

12,64

3-cyclohexen-1-carboxaldhyde,2,4,6-

1160

1,76

nd

1170

1169

2,25

nd

Composs
hexane2,3-dione

%c HE
HI/FS

34,23

trimthyl
bornol

168

CVd
HI/HE/FS

5,89

4,28

Chapitre III : Application pr-industrielle laromatisation des huiles vgtales par les plantes
aromatiques

4-terpinol

1179

1189

4,70

7,65

menthan-2-one

1193

1196

1,46

nd

trans-actate de chrysanthnyle

1228

1236

6,55

10,25

actate de bornyle

1280

1289

1,17

nd

1,3,8 p-menthatrine

1317

0,31

nd

actate de linalyle

1355

0,31

nd

alpha-copane

1370

1377

0,52

nd

isoledne

1382

0,12

nd

bta-caryophyllne

1422

1419

1,42

nd

cis-alpha-bisabolne

1447

0,54

nd

germacrne-D

1474

1485

11,73

methyl-isognol

1487

1492

0,98

nd

gamma-cadinne

1505

1514

0,35

nd

delta-cadinne

1509

1523

1,22

nd

alpha-calacorne

1532

1546

0,35

nd

lemol

1547

1550

1,57

nd

(E)-nrolidol

1555

1563

7,23

10,20

ni

1567

0,84

nd

alcool caryophyllenique

1572

1572

1,97

nd

oxyde de caryophyllne

1584

1583

1,88

nd

ni

1594

1,21

nd

viridiflorol

1598

1596

1,41

nd

cderne-epoxide

1616

1623

0,46

nd

ni

1626

1,14

nd

ni

1631

0,54

nd

bta-eudesmol

1644

1651

1,09

nd

cedr-8(15)-en-10-ol

1653

1652

0,19

nd

alcool patchoulique

1661

1658

0,79

nd

alpha-bisabolol

1674

1686

1,49

nd

17,73

16,58

22,69

10,69

14,72

indice de rtention calcul partir des n-alcanes C5-C18,, bindices de rtention thoriques (IRth) des librairies Adams, NIST,

Agilent France, Wiley, Hewlett Packard, France et de la littrature, cpourcentage moyen sur 3 rplicats, dcoefficient de
variation (%), + prsence du compos organique volatil ltat de trace, nd : non dtcte

169

Chapitre III : Application pr-industrielle laromatisation des huiles vgtales par les plantes
aromatiques

II.2.2. Huile de tournesol aromatise par lHE de Calamintha grandiflora


8 COVs ont t identifis dans lespace de tte de lhuile de tournesol dans les conditions
SPME choisies dont 3 monoterpnes et 5 monoterpnes oxygns : lisomenthone (38,97%),
le no-isomenthol (21,61%), la pulegone (17,87%), lisomenthol (9.14%), la menthone
(6,28%), le limonne (2,86%), le 3-octanol (1,69%) et la bta-pinne (1,58%). On remarque la
prsence majorotaire de la famille de menthone. Labsence des sesquiterpnes dans lespace
de tte est due aux conditions dextraction. On retrouve le germacrne en tat de trace (voir
Tableau 23)
Tableau 23: Identification des COVs dans l'espace de tte de l'huile de tournesol aromatise par l'HE de
Calamintha grandiflora et par ses feuilles sches

Composs

IRa
(TIC)

IRthb

%c HE

HI/FS

%c

CVd

HI/HE/FS

HI/HE/FS

alpha-pinne

931

939

0,03

nd

sabinne

970

975

0,19

nd

bta-pinne

976

979

0,21

1,58

bta-myrcne

987

991

0,09

nd

3-octanol

995

991

0,25

1,69

18,36

limonne

1027

1029

0,71

2,86

13,68

bta-trans-ocimne

1032

1037

0,08

nd

terpinolne

1068

1089

0,03

nd

bta-linalol

1100

1091

0,04

nd

para-Menth-8-en-3-ol

1148

1150

0,24

nd

menthone

1155

1153

4,40

6,28

12,65

isomenthone

1168

1162

34,07

38,97

7,65

isomenthol

1181

1183

7,65

9,14

6,28

no-isomenthol

1191

1187

19,83

21,61

5,99

pulgone

1240

1237

19,54

17,87

14,61

pipritone

1251

1253

1,28

tr

ni

1284

0,03

nd

actate disomenthyle

1301

0,03

nd

ni

1335

0,14

nd

1305

170

14,69

Chapitre III : Application pr-industrielle laromatisation des huiles vgtales par les plantes
aromatiques

copane

1370

1377

0,04

nd

bta-bourbonne

1378

1388

0,13

nd

caryophyllne

1413

1409

1,99

nd

santalne

1448

1447

0,37

nd

germacrne-D

1474

1485

3,55

tr

bicyclogermacrne

1487

1500

1,78

nd

alpha-farnesne

1499

1506

0,11

nd

gamma-cadinne

1510

1514

0,12

nd

actate disognol

1568

1568

0,93

nd

oxyde de caryophyllne

1572

1583

0,43

nd

ni

1599

0,06

nd

ni

1605

0,28

nd

alpha-cadinol

1646

0,20

nd

ni

1781

0,15

nd

ni

1786

0,07

nd

ni

1790

0,08

nd

ni

1802

0,16

nd

ni

1806

0,05

nd

ni

1810

0,18

nd

ni

1830

0,04

nd

ni

1850

0,14

nd

ni

1860

0,17

nd

1654

indice de rtention calcul partir des n-alcanes C5-C18,

indices de rtention thoriques (IRth) des librairies Adams, NIST, Agilent France, Wiley, Hewlett Packard,

France et de la littrature
c

pourcentage moyen sur 3 rplicats

coefficient de variation (%)

+ : prsence du compos organique volatil ltat de trace


nd : non dtcte

171

Chapitre III : Application pr-industrielle laromatisation des huiles vgtales par les plantes
aromatiques

II.2.3. Huile de tournesol aromatise par lHE de Tanacetum balsamita


7 COVs ont t identifis dans lespace de tte de lhuile de tournesol aromatise par lhuile
essentielle de Balsamite et de ses feuilles sches dans les conditions SPME choisies. 3
monoterpnes, 3 monoterpnes oxygns et 1 sesquiterpne ont t identifis dont la
tanacetone (76,31%), leucalyptol (7,68%), la bta thujone (5,12%), la bta-terpinne
(4,88%), le gamma-terpinne (3,14%), le germacrne-D (1,51%) et le sabinne (1,36%)
(Tableau 24).
Tableau 24: Identification des COVs dans lespace de tte de lhuile de tournesol aromatise par lHE de
Tanacetum balsamita et par ses feuilles sches
IRa

Composs

(TIC)

IRthb %c HE

%c

CVd

HI/FS HI/HE/FS HI/HE/FS

alpha-pinne

933

939

0,05

nd

sabinne

973

975

0,19

1,36

bta-pinne

979

979

0,04

nd

mentha-2,8-dine

987

984

0,05

nd

myrcne

991

991

0,09

nd

isoamyl butylate

1010

0,06

nd

alpha-terpinne

1017 1017

0,14

nd

para-cymne

1025 1026

0,26

nd

1,8-cinole

1033 1031

3,97

gamma-terpinne

1058 1060

bta-terpinne

9,68

7,68

11,58

0,53

3,14

10,28

1072 1072

1,55

4,88

11,69

alpha-terpinolne

1086 1089

0,09

nd

2-mthyl-butyrate disoamyl

1099 1100

0,07

nd

cis-thujone

1109 1102

3,33

5,12

4,32

trans-thujone

1128 1144 83,57

76,31

3,87

isothujanol-3

1140 1138

0,23

nd

para menth-3-en-8-ol

1144 1150

0,39

nd

ni

1148

0,05

nd

ni

1151

0,05

nd

1157

0,03

nd

bicyclo[4,1,0] heptan-3-one,7,7 dimthyl-4


mthylne

172

Chapitre III : Application pr-industrielle laromatisation des huiles vgtales par les plantes
aromatiques

pinocarvone

1165 1165

0,28

nd

actate de santolinyle

1172 1175

0,16

nd

pinocarveol

1183 1184

1,48

nd

ocimne

1198 1186

0,16

nd

carvotanacetone

1251

0,15

nd

4-carne

1260

0,14

nd

1288

0,11

nd

3-carne,10-actylmthyl

1296

0,04

nd

actate de dihydrocarvol

1303 1307

0,18

nd

ni

1323

0,03

nd

ni

1329

0,14

nd

ni

1336

0,02

nd

ni

1352

0,02

nd

alpha-bourbonne

1385 1388

0,02

nd

isobutanoate de phenylthyl

1395 1394

0,02

nd

caryophyllne

1421 1419

0,02

nd

gamma-gurjunne

1474 1477

0,07

nd

germacrne-D

1482 1485

1,50

1,51

bicyclogermacrne

1496 1500

0,19

nd

delta-cadinne

1518 1523

0,02

nd

ni

1560

0,05

nd

ni

1578

0,03

nd

dihydro eudesmol

1656 1663

0,38

nd

Pirtrinal

1733

0,03

nd

ni

1788

0,03

nd

bicyclo[3,1,0] hex-2-ene,4-methylne-1-(1mthylthyl)

22,87

indice de rtention calcul partir des n-alcanes C5-C18,

indices de rtention thoriques (IRth) des librairies Adams, NIST, Agilent France, Wiley, Hewlett Packard,

France et de la littrature
c

pourcentage moyen sur 3 rplicats

coefficient de variation (%)

+ : prsence du compos organique volatil ltat de trace, nd : non dtct

173

Chapitre III : Application pr-industrielle laromatisation des huiles vgtales par les plantes
aromatiques

II.2.4. Huile de tournesol aromatise par lHE de Myrrhis odorata


5 COVs ont t identifis dans lespace de tte de lhuile de tournesol aromatise par lhuile
essentielle de Myrrhis dans les conditions SPME choisies. 1 monoterpne, 2 monoterpnes
oxygns et 2 sesquiterpnes dont lanthole (61,18%), le germacrne-D (13,10%), le
limonne (10,29%), lestragole (8,56%) et le bta-caryophyllne (6,87%) (Voir tableau 25).
Tableau 25: Identification des COVs dans l'espace de tte de l'huile de tournesol aromatise par l'HE de
Myrrhis odorata et ses feuilles sches.
IRa
(TIC)

IRthb

%c HE

alpha-pinne

934

939

0,03

sabinne

973

975

0,02

bta-pinne

979

979

0,02

bta-myrcne

987

991

0,63

limonne

1030

1029

4,42

bta-cis-ocimne

1047

1050

0,32

gamma-terpinne

1059

1060

0,24

terpinolne
estragole

1088

1089

0,04

1199

1196

3,04

cis-3 hexenyl isovalerate

1229

0,01

ni

1253

trans-anthole

1290

1285

75,12

ni

1376

0,05

ni

1388

0,10

ni

1404

0,17

bta-caryophyllne

1420

1419

2,71

bta-farnesne

1457

1457

0,22

germacrne-D

1482

1485

6,19

ni

1489

0,01

bicyclogermacrne

1496

1500

3,18

alpha-farnesne

1504

1506

0,48

ni

1518

0,10

ni

1562

2,74

Composs

HI/FS

%c
HI/HE/FS
nd

CVd
HI/HE/FS

nd
nd
nd
+

10,29

16,58

nd
nd
nd
8,56

7,69

nd
nd

0,06
+

61,18

3,12

nd
nd
nd
6,87

8,66

nd
13,10

5,41

nd
tr
nd
nd
nd

indice de rtention calcul partir des n-alcanes C5-C18,, bindices de rtention thoriques (IRth) des librairies

Adams, NIST, Agilent France, Wiley, Hewlett Packard, France et de la littrature, cpourcentage moyen sur 3

174

Chapitre III : Application pr-industrielle laromatisation des huiles vgtales par les plantes
aromatiques
rplicats, dcoefficient de variation (%), + prsence du compos organique volatil ltat de trace, nd : non
dtcte

II.2.5. Huile de tournesol aromatise par lHE de Monarda didyma


La moiti des COVs identifis prsents dans lhuile essentielle de Monarda didyma ont t
retrouvs dans lespace de tte de lhuile de tournesol aromatise par lhuile essentielle de
Monarda et ses feuilles sches. 6 monoterpnes, 5 monoterpnes oxygns, et 2
sesquiterpnes ont t identifis dont thymol (34,79%), eucalyptol (14,31%), D-limonne
(8,71%), sabinne (8,65%), O-mthyle-thymol (7,39%), germacrne-D (6,28%), gammaterpinol (5,63%), camphne (3,67%), caryophyllne (2.57%), alpha-pinne (2,36%), linalool
(2,12%), alpha thujne (1,89%) et bta-pinne(1,63%) (Voir tableau 26).
Tableau 26: Identification des COVs dans l'espace de tte de l'huile de tournesol aromatise par l'huile
essentielle de Monarda didyma et par ses feuilles sches

Composs

IRa

IRthb

%c HE

(TIC)

HI/FS

%c

CVd

HI/HE/FS

HI/HE/FS

alpha-thujne

925

930

0,35

1,89

9,31

alpha-pinne

933

939

0,88

2,36

9,72

camphne

951

954

1,39

3,67

8,25

sabinne

973

975

5,53

8,65

7,16

bta-pinne

979

979

1,05

1,63

8.01

bta-myrcne

987

991

1,10

nd

alpha-phellandrne

1008

1003

0,10

nd

alpha-terpinne

1017

1017

1,04

nd

para-cymne

1025

1026

2,78

nd

limonne

1030

1029

3,46

8,71

4,87

1,8-cinole

1033

1031

9,68

14,31

6,32

gamma-terpinne

1058

1060

2,68

175

nd

Chapitre III : Application pr-industrielle laromatisation des huiles vgtales par les plantes
aromatiques

hydrate de sabinne

1072

1073

0,55

nd

alpha-terpinne

1086

1089

1,02

nd

linalol

1100

1102

1,83

2,12

chrysantnone

1120

1128

0,44

nd

bornol

1174

1180

1,13

nd

alpha-terpinol

1182

1189

0,47

nd

gamma-terpinol

1197

1199

8,52

5,63

8,22

thymol-mthyl ether

1238

1235

3,20

7,39

5,39

thymol

1290

1290

47,06

34,79

3,25

bta-cubebne

1376

1388

0,09

nd

ni

1389

0,14

nd

caryophyllne

1421

1419

0,89

2.57

9,28

germacrne-D

1482

1485

4,04

6,28

19,61

alpha-farnesne

1507

1506

0,54

nd

delta-cadinne

1518

1523

0,04

nd

7,36

indice de rtention calcul partir des n-alcanes C5-C18,, bindices de rtention thoriques (IRth) des librairies

Adams, NIST, Agilent France, Wiley, Hewlett Packard, France et de la littrature, cpourcentage moyen sur 3
rplicats, dcoefficient de variation (%), + prsence du compos organique volatil ltat de trace, nd : non
dtcte

176

Chapitre III : Application pr-industrielle laromatisation des huiles vgtales par les plantes
aromatiques

Conclusion Partie II
Parmi les trois mthodes values une seule est retenir. Il sagit de celle combinant
lhuile essentielle aux feuilles sches car elle offre le plus dintrt pour la production
industrielle et la commercialisation. En effet, quelques gouttes dhuile essentielle (0,1%)
suffisent pour retrouver en quantit importante les composs majoritaires de lhuile essentielle
dans lhuile vecteur et daromatiser le produit. Quelques feuilles sches sont ncessaires pour
appuyer le ct naturel de lhuile aromatise.
Concernant les autres mthodes, celle utilisant les ultrasons aurait pu tre intressante
car elle ncessite encore moins de matire premire que celle retenue mais elle nest pas
gnralisable et applicable toutes les plantes. Effectivement il se peut quune mulsion se
cre et rende lchantillon inexploitable au niveau industriel. La concentration des COVs mis
en fonction du temps tait trs variable.
Les feuilles sches quant elles ne sont pas exploitables lorsquelles sont introduites
seules dans lchantillon car elles naromatisent pas suffisamment le produit. Quant lhuile
essentielle incorpore seule dans lhuile de tournesol, elle aromatise trs bien le produit mais
le fait que lhuile soit aussi limpide que lhuile de tournesol vierge pourrait poser problme
quant lacceptabilit du produit par le consommateur.

177

Chapitre III : Application pr-industrielle laromatisation des huiles vgtales par les plantes
aromatiques

178

Conclusion gnrale

Conclusion gnrale

179

Conclusion gnrale

180

Conclusion gnrale
Les objectifs scientifiques de ces travaux ont t dans un premier temps
dappliquer le concept dagro-raffinage aux plantes aromatiques mdivales du patrimoine
vgtal de Midi-Pyrnes, afin de valoriser de manire squence les diffrents mtabolites
secondaires. Nous avons pour cela slectionn cinq plantes aromatiques mdivales : Achillea
millefolium, Tanacetum balsamita, Calamintha grandiflora, Myrrhis odorata et Monarda
didyma. Lanalyse chimique et sensorielle de la fraction volatile de ces plantes a t effectue.
Les activits biologiques des extraits volatils et non volatils des plantes ont t values.
Dans un second temps, confronts au problme de raret du vgtal tudi, nous avons
dvelopp une mthodologie instrumentalise permettant dvaluer le potentiel aromatique
des plantes partir dune seule feuille. Enfin nous avons essay dlargir le champ
dapplication des plantes aromatiques, par leur utilisation en tant quingrdients darme dans
les huiles vgtales assurant une activit biologique notable associe.

Lhuile essentielle dAchillea millefolium obtenue par hydrodistillation de la partie


arienne frache est compose de 50 constituants dont 45 ont t identifis constituant 96% de
la quantit totale de lhuile. Le bta-pinne (3,3%), le sabinne (6,7%), et leucalyptol (4%)
assurent une note de tte menthole boise. Le camphre (12,6%), le trans-actate de
chrysantnyle (6,6%), le 4-terpinol (5%) et lisocyclocitral (4.5%) assurent une note de cur
camphre boise. Le germacrne-D (11,73%) et le (E)-nrolidol (7,2%) quant eux assurent
une note de fond florale.
Lhuile essentielle de lespce franaise de Calamintha grandiflora, obtenue partir de
lhydrodistillation des tiges et de feuilles a t caractrise pour la premire fois. 29 composs
organiques volatils ont t identifis et constituent 93 % de la composition chimique totale de
lhuile essentielle. Le sabinne (0,19%) et le bta-pinne (0,21%) assurent une note de tte
boise citronne, lisomenthone (34,07%), le noisomenthol (19,83%), la pulegone (19,54%),
lisomenthol (7,65%), et la menthone (4,40%) assurent une note de cur menthole pice.
Le germacrne-D (3,55%) amne une note de fond florale.
Lhuile essentielle des deux origines de Tanacetum balsamita (sauvage et cultive sous
serre) a t analyse. 34 composs ont t dtects dont 27 ont t identifis dans lhuile
essentielle de lespce sauvage, correspondant 96% de la composition totale de lextrait. Les
composs majoritaires de lextrait sauvage sont la carvone (56,72%), la tanacetone (9,08%),
le germacrne-D (2,43%), le limonne (2,51%), et le bta-bisabolne (2,46%).

181

Conclusion gnrale
45 composs organiques volatils ont t dtects dont 38 sont identifis dans lhuile
essentielle de lespce cultive sous serre correspondant 96% de la composition totale de
lextrait.

Le 1,8 cinole (3,97%) et lalpha-thujone (3,3%) assurent une note de tte

menthole citronne, la tanacetone ou bta-thujone (83,57%) fournit une note de cur


menthole herbace, le germacrne-D (1,50%) et le bicyclogermacrne (0,19%) amnent une
note de fond th sec (doux, infusion).
Nous pouvons conclure que lespce sauvage franaise et spcifiquement celles rcoltes dans
la rgion de Midi-Pyrnes se diffre de lespace cultive sous serre o la prdominance de
Tanacetone et labsence de carvone dans les huile essentielles des parties ariennes de cette
dernire suggre quil pourrait sagir dun cinquime chimiotype : le type tanactone induit
par les conditions de culture sous serre.
Lhuile essentielle de Myrrhis odorata est compose de 20 composs organiques
volatils qui constituent 96% de la composition totale de lextrait. Les composs majoritaires,
le sabinne (0,63%), limonne (4,42%) apportent une note de tte fraches herbace,
lanthole (75,12%), le germacrne-D (6,19%), le bicyclogermacrne (3,18%), lestragole
(3,04%) et le caryophyllne (2,71%) assurent une note de cur anise boise, deux derniers
composs non identifis assurent une note de fond boise.
Nous avons identifi 26 composs organiques volatils dans lhuile essentielle obtenue
partir des tiges et les feuilles de Monarda didyma. Leucalyptol (9,68%), le limonne (3,46%)
et le gamma-terpinne (2,68%) assurent une note de tte citronne menthole, le thymol
(47,06%) apporte une note de cur thymol, le germacrne (4,04%) et le caryophyllne
(0,89%) donnent une note de fond boise.

Lactivit antioxydante des huiles essentielles des plantes aromatiques oublies ainsi
que de leurs rsidus dhydrodistillation a t value et compare en utilisant les mthodes
suivantes : la mthode Oxipress, la mthode dvaluation des dines et trines conjugus et la
mthode de dtermination de loxydation du radical 2,2-diphnyl-1-picrylhydrazyl. On a pu
calculer le facteur de protection de chaque huile essentielle, ainsi on a pu conclure que
lefficacit des huiles essentielles diminue dans lordre suivant : M. didyma > A. millefolium
> C.

grandiflora >M. odorata >T. balsamita pour des concentrations de 0,05%, 0,1% et

0,2%. On a remarqu que lactivit antioxydante des 5 huiles essentielles dpendait de leur
concentration.

182

Conclusion gnrale
Daprs cette tude nous avons pu dmontrer que laromatisation de lhuile de tournesol par
ces huiles essentielles contribue prolonger la rsistance de lhuile vgtale contre
loxydation par loxygne. Ceci a t valid en mesurant la priode dinduction de chaque
huile essentielle. On peut conclure que lajout par exemple de 0,2% de lhuile essentielle de
lAchille millefeuille permet de prserver lhuile de tournesol et de retarder son oxydation
de deux heures 110C et sous 5 bars. Cela correspond une augmentation de la rsistance
de lhuile de tournesol de 71%.
Nous avons compar lactivit antioxydante des extraits de rsidus dhydrodistillation des 5
plantes via la mthode DPPH. Cette comparaison a t faite sur la base de la concentration
minimale inhibitrice calcule pour chaque rsidu. Nous avons remarqu que lactivit
antioxydante du rsidu dAchillea millefolium a t la plus efficace parmi les autres. Lordre
defficacit est le suivant Achillea millefolium > M. didyma > T. balsamita > C. grandiflora
> M. odorata. Les extraits mthanoliques ont t lgrement plus efficaces que les extraits
thanoliques et actoniques.
L'activit antimicrobienne des solutions mthanoliques d'huile essentielle a t value
in vitro contre neuf espces bactriennes pathognes. Les bactries Gram positif ont t plus
sensibles que celles Gram ngatif, particulirement Bacillus cereus, qui sest montr tre
lespce la plus sensible vis--vis de lHE de M. didyma. Cette dernire, a montr une
efficacit leve contre toutes les cultures microbiennes pour une concentration de 1%. Les
solutions dHEs 0,5% de T. balsamita et M. odorata possdent les activits
antimicrobiennes les plus faibles contre la majorit des bactries en comparaison avec les
autres huiles appliques la mme concentration. Elles montrent une activit antibactrienne
seulement contre Bacillus cereus et Bacillus subtilus. Lhuile essentielle de C. grandiflora a
t la plus efficace contre Bacillus subtilus, cette huile sest montre plus active que
lantibiotique utilis.
L'effet inhibiteur de lHE de M. didyma (1%) contre Escherichia coli, Salmonella enteritidis,
Salmonella typhymurium et Staphylococcus epidermidis tait aussi bas que l'effet de
l'antibiotique de rfrence; cependant, dans le cas de Bacillus subtilus, l'effet de lHE de M.
didyma tait quivalent celui de lantibiotique.
Lactivit antimicrobienne de lhuile essentielle dA. millefolium a t plus efficace contre
Staphylococcus aureus et Bacillus cereus. Par contre, lhuile essentielle de lA. millefolium
nest pas active vis--vis dEscherichia coli.

183

Conclusion gnrale

Nous avons russi mettre en place un systme instrumental d'valuation rapide du


potentiel aromatique de plantes huiles essentielles bas sur l'analyse des effluves. Un
appareillage novateur dnomm "Crushing Finger Device" (CFD) bas sur le concept de
"Scratch'n Sniff" a t mis au point afin de mimer instrumentalement le froissement de la
feuille entre les doigts suivi du pigeage des composs volatils odorants mis. Ce systme a
montr de relles potentialits pour une valuation qualitative rapide des huiles essentielles
contenues dans les feuilles de plantes aromatiques. Grce ce systme la composition des
notes de tte et de cur de lhuile essentielle native peut tre rapidement value.
La richesse des rsultats obtenus par SPME/CPG-2D ainsi que lutilisation complexe et
coteuse de cette technologie limite son domaine dapplication la recherche.
Finalement, pour un objectif dapplication pr-industrielle, nous avons compar trois
diffrentes mthodes daromatisation des huiles vgtales, La premire en infusant la matire
vgtale sous sa forme sche, la deuxime en infusant la matire vgtale sous sa forme
frache, et la troisime en aromatisant lhuile de tournesol directement par ajout de lhuile
essentielle. Les rsultats des analyses des huiles infuses partir de la matire frache ne sont
pas concluants. En utilisant 1 % de matire frache pour raliser linfusion, seulement un ou
deux composs majoritaires de lhuile essentielle sont retrouvs dans lespace de tte de
lhuile vgtale. Le passage 2% limite lutilisation de cette mthode cause de la formation
dmulsions dues au passage de leau de la plante vers lhuile vgtale. Les feuilles sches ne
sont pas exploitables quand elles sont introduites seules dans lchantillon car elles
naromatisent pas suffisamment le produit. Dans le cas des huiles aromatises par les huiles
essentielles, environ 50% des composs de lhuile essentielle sont retrouvs dans lespace de
tte de lhuile de tournesol.
Des tudes complmentaires pourront tre envisages dans plusieurs domaines.
La composition chimique des rsidus dhydrodistillation devrait tre caractrise pour
connatre les composs responsables de lactivit antioxydante des cinq plantes.
Les concentrations inhibitrices minimales des cinq huiles essentielles pourront tre calcules
pour mieux comparer nos rsultats avec les travaux de la littrature.
Lactivit antioxydante individuelle de chaque compos devrait tre value par une mthode
de couplage type on-line CLHP-DPPH-SM, pour savoir sil existe ou non une synergie entre
ces composs pour donner la fin une activit antioxydante globale.

184

Conclusion gnrale

185

Conclusion gnrale

186

Partie Exprimentale

Partie Exprimentale

187

Partie Exprimentale

188

Partie Exprimentale

I. Techniques dextraction des huiles essentielles


Malgr les progrs considrables raliss ces dernires annes dans le domaine de la chimie
analytique, la caractrisation des huiles essentielles ou des COVs demeure un challenge.
Lanalyse des COVs mis par une plante se droule en trois tapes : extraction des composs
aromatiques, analyse de lextrait et traitement des rsultats pour identifier et/ou quantifier les
COVs.
Les composs organiques volatils sont gnralement prsents dans les matrices vgtales de
trs faibles concentrations [de lordre du ppm (mg/Kg) ou du ppb (g/Kg)] et sont de
polarits, solubilits, volatilits et stabilits trs variables.
Les molcules odorantes sont constitues dun squelette hydrocarbon qui peut tre linaire,
cyclique ou aromatique. Presque toutes les fonctions chimiques portes par ces chanes sont
reprsentes : alcools, composs carbonyls (principalement les aldhydes), esters, thers,
phnols et enfin drivs soufrs et htrocycles.
I.1. Diffrentes techniques dextraction des huiles essentielles
La matire vgtale est disperse dans de leau et place dans un ballon chauff directement
(hydrodistillation) ou indirectement (distillation la vapeur) par de la vapeur deau. Les
composs volatils et semi volatils sont entrans par la vapeur deau, qui est ensuite
condense. On rcupre un surnageant nomm huile essentielle (HE), compose de molcules
peu solubles dans leau.
Dune faon gnrale, la distillation est un procd de sparation bas sur la diffrence de
composition entre un liquide et la vapeur engendre (Garnero, 1996). La technique implique
la condensation de la vapeur et la rcupration des fractions liquides rsultantes. On parle de
distillation simple ou fractionne.
Nous avons utilis deux techniques diffrentes dextraction : lentranement la vapeur et
lhydrodistillation.
I.1.1. Entranement la vapeur
Le procd correspondant une distillation htrogne, met en jeu lapplication de deux lois
physiques :
La loi de Dalton: dans laquelle la pression du mlange de vapeurs est gale la somme des
tensions de vapeur de divers constituants. PT = TH + TE

189

Partie Exprimentale
La loi de Raoult: le rapport des quantits des entits distilles simultanment est fonction de
la tension et des densits des vapeurs (donc des masses molculaires) la temprature de
distillation choisie.
MoleH TH
=
MoleE TE

La relation de ces deux lois donne respectivement la pression totale et la composition des
vapeurs en fonction des pressions partielles, do le calcul du taux de corps entran appel
galement rapport dentranement :

R=

TH M 0 H PH

=
TE M 0 E PE

H et E dsignent respectivement lhuile essentielle et leau


PT

= Pression totale

= Tension de vapeur

M 0 = Masse molaire
P = Poids
R = Rapport dentranement

La temprature dbullition dun mlange est atteinte lorsque la somme des tensions de
vapeurs de chacun des constituants est gale la pression dvaporation. Elle est donc
infrieure chacun des points dbullition des substances pures.
Ainsi le mlange eau/huile essentielle distille possde une temprature infrieure 100C
pression atmosphrique (gnralement proche de 100C en raison de la faible tension des
constituants odorants) alors que les tempratures dbullition des composs aromatiques sont
pour la plupart trs leves. La figure 54 montre lvolution de la temprature de codistillation dun mlange htrogne deau et dhuile essentielle.

190

Partie Exprimentale

Figure 54: Evolution des tempratures de distillation de leau et lhuile essentielle, et du mlange eau/huile
essentielle en fonction de la pression du milieu

Pendant lentranement la vapeur, les liquides non miscibles semblent distiller


simultanment comme sil sagissait de deux compartiments spars (figure 55), bien quen
pratique, ils soient mls. Or leurs vapeurs constituent un gaz homogne. On parle alors de
co-distillation. Dans les deux cas, reprsents dans la figure 1, si la pression partielle de leau
est gale celle de lhuile ( P 0 E = P 0 H ), nous avons respectivement :

I
Phase liquide : mole deau = mole dhuile
Phase vapeur : mole deau = mole dhuile

II
mole deau >mole dhuile
mole deau = mole dhuile

La pression totale ( PT ) est indpendante des quantits deau et dhuile :


PT = P 0 E + P 0 H

O P 0 dsigne la pression partielle.

II

Figure 55: Rpartition de leau (E) et de lhuile essentielle (H) entre les phases liquide et vapeur en
fonction de la pression lors de lhydrodistillation

191

Partie Exprimentale
I.1.2. Hydrodistillation
Lhydrodistillation consiste immerger la matire premire dans un bain deau. Lensemble
est port bullition et lopration est gnralement conduite pression atmosphrique. La
distillation peut seffectuer avec ou sans recyclage communment appel cohobage ;

.
Figure 56: Montage de lhydrodistillation (type clevenger)

Le montage de type Clevenger rprsent dans la figure 56 est compos de quatre parties
principales :
Le racteur, un ballon dans lequel on introduit la matire vgtale et leau
La colonne, un cylindre en verre plac au-dessus du racteur qui recueille la phase vapeur
Le rfrigrant dans lequel se recondensent les vapeurs
Le vase florentin dans lequel vont dcanter les phases organique (huile essentielle) et aqueuse
(eau aromatique).
Calcul de la teneur en matire sche et du rendement en huile essentielle
La teneur en eau et en matires volatiles (ou humidit) relative, est dtermine selon la
norme franaise NF V 03-909. Elle correspond la perte de masse subie par lchantillon
aprs chauffage dans une tuve 103 2 C jusqu poids constant. La teneur en eau et en
matires volatiles est exprime en pourcentage massique :

% Eau =

m1 m2
* 100 = ( H )
m1 m0

192

Partie Exprimentale
O :
m0 est la tare de la coupelle en g
m1 est la masse de la coupelle et de la prise dessai avant chauffage en g
m2 est la masse de la coupelle et du rsidu aprs chauffage jusqu poids
constant en g

Exprime aussi en pourcentage en masse, la teneur en matire sche de lchantillon, se


dduit de la valeur de H :

% Matire Sche = 100 H =

m 2 m0
*100
m1 m0

Trois mesures ont t effectues sur le mme chantillon. Ensuite le rendement de chaque
hydrodistillation est calcul, en effectuant un rapport entre la masse de lhuile essentielle
obtenue et la masse de la matire vgtale sche utilise.

193

Partie Exprimentale
I.1.3. Hydrodistillation dAchillea millefolium
Une fois que la matire vgtale est rcolte, la partie arienne de la plante est rcupre et
nettoye de la terre et des autres herbes contaminantes. Trie et nettoye, la matire vgtale
est introduite dans un ballon de 5 litres aprs avoir t coupe en petits morceaux.
Lextraction a t rpte 6 fois. La quantit deau et la masse de matire vgtale ont t
identiques. Pour chaque extraction 500 g de la partie arienne ont t mixs avec 4 litres deau
distille, puis hydrodistills pendant 3 heures. (Figure 57)

Figure 57: Hydrodistillation de l'Achille millefeuille

A la fin de lhydrodistillation lhuile essentielle de couleur jaune tendance verte est


rcupre laide dune pipette pasteur, et mise dans un petit flacon bouchon en tflon tar
afin de calculer le rendement.

I.1.4. Hydrodistillation de Calamintha grandiflora


Les sommits fleuries ont t enleves et 300 g de la partie arienne (tiges et feuilles) ont t
coups en petits morceaux et introduits dans le ballon de 5 litres contenant 3 litres deau
distille. Lensemble est distill pendant 3 heures, afin de rcuprer lhuile essentielle dans un
flacon tar pour une analyse chromatographique ultrieure. Les conditions dextraction par
hydrodistillation du Th dAubrac ont t rptes 3 fois.

194

Partie Exprimentale
I.1.5. Hydrodistillation de Tanacetum balsamita
400 g de la partie arienne (tiges et feuilles) ont t coups en petits morceaux et introduits
dans le ballon de 5 litres et mixs avec 3,5 litres deau distille. Lensemble est hydrodistill
pendant 3 heures, afin de rcuprer lhuile essentielle dans un petit flacon tar stocke 4C
pour une analyse chromatographique ultrieure.

Les conditions dextraction par

hydrodistillation de la Balsamite ont t rptes 3 fois.

I.1.6. Hydrodistillation de Myrrhis odorata


500 g de la partie arienne (tiges et feuilles) ont t coups en petits morceaux et introduites
dans le ballon de 5 litres contenant 4 litres deau distille. Lensemble est distill pendant 3
heures, afin de rcuprer la fin lhuile essentielle stock 4C dans un flacon tar pour une
analyse chromatographique ultrieure. Les conditions dextraction par hydrodistillation de
Myrrhis odorata ont t rptes 3 fois.

I.1.7. Hydrodistillation de Monarda didyma


Les sommits fleuries ont t enleves et 480 g de la partie arienne (tiges et feuilles) ont t
coups en petits morceaux et introduits dans un ballon de 5 litres contenant 4 litres deau
distille. Lensemble est distill pendant 3 heures, un liquide jauntre (huile essentielle) est
rcupr et mis dans un flacon tar et stock 4C pour une analyse chromatographique
ultrieure. Les conditions dextraction par hydrodistillation de Monarda didyma ont t
rptes 3 fois.

I.2. Extraction des composs organiques volatils (COVs)


I.2.1. Microextraction en phase solide (SPME)
La micro-extraction en phase solide est une mthode complmentaire dextraction par la
caractrisation des COVs. Elle prsente lavantage de regrouper toutes les tapes de la
prparation dun chantillon (extraction, concentration et transfert au chromatographe) en un
seul procd. En particulier, elle peut se rvler une meilleure mthode pour les analyses qui
requirent des extractions longues et coteuses et ncessitent une grande consommation de
solvants.
La SPME utilise une fibre de silice (1 2 cm de long) recouverte dun film polymrique
qui permet dadsorber ou dabsorber les composs organiques dun chantillon (Burgot et al.,
2003). De nombreuses fibres polaires, apolaires ou mixtes sont actuellement disponibles
(tableau 27). La fibre peut se rtracter lintrieur dune aiguille, qui est place dans un

195

Partie Exprimentale
support pour lchantillonnage et la dsorption. Lchantillon est plac dans un flacon serti
par un septum en tflon. Laiguille perce le septum pour permettre lintroduction de la fibre
dans lespace de tte de lchantillon ou son immersion dans un chantillon liquide. Une fois
lextraction termine, la fibre est retire et dsorbe directement dans linjecteur dun CPG.
La fibre est ensuite reconditionne par chauffage dans linjecteur pendant 5 15 min ou dans
un module de conditionnement pour les chantillonneurs automatiques.
Tableau 27: Fibres disponibles pour lanalyse des COVs

TC maximale
Nature de la phase stationnaire

Polarit

dutilisation

Composs extraits

Polydimthylsiloxane (PDMS), 100 et 30m

Apolaire

280

Composs volatils
Composs semi-

Polydimthylsiloxane (PDMS), 100 et 30m

Apolaire

340

Polydimthylsiloxane/divinylbenzne (PDMS/DVB)
30/50 m

volatils et apolaires
Composs volatils

Bipolaire

270

polaires
Composs semi-

Polyacrylate (PA) 85 m

Polaire

320

volatils polaires
Composs gazeux et

Carboxen/divinylbenzne (CAR/PDMS) 85m

Bipolaire

320

trs volatils

Carbowax/divinylbenzne (CW/DVB) 65 et 70 m

Polaire

260

Composs polaires

Divinylbenzne/Carboxen/polydimthylsiloxane

Composs volatils et

(DVB/CAR/PDMS) 50/30m

Bipolaire

196

270

semi-volatils

Partie Exprimentale

I.2.2. Choix de la fibre SPME


En effet, il est ncessaire de dterminer la fibre la plus efficace, les temps et les tempratures
dincubation et dchantillonnage, pour chaque chantillon.
PDMS
8,E+05

CAR/PDMS

7,E+05

DVB/CAR/PDMS

aire du pic

6,E+05
5,E+05
4,E+05
3,E+05
2,E+05
1,E+05
0,E+00
0

10

15

20

Temps de pigeage (min)

Figure 58: Aire du pic de la pulgone en fonction du temps de pigeage et de la nature de la fibre
SPME 20 C

En

effet, la quantit du compos cible adsorbe dpend fortement des conditions dextraction :
temprature, temps dincubation et dextraction, agitation, volume de lchantillon et de la
phase gazeuse. Elle dpend galement de la nature, de lusure de la phase dextraction (perte
de sa capacit dadsorption ou de sorption au cours du temps) et de la nature des autres
constituants caractrisant le mlange
Diffrents types de fibres SPME (PDMS, Carb/PDMS et DVB/Carb/PDMS) ont t testEs,
afin doptimiser les conditions dextraction des composs organiques volatils mis par
lcrasement des feuilles de Calamintha grandiflora dans le systme CFD.

II. Analyses chimiques et sensorielles des huiles essentielles et des COVs


Une fois lextrait le plus reprsentatif obtenu, lanalyse permet didentifier et de quantifier les
produits qui le composent.

II.1. Analyse par chromatographie phase gazeuse


La sparation et lidentification des constituants volatils dun extrait prsentent bien moins
dalternatives que sa prparation. En effet, la CPG est la mthode de rfrence pour lanalyse
des huiles essentielles et des COVs (Lehotay et al., 2002) ; elle permet lanalyse de mlanges,
qui peuvent tre trs complexes, de nature et de volatilit trs varies (Arpino et al., 1995). La

197

Partie Exprimentale
diversit des mthodes dinjection, de dtection et le grand choix de colonnes permettent des
analyses de plus en plus efficaces. Comme toutes les mthodes chromatographiques, la CPG
repose sur le principe de migration diffrentielle des constituants dun mlange travers une
phase stationnaire. La CPG est base sur la partition des composs injects entre une phase
stationnaire (liquide ou solide) et une phase mobile gazeuse. Durant leur passage travers la
colonne, les composs analyss se rpartissent entre la phase mobile et la phase gazeuse
suivant les rgles physico-chimiques de partition (gaz-liquide) ou dadsorption (gaz-solide).
Chaque constituant du mlange analys parcourt la colonne chromatographique et en sort
des temps diffrents (temps de rtention) sur la base de ses proprits physico-chimiques
propres, de la nature de la phase stationnaire, de la longueur, du diamtre interne de la
colonne, mais aussi de la programmation de temprature du four et du dbit du gaz vecteur.
Le calcul dindice de rtention permet de saffranchir de la variabilit des temps de rtention
avec les conditions opratoires (Castello, 1999). Pour un compos donn, il ne dpend que de
la phase stationnaire et non des conditions chromatographiques, ce qui a permis la publication
de

banques

de

donnes

dindices

de

rtention

relatifs

diffrentes

phases

stationnaires(Kovats, 1958; Jennings, 1980; Davies, 1990; Adams, 2001). Le calcul sappuie
sur le principe suivant : lorsquon injecte un mlange de composs appartenant une srie
homologue de n-alcanes ou desters mthyliques linaires, les temps de rtention croissent
linairement avec le nombre datomes de carbone (n) (alcanes ou esters) correspondants.
Initialement dvelopp par Kovats en mode isotherme(Kovats, 1958), le calcul des indices de
rtention a volu pour tenir compte de la programmation de temprature. Ainsi, lquation
linaire dveloppe par Vandendool et Kratz(Vandendool et al., 1962) est utilise pour
calculer les indices de rtention pour chaque compos analyss en programmation de
temprature. La formule est base sur les temps de rtention de deux alcanes ( n et n + 1
atome de carbone) qui encadrent le compos inconnu (X) sur le chromatogramme :

IRX = 100n + 100[(tR(X) tR(n)) / (tR(n+1) tR(n))]

II.1.1. Dtecteurs
Le dtecteur FID sest impos comme un dtecteur universel de choix en CPG. En effet, il
possde de nombreux avantages. Il est trs sensible presque tous les composs organiques,
sa rponse est linaire en concentration et il montre une bonne stabilit de la ligne de base,
son temps de rponse est rapide et il est simple dusage et dentretien.

198

Partie Exprimentale
II.2. Les mthodes couples
II.2.1. Chromatographie en phase gazeuse / spectromtrie de masse
La simplicit du couplage entre ces deux techniques, les progrs accomplis dans le traitement
en temps rel du signal, la constitution de banques de donnes de spectres de masse et le
dveloppement des algorithmes de comparaison entre le spectre dun compos inconnu avec
ceux rpertoris dans la banque sont lorigine de la gnralisation de lusage de la CPG/SM
dans les laboratoires danalyse des composs aromatiques. La CPG sur colonne capillaire
constitue une excellente mthode dintroduction de lchantillon dans le spectromtre de
masse. Ainsi, la colonne capillaire est directement couple la source dions permettant
lionisation en impact lectronique.
Le couplage CPG/SM impose peu de contraintes techniques. Seul lhlium peut tre utilis
comme gaz vecteur car les ions He+ forms lors de lionisation lectronique ninterfrent pas
avec ceux de lanalyte en raison de leur faible rapport m/z. Tous les types dinjecteurs sont
utilisables et les appareils actuels utilisent exclusivement des colonnes capillaires.
la sortie du chromatographe, la colonne capillaire entre dans le spectromtre de masse, via
une ligne de transfert qui est simplement un cylindre chauff une temprature suprieure la
temprature finale programme pour lanalyse chromatographique. Le couplage avec un
analyseur quadripolaire ncessite un vide de 104 105 mbar. Ce vide est ncessaire
llimination des molcules rsiduelles comme lazote, leau, et les composs lus qui
nauraient pas t ioniss et qui peuvent alors polluer le spectromtre de masse et gner
lanalyse.

II.2.2. Protocoles des analyses quantitatives et qualitatives des huiles essentielles


Les huiles essentielles ont t analyses au moyen dun CPG-DIF-SM (Perkin Elmer Clarus
MS 500) quip dune colonne capillaire DB5-MS (30m x 0,25 mm D.I, 0,25 m paisseur de
film). La Quantit injecte est : 1L HE 10%v/v (Hexane). Le dbit dhlium dans la colonne
tait de 1,3 mL/min.
La Programmation en temprature du four : 30C durant 5 minutes, puis 5C/min jusqu'
250C et 10 minutes 250C. La temprature de linjecteur est de 250C et celle du dtecteur
DIF est de 250C. On a appliqu un split de 50 : 1.
Les spectres de masse sont enregistrs en mode dimpact lectronique avec une nergie
dionisation de 70 eV.
Lidentification des composs est base sur les comparaisons des indices de rtention
exprimentaux (IR) et bibliographiques (Kondjoyan et al., 1996; Adams, 2001) et des
199

Partie Exprimentale
spectres de masse exprimentaux et contenus dans les bases de donnes NIST 2005 et
WILEY (275L).

II.2.3. Chromatographie en phase gazeuse / olfactomtrie (CPG/O)


Les huiles essentielles obtenues renferment trs souvent des centaines de composs volatils.
Le couplage CPG/O combine la sparation des composs volatils par CPG avec lvaluation
olfactive. En sortie de colonne, une partie des composs lus est envoye vers un cne de
dtection nasale qui permet lvaluation olfactive en mme temps que lenregistrement du
chromatogramme.
Tous les types de dtecteurs peuvent tre utiliss en parallle au port dolfaction, mais ce sont
les dtecteurs FID ou de masse qui sont les plus frquemment utiliss.
Afin davoir un langage commun, il est prfrable dutiliser un vocabulaire normalis pour
dcrire les odeurs. Le Champs des odeurs introduit par J. N. Jaubert (Jaubert et al., 1987;
Jaubert et al., 1987) trouve son intrt dans la formation des oprateurs et est bien adapt aux
tudes CPG/O.
Les huiles essentielles obtenues ont t injectes (0.05l) sur un CPG-SM (Agilent 5973
Network) quip dune colonne DB5 (0.25mm x 30m, 0.25m), pour laquelle la
programmation de temprature est la suivante : 30C durant 5 minutes, un gradient de
5C/min jusqu'au 250C et 10 minutes disotherme 250C.
Les analyses ont t ralises en triplicata, par lintermdiaire de deux exprimentateurs (J):
n = 2J x 1,5 rptitions ou n= 2J x 2 rptitions selon les cas.

II.3. Etablissement des pyramides olfactives


Elle consiste reprer les diffrentes notes dominantes dans lhuile essentielle comme on le
ferait pour un parfum. On suit lvolution de lodeur des huiles essentielles sur une mouillette
afin de dterminer les notes de tte, notes de cur et notes de fond. Une dilution de 1/10 dans
lthanol anhydre pour chaque huile essentielle a t effectue. On trempe des mouillettes
dans chaque solution dhuile essentielle dilue, et on suit lvolution des notes en fonction du
temps.
Lodeur volue dans le temps et ne laisse pas les mmes traces partir du moment o on
commence sentir les mouillettes et quelques heures aprs. Suivant leur composition, certains
effluves sont plus tenaces et dautres moins, les plus rsistants persistent et les plus phmres
svaporent et disparaissent. Les diffrents lments constitutifs dune huile essentielle sont
regroups dans les trois familles de notes olfactives.

200

Partie Exprimentale
Dure approximative de persistance des notes
- Notes de tte : de 0 2h00
- Notes de cur : de 2h00 4h00
- Notes de fond : de 4h00 jusqu' 24h00

Notes de Tte :
Cest la note que lon distingue en premier. Les lments constitutifs sont plutt phmres et
lgers. Lodeur persistera jusqu' environ 2 heures. Ce sont les odeurs les plus perceptibles
mais les plus volatiles. Elles sont gnralement fraches et vives et donnent la premire
impression olfactive dune composition aromatique.

Notes de Cur :
Quand la note de tte commence sattnuer, la note de cur prend sa place. Elle peut durer
entre 2 h et 4h. La note de cur est moins intense mais tient plus longtemps. Cest cette note
qui constitue le cur du parfum, comme son nom lindique et qui donne le thme
principal du mlange aromatique.

Notes de Fond :
Cest la note qui fait durer la composition aromatique dans le temps, qui laisse des souvenirs
de celle-ci. Les notes de Tte et de Cur sappuient sur cette note de Fond qui peut durer
jusqu' 24 h, voir plusieurs jours. Les ingrdients de cette note sont trs tenaces.

III. Extraction des antioxydants partir des rsidus dhydrodistillation


III.1. Principe dextraction par soxhlet
Un extracteur Soxhlet est une pice de verrerie utilise en chimie analytique et en chimie
organique qui permet de faire lextraction continue par solvant dun solide (figure 59). Il se
compose dun corps en verre (4) dans lequel est plac une cartouche en papier filtre pais (5),
dun tube siphon (6/7) et dun tube dadduction (3). Le corps de lextracteur est plac sur un
ballon (2) contenant le solvant dextraction. Les

rsidus extraire sont placs dans

lextracteur surmont dun rfrigrant (9).


Quand le ballon est chauff, les vapeurs de solvants passent par le tube adducteur, se
condensent dans le rfrigrant et retombent dans le corps de ladducteur, faisant ainsi macrer
les rsidus dans le solvant. Le solvant condens saccumule dans lextracteur jusqu atteindre
le sommet du tube siphon, qui provoque alors le retour du liquide dans le ballon, accompagn
des substances extraites. Le solvant contenu dans le ballon senrichit progressivement en
composs solubles. La taille du corps en verre tant limite, il peut tre ncessaire de raliser

201

Partie Exprimentale
plusieurs extractions successives pour rcuprer une quantit suffisante dextraits.
Lextraction chaud peut dgrader certaines substances chimiques.

Figure 59: Soxhlet

III.2. Extraction des antioxydants


Suite lhydrodistillation des plantes, les rsidus dhydrodistillation sont rcuprs du ballon
filtr afin denlever leau, et schs pendant 4 heures dans une tuve 80C. Environ 30 g de
rsidus dhydrodistillation schs de chaque plante sont introduits dans le corps en verre, o
du coton a t introduit en bas du corps afin dviter le passage de la matire vgtale dans le
ballon contenant 100 mL du solvant organique. Le systme est chauff reflux pendant 6
heures, jusqu la dcoloration de la matire vgtale.
Pour chaque plante, trois diffrents solvants ont t utiliss pour lextraction (mthanol,
thanol et actone), les extractions ont t faites en triplicata.

IV. Evaluation de lactivit antioxydante des rsidus dhydrodistillation par


la mthode de DPPH
IV.1. Prparation des chantillons doser
Suite lextraction soxhlet des rsidus dhydrodistillation, le solvant organique de couleur
vert fonc enrichi en antioxydants est rcupr, et concentr par vaporation sous vide
pendant une demi-heure. Un liquide visqueux est obtenu puis concentr nouveau pendant

202

Partie Exprimentale
une heure sous azote liquide jusqu' vaporation totale du solvant. Un extrait visqueux de
couleur verte trs fonce est alors obtenu.
20 mg de cette matire visqueuse sont dissouts dans 500L de solvant organique (mthanol,
thanol ou actone, suivant le solvant avec lequel lextraction a t faite), lensemble est mis
dans un vials puis soumis aux ultrasons pendant 15 minutes afin de favoriser la dissolution
totale de la matire visqueuse.
On prpare 6 chantillons de concentrations dcroissantes partir de la solution mre obtenue
aprs dissolution complte de lextrait. La couleur des solutions prpares diminue
progressivement jusqu' obtention dune solution transparente.

IV.2. Dosage spectrophptomtrique par la mthode du DPPH des solutions issues des
rsidus dhydrodistillation
La mthode de DPPH, consiste utiliser un radical stable, 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl
(DPPH) dans du mthanol (la plupart des cas). La rduction du DPPH est contrle en
mesurant labsorbance de la solution une longueur donde caractristique (515 nm). A cette
longueur donde le radical absorbe, mais aprs sa rduction par lantioxydant (AH) ou un
autre radical, labsorption diminue(Dvaranauskaite et al., 2008).
On prpare une solution pour laquelle on dissout 1,2 mg dans 50 mL de mthanol, par suite
labsorbance de la solution de couleur rouge violette est de 0,8 = 515 nm.
Les dosages sont effectus dans des microcuvettes en quartz (OS), o on mlange 2 ml de la
solution de DPPH avec 50L de la solution doser. Labsorbance est ensuite mesure aprs
30 minutes. Les mesures ont t faites en triplicata.

IV.2.1. Calcul du pourcentage dinhibition (%I) et de la concentration inhibitrice


minimale (IC50)
I est calcul suivant la formule suivante :
% I = ABS30 ABS0
ABS30
O :
ABS30 : absorbance t=30 min
ABS0 : absorbance t= 0 min
La concentration inhibitrice minimale (IC50) est estime par extrapolation I=50% en traant
la courbe % I = f ([concentration]), (voir figure 60).

203

Partie Exprimentale

Variation du pourcentage d'inhibition (%I) en


fonction de la concentration y = 17,209x
2

R = 0,9878

60
50
%I

40
30
20
10
0
0

1
2
3
concentration (mg/mL)

Figure 60: estimation de lIC50

V. Evaluation de lactivit antioxydante des huiles essentielles


V.1. Evaluation de lactivit antioxydante des huiles essentielles par la mthode Oxipress
La mthode Oxipress est trs avantageuse car elle ne ncessite pas de phase de prtraitement
dchantillon. La capacit de lantioxydant protger laliment ou la matire lipidique est
mesure. Les rsultats sont reproductibles et facilement interprtables et comparables grce
des paramtres physiques calculs via cette mthode.
Lhuile de tournesol a t utilise comme vecteur, ou comme matrice lipidique. Des modles
dhuiles infuses ont t prpars, dans lesquels lhuile essentielle est mlange en
proportions massiques diffrentes (0,05, 0,1 et 0,2%) avec de lhuile de tournesol en
appliquant 5 minutes dultrasons. Lappareil Oxipress (Mikrolab Aarhus) est quip de deux
cellules de mesure en acier (figure 61). Lchantillon (huile infuse) est dos 0,001g prs
directement dans un tube racteur en pyrex. Ce dernier est plac dans une cellule en acier,
dans laquelle, on applique un lavage loxygne, deux trois fois, avant de serrer la cellule et
dappliquer une pression en O2 constante de 5 bars. Ensuite lensemble, cellule et racteur est
plac dans un thermostat spcifique rgl 110C o le changement de la pression en
fonction du temps est enregistr.

204

Partie Exprimentale

Robinet doxygne
Thermostat

Cellule en Acier

Figure 61: systme Oxipress

La priode dinduction est calcule en fonction du temps ncessaire pour que la pression
commence chuter brusquement. Elle est mesure via le point de rencontre des deux
tangentes de la premire et la deuxime partie de la courbe sur la figure 62.
Pour l'analyse des huiles comestibles, les conditions optimums sont les suivants : 5,0g
dchantillon, soumis une pression de 0,5 MPa et une temprature de 110C.
Les analyses ont t excutes en triplicata. L'cart-type dans tous les cas tait compris contre
0,1 et 1 % en moyenne. Un blanc (huile de tournesol) a t prpar, dans une cellule adjacente
dans les mmes conditions, sans ajouter dadditif.
Les changements de la priode d'induction (PI) en fonction de chaque huile essentielle aux 3
concentrations diffrentes ont t dtermins. Le facteur de protection (PF) (Bandoniene et
al., 2000) de lhuile de tournesol ainsi que les activits antioxydantes (AA) des huiles
essentielles ont t calculs par lintermdiaire des formules suivantes :
PF = PIX/PIK;
AA = PIX- PIK /PIBHT- PIK ;
O: PIX: priode dinduction de lchantillon en prsence de ladditif (huile essentielle), h;
PIK: priode dinduction de lchantillon en absence de ladditif, h;
PIBHT: priode dinduction de lchantillon en prsence du BHT, h ;

205

Partie Exprimentale

Evolution de la pression d'oxygne dans le racteur


d'oxipress

pression (bar)

6.8

huile de
tournesol
huile infus

6.6
6.4
6.2
6
5.8
5.6
5.4
5.2
5
0

temps (h)

Figure 62: Cintique de l'oxydation de l'huile de tournesol en prsence ou pas d'un additif, 110C et
5bars

V.2. Evaluation de lactivit antioxydante de lhuile essentielle par des mthodes


spectroscopiques (dines et trines conjugus)
Des modles dhuiles infuses ont t prpars, en mlangeant les huiles essentielles dans de
lhuile de tournesol des concentrations massiques diffrentes (0,05 et 0,1%) en appliquant 5
minutes dultrasons pour chaque cas.
Les huiles infuses sont places dans des cuves hermtiquement fermes, quon introduit dans
une tuve 80C, pour un dosage spectromtrique ultrieur.
A chaque mesure, on prlve 0,05 g de chaque huile infuse, cette dernire sera dilue et
mlange avec lhexane dans une fiole jauge de 25 mL. Les solutions prpares sont
mesures dans des micro-cuvettes de quartz laide dun spectrophotomtre (Varian Cary
219), en utilisant lhexane comme blanc. Labsorbance est mesure une longeur donde de
232 nm (dines conjugus) et 268 nm (trines conjugus). Labsorbance (E) est calcule pour
1% de solution suivant la formule suivante (Miliauskas, 2006):
E1% = A x C-1 x d-1
O : A : absorbance mesure
C : concentration de lchantillon g/100mL
d : diamtre de la microcuvette, 1cm

206

Partie Exprimentale

VI. Evaluation de lactivit antimicrobienne


VI.1. Evaluation de lactivit bactricide par la mthode de diffusion sur Agar
Neuf bactries ont t utilises pour valuer lactivit antimicrobienne via la mthode
dAgar(Sipailiene et al., 2006). Des bactries Gram positif, Bacillus subtilis, Bacillus
cereus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, et Gram ngatif pathognes,
Salmonella typhymurium, Salmonella typhymurium D338, Salmonella enteritidis, Salmonella
agona et Escherichia coli. Les bactries ont t ensemences dans de lAgar (CM 325 Oxiod)
et laisses pendant 24 heures 37C. Aprs culture, un inoculum des cellules bactriennes est
introduit dans un bouillon nutritif et mix via un minishaker MS 1 (Wilmington, USA). Les
suspensions cellulaires ont t ajustes suivant la norme McFarland N 0.5 Standard. Les
suspensions bactriennes dissoutes dans 2 mL de liquide nutritif sont mlanges avec lAgar.
10 ml de la solution dAgar sont dposs dans des boites de ptri (90 mm). Une fois lAgar
glifi, des puits de 8 mm sont cres dans lesquels 10L de solution mthanolique dhuile
essentielle deux diffrentes concentrations massiques (0,5 et 1%) sont introduites via des
micropipettes jauges. Certains puits ont t remplis par du mthanol afin de connatre leffet
du solvant. Aprs une incubation dune nuit 37C, les diamtres dinhibition sont mesurs
par lintermdiaire dun pied coulisse 0,1 mm prs. Les essais ont t effectus en
triplicata pour chaque huile essentielle et pour chaque espce bactrienne.Lantibiotique
(ceftazidine/clavulanic acid, 30/10g (BBL, CAZ/CLA, 231753) a t utilis comme rfrence.
Un disque dantibiotique a t dpos sur chaque boite de ptrie.

VI.2. Evaluation de lactivit antimicrobienne par la mthode de micro dilution


Deux bactries Gram positif, Bacillus cereus, Staphylococcus aureus et une Gram ngatif,
Salmonella typhymurium ont t utilises dans cette mthode. L'activit antimicrobienne a t
dtermine par des essais de micro-titrage sur des plaques de microtitration (Holo et al.,
1991). Chaque puits de plaque de microtitration (Sarstedt, Nmbrecht, Allemagne) contient
50 L dune solution thanolique dhuile essentielle et 150L des solutions dilues de
bactries cultives pendant 12 heures. Les plaques ont t incubes 37C pour 24 heures. La
croissance microbienne a t dtermine par absorbance 620 nm en utilisant un lecteur de
microplaque (Multiskan Ascent, Thermo Fisher Scientific, Loughborough, UK). La
concentration minimale inhibitrice (CMI) reprsente la concentration de lhuile essentielle
ncessaire pour inhiber 50% de la croissance des bactries

207

Partie Exprimentale

208

Rfrences Bibliographiques

Rfrences Bibliographiques

209

Rfrences Bibliographiques

210

Rfrences Bibliographiques

Acquaronne, L., Corticchiato, M., Ramazotti, J. et Raoul, J.L. (1998) "Growing of Monarda
fistulosa in France and getting of essential oils by hydrodiffusion." Rivista Italiana
761-765.
Adams, R.P. (2001) "Identification of Essential Oil Components by Gas Chromatography /
Quadrupole Mass Spectroscopy." Allured Publishing Corp., Carol Stream (III, USA.)
AFSSAPS. (2009) "Pharmacope Franaise." Ed. St. Denis France.
Altarejos, J., Salido, S., Perez-Bonilla, M., Linares-Palomino, P.J., Van Beek, T.A.,
Nogueras, M. et Sanchez, A. (2005) "Preliminary assay on the radical scavenging
activity of the olive wood extracts." Fetoterapia, 76: 348-351.
Antolovich, M., Prenzler, P.D., Patsalides, E., McDonald, S. et Robards, K. (2002) "Methods
for testing antioxidant activity." Analyst, 127: 183-198.
Arpino, P., Prvt, A., Serpinet, J., Tranchant, J., Vergnol, A. et Witier, P. (1995) "Manuel
pratique de chromatographie en phase gazeuse." Ed. Masson, Paris.
Bandoniene, D., Pukalskas, A., Venskutonis, P.R. et Gruzdiene, D. (2000) "Preliminary
screening of antioxidant activity of some plant extracts in rapeseed oil." Food
Research International, 33: 785-791.
Barlow, S.M. (1990) "Toxicological aspects of antioxidants used as food additives." Ed.
Hudson, B.J.F, Food Antioxidants: 253-307.
Baser, K.H.C., Demirci, B., Tabanca, N., Ozek, T. et Goren, N. (2001) "Composition of the
essential oils of Tanacetum armenum (DC.) Schultz Bip., T. balsamita L., T.
chiliophyllum (Fisch. & mey.) Schultz bip. var. chiliophyllum and T. haradjani (Rech.
fil.) grierson and the enantiomeric distribution of camphor and carvone." Flavour and
Fragrance Journal, 16: 195-200.
Baser, K.H.C. et Ozek, T. (1993) "Composition of the Essential Oil of Calamintha
grandiflora." Planta Medica, 59: 390.
Beens,

J.

et

Brinkman,

U.A.T.

(2005)

"Comprehensive

two-dimensional

gas

chromatography a powerful and versatile technique." Analyst 130: 123-127.


Bermond, P. (1990) "Biological effects of food antioxidants." Ed. Hudson, B.J.F, Food
Antioxidants: 193-251.
Bertrand, B. (2003) "L'herbier oubli." Ed. Plume de carotte.
Bertrand, B. (2004) "Glaner dans les Pyrnes." Ed. Ttras.
Bestmann, H.J., Classen, B., Kobold, U., Vostrowsky, O., Klingauf, F., Strobel, H. et
Knobloch, K. (1984) "Herbal insecticides. II. Essential oil from leaves of

211

Rfrences Bibliographiques
Chrysanthemum balsamita L.. Insecticidal activity and composition." Zeitschrift fr
Naturforschung, C: Journal of Biosciences, 39: 543-547.
Bestmann, H.J., Classen, B., Vostrowsky, O., Klingauf, F. et Stein, U. (1988) "Plant
insecticides. VIII: Synergistic activity of (-)-carvone and pyrethrine I in the essential
oil of Chrysanthemum balsamita L." Journal of Applied Entomology, 106: 144-9.
Bley, L.F. (1928) Trommsdorf's Newes Jour. d. Pharm, 16: 94-120.
Bocco, A., Cuvelier, M.E., Richard, H. et Berest, C. (1998) "The antioxidant activity of
various phenolic compounds measured by an accelerated test based on citronellal
oxidation." Sci.Alim, 18: 13-23.
Brand-Williams, W., Cuvelier, M.E., Berest, C. (1995) "Use of a free radical method to
evaluate antioxidant activity." Lebensm-Wiss-Technol: 25-30.
Branen, A.L. (1975) "Toxicology and biochemistry of butylated hydroxyanisole and butylated
hydroxytoluene." Journal of the American Oil Chemists' Society, 52: 59-63.
Burgot, G. et Pellerin, F. (2003) "Microextraction en phase solide (SPME)." Techniques de
l'ingnieur. Analyse et caractrisation, P2, nP1430: 1430.1-1430.20.
Bylaite, E., Venskutonis, P.R., Roozen, J.P. et Posthumus, M.A. (2000) "Composition of
essential oil of costmary [Balsamita major (L.) Desf.] at different growth phases."
Journal of Agricultural and Food Chemistry, 48: 2409-2414.
Candan, F., Unlu, M., Tepe, B., Daferera, D., Polissiou, M., Sokmen, A. et Akpulat, H.A.
(2003) "Antioxidant and antimicrobial activity of the essential oil and methanol
extracts of Achillea millefolium subsp. millefolium Afan. (Asteraceae)." Journal of
Ethnopharmacology, 87: 215-220.
Cao, G. et Prior, R.L. (1998) "Comparison of different analytical methods for assessing total
antioxidant capacity of human serum." Clin.Chem, 44: 1309-1315.
Carnat, A.P. et Lamaison, J.L. (1991) "Composition of Leaf and Flower Essential Oil from
Monarda didyma L. cultivated in France." Flavour and Fragrance Journal, 6: 79-80.
Castello, G. (1999) "Retention index systems: alternatives to n-alkanes as calibration
standards." Journal of Chromatography A, 842: 51-64.
Cavar, S., Maksimovic, M., Solic, M., Jerkovic-Mujkic, A. et Besta, R. (2008) "Chemical
composition and antioxidant and antimicrobial activity of two Satureja essential oils "
Food Chemistry, 111: 648-653.
Chaintreau, A. (2001) "Simultaneous distillation-extraction: from birth to maturityreview."
Flavour and Fragrance Journal, 16: 136-148.

212

Rfrences Bibliographiques
Chen, J.H. et Ho, C.T. (1997) "Antioxydant Activity of caffeic acid and its related
hydroxcinnamic acid compounds." Journal of Agricultural and Food Chemistry, 45:
2374-2378.
Cisowski, W. (1985) "Flavonoid compounds in Myrrhis odorata (L.) Scop." Herba Polonica,
31: 13-19.
Cuvelier, M., Richard, H. et Berset, C. (1992) "Comparaison of the antioxydant activity of
some acid-phenols: structure-activity relationship." Bioscience Biotechnology and
Biochemistry 56: 324-325.
Da Costa, N.C. et Eri, S. (2005) "Identification of Aroma Chemical." Chemistry and
Technology of Flavors and Fragrances: 12-31.
Dalluge, J., Beens, J. et Brinkman, U.A.T. (2003) "Comprehensive two-dimensional gas
chromatography: a powerful and versatile analytical tool." Journal of chromatography
A, 1000: 69-108.
Dalton, D.A. (1995) "Antioxidant defences of plants and fungi." Ed. Oxidative Stress and
Antioxidant Defences in Biology: 298-355.
Dapkevicius, A. (1998) "Antioxidant activity of extract obtained by different isolation
procedures from some Aromatic herbs grown in Lithuania." Journal of science of food
and agriculture, 77: 140-146.
Davies, N.W. (1990) "Gas chromatographic retention indices of monoterpenes and
sesquiterpenes on methyl silicone and Carbowax 20M phases." Journal of
Chromatography A, 503: 1-24.
De Gubernatis, A. (1976) "La Mythologie des plantes, Tome Premier, Botanique Gnrale."
Ed. Arche Milano.
De Gubernatis, A. (1976) "La Mythologie des plantes, Tome Second, Botanique spciale."
Ed. Arche Milano.
Decker, E.A. (1998) "Antioxydant mechanisms." Food Lipids. Chemistry, Nutrition, and
biotechnology: 397-423.
Dugo, G., Tranchida, P., Cotroneo, A., Dugo, P., Bonaccorsi, I., Marriott, P., Shellie, R. et
Mondello, L. (2005) "Advanced and innovative chromatographic techniques for the
study of citrus essential oils." Flavour and Fragrance Journal, 20: 249-264.
Dunn, M., Shellie, R., Morrison, P. et Marriott, P. (2004) "Rapid sequential heart-cut
multidimensional gas chromatographicanalysis." Journal of chromatography A, 1056:
163-169.

213

Rfrences Bibliographiques
Dvaranauskaite, A., Venskutonis, P.R., Raynaud, C., Talou, T., Viskelis, P. et
Dambrauskiene, E. (2008) "Characterization of Steam Volatiles in the Essential Oil of
Black Currant Buds and the Antioxidant Properties of Different Bud Extracts." journal
of Agricultural and Food Chemistry, 56: 3279-3286.
Economou, K.D., Oreopoulou, V. et Thomopoulous, C.D. (1991) "Antioxidant activity of
some plant extracts of the family Labiatae." Journal of the American Oil Chemists'
Society, 68: 109-111.
EL Kalamouni, C., Raynaud, C. et Talou, T. (2010) "Design of an Artificial Crushing Finger
Device for Rapid Evaluation of Essential Oils from Aromatic plants leaves."
Expression of Multidisciplinary Flavour Science, Ed. Imre Blank, Matthias Wst,
Chahan Yeretzian: 525-528.
Essawi, T. et Srour, M. (2000) "Screening of some palestinian medicinal plants for
antibacterial activity." Journal Of Ethnopharmacology, 70: 343-349.
Evans, R.J. et Reynhout, G.S. (1992) "Alternates to synthetic antioxidants." Food Science and
human Nutrition, 29: 27-42.
Finely, J.W. et Otterburn, M.S. (1993) "The consequence of free radical in foods. in
Antioxydants. chemical, physiological, nutitional and toxicological aspects."
Toxicology and industrial Health: 77-91.
Fleming Jones, M.E. et Smith, R.E. (2003) "Volatile Organic Compounds in Foods: A Five
Years Study." Journal of Agricultural and Food Chemistry, 51: 8120-8127.
Frankel, E.N. (1996) "Antioxidants in lipid foods and their impact on food quality." Food
Chemistry, 57: 51-55.
Frankel, E.N. (1998) "Lipid oxidation." The oily Press, 1st edition.
Frankel, E.N. et Meyer, A.S. (2000) "The problems of using one-dimensional methods to
evaluate multifunctional food and biological antioxidants." Journal of science of food
and agriculture, 80: 1925-1941.
Fraternale, D., Giamperi, L., Bucchini, A. et Ricci, D. (2006) "Chemical Composition,
Antifungal and In Vitro Antioxidant Properties of Monarda didyma L. Essential Oil."
Journal of Essential Oil Research, 18: 581-585.
Freire, R., Morais, S., Catunda-Junior, F. et Pinheiro, D. (2005) "Synthesis and antioxidant,
anti-inflammatory and gastroprotector activities of anethole and related compounds."
Bioorganic and medicinal chemistry 13: 4353-4358.
Friedman, M., Henika, P.R. et Mandrell, R.E. (2002) "Bactericidal activities of plant essential
oils and some of their isolated constituents against Campylobacter jejuni, Escherichia
214

Rfrences Bibliographiques
coli, Listeria monocytogenes, and Salmonella enterica." Journal of Food Protection,
64: 1445-1560.
Fukumoto, L.R. et Mazza, G. (2000) "Assessing antioxidant and prooxidant activities of
phenolic compounds." Journal of Agricultural and Food Chemistry, 48: 3597-3604.
Gallori, S., Flamini, G., Bilia, A.R., Morelli, I., Landini, A. et Vincieri, F.F. (2001) "Chemical
Composition of Some Traditional Herbal Drug Preparations: Essential Oil and
Aromatic Water of Costmary (Balsamita suaveolens Pers.)." Journal of Agricultural
and Food Chemistry, 49: 5907-5910.
Garcia-Plazaola, J.I. et Becerril, J.M. (1999) "A rapid HPLC method to measure lipophilic
antioxidants in stressed plants: simultaneous determination of carotenoids and
tocopherols." Phytochemical Analysis, 10: 307-313.
Garnero, J. (1996) "Huiles essentielles." Techniques de lingnieur, 45: 10.
Gebicki,

J.M.

et

Guille,

J.

(1989)

"Spectophotometric

and

High-performance

Chromatographic assays of hydroperoxides by the iodometric technique." Anal.


BioChem, 176: 360-364.
Goeckeritz, D. (1968) "Essential oil of Chrysanthemum balsamita." Pharmazie, 23: 515-518.
Grualbo, R.P., Ses, J.A. et Villar, L. (1993) "Nouvelle localit de Calamintha grandiflora
(L.) Moench (Labiatae) dans les Pyrnes espagnoles." Le monde des plantes, 447: 710.
Hachey, J., Collin, M., Gagnon, S.S., Simard, S., Dufour, S. et France-Ida, J. (1990)
"Extraction and GC/MS Analysis of the essential oil of Achillea millefolium L.
Complex (Compositae)." Journal of Essential Oil Research, 2: 317-326.
Hajji, S., Beliveau, J. et Simon, D. (1985) "Comparative study of an essential oil obtained
according

to

two

different

extraction

procedures:

steam

distillation

and

hydrodiffusion." Actes - Colloq. Int. Plant. Aromat. Med. Maroc: 229-230.


Halliwell, B. (1995) "Antioxydant characterisation. ." Methodology and mechanism, 49:
1341-1348.
Hanaoka, K., Sieffermann, J.-M. et Giampaoli, P. (2000) "Effects of the sniffing port air
makeup in gas chromatography-olfactometry." Journal of Agricultural and Food
Chemistry, 48: 2368-2371.
Hanasaki, Y., Ogawa, S. et Fukui, S. (1994) "The correlation between active oxygen
scavenging and oxidative effects of flavonoids." Free.Rad.Biol.Med, 16: 845-850.

215

Rfrences Bibliographiques
Hao, Y.Y., Brackett, R.E. et Doyle, M.P. (1998) "Efficacy of plant extracts in inhibiting
Aeromonas hydrophila and Listeria monocytogenes in refrigerated, cooked poultry."
Food Microbiology, 15: 367-378.
Heath, H.B. (1981) "Source book of flavours." Ed. Springer, 1st edition.
Heilman, J., Merfort, I. et Weiss, M. (1995) "Radical Scavenging activity of different 3',4'
dihydroxyflavonols

and

1,5-dicaffeoylquinic

acid

studied

by

inhibition

of

chemiluminescence." Planta Medica, 61: 435-438.


Heinrich, G., Schultze, W., Pfab, I. et Boettger, M. (1983) "The site of essential oil
biosynthesis in Poncirus trifoliata and Monarda fistulosa." Physiologie Vegetale, 21:
257-268.
Hiramatsu, M., Yoshikawa, T. et Inoue, M. (1994) "Food and free radicals." Proceedings of
the first symposium on Food and Free radicals, Yamagata, Japan.
Hoffman, F. (1935) "De Millefolio, germanice Schaaf-garden." American Journal of
Pharmacy, 107: 33.
Holo, H., Nilssen, O. et Nes, I.F. (1991) "Lactococcin A, a New Bacteriocin from
Lactococcus lactis subsp. cremoris: Isolation and Characterization of the Protein and
Its Gene." Journal of Bacteriology, 173: 3879-3887.
Huang, D., Ou, B. et Prior, R.L. (2005) "The chemistry behind antioxidant capacity assays."
Journal of Agricultural and Food Chemistry, 53: 1841-1856.
Hussain, R.A., Poveda, L.J., Pezzuto, J.M., Soejarto, D.D. et Kinghorn, A.D. (1990)
"Sweetening agents of plant origin: phenylpropanoid constituents of seven sweettasting plants." Economic Botany, 44: 174-182.
Ivancheva, S. et Tsvetkova, R. (2003) "Distribution of flavonoid aglycones in tribe
Anthemideae (Asteraceae)." Advances in Phytochemistry: 85-95.
Jacobson, G.A. (1993) "Evaluation of oxidized lipids in food." Inform, 4: 811-819.
Jaimand, K. et Rezaee, M.B. (2005) "Chemical constituents of essential oils from Tanacetum
balsamita L. ssp. balsamitoides (Schultz-Bip.) Grierson. from Iran." Journal of
Essential Oil Research, 17: 565-566.
Jaubert, J.N., Gordon, G. et Dor, J.C. (1987) "Une organisation du champ des odeurs.
Deuxime partie : modle descriptif de lorganisation de lespace odorant." Parfums,
Cosmtiques et Armes, 78: 71-82.
Jaubert, J.N., Gordon, G. et Dor, J.C. (1987) "Une organisation du champ des odeurs.
Premire partie : recherche de critres objectifs. ." Parfums, Cosmtiques et Armes,
77: 53-56.
216

Rfrences Bibliographiques
Jennings, W., Shibamoto, T. (1980) "Qualitative analysis of flavor and fragrance volatiles by
glass capillary gas chromatography." Academic Press, New York.
Kalinkina, G.I., Dembitsky, A.D. et Berezovskaya, T.P. (2000) "Chemical composition of
essential oils of Achillea species from Siberia." Khimiya Rastitel'nogo Syr'ya: 13-18.
Kanner, J., Frankel, E., Granit, R., German, B. et Kinsella, J.E. (1994) "Natural Antioxidants
in grapes and wines." Journal of Agricultural and Food Chemistry, 42: 64-69.
Kaufmann, M. et Wink, M. (1994) "Molecular systematics of the Nepetoideae (family
Labiatae): phylogenetic implications from rbcL gene sequences." A Journal of
Biosciences 49: 635-645.
Kim, M.H., Chung, W.T., Kim, Y.K., Lee, J.H., Lee, H.Y., Hwang, B., Park, Y.S., Hwang,
S.J. et Kim, J.H. (2001) "The effect of the oil of Agastache rugosa O. Kuntze and three
of its components on human cancer cell lines." Journal of Essential Oil Research, 13:
214-218.
Kitic, D., Stojanovic, G., Palic, R. et Randjelovic, V. (2005) "Chemical composition and
microbial activity of the essential oil of Calamintha nepeta (L.) Savi ssp. nepeta var.
subisodonda (Borb.) Hayek from Serbia." Journal of Essential Oil Research, 17: 701703.
Koedam, A. (1982) "The influence of some distillation conditions on essential oil
composition." World Crops: Production, Utilization, Description, 7: 229-236.
Koedam, A., Scheffer, J.J.C. et Svendsen, A.B. (1980) "Comparison of isolation procedures
for essential oils. VI. Rosemary and sage." Riechstoffe, Aromen, Kosmetica, 30: 271276.
Kolb, B. (1999) "Headspace sampling with capillary columns." Journal of chromatography A,
842: 163-205.
Kondjoyan, N. et Bergdague, J.-L. (1996) "A compilation of relative retention indices for the
analysis of aromatic compounds." Laboratoire Flaveur, INRA, Clermont-Ferrand.
Kovats, E. (1958) "Gas chromatographic characterization of organic compounds, I. Retention
indexes of aliphatic halides, alcohols, aldehydes, and ketones." Helvetiva Chimica
Acta, 41: 1915-1932.
Kruma, Z., Kreicbergs, V. et Adams, A. (2006) "Volatile compounds in oils aromatized with
spices grown in Latvia." Chemine Technologija 4:74-79.
Kubeczka, K.H., Bartsch, A. et Ullmann, I. (1982) "Recent studies on essential oils of
Apiaceae." Aetherische Oele, Ergeb. Int. Arbeitstag.: 158-187.

217

Rfrences Bibliographiques
Kubo, A. (1995) "Antimicrobial Agents from Tanacetum Balsamita." Journal of natural
products, 58: 1565-1569.
Kudrzycka-Bieloszabska, F.W. et Sawicka, W. (1970) "Myrrhis odorata as a source of
anethole. III. Gas chromatography of the essential oil." Acta Poloniae Pharmaceutica,
27: 313-317.
Labuza, T.P. (1971) "Kinetics of lipid oxidation in foods." Critical Reviews in Food and
Technology, 2: 355-405.
Larson, R.A. (1997) "Naturally occuring antioxidants." Ed. Boca raton.
Le rseau de la botanique francophone. "http://www.tela-botanica.org."
Leclerc, H. (1949) "Histoire et pharmacologie de la balsamite, Tanacetum balsamita L."
Journal de mdecine et de chirurgie pratiques, 120: 228-31.
Lehotay, S.J. et Hajslova, J. (2002) "Application of gas chromatography in food analysis."
Trends in Analytical Chemistry, 21: 686-697.
Lieutaghi, P. (1966) "Le livre des Bonnes Herbes." Ed. Robert Morel.
Linderschmidt, R., Trylka, A., Goad, M. et Witschi, H. (1986) "the effects of dietry butylated
hydroxytoluene on liver and colon tumor development in mice." Toxicology, 38: 151160.
Loziene, K., Venskutonis, P.R., Sipailien, A. et Labokas, J. (2007) "Radical scavenging and
antibacterial properties of the extracts from different Thymus pulegioides L.
chemotypes." Food Chemistry, 103: 546-559.
Lubbers, S., Decourcelle, N., Vallet, N. et Guichard, E. (2004) "Flavor Release and Rheology
Behavior of Strawberry Fat-free Stirred Yogurt during Storage." Journal of
Agricultural and Food Chemistry, 52: 3077-3082.
Madhavi, D.L., Deshpande, S.S. et Salunkhe, D.K. (1995) "Toxicological aspects of food
antioxidants." Food antioxidants. Technological and Health perspectives.
Madsen, H.L., Sorensen, B., Skibsted, L.H. et Bertelsen, G. (1998) "The antioxidative activity
of summer savory (Satureja hortensis L.) and rosemary (Rosmarinus officinalis L) in
dressing stored exposed to light or in darkness." Food Chemistry, 63: 173-180.
Marco, G.J. (1968) "A rapid method for evaluation of antioxidants." Journal of the American
Oil Chemists' Society, 45: 594-598.
Marinova, E. et Yanishlieva, N. (1992) "Inhibited oxidation of lipids II: comparison of the
antioxidative properties of some hydroxy derrivatives of benzoic and cinnamic acids."
Fat Science Technology, 94: 428-432.

218

Rfrences Bibliographiques
Marriott, P.J., Dunn, M., Shellie, R. et Morrison, P. (2003) "Targeted Multidimensional Gas
Chromatography Using Microswitching and Cryogenic Modulation." Analytical
chemistry, 20: 5532-5538.
Matich, A.J., Rowan, D.D. et Banks, N.H. (1999) "Solid phase microextraction for
quantitative headspace sampling of apple volatiles." Analytical chemistry, 68: 41144118.
Mazza, G. et Marshall, H.H. (1992) "Geraniol, linalool, thymol and carvacrol-rich essential
oils from Monarda hybrids." Journal of Essential Oil Research, 4: 395-400.
Mclafferty, F.W. (2005) "Wiley Registry of Mass Spectral Data 7th edition with NIST 2005
Spectral Data." Wiley.
Miliauskas, G. (2006) "Screening, isolation and evaluation of antioxidative compounds from
Geranium macrorrhizum, Potentilla fruticosa and Rhaponticum carthamoides." Thse
de doctorat en chimie l'Universit de Wageningen, Pays-Bas
Miller, N.J., Castelluccio, C., Tijburg, L. et Rice-Evans, C. (1996) "The antioxidant properties
of theaflavins and their gallate esters-radical scavengers or metal chelators." FEBS
Letters, 392: 40-44.
Miller, N.J., Rice-Evans, C., Davies, M.J., Gopinathan, V. et Milner, A.A. (1993) "Novel
methods for measuring antioxidant capacity and its application to monitoring the
antioxidant status in premature neonates." Clin.Sci, 84: 407-412.
Miura, T., Muraoka, S. et Ogiso, T. (1998) "Antioxidant activity of adrenergic agents derived
from catechol " Biochem.Pharmacol, 55: 2001-2006.
Moldao-Martins, M., Beirao-da-Costa, S., Neves, C., Cavaleiro, C., Salgueiro, L. et Luisa
Beirao-da-Costa, M. (2004) "Olive oil flavoured by the essential oils of Mentha
piperita and Thymus mastichina L." Food Quality and Preference, 15: 447-452.
Moller, J.K.S., Hirai, K. et Tkezoe, R. (1991) "Tocopherol and fluorescence levels in deepfrying oil and their measurment for oil assessment." Journal of the American Oil
Chemists' Society, 68: 163-166.
Monfared, A., Davarani, S.S.H., Rustaiyan, A. et Masoudi, S. (2002) "Composition of the
essential oil of Tanacetum balsamita L. ssp. balsamitoides (Schultz Bip.) Grierson
from Iran." Journal of Essential Oil Research, 14: 1-2.
Moreau, F. (1960) "Botanique : Procaryotes (cyanophites et bactries). Eucaryotes (algues,
champignons et vgtaux suprieurs). La plante dans ses rapports avec le milieu." Ed.
Paris, Gallimard.
219

Rfrences Bibliographiques
Morin, P., Gunther, C., Peyron, L. et Richard, H. (1985) "Physical and chemical phenomena
involved in steam distillation." Bulletin de la Societe Chimique de France, 5: 921-930.
Moure, A., Cruz, J.M., Franco, D., Dominguez , J.M. et Sineiro, J. (2001) "Natural
antioxydants from residual sources." Food Chemistry, 72: 145-171.
Murray, A. (1792) "Apparatus medicaminum." Ed. Ludwig Christopher Althof
Namiki, M. (1990) "Antioxidants/Antimutagens in Food." CRC critical reviews in food
science and nutrition, 29: 273-300.
Nature Midi-Pyrnes. (2004) "Les Plantes rares et menaces de la rgion toulousaine." Ed.
Les Escapades Naturalistes de Nature Midi-Pyrnes.
Nickavar, B., Amin, G. et Mehregan, N. (2003) "Quercetin, a major flavonol aglycon from
Tanacetum balsamita L." Iranian Journal of Pharmaceutical Research, 2: 249-250.
Orav, A., Arak, E. et Raal , A. (2006) "Phytochemical analysis of the essential oil of Achillea
millefolium L. from various European Contries." Natural product research, 20: 10821088.
Orav, A., Kailas, T. et Ivask, K. (2001) "Composition of the essential oil from Achillea
millefolium L. from Estonia." Journal of Essential Oil Research, 13: 290-294.
Oswiecimska, M. (1974) "Korrelation zwischen Chromosomenzahl und Prokamazulenen in
Achillea von Osteuropa." Planta Medica, 25: 389-394.
Pailleux, A. et Bois, D. (1899) "Le potager d'un curieux." Ed. Librairie agricole de la maison
rustique.
Papas, A.M. (1999) "Antioxydant status, diet, nutrition, and health." Ed. CRC Press, Boca
raton.
Pawliszyn, J.P. (2003) "Sample Preparation: Quo Vadis." Analytical chemistry, 75: 25432558.
Perez-Bonilla, M., Salido, S., Van deek, T.A., Linares-Palomino, P.J., Altarejos, J., Nogueras,
M. et Sanchez, A. (2006) "Isolation and identification of radical scavengers in olive
(Olea Europaea) wood." Journal of chromatography A, 1112: 311-318.
Pieri, C., Marra, M., Moroni, F., Recchioni, R. et Marcheselli, F. (1994) "Melatonin : a
peroxyl radical scavanger more effective than vitamin E." Life.Sci, 55: 271-276.
Pietta, P.G. (2000) "Flavonoids as antioxidants." Journal of natural products, 63: 1035-1042.
Pillonel, L., Bosset, J.O. et Tabacchi, R. (2002) "Rapid preconcentration and enrichment
techniques for the analysis of food volatile." Lebensmittel-Wissenschaft undTechnologie, 35: 1-14.

220

Rfrences Bibliographiques
Pokorny, J., Nguen, H.T. et Korczak, J. (1997) "Antioxidant activities of rosemary and sage
extracts in sunflower oil." Nahrung, 41: 176-177.
Pollien, P., Ott, A., Fay, L.B., Maignial, L. et Chaintreau, A. (1998) "Simultaneous
distillation-extraction: preparative recovery of volatiles under mild conditions in batch
or continuous operations." Flavour and fragrance Journal, 13: 413-423.
Pratt, D.E. (1980) "Natural antioxidants of soybean and other oil seeds." Ed. M.G. Simic, and
M. Karel, Plenum, Autoxidation in food and biological systems: 261-282.
Prior, R.L. et Cao, G. (1999) "In vivo total antioxidant capacity: comparaison of different
analytical methods." Free Rad. Bio. Med, 27: 1173-1181.
Ragnarsson, J.O., Leick, D. et Labuza, T.P. (1977) "Accelerated temperature study of
antioxidants." Journal of Food Science, 42: 1536-1544.
Ramarathnam, N., Osawa, T., Ochi, H. et Kawakishi, S. (1995) "The contibution of plant food
antioxidants to human health." Trends Food Science and Technology, 6: 75-82.
Rancic, A., Sokovic, M., Vukojevic, J., Simic, A., Marin, P., Duletic-Lausevic, S. et
Djokovic, D. (2005) "Chemical composition and antimicrobial activities of essential
oils of Myrrhis odorata (L.) Scop, Hypericum perforatum L and Helichrysum
arenarium (L.) Moench." Journal of Essential Oil Research, 17: 341-345.
Rauha, J.P., Remes, S., Heinonen, M., Hopia, A., Khknen, M., Kujala, T., Pihlaja, K.,
Vuorela, H. et Vuorela, P. (2000) "Antimicrobial effects of Finnish plant extracts
containing flavonoids and other phenolic compounds." International Journal of Food
Microbiology, 56: 3-12.
Rice-Even, C. et Miller, N.J. (1994) "Total antioxidant status in plasma and body fluids."
Methods in Enzymology, 234: 279-293.
Richard, H. (1992) "Epices et aromates." Ed. Lavoisier, Paris.
Sahu, S.C. et Gray, G.C. (1993) "Interactions of flavonoids, trace metals, and oxygen:
Nuclear DNA damage and lipid peroxidation induced by myricetin." Cancer Letters,
70: 73-79.
Saule, M. (2002) "La Grande Flore Illustre des Pyrnes." Ed.Milan.
Sawicka, W., Zgorka, G. et Glowniak, K. (1999) "The study on coumarin compounds in the
fruits and roots of Myrrhis odorata (L.) Scop." Herba Polonica, 45: 18-22.
Schmitt, B., Schulz, H., Storsberg, J. et Keusgen, M. (2005) "Chemical Characterization of
Allium ursinum L. Depending on Harvesting Time." Journal of Agricultural and Food
Chemistry, 53: 7288-7294.

221

Rfrences Bibliographiques
Schomburg, G. (1995) "Two-dimensional gas chromatography: principles, instrumentation,
methods." Journal of chromatography A, 703: 309-325.
Schuller, P. (1990) "Natural antioxidants exploited commercially." Ed. Hudson, B.J.F, Food
Antioxidants: 99-113.
Shapiro, S. et Guggenheim, B. (1994) "The action of thymol on oral bacteria." Molecular oral
Microbilogy, 9: 202-208.
Shawl, A.S., Srivastava, S.K., Syamasundar, K.V., Tripathi, S. et Raina, V.K. (2002)
"Essential oil composition of Achillea millefolium L. growing wild in Kashmir, India."
Flavour and Fragrance Journal, 17: 165-168.
Shervin, E.R. (1968) "Methods for stability and antioxidant measurement." Journal of the
American Oil Chemists' Society 45: 632-634.
Sipailiene, A., Venskutonis, P.R., Baranauskiene, R. et Sarkinas, A. (2006) "Antimicrobial
activity of commercial samples of thyme and marjoram oils." Journal of Essential Oil
Research, 18: 698-703.
Somogyi, L. (2008) "The role of active materials of Rosemary in sunflower oil." Thse de
doctorat en biologie l'Universit de Budapest, Hongrie.
Souleles, C., Argyriadou, N. et Philianos, S. (1990) "The Volatile Constituents of Calamintha
grandiflora." Planta Medica, 56: 234-235.
Taga, M.S., Miller, E.E. et Pratt, D.E. (1984) "Chia seeds as a natural lipid antioxydants."
Journal of the American Oil Chemists' Society, 61: 928-931.
Takao, T., Kitatani, F., Watanabe, N., Yagi, A. et Sakata, K. (1994) "A simple screening
method for antioxidants and isolation of several antioxidants produced by marine
bacteria from fish and shellfish." Biosci.Biotech.Biochem, 58: 1780-1783.
Teuscher, E., Anton, R. et Lobstein, A. (2005) "Plantes aromatiques - Epices, aromates,
condiments et leurs huiles essentielles." Ed. Tec et Doc.
Tkachenko, K.G. et Zenkevich, I.G. (1993) "Chemical composition of the leaf oil of Myrrhis
odorata (L.) Scop." Journal of Essential Oil Research, 5: 329-331.
Todorova, M., Konakchiev, A. et Tsankova, E. (2001) "Chemical composition of the essential
oils of three Achillea species growing in Bulgaria." Dokladi na Bulgarskata
Akademiya na Naukite, 54: 25-28.
Todorova, M. et Ognyanov, I. (1989) "Sesquiterpene lactones in a population of Balsamita
major cultivated in Bulgaria." Phytochemistry, 28: 1115-1117.
Ulte, A., Slump, R.A., Steging, G. et Smid, E.J. (2000) "Antimicrobial activity of carvacrol
towards Bacillus cereus on rice." Journal of Food Protection, 63: 620-624.
222

Rfrences Bibliographiques
Uusitalo, J.S., Jalonen, J.E., Aflatuni, A. et Luoma, S.L. (1999) "Essential leaf oil
composition of Myrrhis odorata (L.) Scop. grown in Finland." Journal of Essential
Oil Research, 11: 423-425.
Vandendool, H. et Kratz, P.D. (1962) "A generalization of the retention index system
including linear temperature programmed gas-liquid partition chromatography."
Journal of chromatography 11: 463-471.
Veyrat, M. et Couplan, F. (1997) "Herbier Gourmand." Ed. Hachette.
Voigt, R.F., Rogers, C.H. et Fischer, E.B. (1938) "A pharmacognostic study of
Chrysanthemum balsamita L., var. tanacetoides Boiss., together with a study of its
volatile oil." Journal of the American Pharmaceutical Association, 27: 643-54.
Wallach, O. (1907) "Sabinene and its relationship to the terpinenes." Berichte der Deutschen
Chemischen Gesellschaft, 40: 585-595.
Wanasundara, U.N. et Shahidi, F. (1994) "Stabilization of canola oil with flavonoids." Food
Chemistry, 50: 393-396.
Wang, K., Hiruki, C. et Chen, M.H. (1998) "Identification of a phytoplasma causing yellows
of Monarda." Plant Pathology, 47: 103-106.
Wang, Z., Hennion, B., Urruty, L. et Montury, M. (2000) "Solid phase microextraction
coupled with high performance liquid chromatography : a complementary technique to
solid-phase microextraction gas chromatography for the analysis of pesticide residues
in strawberries." Food additives and contaminants, 17: 915-923.
Weber, M., Knoy, C., Kindscher, K., Brown, R.C.D., Niemann, S. et Chapman, J. (2007)
"Identification of medicinally active compounds in prairie plants by HPLC coupled to
electron impact-mass spectrometry." American Laboratory 39: 9-11.
Wilhelm, O. (1885) Thom Flora von Deutschland, sterreich und der Schweiz, Gera,
Germany
Williams, C.A., Harborne, J.B. et Eagles, J. (1999) "Variations in lipophilic and polar
flavonoids in the genus Tanacetum." Phytochemistry, 52: 1301-1306.
Yang, G.C., Qiang, W., Morehouse, K.M., Rosenthal, I., Ku, Y. et Yurawecz, P. (1991)
"Determination of hydroperoxides in edible oils by ESR, TBA assay and LC-CL
techniques." Journal of Agricultural and Food Chemistry, 38: 896-898.
Yen, G.C. et Chen, H.Y. (1995) "Antioxidant activity of various tea extracts in relation to
their antimutagenicity." Journal of Agricultural and Food Chemistry, 43: 27-32.

223

Rfrences Bibliographiques
Yousefzadi, M., S.N., E., Sonboli, A., Miraghasi, F., Ghiasi, S., Arman, M. et Mosaffa, N.
(2009) "Cytotoxicity, antimicrobial activity and composition of essential oil from
Tanacetum balsamita L. subsp. balsamita." natural product communications, 4: 119122.
Zhang, H.L., Nagatsu, A. et Sakakibara, J. (1996) "Novel antioxidants from safflower
(Carthamus Tinctorius L.) oil cake." Chem.Pharm.Bull, 44: 874-876.
Zielinska-Sowicka, R. et Wolbis, M. (1970) "Examination of Chrysanthemum balsamita
leaves." Herba Polonica, 16: 286-295.

224

Liste des Tableaux

Liste des Tableaux


Tableau 1: Liste I des plantes aromatiques mdivales slectionnes, (*) : plantes correspondent la
deuxime srie de slection................................................................................................................... 13
Tableau 2: Liste des 5 plantes aromatiques selectionnes..................................................................... 21
Tableau 3: Les avantages et les limites de quelques mthodes destimation de la stabilit des lipides et
d'valuation de l'activit antioxydante................................................................................................... 65
Tableau 4: Rsultats des analyses par CPG-DIF-SM de lhuile essentielle dAchillea millefolium issues
de lhydrodistillation des parties ariennes ........................................................................................... 78
Tableau 5: Variation des pourcentages des composs majoritaires des huiles essentielles de lAchille
millefeuille provenant de diffrentes rgions du monde ...................................................................... 81
Tableau 6: Composition chimique de l'huile essentielle de Calamintha grandiflora ........................... 83
Tableau 7: Comparaison des composs majoritaires des extraits des feuilles de C. grandiflora France
vs Turquie, Grce et C. Nepeta.............................................................................................................. 85
Tableau 8: Composition chimique de l'HE de Tanacetum balsamita sauvage rcolte Toulouse
pendant la priode de floraison ............................................................................................................. 88
Tableau 9: Composition chimique de l'huile essentielle de la partie arienne de Tanacetum balsamita
cultive sous serre ................................................................................................................................. 89
Tableau 10: Comparaison entre les principaux composs majoritaires de lhuile essentielle de
Tanacetum balsamita de diffrentes origines : France vs Iran, Italie, Lituanie et Turquie ................... 91
Tableau 11: Composition chimique de l'huile essentielle obtenue partir de la partie arienne de
Myrrhis odorata .................................................................................................................................... 93
Tableau 12: Comparaison entre les principaux composs majoritaires de l'HE de Myrrhis odorata de
diffrentes origines : France vs Serbie, Finlande, Russie et Amrique du Nord................................... 95
Tableau 13: Composition chimique (%) de lhuile essentielle de Monarda didyma ............................ 96
Tableau 14 : Comparaison entre les principaux composs majoritaires de l'HE de M. didyma provenant
de diffrents pays .................................................................................................................................. 98
Tableau 15: Activit antioxydante (AA) des huiles essentielles compare l'efficacit du BHT ...... 110
Tableau 16: Activit antioxydante des extraits de rsidus d'hydrodistillation .................................... 124
Tableau 17: Activit antibactrienne des huiles essentielles mesure diffrentes concentrations et
exprime en diamtre d'inhibition ....................................................................................................... 128
Tableau 18: Concentration inhibitrice minimale (CMI) des huiles essentielles.................................. 130
Tableau 19: Principaux composs organiques volatils identifis partir de l'huile essentielle, des
feuilles froisses et des feuilles non froisses de Tanacetum balsamita ............................................. 147
Tableau 20: Comparaison entre la composition chimique de lhuile essentielle extraite par
hydrodistillation et celle de lhuile essentielle native extraite par CFD-SPME et CFD-DHS ............ 152
Tableau 21: Proprits physicochimiques de l'huile de tournesol....................................................... 157
Tableau 22: Identification des COVs dans l'espace de tte de l'huile de tournesol aromatise par l'huile
essentielle d'Achille millefeuille et par ses feuilles sches................................................................ 168
Tableau 23: Identification des COVs dans l'espace de tte de l'huile de tournesol aromatise par l'HE
de Calamintha grandiflora et par ses feuilles sches .......................................................................... 170
Tableau 24: Identification des COVs dans lespace de tte de lhuile de tournesol aromatise par lHE
de Tanacetum balsamita et par ses feuilles sches.............................................................................. 172
Tableau 25: Identification des COVs dans l'espace de tte de l'huile de tournesol aromatise par l'HE
de Myrrhis odorata et ses feuilles sches............................................................................................ 174
Tableau 26: Identification des COVs dans l'espace de tte de l'huile de tournesol aromatise par l'huile
essentielle de Monarda didyma et par ses feuilles sches ................................................................... 175
Tableau 27: Fibres disponibles pour lanalyse des COVs................................................................... 196

225

226

Publications et participation des congrs


Publications
EL Kalamouni Chaker, Raynaud Christine, P.R. Venskutonis, Talou Thierry (2009), Screening of
antioxidant and antimicrobial activities of Midi-Pyrnes Medieval Aromatic Plants
Chemine Technologija, 3 (52), pp: 69-73
Communications par affiche avec actes publis et comit de lecture
EL Kalamouni Chaker, Raynaud Christine, Talou Thierry (2010), Native vs extracted essential oil:
from chemical composition to biological activities, 12th International ACS Flavour Conference, 2529 Mai 2009, Skiathos (Grce)
Royal Society of Chemistry, 326, Recent Advances in Food and Flavor Chemistry. Ed. C-T Ho, C.J.
Mussinan, F. Shahidi and E.Tratras Contis, pp: 369-378
EL Kalamouni Chaker, Raynaud Christine, P.R. Venskutonis, Talou Thierry (2010), Design of an
Artificial Crushing Finger Device for Rapid Evaluation of Essential Oils from Aromatic plants
leaves, 12th International Weurman Flavour Research Symposium, 1-4 Juillet 2008, Interlaken
(Suisse)
Expression of Multidisciplinary Flavour Science. Ed. Imre Blank, Matthias Wst, Chahan Yeretzian,
pp: 525-528
Communications orales avec actes sur rsum
EL Kalamouni Chaker, Raynaud Christine, Talou Thierry Evaluation des activits anti-oxydante et
antibactrienne dhuiles essentielles de plantes aromatiques oublies de Midi-Pyrnes , Journe
Jeunes Chercheurs- Socit Franaise de Chimie, 29 Avril 2009, Toulouse (France)
EL Kalamouni Chaker, Raynaud Christine, Talou Thierry screening of antioxidant and antibacterial
activities of Midi-Pyrenees medieval aromatic plants , 4th Baltic Conference of Food Science and
Technology, 12-13 Mai 2009, Kaunas (Lituanie)
Communications par affiche avec actes sur rsum
EL Kalamouni Chaker, Raynaud Christine, Talou Thierry, MPAROM Trek: Collect and Analysis of
Midi-pyrnes Medieval Aromatic Plants
38th International Symposium on Essential Oils (ISEO), 9-12 Septembre 2007, Graz (Autriche).
EL Kalamouni Chaker, Raynaud Christine, Talou Thierry, Evaluation du potentiel aromatique des
plantes huiles essentielles
27mes Journes Internationales Huiles Essentielles de Digne, 26-27 juin 2008, Dignes les bains
(France), obtention du prix du Meilleur Poster.
EL Kalamouni Chaker, Dobravalskyte Diana, Berdague Jean-Louis, Tournayre Pascal, Raynaud
Christine, Talou Thierry, CFD-DHS/GC vs SPME/GC-2D: 2 approches pour une valuation rapide
des plantes huiles essentielles
Journes Armes, 2-3 Avril 2009, INRA de Dijon, (France)

227

228

ISSN 1392 1231. CHEMIN TECHNOLOGIJA. 2009. Nr. 3 (52)

Screening of antioxidant and antimicrobial activities of


Midi-Pyrenes aromatic plants
C. El Kalamouni, C. Raynaud, T. Talou
SENSORIC Agro-industrial Chemistry Laboratory UMR 1010 INRA/INPT, Universit de Toulouse INP
Toulouse, ENSIACET, 118 Route de Narbonne 31077, Toulouse, France

P. R. Venskutonis
Department of Food Technology, Kaunas University of Technology,
Radviln pl. 19, LT-50254 Kaunas, Lithuania
E-mail: rimas.venskutonis@ktu.lt
Received 17 July 2009; Accepted 2 September 2009
The antioxidant activity of essential oils from aerial parts of four plants, namely Tanacetum balsamita, Calamintha
grandiflora, Myrrhis odorata and Monarda didyma, from the Midi-Pyrenes region of France were determined by the Oxipress
method, and the antimicrobial activity of each oil was evaluated against nine bacteria species. All tested essential oils were able
to retard the oxidation of sunflower oil, and their antioxidant capacity decreased in the following order: M. didyma > C.
grandiflora > M. odorata > T. balsamita. The antioxidant activity of the essential oils was dose-dependent and in case of the
highest dose (0.2%) of M. didyma, C. grandiflora and M. odorata it exceeded the antioxidant capacity of the synthetic
compound BHT added at a concentration of 0.02%. Antimicrobial activity tests showed that Gram-positive bacteria to be more
sensitive the Gram-negative, especially Bacillus cereus which was the most sensitive species for M. didyma essential oil at a
concentration of 1%. M. didyma oil possessed an inhibitory effect against all test cultures. Most likely the high percentage of
the strong antimicrobial agent thymol in M. didyma oil was the main factor for its pronounced antimicrobial activity.

instance, it was reported that essential oil of T. balsamita


grown in Iran contained carvone and -thujone as the
main constituents; the results of the antimicrobial activity
of the essential oil according to the disc diffusion method
and minimal inhibition concentration (MIC) values
indicated that the oil exhibited moderate to high antimicrobial activity against eight Gram-positive and Gramnegative bacteria (Bacillus subtilis, B. pumulis, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, S. epidermidis,
Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella pneumoniae) and three fungi (Candida albicans,
Saccharomyces cerevisiae and Aspergillus niger) [1]. In
anoher study, essential oil of T. balsamita subsp. Balsamita from Turkey contained trans-chrysanthenol, chrysanthenyl acetate, linalool oxide, camphor and 1,8-cineole as the major components. The antimicrobial activities
of the oil and two antibiotics against Gram-positive and
Gram-negative bacteria and two yeasts were investigated
in vitro, and the results showed the oils to possess
moderate activities against all test microorganisms [2].
This example clearly shows that a remarkable diversity in
the chemical composition may be characteristic of the
same plant species, particularly of those grown in
different parts of the world.
The chemical composition and antimicrobial activities of essential oil isolated from M. odorata were investigated against seven bacterial and six fungal species.
Activity against bacteria and C. albicans were investigated by the bioautographic test on TLC plates, while
all the other fungi were tested by the microdilution test.
M. odorata oil showed the lowest effect as compared
with commercial products [3]. The composition of C.

Introduction
Aromatic, medicinal and spicy plants are an immense
and sustainable source of natural compounds with various
beneficial properties. Therefore, such materials have been
used since ancient ages for various applications, particularly healing of diseases, flavouring of foods and formulation of fragrances. Some of these plants nowadays
are grown commercially and serve for the production of a
variety of ingredients. However, some of medicinal and
aromatic herbs for some reasons have not found wider
application and sometimes are referred to as forgotten
plants. Taking into account the increasing demand for
natural ingredients that might be used as food additives,
components of functional foods and nutraceuticals as well
as for other applications, it is reasonable to revise the
forgotten plants by assessing their applicability and
benefits using modern scientific analysis methods. The
Midi-Pyrenes region of southwest France has a rich and
so for poorly valorized wild vegetal heritage, including a
remarkable diversity of aromatic and medicinal plants.
Recently, the MIPAROM Trek initiative has been
conducted to collect and analyse various regional and
forgotten aromatic plants, including such species as
Tanacetum balsamita, Myrrhis odorata, Calamintha
grandiflora and Monarda didyma. The first phase in the
assessment of these plants includes analysis of their
essential oils, antioxidative properties and antimicrobial
activity.
The essential oil composition and properties of
plants grown in various regions of the world and selected
for this investigation have been studied previously. For

69

grandiflora essential oil had been previously studied [4,


5], however, no reports were found in the available
literature sources on the antimicrobial and antioxidant
properties of this species.
Oxidative and microbial deterioration are the main
processes damaging huge amounts of foods. Lipid-containing foods can be stored for a limited time period
because of their insufficient resistance to oxidation.
Moreover, in dry foods, which are more stable from the
microbiological point of view, oxygen can easily enter
the lipid phase, and the stability of such foods in many
cases is substantially lower than in the presence of water.
Therefore, the stability of dry foods should be carefully
tested and, if necessary, the lipid fraction should be
protected by adding antioxidants. During storage of oils,
fats and other fat-containing foods, lipid oxidation is still
a major cause of food quality deterioration in spite of a
wide use of several antioxidants. The most widely used
synthetic antioxidants butylhydroxyanisole (BHA) and
butylhydroxytoluene (BHT) are quite volatile compounds and easily decompose at high temperatures [6].
There are some serious problems concerning the safety
and toxicity of some synthetic antioxidants related to
their metabolism and possible absorption and accumulation in body organs and tissues [7]. Therefore, development of preparations based on the antioxidative properties
of natural compounds is highly desirable.
The antioxidant extracts isolated from various herbs
were reported to be effective in retarding the development of rancidity in oils and fatty foods; however, the
antioxidant activity of these extracts depends on the
concentration and chemical structure of antioxidatively
active components in the raw materials. Since ancient
times, aromatic plants have been widely used as flavourings; however, during the last few years they have
become a source of natural antioxidants and antibacterial
agents [8]. Essential oils are considered among the most
important antimicrobial agents present in plants and may
possess also antioxidant and anti-inflammatory activities.
The increasing antibiotic resistance of some pathogens that are associated with diseases is another major
concern. Therefore, there has been increasing interest in
developing a new type of effective and nontoxic antimicrobial compounds. Several authors have proposed
essential oils as natural preservative agents [9].
In the present study, a preliminary screening of
antioxidant and antimicrobial activities of Midi-Pyrenes
aromatic plants grown in France, namely Tanacetum
balsamita, Calamintha grandiflora, Myrrhis odorata and
Monarda didyma, was carried out. Essentials oils from
these plants were added to sunflower oil, and oxidative
deterioration was measured by the Oxipress method. The
antimicrobial activities of the essentials oils were
evaluated against nine pathogenic bacteria present in
various foods.

or sweet cicely (Myrrhis odorata L. Scop.), largeflowered calamint (Calamintha grandiflora L. Moench.)
and bergamot, also known as scarlet beebalm, scarlet
monarda, oswego tea, or crimson beebalm (Monarda
didyma L.) were used in the study. The plants were
collected in Midi-Pyrenes (south west of France) in
AprilMay 2008 at the vegetation phase which is
considered preferable in terms of the functional properties
of herbs. Essential oils were isolated from ground plants
by hydrodistillation in a Clevenger type apparatus.
The antioxidant activity of the essentials oils was
determined in sunflower oil, using an Oxipress apparatus
(Mikrolab Aarhus, Denmark): in the course of oxidation,
oxygen consumption is evaluated by measuring changes
in its pressure in a hermetically sealed 200 ml vessel
containing oxygen and a sample. Five grams of sunflower
oil (pure, with essential oils and with the synthetic
antioxidant BHT) were placed in the reactor which was
connected to the pressurized oxygen cylinder; first, it was
washed with oxygen and afterwards filled with oxygen to
reach the defined initial pressure (0.5 MPa). The experiments were carried out at a temperature of 110 C in
triplicate. The relative standard deviation was in the range
of 0.1 to 3%; in rare cases when it was higher, additional
measurements were performed. The induction period (IP)
of oxidation was read at the time when the pressure began
to decrease abruptly (the end was measured from the
cross-section point of tangents of the first part and the
subsequent part of the curve recording the pressure
changes, as evident from Figure). The protection factor
(PF) value of sunflower oil in case of using essential oils
and their antioxidant activities (AA) were calculated by
the following formulas:

Materials and methods

Fig. Sunflower oil oxidation curves at 110 C

The aerial parts of costmary, also known as alecost,


balsam herb, Bible leaf (Tanacetum balsamita L.), cicely

Nine food spoilage bacteria, including Gram-positive, Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Staphylococcus

PF =

IPX
;
IPK

AA =

IPX IPK
;
IPBHT IPK

where IPX is the induction period of a sample with an additive,


h; IPK is the induction period of a sample without additive, h;
IPBHT is the induction period of a sample with containing the
synthetic antioxidant BHT, h.

70

aureus, Staphylococcus epidermidis, and Gram-negative


pathogens, namely Salmonella typhymurium, Salmonella
typhymurium D338, Salmonella enteritidis, Salmonella
agona and Escherichia coli, were used in this study. The
antimicrobial properties were evaluated by the agar
diffusion method. Bacteria were grown in plate count
agar (CM 325, Oxoid) for 24 h at 37 C. After cultivation, test culture cells were mixed using an MS1 mini
shaker (Wilmington, USA) and the cell suspensions were
adjusted according to McFarland no. 0.5 standard. The
suspension of bacteria cells in saline (2 ml) was introduced into the dissolved um agar media; 10 ml of each
bacteria culture was pipetted into a 90 mm Petri dish.
Eight-millimeter diameter wells were pushed in the agar
and filled with methanolic solutions of oils. The plates
were incubated overnight at 37 C.
A 10 l volume of 1.0 and 0.5% methanolic solutions of the essential oils was added to the agar wells.
Pure methanol was used as a control in blank samples for
bacteria. After incubation, the inhibition zones were
measured with calipers to an accuracy of 0.1 mm, and the
effect was calculated as a mean of three replicate tests.
An appropriate reference antibiotic disc was applied on
each plate depending on the test microorganisms
(ceftazidine/clavulanic acid, 30/10 g; BBL, CAZ/CLA,
231753); they served as a positive control which is
effective against all species used in the study.

of thymol, and it may explain the comparatively high


antioxidant activity of this additive. The chemical composition of the essential oil obtained from M. didyma had
been analysed previously, and thymol was also found as
the main component constituting more than 50% in the
total oil. The antioxidant activity of the oil was evaluated
by the DPPH test where the oil showed an effect
comparable to Trolox, and by lipid peroxidation test
where the activity of the oil was similar to that of BHT
[10]. Antioxidant activity of the essential oils was dosedependent, and in case of the highest dose (0.02%) of M.
didyma, C. grandiflora and M. odorata it exceeded the
antioxidant capacity of BHT added at a concentration of
0.02%. The main components in the essential oils of C.
grandiflora, T. balsamita and M. odorata were menthone,
-thujone and anethol, respectively.
Table 1. Antioxidant activity (AA) of essential oils as compared
with the effect of BHT and their effect on the stability of
sunflower oil, expressed in protection factor values (PF)
Species

Results and discussion

PF

AA

Without additive

0.00

1.00

BHT

0.02

1.47

1.00

M. didyma

0.2

1.73

1.55

C. grandiflora

The oxipress method, which was used to evaluate


the antioxidant activity of essential oils, is a very
convenient procedure performed without using any
chemicals. Typical curves of oxidation are presented in
Figure. The change of pressure at the end of the induction
period can be rather precisely measured and, as shown in
Figure, in case of adding plant essential oil to sunflower
oil, the pressure drop was delayed for some period of
time, indicating the antioxidative effect of the added
substance.
The effects of the applied essential oils at 0.05, 0.1
and 0.2% concentrations are summarized in Table 1; the
essential oil of M. didyma was found to be the most
effective natural antioxidant measured by the Oxipress
method as compared with other essentials oils used in this
experiment. The effectiveness of the applied essentials
oils decreased in the following order: M. didyma > C.
grandiflora > M. odorata > T. balsamita.
Essential oils are complex mixtures of volatile
natural compounds, and their total antioxidant capacity
depends on the presence of the most active components
and their concentration in the oil. For instance, such
phenolic compound as thymol, which is present in many
essential oils, particularly in those isolated from plants
belonging to the genus Thymus, possesses high antioxidant strength due to the presence of the phenolic hydroxyl
group. It was also suggested that the presence of an
electron donating group in ortho position to the hydroxyl
moiety may be crucial for exerting an effective antioxidant activity. M. didyma essential oil contained up to 50%

Conc. %

M. odorata

T. balsamita

0.1

1.37

0.79

0.05

1.29

0.62

0.2

1.63

1.34

0.1

1.22

0.47

0.05

1.18

0.38

0.2

1.61

1.30

0.1

1.2

0.43

0.05

1.17

0.36

0.2

1.41

0.87

0.1

1.2

0.43

0.05

1.1

0.21

Antimicrobial activity of the methanol solutions of


essentials oils was evaluated in vitro against nine bacteria
species known to cause infections in humans (Table 2).
Gram-positive bacteria are more sensitive than Gramnegative, especially Bacillus cereus, which was the most
sensitive species in case of using M. didyma essential oil
at a concentration of 1%. M. didyma oil showed the
inhibitory effect against all test cultures. Most likely the
high percentage of the strong antimicrobial agent thymol
in M. didyma essential oil was the main factor for its
pronounced antimicrobial activity. It is in agreement with
the previously published results; e.g., thymol-rich essential oils from Thymus pulegioides were strong antimicrobial substances against various pathogenic bacteria
[11]. The fungicidal activity of Thymus vulgaris oil
correlated also with the content of thymol [12]. The
antifungal activity of M. didyma oil was evaluated against
four phytopathogenic fungi through a direct contact with
by agar diffusion method and with the fungistate action of

71

the vapors using the micro-atmosphere method. The most


sensitive fungus was Rhizoctonia solani in the first test

and Botrytis cinerea in the second [10].

Table 2. Antimicrobial activity of the essential oils at different concentrations, expressed in the diameter of inhibition, mm; na not
active
M. didyma

C. grandiflora

M. odorata

T. balsamita

Antibiotic

Bacterial species
1%

0.50%

1%

0.50%

1%

0.50%

1%

0.50%

sensi-disc

Bacillus subtilis

16.5

12.8

19.1

8.5

9.2

8.5

10.2

8.2

16.8

Bacillus cereus

40

13.1

9.8

10.6

10.6

9.9

11.4

8.8

29.0

Staphylococcus aureus

13.1

10.2

9.7

na

8.8

na

na

21.0

Staphylococcus epidermidis

14.7

11.5

10

na

9.1

na

8.5

na

25.8

Salmonella typhimurium

15

11

8.9

na

8.1

na

8.4

na

31.2

Salmonella typhymurium D338

16.2

12.2

9.3

8.8

na

9.7

na

34.0

Salmonella enteritidis

15.2

11.5

10.1

9.1

8.1

na

8.9

na

32.2

Salmonella agona

13.8

10.7

8.4

na

na

na

na

na

20.8

Esherichia coli

18.9

14.4

10.3

na

10.2

na

9.7

na

26.4

T. balsamita and M. odorata oils at 0.5% possessed


a weaker antimicrobial activity against the majority of
test bacteria as compared to other essentials oils applied
at the same concentration; they showed antibacterial
activity only against Bacillus cereus and Bacillus subtilis.
Comparing Salmonella spp., Salmonella agona was the
most resistant species; the smallest zones of inhibition
were measured in case of the majority of applied essential
oils. C. grandiflora oil applied at a concentration of 1%
was the most effective antimicrobial agent against Bacillus subtilis as compared with the other oils. The inhibitory effect of M. didyma oil (1%) against Escherichia
coli, Salmonella enteritidis, Salmonella typhymurium and
Staphylococcus epidermidis was halt as low as the effect
of the reference antibiotic compound; however, in case of
Bacillus subtilis, the effect of M. didyma oil was equal to
that of the antibiotic compound.

5.

Conclusions

6.

Foundation (grant No. V-42/2009) and the Agency for


International Science and Technology Development Programmes in Lithuania (grant No. 31V-136.

References
1.
2.

3.

4.

7.

A preliminary screening of the bioactivity of Tanacetum balsamita, Calamintha grandiflora, Myrrhis odorata and Monarda didyma essential oils showed the
volatile fractions of these plants to possess antioxidant
activity in vegetable oil and antimicrobial activity against
various pathogenic bacteria. These results suggest the
need of the further studies of these plants to assess their
wider application in the production of valuable ingredients. Further studies should be focused on the nonvolatile fraction of plant materials.

8.

9.
10.

11.
12.

Acknowledgements
This study was performed in the framework of the
bilateral FrenchLithuanian programme "Gillibert" and
supported by the Lithuanian State Science and Studies

72

Yousefkadi M., Ebrahimi S. N., Sonboli A., Miraghasi


F., Ghiasi S., Arman M., Mosaffa N. // Natural Product
Communications. 2009. Vol. 4, N 1. P. 119122.
Bagci E., Kursat M., Kocak A., Gur S. // Journal of
Essential Oil Bearing Plants. 2008. Vol. 11, N 5. P. 476
484.
Rancic A., Sokovic M., Vukojevic J., Simic A., Marin
P., Duletic-Lausevic S., Djokovic D. // Journal of
Essential Oil Research. 2005. Vol. 17, N 3. P. 341345.
Baser K. H. C., Ozek T. // Planta Medica. 1993. Vol. 59,
N 4. P. 390390.
Souleles C., Argyriadou N. // Planta Medica. 1990.
Vol. 56, N 2. P. 234235.
Branen A. L. // Journal of American Oil Chemists
Society. 1975. Vol. 52, N 2. P. 5963.
Linderschmidt R., Trylka A., Goad M., Witschi H. //
Toxicology. 1986. Vol. 38, N 2. P. 151160.
Bandonien D., Pukalskas A., Venskutonis P. R., Gruzdien D. // Food Research International. 2000. Vol. 33,
N 9. P. 785791.
Kubo A. // Journal of Natural Products. 1995. Vol. 58,
N 10. P. 15651569.
Fraternale D., Giamperi L., Bucchini A., Ricci D.,
Epifano F., Burini G., Curini M. // Journal of Essential
Oil Research. 2006. Vol. 18, N 5. P. 581585.
Loien K., Venskutonis P. R., ipailien A., Labokas
J. // Food Chemistry. 2007. Vol. 103, N 2. P. 546559.
Zambonelli A, D'Aulerio A. Z., Severi A., Benvenuti
S., Maggi L., Bianchi A. // Journal of Essential Oil
Research. 2004. Vol. 16, N 1. P. 6974.

sultino saulgr aliejaus oksidacijos greit: tirt augal


antioksidacinis aktyvumas majo tokia tvarka: M. didyma > C.
grandiflora > M. odorata > T. balsamita. Eterinio aliejaus
antioksidacin galia taip pat priklaus nuo eterinio aliejaus
koncentracijos: pavyzdiui, 0,2 % M. didyma, C. grandiflora ir
M. odorata pried poveikis buvo didesnis, palyginus su sintetiniu antioksidantu BHT, kurio koncentracija buvo 0,02 %.
Gramteigiamos bakterijos buvo jautresns eterinio aliejaus
poveikiui negu gramneigiamos. Pavyzdiui, M. didyma eterinis
aliejus slopino vis bakterij kultras, taiau 1 % koncentracijos
tirpalas buvo efektyviausias slopinant Bacillus cereus augim.
Didel stipraus antimikrobinio junginio timolio koncentracija
io augalo eteriniame aliejuje tikriausiai yra pagrindin jo
iskirtinio antimikrobinio aktyvumo prieastis.

C. El Kalamouni, C. Raynaud, T. Talou,


P. R. Venskutonis
VIDURIO PIRN AROMATINI AUGAL
ANTIOKSIDACINIO IR ANTIMIKROBINIO
AKTYVUMO PIRMINIS VERTINIMAS
Santrauka
Vidurio Pirnuose augani aromatini augal Tanacetum
balsamita, Calamintha grandiflora, Myrrhis odorata ir Monarda didyma eterinio aliejaus antioksidacins savybs buvo tirtos
oksipres metodu, o antimikrobinis aktyvumas vertintas naudojant 9 bakterij ri kultras. Nustatyta, kad eterinis aliejus

73

Expression of Multidisciplinary Flavour Science

DESIGN OF AN ARTIFICIAL CRUSHING FINGER DEVICE FOR


RAPID EVALUATION OF ESSENTIAL OILS FROM AROMATIC
PLANTS LEAVES
C. EL KALAMOUNI1,2, C. Raynaud1,2, and T. Talou1,2
1

LCA Universit de Toulouse ; INP ; LCA (Laboratoire de Chimie AgroIndustrielle);


ENSIACET, 4 Alles Emile Monso, F-31029 Toulouse, France
INRA (Laboratoire de Chimie AgroIndustrielle) ; F-31029 Toulouse, France

Abstract
A special designed apparatus based on Scratch' n Sniff concept was developed for
copying the crushing of aromatic plants leaves between fingers. The so-called
Crushing Finger Device (CFD) was equipped with a TENAX trap for a rapid analysis
of emitted volatiles by GC-MS. The CFD efficiency was presently evaluated by
comparison of chromatographic profiles obtained with crushed, uncrushed leaves
and essential oil of costmary (Tanacetum Balsamita) fresh leaves, chosen as model
plant.
Introduction
A decade ago, several treks (NEBLINA, TASTETREK) were performed by
companies of aromatic industry sector both in South-America and West-Africa in
order to investigate the aromatic potentialities of rare exotic plants for novel flavours
and fragrances formulations. As Midi-Pyrenees region (Southwest of France) has a
rich and unvalorised wild vegetal heritage, especially for aromatic and medicinal
plants, the MIPAROM Trek was conducted in order to collect and analyse various
regional medieval (aka forgotten) aromatic plants, e.g. Achillea millefolium,
Tanacetum balsamita, Agastache foeniculum, Meum athamanticum, Chrysantemum
balsamita, Myrris odorata, Calamintha gradiflora. As a consequence of a global
bibliographical survey study based on historical books, library archived documents
and computerized data banks, a list of 20 regional plants to be investigated has been
precised [1]. But as such plants being rare or their harvesting problematic as they
were protected, sampling could be limiting. We have developed a strategic approach
based either on the use of a specific/high effective sampling system with a classic
detection or a classic sampling with a specific/ultra sensitive detection. If this last
methodology was based on the coupling of SPME to Comprehensive GC (GCxGCTOFMS) (current works) the first ones was based on a self designed apparatus [2],
allowing to copy the crushing of leaves between fingers used by farmers or
flavourists to sensorially evaluate the odour of aromatic plants. The so-called
Crushing Finger Device (CFD) was based on a modified artificial mouth and has the
objective to perform a rapid evaluation of essential oil content with only a couple of
leaves through a controlled Dynamic HeadSpace (DHS) concentration of volatiles
emitted by crushed fresh leaves. In the present paper we report the comparison of
the chromatographic profiles of essential oil of leaves of our model plant, costmary
(Tanacetum Balsamita), with the ones obtained with leaves without crushing (DHS)
and with leaves processed by CFD-DHS.

525

Expression of Multidisciplinary Flavour Science

Experimental
Materials. Costmary (Tanacetum Balsamita) plants using in the present study were
collected at their optimum biological stage in Midi-Pyrenees area (south West
France) in April-May 2008.
Dynamic HeadSpace with crushing (CFD/DHS). Two or three entire fresh leaves
of costmary corresponding to 500mg were placed in the glass cell of the CFD
thermostated at 25C. A flow of purified nitrogen (100 ml/min) passed through the
leaves for 5 min to trap the volatiles into a TENAX TA trap positioned at the top of the
device. The crushing of leaves was set up by a motorized Teflon piston having
transverse and rotative movements. 4 replicates were performed
Dynamic HeadSpace without crushing (DHS). The CFD piston was removed from
the device and fresh leaves were carefully placed without damaging tissues.
Operating conditions were applied as described before with 3 replicates performed.
Isolation of essential oil (EO). 100g of the aerial part of fresh costmary plants was
hydrodistilled for 3h at 100C by using a Clevenger-type apparatus in order to obtain
essential oils. 4 replicates were performed.
Gas chromatographic analysis. Volatile analysis (EO) were performed with a
Hewlett Packard 5890 SERIES II gas chromatograph equipped with FID and an
Agilent 5973 Network GC-MS. (DHS, DHS/CFD) analysis were performed with a
Perkin Elmer Clarus 500 GC-MS-FID equipped with a TurboMatrix TD
thermodesorber. A fused-silica DB5 (0.25mm x 30m, 0.25m film thickness) was
used throughout this study. Temperature program used was: 30C for 5min, then
5C/min up to 200C and 10 min isotherm at 200C. -Terpinene was used as
standard to estimate the concentration of volatiles compounds in CFD in g/kg of
dried material. Identification of volatiles was based on comparison of their retention
times with those of authentic samples (calculated RI based on n-hydrocarbons series
kit) and on computerized matching with commercial mass spectra data bank (NIST
2005 and WILEY) and Adams library [3].
Results
The composition of the yellow coloured essential oil obtained with a yield of 0,53% on
a dry weight basis, was conform to literature [4-8] while thujone (cis and trans
isomers) and 1,8-cineole were the main identified volatiles (Table 1). trans-Thujone
was reported as the main compound of both essential oil (63.3%) and emitted
volatiles from uncrushed (82.5%) and crushed ones (67.7%). The yield of emitted
volatiles by fresh costmary leaves was by increasing order: CFD / DHS >> DHS.
The consequence of the crushing of the leaves by CFD was the explosion of the
vesicles of storage of essential oil and the release of the main volatile compounds of
the plant in atmosphere. The comparison of the GC-profiles of crushed leaves
(Figure 1A) versus leaves without crushing (Figure 1B) showed an increase of
number of top notes compounds (4 to 20). The major volatiles emitted during the
crushing of leaves were 3-methylhexanal (0.3%), -thujene (0.2%), -pinene (0.7%),
-terpinene (2.4%), -pinene (0.4%), 1,8-cineole (21%), -terpinene (0.5%), pmentha-1,4(8)-diene (0.2%) and cis-thujone (3.3%). In case of essential oil, the minor
compounds reported were 1,8-cineole (27.5%), -terpinene (0.1%), cis-thujone
(4.2%), terpineol-4 (0.6%), germacrene D(0.9%), bicyclo-germacrene (0.1%), terpineol (0.2%), and -eudesmol (0.4%) and could be assimilated to back notes
components generated during hydrodistillation.

526

Expression of Multidisciplinary Flavour Science

Table 1. Volatile compositions of essential oil, uncrushed and crushed fresh leaves
of Tanacetum balsamita
Peak
1
2
3
4
5
6
7
8

9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30

Volatile Compound
Hexanal, 3-methyl
1-Butanol, 2-methyl
1-Octen
3-Hexen-1-ol
1-Butanol, 3methylacetate
-Thujene
-Pinene
bicyclo[3.1.0]Hex-2-ene,
4-methylene-1-(1methylethyl)
Camphene
-Terpinene
-Pinene
cis-Pinene-3-ol
3-Hexen-1-ol, acetate
NI
o-Cymene
p-Pymene
1,8-Cineole
-Terpinene
N.I.
N.I.
p-Mentha-1,4(8)-diene
Butanoic acid, 2-methyl3 ethylbutylester
cis-Thujone
trans-Thujone
4-Terpineol
-Terpineol
Sabinyl acetate
Germacrene-D
bicyclo-Germacrene
-Eudesmol

RI
(DB-5)
738
742
791
857
879

EO
(n=4) %

926
933
944

950
973
978
989
1004
1012
1017
1023
1031
1057
1071
1072
1086
1100
1107
1121
1166
1185
1282
1476
1489
1650

DHS
(n=3) %

0.6

1.7
1.5

tr
27.5
0.1
0.3

4.2
63.3
0.6
0.2
tr
0.9
0.1
0.4

12.6

1.1
82.5

CFD
(n=4) %
0.3
0.1
0.4
0.3
0.1

CFD [c]
g/kg/5min
0.5
0.2
0.5
0.4
0.1

CFD [c]
SD %
11
23
15
34
17

0.2
0.7
0.1

0.1
0.9
0.1

23
12
18

0.1
2.4
0.4
0.1
0.4
0.2
0.4

0.2
3.7
0.5
0.3
0.3
0.6
0.5

7
26
9
25
22
21
18

21
0.5

21.3
0.6

4
13

0.2
0.2
0.2

0.2
0.3

19
49

3.3
67.7

4.9
103.8

9
27

tr : Trace (<0,1%), NI : unidentified

Figure 1. CFD/DHS-GC profile of crushed leaves (A) and DHS-GC profile of


uncrushed leaves (B)

527

Expression of Multidisciplinary Flavour Science

These preliminary results showed that GC profiles of essential oil (Figure 2) and
volatiles emitted from crushed leaves (Figure 1A) by using the CFD had similarities
for top and heart notes (cis-, trans-thujone and 1,8-cineol as major constituents) but
also differences, especially for back notes components due to the extraction
technique used (hydrodistillation vs dynamic headspace).

Figure 2. GC profile of Essential Oil of Tanacetum balsamita.


The coupling CFD/DHS, demonstrated the potential for rapid evaluation of
essential oils from aromatic plant leaves. Indeed, this novel system allowed having a
representative finger-print of fresh plant volatiles with similar top and heart notes than
the essential oils (qualitatively and quantitatively). Comparison of results obtained
with fresh costmary leaves by CFD/DHS-GC/MS vs SPME-GCxGC/TOFMS is in
progress. The generalization of its use with various medieval aromatic plants from
Midi-Pyrnes is suggested. Coupling of CFD/DHS and CFD/SPME with Fast-GC
and GC-O for quality control and aroma key compounds identification purposes is
being carried out.
References
1.
2.

3.

4.
5.
6.
7.
8.

El Kalamouni C. INP Toulouse Doctorate Thesis, in progress.


Talou T., El Kalamouni C. and Raynaud C. (2008) Rapid evaluation of essential
oil quality based on instrumentalized crushed fresh leaves volatiles assessment.
French Patent trading.
Adams R.P. (2001) Identification of Essential Oils Components by Gas
Chromatography/Quadrupole
Mass
Spectroscopy.
Allured
Publishing
Corporation, Carol Steam, IL.
Voigt R.F., Rogers C.H., Fischer E.B. (1938) J. Am. Phar. Ass., 27: 643-654.
Bylaite E., Venskutonis R., Roozen J., Posthumus M. (2000) J. Agric. Food
Chem. 48: 2409-2414.
Gallori S., Flamini G., Bilia A., Morelli I., Landini A., Vincieri F. (2001) J. Agric.
Food Chem. 49: 5907-5910.
Monfared A., Davarani S., Rustaiyan A., Masoudi S. (2002) J. Ess.Oil Res. 14:
1-2.
Baser K.H.C., Demirci B., Tabanca N., Ozek T., Goren N. (2001) Flav. Frag. J.
16: 195-200.

528

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