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Grupo: 2IM09
OBJETIVOS
ALCANCES
Definir el
concepto de
cromatografa y
aplicarlo en la
purificacin de
compuestos .
Documentarse en
conceptos de
mezcla, pureza,
propiedades
fsicas y qumicas
de la materia.
Indicar en que
consiste la
cromatografa
de adsorcin y
la de particin
Leer con
detenimiento el
desarrollo de la
practica
Explicar el
concepto de
polaridad en
cromatografa
Establecer la
relacin y la
diferencia que
existe entre la
cromatografa
en placa fina y
la preparativa
Seleccionar el
disolvente o
mezcla de ellos
para efectuar el
desarrollo de la
cromatografa
Purificar
compuestos
orgnicos
Analizar
cuidadosamente
cada una de las
etapas de la
tcnica de
cromatografa
Consultar la tabla
de toxicidad de
los reactivos y
productos
empleados en el
experimento
Tomar
precauciones
adecuadas y
evitar accidentes.
METAS
Preparar las
placas finas o
cromatoplacas
, y los
aplicadores
Preparar la
cmara
cromatografic
a
Preparar las
muestras
Aplicacin de
las muestras y
desarrollo de
la placa
Revelado de
las placas
Determinacin
del Rf
Interpretacin
de los
resultados.
mediante placas
preparativas
Determinar el Rf
de
las sustancias
separadas
Cuando son visibles, se puede determinar para cada una de las manchas el valor
de Rf (factor de retencin), o la distancia que cada compuesto se desplaza en la
placa. Cada compuesto tiene un Rf caracterstico que depende del disolvente
empleado y del tipo de placa de CCF utilizada, pero es independiente del recorrido
del disolvente. De esta manera se puede ayudar a identificar un compuesto en una
mezcla al comparar su Rf con el de un compuesto conocido (preferiblemente
cuando se hacen eluir en la misma placa de CCF).
Cromatografa en columna
Es una tcnica de purificacin, puesto que permite aislar los compuestos
deseados de una mezcla.
Procedimiento
La cromatografa en columna utiliza una columna de vidrio vertical que se llena
con un soporte slido adsorbente (fase estacionaria: los ms utilizados son gel de
slice (SiO2) y almina (Al2O3))+. La muestra que se quiere separar se deposita
en la parte superior de este soporte. El resto de la columna se llena con el
eluyente (disolvente que constituye la fase mvil) que, por efecto de la gravedad,
hace mover la muestra a travs de la columna. Se establece un equilibrio entre el
soluto adsorbido en la fase estacionaria y el disolvente eluyente que fluye por la
columna. Debido a que cada uno de los componentes de una mezcla establecer
interacciones diferentes con la fase estacionaria y la mvil, sern transportados a
diferentes velocidades y se conseguir su separacin. As, de manera similar a
otros tipos de cromatografa, las diferencias en las velocidades de desplazamiento
a travs del medio slido se corresponden con diferencias en los tiempos de
elucin por la parte inferior de la columna para cada uno de los componentes de la
muestra original, que se recogern en fracciones diferentes.
La polaridad del eluyente afecta las velocidades relativas con las que los
diferentes componentes de la mezcla se mueven en la columna. Los disolventes
polares compiten ms eficientemente con las molculas polares de una mezcla
por los lugares polares del adsorbente. Por lo tanto, un disolvente polar desplazar
las molculas, incluyendo las ms polares, rpidamente a travs de la columna. Si
el disolvente es muy polar la elucin ser muy rpida y generalmente habr poca
DESARROLLO DE LA PRCTICA
CROMATOGRAFIA EN PLACA
MATERIAL A UTILIZAR:
Aplicadores
Porta objetos (placa) - cromatoplaca
Disolventes (A,B,C)
Placas
Cmara cromatografica- frascos de gerber
Vasos de precipitado (3)
CROMATOGRAFIA EN
Tcnicas cromatogrficas
1. Cromatografa en capa fina.
Por este mtodo se pueden analizar mezclas de aminocidos. La
muestra para anlisis se aplica por medio de un tubo capilar en la superficie
de una capa fina adsorbente en forma de banda, punto o mancha y es
adsorbida en la superficie por la accin de fuerzas electrostticas (Fuerzas
de Van der. Waals, puentes de hidrogeno, efectos inductivos, etc). Los
adsorbentes ms utilizados son gel de silica, alumina, tierra silcea,
celulosa y poliamidas. Como soportes del adsorbente se utilizan laminas o
placas de vidrio, plsticas o metlicas, algunas placas tienen indicador de
fluorescencia : f254 f366.
La placa seca se coloca en el tanque cromatogrfico o cmara, en el cual
debe encontrarse saturado el eluente (Fase Mvil lquida).El eluente
ascender o desplazara por capilaridad en la placa y arrastrar los
componentes a lo largo de sta produciendo manchas que representan a
los componentes, la separacin se da por migracin diferencial, es decir
que la fase mvil arrastra a las substancias apolares y aquellas ms polares
son retenidas por la fase estacionaria dando lugar a la separacin.
Posteriormente se evapora el eluente y la placa se analiza por medio de
mtodos qumicos en el que por inmersin o rociado se obtienen derivados
coloreados o fluorescentes (Adicin de Ninhidrina a aminas, cido sulfrico
para carbonizar compuestos orgnicos, etc), o por medio de mtodos
fsicos pticos utilizando radiacin UV o luz visible.
El anlisis es de tipo cualitativo, semicuantitativo o cuantitativo. En el
primero se hacen comparaciones visuales de color e intensidad y
propiedades UV entre otras. En el semicuantitativo se observa dimetro y
comparacin visual e intensidad del color de la mancha contra manchas
patrones de concentracin conocida. Y en la forma cuantitativa se pueden
realizar medidas de transmisin a travs de la sustancia y medidas de
emisin o medida de luz reflejada desde la sustancia, y espectrofotometra
por fluorescencia.
2. Cromatografa en papel.
El proceso es bsicamente el mismo, solo que se usan tiras de papel
cromatogrfico en el tanque cromatogrfico.
3. Cromatografa en Columna.
Se utilizan columnas de vidrio rellenas de Almina (Al2O3), Slica u Oxido
de Magnesio. La fase estacionaria esta constituida por un slido poroso, el
cual queda soportado en el interior de una columna generalmente fabricada
en plstico o vidrio. La fase mvil se encuentra formada por la solucin que
lentamente va atravesando la fase estacionaria. La solucin que sale al final
de la columna se reemplaza constantemente por nueva solucin que se
suministra desde un contenedor por la parte superior de la columna.
La migracin de las sustancias de la mezcla a travs de la columna se
encuentra retardada en diferente grado por las interacciones diferenciales
que cada una de ellas pueda ejercer con la fase estacionaria. Las
sustancias se separan gradualmente formando bandas dentro de la banda
total, la separacin, y por tanto la resolucin, aumenta con la longitud de la
columna. La banda individual de cada sustancia puede ensancharse con el
tiempo debido a procesos difusinales, disminuyendo por tanto la
resolucin.
4. Cromatografa de gases.
Se utiliza para la separacin de sustancias gaseosas. La Fase Mvil es un
Gas (llamado Gas Portador) y la Fase Estacionaria puede ser un slido
(Cromatografa Gas-Slido) o una Pelcula de lquido de alto punto de
ebullicin (Generalmente Polietiln-Glicol o Silicn) recubriendo un slido
inerte (Cromatografa Gas-Lquido).
El cromatgrafo de gases esta constituido normalmente por un suministro y
una entrada del gas portador, un puerto de inyeccin, una columna
normalmente localizada en el interior de una cmara termostatizada
(horno), un detector y un sistema computarizado para analizar, registrar e
imprimir el cromatgrama. La muestra se introduce a travs del sistema de
inyeccin dentro de la columna que es el sitio donde ocurre la separacin.
La columna de aluminio, acero inoxidable, vidrio o tefln contiene la fase
estacionaria slida o lquida y esta sujeta a la superficie por un soporte que
es generalmente de slice.
La fase mvil o gas portador transporta los componentes de la muestra a
travs de la columna, por esta razn debe ser inerte para evitar
interacciones con la muestra o la fase estacionaria, y ser capaz de
minimizar la difusin gaseosa.
Al final de la columna existe el detector que permite la deteccin y
cuantificacin de las sustancias, midiendo conductividad trmica y
electronegatividad de las sustancias eludas. Se produce una seal tipo
elctrico, que posteriormente se amplifica por un registrador grafico o un
integrador permitiendo indicar el momento en que salen de la columna los
componentes. La salida de la sustancia se registra en un cromatgrama
en forma de picos y se determinan medidas como la altura y el rea del
pico.
5. Cromatografa Liquida de alta eficiencia o rendimiento (HPLC).
Es una Cromatografa de alta presin es decir se aplica el flujo a presin
(entre 1500 a 2200 psi). El tamao de partcula es entre 3 y 10 micras, la
longitud de la columna es entre 5 y 25 cm. y requiere de equipo sofisticado.
Se pueden analizar muestras proteicas. La reduccin del tiempo en que la
sustancia se encuentra en el interior de la columna, limita el
ensanchamiento por difusin de las bandas, aumentando por tanto la
resolucin.
El sistema HPLC requiere una mezcladora de solventes, un inyector, y una
bomba que inyecte el lquido a la columna. Generalmente las columnas de
slica requieren alta presin para que el flujo de lquido sea adecuado, la
mezcladora se requiere para variar la proporcin de solvente en la fase
mvil y el inyector permite la aplicacin de la muestra.
A la salida de la columna se coloca un detector generalmente de absorcin
ultravioleta o de fluorescencia y si se desea recuperar las molculas que
eluyen de la columna, se requiere un colector.
En los sistemas modernos el anlisis de la informacin obtenida se realizan
mediante una computadora acoplada al equipo; lo que permite estandarizar
la cromatografa, identificar la naturaleza los picos eludos y cuantificar su
contenido.
Los picos se relacionan segn su "tiempo de retencin" con estndares,
que permiten identificar los aminocidos presentes en la mezcla. La
cantidad relativa de cada uno de ellos se determina calculando el rea la
curva del pico correspondiente.
6. Cromatografa de intercambio inico.
La Fase Estacionaria es una resina de intercambio inico que contiene
grupos cargados, teniendo la propiedad de separar especies ionizadas
(Cationes o Aniones); la Fase Mvil es generalmente una solucin
amortiguadora de pH. En protenas la cromatografa de intercambio inico
se basa en las diferencias en signo y magnitud de la carga elctrica neta de
las protenas a un valor de pH determinado.
La afinidad de cada protena a los grupos cargados de la columna esta
influenciada por el pH y por la concentracin de iones en solucin
(concentracin salina) que compiten con la protena en la interaccin con la
matriz.
La separacin de la protena de la matriz cargada puede obtenerse
gradualmente cambiando el pH y/o la concentracin salina de la fase mvil,
de tal forma que se genere un gradiente de concentracin.
7. Cromatografa por Permeabilidad en Gel.
Es til para la separacin de protenas. La Cromatografa de exclusin
molecular, tambin llamada de filtracin en gel, separa en funcin de su
tamao. La matriz de la columna esta formada por un polmero
entrecruzado con poros de tamaos determinados.
Conclusiones de la prctica:
Conclusin general:
Despus de la realizacin de esta prctica de la interpretacin de los resultados
obtenidos, se concluye que por medio de la cromatografa es posible identificar los
componentes de una mezcla, adems de que se trabaj con soluciones polar, no
polar y medianamente polar, las cuales nos indican que las soluciones polares son
mejores en el empleo de esta prctica para poder observar los espectros y as
calcular el Rf.
Observaciones:
Al realizar la prctica al utilizar las soluciones pudimos notar que la solucin C era
la solucin polar, ya que esta pudo desplazar el colorante de manera uniforme en
la placa cromatogrfica, la solucin B no desplaz nada el colorante, y la Solucin
A lo desplaz dejando pequeas marcas en la placa
El gis al utilizar la solucin C desprendi un pequeo color amarillento que se
desplaz hasta el final
Al realizar la cromatografa en columna y al poner el colorante junto con la
solucin C, el colorante se separ en 3, dos eran tono de azul muy parecidos y
haba uno color morado.
Bibliografa:
http://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/cromatografia_tipus.html#simple
http://laboratoriotecnicasinstrumentales.es/cromatografa
http://es.wikipedia.org/wiki/Polaridad_(qu%C3%ADmica)
Hernndez Luna Heliodoro. (2007). 4 edicin, Qumica orgnica experimental a
escala semi micro y fundamentos de la espectroscopia. IPN, Mxico, Pp. 119-133.