CURSO DE FARMCIA

DISCIPLINA DE BIOQUMICA

Dosagem de Colesterol Total

Guilhermina Brites1; Inez de Lima Gonalves2; Dra.Snia Aparecida Viana
Cmara3.
1,2,
3

- Acadmicas do Curso de Farmcia.

- Professora da disciplina de Bioqumica.

1. Dosagem de Colesterol Total

Dosagem de Colesterol Total - experimento realizado em 17/09/2015.
2. Introduo
Colesterol um lcool policclico de cadeia longa, usualmente considerado
um esteride, encontrado nas membranas celulares e transportado no plasma
sanguneo de todos os animais. um componente essencial das membranas
celulares dos mamferos. O colesterol o principal esterol sintetizado pelos
animais, mas pequenas quantidades so tambm sintetizadas por
outros eucariotas, como plantas e fungos.
O colesterol insolvel em gua e, consequentemente, insolvel no sangue.
Para ser transportado atravs da corrente sangunea ele liga-se a diversos
tipos de lipoprotenas. As duas principais lipoprotenas usadas para diagnstico
dos nveis de colesterol so:
1.

lipoprotenas de baixa densidade (Low Density Lipoproteins ou

LDL): acredita-se que so a classe malfica ao ser humano, por serem
capazes de transportar o colesterol do fgado at as clulas de vrios outros
tecidos. Nos ltimos anos, o termo (de certa forma imprecisa) "colesterol ruim"
ou "colesterol mau" tem sido usado para referir ao LDL que, de acordo com
a hiptese de Rudolf Virchow, acredita-se ter aes danosas (formao de
placas arterosclerticas nos vasos sanguneos).

2.

lipoprotenas de alta densidade (High Density Lipoproteins ou

HDL): acredita-se que so capazes de absorver os cristais de colesterol, que
comeam a ser depositados nas paredes arteriais/veias (retardando o processo
arterosclertico). Tem sido usado o termo "colesterol bom" para referir ao HDL,
que se acredita que tem aes benficas.
O colesterol necessrio para construir e manter as membranas celulares;
regula a fluidez da membrana em diversas faixas de temperatura. O
grupo hidroxil presente no colesterol interage com as cabeas fosfato da
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membrana celular, enquanto que a maior parte dos esterides e da cadeia
de hidrocarbonetos est mergulhada no interior da membrana.
Algumas pesquisas recentes indicam que o colesterol pode atuar como
um antioxidante. O colesterol tambm ajuda na fabricao da blis (que
armazenada na vescula biliar e ajuda a digerir gorduras), e tambm
importante para o metabolismo das vitaminas lipossolveis, incluindo as
vitaminas A, D, E e K. Ele o principal precursor para a sntese de vitamina D
e
de
vrios hormnios
esterides (que
incluem
o cortisol e
a aldosterona nas glndulas
supra-renais,
e
os
hormnios
sexuais progesterona, os diversos estrgenos, testosterona e derivados).
O colesterol sintetizado primariamente da acetil CoA atravs da cascata
da HMG-CoA redutase em diversas clulas e tecidos. Cerca de 20 a 25% da
produo total diria (1 g/dia) ocorre no fgado; outros locais de maior taxa de
sntese incluem os intestinos, glndulas adrenais e rgos reprodutivos. Em
uma pessoa de cerca de 68 kg, a quantidade total de colesterol de 35 g, a
produo interna tpica diria de cerca de 1 g e a ingesta de 200 a 300 mg.
Do colesterol liberado ao intestino com a produo de bile, 92-97%
reabsorvido e reciclado via circulao entero-heptica.

O que o exame de colesterol:

Exame de sangue que mede as taxas de colesterol e de suas fraes HDL (o
colesterol bom), LDL (o colesterol ruim) e triglicerdeos na corrente
sangunea. Produzida pelo fgado, essa substncia est envolvida em diversos
processos vitais do organismo e seu excesso no sangue est relacionado a um
maior risco de desenvolvimento de doenas cardiovasculares.
Para que serve
A avaliao dos nveis do colesterol permite ao mdico detectar o risco
aumentado de doenas cardiovasculares e adotar medidas para reduzir as
taxas dessa substncia no sangue. Isso pode ser feito com mudanas nos
hbitos (alimentao pobre em gorduras e atividade fsica) ou com medicaes
especficas, como as estatinas.
Como feito
O sangue coletado por uma agulha colocada diretamente em uma veia do
brao.

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Preparo
necessrio jejum (de 3 a 12 horas, dependendo da idade). recomendvel
evitar excesso de comida gordurosa nas ltimas 48 horas e o uso de lcool nas
ltimas 72 horas antes do exame. O uso de remdios deve ser informado.
Valores de referncia
Colesterol total (CT): inferior a 200 mg/dL
LDL: inferior a 100 mg/dL
HDL: superior a 60 mg/dL
Triglicerdeos: inferior a 150 mg/dL

3. Objetivo em sala de aula

Realizar a tcnica de dosagem de colesterol, e aprender o fundamento do
mtodo.
4. Materiais e Mtodos
Todas as vidrarias e materiais utilizados sero relatados no item 4.1. seguidos
pelos reagentes utilizados no 4.2. e o procedimento experimental no item 4.3.
4.1. Materiais Utilizados

Pipetador e ponteira;
Galeria;
Tubos de ensaio;
Luvas de procedimentos;
gua destilada;
Frasco de plstico;
Bquer;
Cronometro;
Papel toalha;
Kit teste colesterol;

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Figura 1 Centrfuga fechada

Figura 2 Centrfuga aberta

Figura 3 - Banho-maria a 370C;

Figura 4 - Espectrofotmetro;

4.2. Reagentes Utilizados

Reagente 1 - Colesterol Liquiform Labtest Cat. 76.

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Figura 5 Kit Labtest e Reagentes

4.3. Procedimento Experimental Manual

1. Identificou-se trs tubos de acordo com o procedimento indicado, letra B
para Branco, letra T para o Teste e letra P para o Padro.
2. Coletou-se sangue de um acadmico do grupo, por meio de uma puno
venosa usando agulha, seringa 3 ml, algodo umedecido em lcool 70% para
assepsia local no brao indivduo do qual ser feito o exame de colesterol total.

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Fig.6 - Intravenosa (25 x 0,8 mm)

Figura 7 Puno venosa

2. Pipetou-se 1,0mL de reagente1 em cada tubo de ensaio, adicionou-se 0,1mL

da amostra e a mesma quantidade de padro. Quadro 1.
TUBOS

Amostra
Padro2
Reagente1

O clculo
foi o seguinte:

BRANCO
1,0 mL

TESTE
0,01
1,0mL

PADRO
0,1mL
1,0mL

utilizado

Colesterol/Mg/dL=absorbncia do
testex200
absorbncia
do padro

3. Homogeneizou-se os tubos e colocados no banho-maria a 37 C durante

10 minutos.
4. Determinou-se as absorbncias do teste e padro em 500 nm,
acertando o zero com o branco. A cor estvel por 60 minutos.
Lembrando que o nvel da gua no banho deve ser superior ao nvel do
reagente nos tubos de ensaio.
Figura 8 e 9 Procedimentos

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5. Aps esse procedimento colocou-se para centrifugar por 3 minutos a

uma velocidade de 9 RPMs.
Quando coletamos o sangue do paciente, obtemos soroplasma, ou seja,
plasma com hemcias misturadas, o objetivo de centrifugar separar o
plasma das hemcias. Uma vez separados, coloca-se o plasma em
outro tubo e iniciamos a dosagem do colesterol, ou seja separa o liquido
amarelo.
Hemcias = clulas vermelhas
Plasma = Nutrientes
Como j foi colocado na introduo, o valor de referencia do
Colesterol total (CT) deve ser inferior a 200 mg/dL, se o resultado
for acima disso, estar fora da taxa normal, demonstra que preciso
fazer
algum
tipo
de
tratamento.
Ainda em relao centrfuga, lembramos que preciso equilibr-la
com outro tubo com gua, colocando-os um de frente para o outro
(nunca de lado) para no trepidar, e os dois tubos tem que conter o
mesmo volume pois tem que haver equilbrio de peso.
A centrfuga s pode ser aberta quando parar totalmente, no abri-la
antes disso, para no trepidar.
6. Quando a centrfuga parou totalmente, retirou-se o tubo com a amostra.

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Figura 10 Separao do lquido

7. Aps retirada da centrfuga, utilizou-se uma pipeta de Pasteur para

separar o lquido. Este processo deve ser feito bem devagarinho, para
no subir o lquido vermelho.
8. Aps esse procedimento levou-se para a centrfuga biospectro.
O biospectro o instrumento que caracteriza amostras coloridas para
obter uma medida objetiva das caractersticas da cor.
Colormetros tornam possveis as verificaes de concentrao de
um soluto conhecido, desde que esta seja proporcional absorbncia.
antes de iniciar o procedimento necessrio zerar o aparelho utilizando
um tubo de ensaio branco e vazio, de acordo com a figura abaixo.
Em sala de aula, cada grupo repetiu esse procedimento, mas quando
isso feito em laboratrio, quando se zera o aparelho com o branco,
possvel fazer pelo menos 50 (cinqenta) testes de pacientes diferentes,
no sendo necessrio zerar cada vez que o fizer.
Durante o procedimento de leitura do padro, preciso tomar cuidado
para no balanar a bancada e nem trepidar o aparelho, para no
interferir no resultado.
9. Pegou-se a cubeta de quartzo, lavou-se com gua destilada contida na
pisseta, secou-se com papel toalha, colocou-se o material colhido dentro
dela e colocou-se no espectrofotmetro e aguardou-se a leitura no
aparelho.

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Figura 11 cubeta

10. preciso lembrar-se de segurar a cubeta pelos lados opacos e estes

mesmos lados devem ser colocados de forma contrria a luz, j que a
mesma dever incidir sobre o lquido pela parte transparente. Verifica-se
a concentrao da substncia de acordo com a intensidade da cor.
5. Resultados
Os resultados que deveriam ser obtidos atravs do clculo abaixo, e o valor
encontrado deveria ser este:
Desejvel ...............................< 200
Aceitvel..............................200-239
Elevado...................................> 240

Colesterol (g/dL) = Absorbncia da amostra x 200

Absorbncia do padro
Colesterol (g/dL) = 0,654 x 200
0,833
Colesterol (g/dL) = 157,02 mg/dL
Colesterol (g/dL) = 0,385.

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6. Concluso
Ao determinarmos a dosagem do colesterol, o resultado apresentou-se
insatisfatrio na analise realizada. O valor obtido foi 0,385 mg/dL, valor
totalmente fora da faixa de especificao.
7. Discusso
No caso do nosso grupo, por falta de habilidade do aluno, talvez porque o
mesmo no pipetou direito, ou porque usou kits diferentes e padro diferentes,
o resultado no foi satisfatrio, a soluo ficou incolor, a leitura ficou muito
abaixo dos nveis normais.
De qualquer forma, como estamos em sala de aula, e o objetivo aprender as
tcnicas, por um lado o resultado saiu errado, mas por outro, serviu para a
aprendizagem.
8. Referncias

SBC. Sociedade Brasileira de Cardiologia. Resumo das III Diretrizes

Brasileiras sobre Dislipidemias e Diretriz de Preveno da Aterosclerose da
Sociedade Brasileira de Cardiologia. Arq. Bras. Cardiol. 2001; 77:1-48.

Procedimento operacional padro para dosagem de colesterol,

disponvel
em:http://www.lincx.com.br/cuidando-de-sua-saude/saude-de-aa-/medicina /bprevencao/5156-colesterol-e-triglicerides.html, acesso em
01/05/11 as 22:50.

Dosagem de colesterol total, disponvel em http://www.mega21.com.br

/artigo/310-Dosagem-de-colesterol-total.htm, acesso em 29/04/11 as 19:30.

Colesterol, disponvel em: http://pt.wikipedia.org/wiki/Colesterol, acesso

em 30/04/11 as 12:00.

http://www.scielo.br/scielo.php?pid=S000427302002000100004&script=sci_arttext
Acesso em: 14 de setembro de 2015.
http://www.diabetes.org.br/
Acesso em: 14 de setembro de 2015.
Juliana Hori, Bioqumica, Editora Sesse, Rio de Janeiro, 2015.

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