25-09-2015

Relao entre a estrutura e a funo das protenas

Hemoglobina e Mioglobina

Guadalupe Cabral
(guadalupe.cabral@fcm.unl.pt)

Tecidos, Clulas e Molculas 2015/2016

As globinas constituem um bom exemplo para se compreender as

relaes entre a estrutura e a funo das protenas.

A Mioglobina, composta por uma cadeia polipeptdica,

uma protena armazenadora de oxignio, presente
no tecido muscular de mamferos.

apresenta alta afinidade por O2

A Hemoglobina, composta por quatro cadeias

polipeptdicas, uma protena transportadora de
oxignio.

apresenta afinidade varivel por O2

Alteraes estruturais tm repercusses funcionais

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Comparao das estruturas 3D das globinas e da

hemoglobina e mioglobina

globina

globina

mioglobina

hemoglobina
Apesar do baixo grau de identidade das 3 sequncias de aminocidos
globnicas h uma semelhana estrutural das 3 globinas, formadas por
7/8 segmentos de -hlice que delimitam uma fenda, na qual se localiza o
heme.

O heme das globinas responsvel pela ligao ao

oxignio

+ Fe2+
Heme sintase

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Hemoglobina - caractersticas

Protena globular, em altas concentraes nos glbulos
Vermelhos

Transporta O2 do aparelho respiratrio para os tecidos
perifricos (4 molculas de O2 por cada molcula de
hemoglobina)

Transporta CO2 dos
tecidos para os pulmes

Valores normais no sangue:
13-18 g/dl no homem
12-16 g/dl na mulher

Hemoglobina - estrutura

Estrutura primria: Com algumas diferenas nas
vrias globinas

Estrutura secundria: hlice alfa

Estrutura terciria: Globular- aminocidos
hidroflicos no exterior (solubilidade) e aminocidos
hidrfobos no interior (pockets para insero do grupo
heme)

Estrutura quaternria: Tetrmero solvel

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Hemoglobina - estrutura
Dmeros 11 e 2 2, com eixo de simetria
- Um grupo prosttico Heme por cada subunidade ligado a histidina proximal 87
() e 92 () na bolsa hidrofobica da hemoglobina

Hemoglobina - estrutura
O Fe2+ fica no centro do heme, formando 6 Ligaes: liga-se aos 4 tomos de N do anel
porfrinico, 1 ligao cadeia polipeptdica (atravs de um resduo de histidina (87 ou 92)
histidina proximal e a uma molcula de O2

Fe

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Ligao de O2 ao Fe2+

O2

Como a ligao de um O2 num grupo heme afecta a

afinidade de ligao de outro grupo heme?

Desoxigenado

Oxigenado

A oxigenao faz com que o Fe2+ que no estava originalmente centrado no plano da
protoporfirina, se mova para esse plano, distorcendo a cadeia da Hb
e causando uma alterao conformacional.
Como consequncia da alterao conformacional em uma das subunidades, ocorrem
alteraes nas outras subunidades e altera-se a afinidade destas para o O2.

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A oxigenao da molcula de hemoglobina

Quando o O2 se liga a Hb - um dmero
Alfa-Beta sofre rotao de 15 em
relao ao outro rearranjo estrutural
que permite a transformao em Hb , com
maior afinidade para o O2.

Alteraes conformacionais da hemoglobina durante a transio do

estado oxigenado para desoxigenado

Mudanas nos contactos entre as

subunidades

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Conformaes da Hemoglobina
Duas conformaes principais com diferentes afinidades para o O2:
1) T (Tenso) - Estado desoxigenado - desoxi-Hb
2) R (Relaxado) - Estado Oxigenado Oxi -Hb

O2

Na presena de O2, o estado R mais estvel

Conformaes da Hemoglobina
Forma desoxigenada (desoxi Hb) Conformao T
As subunidade esto mais afastadas (5A)
A estrutura molecular mais rgida e dificulta o acesso ao O2

Forma oxigenada (oxi-Hb) Conformao R

Maior proximidade das cadeias
Ligao de O2 a desoxi-Hb favorece a conformao R por rotura de
pontes salinas aumenta a flexibilidade da molcula e facilita a ligao a
mais molculas de O2

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Alosterismo na hemoglobina (Hb)

A ligao da primeira molcula de oxignio (O2) ao heme facilita o preenchimento dos
outros grupos heme, de tal maneira que a ligao da quarta molcula de oxignio 300
vezes mais fcil que a ligao da primeira.

Cooperatividade.

O2 um modelador alostrico positivo

A curva de saturao da hemoglobina pelo O2

segue um perfil sigmoidal
Afinidade da Hb para o O2 varia com a PO2
Fraco de stios ocupados
(% de saturao da Hemoglobina)

Pulmes
Presso de O2 arterial

Presso de O2 venoso

Maior afinidade para O2 no pulmo -

pO2
Menor afinidade nos tecidos
- pO2

Tecidos
Presso parcial de O2 (PO2)

Reflete o modelo concertado de cooperatividade

Forma T
Tecidos

Forma R
Pulmes

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H+ e CO2: outros ligandos modeladores alostricos da

Hemoglobina o Efeito de Bohr - Haldane

 A afinidade da hemoglobina pelo O2 depende de pH do meio

 A acidez e aumento da concentrao de CO2 (por ligao direta Hb ou
por se transformar em cido carbnico H2CO3 - o qual se dissocia em H+ e
HCO3-) - estimulam a libertao de oxignio - a afinidade e favorecida a
conformao T.
Para a mesma pO2, a saturao da Hb
diminui de 65% em pH 7,6 para 35% em pH
7,2.
 A presena de nveis mais altos de CO2 e H+ nos
capilares de tecidos em metabolismo ativo promove a
liberao de O2 da hemoglobina,

O processo de alterao da afinidade da

hemoglobina pelo O2 na presena de H+,
CO2 e O2 efeito Bohr - Haldane

2,3-Bisfosfoglicerato: ligando modelador alostrico da

hemoglobina

2,3 Bifosfoglicerato (2,3-BPG)

Liga-se conformao T estabilizando-a
diminui afinidade para O2 (tecidos, PO2 )
A ligao de O2 Hb T - diminui afinidade para 2,3 BPG (pulmes, PO2)

O seu papel fisiolgico aumentar substancialmente a libertao de O2 nos

tecidos extrapulmonares, onde a PO2 baixa.

- A exposio prolongada altitude aumenta o 2,3 BPG (adaptao)

que diminui a afinidade do heme para o O2 mas aumenta a libertao
de O2 nos tecidos

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2,3-bifosfoglicerato um regulador alostrico negativo da

hemoglobina
O 2,3 BPG liga-se na cavidade
central do tetrmero da
hemoglobina, estabilizado por
interaes eletrostticas com
resduos de carga positiva.

Desvios curva de saturao da hemoglobina

pelo O2

A P50 a presso parcial do oxignio na qual a Hb se encontra 50% saturada, padronizada a um nvel
de pH de 7,40. A P50 normal de aproximadamente 27 mmHg.
Condies que causam uma diminuio da afinidade da Hb pelo oxignio aumentam a P50 acima do
seu valor normal.
Condies associadas com um aumento da afinidade diminuem a P50 abaixo do seu valor normal.

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O papel da histidina distal

(58 e 63 em e )

Protege o Fe2+ da oxidao Meta-hemaglobina (Fe3+)

Impedimento estreo da ligao do CO (maior afinidade que o O2) ao Fe2+
O CO liga-se linearmente ao Fe2+ - h um impedimento pela histidina distal
(enquanto que o O2 no afectado porque se liga com um angulo de 120
relativamente ao plano do anel).

ONTOGENIA DAS HEMOGLOBINAS

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Desenvolvimento biolgico

Dadas as condies respiratrias to diferentes durante o desenvolvimento

biolgico, explica-se a existncia de tipos diferentes de hemoglobinas,
adequados aos perodos intra e extra-uterinos de vida.

HEMOGLOBINA Fetal (F) vs Adulto (A)

Na hemoglobina A as cadeias normais ligam-se ao 2,3-BPG, o seu regulador natural, que

participa na libertao do oxignio.
Na hemoglobia F as cadeias no se ligam ao 2,3-BPG e por consequncia tm uma maior
afinidade para com o oxignio. Num ambiente pobre em oxignio, como o da placenta, o oxignio
libertado da hemoglobina da me e o feto capta-o e liga-se a ele. Esta pequena diferena na
afinidade medeia a transferncia de oxignio da me para o feto.

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HEMOGLOBINOPATIAS - classificao
1. Estruturais (erros sequncia de aminocidos)
a) Polimerizao HbS Anemia Falciforme
b) Afinidade alterada para O2
Aumentada (Hb Yakima - eritrocitose)
Diminuda (cianose)
c) Hemoglobinas instveis (Hb Koln, Hb Philly, Hb Genova corpos de
incluso e hemlise)
2. Talassmias (erros na sntese de globina)
3. Variantes talassmicas (hemoglobinopatias estruturais com
fentipos talassmicos associados)
a) HbE, Hb Constant Spring, Hb Lepore
4. Persistncia hereditria de HbF
5. Adquiridas
a) Methemoglobina
b) Sulfhemoglobina
c) Carboxihemoglobina
d) Aumento dos nveis de HbF

Anemia Falciforme

Hemoglobina S - tipo anormal de hemoglobina - faz com que as hemcias

adquiram a forma de foice (da o nome falciforme) em ambiente de baixa
oxigenao, dificultando sua circulao e provocando obstruo vascular.

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Mioglobina- caractersticas

Hemoprotena citoplasmtica

Ancestral comum com hemoglobina

Msculo estriado cardaco e esqueltico dos mamferos

Funo:
Armazenamento de O2 no msculo e transporte para a mitocndria
(grandes demandas de O2)

Mioglobina- estrutura
Estrutura monomrica (cadeia nica 154 aa)
Cadeia polipeptdica com 8 hlices (de A a H)
1 grupo heme na bolsa hidrofbica, entre 2 resduos de histidina (His64 e
His93) com um tomo de Fe2+ central
Ferro com 6 ligandos
4 tomos de N (anel de porfirina)
1 His93 (= hemoglobina)
1 O2

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As estruturas secundrias e tercirias da mioglobina e das

subunidades da Hemoglobina so quase idnticas

Grupo Heme

Mioglobina

Subunidade da Hemoglobina

Comparao das curva de saturao pelo O2 da

hemoglobina e da mioglobina

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Mioglobina
Armazena O2 no msculo e
transporta para as mitocndrias
Uma cadeia polipeptdica estrutura
terciria

Funo de saturao: curva

hiperblica

P50 menor

Hemoglobina
Transporte de O2 dos pulmes para as
clulas e de CO2 das clulas para os
pulmes
Quatro cadeias polipeptdicasestrutura quaternria

Funo de saturao: curva sigmoidal

P50 maior

Maior afinidade para o O2

Menor afinidade para o O2

No alostrica

Alostrica: Forma T e forma R

No h presena de efeito cooperativo

No afectada por H+ e 2,3-BPG

Efeito cooperativo
Afectada por H+ e 2,3-BPG (estabilizam
a forma T)

Importante saber:
o As caractersticas gerais, a funo metablica e estrutura da Hemoglobina
o A importncia do mecanismo de cooperatividade e a alternncia entre as
conformaes T e R para a funo da Hemoglobina
o Interpretar as curvas de saturao da Hemoglobina e a forma como refletem a
alterao conformacional/funcionalidade desta protena
o A modulao alostrica negativa e o efeito de Bohr-Haldane
o Os vrios tipos de hemoglobinas presentes ao longo do desenvolvimento
biolgico
oSaber as semelhanas e as diferenas entre a Mioglobina e a Hemoglobina em
termos de estrutura e funo

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Aplicao dos conhecimentos:

Curvas de oxigenao da Mioglobina, Hemoglobina A e Hemoglobina F.

1. Identifique-as corretamente e justifique a sua escolha.
2. Porque que que a hemoglobina
mais adequada do que a mioglobina para a
funo de transporte de O2?

3. Qual o efeito da ligao do CO2 e H+

hemoglobina? Qual a importncia desta ligao na
oxigenao dos tecidos?

Bibliografia
 Alexandre Quintas, Ana Ponces e Manuel J. Halpern., Bioqumica Organizao Molecular da Vida. Lidel Edies Tcnicas Lda Captulo 14
 Gerald Carp, Cell and Molecular Biology Concepts and Experiments. John
Wiley & Sons, Inc. 16th edition Captulo 2
 Lodish, Harvey et al.; Molecular Cell Biology; 4 Edio; W. H. Freeman and
Company. Captulo 3
 Links teis
http://www.wiley.com/college/pratt/0471393878/student/structure/myoglo
bin_hemoglobin/
http://themedicalbiochemistrypage.org/hemoglobin-myoglobin.php

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