Determinar curva de valoracion

Dterminacion de absorvancia por medio de un espectofotometro

Pastilla de clorofila 760mg por cada 3.6 gramos de muestra.
Molesmo la muestra, se coloca en un mortero con pistilo, la cantidad de la
pastilla es aprox de 5gramos ( hasta pulverizadarlas, polvo fino)
Las pastillas qudaron ulverizadas
Pesando la clorofila molida pesamos exactamente 5 gramos (balanza analtica
es muy exacto) y obtenemeos pesos hasta 5 cifras signficativas
Peso= 5.0294 gramos
Como nuestras pastillas de clorofila contienen una base, se necesita la
extracion completa del ANALITO, para lo cual colocamos las pastillas de
clorofila molidas en un vaso precipitado y las disolvemos con ACETONA.
Luego lo vertemos en el matraz aforado todo lo disuleto anteriormente
Transferiri la pastilla, y si se ha quedado residuo, tomar acetona limpia y volver
a hacer le procedimiento, tiene k trasvasarse todo elc ontnido del vaso
precipitado
TIP: ir poniendo cantidades pequeas del disolvente en el vaso del preciptado,
esto permite trasvasar todo el contenido del vaso de preciptado al matraz
aforado.
Que pasa si no trsvasamos todo? Si nos quedan residuso, pues ya no se tendr
la concentracin que nos estn indicando de clorofila en nuestra solucin.
Ahora se va aforar nuestro matraz aforado y mezclamos
Una vez mezaclado e observa en la parte inferior, que la pastilla que haba
quedado, ya esta totalmente disuelto
Vertemos un poc de extracto en un vaso precipitado, y lkenamos en lso tubos
para ecpectro, con la solucin
TUBO 1: 1 mililitro de extracto
TUBO 2: 3 mililitro de extracto
TUBO 3: 5 mililitro de extracto
TUBO 4: 7 mililitro de extracto
TUBO 5: 9 mililitro de extracto
Con el fin de obtener diferentes concentraciones de la clorofila en nuestra
muestra.
Y llenamos un tubo con pura acetona (DISOLVENte), el cual nos funciona como
blanco para nuestra determinnacion.

Luego pipetemos, para agregar las cantidades descritas de la mezcla en cada

tubo segn la cntidad establecida.
Nos detenemos en el mililitro 9, es importante no continuar, en elc aso cuando
no requerimso todo el volumen dela pipeta porque la ultima parte no esta
graduada, y podemos tener un mayor error, es preferible si vamos a pner 7
mililitros, llenemos nuestra pipeta y hacerlo en una sola ALCUOTA.
Ahora se va acompletar al volumen de 10 militros para que todo los tubos
tengan la misma cntidad de muestra, es fudamental en espectrofotometra,
porqk si onemos diferentes vlumenes, se tendr diferente mediociones
TUBO1: 1ml adicionamos 9ml (acetona)= 10 ml
TUBO2: 3ml adicionamos 7ml (acetona) = 10 ml
TUBO3: 5ml adicionamos 5ml (acetona) = 10 ml
TUBO4: 7ml adicionamos 3ml (acetona)= 10 ml
TUBO5: 9ml adicionamos 1ml (acetona) = 10 ml
Y de esta manera, ya estara nuestras diluciones para pasar al equipo de
espectrofotometra.
EN EL ESPECTROFOTMETRO
Ya teniendo nuestra muestras, Podemos desiganar un programa que el equipo
tenga almacenado, pero podemos establecer nosotros la longitud de onda en la
que podamos medir.
Sabemos que la lontigut de honda es de 645 nanometros, registramso y ok.
SOLVENTE= ACETONA, utilizamso un tubo k contenga nicamente acetona
como nuestro blanco.
Y esto lo ponemos en la camra de lectura, que pasa rayos de luz, el cual va
absorversrse en nuestra muestra.
En esta muestra no haba nada de clorofila, po lo tanto se marca como cero. Y
el equopo ajusta acro automticamente.
El equpo esta estbilizado, y sacamos nuesto tubo como blanco.
Tomamos la solucin con menos concentracin, la limpiamos es importante
hacerlo con pael absorvente suave, pork las celdas no se deben rayas, si
sucede eso, altera la medida.
Insertamso el primer tubo, ponemso medicin y nos proporciona el dato para al
medicin.
1ER tubo de 1ml de extracto (Clorofila) = lectura 0.572 de absorbancia
2do tubo 3ml de extracto = lectura 1.832 de absorbancia

3rt tubo 5ml de extracto = lectura 2.843 de absorbancia

4to tubo 7 ml de extracto = lectura 3.305 de absorbancia
5to tubo de 9 ml de extracto = lectura, el valor que se ha regitraod es mayor a
3.5 quiere decir, si ya un equipo nos registra k es superior a ese valor, esk
estamso fuera del intervalo del equipo, para lo cual se tendra k hacer una
diluscion ( pero con lo valores obtenido es suvicnete) y se puede hacer la cyrva
de calibracion
NO DEBEMSO ABRIR LA CAMARA CUANDO EL ESPECTROFOTOMETRO ESTA
MIDIENDO, YA QUE toda la luz visible en uestar alrededor, entra al aquipo y la
lectura ser alterada.
CALCULOR PARA CURVA DE CALIBRACIN
760 miligramos 100 gr pastillas (frasco, estos estabas contenido en 100 gr de
padtila)
X

- 5 gramos de pastilla (balanza analtica pesamos)

Cuntos gramos de clorofila han contenido en esos 5 gramos de pastilla

X= 38 miligramos en 5 gramos de pastilla.
Estos 5 gramos de pastilla lo disolvimos en 250 mililitros de acetona.
Entonces dividimos esos 38 miligramos en 5 gramos de pastilla en 250
mililitros de acetona n el que disolvemos, obteniendo una concentracin de
clorofila a 0.152 miligramos por mililitro de acetona.
Con estos datos vamos hacer nuestro clculos para la curva de calibracin.
1 mililitro de extracto + 9 mililitros de acetona=10 ml de volumen de Dilucin
3 mililitro de extracto+ 7 mililitros de acetona= 10 ml de volumen de Dilucin
5 mililitro de extracto+ 5 mililitros de acetona= 10 ml de volumen de Dilucin
7 mililitro de extracto+ 3 mililitros de acetona= 10 ml de volumen de Dilucin
9 mililitro de extracto+ 1 mililitros de acetona= 10 ml de volumen de Dilucin
Tenemos:
Concentracin de 0.152 mg/ml de acetona
N1*V1=N2*V2
Hallamos la concentracin final de nuestras diluciones
10ml -> volumen final
1ml de extracto Con una Concentracin de 0.152 mg/ml de acetona

Entonces definimos:
N1= 0.152mg/ml (concentracin)
V1= 1m (volumen inicial)
N2=?
V2= 10 ml (volumen final)
(N1*V1)/V2 = N2
Sustituyendo los datos en los 5 tubos:
1er TUBO: (0.152mg/ml*1ml)/10ml = 0.0152mg/ml de concentracin de
clorofila
2do TUBO: (0.152mg/ml*3ml)/10ml = 0.0456mg/ml de concentracin de
clorofila
3ero TUBO: (0.152mg/ml*5ml)/10ml = 0.076mg/ml de concentracin de
clorofila
4to TUBO: (0.152mg/ml*7ml)/10ml = 0.1064mg/ml de concentracin de
clorofila
5to TUBO: (0.152mg/ml*9ml)/10ml = 0.1368mg/ml de concentracin de
clorofila
Grfica que coincida con las absorbancia obtenidas para cada dato.
Dato de absorbancia para 1ml: 0.572
Dato de absorbancia para 3ml: 1.832
Dato de absorbancia para 5ml: 2.843
Dato de absorbancia para 7ml: 3.305
Dato de absorbancia para 9ml: >3.5, por lo tanto con el dato obtenido lneas
arriba de 0.1368mg/ml de concentracin (Tubo 5), no se considera estos
valores para nuestra curva de valoracin.