ELECTROFORESIS: PRINCIPIOS Y APLICACIONES

MAURICIO PULIDO JIMNEZ

CENTRO DE ESTUDIOS EN BIOLOGA MOLECULAR

GIMNASIO CAMPESTRE

ANTECEDENTES HISTRICOS DE LA ELECTROFORESIS

La electroforesis nace como uno de los numerosos desarrollos contemporneos de la

electroqumica, rama de la fisicoqumica que a lo largo de la historia ha tenido como
objetos de estudio los primeros magnetos (s. XVI y XVII), las cargas elctricas y la
conductividad (s. XIX), las bateras solares, los mtodos de proteccin de metales y algunas
tcnicas aplicadas a la biologa (s. XX).

La primera aplicacin de la electroqumica en los campos de la biologa y la

medicina se di en 1937, cuando el bioqumico sueco Arne Tiselius
desarroll el primer aparato sofisticado de electroforesis.

Arne Wilhelm Kaurin Tiselius (1902-1971)

Premio Nobel Qumica - 1948

ELECTROFORESIS
lek-tr(o)- gr. cient. electricidad + pher-/phor- llevar

La electroforesis es una tcnica que permite la separacin de molculas (DNA, RNA

protenas) en funcin de su tamao, carga elctrica y conformacin mediante la
aplicacin de corriente elctrica.

PRINCIPIO DE LA TCNICA

La corriente elctrica aplicada hace que las molculas cargadas negativamente se

muevan a travs de los poros de un soporte gelatinoso llamado gel en el mismo
sentido del flujo de electrones.
Los poros del gel (cuyo tamao puede variar) actan a manera de coladera
permitiendo o dificultando el paso de las molculas. Las ms pequeas se mueven
ms rpidamente y migran ms lejos que las grandes.

EL GEL
Para la separacin de las molculas (DNA, RNA protenas) se requiere de un
soporte (matriz) de naturaleza gelatinosa llamado gel. Los dos tipos de molculas
ms ampliamente utilizadas para la preparacin de geles de electroforesis son:
Agarosa
Poliacrilamida (Acrilamida + Bisacrilamida)

AGAROSA
La agarosa es un polisacrido lineal que se extrae de algas marinas de los gneros
Gellidium y Gracillaria. Est formada por la repeticin de unidades del disacrido
agarobiosa, constituido por dos molculas de galactosa.
(-D-galactosa + 3,6 anhidro- -L-galactosa).

La agarosa es soluble en agua a temperaturas cercanas a los 65C; el nmero

de sustituciones hidroxietlicas en sus cadenas laterales se puede modificar
para lograr que la temperatura de gelificacin vare entre 17 y 40 C.

Agarobiosa (-D-galactosa + 3,6 anhidro- -L-galactosa)

POLIACRILAMIDA
La poliacrilamida es una molcula de gran tamao que resulta de la asociacin de dos
tipos de molculas ms pequeas: acrilamida y bisacrilamida. Forma un gel con poros
mucho ms pequeos que la agarosa, lo que le permite separar ms eficientemente
molculas de tamao similar.

+
Acrilamida

Bisacrilamida

Poliacrilamida

La concentracin de la agarosa o la poliacrilamida en el gel determina el tamao

de los poros, lo que a su vez determina el tamao de las molculas que podrn
pasar a travs del gel y la velocidad a la cual se desplazarn.

CMO SE HACE UNA ELECTROFORESIS?

1. Preparacin del gel de Agarosa

CMO SE HACE UNA ELECTROFORESIS?

2. Siembra de las muestras en el gel

CMO SE HACE UNA ELECTROFORESIS?

3. Corrido del gel

CMO SE HACE UNA ELECTROFORESIS?

4. Visualizacin bandas de DNA con L.U.V

Bromuro de Etidio se intercala entre

las bases nitrogenadas del DNA.
Cuando el gel se expone a L.U.V
(longitud onda = 260 nM), la molcula
de BrEt absorbe la energa y la
proyecta en forma de luz visible.

ELECTROFORESIS DE DNA EN GEL DE AGAROSA

SIMULADOR ELECTROFORESIS
http://biomodel.uah.es/lab/sds-page/inicio.htm
http://biomodel.uah.es/biomodel-misc/anim/elfo/electrof2.html