5. QU ES UN MARCADOR CELULAR?

EXPLICAR BREVEMENTE LA
PROTENA VERDE FLUORESCENTE (GFP).
Los marcadores celulares se encuentran en todas las clulas somticas, son antgenos (protenas) de superficie de
todas las clulas, algunas de estas protenas se encuentran solo en ciertos tipos de clulas, por ejemplo el CD16 es
la protena que se expresa especficamente en neutrfilos, clulas NK y macrfagos.
PROTENA VERDE FLUORESCENTE
La protena verde fluorescente (o GFP, por sus siglas en ingls, Green Fluorescent Protein) es una
protena producida por la medusa Aequorea victoria, que emite bioluminiscencia en la zona verde del
espectro visible. El gen que codifica esta protena, que ya ha sido clonado, se utiliza habitualmente en
biologa molecular como marcador. El descubrimiento y estudio de GFP represent un enorme avance
para los investigadores, ampla la capacidad del microscopio ptico, y otorga una nueva dimensin
visible al ojo humano.
Los descubrimientos relacionados a la GFP de Osamu Shimomura, Martin Chalfie, y Roger Y. Tsien
merecieron el Premio Nobel de Qumica 2008, otorgado en partes iguales a los tres, "por el
descubrimiento y desarrollo de la protena verde fluorescente.
A pesar que la llamada qumica "verde" est de moda en la comunidad de qumicos, ningn esfuerzo de
los mismos ha podido igualar las reacciones que coordina un solo gen de esta medusa.
Las protenas fluorescentes, entre las cuales se encuentra la GFP, son muy verstiles y se utilizan en diversos
campos como la microbiologa, ingeniera gentica y fisiologa. Permiten ver procesos previamente invisibles, como
el desarrollo de neuronas, cmo se diseminan las clulas cancerosas, el desarrollo de la enfermedad de Alzheimer,
el crecimiento de bacterias patognicas, la proliferacin del virus del SIDA, entre otros.
Por ejemplo, clulas cancerosas permite seguir la evolucin comparativa de las metstasis en presencia o ausencia
de distintos frmacos.
La GFP tambin tiene una importancia especial en la biologa del desarrollo: si se introduce en un estadio temprano
de un embrin, se puede seguir la evolucin de las primeras clulas, estructuras y rganos.

6. DESCRIBA BREVEMENTE LA TCNICA DE FISH.

FISH o hibridacin fluorescente in situ es una tcnica citogentica de marcaje de cromosomas mediante la
cual estos son hibridados con sondas que emiten fluorescencia y permiten la visualizacin, distincin y
estudio de los cromosomas as como de las anomalas que puedan presentar. Esta tcnica permite la rpida
determinacin de aneuploidas, microdeleciones, duplicaciones, inversiones, as como la adjudicacin de
un marcador gentico a un cromosoma (cartografa gentica).
La tcnica FISH puede realizarse a los cromosomas en metafase o en interface.
Los cromosomas que son usualmente analizados por FISH son los 13, 18, 21, X e Y, que son los ms
propensos a sufrir anomalas. Estn relacionados a enfermedades como :
el sndrome de Patau (13),
el sndrome de Edwards (18),
el sndrome de Down (21),
el sndrome de Turner (X) y
el sndrome del superhombre (Y), entre otros.
Sin embargo, cmo son posibles marcados adicionales del cromosoma, otros cromosomas pueden ser
visualizados con esta tcnica. FISH usa segmentos de una nica hebra de ADN que son tintados, o

etiquetados, con una sustancia fluorescente que puede ligarse a un cromosoma especfico; estos
segmentos de ADN son llamados sondas. En un principio se emplearon sondas de carcter radiactivo,
pero este tipo de marcaje fue reemplazado por los fluorforos por mayor seguridad, eficacia y facilidad de
deteccin.
Protocolo bsico: El primer paso de la tcnica consiste en la desnaturalizacin del DNA para separar la
doble hlice. A la muestra desnaturalizada se le aade entonces la sonda de inters (fragmento de ADN
marcado fluorescentemente). Primero, las sondas hibridan a las regiones especficas para las que han sido
diseadas. Despus, se tien los ncleos con un color de contraste inespecfico (generalmente DAPI). Las
sondas de DNA pueden marcarse con molculas fluorescentes denominados fluorforos (mtodo directo)
o no fluorescentes que se detectan con anticuerpos fluorescentes (mtodo indirecto). Por ltimo se
visualiza la muestra preparada bajo un microscopio de fluorescencia.
Aplicaciones: Esta tcnica ha resultado ser muy til en el campo de la medicina reproductiva, con
aplicacin en el diagnstico gentico preimplantatorio (DGP). Resulta una forma muy precoz de
diagnstico que, apoyndose en las tcnicas de reproduccin asistida, posibilita el estudio de embriones
antes de ser transferidos al tero materno y, por consiguiente, antes de que se lleve a cabo la implantacin
embrionaria. Para el anlisis de anomalas cromosmicas embrionarias, tanto numricas como
estructurales, puede utilizarse la tcnica DGP-FISH. Para este fin se requiere una biopsia embrionaria,
mediante la cual se extrae una clula del embrin en cultivo "in vitro". Seguidamente, se procesa la
muestra de tal manera que quede fijado el ncleo en interfase y se hibrida con sondas especficas para el
estudio cromosmico de la patologa que se sospecha pueda estar presente en el embrin.