UNIVERSIDAD TECNICA DE

MANABI
FALCULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA DE LABORATORIO CLINICO
BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR II

TRABAJO DE EXPOSICION
TEMAS:
HIBRIDACION DE ACIDOS NUCLEICOS
SONDAS DE ANTICUERPOS PARA PROTEINAS
INTEGRANTES:
FLECHER PALMA JERSON
SALTOS GARCIA KARLA
SANTANA CANDELA JOSSENKA
PESANTES LUCAS NEXAR
PUCHA BAIRD PAMELA
ZAMBRANO MENDOZA KAROL
DOCENTE: MAYRA PARRAGA

PALABRAS CLAVES

Clones
Cebador
Hibridacin
Northern blotting
Electroforesis
Clula neoplsica
SDS-poliacrilamida
Inmunoprecipitacion
Quimioluminiscencia
Desnaturalizada
Endonucleasa
Nitrocelulosa
Microarrays
ADNc
Hibridacin in situ

GLOSARIO

Cebador: Un iniciador o cebador es una secuencia corta de ADN de cadena simple que
se utiliza en una reaccin en cadena de la polimerasa
SDS-poliacrilamida: Es una tcnica ampliamente utilizada en bioqumica, gentica,
biologa molecular y ciencia forense para separar las protenas
Inmuno-precipitacin: Regula procesos que se dan sobre la estructura nucleosomal
como la transcripcin, la replicacin y la recombinacin.
Quimioluminiscencia: Produccin de luz que acompaa a algunas reacciones qumicas
y bioqumicas.
Desnaturalizadas: Hacer que una protena pierda total o parcialmente su estructura.
Endonucleasa: Son enzimas que catalizan la ruptura de enlaces fosfodister en
diferentes regiones ubicadas en el interior de una cadena polinucleotdica
Nitrocelulosa: Producto resultante de la nitracin de la celulosa.
Oligonucletidos: es una secuencia corta de ADN o ARN, con cincuenta pares de bases
o menos.
Microarrays: (Microarray) Un Chip de ADN es una superficie slida a la cual se une
una coleccin de fragmentos de ADN. Las superficies empleadas para fijar el ADN son
muy variables y pueden ser de vidrio, plstico e incluso de silicona.
ADNc: El ADN complementario o ADN copia (ADNc) es una hebra de ADN de doble
cadena una de las cuales constituye una secuencia totalmente complementaria del ARN
mensajero a partir del cual se ha sintetizado.
Hibridacin in situ: La hibridacin in situ es una tcnica de laboratorio que consiste en
marcar una hebra sencilla de ARN o ADN denominada sonda y permitir que se empareje
con su secuencia complementaria en el ARN o el ADN presente en una muestra de tejido
o de cromosomas.

Hibridacin de
cidos Nucleicos

La clave para la deteccin de

secuencias especficas de
cidos nucleicos es el
apareamiento de bases entre
hebras complementarias de
ARN o ADN.
Las hebras complementarias
de ADN se separan dando
molculas de cadena simple.
Si dichas hebras
desnaturalizadas de ADN se
incuban se renaturalizaran
para formar molculas de
doble cadena por
apareamiento complementario
de bases.

Como se ha descrito anteriormente la

hibridacin entre cebadores y ADN
molde proporciona la especificidad a la
amplificacin por PCR.
Adicionalmente, una variedad de otras
tcnicas emplean la hibridacin de
cidos nucleicos como medio para
detectar secuencias de ADN o ARN
que son complementarias a cualquier
acido nucleico aislado, como una
secuencia de ADN clonado.
EL ADN clonado es marcado con
nucletidos radioactivos o con
nucletidos modificados que pueden
detectarse por fluorescencia.

Transferen
cia
Southern
Se utiliza de modo
generalizado para la
deteccin de genes
especficos en el ADN
celular. El ADN problema es
digerido por una
endonucleasa de restriccin
y los fragmentos obtenidos
se separan por
electroforesis.
El gel se adhiere a un filtro
de nitrocelulosa o nylon, al
cual se transfieren los
fragmentos de ADN, para
dar una replica del gel. El
filtro es entonces incubado
con una sonda marcada,
que hibrida con los
fragmentos de ADN.

La transferencia Northern o
Northern blotting es una variante
de la tcnica de transferencia de
Southern, utilizada para la
deteccin de ARN en vez de ADN.

La hibridacin de cidos nucleicos

tambin puede emplearse para
identificar clones moleculares que
contienen insertos especficos de
ADN celular.

. El primer paso en el aislamiento tanto de ADN

genmico o de clones de ADNc es frecuentemente la
preparacin de bibliotecas de ADN recombinante
Los fagos recombinantes son sembrados en E. coli,
y cada fago se replica produciendo una placa de
lisis sobre un csped de bacterias
Una variedad de sondas pueden ser empleadas para
estos experimentos
La placa adecuada puede entonces ser aislada a
partir de la placa original para propagar el fago
recombinante que porta el inserto de ADN celular
de inters.

En

lugar de analizar un gen cada vez, como en la transferencia

Southern o Northen, la hibridacin a microarrays de ADN
permite el anlisis simultneo de miles de genes.

medida que se han hecho disponibles las secuencias

completas de genes eucariticos, la hibridacin a microarrays
de ADN ha permitido a los investigadores realizar anlisis
globales de secuencias presentes en muestras celulares de ADN
o ARN.

Una

micromatriz de ADN consiste en una placa de cristal o

silicona en la que se imprimen oligonucletidos en puntos
pequeos con una densidad elevada mediante un sistema
robotizado.

Cada

punto de la matriz consiste en un solo oligonucletido.

En

una placa normal pueden imprimirse decenas de miles de

sondas nicas, de modo que es posible producir fcilmente
microarrays de ADN que contengan secuencias
representativas de todos los genes de genomas celulares.

Es

una aplicacin muy extendida de microarrays de ADN es

en los estudios de expresin gnica; ej., para comparar los
genes expresados por dos tipos distintos de clulas.

En

uno de estos experimentos, se sintetizan sondas de

ADNc a partir de los ARNm expresados en los dos tipos de
clulas (Clulas cancerosas y normales).

Los

ADNc se marcan con tinciones fluorescentes y se

hibridan a microarrays de ADN en las que estn
representadas 25000 o ms genes humanos mediante
puntos de oligonucletidos.

continuacin se analizan las matrices mediante un

escner lser de alta resolucin, y la cuanta relativa de
transcripcin de cada gen queda indicada por la intensidad
de fluorescencia en el punto especfico de la matriz.

La

hibridacin de cidos
nucleicos se emplea
para detectar
secuencias de ADN o
ARN homlogas no slo
en extractos celulares,
sino tambin en
cromosomas o clulas
intactas, proceso
llamado hibridacin in
situ.

SONDAS DE ANTICUERPOS PARA PROTEINAS

Los anticuerpos ocupan el lugar de
las sondas de cidos nucleicos como
reactantes que interaccionan de
modo selectivo con molculas
protenicas. Los anticuerpos son
protenas sintetizadas por
determinadas clulas del sistema
inmune que reaccionan con
molculas que el organismo husped
ha reconocido como exgenas. Los
sistemas inmunes a los vertebrados
son capaces de sintetizar millones
de anticuerpos diferentes, cada uno
de los cuales reconoce de forma

Cada linfocito produce un nico tipo de

anticuerpo, pero los genes responsables de la
codificacin de anticuerpos varan de un
linfocito a otro como resultado de un proceso
programado de reordenamiento gnico que
tiene lugar durante el desarrollo del sistema
inmune.
Los anticuerpos se generan mediante
inoculacin de una protena extraa en un
animal.

Pueden
utilizarse
otros
materiales
para
producir
inmunizacin
yy
Pueden
utilizarse
otros
materiales
para
producir
inmunizacin
sintetizar
anticuerpos
sintetizar
anticuerpos
Las
Lasprotenas
protenasseseseparan
separan
(una
clula
por
una
tcnica
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clula
por
una
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neoplsica)
denominada
neoplsica)
denominada electroforesis
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poliacrilamina
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contra
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estos pptidos
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Tras la la electroforesis
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completa.
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anticuerpos
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inmunotransferencia
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Westerno o
Quimioluminisce
Quimioluminisce
Western
Blotting
y
la
Western
Blotting
y
la
ncia
ncia
nmunoprecipitacin
inmunoprecipitacin

En la inmunoprecipitacin los
anticuerpos son utilizados para aislar
las protenas contra las que
reaccionan. Pro ejemplo las clulas son
incubadas con aminocidos
radioactivos para marcar sus
protenas. Al extracto celular marcado
se le aade un anticuerpo, que se une
a su antgeno protenico diana. Los
complejos Antgeno-anticuerpo
resultantes se aislan y se someten a
electroforesis, permitiendo la
deteccin del antgeno radioactivo por
autorradiografia.

La inmunoprecipitacin tambin
puede emplearse para detectar
interacciones protena-protena
en el interior celular, mediante la
co-inmunoprecipitacin de dos
protenas que se encuentran
interaccionando.
Como
se
describi en el Captulo 2, una
tcnica para la identificacin de
complejos
de
protenas
es
inmunoprecipitar una protena a
partir de clulas bajo condiciones
suaves de modo que permanece
asociada con las protenas conComo fue expuesto en el capitulo 1
las que normalmente interacta los anticuerpos pueden ser
utilizados para visualizar protenas
en el interior de las clulas, as
como en la clulas lisadas. Las
clulas se tien con anticuerpos
marcados con pigmentos
fluorescentes, tras lo cual al ser
examinados con el microscopio de
fluorescencia se la localizacin