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DE TEJIDOS.
Qu es la
deshidratacion?
El mtodo ms comn para eliminar el agua de los tejidos usa etanol como agente
deshidratante. Deshidrata el tejido pasando a travs de series de etanol graduado
empezando con un 30% y acabando con etanol 100%. Para todas las diluciones excepto
para la dilucin final de etanol, debe ser usado etanol de 95% comercial. Desde cada paso
en la serie la concentracin es ms relativa que absoluta, tratar el alcohol de 95% como de
100% cuando calcules las diluciones. Diluir con agua destilada a la proporcin adecuada..
Finalmente, la mayora de los fijadores requieren un paso de lavado antes del
procedimiento de deshidratacin. Lavar los tejidos con la solucin fijadora menos el fijador.
La deshidratacin de tejidos puede volverlos transparentes.
Cambiar las soluciones decantando el lquido donde hayan tejidos de tamao grande o
retirando el lquido con una pipeta de vidrio cuando se traten de piezas de pequeo
tamao. Elimina todo menos una pequea cantidad de lquido y aade el siguiente solvente
en series rpidamente. Nunca dejar que los tejidos se sequen o se daarn
irremediablemente.
La cantidad de tiempo en cada solvente depende de la velocidad a al cual el solvente
difunde dentro del tejido. Tejidos pequeos, porosos, necesitan slo de 30 minutos a 2
horas por paso, mientras que un tejido ms grande o duro pueden necesitar como mucho
24 horas por paso
En algunos casos, sustituyendo acetona por etanol debera cosechar resultados superiores,
especialmente para algunos tipos de trabajo en inmunolocalizacin. La acetona, sin
embargo, es considerablemente ms voltil que el etano y las precauciones que deberan
ser tomadas para prevenir la desecacin de tejidos durante el ltimo paso de
deshidratacin, mayores.
DESHIDRATACION RAPIDA
Durante la deshidratacin rpida, el agua del tejido es reemplazada
rpidamente, sin el dao por tensin superficial que puede ir asociado
con los alcoholes o la acetona. El metil celosolve y dimetoxipropano
tienen regiones hidroflicas e hidrofbicas. Esto permite que el solvente
interacte con los lpidos de las membranas biolgicas, sin causar
alteracin.
La mayora de los solventes de deshidratacin no son tambin solventes
de parafina; por tanto incorporaremos varios pasos de intermediarios para
mover el tejido del agente deshidratante hasta la parafina.
Ejemplos de agentes intermedios son Histo-Clear, xileno, isopropanol, y tertbutil alcolhol (TBA). Estos deben ser includos en el programa de
deshidratacin despus de las soluciones de deshidratacin pero antes
de la infiltracin en parafina. Algunos solventes intermedios pueden
endurecer tejidos (xileno) mientras que su qumico homlogo debe ser
ms txico (cloroformo, benceno).
Despus de la deshidratacin, los tejidos deben ser procesados por
cualquier nmero de tcnicas, la deshidratacin es el punto de apoyo
para todas las tcnicas de investigacin en tejidos.
Histokinette
(cualquier que sea el producto utilizado debe, en cada etapa su cantidad debe ser superior a 10
veces el volumen del tejido por deshidratacion)
Bibliografia
http://
www.euita.upv.es/varios/biologia/tecni
cas_de_histologia_vegetal/Documentos/D
eshidratacion.htm