Propledades de los, amortiguadores Area carbénico —— ae | DISOLUCIONES AMORTIGUADORAS ‘Mantener el pH coustante es vital para el correcto desarrollo de las seacciones quimieas y bioguimieas que tienen lugar tanto ex los seres vivos como. a nivel experimental, en el laborntorio. Los amortiguadores (también amados disolusiones amortiguadoras, sistemas tampén o buffers) son aquellas disoluciones cuya ‘concentracién de protones apenas varia al adadir écidos o bases fuertes (Figusa inferior) a exe aS Los amortiguadores mas sencillos estan formados por mezelas binarias: + un eid dabil y una sal del misino deido con una base fuerte (por ejemplo, acido acétice y acetate sédico) + una base débil y Ia sal de esta base con un Acido fuerte (por ejemplo, amoniaeo y cloruro amdaico) La concentracidn de protones del agua pura experimenta uns elevacién inmediata cuando se atade una miniona ccantidad de un cide cualquiera, A un litto de agua neutra (pH 7) basta aiadirle | ml de HCI 10M para que el pH descienda $ unidaces. En cambio, si esta misma cantidad de Acido se aflade a1 litro de disolucion amortiguadora formada por HAclAeNa 1M, el pH desciende en una centésima, o sea, quinientas veoes menos (Ver la tabla inferior).0 [CH= 001 iNaAcFOooM | 4, =001 =6 jour | 467_[ -095 “63 eat_| [=0.7 SSE SSS 155 +8 | Acoso M—NaaceLoLM | 477 | +001 13 +6 | IHACEOSM=WNaaceLIM | 485 | F009 3463, THAPOSM—INaAdi2M [49s | +007 impongamos un amortiguadar constituide por un éeido acético (Acido d&bil) y acetato sédico (sal de Acido d&bil vase fuerte). En este sistema: .~ El dcido estara parcialmente disociado seat la ecuacic AcH === Act + Ht Aplicando Ia ley de accin de masas: (Ac IH") a> Tach] 1 El acetato sédico, como todas las sales esta completamente disociado, y por lo tanto, el ion acetato (Ac") ocedente de esta sal desplazara el equilibrio de disociacion del acido hacia la izquierda, haciendo que ligoninnva Ya TEP 3.+La prescucia conjunta de la sal el dcido hace decrecer Ia acidez libve, es decis, que el AcH apenas estari isociado y Ia [AcH] sera la concentracion inielal que hay en el sistema. 4 Como el AcH apenas est disocindo, la [Ac-] en el sistema serd la concentracién de sal que hay en el tistema, MECANISMO DE LA ACCION AMORTIGUADORA Sia este sistema aiiadimos wm icido fuerte como el HCI, se prodhice wm aumento instantineo dela [HT]. yet 2quilibio se desplaza hacia la izquiezda, formindove Ack hasta seeupezarse pricticamente la [Ack] nical ‘Adenais, los jones acetato procedentes de la sal se pueden combinar con los H procedentes del HCI para formar mis AeH. La renecion podeia representarse as: NaAc + HCl —> AcH + NaCl a resumen, el sistema amortiguador ha destmuido el écido fuerte, generando en sa lugar tna cantidad equivalente de dcido débil, cuyo quilibrio de disociacién determinara la [H] final (Figura inferior) A nee HEL \c)H,0, +H,0°[HC,H,0, | H,0 “lear state ae HC,H;0; + H,0 H,0° +C,H;07_ Si aiadimos una base fuerte (NaOH) los fones OFF consumen ripidamente los H” del sistema para formar saua, cou lo que el equllibrio de disociaciu del ldo se desplaza hacia la derecha para sestasar laconcentracion mucial Ge protones ("gua ulterior). 20 otras palabras, 1a agicion de una base provora 1a transformacion de una parte del acético libre en acetao: ‘AcH + NaOH —> NaAc + Hj0 see NaOH \C,H1,02 [+ 11,0] realy pieces in butferecticn 0" +C,1,0,° HC,H,0,+0H1 =| ne! bon nes pst i ean | oaths lento de Lites ta ECUACION DE HENDERSON-HASSELBALCH El pH de tina mezcla amortiguadora se puede conocer mediante Is ecuacién de Henderson-Hasselbalch, En la disociacidn del écido acético: AcH ZR AC + HY Ree eae [Ac ]IH*] Me Tact] eeoaweloge Jog Ky = tog (ASI) | tog (AT), tog tH [AcH] CD) Seer ee ee = [Ac ]TH* ] [Ac] = log Ky = - lo - log ( —— } - log [H* 9 Ka a ( [AcH] ) 0 (Fa coi it] [ac] =oh PK eo (EEN + pH lo que ¢s lo mismo:[ac T [AcH } pH = Py 109 (; que es la firmula conoeida como la eeuaetéu de Henderson Hasselbaleh, Teniendo en cuenta que el dcido acético ex muy débil y. par tanto, el equilibrio de disociacién ests casi totalmente desplazado hacia la izquierda (desplazamiento fivarecido por la presencia de cantidades notab de acetate) podremos sustituir en la ecuacion de Henderson-Hasselbalch, sin introducir errores, la concentracion de acétice libre per la de acetico total ([AeH]-[éeido]), Analognmente, como el ncetato sédlico esti completamente disocinde podemos considerar que [a concentracion del ion acetato coincide con Ia concentracion de sal ([ACI-tsal). (Con estas modificaciones podemos expresar In ecuacién de Heniderson-Hasselbalch de una forma valida para todos los amortiguadores (no sole para el acetico acetato): PH = pKa* !09 ( TacidoT \ partir de esta fornmula se pueden deducir ficilmente las vropledades de los amortiguadores: ~ E1 pH de una disolucién amortiguadora depende de ta \aturaleza del acido debil que lo integra (de su pK), de todo que para cantidades equimoleculares de sal y de ido, el pH es justamente el pK de este icido. Dicho de tra forma, se puede defintr el pK de un acido débil Coniston como el pH del sistema amortiguador que se obtiene By Caines uuando [sal] = [aeido] (Figura de la derecha), {Aci = ase} = El pif del sistema amortiguador depende de la ‘roporcidn relativa entre la saly el eido, pero no de as concentraciones absolutas de estos componentes. De qui se deduce que afadiendo agua al sistema, as Base Added —> oncentraciones de sal ydcido disminuyen paralelamente, + Aid Added lero su cociente permanece constante, yel pH no eambia in embargo. sila dilucién llega a ser muy grande, el equilibrio de disociacién del écido se desplazasia hacia 1 derecha, anmentando la [sal] y disminuyendo [Acido], con Jo cual el eociente aumenta y el pH también, de grma que se iria acereando gradualmente a Ia neutralidad (PE 7). =~ Cuando se ailaden acidos 0 bases fuertes a la disolucion amertiguadora, el equilibrio se desplaza en el entido de elimina el Acido aftadido (hacia la izquierda) o de neutralizar a base aadida (hacia la derecha). 'ste desplazamiento afecta a las proporciones relativas de sal y aeido ca el equilibria, Como el pH varia ‘on el logaritmo de este cociente, la modificacién del pHT resulta exigua hasta que umo de TosEFICACIA AMORTIGUADORA Podemos definir Ia capacidad amortiguadora de us tampa como Ia cantidad de écido 0 base fuerte ‘que puede neutralizar suftiendo wn dlesplazamiento de pH de una unidad (Figura de la derecha), Resulta evidente que ls efieacia amortiguadora esti vineulada a dos factores: + la concentracién absoluta del sistema + la proporcién relativa de las formas disociada y sin disociar Un sistema de acético y acetato ‘concentrados (1M en cada ‘componente, por ejemplo) tendré el ApH=1 pH ‘mismo pH que el mismo sistema a ‘concentracién 0,01M (100 veces mas diluido). Sin embargo, Ia eapacidad amortiguadora sera mayor en el sistema mas concentrado. En efecto, si atadimos 0.1 moles de HCl al sistema 1M (cuyo pH es 4,76), se ‘ransforman 0,1 moles de NaAc en HAG, ¥ su pH baja a 4,67, En cambio, en el sistema 0,01M, la adicion de HCI lo desborda por agotamiento de] Nae y queda HCI libre, lo que provoeara un fuerte descenso del pH. 4 capacidad amortiguadora es maxima cuando Leociente sal/acido es préximo a Ia unidad Figura de In derecho). Si tenemos $0 moléeulas ‘eacético y 50 de acetato, el pH ser igual al pK. partir de este punto: + Siaiiadimos 41 moléculas de NaOH, despues de reaccionar con al deido habra 91 moléculas de sal (50+ 41) y nueve de écido. (60 - 41). La relacién sal/Acido ha pasado de ua valor 1 a.un valor aproximado de 10, con Jo cual, el pH habra variado en una unidad (pH=pK+1), + Sien este momento aiiadimos 8 moléculas de NaOH, resccionaran con otras tantas de pK PK +! ps2 acétieo, y tendremos un total de 99 moléculas de sal (91+8) y 1 molécula de dcido (9 - 8). La relacion sal/acido es aproximadsmente de 100, y el pH=pK+2 + Con una molécula mis de NaOH se agota el sistema (100% sal) + cualquier adicion de NaOH provocara grandes cambios en el pH Ye modo anilogo, se observa que partiendo de un valor sal/Acido de uno (pH=pK), al atiadir 41 moléculas de HCl se obtiene un pH™=pK - 1 + con § moléculas més. el pH = pK -2 «+ La siguiente molécula de HCl agotaria el sistema (100% acido). + eualquier adicion de HCI provocara erandes cambios en el pH \a-eficacia maxima del amortiguador, tanto para neutralizar acidos como bases esté en Ia zona de pH de aayor pendiente. que es la zona que abarea la flecha discontinua de la figura superior:+ Con una molécula mas de NaOH se agota el sistema (100% sal) + cualquier adicién de NaOH provocara grandes cambios en el pH ‘De modo anilogo, se observa que partiendo de un valor sal/4cido de uno (pH=pK), nde 41 molecu de HCL se obtene wn pit = pK 1 + con § moléeulas mas, el pH = pX = 2 + La siguiente moléoula de HCl agotaria el sistema (100% acid). ‘mayor pendiente, que es Ia zona que abarca ls flecha discontinua de la figura superior: + el maximo de la curva de la efieacia del emortiguador frente a bases esta en el punto pH-pK-1/2, Ea «ste punto, In proporcion de sal es del 24%, y hay que aftadir un 52% de NaOH para que que el pli ssuba a pK+1/2, donde el porcentaje de In base es del 76% rximo de Ia curva de la eficacia del annortizuador frente a dcidos esti a pH=pK+1/2, donde <1 % de Ia sales del 76%, y admite un $2% de cide para disminuir el pH en una unidad (pH=pK-1/2). donde el porcentaje de la sal es del 24% ACIDO FOSFORICO icidofosforico ;PO;), ademis de formar parte de mumerosos compuestos organicos (écidos cleicos. fosflipidos, aziares et.) tambign se encuentra en forma libre, aunque en pequeia proporei «conceatraciin de ines fosfato en el plasma sanguineo es de ios 2 mEq lito, ‘ada forma, molecular 0 ionica " ctita como aida respecto ala que ene a su derecha y como basica sspecto a la que tiene a su ‘quierda. Se pueiden establecer. or tanto, tres equilibrios de we isociacién, cada mo con una onstante caracteristica a 25°C 5 figura dela derecha) z Thi apo Po] = [POP] enapoint Fintmidpoin + Kj=5,7x 10? (EK, tapr0,)= [70] + Ky + Ky=2.2.x 103 (pk j=12,7) 'stos valores indican que el rimer H” se desprende con Aided pera (e 2.1 la mitad del HsPO, se ha jsociad para formar H,P0,). lo que quiere decir que el HPO, es un dio moderadamente fuerte pK de la segunda disociaci6n (7.2) es el mas proximo al pH del medio interno y por lo tanto, es esta egunda disociacién Ia que tiene lugar reversiblemente en el medio interno, y la que posee accin mortiguadora (figura inferior izquierda). El tereer H” se disocia en medio muy alcalino (pH=12.7), y por into no tiene interés biolégico.1 Wieneido Face LY Seis pea ESETS... Cl npotade dene Fw We Labora Eine [9 Damas Cress | {1a temperatura del organism, y teniendo en cuenta la fuerza ioniea del plasma en condiciones fsiolog ordinarias, se acepta gencralment el valor de 6,8 para el pK de Ia segunda ionizacion del fosfato (fist inferior derecho), T T 7 sa 6s 72 88 ph Equivalents of OM Added | pautir de este valor se puede calcular que en el plasma (a pH 7.4) la concentvacion del HPO," es cuatn seces superior a la de H2PO,. y. por tanto, el sistema es mis eficaz para amortiguar icidos fucrtes que ara amortiguar bases fuertes (figura superior), lo cual supone una ventaja biolbgica, ya que en el ergani »redomina la tendeneia a las variaciones hacia el lado Acido, Tanto en condiciones normales como en condiciones fisiologicas, las proporciones relativas de las otras) species iénicas son despreciables, y no participan en la actividad amortiguadora del sistemaACIDO CARBONICO - BICARBONATO alos animales con pulmones, gaseoso presente en el espacio aéreo de >s pulmones. lo que supone una reserva récticamente ilimitada de CO> que puede articipar en el equilibrio, En este sistema tampon ‘enen Iugar 3 equilibrios reversibles entre el COx ascoso de los pulmones y el bicarbonato disuelto, alla sangre (Figura de la derecha y Figura aferior). CO, sangre 1 este sistema amortiguador. la forma dcido es la suma de la [COs] y de la [H3CO5], y la forma sal es la ICOs"], ECO, es un acido moderadamente fuerte, con un pK aproximado de 3.1. Sin embargo, como {oma milésima parte del CO> disuelto en agua se transforma en acide carbonico, y como la [CO>] 5 cluye en la ecuacién de disociacion, resulta wn pK de 6,1 (una eonstante de equilibrio mil veces menor). or lo tanto, el pK, tomando en consideraciéu la totalidad del acido, es de 6,1: 1 ecuacién que se aplica a este sistema amortiguader es: a ccuacién que se aplica a este sistema amortiguador es: pH= 6,1 + log —__[heo3] [co,}+[4,¢03 ] le donde resulta que al pH fisiologico de 7,4: HCO. ~ [Heos] Oy [co,]}+[H,¢o3] [co] {m estas condiciones, la [HCO] puede considerarse como despreciable frente a la [COs]. Todo cambio « 1 proporeién HCOs(CO> se vera reflejado en una variacion del pH. Yara determinar las concentraciones de las formas sal y deido presentes en el sistema amortiguador se tansforma todo el biestbonato en CO; mediante la adieién de un dcido (AH). La veaceién es la siguiente: AH + HCO." —» A +H.0 + CO, (1)EL CO liberado se puede medis experimentalmente y ‘corresponde a la sama del CO> procedente dela transformacién del HCO5” (forma sal) y del CO> originalmente disuelto en el plasma (forma deido). A este vvalor (la suma de las formas sal y écido) se le llama reserva alealina, En condiciones normales, el plasm tiene ‘una reserva alealina de 25.2 miliequivalentes (mEq) de CO> por itr, Como @ pH 7.4 la proporeion entre la forma sal y la forma ‘cid es de 20, resulta que: + [HCOs] = [sal] =24 mEq (5,24%) 2: mEq (4,76%) er Co ee et eect etl COO ge pester a ptec e ee e oedte eeer er eee a ee ee Pr _ [co], Po [coz], ‘Asi, conociendo la presion parcial del CO, en los pulmones, la ley de Henry nos permite conocer euinto CO» va a estar disuelto en el plasma: {cos 0,03 + Peo, Y¥ viceversa, si conocemos la [CO] disuelta en la sangre, podemos saber cual seri la presion parcial del CO» gaseoso en equilibrio con ese plasma, REGULACTON DEL pH DE LA SANGRE EL pH normal de la sangre se sitia entre 7.35 y 7.45, lo gue comespoude a una [H] en toro 2 40 uM. Como <1 pK del tampon bicarbonato es 6,1, bastante alejado del pH normal de Ia sangte, su eficacia amortiguadora ‘es muy reducida, Sin embargo. su importancia fsiologica es enorme ya que ‘+ cLsistema respiratorio permite controlar la presién parcial de CO) en los pulmones + los stiouee permiten ajustar la [HCOs"] en el plasma Los pulmonesy los rinones regulan Ia presion parcial de CO; y la (HCO. J, respectivamente, lo ‘que permite mantener el pH de la sangre dentro de los valores normales noes utes ieeleorpaeion | 1 change espe douubanoes 2 changes ane ‘robbie dtarees pH=6.oduice una alealosis, Como ¢l origen de las désviaciones del pH puede ser de tipo metabélico 0 de tipo spiratorio, se dstinguen cuato tipos de desajustes: + Alealosis respisatoria 2c bales ret AN AMINOACIDOS Y PROTEINAS La caracteristiea ms llamativa de los aminodeidos (AA) es Is existencia en una misma molécula de grupos cidos oe (capaces de ceder H”) y grupos bisicos (capaces de captar 11) Por lo tanto, en medio dcido se comportan como bases, y en medio basico se comportan como acidos. Las moléculas Gqe presentan esta caracteratica se dice que son anféteros © anfolitos. Cal Los grupos fcidos y bésicos pueden neutralizarse ‘mutuamiente, constituyendo una sal intema formada por un ign hibrido (carga positiva y carga nevativa), que se llama zwvittesion. si-cousidermos un AA sencillo, éste puede adoptar tres formas ionicas diferentes: Cation (+) Zwitterion (+/-) ‘Anién (-) ° ° 1 pK, = 222 ° I pk, = 9.86 | ® | HK SPH, 8 om EHTOHN Ut 6 poe f R R R "El primer grupo que se disocia ese cabexilo(pKy = 2.22). Por la proximidad del gropo NH" es 9.86 a concenracin de Ia forma anignica es muy peqhedia ‘zomparacion con la forma zits (1 moleula en forma ania pr eada 300 forma 2witeriniea), [EIAA se comporta api isiologico como un eido debi qu ets dsociado a 0.35%. Exist un pH par cl cual la carga elétrica media de las moléulas cs cero, Este ps ma punto Isoeletreo (pl). Et es el pH en el que la moécula se disocia por imal en anos setidos, y como east de on dos valores de pK. puede obtener por sexnisuma: = PK + pKe 2 ‘Asi, para In glicina (pK,~2.22 y pR{)~9,86, cl pl vale 6,04. As, a pHI~6,04 la imanensa mayoria de lav :moléeulas de alicina estarian en forma de ioneshibrides (zwitterién) ¥ no se desplazarian hacia ningtn po sl aplicares un campo elétrico (Pincha en el botin "Actualizar” del navegador y observa Ia figura{Mt z @ sn sles077 Cuando el AA contiens otros ee CH Puts GH SEH + aut & 1 (eee 7 im wii v6 45 euivalones af 1 forma I (totalmente protonada) tiene una earga neta postiva. La forma TI tiene carga neutra (una ‘uns negativa), la forma III tiene una carga negativay la forma IV tiene dos cargas negativas. El punto sweléctrico del deido glutamico sera aproximadameate 3,0 (la semisuma de pK y pK). los pK que lanquean a la forma zwitterion) La proporeion de moléenlas en la forma TV (2 earges negativas) es tan equena que puede considerarse como despreciable a la hora de ealeular el pl ‘acl caso del AA arginina existea das gripae bésicos tna écido. La disocincidn dela arginina se squemiatiza del siguiente modo, donde pivo aE 109 a La forma | (totalmente protonada) tiene dos cargas positivas, La forma II tiene una carga neta positiva, la forma IT es neura (ana postiva y una negativ) y Informa TV tiene una carga negativa. El punto Isoeléctrico de la arginina seri aproninadamenfe 10,85 (la semisusa de pK y pK, los pK: que Danques ala forma zwitterién). La proporcién de moléculas en la forma I (2 cargas positivas) es tan pequefla que ‘ued consideraree como desneciable a Is hors de eaeular elo ‘La forma I (totaltente protonads) tiene dos carga positivas. La forma T iene una carga neta positiva, la oon Iles neutra (ana posiiva ysna nepativs) ya oumna IV tiene una carga nepativa. El panto Isoeléctrico de la arginina secéaproximadamenie 10.85 (a semisuma de pK y pK, los pK que anquea 2 la forma 2witterion). La proporcin de moléculs en Ia forma I (2 cargas psitivas) estan pequedia que puede cousiderarse come despreciable ala hora de calcula e pl. ‘Las proteinas est formadas porla ign de AA ‘mediante un enlace peptidico, Fste enlace se produce TABLE 3.4 pt, values of some amino acids ‘enive el grupo COOH de un AA y el grupo NH de ‘otro. deforma que dessparecen sus propiedades ‘amortguadoras. Sin embargo, siempre exist al ‘enon grape amino yam grape carbene. Amino aid_ roo terminal. gue pueda ct como mortiginoes; "Xing ‘Sinha agen a gue spores paper = ioninableen ue cadeas terse sis wpitco NSN 2 Salts ri sine Batasa | “ Ui seca ne reopen lu valores dep dese ine 2 “iline Fa sues Apwricxid 20 ws Loup para daiacio de os grponcdono | Gmamicadd 22 a ‘ses decstecadcmelneale peedenvere | Hints a a stern pr In neta de ten grapes fa os foneabierponnon apenbllda earmarun | CYC 1S TOR 8 oct denen cube sd etesimy | [7 2281 ‘uno de aida asplstico puede alterar el pK de la a disosiaciom del grupo carboxilo. Asimismo, elpKde | Awinine 1890125 Ia disociacion det grupo earboxilo de una cadenastablecer con un resicuo de lisina cercano, Un caso particularmente importante es el de la histidina toxin al grupo hemo de la hemoglobina, ya que su pK adopta valores muy distintos en funcion de que sé uni al oxigeno 0 n0 (Cigura derechn dela tabla inferior) Hb" + HY (PK=7,9) HbO,H == Hbo>” + HY (pK = 6,7) Esta propiedad le confiere una eficacia amortiguadora excepeional, que se ve fivorecida por el hecho de ‘que la Hb es una proteina muy abundante en la sangre (el 15% del total de proteina) Si consideramos que en al eritrocito el pH interno es 7.3 y aplisamos la ecuacién del Hendesson- Hasselbulch, se puede calcula fcilmente que para la HbO>, 1 80% de las moléculas esti en forma ‘isociada y c] 20% esti ea la forma Acids no disoeiada (eurva de colossojo en la figura inferior). % sal 100 470 57) OTT TT PH {in cambio, 1 80% de Ia Mb desoxigenada se encuentra sin disociar, y el 20% esta disociada (curva de color azul en la figura superios). Esta especial propiedad hace de la Hi un amortiguador -xtraordinariamente efieaz, puesto que es capaz de modificar su pK liberando O> y asi soportar arandes| ‘amibios en Ia proporeién sal/Scido sin que se produzea exmbio alguno en el pH. Veamos un ejemplo. Supongames que un eritrocito tiene 100 moléeulas de HbOsH a pH 7,3 (Figura inferior), En estas condiciones habri 80 moléeulas de HbOy” y 20 moléeulas de HbO)H. Si imtroducimos 60 moléeulas de {TCI los H” son captados por Is forma salina (HbO>") para originar Ia forma écida (HbO3H). Esto origina n cambio en la proporeidn salieido de 80/20 a 20/80 que provocara un cambio en el pH de 7,3 a 6,1 ‘curva roja de Ia figura inferior).