Bioquimica Experimental | 201572016 formag&o ou tecorendo a equipamento espacial e, descontinuos, formados através da deposigéo cuidadosa de camadas de diferentes densidades umas sobre as outras, geralmente com a mais densa no fundo. Os gradientes de densidade so utiizados com dois objectivos distintos: - na centrifugacao zonal ou de banda de sedimentagdo - na centrifugacao de equilibrio ou isopicnica - Centrifugacao zonal ou de banda de sedimentacao Neste tipo de centrifugagdo, a preparagdo a separar é aplicada no cimo de um tubo centrifugada através de um gradiente de um meio geralmente menos denso do que as particulas a serem isoladas. Deste modo, as diferentes patticulas que fazem parte de uma amostra heterogénea, vo sedimentar com uma velocidade prépria ao longo do gradiente segundo uma banda, que depende das dimensées € forma das particulas, além da forga centrifuga, viscosidade e densidade do meio. As particulas maiores movem-se através do gradiente com uma velocidade superior 4 das particulas mais pequenas; 0 intetvalo de densidades do gradients ¢ escolhido de modo a que a densidade das particulas @ separar seja superior 4 densidade do meio em todos os pontos, durante a separacdo. Neste tipo de gradiente, todas as particulas da amostra acabariam por se depositar apés uma centrifugaeao suficientemente longa, dai que esta deva terminar ao fim de um certo tempo, que fungdo das particulas a separar, antes que estas se depositem no fundo do tubo. - Centrifugacao de equilibrio ou isopicnica Nas centrifugagées isopicnicas, 0 intervalo de densidades do gradient compreende todas as densidades das particulas da amostra a separar. 0 gradiente apresenta uma densidade maxima superior & dos componentes da amostra. Cada patticula ira migrar até uma posigéo de equilibrio no gradiente, cuja densidade iguala a densidade da particula- posicgo isopicnica, Em condices bem controladas, as bandas podem ficar muito estreitas e bem definidas, sendo possivel separar eficientemente particulas de tamanhos e formas semelhantes mas que diferem apenas um pouco no valor da sua densidade comeitugagdo Cenitugasio ‘onal Tsopienica ig, 2 - Centritugasio em gradiente de densidade. 0 tubo certral mostra a posigo da amostra antes da centriftugagdo (uma camada colocada no topo do melo correspondent ao gradiente de densidade). As particulas sedimentam de acordo com 0 seu tamanho na centritigago zonal e de acordo com @ sua densidade na centrifugagéo isopicnica. «, particulas de maior dmenso e densidade intermédis; a,