NDICE

1. Objetivos

..

2. Fundamento Terico

3. Metodologa

4. Resultado

...

5. Discusin

..

6. Conclusiones

7. Recomendaciones

8. Cuestionario

9. Bibliografa

ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA

LABORATORIO NRO. 5
ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA
Accin bacteriosttica selectiva del cristal violeta
1. Objetivos
Determinar si hay crecimiento de bacterias
Verificar la accin bacteriosttica del cristal violeta, el poder inhibidor en
muestras preparadas con diferentes concentraciones de cristal violeta.
Obtener las diferentes colonias y clasificar mediante la coloracin de bacterias
el tipo de bacteria al que corresponde.
2. Fundamento terico
Accin bacteriosttica selectiva del cristal violeta
La accin bacteriosttica es un conjunto de procesos en el cual altera la reproduccin de
ciertas bacterias. Lo que conlleva a que se vuelva lento el proceso de la multiplicacin de
los grmenes patgenos, con lo que se tornan ms vulnerables ante los procesos
defensivos humorales y celulares del organismo. La actividad bacteriosttica se explora
mediante el mtodo de difusin.
Agente bacteriosttico
Es aqul que tiene la propiedad de inhibir la multiplicacin bacteriana, inhiben la tincin de
las bacterias, la misma que se reanuda cuando se retira el agente. Algunos agentes
tienen finalidad particular por medio de genes o los lesionan especficamente.
Cristal violeta
El cristal violeta es un colorante derivado del trifenilmetano, como sabemos el fenol y sus
derivados actan como microbicidas o microbiostticos dependiendo de la concentracin
que se utilice. Los fenoles poseen efecto germicida pues daan la membrana y
desnaturalizan las protenas bacteriales.
Los colorantes bsicos como el violeta de cristal, reaccionan intensamente con los cidos
nucledos de las nucleoprotenas, quizs por la formacin de sales. Las bacterias Gram +
son ms sensibles que las Gram , que se debe al carcter cido de las protenas de las
clulas, gran positivas. Bacteria Gram Positiva Bacteria Gram Negativa
Tiene una capa gruesa de peptidoglicano y dos clases de cidos teicoicos.. El cido
Teicoico es el responsable del determinante antignico del organismo. Entre la membrana
citoplsmica y la pared celular hay un espacio periplsmico con enzimas hidrolticas,
enzimas inactivadoras de antibiticos y protenas de transporte.
Los colorantes no solo tien a las bacterias sino que tambin son inhibidores en
diluciones muy altas, pueden clasificarse en dos grupos: cidos o aninicos (se combinan

MICROBIOLOGIA SANITARIA - I

10

ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA

con los constituyentes bsicos del protoplasma bacterianos) y Bsicos o catinicos (se
combinan tiendo los constituyentes cidos del protoplasma bacteriano).
Dentro de los colorantes trifenilmetanos de aplicacin mdica sealaremos al verde
brillante, verde malaquita y violeta de genciana (cristal violeta). Son efectivos contra
microorganismos Gram positivos, y sobre hongos patgenos del gnero Cndida
especialmente.
El mecanismo de accin de los colorantes de este grupo no se encuentran an bien
definido, aunque la accin del cristal violeta es atribuida a su accin de interferencia en la
sntesis del peptidoglicano de la pared celular, en caso delos Gramnegativos su
membrana externa actuara como una barrera importante para la penetracin del
colorante, de all su accin selectiva.
Entre los colorantes de acridina o flavinas (flavus: amarillo) citaremos la acriflavina, tiene
un espectro de accin ms amplio sobre los microorganismos mayor estabilidad
antimicrobiana pudiendo actuar en presencia de material purulento. Su mecanismo de
accin se basa su interferencia sobre la sntesis de cido nucleicos insertndose en el
ADN entre dos bases sucesivas (intercalacin).
Es importante destacar que el azul de metileno est indicado actualmente como antdoto
de las intoxicaciones con nitratos y nitritos, en los mamferos.
a. Trifenilmetano El trifenilmetano (o tritano) es un slido incoloro que presenta tres
grupos fenilo y un tomo de hidrgeno unidos a un tomo de carbono. Derivados
de esta estructura se encuentran en el centro de numerosos colorantes.
b. Cristal Violeta Reacciona con radicales cidos. Mecanismo de accin
bacteriosttico; probablemente forma sales con los cidos nucleicos. Se emplea
en medio de cultivo selectivo, antisptico de piel y membrana bucales, inhibe las
bacterias Gram positivas. El violeta cristal es un colorante bsico bacteriosttico
potente, especialmente contra microorganismos gran positivos, las bacterias Gran
negativas son alterada en poco grado.
c. Crecimiento Bacteriano Cuando se siembran microorganismos en un medio de
cultivo apropiado, los mismos comienzan a dividirse activamente empleando los
nutrientes que le aporta el medio de cultivo para "fabricar" nuevos
microorganismos. Este proceso contina hasta que algn nutriente del medio de
cultivo se agota (sustrato limitante) y el crecimiento se detiene. Tambin puede
detenerse el crecimiento por acumulacin de alguna sustancia inhibidora formada
por los mismos microorganismos, pero supngase por ahora que ste no es el
caso y que la primera alternativa es la vlida. Luego hay dos aspectos claramente
diferenciables que hacen al crecimiento microbiano: uno estequiomtrico, por el
cual la concentracin final de microorganismos obtenidos depender de la
concentracin y composicin del medio de cultivo, y el otro cintico, el que dir con
qu velocidad se lleva a cabo el proceso.
d.

Accin oligodinmica de los metales pesados Algunos metales en diluciones muy

altas son capaces de ejercer una accin txica sobre las bacterias. Si se coloca
una laminilla de plata o de cobre debidamente preparada dentro de una placa Petri
y se cubre con agar fundido, previamente inoculado con un organismo, se puede
observar con claridad varias zonas diferentes de desarrollo despus de un perodo

MICROBIOLOGIA SANITARIA - I

10

ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA

de 24 horas de incubacin. Inmediatamente alrededor de la laminilla se ver una
zona despejada en la cual no aparecen colonias. Esta se conoce con el nombre de
zona oligodinmica. Ms al exterior de esta zona habr otra zona ms angosta en
la que se presenta un crecimiento abundante. Esta se denomina zona de
estimulacin. Cantidades diminutas de iones txicos estimulan el crecimiento. En
todo el resto del agar ocurre un crecimiento normal.
Utilidad del cristal violeta
Las razones principales para controlar los microorganismos son: prevenir la
transmisin de enfermedades, evitar el deterioro de los alimentos y evitar la
contaminacin tanto en procesos industriales que requieran cultivos puros, como
en laboratorios de diagnstico o investigacin. Adems se ha difundido mucho el
uso de agentes bacteriostticos en la industria farmacutica para la produccin de
antibitico.

3. Metodologa
Mantener 4 tubos con agar nutritivo fundido en el bao mara a 45 C.
Transferir 1ml de la solucin acuosa de cristal violeta de 1:1000 a uno de los tubos
con 9 ml de agua. Esto da una disolucin de 1:100000.
Usando la misma pipeta, transferir 1ml al segundo tubo con 9ml de agua. Esto da
una disolucin de 1:100000.
Transferir 1ml de la solucin 1:1000000 a una placa de Petri.
Verter el agar en las tres placas de Petri y mezclar el colorante con el agar
rotando suavemente la placa.
Verter el contenido del ultimo tubo de agar en la placa sin colorante para que sirva
de control.
Cuando se ha solidificado el agar se invierte la placa y dividir cada una en en dos
partes iguales con un lpiz.
Marcar cada mitad con el nombre del organismo con el que se va sembrar por el
mtodo de estras.
Rayar en estras la mitad de una placa con una gotita del cultivo Sector A: Siembra
de Escherichia. Coli, Sector B: Siembra de Bacillus Subtillis.

4. Resultado

MICROBIOLOGIA SANITARIA - I

10

ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA

RESULTADOS:

CONCENTRA
CIN

GRUPO
1
A
B

GRUPO
2
A
B

GRUPO
3
A
B

GRUPO
4
A
B

GRUPO
5
A
B

1:10000

1:100000

1:1000000

Sin
+
colorante
(+) Hay crecimiento
(-) No hay crecimiento

Resultado: placas blanco sin colorante

GRUPO
S

COLONIA A

N 1

Gram(-)bacilos

N 2
N 3

Gram(+)
diplobacilos
Gram(-)
estafilococos

COLONIAB
Gran(-)
Estreptococos
Gram(-)
diplobacilos
Gram(-)
streptococos

N 4
N 5
colorante
Cristal violeta

Gram(+)
streptococos
concentracion
1:10000
1:100000
1:1000000

Sin colorante

Echerichia coli
+
+
+

Bacillus subtilis
+
+

Proceso de la accin bacteriosttica selectiva del cristal violeta

MICROBIOLOGIA SANITARIA - I

10

ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA

Imgenes de los resultados de los grupos

MICROBIOLOGIA SANITARIA - I

10

ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA

MICROBIOLOGIA SANITARIA - I

10

ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA

MICROBIOLOGIA SANITARIA - I

10

ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA

5. Discusin
Los resultados de la coloracin Gram no fueron los esperados, esto debido a
muchos factores, como la mala manipulacin de los materiales durante el
experimento.
Se debi hacer de nuevo el experimento para obtener los resultados correctos.

6. Conclusin
Se encontr crecimiento de colonias despus de accin bacteriolgica del
cristal violeta excepto el grupo dos que no se encontr nada debido
seguramente a no seguir los mismos pasos que los dems grupos.
La accin inhibidora de los agentes bacteriosttica tiene importancia en la
industria farmacutica, pues son utilizados en la industria farmacutica en la
fabricacin de antibiticos a nivel industrial.
La accin bacteriosttica depende de la concentracin del agente
bacteriosttico, a mayor concentracin del agente, es menor el crecimiento
microbiano.
7. Recomendacin
Inocular las placas y no muy prximas a la lnea de divisin de cultivo colonias
A al B para evitar un paso de colonias de una zona a la otra.
Los pasos se deben seguir como se indica en la gua, para no obtener
resultados como el grupo 3 que no tuvieron los resultados que se esperaban.
Mezclar bien el colorante con el agar, para obtener una buena distribucin.
Rotar el tubo entre las manos para obtener una buena distribucin.

MICROBIOLOGIA SANITARIA - I

10