Vous êtes sur la page 1sur 17

Antigenile eritrocitare ale sistemului AB0

n identificarea i descifrarea antigenilor eritrocitare este


primordial aportul lui K.Landsteiner (1901), care n baza unui studiu
asupra interaciunii dintre hematiile i serurile recoltate de la diferite
persoane a constatat existena a 2 tipuri de Ag, supranumite A i B.
Observnd proprietile hematiilor i serurilor de a manifesta reacia
de hemaglutinare, autorul conchide c oamenii pot fi repartizai n 3
grupe sangvine (A, B, C). Ulterior grupul C a fost semnificat ca 0 i
presupune absena antigenelor A i B i nu prezena antigenului 0. n
1907 I.Ianschi constata prezena grupului sangvin AB.
Sistemul sangvin AB0 a fost cel depistat primar, dar i pn n
prezent este de cea mai mare valoare pentru transfuziologie.
Un element important i caracteristic pentru sistemul sangvin AB0
este prezena n ser a anticorpilor anti-A i anti-B naturali, cu excepia
persoanelor cu grupa sangvin AB. n funcie de prezena sau
absena pe eritrocite a antigenilor (aglutinogenelor) A i B i a
anticorpilor (aglutininelor) anti-A i anti-B n serul sangvin distingem
4 grupe sangvine (tab. 6).

Tabelul 1.
Antigenile i anticorpii specifici grupelor sangvine dup sistemul
AB0
Criterii
Antigene
eritrocitare
Anticorpi n
serul
sangvin

O
anti-A,
anti-B

Grup sangvin
A
B
A
B
anti-B

anti-A

AB
A,B
-

Caracteristica aglutinogenelor A i B
Apariia antigenelor sistemului AB0 n eritrocite la ft se constat
precoce (la a 37-a zi de dezvoltare embrionar), dar stabilirea
cantitativ a proprietilor antigenice i 49 imunogene se poare evalua
doar la 2-4 ani i rmne constant pe parcursul ntregii viei.
Persoanele aparent sntoase pot dispune de Ag A i/sau B. Substana
H care se gsete n eritrocite nu aparine sistemului AB0 i este
specificat ntr-un sistem separat i, anume, sistemul H. Antigenul H
este precursorul antigenelor A i B, fiind depistat n cantiti majore n
hematiile de grup sangvin 0.
Ag A, B, H sunt nu doar structuri eritrocitare, ele fiind prezente n
diverse concentraii n majoritatea celulelor tisulare ale organismului,
n trombocite, secrete i lichide biologice.
Dup structura lor chimic antigenele A, B, H sunt glicolipide i
glicoproteine, avnd aceeai componen chimic, iar specificitatea
lor imunologic este asigurat de zaharidele terminale ancorate pe
lanul de baz: -N-acetilgalactozamina pentru antigenul A, Dgalactoza pentru antigenul B i L-fucoza - pentru antigenul H.
Glicolipidele purttoare de oligozaharide A i B intr n
componena membranei eritrocitelor, a celulelor epiteliale i
endoteliale, iar n form solubil sunt prezente i n plasma sangvin.
Saliva conine molecule de glicoproteine care la persoanele secretoare
pot comporta oligozaharide identice. Oligozaharidele A i B libere
(nelegate de molecula purttoare a proteinelor i lipidelor) sunt testate
de asemenea n lapte sau urin.
Genele a 3 loci separai (AB0, Hh i Sese) controleaz prezena i
amplasarea antigenilor A i B. Trei alele (A, B i 0) se gsesc n
locusul AB0 pe cromozomul 9. Genele A i B codific sinteza
glicoziltransferazelor enzime care asigur formarea antigenelor A i
B, transportnd resturile glicozile necesare pentru formarea
determinantelor antigenice. Genele A,B i 0 codific nu Ag A i B, ci

producia glicoziltransferazelor responsabile de transportul resturilor


glicozile necesare pentru formarea determinantei antigenice.
Gena A codific producerea N-acetilgalactozoaminotransferazei,
care asigur transferul N-acetilgalactozaminei, gena B galactoziltransferazei ce rspunde de transferul D-galactozei. Gena 0
se consider afuncional i nu codific careva glicoziltransferaze (Ag
0 nu exist). Pe eritrocitele persoanelor cu grupa sangvin 0
antigenele A i B sunt absente, dei acestea conin o cantitate
important de Ag H, precursorul A i B. Determinantele antigenice
sunt structurate prin ataarea resturilor de zaharide la lanul
hidrocarbonic prin concursul glicoziltransferazelorenzime care
asigur transportul resturilor de zaharide. Ataarea resturilor de
zaharide mascheaz specificitatea serologic a antigenului H.
Diferenele dintre copii i aduli n activitatea celular a antigenelor A,
B, i H sunt posibil datorate numrului diferit de structuri
determinante ramificate pe suprafaa membranei celulare. Se
consider, c eritrocitele nou-nscuilor poart oligozaharide liniare,
care posed numai un fragment capabil s lege zaharidele H (ulterior
i A sau B). Eritrocitele maturilor dimpotriv posed un numr major
de oligozaharide ramificate care se transform n substana H, iar
ulterior n Ag A sau B. Grupa sangvin 0 se caracterizeaz prin
prezena pe eritrocite a antigenului H. Genele A i B sunt dominante
comparativ cu gena 0 i codominante una faa de alta. Criteriul
dominant se manifest chiar dac a fost motenit numai de la unul din
prini, iar cele codominante se vor expresia n cazul motenirii unuia
de la tat, iar a celuilalt de la mam. Gena 0 este recesiv comparativ
cu genele A i B i se va manifesta la copil numai n cazul cnd va fi
motenit de la ambii prini. Fenotipul i genotipul posibil sunt
elucidate n tab. 7 i fig.8.

Variantele antigenilor A i B

La testarea antigenilor sistemului AB0 cu seruri standard pot


aprea dificulti dependente de modificarea determinantelor prezente
pe membrana eritrocitar. La persoanele aparent sntoase s-a
constatat heterogenitatea Ag A. S-a stabilit, c exist 2 subclase mai
importante de antigen A: A1 i A2 ceea ce a sugerat existena
respectivelor subgrupe sangvine.
Tabelul 2
Variante fenotipice i genotipice posibile a grupelor sangvine dup
sistemul AB0
Fenotip (grupa sangvin)
A
B
AB
0

Genotip posibil
AA,A0
BB,B0
AB
00

Ultimele reprezint fenotipurile AB0, care se difer dup


cantitatea antigenilor prezente pe membrana hematiilor i n saliva
secretorilor. Subgrupele Ag A se ntlnesc mai frecvent i au o
implicaie clinic mai ponderal dect cea a Ag B. Astfel, Ag A1 se
nregistreaz la 80% dintre indivizii populaiei europene, iar A2 n
20% de cazuri. Genele A1 i A2 codific diferite transferaze care
asigur diferenele calitative i cantitative dintre fenotipurile
eritrocitare A1 i A2. Diferenele calitative se refer la structura
biochimic a zaharidelor (A1 are o structura mai ramificat dect cea
a A2), iar cele cantitative sunt asigurate de numrul epitopilor (A1
conine de 3 ori mai muli epitopi dect A2. Hematiile de ambele
fenotipuri manifest reacii evidente cu reagentul anti-A n testele de
aglutinare direct. Diferenele serologice dintre celulele cu A1 i A2
pot fi stabilite n testele cu reagentul anti-A1, preparat din serul uman
de grupa B sau cu lecitine obinute din boabele Dolichos biflorus. La

respectarea condiiilor de testare reagentul anti-A1 aglutineaz


hematiile A1 i nu le aglutineaz pe cele cu A2. Aproximativ la 80%
de indivizi cu grupa sangvin A sau AB hematiile sunt aglutinate de
anti-A1 i sunt clasificate ca A1 i, respectiv, A2.
Celelalte 20% de persoane eritrocitele crora sunt aglutinate de antiA i nu sunt aglutinate de anti- A1 sunt specificate ca subgrupe A2 sau
A2B.
Au fost descrise i alte variante ale antigenului A: A3 , Ax, Am, Aend,
Ael, Ay, care se nregistreaz foarte rar i sunt slab imunogene.
Testarea acestor variante este posibil doar la utilizarea unui ser imun
anti-A cu activitate major sau prin intermediul testului de absorbie eluie a anticorpilor de pe eritrocitele A. Activitatea minor a
hematiilor cu varianta antigenic A este dependent de numrul de
epitopi care interacioneaz cu anticorpii (tab.2).
Tabelul 2.
Cantitatea determinantelor antigenice A pe hematiile adulilor cu
diverse variante antigenice
Variantele antigenului A
A1
A2
A3
Ax
Aend
Am
Ael
Ay

Numrul de epitopi antigenici


810 000 1170 000
160 000 440 000
40 600 118 000
7 500 10 500
2 100 2 700
100 1 900
100 1 400
100 1 900

De regul, la clasificarea subgrupelor A slabe se ia n consideraie


intensitatea aglutinrii eritrocitelor cu reagenii anti-A, anti- A1, antiA1B, anti-H (ultimul obinut din Ulex europeans), prezena sau

absena Ac anti- A1 n ser, prezena substanelor A i H n saliva


secretorilor.
La testarea grupei sangvine dup sistemul AB0 caracterul aglutinrii
hematiilor care conin varianta antigenic A este dependent de
reagentul utilizat . Ac monoclonali anti-A i anti-AB se deosebesc
prin capacitatea de interaciune cu eritrocitele care dein varianta
antigenic A2. n cazul dat este necesar standardizarea Ac
monoclonali. Mai frecvent pentru detecia variantelor antigenice A
sunt utilizate serurile umane i lectina anti A1 (fig. 1).

Aglutinarea absent sau slab a eritrocitelor cercetate cu ser anti-A (0-2+)


Cercetarea eritrocitelor cu ser anti-AB

Reactia de
aglutinare este
slaba
A3
Aglutinare de
tip mixt.
Uneori se
constata anti-A1

Reactia de aglutinare
este absenta

Ax
Aglutinare
numai cu
anti-A1

Ael
In ser sunt anti-A1.
Dupa absorbtie-elutie
se apreciaza antigenul
A in eluat

Figura 1. Algoritmul de testare a variantelor antigenice A cu serurile


sangvine anti-A i anti-AB umane.

Subgrupele B se ntlnesc i mai rar dect subgrupele A, ele fiind


difereniate n baza criteriilor comune cu cele descrise pentru

subgrupele A. Variantele antigenice B se deosebesc ntre ele prin


caractere cantitative, adic intensitatea aglutinabil i prin capacitile
de absorbie a aglutinogenului B.

Apelnd la serurile standard cu activitate major pentru testarea


apartenenei de grup a eritrocitelor B, se poate reui evidenierea
acestor aglutinogene slabe. De altfel, la testarea grupelor sangvine
dup sistemul AB0 caracterul aglutinrii eritrocitelor ce comport
variantele antigenice A i B va depinde de reagenii utilizai (tab. 3).
Tabelul 3 .
Carcateristica reaciilor serologice realizate la persoanele cu fenotipurile
A i B
Fenotip
eritrocitar A
A1
A2
A3
Aend
Am
Ax
Ael
B
B3
Bm
Bx

4+
3+
2+mf
+mf
-/+
-/+
0
0
0
0
0

Reacia eritrocitelor cu serul antiAB


H A1
A1
A2
B
lectin

0
4+
-/+
0
3+
3+
0
2+mf 4+
0
+mf 4+
0
+
4+
0
1+/2+ 4+
0
0
4+
4+
4+
0
1+mf 2+mf 4+
0
0/
4+
0/
0/2+ 4+

3+
0
0
0/+
0
0
0

0
*
*
0
0
2+/0
2+/0
4+
4+
4+
4+

0
0
0
0
0
0/1+
0
4+
4+
4+
4+

4+
4+
4+
4+
4+
4+
4+
0
0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0

Saliva
secretorilor
conine

A si H
A si H
A si H
H
A si H
H
H
B si H
B si H
B si H
H

NOT: ntre 1+ pn la 4+ - aglutinare intens; - aglutinare slab; mf aglutinare mixed-field,


microscopic se disting aglutinatele mici i hematiile libere; 0 aglutinare absent; * - incidena anti-A1 este
diferit: la persoanele cu fenotip A2 anti-A1 aceti sunt frecveni, la indivizii cu A3 Ac anti-A1 sunt abseni cu
unele excepii.

Varianta eritrocitar tip Bombay (fenotipul Oh)


Exist un fenotip rar de hematii, identificat la Bombay, care se
motenete i care se caracterizeaz prin absena antigenelor H i
AB0. Hematiile cercetate nu se aglutineaz cu serurile anti-A, anti-B,
anti-h, anti-0. n serul acestor indivizi se conine anticorpi anti-A,
anti-B i anti-H. La prezena fenotipului Oh va indica absena reaciei
la interaciunea celulelor cu lectina anti H.
Existena variantelor sangvine de tip Bombay trebuie luat n
consideraie n practica medicinii legale. Dac se atest prezeni Ac
anti-A, anti-B i anti-H devine evident i apartenena de grup
sangvin.
Fenotipul B (A). La unii indivizi cu grupa sangvin B eritrocitele
sunt aglutinate de reagentul anti-A care conine anticorpi monoclonali
de murine. La aceste persoane s-a constatat hiperactivitatea
galactoziltransferazei codificat de gena B. Fenotipul acestui grup a
fost semnificat ca B (A). Identificarea acestui fenotip, de regul, se
efectueaz fr utilizarea reagentului monoclonal anti-A, cu care
hematiile B(A) reacioneaz divers. n majoritatea cazurilor se
observ o reacie slab, iar aglutinatele sunt mai frecvent instabile,
disociaz uor, cu toate c uneori reacia s-a manifestat de 2+. Serul
acestor indivizi aglutineaz celulele A1 i A2, astfel c, exceptnd
nou-nscuii i persoanele imunocompromise, testarea serului va
trebui s evidenieze diferenele ntre acest fenotip i fenotipul AB, n
care subgrupul A presupune prezena Ac anti-A1. O confirmare
definitiv se poate reui numai prin studiul structural al transferazelor

Testarea AB0 standard


Cercetarea Ag, realizat prin intermediul Ac anti-A i anti-B a primit
denumirea de testare direct sau eritrocitar. Utilizarea reagenilor
eritrocitari A1 i B pentru detecia Ac anti-A i anti-B n ser este
denumit testare seric. Testarea standard include testarea hematiilor
i serului, de altfel, fiecare din aceste teste servete ca martor unul
pentru altul (tab. 4).

Tabelul 4.
Testarea AB0 standard
Reacia eritrocitelor testate
cu anticorpi
Anti-A
0
+
0
+

Anti-B
0
0
+
+

Reacia serului cu hematiile


standard
A1
+
0
+
0

B
+
+
0
0

0
0
0
0
0

Grupa
sangvin
dedus
0
A
B
AB

Not: + aglutinare prezent; 0 aglutinare absent.

Pentru confirmarea apartenenei dup AB0 a donatorilor, pentru care


deja a fost efectuat tiparea, la fel i testarea copiilor pn la 4 luni se
permite utilizarea numai cu testarea AB0 pe hematii.
La tipizarea sistemului AB0 n calitatea de reageni suplimentari se
poate utiliza serul anti-AB, pentru testarea hematiilor i A2, sau
hematiile de grup 0 - pentru testarea serului.Unele seturi comerciale
de celule recomandate pentru testarea serurilor conin eritrocite A1, B
i A2. Hematiile A2 sunt predestinate pentru facilitarea aprecierii
anti - A1 n mostrele serice, care au manifestat criterii specifice
subgrupului A.

Divergenele posibile la testarea grupei sanguine dup sistemul AB0


Divergenele de tipizare a grupei sangvine pot apare, cnd
rezultatele testelor eritrocitare nu corespund cu cele serice.
Rezultatele se fixeaz, dar interpretarea trebuie efectuat numai dup
clarificarea cauzelor necorespunderii.
Cauzele apariiei unor erori n testarea grupei sanguine dup
sistemul AB0 pot avea caracter divers:
tehnic,
calitatea ingredienilor utilizai (eritrocite,seruri),
particularitile individuale ale sngelui cercetat,
dificultile aparente la testare
Printre cauzele erorilor tehnice cele mai frecvente sunt:
Marcarea incorect a tuburilor cu singe pentru cercetare;
Amplasarea incorect a serurilor izohemoaglutinante sau
anticorpilor monoclonali pe plan;
nregestrarea incorect a rezultatelor testrii;
Nerespectarea tehnicii cercetrii:
-coraport incorect al serului i eritrocitelor cercetate
-utilizarea suspensiei de eritrocite prea concentrat,
-utilizarea reagenilor cu termen expirat
-minorizarea timpului de monitorizare a reaciei
-nerespectarea regimului de temperatur.
Rezultate fals-negative pot apare n urma erorilor la:
Suplimentarea reagentului sau serului testat n tub;
Identificarea hemolizei ca rezultat pozitiv;
Realizarea unui coraport incorect dintre ser (reagent) i eritrocite;
Centrifugarea ndelungat a tuburilor;
Incubarea la temperaturi de 20-24C i mai puin;
nregistrarea i interpretarea incorect a rezultatelor testului.
Rezultatele fals-pozitive pot fi datorate:

centrifugrii ndelungate a tuburilor;


utilizrii reagenilor contaminai;
utilizrii sticlriei murdare;
nregistrrii i interpretrii incorecte a rezultatelor testrii.
Erorile n rezultatul utilizrii reactivelor de o calitate
insuficient pentru testarea grupei sanguine:
- aviditatea minora anticorpilor serurilor standard poate avea ca
consecin rezultat fals negativ la identificarea aglutinogenelor
i concluzia incorect despre apartinena grupei sanguine,
- spectrul redus al specificitii anticorpilor anti-A al unor serii de
reageni monoclonali i seruri izohemaglutinante care nu interacioneaz
cu toate variantele antigenice A.
Erorile cauzate de particularitile individuale ale
antigenilor eritrocitari AB0:
- cantitatea i amplasarea determinantelor antigenice pe eritrocte la
diferii indivizi variaz pentru antigenii A i B i variantele lor,
-modificarea expresivitii antigenice sau dispariia determinantelor
antigenice eritrocitare .
Dificulti la testarea hematiilor dependente de mostr

La tipizarea hematiilor se pot manifesta rezultate neateptate din


cauza c:
1. n sngele pacientului cu multiple transfuzii sau cu transplant
medular pot circula eritrocite apartenente concomitent la cteva grupe
sangvine dup AB0, iar un astfel de fenomen a fost supranumit
himer transfuzional sau de transplant;

2. Hematiile persoanelor cu diferite gene A i B comport uneori Ag


slab exprimate. Minorizarea expresiei poate avea loc la pacienii cu
leucemie i alte tumori maligne, iar n aceste situaii testele de
aglutinare cu reagenii anti-A i anti-B pot s nu realizeze rezultatele
ateptate;
3. Modificrile structurale ale membranei eritrocitare motenite sau
adoptive pot conduce la poliaglutinare. Aceste eritrocite pot fi
aglutinate de reagenii anti-A, anti-B sau de ambii;
4. Concentraiile anormale de proteine serice, prezena n ser a
macromoleculelor sau n proba de snge ombilical a gelului Warton
(Wartons jelly) poate genera agregarea nespecific a celulelor
suspendate n ser ce se poate interpreta eronat ca fiind aglutinare;
5. Concentraiile majore de substan de grupa sangvin A sau B n ser
pot reaciona cu Ac reagentului i i neutralizeaz, iar aceasta poate
conduce la rezultate negative ale reaciei cu eritrocitele suspendate n
ser sau plasma sangvin;
6. Serul poate conine Ac care interacioneaz cu coloranii utilizai
pentru colorarea reagenilor anti-A i anti-B. Dac pentru testare se
utilizeaz hematiile suspendate n ser sau plasm, aceti Ac pot
manifesta o aglutinare fals-pozitiv;
7. Pacienii cu autoaglutinine a frigore pot conine eritrocite acoperite
masiv cu Ac, ceea ce conduce la aglutinarea lor spontan n prezena
diluentului, indiferent de specificitatea Ac reagentului.
Soluionarea contradiciilor de testare a sistemului AB0
Pentru rezolvarea acestor probleme se efectueaz testarea repetat a
mostrei date. Dac iniial s-a utilizat suspensia de eritrocite n plasm
sau ser, atunci la cercetarea repetat se recomand utilizarea

suspensiei de eritrocite splate n soluie salin. Dac divergenele din


nou sunt prezente, atunci se efectueaz urmtoarele manevre:
1.Recoltarea unei mostre sanguine noi, care se testeaz i astfel
contradiciile dependente de contaminarea probelor sau marcarea
incorect dispar;
2.Splarea celulelor testate i a celulelor reagentului pentru
nlturarea tuturor componenilor serici i chimici capabili s induc
reacii pozitive neateptate;
3.Testarea eritrocitelor cu Ac anti-A, B, anti- A1 sau anti-H n funcie
de problema concret.
4. Dac se presupune prezena anti-A1, serul se testeaz cu utilizarea
ctorva mostre eritrocitare A2.
5.Screening-ul repetat al Ac cu utilizarea eritrocitelor de grupa 0
pentru detecia efectelor nespecifice ale aloanticorpilor a frigore.
Pentru detecia Ag slab exprimai se pot utiliza urmtoarele
proceduri:
1. Incubarea celulelor splate cu anti-A sau anti-B la temperatura
camerei timp de 30 min, pentru a intensifica interaciunea dintre Ac i
Ag insuficient cantitativ
2. Prelucrarea eritrocitelor pacientului cu enzime proteolitice (fiin,
papain, bromelin), care contribuie la intensificarea interaciunii
antigen-anticorp cu anti-A sau anti-B. Reacia de legare a Ac cu
eritrocitele ce au Ag exprimate corespunztor n unele cazuri va avea
loc n primele 30 min la temperatura camerei, dac eritrocitele au fost
prelucrate n prealabil cu enzime. Pentru confirmarea specificitii
reaciilor AB0 este necesar testarea n paralel a eritrocitelor de grupa
0 prelucrate cu enzime;

3. Incubarea alicvotei eritrocitare la temperatura camerei sau la +4C


cu Ac umani anti-A sau anti-B pentru absorbia Ac cu Ag eritrocitare
corespunztoare. n calitate de martor la absorbie/eluie este necesar a
utiliza eritrocite de grupa 0. Dup incubare hematiile trebuie minuios
splate, apoi se prepar eluatul. Ultimul se testeaz cu celulele de
grupa A1, B sau 0. Dac eritrocitele posed Ag A, atunci eluatul va
aglutina A1, dar nu i hematiile cu Ag B sau 0. Eluatele preparate din
hematiile de grupa B aglutineaz cu exclusivitate alte celule ale
grupului B. Eluatul din eritrocitele de grup 0 trebuie s fie areactiv.
Prin testarea direct pot fi identificate i eliminate reacii neateptate
sau extra-reacii aprute din cauza eritrocitelor sensibilizate de
anticorpi, care se pot aglutina cu antiserurile AB0 datorit naturii
coloidale ale reagenilor, antiserurile AB0 de natur uman pot s
conin anticorpi la un antigen cu inciden joas, anticorpii din
plasma pacientului - la colorani sau medicamente prezente n
antiserurile AB0, antigenul B dobndit (boal rar prezent numai la
pacieni de grupa A1) sau eritrocitele poli-aglutinabile pot s se
aglutineze cu anti-A, anti-B i/sau anti-A, B de natur uman.
Cnd rezultatele curente la grupa de snge sunt diferite de cele
anterioare din istoria pacientului, diagnosticul pacientului poate s
explice schimbarea.

Regulile necesare de respectare la testarea grupei sanguine:


1.Utilizarea reagenilor de calitate nalt.
2.Recoltarea sngelui i aprecierea apartenenei de grup se efectuiaz
dublu cu utilizarea de fiecare dat a 2 serii de seruri sau anticorpi
monoclonali.
3.Cercetarea trebuie realizat prin metoda ncruciat, cu utilizarea a 2
serii de seruri sau anticorpi monoclonali de la diferii producatori i
eritrocite standarde.
4.
5.Sngele pentru cercetare se recolteaz de la pacient pn la
hemotransfuzie,graie faptului ca transfuzia sngelui incompatibil i
volumelor mari ai componenilor sanguini de la persoanele cu grupa 0
pot conduce la concluzii incorecte despre apartenena de grup .
6.Sngele pentru cercetare se recolteaz pn la trasfuzia soluiilor
substituente de plasm pentru excluderea erorilor induse de
aglomerarea eritrocitelor n stlpi.
7.De atras atenia la diagnosticul pacientului.

In caz de discrepan AB0 datorit procedurii sau tehnicii de realizare


a testrii, cauzele cele mai frecvente sunt neadugarea antiserurilor
sau adugarea antiserurilor greite, utilizarea suspensiei de eritrocite
prea concentrat, centrifugarea insuficient sau exagerat, butonul
de eritrocite resuspendat puternic, dispersnd aglutinine mici,
resuspendarea butonului euat i citirea incorect (microscopic).
Pentru a identifica sursa problemei legat de determinarea grupei de
snge, de ex., testarea direct versus cea revers, urmeaz a analiza
urmtoarele: reaciile AB0 sunt de regul intensive iar reaciile slabe
trebuie s fie investigate ulterior. Problemele apar mai des la testarea
revers. S-ar putea s existe mai mult dect o problem, de ex., o
subgrup slab A ar putea s aib antiA1 n plasm. Testarea revers
este atunci cnd se nregisreaz o reacie slab (de pn la 1+) sau lipsa
reaciei, cauze posibile fiind situaiile cnd pacientul este n vrst
naintat sau este imunocompromis, bnuindu-se

hipogamaglobulinemie sau agamaglobulinemie, sau la nou-nscut, la


care uneori,pn la vrsta de 4 6 luni, nu sunt n concentraie
suficient anticorpii anti-A i/sau anti-B. Constatarea reaciei ateptate
cu eritrocitele A1 i/sau B sunt mai slabe de 1+ dup testarea cu
metoda de catalizare care ne indic c pacientul ar fi primit un
transplant de mduv sau de celule hematopoietice stem, de. ex, un
pacient cu grupa A care a primit un transplant de grupa 0, va arta un
rezultat 0, dar nu va avea anti-A n serul sanguin. Cauzele posibile n
apariia reaciei neateptate sau extrareaciei pot fi rulourile, prezena
anticorpilor care reacioneaz la rece (dac autocontrolul este pozitiv,
atunci anticorpul este probabil un auto anti-I care reacioneaz cu
antigenul I a eritrocitelor A i B) sau anti-A. n reacia mai mare de 2+
sau lipsa acesteia ca cauze posibile pot fi aglutinarea cu cmp mixt
ca drept urmarea substanei excesiv a grupei de snge n plasma
pacientului care cauzeaz neutralizarea anti-A i/sau anti-B, de. ex.,
mucina (glicoprotein) care produce adenocarcinoame. Deasemenea
la aglutinarea cu cmp mixt pot conduce cauzele ca transfuzia
recent de eritrocite de alt grup, hemoragie feto-maternal,
transplant de mduv alogen sau celule hematopoietice stem n
timpul perioadei de transplant (la unii pacieni-reciieni de transplant
cmpul mixt va rmne pentru totdeauna), nereacionarea cu anti-A
i/sau anti-B a subgrupelor slabe, de. ex. A3 a A i alte subgrupe ale A
sau B, schimbarea expresiilor antigenelor A i/sau B n unele boli rare.
Cnd rezultatele curente la grupa de snge sunt diferite de cele
anterioare din istoria pacientului, diagnosticul pacientului poate s
explice schimbarea. Reacii neateptate sau extrareacii pot aprea i
din cauza auto-aglutininei puternice la rece, ruloului, jeleu Wharton
(mostrele din cordonul ombilical), fibrin i contaminare cu alte
rmie.Aceste reacii pot fi rezolvate odat cu splarea eritrocitelor
pacientului. Prin testarea direct pot fi identificate i eliminate reacii
neateptate sau extra-reacii aprute din cauza eritrocitelor
sensibilizate de anticorpi, care se pot aglutineze cu antiserurile AB0
datorit naturii coloidale ale reagenilor, antiserurile AB0 de natur

uman pot s conin anticorpi la un antigen cu inciden joas,


anticorpii din plasma pacientului la colorani sau medicamente
prezente n antiserurile AB0, antigena B dobndit (boal rar
prezent numai la pacieni de grupa A1) sau eritrocitele poliaglutinabile pot s se aglutineze cu anti-A, anti-B i/sau anti-A, B de
natur uman
Testarea sistemului AB0, metoda pe plac
Amestecai fiecare pictur cu beior de sticl de laborator, asigurnd splarea
acestuia n vas cu soluie fiziologic i tegrerea acestuia cu un tampon din
material absorbant, dup fiecare amestecare. Atenie: n cazuri cnd marginile
picturilor dup amestecare se usuc adugai o pictur de soluie fiziologic
(NaCl) 0,9%.
nclinai uor placa de lucru i urmrii aglutinarea timp de 3 minute pentru
testul cu reageni monoclonali i 5 minute pentru testul cu eritrocite standard.
Citii rezultatul vizual cu ochiul liber. Reactia negativ: nu apare aglutinarea
dupa cele 3 minute n testul cu reagenii monoclonali i dup 5 minute n testul
cu eritrocite standard.
Reactia pozitiv: apare reactie de aglutinare a eritrocitelor dup cteva secunde,
dar rezultatul va fi controlat peste 3 min. n testul cu reageni monoclonali i
peste 5 min. n testul cu eritrocite standard. Atenie: nu confundati fibrele de
fibrina cu aglutinarea.
Orice reactie slab trebuie repetat prin metoda n tub. nregistrai rezultatele
testelor realizate. Asigurai-v c picturile pe plac corespund exact cu mostra
de snge examinat iar codul identificator unic de pe fiecare