Mtodos de determinacin de

la glucosa

Mtodos

Cualitativos

Glucosa oxidasa (E)

Cuantitativos

Quimico: O-Toluidina

Enzimatico

Glucosa oxidasa

Hexoquinasa

Cualitativos
Glucosa oxidasa- Tiras colorimetricas
Utiliza glucosa oxidasa que cataliza la oxidacin de Dglucosa a cido glucnico con formacin de H2O2.
En presencia de la enzima peroxidasa, el H2O2
generado oxida un cromgeno (orto-dianicidina),
produciendo un cambio de color, que indica la presencia
de glucosa.
Este mtodo es especifico para la glucosa y la detecta
cuando su concentracin est sobre el rango normal.

Cuantitativos
O-Toluidina
La o-toluidina se condensa inicialmente con el
grupo aldehdo de la glucosa para formar una
mezcla en equilibrio de la glucosilamina y la
base de Schiff correspondiente.
Las reacciones que tienen lugar despus de la
condensacin original producen una mezcla de
cromgenos verdes con una longitud de onda
analtica a 630 nm.

Cuantitativos
Glucosa-Oxidasa
El mtodo enzimtico se basa en la especificidad de la
enzima glucosa oxidasa (GOD) por la -D-glucosa.
La enzima cataliza la oxidacin de la glucosa por
oxgeno molecular dando D-gluconato y H2O2.

D glu cos a O2 H 2O GOD

D gluconato H H 2O2

 Para detectar y cuantificar esta oxidacin se ocupa una

reaccin acoplada

H 2 O 2 4 - AF 4 - hidroxibenzoato

peroxidasa

quinonimina (roja)

En forma cuantitativa el H2O2 es oxidado por un reactivo

comercial (4-aminofenazona (4-AF) y 4-hidroxibenzoato),
reaccin catalizada por la enzima peroxidasa, para dar
como producto un compuesto coloreado rojo
(quinonimina) que se cuantifica midiendo la absorbancia
a 505 nm.

Cuantitativos
Hexocinasa

La glucosa es convertida a glucosa-6-fosfato (G-6-P) por la

hexocinasa (HK) en presencia de ATP.
La G-6-P es convertida en presencia de glucosa-6-fosfato
deshidrogenasa (G-6-PDH) y dinucletido de nicotinamida adenina
(NAD) a 6-fosfogluconato y NADH, y se determina el aumento en la
densidad ptica a 340 nm.
La formacin de NADH causa un aumento en la absorbancia a 340
nm, la cual es directamente proporcional a la concentracin de
glucosa en la muestra.