UNIVERSIDAD PRIVADA DEL VALLE

SERVICIOS DE LABORATORIO: ANALISIS CLINICO II

ELABOPRADO POR: BIOQUIMICA MARLENE MEDRANO GUZMAN
GUIA PRCTICA MARZO de 2016

BILIRRUBINAS
1. OBJETIVO: Determinar la concentracin de Bilirrubinas directa y total en
suero y otros lquidos biolgicos por el mtodo colorimtrico.
2. DEFINICIONES:
Bilirrubinas: Compuesto de degradacin de la hemoglobina, es
captada por el hgado para su conjugacin y excrecin en las bilis, las
alteraciones
hepatocelulares
u
obstrucciones
provocan
hiperbilirrubinemias. La eritroblastosis fetal o anemia hemoltica es una
patologa provocada por destruccin excesiva de glbulos rojos.
3. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO:
3.1. Fundamento: La bilirrubina reacciona especficamente con el acido
sulfanilico diazotado produciendo un pigmento color rojo-violaceo (azo
bilirrubina) que se mide foto colorimtricamente a 530 nm. Si bien la
bilirrubina conjugada (directa) reacciona directamente con el diazo
reactivo, la bilirrubina no conjugada (indirecta) requiere la presencia de un
desarrollador acuoso que posibilite su reaccin. De forma tal que, para
que reaccione la bilirrubina total (conjugada y no conjugada) presenta en
la muestra, debe agregarse benzoato de cafena al medio de reaccin.
3.2. Muestra: Suero o plasma con heparina o liquido amnitico.
3.2.1. Cantidad: 300 ul.
3.2.2. Requisitos: No hemolizado, limpio y fresco. protegido de la luz natural
o artificial, envolver el tubo con papel negro.
3.3. Equipos, materiales y reactivos:
3.3.1. Equipos:
Centrifuga
Espectrofotmetro (Stat Fax)
Vortex
3.3.2. Materiales:
Micropipetas :10 a 100;100 a 1000 ul
Pipetas de 2 o 5 ml

3.3.3.

Tubos de hemolisis (tubos de Stat fax)

Reloj marcador
Reactivos:
Agua destilada
Reactivos sulfanilico
Desarrollador
Diazoreactivo

3.4. Procedimiento: Enumerar los tubos de la siguiente forma:

REACTIVOS

BLANCO

DIRECTA

TOTAL

Agua Destilada
1,250 ml
1,250 ml
Desarrollador
1,250 ml
Sulfanilico
100 ul
Diazoreactivo
100 ul
100 ul
Muestra
100 ul
100 ul
100 ul
Mezclar en el vortex dejar actuar en la oscuridad 5 minutos a temperatura
ambiente
Realice la lectura de absorbancias comenzando por el blanco , directa y total
Luego leer en el STAT FAX :N_____
Absorbancias obtenidas multiplicar por Factor = 17.3
Registrar los resultados e informar
3.4.1. Estabilidad de la mezcla de reaccin final:
Las lecturas pueden efectuarse entre 4 y 15 minutos excepto para la
bilirrubina directa que debe leerse a los 5 minutos exactos.
Si se lee antes habr subvaloracin de los resultados por reaccin
incompleta.
Si se lee despus habr sobre valoracin porque comienza a
reaccionar la bilirrubina libre.
3.5. Valores de referencia:
Adultos :
Directa : 0.1 - 0.4 mg/dl
Total
4. ANEXOS:

: hasta 1.3 mg/dl

Sustancias interferentes conocidas:

Suero o plasma con hemlisis visible o intensa.
Hemlisis moderada o intensa inhibe la reaccin directa, obtenindose
valores de bilirrubina total falsamente elevados.
La accin de la luz, tanto sobre los sueros como sobre las soluciones
Standard, es capaz de destruir en 1hora el 50 % de la bilirrubina presente.
La presencia de sedimento y/o cambio d coloracin de los reactivos, pueden
ser indicio de deterioro de los mismos.
Linealidad:
La reaccin es lineal hasta 15 mg/dl
Para valores superiores, diluir 1:2 la solucin coloreada final con el reactivo
y repetir la lectura multiplicando el resultado por 2.
Preparacin de reactivos de trabajo: Estndar listo para usar
Desarrollador y reactivo Sulfanilico listo para usar.
Diazoreactivo: De acuerdo al volumen de trabajo, mezclar 1,5 ml de reactivo
sulfanilico + 1 gota de Nitrito de sodio.
Estabilidad y condiciones de almacenamiento:
Los reactivos de bilirrubina son estables a temperatura ambiente (< 25 C)
hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja.
Diazorreactivo: en refrigerador (2-10C) y en frasco de vidrio color caramelo
es estable 3 meses a partir de la fecha de su preparacin.
Almacenamiento y estabilidad del suero:
La muerta debe ser preferentemente fresca, en caso de no efectuarse el
ensayo en el momento, el suero debe conservarse hasta 48 hrs. en el
refrigerador (2-10C).
La sangre entera no ms de 24 hrs en refrigerador o 12 hrs. a temperatura
ambiente. El liquido amnitico es conveniente mantenerlo congelado hasta
el momento de efectuar el ensayo.
5. CLCULOS DE LOS RESULTADOS:

Bilirrubina Directa mg /dl :

Bilirrubina Total mg/dl :
Bilirrubina Indirecta mg/dl:

Factor = 17.3

absorbancia x Factor
absorbancia x Factor
bilirrubina Total - bilirrubinas Directa

6. CUESTIONARIO
1. Que es la eritroblastosis fetal?
2. Que es la fototerapia?
3. Cules
y
a que se deben las alteraciones hepatocelulares u
obstrucciones?
4. Cual es la estructura qumica de las bilirrubinas?
5. Como se elimina la bilirrubinas?