INSTITUTO UMIVERSETARIO DE LA PAZ CAPITULO 1 SIBLIOTECA | ERITROCITOS Charles W. Brockus, DVM, PhD, y Claire B. Andreasen, DVM , PhD CONCEPTOS BASICOS DE LA FUNCION, METABOLISMO, PRODUCCION Y ELIMINACION DE LOS ERITROCITOS. L El Eritrén (A, Eleritron es una masa de células eritroides, ampliamente dispersa, que incluye los eri- trocitos circulantes y los precursores, progenitores y células madre de la médula 6sea B. Su finci6n es el transporte de oxigeno, por medio de la hemoglobina. C. La hemoglobina es transportada en Jos eritrocitos cuya membrana, citoesqueleto y a las tensiones debi- procesos metabdlicos, aseguran la integridad de la célula frent das a la circulacién asi como a varias substancias perjudiciales. D. La hemoglobina esti constituida por el grupo hemo y por una globina, La molé- cula completa de hemoglobina forma un tetrimero: 1. Cada grupo hemo contiene un stomo de hierro en estado de valencia 2 2. A cada grupo hemo se le une uma cadena de globina con tina secuencia espe- cifica de aminoicido. 3, La hemoglobina completa es un tetrimero que contiene cuatro grupos hemos y cuatro cadenas de globina. Las cadenas de globina son idénticas a pares y se designan cadena o y cadena B. IL. Sintesis del hemo ‘A. La sintesis del hemo es unidireccional e irreversible, Esti controlada en wn primer nivel por el enzima fcido 8-aminolevulinico sintetasa, cuya sintesis se controla por retroa- limentacién negativa dependiente de la concentracién de hemo en el eritrocito 1. Elplomo inhibe, hasta cierto punto, la mayoria de los pasos de Ja sintesis del hemo, inhibiendo también el transporte de hierro a la zona de actividad ferro- quelastisic: El cloranfenicol puede inhibir la sintesis del hemo. B. Las porfirinas y sus precursores son los intermediarios de la biosintesis del hemo 1. Ciertas deficiencias enziméticas en la via de sintesis pueden dar lugar a una acu- mulacién de porfirinas y de sus preeursores, lo que se conoce como porfiriasPATOLOGIA CLINICA VETERINARIA * CAPITULO 1. ERITROCITOS Las portitias se diferencian en los productos intermedios que se acumulan en sus manifestaciones clinicas. 3. Los excesos de porfirinas salen del eritrocito pudiendo depositarse en los tcjidos o ser excretados por orina u otros fluidos corporales C: Después de la formacién de la protoporfirina, la ferroquelastasa inserta el hierro en a molécula dando lugar al grupo hemo. IIL. Sintesis de globina A. Cada molécula de hemoglobina esti formada por cuatro cadenas de globina, cada tuna de las cuales se encuentra unida a un grupo hemo 1. El tipo de hemoglobina depende del tipo de cadenas de globina, las cuales estin definidas por su secuencia de aminoacidos, a En diversos animales existen hemoglobinas embrionarias, fetales y adultas b. Ta presencia y nimero de cada hemoglobina es diferente en cad especie 2. Las sintesis del hemo y la globina estin equilibradas (el incremento de una da lugar a un aumento de la otra). B. En los animales domésticos no se han descrito anormalidades en la sintesis de glo~ bina, es decir hemoglobinopatias. IV. Metabolismo del hierro El contenido corporal de hierro se encuentra regulado sobretodo por la tasa de absorcion Ins que por la de excrecién. La absorcién se regula segiin la cantidad de reservas de hie Fro (unas reservas elevadas de hierto disminuyen la absorci6n) y segtin la tasa de eritropo- Yyesis (la eritropoyesis acelerada aumenta la absorcién). Menos del 0,05% del hierro total corporal se absorbe o elimina cada dia. A: El hierro se wansporta en sangre ligado a la transferrina, que es una B-globulina ico (HS). Esta medida es poco representativa de las reservas corporales totales de hierro: 4. Allteraciones que provocan disminucién del hierro sérico: (l) Deficiencia de hierto. (2) Enfermedad o inflamacién aguda y crénica (incluy enfermedad inflamatoria) (3) Hipoproteinemia. (4) Hipotiroidismo. Enfermedad renal. b. Alteraciones en las que se incrementa el hierro série: (1) Anemia hemolitica (2) Rotura accidental de los eritrocitos en el muestreo (heméliss) @) Exceso de glucocorticoides en perro y caballo. Contrariamente, el hierro sérico disminuye en vacuno con exceso de glucocorticoides @) Sobrecarga de hierro, La sobrecarga de hierro puede ser adquirida (P.¢j.. toxicidad por hierro) o hereditaria (p.ej., hemocromatosis en 1. El hierro ligado a transferrina se contabiliza como hietro ndo la anemia deCAPITULO 1. ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA vacuno de raza Salers). La sobrecarga de hierro en algunos p4jaros (p.gj.,Tucanes) también puede ser hereditaria, (3) Anemia no regenerativa. c. Elhierro sérico se puede expresar como el porcentaje de la capacidad total de fijacién de hierro (TIBC, ver siguiente pirrafo) y expresado como el porcentaje de saturacién. 2. TIBC (Capacidad total de fijacién de hierro) es una medida indirecta del hierro que fa transferrina puede ligar. Existe un método inmunolégico para cuantificar la transferrina, pero normalmente no se usa. a. En condiciones normales, s6lo una tercera parte de las zonas de fijacién de la twansferrina estin ocupadas por hierro, Esto se expresa en porcen~ taje de saturacién b. En caso de deficiencia de hierro, en la mayoria de las especies excepto en el perro, la TIBC est incrementada. La wansferrina puede unirse a més hierro del que normalmente hay. Por tanto, la diferencia numérica entre la TIBC y el HS es la capacidad rema- nente de ligar hierro © bien la capacidad de fijacién de hierro libre (UIBC). B. La hefaestina (anéloga intestinal de la ceruloplasmina) y Ja ceruloplasmina (sinteti- zada en el higado) son proteinas que contienen cobre y estin involucradas en el transporte de hierro. La Ferroportina 1 y el transportador de metal divalente 1 (DMT1) son necesarios para transferir el hierro del epitelio intestinal fagos a la transferrina, La ceruloplasmina también es un reactivo en la fase inflama- » los macré- toria aguda. C. El hierro se incorpora a la hemoglobina durante el tiltimo paso de la sintesis del hemo. La falta de hiérro intracelular genera un incremento de la concentracién de protoporfirina en el eritrocito. D. El hierro se almacena en los macr6fagos como ferritina y hemosiderina, La ferritina es un complejo de hierro y protefma, soluble en agua 1, La ferritina es la forma mis lébil de almacenamiento de hierro. 2. Existen pequeiias cantidades de ferritina sérica en la circulacion que pueden ser utilizadas como medida indireeta de la reserva férrica, Esta medici6n se realiza mediante un inmunoensayo especie-especifico. Bp a. La concentracién de ferritina sérica disminuye en la deficiencia de hierro. b. La concentracién sérica de ferritina aumenta en caso de: (1) Anemia hemolitica, (2) Sobrecarga de hierro. (3) Inflamacién aguda y crénica. (4) Enfermedad hepatica (5) Algunas neoplasias (p.¢j.,linfoma, histiocitosis maligna). (6) Malnutricién (en vacuno) FE Lahemosiderina es una forma mis estable, pero menos disponible, de almacenamiento de hierro, La hemosiderina esti formada por la ferritina desnaturalizada y por prote- {nas. No es soluble en agua y se puede tefiir con las téenicas de Perl o azul de Prusia,4 |_PsroLoGin CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1, ERITROCITOS J E] hicrro sérico presenta anormalidades relacionadas con problemas de absorcién, deficiencias nutricionales, pérdida de hierro por hemortagias y metabolismo abe rrante del hierro con desvio hacia macréfagos en detrimento de las células hema- topoyéticas, en caso de enfermedades crénicas V. Metabolismo eritrocitario Después del estado de reticulocito el metabolismo est’ limitado porque los eritrocitos maduros carecen de mitocondrias para el metabolismo oxidativo. Las vias bioquimicas pre sentes en los eritrocitos maduros se representan en la Figura 1,1. con sus fanciones y anor malidades asociadas. A. Via glucolitica de Embden-Meyerhof 1, Por esta via anaerobia, la gluedlisis genera adenosin-trifosfato (ATP) y NADH. EJATP es esencial para la funcidn ¢ integridad de la membrana, y el NADH se utiliza en la reduccién de la metahemoglobina. La piravato quinasa (PK) y la fosfofructoquinasa (PFK) son enzimas impor tantes de esta via. Las deficiencias enziméticas en esta ruta pucden dar lugar a. anemia hemolitica (p.ej., anemias por deficiencias de PK y PFK en perros). 3. La deficiencia de PK disminuye la produccién de ATP, produciendo una ane: 0% de reticulocitos, mielofibro- sis, hemocromatosis, disminucién de la vida étil de los eritrocitos y acumu- lacién de fosfoenolpiruvato (PEP) y acid 2,3-difosfoglicérido (DPG). La deficiencia de PK se ha descrito en perros (de raza Basenji, West Highland White Terrier, Cairn Terrier, Perro Esquimal Americano, Caniche Miniatura, Carlino, Chihuahua, Beagle) y gatos (Abisinio y Somali) 4, La deficiencia de PFK da lugar a una disminucién de la concentracién de N mia macrocitica € hipocrémica con un 15 2,3 DPG eritrocitaria, el hematocrito esti dentro de sus valores de referen- Gia o disminuido, reticulocitosis persistente, y alcalemia que produce hem6- lisis. Esta deficiencia enzimiitica se ha descrito en perros (de raza Springer Spaniel Inglés, Cocker Spaniel y en algunos perros mestizos) B. Via de la Pentosa Fosfato (Via de la hexosa-monofosfato) 1, La Glucosa-6-fosfato deshidrogenasa es la limitante en esta via anaerobia 2. Esta via metabélica produce NADPH, que es el principal agente reductor del critrocito. El NADPH sirve de cofactor para la reduccidn del glutatin oxidado. E] glutatién reduc lizar a la hemoglobina. 3. Una deficiencia o defecto en la glucosa-6- a anemia hemolitica en condiciones moderadamente oxidantes (p.ej, de ciencia de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa en el caballo con excentrocitos y cuerpos de Heinz). C. Via de la Metahemoglobina reductasa 1. Mediante esta via la hemoglobina se mantiene en estado reducido (es decir, oxihemoglobina, Fe2+) necesario para el transporte de oxigeno. lo neutraliza oxidantes que pucden desnatura- sfato deshidrogenasa dard lugar6 | _PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA « CAPITULO 1. ERITROCITOS N La defi metahemoglobina (Fe2+) no puede transportar oxigeno, dando lugar a cia~ encia de enzima comporta la acumulacién de metahemoglobina. La nosis, Con la concentracién de metahemoglobina considerablemente aumen- tada, Ja sangre y las membranas mucosas pueden tener un aspecto marron, ‘También encontramos NADH y NADPH reductasas. La primera predomi- na en condiciones normales y la segunda se activa por colorantes redox (p.cj., azul de metileno). La deficiencia de Metahemoglobina reductasa da lugar a cianosis, metahe- moglobinemia, pO, en el intervalo de referencia ¢ intolerancia al ejercicio. Esta deficiencia se ha descrito en pertos (Perro Esquimal Americano, Caniche, cruce de Caniche con Cocker Spaniel, Chihuahua y Borzoi) D. Via de Rapoport-Luebering 1 3. Esta via permite la formacién de 2,3-difosfogliverato (2,3 DPG), que tiene un papel regulador en el transporte de oxigeno. El aumento de 2,3 DPG favorece la liberaci6n de oxigeno a los tejidos mediante la disminucién de la afinidad de la hemoglobina al oxigeno. Dependiendo de las especies, algunos animales anémicos tienen incremen- tada la concentracién de 2,3 DPG y entregan mis oxigeno a los tejidos con una menor cantidad de hemoglobina (mecanismo de compensaci6n). Hay variaciones en la concentracién de 2,3 DPG y su reactividad con la hemoglobina en los eritrocitos de Jos animales. Los eritrocitos del perro, caba- Ilo y cerdo tienen altas concentraciones y reactividad; los eritrocites del gato y rumiantes bajas concentraciones y reactividad. VI. Eritrocinética ‘A. Células madre, células progenitoras y células precursoras (Figura 1.2.) 1 2, Células madre Pluripotenciales y Multipotenciales (CFU-GEMM 0 células D344) a. Estas célul s tienen capacidad de autorrenovarse y diferenciarse en célu- las progenitoras. b. La diferenciacién esta controlada por estimulos promotores del mniento producidos por las células estromales de la médula 6sea. Diversos factores de crecimiento y IL-3, IL- 9,IL-I1 y eritropoyetina). Cuando una célula madre se diferencia, pierde parte de su capacidad para autoreplicarse y también parte de su potencialidad. Céhulas progenitoras a. Algunas de las primeras células progenitoras tienen la capacidad de dife- renciarse en mas de una linea celular (p.ej., Jas células CFU-GEMM tiene potencial para diferenciarse en granulocites, eritrocitos, monocitos 0 eci- itoquinas son las responsables (S megacariocitos). b. Quras células progenitoras son unipotenciales (p.¢)., CFU-E sélo puede diferenciarse en células eritroides)CAPITULO 1. ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA | 7 Célula madre Linfocito T pluripotencial Célula madre linfocitica BFU-E Eritrocitos, @—-@—_%, as Neutrétilo = —e—© Monocito CFU-Meg hia . Plaquetas L—-@— &@—w | ! aru, Eosinéflo. | Célula madre o— @ mieloide (CFU-GEMM ike Baséfilo. = @—@: Figura 1.2. Un modelo de hematopoyesis. La o&lula mace pluripotencial da lugar a células madre mulipotencia leslinfodes y mieloides. La céula madre linfoide se diferencia en linfocitos Ty 8. La célula madre mieloide forma los siguientes célles progenitoras:formadora de colonias ertrocitaries (BFU-E), que se diferencian a unidades for- rmadoras de colonia ettoides; Unidades formadoras de colonia Grenulocito/Monacito (CFU-GM) que se ciferen- cian a unidades formadoras de colonia granuloctica (CFU-G) y unidades formadores de colonia manoctica (CFU My; unidades formadoras de colonia megacatiocica (CFU-Meg); unidades formadoras de colonia eosindfa (CFU-E0); y unidades formadoras de colonia bastfla (CFU-B2s). Estas unidades formadoras de colonia se diferencian a célu- las precursoras y tego @ células maduras de las diferentes linews celularesPATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1. ERITROCITOS 3. c. Las o6lulas progenitoras tienen una capacidad limitada para autorenovar~ se y diferenciarse en células precursoras de distintas lineas celulares, 4. Las células progenitoras no son identificables morfolégicamente con tin- ciones de Romanowsky; no obstante, se parecen a linfocitos pequefios, Células precursoras: a. Las células precursoras no tienen capacidad de autorrenovarse, pero pro- liferan mientras se diferencian en las células funcionales maduras bb, Estas son las primeras células que pueden reconocerse como miembros de una linea celular conereta. B. Britropoyesis (Figura 1.3.) 1. Bn los mamiferos, la eritropoyesis es extravascular y se realiza en el parén- guima de la médulla ésea, 2. Hay cambios morfoldgicos caracteristicos que se producen durante Ja madu- racién del rubriblasto hasta el eritrocito maduro: a. Las céhulas se hacen mis pequeiias, b. El ndicleo se reduce y su cromatina esta mas condensada, (J) La divisién celular se detiene en la éltima etapa del rubricito cuan- do se lega a una concentracién critica de hemoglobina intracelular 2) El micleo es extrudido en el estado de metarubricito formandose un reticulocito en mamiferos. En cambio, los reticulocitos y eritrocitos maduros de las aves mantienen su nicleo. ¢. Elcolor del citoplasma cambia de azul a naranja a medida que se forma hemoglobina y se pierde AR. Rubriblasio Prorubricito Rubricito Rubricito Rubricito Mietarubricito Reticulocito Eritrocito, Figura 1.3. Secuencia de la eritropoyesis.CAPITULO 1, ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA | 9 6. L_ En los mamiferos, reticulocitos y eritrocitos migran al interior del seno veno- so de la médula dsea a través de aberturas transitorias (temporales) en el cito- plasma de las células endoteliales. a. Los reticulocitos de la mayoria de especies permanecen en li médula ésea durante 2-3 dias antes de liberarse y acabar de madurar en sangre peri- fica o en el bazo. b. En vacuno y caballos sanos, los reticulocitos maduran en la médula ésea, liberindose eritrocitos maduros, ELtiempo que transcurre entre la estimulacién de la eéhula progenitora eritro- poyética hasta la liberacién de los reticulacitos es aproximadamente de 5 dias, Partiendo del rubriblasto, se producen 3-5 divisiones que dan lugar a 8-32 células diferenciadas La médula ésea tiene la capacidad de incrementar la eritropoyesis: a. La produccién de eritrocitos en humanos puede inerementarse hasta 7 veces respecto a su ritmo normal, siempre que se produzca la estimula~ Gién y se disponga de los nutrientes necesarios. Esta capacidad para inere- mentar la produccién es diferente en las distintas especies animales. Es yor en pajaros y perros y menor en vacuno y caballos. b. Elincremento del nimero de eritrocitos liberados a la sangre es debido al aumento de eélulas madre y en menor grado por una disminucién de su tiempo de maduracién. c. Los eritrocitos pueden ser liberados mis répidamente a la circulacién mediante dos fenémenos: por la liberacién temprana de reticulocitos y por una reduccién del niimero de divisiones celulares. Estos procesos no incrementan el nfimero total de eritrocitos producidos y son beneficio~ ma sos s6lo temporalmente. . Regulacién de la eritropoyesis: a. Eritropoyetina: (1) La mayor parte de la produccién de eritropoyetina se produce en las células intersticiales peritubulares del rifin como respuesta a la hipo- xia, aunque el higado puede aportar hasta un 10-15% de su produc cién por medio de hepatocitos especificos y células Ito. (2) Acciones de la Eritropoyetina: (a) Inhibicién de la apoptosis de células progenitoras y prorubrici- tos recién formados, permitiendo su diferenciacién a eritrocitos madaros. (b) Estimulacién de la sintesis de hemoglobina en las células eritroi- des en division, {c) Cambio de la sintesis de hemoglobina de tipo HgbA a HgbC de adulto en ovejas. b. Interleucina-3 (IL-3) y factores estimulantes de colonia (GM-CSF y G-CSF)PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA * CAPITULO 1. ERITROCITOS (1) La IL-3 es producida por linfocitos'T activados; la GM-CSE por lin focitos T activados, macréfagos, células endoteliales y fibroblastos; y la G-CSF por macrofagos, monocitos, neutréfilos, células endotelia- les y fibroblastos (2) Conjuntamente con ka eritropoyetina, estos factores estimulan la mul- tiplicacién de la unidad formadora de colonias eritrocitarias, BFU- E.y su diferenciacién a célula progenitora, CPU-E. (3) La célula progenitora BFU-E es bastante insensible a Ja estimulacién solamente por eritropoyetina. c. Los andrégenos incrementan la liberaci6n de eritropoyetina. Por lo con- trario, los estrdgenos y corticoesteroides disminuyen la liberacién de eri~ tropoyetina, aunque su efecto probablemente no tiene relevancia clinica d. Las hormonas tiroideas e hipofisarias modifican las demandas de oxigeno de los tejidos, cambiando de este modo las necesidades de eritropoyesis. VIL. Destruccién de los eritrocitos A. La vida media de un eritrocito en circulacién varia segéin las especies: vaca: 160 dias, oveja: 150 dias, caballo: 145 dias, perro: 110 dias, cerdo: 86 dias, gato: 70 dias, paja- ros:~35 dias. Por Jo tanto, el frotis sanguineo de rumiantes sanos suele presentar reti- culocitosis con muy poca frecuencia y el frotis sanguineo de aves sanas puede tener un 45% de reticulocitos. En ciertos estados de enfermedad, se pucde desarrollar anemia més ripidamente en aves y gatos que en grandes animales a causa del perio- do de vida més corto que tienen sus etitrocitos en condiciones normals B. Durante el envejecimiento de los eritrocitos, los cambios que se producen en el contenido enzimatico y en la estructura de la membrana celular, reducen la capa- Cidad de supervivencia de las células y las expone a ser eliminadas por el bazo. En animales sanos, los eritrocitos envejecidos se eliminan de la circulacion por dos vias 1. La fagocitosis por macrofagos es la via principal de eliminacién de eritroci- tos viejos (Figura 1.4.): a. Dentro del fagosoma, el eritrocito libera su hemoglobina, que es separa- da en hemo y globina. b. La son reutilizados. ¢. Después de liberar el hierro, el hemo por medio de la hemo oxigenasa se divide en mondxido de carbono y biliverdina, d. La biliverdina es reducida a bilirrubina por la biliverdina reductasa, que se excreta a la sangre, donde se une a albtimina para ser transportada al higado. Las aves carecen de biliverdina reductasa; por lo que tienen la bili- verdina como producto final y no la bilirrubina. La biliverdina es verde y da el color catacteristico de los hematomas en el tejido aviar globina es hidrolizada a los aminodcidos que la componen, los cuales Una via minoritaria de eliminacién de los eritrocitos viejos es la lisis intra vascular con liberacién de hemoglobina al plasma (Figura 1.5.)CAPITULO 1. ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA Ww Sangre Eritrocitos (agocitosis) : Macréfago - | Hemogtobina I ce See | Bilirubin e 1 no conjugada Figura 1.4. Vie de desiruccion fagoctica (edrevascular) de los entrocitos, Eritracitos | (hemdisis intravascular) \ Hemoglobina libre = ~ ~ ) 1 x r Metahemoglobina Hemoglobina-Haptoglobina [\~sctine ’ Hemo ad > J Hemopexina Sangre Haptoglobina Hemoglobinuria Bilirubina Hemo-Hemopexina Globina Bilirrubina no conjugada Figure 1.5. Via de destruccon intravascular de los eritrocits, a LUiTa youPATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1, ERITROCITOS 3. En la anemia hemolitica existen vias de destruc a. La hemoglobina libre en el plasma se une a la «.,-globulina (haptoglobi- na). El complejo Hemoglobina-Haptoglobina es eliminado del plasma por el higado, evitando la perdida de hemoglobina en la orina Normalmente hay suficiente cantidad de haptoglobina para ligar 150 mg/dl de hemoglobina. El plasma adquiere una tonalidad de rosada a roja cuando contiene 50 — 100 mg/dl de hemoglabina; por lo tanto el cam- bio de coloracién del plasma precede a la hemoglobinuria. En animales sanos no deben observarse cambios de coloracién del plasma b. Si se produce una lisis intravascular excesiva, la haptoglobina sérica puede llegar a saturarse. Entonces la hemoglobina libre se disocia en dimeros que pueden atravesar el filtro glomerular. Este proceso no se produce en animales sanos ¢. Con el tiempo la hemoglobina libre plasmitica se oxida a metahemoglo- bina, la cual se disocia dando grupos ferrihemo libres. Los grupos ferrihe- mo libres se unen formando complejos con la a-globul 4. Los complejos hemo-hemopexina son eliminados por el higado, evitan- do de nuevo la pérdida de hemoglobina en la orina. e. Lahemoglobina que pasa al filtrado glomerular es absorbida por los tibu- Jos proximales y catabolizada a hiero, bilirrubina y globina £. La hemoglobina no absorbida llega a la orina dando lugar a hemoglobi- nuria (hemopexina). g. Las células epiteliales tubulares que contienen hemosiderina pueden des prenderse pasando a la orina y generando hemosiderinuria on similares pero predominan tanto Ja hemélisis extravascular come la intravascular. FORMAS DE EVALUAR LOS ERITROCITOS I. El hematoerito (Het), la concentracién de hemoglobina (Hgb), y el recuento de glébulos rojos (RBC) Los grificos informatizados de los nuevos sistemas hematoldgicos automatizados pueden detectar cambios en el volumen etitrocitario 0 en las concentraciones de Hgb con sufi- ciente sensibilidad A, El Het es el porcentaje de sangre compuesto por los eritrocitos 1. Los métodos centrifigos nos dan el volumen celular aglomerado (VCA) 0 valor hematocrito, una medida muy precisa con un bajo error intrinseco (+ 1%): a. El plasma obtenido por este método puede usarse en otras determina ciones rutinarias: (1) Concentracién de proteinas plasmiticas por medio de refractometria. (2) Concentracién de fibrinégeno plasmatico usando precipitacién por calor y refractometia (3) Color y transparencia del plasma:CAPITULO 1. ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA (a) El plasma normal ¢s transparente e incoloro (en perro y gato) a lige- ramente amarillo (en caballo y vaca) (b) El plasma ictérico es transparente y amarillo. (0) Elplasma hemoglobingmico es de color entre rosado y rojo. con un aspecto transparente. ‘ (a) El plasma lipémico es de color entre blanguecino y rosado con un aspecto opaco. 'b. El buffy coat es una linea blanca entre los eritrocitos y el plasma, esti com- puesta por Ieucocitos y plaquetas. La medida de su anchura se ha usado para estimar el recuento de células blancas. c. Las microfilarias se pueden detectar mediante examen microscépico del plasma de la zona inmediatamente superior a la capa leucocitica (buffy coat 2. La mayoria de contadores automiticos de células, diseftados para sangre huma- na, calculan el Het después de determinar el recuento de RBC y el volu- men corpuscular medio de la poblacién de hematies. La formula de este cal- cuilo es Het % = (RBC / jul) X VCM (fl). El error potencial de este método es mayor que el del método VCA, porque sélo el perro tiene un eritrocito que es comparable a los hematies humanos. Los otros animales domésticos tienen critrocitos mis pequefios que los humanos. No obstante, los sistemas hematolégicos mis nuevos y avanzados se pueden modificar ficilmente para identificar células sanguineas de muchas especies distintas. Las aves tienen nucleados Jo cual interfiere con los sistemas automati- cos de recuento de glébulos rojos. B. Concentracién de hemoglobina 1. El método mis frecuentemente usado es la determinacién colorimétrica por eritrocitos elipticos y la técnica de la cianometahemoglobina o el método del complejo de la hemo- globinahidroxilamina mis reciente y libre de cianuto. Los eritrocitos aviares deben romperse ¥ centrifugar la muestra para separar los restos libres de niicleo y asi poder hacer una determinacién precisa de la concentracién de Hb y calcular los respectivos indices a. Elcoeficiente de variacién es de aproximadamente + 5%. b. Los cuerpos de Heinz, la hemélisis, la lipemia y el tratamiento con oxi- globina pueden dar lugar a valores elevados falsos, 2, Algunos instrumentos automatizados miden directamente la densidad 6pti- ca de la oxihemoglobina 3. La concentracién de hemoglobina es el indicador mis directo de la capaci- dad de transporte de oxigeno de la sangre y puede ser aproximadamente de un tercio del hematocrito si los eritrocitos son de tamafio normal. 4. La determinacién de la concentracién de hemoglobina no aporta ninguna ventaja clinica sobre el hematocrito, pero nos permite calcular la hemoglo- bina corpuscular media (HCM) y la concentracién de hemoglobina corpus- cular media (CHCM) (véase los indices de células rojas sanguiineas, mas abajo) Recuento de glébulos rojos: *CRSTTARIN14 PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA * CAPITULO 1. ERITROCITOS 1, Los recuentos de eritrocitos realizados con un hemocitémetro tienen un critrocitos realizados con un, mayor grado de error, Por eso los recuentos de hemocitémetro son de un valor relative, excepto en las especies aviares. Los recontadores automiticos, siempre que se hayan estandarizado para san- gre de mamiferos, permiten unos reeuentos de eritrocitos més precisos. Los recontadores automticos no estin correctamente validados para sangre aviar, porque cuentan todas las células nucleadas (eritrocitos, glébulos blancos trombocitos) El principal valor del recuento de glébulos rojos es que permite el cilculo delVOM y HCM (véase los indices de células rojas sanguineas, mis abajo) D, Factores que afectan al hematocrito, la concentracién de hemoglobina y el recuen~ to de eritrocitos 1 wv Los cambios en la masa de eritrocitos circulantes afectan a los tres parimetros: a. En la anemia se dan valores bajos. $i el tamaiio de la célula tenido de hemoglobina por célula también estén alterados, la disminu- y/o el con- cidn en los tres parimetros puede ser desproporcionada. b. El aumento de la masa de eritrocitos (policitemia absoluta) da lugar a valores elevados ©. Obtenemos valores elevados falsos con la deshidratacién y la contraccién esplénica debida a excitacién. Cambios en el volumen plasmitico afectan a los tres parimetros; por lo que la interpretacién de los resultados hay que hacerla siempre conociendo el estado de hidratacién del paciente (Casos 6, 9,18 y 24} a. La deshidratacién o el desplazamiento de fluidos a érganos viscerales pro- voca valores aumentados, b. La sobrehidratacién con fluidoterapia da lugar a valores disminuidos, simu- Jando una anemia IL. indices de las células sanguineas rojas Los indices de los glébulos rojos son titiles en la clasificacién de ciertas anemias, A. Volumen Corpuscular Medio (VCM) 1 3 (VEA X 10) + recuento de eritrocitos (millones) =VCM (femtolitros) EIVCM se determina directamente en recontadores automiticos de células. Factores que afectan a los valores del VCM: a. La reticulocistosis es la causa mas comiin de macrocistosis (VCM aumen- .tado) (Casos 1 y 2). Los reticulocitos, especificamente las formas jévenes, son células grandes b, Los animales inmaduros de la mayoria de las especies tienen eritrocitos pequeiios y microcistosis (VCM bajo). Esto tambien puede evidenciar una deficiencia de hierro, que es mis convin en animales jovenes. ¢. La deficiencia de hierto da lugar a microcistosis (Caso 5). Se produce una division celular extra antes de que se alcance la concentracién citoplas- mitica critica de hemoglobina, que es necesaria para detener la sintesisCAPITULO 1, ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA 15 de ADN y la divisién celular, dando lugar entonces a la produccién de células mas pequefias d. La microcistosis se presenta en perros con anastomosis portosistémica (Caso 13) €. Perros sanos de razas asiitieas (Akita, Chow Chow, Shar Pei, Shiba Inu) con frecuencia presentan eritrocitos microcisticos. Los perros Greyhounds normalmente tienen valores de VCM mayores que el resto de perros, Esto puede ser debido a que el periodo de vida de sus eritrocitos es considerablemente menor (~ 55 dias) La interferencia con la sintesis de Acido nucleico da lugar a una inhibi- 8 cidn de la divisién celular y consecuentemente a células mayores. En perros de raza Schnauzer Gigante se ha descrito anemia mactocitica por cctiva hereditaria de cobalamina (vitamina B,;) h, En Caniches se produce macrocistosis congénita. i. En Alaskan Malamutes, Drentse-Partrijshond y Schnauzer Miniatura se ha observado estomatocistosis hereditaria con macrocistosis. Los gatos infectados por VLFe tienen a menudo eritrocitos macrocisti- malabsorcién intestinal sel cos, seguramente debido a una maduracién asineréni k. La aghutinacién de eritrocitos puede dar higar a un falso aumento delVCM. B. Hemoglobina corpuscular media (HCM) (Concentracién de Hgb 10) + HCM (cn picogramos) Los factores afectan de forma similar a la HCM y la CHCM (véase mis abajo a concentracién de hemoglobina corpuscular media (CHCM)); en conse- cuencia, elVCM nos da cierta informacién hematoldgica adicional respec to al paciente. La hemoglobina corpuscular media esta influenciada por elVCM. Por ejem- plo, eritrocicos mas pequefios contienen menos hemoglobina, por tanto tie~ cuento de gldbulos rojos (en millones) nen una HCM disminuida En algunos casos de anemia por deficiencia de hierro, la hemoglobina cor puscular media puede disminuir antes que la CHCM disminuya. Este indice generalmente no se usa para la clasificacién de anemias. Si la con- centracién de hemoglobina corpuscular media y la de hemoglobina cor puscular media difieren, la interpretacién de la concentracién de hemoglo- bina debe basarse en la CHCM, porque este valor estandariza respecto al volumen celular. C. Concentracién de hemoglobina corpuscular media (CHCM) 1 Zi, {Concentracién de Hgb (pg) X 100] + Het (%) = CHCM (g/dl) La CHCM es el mi necesariamente el recuento de glébulos rojas. Sin embargo, si el hematocri- to es un valor calculado (como en el caso de los analizadores hematologicos automatizados), a precision de la concentracién de hemoglobina corpuscu- ar media puede disminuir. r PAB par mcne preciso de los indices, porque st cfleulo no requierePATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1, ERITROCITOS 3. La concentracién de hemoglobina corpuscular media se usa en la clasifica cidn de anemias. 4, Factores que afectan a la concentracién de hemoglobina corpuscular media: a. La hemblisis, in vitro o in vivo,o el watamiento con Oxiglobina, general- mente dan valores de concentracién de hemoglobina corpuscular media aumentados. Tanto la hemoglobina intracelular como la extracelular se valoran con el procedimiento de la hemoglobina, pero la formula supo- ne que toda la hemoglobina es intracelular, dando lugar a un resultado elevado falso (Caso 3). b. Normalmente no suele darse un incremento verdadero de la concentra cién de hemoglobina corpuscular media, dentro de la célula no pueden producirse aumentos de la concentracién de hemoglobina. Los reticulocitos no tienen completa su carga de hemoglobina; por tanto en la reticulocistosis la concentracién de hemoglobina corpuscular media puede estar disminuida (Casos 1 y 2) 4. La hipocromia (es decir, baja CHCM) se da en algunos casos de defi- ciencia de hierro (Caso 5) (1) Los gatos con deficiencia de hierro pueden no presentar critrocitos hipocrémicos. (2) La concentracién de hemoglobina corpuscular media de perros con deficiencia de hierro puede no dar valores bajos cuando se mide con algunos contadores electronicos. D. Ancho de distribucion del histograma de los eritrocitos (RDW) 1, Este parimetro eritrocitario lo pueden calcular algunos contadores automa- ticos de células. 2. ELRDW cs el coeficiente de variacién de la distribucién del volumen de los gldbulos rojos y se calcula por la formula RDW = (DEycy, +VEM) X 100. Es un indice del grado de anisocitosis o de la variacién del tamano de los eritrocitos. 3. Las anemias con considerable grado de microcistosis © macrocistosis tendrin un valor del ancho de distribucién del histograma de los eritrocitos aumen- tado. La reticulocistosis puede dar un aumento del RDW. ILL. Frotis de sangre periférica ‘A. Tincién y examen del frotis Nuevo Azul de Metileno. Una gota entre el frotis sanguineo secado al aire y el cubreobjetos, nos da una tincién ripida y significativa pero es una prepa~ racin no permanente. Los grupos acido se tifien de azul (es decir, el ADN y ARN del niicleo, el ARN citoplasmitico y los grinulos bas6filos) Dependiendo de la distancia entre los grupos cido, puede dar lugar a colo~ res azul 0 parpura, Los grinulos eosinéfilos quedan sin teftir. El reticulo de Jos reticulocitos se tifie de azul, aunque los reticulocitos se tiften mejor mez clando a partes iguales sangre y Nuevo Azul de Metileno, manteniéndoloCAPITULO 1. ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA durante 10 minutos a temperatura ambiente y después hacer la extensién. Tinciones de Romanowsky (p. cj, Tincién de Wright, Diff-Quik, Hemacolor, etc,). Estas preparaciones policrémicas tifien ciertos grupos icidos de azul (ARN) a pérpura (mastocitos, grinulos basdfilos y ADN del néicleo); os gru- pos basicos se tifien de rojo a naranja (proteinas, grinulos eosinofilos) 3. Evaluacién sistemitica del frotis sanguineo: ; a, A bajos aumentos. Escoger una area delgada del frotis donde las células estén uniformemente distribuidas y buscar los siguientes rasgos (1) Formaciones de glébulos rojos en pilas de monedas (descrito més v abajo en la morfologia eritrocitaria).. (2) Aglutinacién de eritrocitos (descrito mits abajo). (3) Agregacién plaquetaria, especialmente en el borde del frotis (wéase el Capitulo 4) (4) Néimero relativo de leucocitos. b. A altos aumentos (objetivo de 40 X). Confirmar las observaciones reali~ zadas a bajos aumentos y hacer lo siguiente: (1) Tomar nota de la concentracién de leucocitos y evaluar si el recuen= to de células blancas esta aumentado, disminuido o dentro del inter valo de referencia, lcular un recuento diferencial de leucocites. Se realiza mediante la observacién a altos aumentos, aunque para identificar ciertas célu- las se necesita inmersién en aceite. (3) Buscar eritrocitos nucleados y policromasia. c Aumentos en aceite de inmersi6n: (1) Examinar la morfologia eritrocitaria (descrita posteriormente) (2) Realizar el recuento diferencial de leucocitos si se ha encontrado difi- cultad para hacerlo a altos aumentos, (3) Examinar la morfologia leucocitaria (véase el Capitulo 2) (4) Estimar si el mimero de plaquetas es correcto y evaluar su morfolo- gia (véase el Capitulo 4) B. Morfologia eritrocitaria (Lamina 1.2.) 1. Morfologia normal: a, Los eritrocitos canines tienen un didmetro medio de 7 jum, son de tama- iio uniforme y presentan una zona pilida central (disco bicéncavo). 7 b, Los eritrocitos felinos tienen un difmetro medio de 5,8 jum, presentan una moderada anisocitosis (es decir, variacién en tamaiio) y una zona cen tzal muy poco pilida, Frecuentemente se observan hendiduras. En un 1% \ de los eritrocitos se encuentran cuerpos de Howell-Jolly (restos del nétcleo). ¢. Los eritrocitos del vacuno tienen un diémetro medio de 5,5 um. Es fre cuente la anisocitosis y la zona pilida central es normalmente poco mar- cada. Con frecuencia son indentados. d, Los eritrocitos equinos tienen un didmetro medio de 5,7 pum y no Ge nen zona pilida central. Es normal la formacién en pilas de monedas. @18 | PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1. ERITROCITOS €. Los eritrocitos porcinos tienen un diimetro medio de 6,0 jum y a menu- do presentan poiquilocitosis. f. Los eritrocitos ovinos son similares a los bovinos pero mis pequeiios. Tienen un diametro medio de 4,5 pam. Los eritrocitos caprinos son los mas pequefios de los animales domésti- cos. Normalmente son de menos de 4 jum de didmetro. Son frecuentes la anisocitosis y la poiquilocitosis h, Los eritrocitos de la familia de los camélidos (camellos, llama, alpaca, etc.) son delgados (~ 1,1 um) y de forma elipsoidal con un difmetro medio de 6,5 jum y normalmente tienen un elevado recuento eritrocitario. Los eritrocitos aviares son ovales y nucleades con un tamatio medio de 12 X 6 pm. 2. Las formaciones en pilas de monedas son agrupaciones eritrocitarias que se asemejan a lo que su propio nombre indica. E] grado de grupacion tiende a correlacionarse positivamente con la tasa de sedimentacién eritrocitaria (ESR: eritrosedimentacién) y esti asociado normalmente con una carga superficial de membrana (potencial zeta) alterada. La intensidad de esta carga puede ser caracteristica de especies o consecuencia de una enfermedad. Esta formacién es frecuente en caballos, que en estado normal de salud, tienden a tener una carga de membrana disminuida, En ciertas enfermedades, la carga normal de la membrana puede estar parcialmente enmascarada por exceso de proteina (hiperfibrinogenemia, hiperglobulinemia) que disminuye las car- gas superficiales negativa ciones en pilas de monedas y aumento de la ESR Microscopicamente las pilas de monedas se pueden diferenciar de la autoa- ¢glutinacién por su dispersion en gota fresc solucién salina fisioldgica a. En Jos equinos sanos es fiecuente encontrar formaciones en pilas de mone- s y repulsivas del eritrocito. Observaremos forma- a cuando la sangre es diluida con das, pero puede que no se encuentren en la sangre de caballos gravemente anémicos 0 caquécticos. b, En cinidos y félidos sanos pueden encontrarse formaciones en pilas de monedas ligeras 0 moderadas, respectivamente. Podemos ver marcadas formaciones en pilas de monedas durante enfermedades inflamatorias neoplisicas. ¢. Las formaciones en pilas de monedas son raras en los rumiantes, tanto sanos como enfermos. 3. La aglutinacién es una agregacién de eritrocitos en forma de racimo de uvas que se puede ver en algunas muestras de animales con anemia inmuno-media- da (mediada por anticuerpos).A veces ¢s visible macroscépicamente (en las paredes del tubo de muestra sanguinea) 0 microscépicamente (en una gota sin teflir o en el frotis sanguineo tefiido). Hay aglutinacién si los eritrocitos permanecen agrupados al diluir la sangre 50:50 con solucién salina fisiol6- gica y observarlo microscpicamente en gota fresca. En animales anémicos,CAPITULO 1. ERITROCITOS = PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA 6. 19 Ja aglatinacién es un indicador de un efecto mediado por anticuerpos, aun que Ja ausencia de aglutinacién no excluye a la anemia inmuno-mediada. La anisocitosis es la variedad de tamaiios de los eritrocitos a causa de la pre- sencia de macrocitos y/o microcitos entre los normocitos (eritrocitos de tamaiio normal; Casos 1,2 y 5). : Los miacrocitos son eritrocitos grandes. Los reticulocitos normalmente son macrociticos y policromatofilicos. Los macrocitos normocrémicos se pue- den encontrar en ciertas circumstancias (p. ej., macrocistosis de los Caniches, infecciones por virus de leucemia felina, preleucemia en perros y gatos, apla~ sia eritroide de los gatos, deficiencia de vitamina B12 de los Schnauzer Gigantes). Si hay una presencia importante de macrocitos, el VCM se puede incrementar. Los microcitos son eritrocitos pequeitos. Se pueden observar en anemias por deficiencia de hierro y por deficiencia de piridoxina y estin asociados a una disminucién del VCM. Los microcitos pueden incluir restos celulares en cuer pos de Heinz y anemias de fragmentacién. Los microcitos también se aso- cian a la anastomosis portosistémica y la hiponatremia. Finalmente, podemos observar microcitos en perros sanos de algunas razas asidticas (Akita, Chow Chow, Shar Pei, Shiba Inu). Los esferocitos, que estén asociados a anemias inmunomediadas, tienen un VEM normal pero una disminucién de Ja superficie de membrana celular. Los esféracitos son globulares porque la membrana celular que les queda ha de contener una cantidad normal de hemoglobina. Debido a que no que~ dan bien extendidos en el frotis sanguineo, parecen mas pequefios que los eritrocitos de disco bicéncavo normocrémicos. La policromasia se refiere a los eritrocitos azul grisiceos con ARN residual que normalmente son grandes (macrociticos) y se ven en los frotis sanguine 05 tefidos rutinariamente. Los eritrocitos policromatofilicos (tal y como se observan con tinciones de Romanowsky) son sindnimos de reticulocitos (tal y como se observan con tincién del nuevo azul de metileno). El aumento del ndimero de estas células se asocia a un incremento de la actividad eritropoyé- tica y un intento de regeneracin como respuesta a uma atiemia (Casos 1, 5 y 25). El grado de regeneracién depende del niimero de eritrocitos poli- cromiticos (reticulocitos) respecto al grado de anemia, En perro y gato es nor~ mal encontrar alguna célula policrémica, es menos freeuente encontrarlas en rumiantes, y normalmente no se ve en caballos (ni sanos ni con anemia). La hipocromia es la disminucién de la intensidad de tincién del citoplasma y aumento de la palidez central del eritrocito a causa de la insuficiencia de hemoglobina en la célula. La causa mis frecuente de hipocromia es la defi- ciencia de hierro, pero también se puede dar en la intoxicacién por plome (saturnismo) por medio de la inhibicién de la sintesis de hemoglobina. La hipocromia en frotis sanguineos de aves se ha observado en la intoxicacin por plomo y en casos de inflamacion. ss, lA ™STTITA UNIVERSHARIO |PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1. ERITROCITOS 10, Poiquilocito es un término general para nombrar a los eritrocitos que pre- sentan anormalidades en su forma. Si hay un periodo de tiempo considera ble entre la recoleccién de la muestra y el anilisis, los frotis sanguineos deben someterse a muestras de recuento sanguineo completo para evitar artefactos en la forma celular. Se pueden ver poiquilocitos en terneros jovenes sanos y en cabras (debido al cambio estructural de la hemoglobina) y también en cerdos de cualquier edad. Los poiquilocitos se consideran una anormalidad cen has otras especies donde pueden presentarse como consecuencia del trau- matismo de la membrana eritrocitaria asociado a flujos de sangre turbulen- tos 0 a depésitos de fibrina intravasculares. Los poiquilocitos se eliminan de la circulacién prematuramente, provocando anemia hemolitica. Los siguien~ tes son tipos espectficos de poiquilocitos a, Los equinocitos son critrocitos especulados con muchas proyecciones uni- formes y regularmente separadas, Los equinocitos de tipo | tienen espi- culas en la periferia del eritrocito. Son eritrocitos festonados y son un arte~ facto asociado a cambios de temperatura, de pH, secado, 0 otras interacciones entre la sangre y la preparacién del frotis in vitro, Los equi- nocitos de tipo IT y III (células de Burr) tienen espiculas en toda la super ficie del eritrocito que se atribuyen a flujos de electrolitos 0 electrolitos alterados que dan lugar a una expansién de la capa exterior de la mem- brana celular. También se han detectado en casos de uremia, reduccién de electrolitos, informa, toxicidad por doxorrubicina y glomerulonefritis. b. Los queratocitos ("“células casco”) son eritrocitos con una o dos proyec~ ciones que se forman de una vesicula herniada. Estas anormalidades sue~ len derivar de dafios oxidativos de la membrana eritrocitaria, formando parte de los cuerpos de Heinz €. Los esquistocitos son fragments irregulares de eritrocitos que se obtie~ nen como resultado de las tensiones soportadas en la circulacién y con la fibrina intravascular y los flujos de sangre turbulentos (Caso 11). Los esquistocitos se asocian, nombrando solo algunos ejemplos, a coagulacién intravascular diseminada (CID), hemangiosarcoma, glumeruloneffitis, fallo cardiaco congestive, mielofibrosis, toxicidad crdnica por doxorrubicina y vasculitis. 4. Los acantocitos son eritrocitos espiculados con dos 0 més proyecciones irregulares y normalmente redondeadas. Se cree gue estas céhulas se for man a consecuencia de alteraciones en la relacién entre lipidos y coles~ terol en la membrana eritrocitaria, En los animales, los acantocitos estan asociados a hemangiosarcoma (sobretodo si afecta al higado), glomeru- loneffitis, linfoma y enfermedades hepaticas. €. Los fusocitos son eritrocitos alargados que se encuentran en las cabras de angora sanas, £. Los eliptocitos son células ovales que encontramos en los camélidos sanos Se ha descrito eliptocitosis en una enfermedad hereditaria canina pocoCAPITULO 1. ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA 21 comin que cursa con deficiencia de la banda 4.1 de la membrana del citoesqueleto eritrocitario. A veces se pueden ver eliptocitos en la defi~ ciencia de hierro. g Los dacriocitos son eritrocitos de forma piriforme que aparecen a causa de la incapacidad del eritrocito para recuperar su forma normal después de haberse deformado en los vasos sanguineos (capacidad para deformarse disminuida). Este cambio puede estar relacionado con alteraciones en las proveinas del citoesqueleto. Si las colas de los dacriocitos estin todas orien- tadas en la misma direccién, probablemente serin debidos a un artefacto en la preparaci6n del frotis. Se observan dacriocitos en los frotis sangui- neos de lamas con deficiencia de hierro. h, Los leptocitos son células delgadas con una relacién aumentada entre membrana y volumen; pueden parecer doblados a causa del exceso de membrana. Los leptocitos se asocian a las anastomosis portosistémicas (Caso 13). Los eritrocitos policromatofilicos (reticulocitos) pueden pare cet leptocitos a causa de la membrana celular aumentada, i. Las células diana (codocitos) son un tipo de leptocito que tiene forma acampanada y parece una diana en el frotis a causa de la distribucién cen wal y periférica que presenta su hemoglobina en la célula, La formacién de células diana puede observarse por el incremento de la membi celular por insercién de lipidos y colesterol o por disminucién del volu- men citoplasmatico como en la hipocromia. Las células diana pueden aso- ciarse con enfermedad hepatica y deficiencia de hierro. 4. Los estomatocitos son un tipo de leptocito con forma de cuenco con reas centrales pilidas ovales en el frotis sanguineo. Este cambio de la forma ¢s causado por la expansién de la Mimina interna de la membrana celular. Estas células se encuentran en la estomatocitosis hereditaria de los Alaskan Malamutes, Drentse Partrijshond y Schnauzers Miniatura. Los estomatocitos también pueden ser artefactos en la zona gruesa del frotis k, Los esterocitos son microcitos pequefios y oscuros que carecen de pali- dez central y tienen una baja cantidad de membrana por unidad de volu- men, Se detectan ficilmente solo en el perro gracias a su abundancia nor mal de zona pilida central. Los esferocitos frecuentemente se observan en anemias hemoliticas inmunomediadas (Caso 2), pero también se pue- den ver después de transfusiones y en algunas fases de la anemia de cuer- pos de Heinz. Son el resultado de la eliminacién parcial por fagocitosis de la membrana recubierta de anticuerpos o por cambios en la membra~ na como los debidos a la presencia de cuerpos de Heinz. Los esferocitos son eliminados prematuramente de la circulacién por los macréfagos esplénicos a causa de su baja capacidad de deformacién (es decir, pérdi- da de flexibilidad de la céhula) y atravesar la red microvascular esplénica. 11.El punteado basdfilo son agregaciones de ARN residual en células teftidas con tincion de Romanowsky (tinciones de Wright o Diff-Quick). Stele aA — 7322 PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1, ERITROCITOS Lf observarse en ovejas y ganado bovino anémico y ocasionalmente en la ane- mia felina; tiene el mismo significado que la policromasia (anemia regenera- tiva}, y puede ser una respuesta adecuada durante una anemia. El punteado basdfilo también puede ser indicador de toxicidad por plomo si se acompa- fia de una metarrubricitosis importante con una policromasia minima (una respuesta inadecuada) 12,Los cuerpos de Howell-Jolly son restos nucleares baséfilos en el citoplasma del eritrocito, Es mis frecuente observar estas estructuras en situacién de eri- tropoyesis acelerada o después de una esplenectomia. 13.El cuerpo de Heinz es una estructura redondeada que sobresale en la mem- brana del eritrocito o también puede parecer un pequeiio cuerpo refracta~ rio cn el citoplasma. Estin compuestos de hemoglobina desnaturalizada y precipitada a causa de la oxidacién.A menudo se encuentran adheridos ala parte interna de la membrana celular (Caso 3).Al ser derivados de la hemo- globina, son del mismo color que el resto del citoplasma y no se pueden dis tinguir con tinciones de Romanowsky. Utilizando la tincién de nuevo azul de metileno, los cuerpos de Heinz se ven como cuerpos basofilos oscuros. Los cuerpos de Heinz alteran la membrana celular y disminuyen la capaci- dad de deformacién del eritrocito al atravesar los capilares. Pueden causar hemélisis intravascular. Los cuerpos de Heinz pueden ser eliminados por macréfagos esplénicos dando lugar a esferocitos. Los gatos son mis propen- sos a la formacién de cuerpos de Heinz (a veces llamados cuerpos refracta- rios eritrocitarios en esta especie). La hemoglobina felina tiene un mayor nimero de grupos sulfhidrilo que incrementan su sensibilidad a la oxida cién. Ademis, el bazo felino es ineficiente para eliminar estos cuerpos. Hasta un 10% de los eritrocitos de felinos sanos pueden contener cuerpos de Heinz. En aves, dentro de los eritrocitos los cuerpos de Heinz son mas pequetios y nds numerosos 14, Los eccentrocitos (eritrocitos semi-fantasmas) son eritrocitos con la hemo- globina condensada en una parte de la célula, dejando el resto de la céluila vacfa © con aspecto de ampolla. Son consecuencia de daiios oxidativos con peroxi- dacién de los lipides y entrecruzamiento de la membrana celular (Caso 3) 15.En un frotis teaido, el grupo de los eritrocitos nucleados esté formado por metartubricitos, rubricitos y estados iniciales de desarrollo eritrocitico. El tér- mino metarrubricitosis hace referencia a la presencia de cualquiera dé las for- mas de eritrocitos nucleados y supone la liberaci6n precoz de estas células a la circulacién. En caso de enfermedad, esta liberacién de eritrocitos nuclea- dos se puede clasificar de dos maneras: respuesta apropiada o inapropiada. a. La liberacién de eritrocitos nucleados es una respuesta esperada o apro- piada en anemias altamente regencrativas con una intensa hiperplasia eri— troide. Los eritrocitos nucleados se acompaiian de reticulocitosis (Casos 1,2 y 5). La eritropoyetina también puede estimular la liberacin de eri- trocitos nucleados durante Ia hipoxia, sin estar relacionado a anemia.CAPITULO 1, ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA b. En los camélidos, las llamas fiecuentemente tienen un elevado néimero de critrocitos nucleados en las anemias regenerativas pero con ausencia 6 ligera policromasia ¢. Los metarrubricitos pueden ser liberados de forma inapropiada en la into- xicaci6n por plomo, deficiencia de hierro, deficiencia de cobre, hemangio- sarcoma, hematopoyesis extramedular, mieloptisis, sindrome del disco inter- vertebral, macrocitosis hereditaria del Caniche, endotoxemia, traumatismo de la médula 6sea, necrosis de la médula dsea, metistasis neoplisicas de la cavidad de la médula 6sea, mielofibrosis, infeccién por FeLV, sindrome mic- lodisplastico y leucemia, especialmente en miclosis eritrémica en gatos. . Los eritrocitos nucleados se pueden observar cn nimero elevado en cer- dos sanos, especialmente en lechones de menos de 3 semanas de vida €. En las aves, los eritracitos nucleados son normales, 16. Los eritroplistidos son fragmentos anucleados de citoplasma eritrocitario que a veces se encuentran en el frotis sanguinco de aves y los hematogones son niicleos eritrocitarios libres. 17. Podemos encontrar parisitos dentro del eritrocito (inmacelulates), en las depre- siones de la superficie de la membrana (epicelulares), 0 en el plasma (extra~ celulares): a. Parisitos intracelulares son Hemoproteus spp., Leukocytozoon spp. Plasmoditent spp. (aves); Cytanxzoon felis, Babesia cati, B. felis (gatos); Anaplasma margina- le, A. centrale (vacuno); Bahesia bovis, B. bigemina (vacuno); Theileria mutans, T. annulata (vacuno); Theileria cervi, (ciervo, alce); Babesia canis, B. gibsoni (perros); Babesia equi, B. caballi (caballos); y Babesia ovis, B. motasi (avejas). b. Son pardsitos epicelulares comunes: Trypanosoma johnbakeri (aves), Hemobartonelia felis (Mycoplasma haemofelis) (gatos), H. canis (Mycoplasma haemocanis) (perros), Eperyihrozoon suis (Mycoplasina haemosuis) (cerdos), Eperythrozoon wenyoni (bovino), y Eperythrozoon sp. (lamas). | ¢. Los parisitos extracelulares comunes estin formados por filiridos y wi- panosomas: (1) Microfilariae: Dipetalonema seconditun (perros), Dirofilaria init (perro, ocasionalmente gatos), y Setaria sp. (caballo) (2) Tripanosomas: Trypanosoma theileri, . congolense, T. vivax (vacuno); ‘Trypanosoma cruzi (perros); y Trypanosoma brucei, T: evansi (caballos) 18. Las inelusiones del moquillo en los eritrocitos caninos son irregulares, redon- das 0 con forma de anillo y se tifien de color magenta con las tinciones de Romanowsky y Diff-Quik (las inclusiones se tifien de azul con otras tin- ciones ripidas para sangre). También se pueden observar en los Ieucocitos. Las inclusiones del moquillo son transitorias. IV. Evaluacién de los reticulocitos sanguineos A. Los reticulocitos son eritrocitos inmaduros y sin nficleo de los mamiferos, que con tienen restos de ARN y mitocondrias agrupados en un patr6n reticulado al teftir-24 PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1. ERITROCITOS los con tinciones supravitales (p. ¢j., tincién de nuevo azul de metileno) (Lamina 1.2). Los reticulocitos se corresponden a los eritrocitos policromatofilicos que se observan en preparaciones teitidas con tinciones de Romanowsky. Los reticuloci- tos liberados precozmente como respuesta a una anemia son de mayor tamafio y se denomina desviacién a la izquierda reticulocitica. En las aves, los reticulocitos son nucleados y a veces pueden parecer mas redondeados. B. La cuantificacién de los reticulocitos circulantes, mediante el cilculo del néimero absoluto de reticulocitos, es el mejor indicador de la respuesta eritroide de la médu- Ja 6sea frente a Ja anemia. C. Caracteristicas de los reticulocitos segiin especie 1. Bl perro sano tiene pocos reticulocitos con agregados (hasta un 1%). Estos agregados se tifien de azul con tinciones supravitales (Lamina 1.2.) En el gato encontramos dos tipos de reticulocitos: a, Reticulocitos agregados, que son similares a los de otras especies y que en cl animal sano representan hasta un 0,4% de los eritrocitos. Este po de reticulocito se recuenta hematoldgicamente, En aumento de reticu- locitos agregados implica una respuesta actual de la médula 6sea a una anemia (es decis, eritropoyesis aumentada 0 regeneracién). La reticuloci- v tosis es menos espectacular que en el perro. b, Reticulocitos punteados (que contienen pequefios puntos que se tifien de azul) que derivan de los reticulocitos agregados envejecidos y duran unas 2 semanas, Al igual que los reticulocitos agregados, aumenta su néime- 10 con el incremento de la eritropoyesis. Debido a su persistencia en cir culacién durante semanas y a que atin persisten cuando el recuento de reticulocitos agregados vuelve a niveles normales, su recuento es de poca utilidad para determinar respuestas regenerativas recientes. Los reticulo~ citos punteados indican una respuesta de la médula 6sea a una anemia ocurrida, como maximo, en las 3-4 semanas anteriores. 3. No se encuentran reticulocitos en la sangre de los rumiantes sanos a causa de la larga vida media de sus eritrocitos, hay ligeros aumentos en las respuestas a. anemias. 4. No hay reticulocitos en la sangre de caballos sanos ni en animales que sufran anemia regenerativa 5. La reticulocitosis es una caracteristica importante de la sangre de los cerdos lactantes, pero no es tan marcada en adultos (19%). Los recuentos de reticu- + locitos aumentan en las anemias regenerativas, 6. Elporcentaje de reticulocitos en la sangre de aves sanas es mayor (4-5%) que en la de mamiferos a causa de la baja vida media de sus eritrocitos (~ 35 dias). La policromasia es mis notable en aves jOvenes que en adultas pero no suele pasar del 5%. D. Formas de recuento de reticulocitos 1. Porcentaje de reticulocitos. Se cuentan los reticulocitos en un frotis de san- gre teftido con Nuevo Azul de Metileno y se expresan como porcentaje deCAPITULO 1. ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA la poblacién total de eritrocitos. Este parimetro puede sobreestimar la res- puesta de la médula 6sea por las siguientes causas: a. Los reticulocitos liberados de la médula dsea a la sangre de animales ané- mics se mezclan con un nimero bajo de eritrocitos maduros, dando lugar a un porcentaje relativo de reticulocitos elevado. : b. Se liberan reticulocitos inmaduros y de mayor tamaiio como respuesta a Ja anemia, Estos reticulocitos, a los que lleva més tiempo madurar, persis ten durante mas tiempo en Ja sangre. Esto da lugar a un porcentaje de reticulocitos mayor. Porcentaje de reticulocitos corregido: a, Férmula: Reticulocitos observados % % (Het % del paciente + Het % normal) = % de reticulocitos corregido. El hematocrito “normal” que se toma como referencia es de 45% en perro y 37% en gato. b. Este parimetro corrige la desviacién descrita en el apartado anterior 1a pero no la 1b, ©. Porcentajes corregidos de reticulocitos >1% en perro y > 0.4% en gato indican una respuesta de la médula ésea a Ja anemia. El porcentaje de reti- culocitos corregido no ha sido validado para otras especies animales dife- rentes al perro y al gato. Recuento absoluto de reticulocitos: a. Férmula: Porcentaje de reticulocitos (en forma decimal) X (recuento san guineo total/1l) = recuento absoluto de reticulocitos/ 1h b. Este parimetro corrige la desviacién descrita en el apartado Ia pero no cl efecto descrito en la 1b. Un recuento absoluto de reticulocitos > 80.000/yl en el perro y > 60,000/pal en el gato indican una respuesta regenerativa, Un hemato~ crito muy bajo puede tener un recuento absoluto de reticulocitos pro- porcionalmente mayor, 4d. Bstos son los grados de regeneracién estimados para perros: (1) Ninguna = 60.000/ul (2) Débil = 150.000/pA 3) Moderada = 300.000/p1 (A) Fuerte => 500.000/pl €. Los siguientes son los grados de regeneracién (reticulocitos agregados) estimados para gatos: (1) Ninguna = <15.000/p1 2) Débil = 50.000/p1 (3) Moderada = 100.000/p1 (4) Fuerte => 200.000/p £. Aunque no se suele usar, se estiman los siguientes grados para reticulo- citos punteados: (1) Ninguna = < 200,000/1 a - (2) Débil = 500.000/p * 2526 PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA * CAPITULO 1. ERITROCITOS (3) Moderada = 1,000,000/p1 (4) Fuerte => 1.500.000/pl 4. indice de produccién de reticulocitos (IPR). Este indice de correccién se utiliza en humanos y también se ha usado en perro y gato para corregir las desviaciones definidas anteriormente en los apartados 1a y 1b. Este parime- to presenta controversia porque no se han realizado estudios de correlacién en animales: a. IPR = reticulocitos observados (9%) X [Het observado (%) + 45 (Het normal)] X [ 1 + tiempo de maduracién en sangre] b. Los tiempos de maduracién en sangre de los reticulocitos a varios Hets son 4596 = 1,0 dias, 35% = 1,5 dias, 25% = 2,0 dias y 15% = 2.5 dias ©. Los valores del indice de produccién de reticulocitos equivalen el incre- mento en la produccién de eritrocitos (p. ¢j., IPR. de 3,0 equivale a 3 veces la produccién normal de eritrocitos). Un indice de produccién de reticulocitos superior a 2 implica respuesta regenerativa. E. Interpretacién de los parimetros de reticulocitos 1. Un aumento absoluto de los reticulocitos indica que la médula ésea esté res pondiendo (anemia regenerativa) y que la causa de la anemia es extramedu- lar (es decir, hemorragia o hemélisis) 2. La reticulocitosis es mas intensa en las anemias hemoliticas que en las hemo~ rragicas, El hierro de los eritrocitos destruides esta més disponible para a eri~ tropoyesis que el hierro almacenado como hemosiderina. 3. La reticulocitosis no se evidencia de forma clara hasta las 48 -72 horas del inicio de Ja anemia, Con una respuesta medular normal, el nivel méximo de reticulocitosis se alcanza a los 7 dias. No obstante en animales con diferen- tes enfermedades sistémicas la reticulocitosis se puede retrasar, Los perros tienen una respuesta reticulocitica mayor que los gatos. 5. Enel ganado bovino no se desarrollan reticulocitosis significativas como res- puesta a anemias agudas, hasta que el hematocrito es muy bajo. 6. En caballos no aparece reticulocitosis en ningiin tipo de anemia. 7. Los lechones sanos presentan recuentes de reticulocitos altos, 8. Las aves sanas frecuentemente tienen recuentos de reticulocitos mis altos (-4-5%) gue los mamiferos a causa que la vida media de sus eritrocitos es més corta (25 - 40 dias). 9. La falta de reticulocitosis como respuesta a una anemia, hace suponer que la amédula 6sea no esti respondiendo (anemia no regenerativa) Esto puede ser causado por falta de tiempo para generar la reticulocitosis, por una deficiencia en la respuesta reticulocitica existente 0 debido a defectos en la eritropoyesis. V. Examen de la médula ésea A, Se debe realizar el examen ante: 1. Anemia no regenerativa o que no responde. 2. Neutropenia persistente,CAPITULO 1. ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA ‘Trombocitopenia no explicable Sospecha de neoplasia hematopoyética. Sospecha de osteomielitis, enfermedad infiltrativa o proliferativa de la médu- Ja ésea, yas 6. Fiebre de origen desconocido B. Técnica i 1. Se pueden obtener aspirados de médula 6sea por puncién de la cresta ilfaca, fosa trocantérica, esternén, himero o costilla de los mamiferos, usando una aguja especial para médula dsea o una aguja espinal de didmetro 18. En aves, Jos aspirados se obtienen de la quilla 0 el tibiotarso, Los otros huesos largos importantes de las aves estén lenos de aire y carecen de tejido hematopoyé- tico significativo, 2. Se prefiere el frotis de particulas porque tiene menos contaminacién por sangre 3. Las biopsias centrales, obtenidas de Jos sitios anteriormente indicados median te el uso de agujas especiales, ofrecen mejor informacion que los frotis cito- logicos C. Examen del fiotis de médula 6sea teftido 1. Observar el niimero relativo, tamaio y contenido celular de las particulas, incluyendo la proporcién de adipocitos (aproximadamente 50%) y células progenitoras hematopoyéticas (aproximadamente 50%). El mimero y conte- nido de células de las particulas es una estimacién del total de la médula dsea, sin embargo, pueden darse muestreos incompletos de la médula ésea con un bajo mamero de células aspiradas. El examen histologico de una biopsia del centro de la médula 6sea es mis preciso para evaluar el contenido celular de la médula ésea Ver si el niimero y estado de maduracién de los megacariocitos es el ade- cuado, Los megacariocitos inmaduros tienen el citoplasma azul y granuloso mientras que el de los maduros es rosado y granulado. 3. Hacer una relacién de células micloides con eritroides nucleadas (relacién M:E): a. Normalmente, la relacién McE se determina para valorar la respuesta eri- detectar reacciones del estroma (p. ¢j., mielofibrosis), tropoyética a una anemia. El recuento de células blancas, y mas concre- tamente de los neutréfilos, es necesario para una adecuada interpretacién de la relaci6n. b, Siel recuento de la serie blanca esta dentro de sus intervalos de referen- cia, los cambios que encontremos en la relacién M:E serin debidos a cam- bios en a seria eritroide. c. Valores altos de relacién M:E en animales anémicos que tienen recuen- tos de serie blanca normales hacen pensar en hipoplasia eritroide. d. Valores altos de relacién M:E en animales anémicos con recuentos de serie blanca aumentados son mis dificiles de interpretar porque la tela~ cién puede estar incrementada por hiperplasia mieloide (granulocitica) y/o por hipoplasia eritroide. [Pr usrrure mvsasiran |PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1. ERITROCITOS €. Valores bajos de relaci res de la serie blanca normales o superiores al normal, puede indicar rege- neracién eritroide de la eritropoyesis inefectiva reciente. 4. Para valorar Ja maduraci6n, se pueden observar los porcentajes relativos de distintos estados de las diferentes series (Lamina 1.1.). En animales sanos, aproximadamente el 80% de las series micloides serin metamielocitos, ban das y segmentados (almacén de reserva, maduracién, no proliferante); el 90% de la serie eritroide serin rubricitos y metarubricitos. Un porcentaje eleva do de formas inmaduras se puede relacionar con hiperplasia, neoplasia 0 maduracién anormal de la serie respectiva. En las series mieloides, la reduc cién de la reserva de almacenamiento (que contiene las células mis madu- ras) puede causar un desvio hacia células inmadutas. 1 M:E en animales anémicos que tienen los valo- Podemos identificar células anormales. 6. Para diferenciar la anemia por deficiencia de hierro (reservas de hierto dis~ minuidas) de la anemia por enfermedad crénica (reservas de hierro aumen- tadas), nos puede ser de utilidad aplicar tinciones de Perl’ o azul de Prusia para cl hierro, a los macrofagos de la médula ésea. Las tinciones de Perl's 0 azul de Prusia detectan la hemosiderina (hierro insoluble) pero no detectan la ferritina (hierro soluble que es eliminado durante el proceso de tincién). En la médula ésea felina normalmente no se observa hemosiderina, VI. Deteccién de antigenos y anticuerpos A. Conceptos generales de los antigenos y anticuerpos de los glébulos rojos 1, En los animales domésticos, los anticuerpos anti-erittocitarios son conse- cuencia de transfusiones, transmision trans-placentaria durante la gestacion en el caballo, vacunaci6n con productos de origen sanguineo, fenomenos autoinmunes y por sucesos naturales en el gato. La identificacién de antigenos es de utilidad para pruebas de parentesco, iden- tificacién de donantes de sangre compatibles (p. ej. perros DEA=I.1, 1.2 y 1.3 negativos son los mejores donantes de sangre) y para identificar aparea- mientos que puedan dar lugar a isoinmunizacién y consiguientemente el desarrollo de enfermedad hemolitica en los animales recién nacidos (isoeri- trolisis neonatal) (p. gj. yeguas Aa negativas cruzadas con sementales Aa posi tivos tienen un alto riesgo de manifestarlo en el segundo parto). 3. Para Ja identificacién se utilizan pruebas de aglutinacién y hemélisis con anti. suetos especificos para cada antigeno. Algunos antigenos (subtipos sanguine- os de grupo) son m4 riesgo a tener problemas hemoliticos. La sangre de animales con los antige- nos descritos a continuacién, tiene el mayor potencial para causar sensibili- zacién y consiguientes reacciones: a, Enel perro, los DEA (antigeno eritrocitario de perro) ~ 1.1 (Aa,), DEA- 13 los receptores, Anticuerpos anti-DEA 1.1 y anti-DEA1.2 no se encuen- 2 importantes que otros para determinar animales con (Aa.), DEA-1.3 (Aas) son altamente inmunogénicos y sensibilizaran aCAPITULO 1. ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA tran de forma natural, su presencia en sangre requiere una exposicién pre- via a estos antigenos. Los anticuerpos anti-DEA 1.1 y anti-DEA1.2 dan lugar a reacciones hemoliticas. Los anticuerpos anti-DEA-3 (Ba) que se dan de forma natural generan una eliminacién précoz del eritrocito o hemélisis. Los anticuerpos anti-DEA-5 (Da) y anti-DEA-7 (Ti) se presen- tan de forma natural y implican aumento de la eliminacién de eritrocitos. b. Los anticuerpos del calostro de la yegua para los tipos Aa y Qa son los is frecuentemente relacionados con Ia isoeritrolisis neonatal. ¢. El ganado bovino tiene mucha variabilidad de antigenos eritrocitarios con unos 70 factores de grupo sanguineo, 4d. Los anticuerpos de tipo A y B se presentan de forma natural en el gato. Los gatos de tipo B con anticuerpos anti-A presentaran reacciones hemo- liticas peligrosas para la vida si reciben transfusiones con sangre de tipo A. Si gatos de tipo A con anticuerpos anti-B si reciben sangre de tipo B tendrin una eliminacién precoz de los eritrocitos. B. Deteccién de los anticuerpos anti-eritrocitarios 1. Reaccién de sangre cruzada: a. Estos ensayos se utilizan para detectar anticuerpos y determinar si la sangre puede ser transfundida con seguridad, b. La reaccién cruzada principal cruza eritrocitos del donante con suero del receptor. Este ensayo se utiliza para detectar anticuerpos en el receptor que reaccionen a las células del donante. Las incompatibilidades en este ensayo son clinicamente importantes por la reaccién sistémica que causa la des- truccién masiva de las células transfundida c. La reaccién cruzada secundaria cruza suet del donante con eritrocitos del receptor. Es un ensayo para detectar anticuerpos en la sangre del donante. Las incompatibilidades no son tan peligrosas para la vida del receptor por que los anticuerpos transfundidos se diluirin en el paciente d. Reacciones cruzadas incompatibles pueden indicar sensibilizacién previa: (1) Los anticuerpos que se encuentran de forma natural normalmente no lo estin en concentracién suficiente para causar reacciones en wna transfiu- sién, excepto en los gatos A negativos (tipo B), que tienen de forma natu ral anticuerpos anti-A, (2) Una reaccién cruzada incompatible implica, por Jo tanto, una sensibili- zacion previa, excepto en el gato. ¢. La reaccién cruzada incompatible se refleja en la mayoria de especies por aglutinacion, aunque en el caballo y la vaca la hemélisis predomina, = 2. Prueba de antiglobulina (Test de Coombs): a. La prueba de la antiglobulina (prueba de Coombs) se utiliza para confirmar Ja hemélisis inmuno-mediada de eritrocitos, b. La prueba directa de la antiglobulina (PDA) detecta un anticuerpo y/o com- plemento fijado a la membrana de los eritrocitos lavados del paciente.PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1, ERITROCITOS (1) El reactivo da la antiglobulina (suero de Coombs) se debe preparar con tra cualquier tipo de anticuerpo (TgG, IgM) 0 complemento (C3) 0 puede ser una mezcla (IgG y C3). Los reactivos que evaliian frente un anticuerpo © complemento son monovalentes. Los reactivos que evaldan frente mail tiples anticuerpos © complementos son polivalentes. (2) Hay que usar sueros de Coombs especie-especificos (p.¢ {jo anticanina para el perro) c. Laprueba indirecta de la antiglobulina detecta anticuerpos anti-eritrocito en el sueto del paciente, En esta prueba se evaliia el suero del paciente frente a eritrocitos lavados del padre, de alguno de sus descendientes o de sangre de un donante potencial. En el posparto de yeguas o vacas se puede usar el suero del calostro en lugar del suero sanguineo para detectar posibles reacciones contra las células de la descendencia d. Se ha descrito un método basado en la prueba de inmunoabsorcién enzi- mitica (ELISA) (prueba directa de la antiglobulina unida a enzimas 0 prue- ba DELAT) y se ha usado satisfactoriamente para detectar anticuerpos en la anemia hemolitica autoinmune test de aglutinacién directo-negativa canina (AHIM). Se han detectado IgG, IgM, IgA y C3 recubriendo la membrana de los eritrocitos en perros, aunque esta prueba se ha usado bisicamente IgG de cone como herramienta de investigacién. ANEMIA: DIAGNOSTICO Y CLASIFICACION La anemia es una disminucién absoluta en el valor hematocrito, la concentracién de hemo- globina y/o el recuento de glébulos rojos. La anemia relativa puede darse por aumento del yolumen plasmético (p. ej. administracién de fluidos parenterales en exceso, gestacin, neo~ natos) 0 por obtencién inadecuada de las muestras de sangre de vias intravenosas de flui- doterapia (pseudoanemia). I. Determinacién de la causa de la anemia Como en cualquier enfermedad, el diagnéstico de la anemia se hace a partir de la infor- macién historica, sintomas fisicos y de resultados de laboratorio. ‘A. Anamnesis. Pueden ser importantes los siguientes hechos: 1. Vacunacién 0 administracién de farmacos 2. Exposicién a plantas o agentes quimicos téxicos. 3, Existencia de enfermedad en la familia o rebaio. 4, Ingestién reciente de calostro 0 transfusion. 5. Edad al inicio de los signos clinicos. 6. Historial de problemas sanguineos anteriores. 7. Dieta. 8. Raza, sefias 9. Gestaciones previas de la madre. 10. Estado reproductor (entero 0 castrado)CAPITULO 1. ERITROCITOS + PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA B. Sintomas fisicos 1. Los signos clinicos que sugieren la presencia de anemia estin relaciona- dos con la merma de la capacidad de transporte de oxigeno y los reajus- tes fisiolégicos para aumentar la eficiencia del eritrén y reducir el nivel de trabajo del corazén. Los signos clinicos tipicos son los siguientes: a. Membranas mucosas palidas, b, Debilidad, pérdida de resistencia fisica, intolerancia al ejercicio, Taguicardia y polipnea, especialmente después del ejercicio, a. Sincope, depresién. Sensibilidad al frio aumentada, f. Murmullo cardiaco causado por la baja viscosidad y aumento de ur- bulencia del dujo sanguineo. g. Pulso débil o palpitante. h. Shock, si se pierde de forma répida mas de un tercio del volumen sanguineo. Dependiendo del mecanismo fisiopatoldgico involucrado podemos obser- var iotericia, hemoglobinuria, hemorragia, melena, petequias o fiebre. Si el establecimiento de la anemia es gradual y el animal se ha adaptado ala disminucién de la masa eritrocitica y a la baja capacidad de transporte de oxigeno, los signos clinicos seran menos evidentes. Xv e C. Resultados de laboratorio. Se necesita una confirmacién laboratorial porque las anemias no siempre se acompatian de los signos clinicos tipicos. Una ane= mia moderada fiecuentemente se diagnostica a partir de los datos analiticos de animales enfermos en los que no se habia sospechado de anemia 1. El valor hematocrito es el método mis ficil y preciso para detectar anemia. Siempre hay que interpretarlo conociendo el estado de hidratacién del ani- mal y considerando la posible influencia de una contraccién esplénica. 2. Laconcentacién de hemoglobina y el recuento de globules rojos se pue~ den usar para la posterior clasificacién de la anemia pero normalmente no son necesarios para confirmar su presencia, 3. Se pueden usar otros parimetros de laboratorio para caracterizar la ane- mia y legar a un diagnostico especifico, IL. Clasificacién ava #12 @ ?| TUISHIAINN OLNLILS Siempre que sea posible deberd identificarse la causa de la anemia, porque el término anemia por si solo no constituye un diagnostico definitivo, Para el diagnéstico defini- tivo se usan esquemas de clasificaci6n. Sin embargo, usar una sola clasificacion puede que no sea del todo adecuado. A. Clasificacién segtin tamaio (VCM) y concentracién de hemoglobina (CHCM) del eritrocito 1. ELVCM clasifica la anemia en normocitica, macrocitica o microcitica, dependiendo de si el volumen eritrocitario medio est dentro del inter- valo de referencia, aumentado o disminuido, respectivamente. 31PATOLOGIA CLINICA VETERINARIA + CAPITULO 1. ERITROCITOS 2. La CHCM clasifica las anemias en normocrémica, hipocrémica o hiper crOmiica. Silos eritrocitos son normocrémicos, la concentracién de hemo~ globina esti dentro de su intervalo de referencia. Si son hipocrémicos esti disminuida. La hipercromasia esta relacionada mis frecuentemente con la hemblisis de eritrocitos o Ia administracién de oxiglobina, ya que Jos eri- trocitos no producen excesos de hemoglobina. En circunstancias excep~ cionales, la esferocitosis se puede asociar con la hipereromasia a causa de la disminucién de volumen del critrocito. B. Clasificacién en funcién de la respuesta de la médula sea 1, Anemia regenerativa: a. Lamédula ésea responde activamente a la anemia aumentando la pro- ducci6n de eritrocitos. b. Hallazgos que indican la regeneracién de los eritrocitos: (1) Policromasia 2) Reticulocitosis con anisocitosis y aumento del RDW. (3) Mactocitosis (aumento del VCM) ¢ hipocromasia (disminucién de HCM y CHCM) asociado a reticulecitosis, (4) Punteado baséfilo de los eritrocitos en rumiantes. (5) Médula ésea hipercelular con disminucién de la relacién M:E a causa de la hiperplasia eritroide. c. Las especies capaces de la méxima respuesta reticulocitica son las que tienen la regeneraci6n mis intensa; el hematocrito vuelve al interva- Jo de referencia mis ripidamente. La capacidad de Jas especies para organizar una respuesta regenerativa, en orden decreciente es: aves, perro, gato, vaca, caballo. d._ Lapresencia de regeneraci6n indica una etiologia externa a la médu- Ja 6sea, implicando pérdida (p. ej. hemorragia) o lisis (p. ¢j. cuerpos de Heinz, inmuno-mediada o fragmentacién) de los eritrocitos de suficiente duracién (2-3 dias) para que la respuesta regenerativa sea evidente en la sangre. El examen de la médula sea raramente es necesario para detectar la regeneracién de los etitrocitos; no obstante, si se toman muestras de aspirados la hiperplasia eritroide serd evidente, La regeneraci6n en el caballo es dificil de detectar, porque los reti- culocitos no se liberan a la circulacién. Un incremento del VCM y RDW puede indicar una respuesta regenerativa. El examen de la médula 6sea puede ayudar pero no siempre es concluyente; en los aspirados observaremos hiperplasia eritroide e incremento del néim: ro de reticulocitos. g. _Algunos ejemplos de anemia regenerativa son la hemélisis, la hemo- rmagia o la regeneraci6n una vez se ha resuelto la causa de una ane- mia no regenerativa