PAULO CESAR NAOUM

AC&T- 2013

HEMOGLOBINAS NORMAIS

MOLCULA DA HEMOGLOBINA
HUMANA NORMAL Hb A

AS HEMOGLOBINAS
HUMANAS SO
COMPOSTAS POR
QUATRO CADEIAS
DE AMINOCIDOS
CONHECIDAS POR
GLOBINAS E
INSERIDO EM CADA
GLOBINA H UM
COMPONENTE
QUMICO
DENOMINADO POR
GRUPO HEME

HEMOGLOBINAS NORMAIS

GLOBINA ALFA

GRUPO
HEME
GRUPO
HEME
GLOBINA BETA

GLOBINA ALFA
GRUPO
HEME
GRUPO
HEME
GLOBINA BETA

COMPONENTES DA MOLCULA DE Hb A

PORTANTO, H
QUATRO GLOBINAS
(TETRMERO)
COMPOSTAS POR
DUAS GLOBINAS
ALFA E DUAS
GLOBINAS BETA.
EM CADA GRUPO
HEME H UM
TOMO DE FERRO
QUE TEM A FUNO
DE SE LIGAR COM A
MOLCULA DE
OXIGNIO.

HEMOGLOBINAS NORMAIS

EM CADA
ERITRCITO H
CERCA DE 270 A
330 MILHES DE
MOLCULAS DE
HEMOGLOBINAS.
ESSA AVALIAO
FEITA NO
HEMOGRAMA POR
MEIO DO NDICE
HEMATIMTRICO
HCM.

HEMOGLOBINAS NORMAIS
O HCM A SIGLA DA
HEMOGLOBINA
CORPUSCULAR
MDIA.
O VALOR NORMAL
DO HCM 27 A 33
PICOGRAMA( pg) QUE
REPRESENTA A
MDIA ENTRE 270 A
330 MILHES DE
MOLCULAS DE
HEMOGLOBINAS EM
CADA ERITRCITO.

MEDULA SSEA DE CRNEO DE UMA

PESSOA COM TALASSEMIA BETA MAIOR

A PRODUO
DAS CLULAS
DO SANGUE
OCORRE NA
MEDULA
SSEA.A
PRODUO
ESPECFICA
DOS
ERITRCITOS
DENOMINADA
POR
ERITROPOIESE

MEDULA SSEA DE CRNEO DE UMA

PESSOA COM TALASSEMIA BETA MAIOR

EM SITUAES
PATOLGICAS
CRNICAS H
ACENTUADA
PRODUO DE
ERITROCITOS NA
MEDULA SSEA, POR
EX.: TALASSEMIA
BETA MAIOR, ANEMIA
FALCIFORME,ETC.
O ESPAO MEDULAR
SE AMPLIA DE
FORMA ACENTUADA
(FIGURA AO LADO).

MICROSCOPIA PTICA DO ESFREGAO DE

MEDULA SSEA NORMAL

AO EXAMINARMOS
A CITOLOGIA DE
UM ESFREGAO DE
MEDULA SSEA
POSSVEL
RECONHECER AS
DIFERENTES
CLULAS QUE
FAZEM PARTE DA
LINHAGEM
ERITROCITRIA.
ESSAS CLULAS
SO OS
ERITROBLASTOS.

ERITROBLASTO
POLICROMTICO
ERITROBLASTO BASFILO
ERITROBLASTO
ORTOCROMTICO

MICROSCOPIA PTICA DO ESFREGAO DE

MEDULA SSEA NORMAL

NO INTERIOR DE
CADA UM DESSES
ERITROBLASTOS
CORRE A SNTESE
DE MOLCULAS DE
HEMOGLOBINAS.

MICROSCOPIA PTICA DO ESFREGAO DE

MEDULA SSEA NORMAL

ERITROBLASTO EM FASE DE MITOSE

COM A SEPARAO DE CROMOSSOMOS

PARA ENTENDER A
SNTESE DE
HEMOGLOBINAS
PRECISO CONHECER
FUNDAMENTOS DE
CITOLOGIA E
GENTICA.
NA FIGURA AO LADO
POSSVEL OBSERVAR
OS CROMOSSOMOS
SEPARADOS EM DOIS
PLOS DA CLULA,
NO MOMENTO QUE
ANTECEDE SUA
REPRODUO.

POR MEIO DA ANLISE DE

CARIOTIPO POSSVEL
IDENTIFICAR OS
CROMOSSOMOS,INCLUINDO OS
DOIS CROMOSSOMOS QUE TEM
OS GENES QUE SINTETIZAM AS
GLOBINAS.
O CROMOSSOMO 11 TEM OS
GENES QUE SINTETIZAM AS
GLOBINAS BETA .
O CROMOSSOMO 16 TEM OS
GENES QUE SINTETIZAM AS
GLOBINAS ALFA
CITOLOGIA DO CARIOTIPO
QUE MOSTRA OS 23 PARES
DE CROMOSSOMOS
HUMANOS.

MICROSCOPIA ELETRNICA DO
CROMOSSOMO 11. NESSE CROMOSSOMO
H CENTENAS DE GENES, ENTRE OS QUAIS
OS GENES QUE SINTETIZAM A GLOBINA
ALFA.

O CROMOSSOMO
NADA MAIS DO
QUE UMA
GRANDE
MOLCULA DE
DNA. ALGUMAS
REGIES DESSA
MOLCULA DE
DNA TEM A
CAPACIDADE DE
PRODUZIR
PROTEINAS E
ENZIMAS. ESSAS
REGIES SO
DENOMINADAS
POR GENES.

16

11

CITOGENTICA DE HIBRIDIZAO IN SITU POR

FLUORESCNCIA (FISH) DESTACANDO OS
GENES DE GLOBINAS ALFA (CROMOSSOMO 16 )
BETA (CROMOSSOMO 11)

DOIS
CROMOSSOMOS
ESPECFICOS (11
E 16) TEM OS
GENES DA
SNTESE DE
HEMOGLOBINAS
HUMANAS

POR DE UM PROCESSO
ESPECIAL DE
MICROSCOPIA
ELETRNICA
POSSVEL VER A
ESTRUTRA DE DUPLA
HLICE DE DNA LIGADA
PELAS BASES
NITROGENADAS (EM
FORMA DE HASTES).
PEDAO DE UM CROMOSSOMO VISTO
POR MICROSCOPIA ELETRNICA POR
NANOTECNOLOGIA. POSSVEL
OBSERVAR A ESTRUTURA DO DNA
DESSE PEDAO.

PEDAO DE UM CROMOSSOMO VISTO

POR MICROSCOPIA ELETRNICA POR
NANOTECNOLOGIA. POSSVEL
OBSERVAR A ESTRUTURA DO DNA
DESSE PEDAO.

OS GENES TEM A
ESTRUTURA DE DNA,
CONFORME A FIGURA AO
LADO. A LEITURA DE
CADA BASE
NITROGENADA FEITA
POR UMA ENZIMA
CONHECIDA POR RNA
POLIMERASE.
A REPRESENTAO DAS
BASES NITROGENADAS
FEITA POR MEIO DE
LETRAS A (ADENINA)
G(GUANINA),C(CITOSINA),
T(TIMINA).

MICROSCOPIA ELETRNICA POR NANOTECNOLOGIA

MOSTRANDO A RNA POLIMERASE COM A CPIA DAS
BASES NITROGENADAS PASSANDO POR DENTRO DA
MOLCULA DE RIBOSSOM. A TRADUO BIOLGICA
DESSAS BASES SE TRADUZ EM AMINOCIDOS QUE
SE DISPE EM POLIPETDEOS PARA FORMAR O
TETRMERO DA MOLCULA DE HEMOGLOBINA .
.

REPRESANTAO
DA MOLCULA DE
HEMOGLOBINA

Triptofano

TGG

Metionina

ATG

cido asprtico

GAT GAC

Arginina

AGA AGG

Istidina

CAT CAC

Cistena

UGT TGC

Fenilalanina

TTT TTC

Tirosina

TAT TAC

Serina

AGT AGC

Isoleucina

ATT ATC ATA

Glicina

GGT GGC GGA GGG

Valina

GTT GTC GTA GTG

Alanina

GCT GCC GCA GCG

Prolina

CCT CCC CCA CCG

Treonina

ACT ACC ACA ACG

Leucina

TTA TTG CTT CTC CTA CTG

ATUALMENTE SE
CONHECEM TODOS OS
20 AMINOCIDOS E SUAS
TRPLICES BASES
NITROGENADAS
CORRESPONDENTES.

etc...

Estrutura plana

Dobraduras

Estrutura
Plana

Regies
prximas ao
grupo heme

Dobraduras

REPRESENTAO
ESTRUTURAL DA GLOBINA
BETA
Observe
que
a
molcula
apresenta dobradurasem quase
totalidade da sua estrutura.
Mutaes de aminocidos nessas
drobraduras causam instabilidade
molcula. Se a mutao
prxima ao grupo heme pode
afetar a ligao do ferro com o
oxignio,
fato
que
origina
hemoglobinas variantes com
fixao alterada ao oxignio. Nas
estruturas sem dobraduras(plana),
a maioria das mutaes (com
excees das Hb S e Hb C) no
causam danos molcula.

Fingerprint de
peptdeos das
globinas alfa e beta
DA Hb S. O crculo
indica onde deveria
estar o peptdeo
normal da Hb A.

PEPTDEOS DAS GLOBINAS ALFA E

BETA DA Hb A
A figura ao lado representa a separao
de peptdeos de globinas alfa e beta da
Hb A. Inicialmente isolam-se as globinas
dos seus grupos heme e depois tratam-se
as globinas (polipetdeos) com a enzima
tripsina para quebrar os polipetdeos em
peptdeos. Esses peptdeos so
submetidos eletroforese no sentdo
horizontal e cromatografia no sentdo
vertical.Essa tcnica denominada por
fingerprint de globinas. Cada
mancharepresenta um peptdeo, que
so submetidos anlise de seus
aminocidos.

Por meio de eletroforese

de globinas possvel
separar as globinas alfa
das beta, conforme
mostra a figura ao lado.
Observe que h
equilbrio quantitativo
entre elas, mostrando
que os genes que
sintetizam as globinas
alfa e beta atuam
tambm de forma
equilibrada e
sicronizadamente.

Por meio da
eletroforese de
hemoglobinas
possvel separar as
fraes de
hemoglobinas normais:
Hb A (96 a 98%)
Hb A2 (2 a 4%)
Hb Fetal (0 a 1%)*
(*) a partir dos seis
meses de idade.

Cr.11

Cr.16

Genes da globina alfa no

cromossomo 16 e genes da globina
beta no cromossomo 11

GENTICA DA SNTESE DE
HEMOGLOBINAS
Para entender as alteraes
biolgicas que afetam as
molculas de hemoglobinas e
que resultam em
hemoglobinas variantes e
talassemias preciso
conhecer a dinmica dos
genes que produzem as
globinas alfa e beta,
principalmente. Cerca de 60%
das mutaes ocorrem na
globina beta, 38% na globina
alfa, 1% na globina delta
(variantes de Hb A2) e 1% na
globina gama (variantes de
Hb Fetal).

CROMOSSOMOS E GENES RELACIONADOS

COM A SNTESE DE HEMOGLOBINAS
GENES DO CROMOSSOMO 11

RCG

GENES DO CROMOSSOMO 16

RCG

SNTESE NORMAL DAS HEMOGLOBINAS

NORMAIS
Cromossomo 16

RCG

Cromossomo 11

RCG

A2 (2 4%)

Fetal (0 1%)

A (96 98%)

ALTERAES HEREDITRIAS DAS

HEMOGLOBINAS

TALASSEMIAS
Se deve ao desequilbrio de
produo de globinas alfa e beta.

normal

Tal.alfa

Tal.beta

Hb VARIANTES
Se deve a trocas de aminocidos nas
globinas alfa ou beta, principalmente.
Hb A
Hb variante por
mutao na globina
alfa (ex. Hb I)
Hb variante por
mutao na globina
beta (ex. Hb S)

SNTESE DAS HEMOGLOBINAS NA TALASSEMIA ALFA

(DEFICINCIA NA PRODUO DE GLOBINAS ALFA)
Cromossomo 16

RCG

Cromossomo 11

RCG

Hb A2

Hb A
(
4 = Hb H)

CORPSCULOS OU
PRECIPITADOS
INTRAERITROCITRIOS DE Hb H
A precipitao de Hb H ocorre
como consequncia da sobrade
globinas beta que no teve
quantidades suficientes de
globina alfa para se combinar e,
assim. formar a molcula de Hb A.
Esses precipitados somente so
visualizados aps os eritrcitos
terem sido tratados com azul de
crezil brilhante a 1%.
ERITRCITOS COM
PRECIPITADOS DE Hb H EM
OBJETIVA DE IMERSO
(10000X)

A2
AC

AH

O TESTE LABORATORIAL MAIS

SENSVEL PARA DETECTAR A Hb H
A ELETROFORESE DE
HEMOGLOBINAS.
NA ELETROFORESE ALCALINA EM
ACETATO DE CELULOSE POSSVEL
FRACIONA-LA NOS PRIMEIROS 10
MINUTOS DE ELETROFORESE.
NA FIGURA AO LADO A Hb H
FACILMENTE IDENTIFICADA POR TER
CONCENTRAO DE 8%. MAS A
MAIORIA DAS TALASSEMIAS ALFA
SO DO TIPO MINIMAE TEM
CONCENTRAES ENTRE 0,5 E 1%.

SNTESE DAS HEMOGLOBINAS NA

TALASSEMIA BETA
Cromossomo 16

RCG

Cromossomo 11

RCG

Hb A2

Hb F

Hb A

Livre

UMA DAS CONSEQUNCIAS FISIOPATOLGICAS

DA TALASSEMIA BETA MAIOR A INTENSA
DEFORMAO DOS ERITRCITOS, MOTIVADA
PELA ENORME QUANTIDADE DE CORPOS DE
HEINZ.

A LESO MOLECULAR
NO GENE BETA PODE
AFETAR COM MUITA
INTENSIDADE A SUA
CAPACIDADE DE
PRODUZIR GLOBINAS
BETA. EM CASOS MAIS
GRAVES DE TALASSEMIA
BETA MAIOR A
PRODUO DE GLOBINA
BETA NULA, E COMO
CONSEQUNCIA OS
ERITRCITOS SO
DESPROVIDOS DE
MOLCULAS DE
HEMOGLOBINAS.

IDENTIFICAO LABORATORIAL DE
TALASSEMIAS BETA MAIOR

1-Tal. Beta Menor

com
Hb
A2
aumentada.

3
Hb A
Hb Fetal

Hb A2

2Tal.
Beta
Maior(
/ )
0
com
ausncia
total de Hb A e
A2.
3 - Tal. Beta
Maior(
+ / +) com
alguma sntese de
Hb A.

ALTERAES ESTRUTURAIS NA MOLCULA

DE GLOBINA BETA NA DOENA FALCIFORME

Local da mudana de
cido glutmico por
valina,dando origem Hb S

A MUTAO QUE D ORIGEM Hb S

OCORRE NO GENE DA GLOBINA
BETA POR TROCA DO SEU SEXTO
AMINOCIDO (CIDO GLUTMICO)
PELA VALINA.
APESAR DESTA MUTAO
OCORRER NUMA REGIO EXTERNA
E NO DOBRADA DA MOLCULA, O
DESENCADEAMENTO DA
FALCIZAO DECORRE DA
DESOXIGENAO DA Hb S. AO
PERDER O OXIGNIO A MOLCULA
DE GLOBINA BETA S SE MOVIMENTA
DISCRETAMENTE, PORM O
SUFICIENTE PARA REAGIR COM
GLOBINAS BETA S DE OUTRAS
MOLCULAS DE Hb S (prximo slide).

INCIO DA POLIMERIZAO DE
MOLCULAS DE Hb S
DESOXIGENADAS. OS CONTATOS
ENTRE ELAS SE DEVEM UMA
MOVIMENTAO ANORMAL DA
MOLCULA DEVIDO MUTAO.

TODAS AS MOLCULAS DE
HEMOGLOBINAS NORMAIS E
ANORMAIS (EXCEPTUANDO-SE
A Hb S) MANTM-SE ISOLADAS
NO LQUIDO
INTRAERITROCITRIO, QUER
ESTEJAM OXIGENADAS OU NO.
AS MOLCULAS DE Hb S S SE
MANTM ISOLADAS QUANDO
OXIGENADAS. AO SE
DESOXIGENAREM, UMA SIMPLES
MOVIMENTAO MOLECULAR
DEVIDO MUDANA
ESTRUTURAL, AS FAZEM SE
TOCAREM DANDO ORIGEM
FORMAO DE POLMEROS DE
Hb S, FORMANDO ESTRUTURAS
AGRUPADAS E ALONGADAS.

A DISPOSIO DOS FILAMENTOS AGRUPADOS DE

MOLCULAS DE Hb S DESOXIGENADAS (POLMEROS
DE Hb S) DEFORMAM OS ERITRCITOS, COMO A
CLULA ABAIXO, TORNANDO-OS ALONGADOS EM
FORMA DE FOICE (FALCIFORME).

DURANTE A PERDA DE OXIGNIO PELOS ERITRCITOS QUECONTM

Hb S, OCORREM OS PROCESSOS POLIMERIZANTE (VRIOS DENTRO DE
UMA MESMA CLULA, COMO MOSTRA A FIGURA DO MEIO) AT O
ERITRCITO ADQUIRI A FORMA FALCIFORME IRREVERSVEL

O2
O2

O2

O2
O2

O2
O2

O2

O2
O2
O2

O2

O2

O2
O2

O2
O2

Oxi-Hb S

Deoxi-Hb S

Deoxi-Hb S

Fase reversvel

Fase irreversvel

Reposio de O2

CONSEQUNCIAS FISIOPATOLGICAS DA Hb S
OXI-Hb S
O2

O2; H2O2, HO

DEOXI-Hb S

Polimerizao
da deoxi-Hb S
Clulas
Falciformes

Degradao
da Hb S

Meta Hb
Corpos de
Heinz

Alterao de
membrana

Ocluso
vascular

A FIGURA DO SLIDE ANTERIOR DESTACOU A FORMAO

DOS CORPOS DE HEINZ COMO UMA DAS CONSEQUNCIAS
DA DESNATURAO DA GLOBINA BETA S.
CORPOS DE HEINZ SO COMPOSTOS DE DEGRADAO
DA METAHb S QUE SE PRECIPITAM JUNTO MEMBRANA
DO ERITRCITO, CAUSANDO LESES. ESSAS LESES
ATRAEM OS MACRFAGOS QUE FAGOCITAM OS
ERITRCITOS FALCIFORMES, CAUSANDO ANEMIA.

CORPOS DE HEINZ EM
MICROSCOPIA PTICA

CORPOS DE HEINZ EM
MICROSCOPIA ELETRNICA

ERITROFAGOCITOSE POR MACRFAGO DE ERITRCITOS

ANORMAIS.
NA ANEMIA FALCIFORME OS ERITRCITOS FALCMICOS SE
TORNAM MUITAS VZES ESFEROCTICOS, COMO NA FIGURA
ABAIXO.

Foto em M.E. de macrfago

fagocitando eritrcitos da
esferocitose

M.E. plana da fagocitose de

eritrcitos vista por meio da
tcnica de microresplandescncia

A PRINCIPAL
CONSEQUNCIA DO
PROCESSO DA
FALCIZAO EM
DOENTES FALCIFORMES
A OCULSO DOS
PEQUENOS VASOS
SANGUNEOS. ESTA
OCULSO
RESPONSVEL POR
ISQUEMIAS, NECROSES
TECIDUAIS E MUITA DOR.
MICROSCOPIA ELETRNICA DA
OCLUSO VASCULAR

CONSEQUNCIAS DAS OCLUSES VASCULARES

ELETROFORESE DE HEMOGLOBINAS
A DOENA
FALCIFORME O NOME
QUE SE D QUANDO A
CONCENTRAO DA Hb
S MAIOR QUE 50% EM
RELAO Hb A OU
QUANDO EST
ASSOCIADA A OUTRA
Hb ANORMAL.
Doena falciforme SC
Anemia falciforme
Trao falciforme (assintomtico)


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