PATOLOGA | GENERALIDADES

18-3-2016

Patologa:
Pathos: estado anormal duradero como producto de una enfermedad.
Enfermedad: Entidades reconocibles por manifestaciones caractersticas y por una
evolucin natural tpica.
Patologa: Estudio de las causas estructurales y funcionales de la enfermedad humana.
Aspectos del proceso patolgico:
Etiologa: causa de la enfermedad.
Patogenia: mecanismo (s) del desarrollo de la enfermedad.
Cambio morfolgico: alteraciones estructurales inducidas en las clulas y en los tejidos por
la enfermedad.
Significacin clnica: las consecuencias funcionales de los cambios morfolgicos. (como
afecta el cambio morfolgico a la persona)
Ej.: Cncer de pulmn
Etiologa: Humo del tabaco
Patogenia: Alteraciones a nivel de epitelio que hace que prolifere de forma descontrolada
Cambio morfolgico: Tumor pulmonar
Significacin clnica: Insuficiencia respiratoria, neumona, Muerte
Si bien el objeto central del estudio terico de la Patologa es la enfermedad como entidad, en la
prctica el objeto ms importante es el diagnstico de enfermedades y lesiones, lo que tiene
mucha trascendencia para el tratamiento y pronstico en pacientes.
Mtodos de diagnstico:
Biopsias:
Procedimiento en el que se remueve tejido de un organismo para examen microscpico y
as establecer un diagnstico.
La Patologa Quirrgica (Estudio de lesiones a travs del microscopio que se toman a
travs de procesos quirrgicos) es la rama de la Anatoma Patolgica que se preocupa del
estudio de las biopsias.
El diagnstico histopatolgico muchas veces precede al tratamiento.
Se ven tejidos
Se ve la arquitectura del tejido

Citologa:
Estudia clulas sueltas, la biopsia estudia tejidos.
Citologa ms comn: PAP (Citologa exfoliativa del cuello uterino)
Hace diagnostico presuntivo
Se hacen extendidos celulares

Con respecto a la biopsia incisional?

se extirpa parte de la lesin, exclusivamente con un propsito diagnstico.

Se recomienda en lesiones de gran tamao, en las que ser necesario programar

ulteriormente una intervencin quirrgica de gran envergadura.
Con respecto a la PAF?
Se utiliza tanto en lesiones de tamao pequeo como en las ms grandes.
Es recomendable no emplearla indiscriminadamente, pues la muestra que se obtiene
puede no ser representativa y, en consecuencia, llevar a errores diagnsticos por
interpretacin inadecuada.
Con respecto a la escisional?
se extirpa la lesin completa en un solo tiempo.

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Esta biopsia incluye habitualmente tejido normal adyacente para tener un margen de
seguridad.
Es ideal para lesiones pequeas.

Con respecto a biopsias?

Puede definirse como el procedimiento en el que se remueve tejido de un organismo vivo para
examen microscpico y as establecer un diagnstico. La muestra obtenida tambin se llama
biopsia.
La Patologa Quirrgica es la rama de la Anatoma Patolgica que se preocupa del estudio de las
biopsias y difiere de la autopsia por la inmediatez del diagnstico. El diagnstico histopatolgico
muchas veces precede y determina la actitud teraputica en un caso dado. Por consiguiente, el
diagnstico de la biopsia es siempre URGENTE. Esto es importante no slo por la decisin
teraputica, sino que tambin porque significa reducir gastos de hospitalizacin, ahorro de tiempo,
etctera.
Segn el tipo de muestra se distinguen:
1) Biopsia por puncin:
se utiliza tanto en lesiones de tamao pequeo como en las ms grandes. Es recomendable no
emplearla indiscriminadamente, pues la muestra que se obtiene puede no ser representativa y, en
consecuencia, llevar a errores diagnsticos por interpretacin inadecuada.
2) Biopsia excisional:
se extirpa la lesin completa en un solo tiempo. Esta biopsia incluye habitualmente tejido normal
adyacente para tener un margen de seguridad. Es ideal para lesiones pequeas.
3) Biopsia incisional:
se extirpa parte de la lesin, exclusivamente con un propsito diagnstico. Se recomienda en
lesiones de gran tamao, en las que ser necesario programar ulteriormente una intervencin
quirrgica de gran envergadura.
4) Formas especiales de biopsia.
Biopsia percutnea es aquella en la cual el tejido se obtiene por puncin a travs de la piel; biopsia
endoscpica: el tejido se obtiene con instrumentos (endoscopio) a travs de cavidades naturales;
biopsia estereotxica: biopsia cerebral a travs de estereotaxis, o sea la localizacin del sitio de la
biopsia se hace mediante anlisis externo de coordenadas; biopsia punch: biopsia de piel obtenida
con instrumentos cilndrico hueco llamado punch, de dimetro variable (algunos mm) que permite
el estudio de todas las capas de la piel e hipodermis; biopsia shave: biopsia de piel en la que la
muestra se obtiene mediante corte paralelo a la superficie cutnea (afeitado).
El desarrollo alcanzado por la Anatoma Patolgica, gracias a la incorporacin de nuevas tcnicas,
ha significado no slo un aporte importante al diagnstico mdico, sino que tambin una exigencia
cada vez mayor en cuanto a precisin y calidad del mismo.
La toma de la muestra debe considerar contar con tejido representativo, en cantidad y condiciones
adecuadas. Nunca estar de ms repetir que resulta imprescindible una conversacin y acuerdo
previos para el estudio antomo-patolgico de las muestras. Idealmente, y si se puede hacer de
manera rpida, es recomendable enviar la muestra fresca sin fijar. En estos casos, lo mejor es
enviarla envuelta en una gasa humedecida en suero fisiolgico, tan pronto como sea posible. Si la
distancia es francamente larga, como el traslado interurbano, puede depositarse la muestra en
estas condiciones en un recipiente relleno con cubos de hielo, para preservar la muestra fra
durante el transporte.
Las muestras fijadas en formalina e incluso las incluidas en parafina pueden eventualmente ser
tiles para estudios ms elaborados como la inmunohistoqumica y la microscopa electrnica, pero
su rendimiento es inferior, pues ambas tcnicas requieren condiciones de fijacin especiales. La
fijacin en formalina produce artefactos importantes en la estructura fina de las clulas, lo que
dificulta el examen ulterior, especialmente con microscopa electrnica. En ciertas circunstancias,
cabe an la posibilidad de recuperar las muestras incluidas en parafina, revirtiendo todo el proceso
para incluir en polmeros plsticos y obtener cortes ultrafinos para microscopa electrnica. Para las
tcnicas inmunohistoqumicas pueden servir los cortes usuales, pero slo ser factible el estudio
de antgenos citoplasmticos o nucleares y no el de membranas, como en el estudio de
poblaciones y subpoblaciones linfocitarias.

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La fijacin corriente de la muestra es en formalina neutra al 10%, que debe obtenerse en el servicio
de Anatoma Patolgica. El volumen del fijador deber ser a lo menos 10 veces mayor que el del
trozo de tejido. Las muestras pequeas (menos de 2 cm) son extremadamente susceptibles a la
desecacin y deben colocarse inmediatamente en fijador o ser enviadas al laboratorio envueltas en
una gasa humedecida en suero fisiolgico. Errores comunes y frecuentes son: sumergir la muestra
en suero fisiolgico u otros lquidos, utilizar cantidad y concentracin inadecuadas de fijador,
fijacin de rganos completos, todo lo cual acarrea fijacin deficiente con deterioro del material y
mayores posibilidades de error en la interpretacin o, simplemente, inutilizacin definitiva del tejido.
Si por razones excepcionales tiene que diferirse la fijacin, las muestras podrn mantenerse en
refrigerador a 4C.
Hay muestras que por la naturaleza del examen a realizar no deben fijarse y tienen que ser
enviada en fresco al laboratorio: algunas biopsias de piel y rin, que requieren estudio de
inmunofluorescencia directa, biopsias de msculo esqueltico para estudio enzimohistoqumico de
miopatas y muestras de neoplasias para caracterizar inmunofenotipo como linfomas.
Toda muestra para examen histopatolgico o citolgico debe ser identificada en el frasco, sobre o
bolsa con el nombre completo del paciente y el rgano de donde procede. La muestra debe
acompaarse de un formulario en el que se consigne el nombre completo y edad del paciente,
rgano de donde se obtuvo, diagnstico y antecedentes clnicos y mdico que enva.
Todo el material extirpado debe enviarse a examen y a un solo patlogo. No es raro que la muestra
sea dividida en algn momento y enviada a dos patlogos distintos simultneamente. Este
proceder es desaconsejable, porque una de las partes puede no ser representativa de la lesin en
cuestin, lo que dar diagnsticos diferentes que slo inducirn a confusin en perjuicio del
paciente. En casos excepcionales, es aconsejable la interconsulta del material de una biopsia a
otro patlogo o a instituciones de reconocida y demostrada experiencia. Es recomendable en estos
casos, que todas las opiniones queden por escrito y se debe exigir material apropiado y suficiente
y, por supuesto, una pregunta precisa sobre cul es la duda o problema reales en el caso en
cuestin.
En lo posible, se debe guardar siempre el material sobrante hasta que se tenga un diagnstico.
Despus del examen microscpico, no rara vez, es necesario reexaminar las piezas quirrgicas e
incluso tomar nuevas muestras. Ms an, frecuentemente el mdico tratante o el cirujano, visitan la
sala de biopsias para tener una visin ms detallada y provechosa del caso en cuestin junto al
patlogo. Todo el material que llega a Anatoma Patolgica y los informes escritos
correspondientes tienen que ser archivados y guardados por un tiempo prudente, a lo menos 5
aos segn la legislacin vigente, y estar a disposicin de las personas interesadas, ya sea para
revisin o para investigacin.
La llamada biopsia contempornea a intervencin quirrgica o peroperatoria es la que se realiza
durante el acto operatorio y tiene una sola indicacin, a saber, elegir entre dos o ms opciones
quirrgicas, dependiendo de cul sea el informe antomo-patolgico intraoperatorio. En la mayora
de los casos, al cirujano le basta que el patlogo establezca si se trata de una lesin benigna o de
un cncer.
En trminos generales, el diagnstico de malignidad no presenta mayores problemas para un
patlogo con experiencia. Sin embargo, en un bajo porcentaje de casos, la decisin debe
postergarse uno o dos das, hasta que se hayan examinado ms muestras procesadas con la
tcnica corriente. Otro objetivo de la biopsia por congelacin es determinar la presencia de lesin
en los bordes de reseccin quirrgica, particularmente en tumores benignos con tendencia a
recidivar o en tumores malignos en los que se desea hacer ciruga curativa.
Con relacin a los aspectos del proceso patolgico?
Etiologa: causa de la enfermedad.
Patogenia: mecanismo (s) del desarrollo de la enfermedad.
Cambio morfolgico: alteraciones estructurales inducidas en las clulas y en los tejidos por
la enfermedad.
Significacin clnica: las consecuencias funcionales de los cambios morfolgicos. (como
afecta el cambio morfolgico a la persona)
Tipos de biopsia?:

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Segn tipo de muestra

Biopsia por puncin
Biopsia incisional
Biopsia escisional
Formas especiales de biopsia:
- Biopsia percutnea es aquella en la cual el tejido se obtiene por puncin a travs
de la piel.
- Biopsia endoscpica: el tejido se obtiene con instrumentos (endoscopio) a travs
de cavidades naturales
- Biopsia estereotxica: biopsia cerebral a travs de estereotaxis, o sea la
localizacin del sitio de la biopsia se hace mediante anlisis externo de
coordenadas
- Biopsia punch: biopsia de piel obtenida con instrumentos cilndrico hueco llamado
punch, de dimetro variable (algunos mm) que permite el estudio de todas las
capas de la piel e hipodermis
Biopsia shave: biopsia de piel en la que la muestra se obtiene mediante corte
paralelo a la superficie cutnea (afeitado).
Segn procesamiento:
Estndar
Seriada
Intraoperatoria
Bloque celular

Con respecto a la autopsia?

La palabra autopsia significa ver por s mismo y se usa como sinnimo de necropsia o
examen post-mortem.
Representa un examen mdico despus de la vida, cuyos objetivos son la bsqueda de las
causas de la muerte, el anlisis de la enfermedad bsica y de sus efectos y complicaciones
en sus aspectos anatmicos y de las consecuencias de la intervencin mdica.
La autopsia permite formular un diagnstico mdico final o definitivo, dar una explicacin
de las observaciones clnicas dudosas y evaluar un tratamiento dado.
La palabra autopsia significa ver por s mismo y se usa como sinnimo de necropsia o
examen post-mortem. Quizs si el mejor trmino sea examen post-mortem, porque
representa en verdad un examen mdico despus de la vida, cuyos objetivos son la
bsqueda de las causas de la muerte, el anlisis de la enfermedad bsica y de sus efectos
y complicaciones en sus aspectos anatmicos y de las consecuencias de la intervencin
mdica. La autopsia permite formular un diagnstico mdico final o definitivo, dar una
explicacin de las observaciones clnicas dudosas y evaluar un tratamiento dado. Para el
cirujano la autopsia proporciona informacin acerca de las causas de muerte en el
postoperatorio, del estado de las suturas y de la presencia de complicaciones quirrgicas.
El valor de la autopsia puede resumirse en los siguientes puntos:
- cientos de enfermedades descubiertas y descritas
- clasificaciones de innumerables lesiones
- control de efectividad de los tratamientos mdicos
- origen de ideas para tratamientos mdicos y quirrgicos
- comprobacin del diagnstico mdico
- fuente de enseanza de estudiantes y mdicos
- fuente de informacin epidemiolgica
Puede considerarse que la autopsia es el nico mtodo confiable que permite confirmar el
acierto diagnstico mdico en 70 a 85% de los casos. Sin embargo, estudios sistemticos
muestran que un 30% de los pacientes fallecidos y que llegan a autopsia no fueron
diagnosticados correctamente en vida. El porcentaje de error diagnstico "trascendental"
de estos casos, o sea de diagnstico con implicaciones pronsticas y teraputicas
importantes, que eventualmente podran haber modificado la evolucin en forma

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significativa, es de 10 a 12%. Ambos porcentajes se han mantenido prcticamente

inalterados en las ltimas dcadas.
La autopsia, es irreemplazable por la informacin que aporta para confeccionar el
certificado de defuncin, pues establece la mayora de las veces la causa de muerte en el
caso individual. As, ha podido establecerse que las infecciones por grmenes oportunistas
corresponden a la primera causa inmediata de muerte en pacientes inmunodeprimidos y
que en los ltimos decenios esta frecuencia se ha quintuplicado.
Con respecto a la microscopia electrnica?
De transmisin:
- En esta tcnica la preparacin teida es traspasada por un haz de electrones, lo
cual proporciona la imagen ultrafina sobre una pantalla ad hoc.
De barrido:
- La microscopa electrnica de barrido permite el estudio de superficies celulares.
- La imagen se obtiene rastreando la superficie de la muestra con un haz electrnico
ultrafino.
- Las seales generadas se recolectan, amplifican y captan en un tubo de rayos
catdicos.
La microscopa electrnica es una tcnica que requiere instrumentos de alta complejidad y
personal altamente especializado. Se utilizan la microscopa electrnica de transmisin o
convencional y la de barrido.
Las muestras para microscopa electrnica deben fijarse en glutaraldehdo, que se solicita al
laboratorio de Anatoma Patolgica con las instrucciones para la toma y fijacin de la muestra. Los
fragmentos deben ser pequeos y tienen que fijarse en forma de varios trocitos cuboideos de tejido
de no ms de 1 mm, obtenidos con hoja de afeitar o bistur limpios. Las muestras se incluyen en
resinas sintticas (Epon) y se practican cortes 10 veces ms delgados que los de microscopa de
luz llamados cortes ultrafinos. La tincin se realiza con sales de metales pesados como citrato de
plomo, tetrxido de Osmio o acetato de uranilo, que permiten un contraste adecuado del tejido bajo
el haz de electrones. Los cortes ultrafinos se montan sobre grillas de cobre, se tien y se observan
al microscopio electrnico. Para documentar los hallazgos es necesario obtener fotografas en
blanco y negro de las preparaciones. Las grillas, muestras, inclusiones y fotografas se guardan en
un archivo especial durante aos.
Microscopa electrnica de transmisin
En esta tcnica la preparacin teida es traspasada por un haz de electrones, lo cual proporciona
la imagen ultrafina sobre una pantalla ad hoc. El microscopio electrnico de transmisin es capaz
de generar un haz de electrones a alta tensin (80kV) y concentrarlo sobre la preparacin
mediante un complejo sistema de campos electromagnticos equivalentes a las "lentes" del
microscopio de luz.
La mayor utilidad de la microscopa electrnica de transmisin es en Oncologa. Es particularmente
til en el diagnstico de neoplasias malignas, ya que permite identificar la estirpe o diferenciacin
de una neoplasia. Por ejemplo, al demostrar elementos de diferenciacin no apreciables a
microscopa de luz como desmosomas, propios de clulas epiteliales, que orientan hacia
carcinoma; microvellosidades bien desarrolladas, que sugieren adenocarcinoma; melanosomas en
melanoma y grnulos densos rodeados por membrana en carcinoma neuroendocrino.
En conjunto con la inmunohistoqumica permite identificar un alto porcentaje de las neoplasias
malignas (95%). Igualmente, en el diagnstico diferencial de metstasis tumor maligno
indiferenciado en ganglio linftico (melanoma maligno, carcinoma, linfoma). En el frecuente dilema
adenocarcinoma versus mesotelioma maligno pleural; tambin en el diagnstico de la
granulomatosis de clulas de Langerhans.
Esta tcnica juega un papel muy importante en el estudio de las enfermedades del rin, en
particular en glomerulopatas primarias y secundarias. Junto con la inmunofluorescencia directa
representan el estudio bsico para llegar a un diagnstico preciso en cada caso.
Otras aplicaciones son la identificacin de partculas virales intranucleares y citoplasmticas.
Tambin en enfermedades metablicas para estudiar el tipo de inclusiones o cuerpos de inclusin
en las clulas afectadas (Niemann-Pick, Tay-Sachs, amiloide, etctera). En enfermedades

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ampollares de la piel es el nico mtodo para diferenciar variedades de epidermlisis bulosa

congnita.
En ciertas enfermedades respiratorias se ha detectado un trastorno importante del transporte
mucociliar. Ultraestructuralmente, se observan cilios con alteraciones en nmero y disposicin del
esqueleto ciliar microtubular y ausencia de los brazos internos de dinena y de las espculas
radiales del esqueleto microtubular constituyendo el llamado sndrome de cilios inmviles o
disquinesia ciliar. Estas anomalas representan un trastorno de carcter congnito y la microscopa
electrnica es el nico mtodo que permite hacer un diagnstico preciso en estos pacientes.
En muchos casos la informacin negativa, o sea la ausencia de algn carcter morfolgico
especfico, puede ser tambin muy til. El examen cuidadoso y la evaluacin de las caractersticas
ultraestructurales a la luz del cuadro clnico y la imagen histopatolgica al microscopio de luz y los
estudios inmunohistoqumicos, permiten un diagnstico de certeza en la mayora de los casos.
Microscopa electrnica de barrido
La microscopa electrnica de barrido permite el estudio de superficies celulares. La imagen se
obtiene rastreando la superficie de la muestra con un haz electrnico ultrafino. Las seales
generadas se recolectan, amplifican y captan en un tubo de rayos catdicos. Se utiliza en forma
rutinaria en el estudio de enfermedades del tallo piloso. En estas condiciones hay anomalas
estructurales y de superficie de los pelos, que pueden identificarse fcilmente con esta tcnica. De
esta forma, es posible incluso establecer un pronstico de reversibilidad de las alteraciones
utilizando esta tcnica.
Con respecto a un estudio citolgico?
El citodiagnstico, tambin llamado examen citolgico o simplemente citologa, es el diagnstico
morfolgico basado en los caracteres microscpicos de clulas y componentes extracelulares,
desprendidos de los rganos espontneamente u obtenidos por procedimientos que, en general,
son menos invasivos que la biopsia.
Objetivos del Citodiagnstico
1) Colaboracin en el diagnstico y tipificacin de neoplasias malignas, mediante la evaluacin de
las alteraciones de la morfologa del ncleo, del citoplasma y de las relaciones entre las clulas.
2) Diagnstico especfico de algunas lesiones benignas, por ejemplo: tumores benignos,
hiperplasias, ciertas infecciones virales o micticas.
3) Eleccin de pacientes que deben ser estudiados ms profundamente en grupos de alto riesgo
para un tipo especfico de cncer.
4) En hematologa, examen cualitativo y cuantitativo de los elementos figurados de la sangre
perifrica (hemograma) y de la mdula sea (mielograma).
Mtodos de Obtencin de la Muestra
1) Citologa exfoliativa
Se recoge material desprendido espontneamente o en forma inducida de las superficies de los
rganos. En la mayora de los casos, la toma de la muestra se hace recogiendo material de un
rea amplia, sin visin directa de una zona sospechosa, como se aprecia en los siguientes
ejemplos.
Muestra de mucosa crvico-vaginal, por raspado con esptula de madera.
Este es el examen citolgico ms usado. Se aplica en programas de deteccin de cncer del cuello
uterino, examinando mujeres asintomticas ("examen de Papanicolaou"). Las mujeres cuyo frotis
contiene clulas atpicas son luego sometidas a examen clnico dirigido del cuello y biopsia, para
confirmar si se trata de lesiones preneoplsicas o carcinoma infiltrante.
Muestra de lquido de una serosa aspirado con aguja, en caso de derrame (acumulacin
anormal de lquido) peritoneal, pleural o pericrdico.
Se utiliza para el diagnstico diferencial entre inflamacin y tumor maligno. Los tumores malignos
generalmente son metstasis de carcinoma en la serosa. El recuento de los diferentes tipos de
clulas en el lquido de las serosas y en el cfalorraqudeo es importante tambin para el
diagnstico diferencial entre procesos patolgicos benignos, por ejemplo: leucocitos polinucleares
neutrfilos, eosinfilos, monocitos, linfocitos.

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Muestra de superficie del peritoneo por lavado en una intervencin quirrgica para detectar
metstasis
Muestra de esputo, espontneo o inducido, o de lavado broncoalveolar.
Se utiliza para detectar carcinoma bronquial o bien infecciones especficas en pacientes
inmunodeprimidos (Pneumocystis carinii, hongos, alteraciones citopticas virales)
Muestra de orina obtenida por miccin espontnea.
Se usa como mtodo complementario para el diagnstico de cncer de la vejiga, en particular el
tipo plano, o para el control despus del tratamiento.
En otros casos, la toma de muestra se hace con ayuda de un instrumento que permite ver una
zona sospechosa, de la que se recoge material mediante cepillado o lavado. Se practica al
paciente una endoscopa, del rbol bronquial o del tubo digestivo. Al encontrar una zona
sospechosa de la mucosa, el mdico puede introducir un cepillo y obtener material para hacer un
frotis. Tambin puede lanzar un chorro de suero a la lesin y aspirar el lquido que contiene clulas
desprendidas. Con frecuencia el endoscopista tambin puede introducir una pinza y tomar una
pequea biopsia; en estos casos el examen citolgico es complementario de la biopsia.
2) Citologa por aspiracin con aguja fina
Se introduce en la lesin una aguja ms fina que las empleadas para biopsia. El corte por el filo de
la aguja y la aspiracin por la presin negativa que se produce dentro de ella desprenden un
lquido sanguinolento que contiene grupos de clulas; con este lquido se prepara el frotis.
Se pueden distinguir dos tipos de muestras por puncin aspirativa con aguja fina:
a) Puncin directa de lesiones superficiales palpables.
Generalmente la practica un mdico en el consultorio con una aguja fina corriente. Se usa
frecuentemente en casos de quistes y ndulos mamarios o tiroideos, para el diagnstico diferencial
entre lesin benigna y cncer. Otro ejemplo es la puncin de ganglios linfticos superficiales
(linfoadenopatas), como parte del diagnstico diferencial entre inflamacin, hiperplasia, linfoma o
metstasis.
b) Puncin de lesiones profundas no palpables, dirigida por imgenes.
Es realizada por mdico radilogo en paciente hospitalizado, utilizando agujas finas largas, de
diseos especiales. La puncin se practica bajo control de imgenes ecogrficas o de tomografa
computada. Se emplea en masas hepticas, pancreticas, pulmonares, mediastnicas o
retroperitoneales, para el diagnstico diferencial entre lesiones benignas y malignas.
Preparacin y Examen de la Muestra
El material obtenido por raspado, cepillado o puncin aspirativa se extiende sobre un portaobjeto
en forma de una delgada capa y se fija inmediatamente en alcohol de 96. Los lquidos (orina,
ascitis, material de lavado) se fijan con un volumen igual de alcohol de 50%; a continuacin se
centrifugan. Parte del sedimento se extiende sobre un portaobjeto. Los frotis o extendidos as
preparados se colorean con el mtodo de Papanicolaou o con hematoxilina-eosina. En
hematologa los frotis se secan al aire y se tien el mtodo de May-Grnwald- Giemsa y se
examinan al microscopio. En los laboratorios que procesan muchos exmenes, un citotecnlogo
hace un examen preliminar y marca las zonas del extendido que contienen clulas sospechosas
(screening); luego el patlogo examina dichos elementos y formula el diagnstico citolgico. Se
pueden guardar extendidos adicionales por si es necesario practicar mtodos auxiliares de tincin
para identificar elementos especficos como bacterias, hongos, o practicar reacciones de
inmunocitqumica. Se recomienda incluir en parafina los grumos de material o sedimento
sobrantes, para hacer cortes histolgicos que completan el examen citolgico ("blocks celulares").
Ejemplos de Diagnsticos Citolgicos
Examen citolgico negativo para clulas neoplsicas malignas
(Se observan elementos celulares compatibles con fibroadenoma)

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(Se observan estructuras micticas del gnero Candida)

(Se observa abundante exudado purulento compatible con peritonitis aguda)
Examen citolgico no concluyente
(Se observan atipias celulares sospechosas, pero no diagnsticas, de carcinoma; se sugiere
practicar biopsia)
Examen citolgico positivo para clulas neoplsicas malignas
(Alteraciones compatibles con carcinoma espinocelular)
(Alteraciones compatibles con metstasis de melanoma)
(Alteraciones compatibles con tumor maligno indiferenciado)
Muestra insuficiente para examen citolgico
Ventajas del Examen Citolgico
En comparacin con la biopsia, la toma de muestra citolgica es ms fcil, ms econmica y
menos cruenta. El procesamiento es tambin ms sencillo y el resultado se puede obtener con
ms rapidez. La muestra citolgica en general, abarca un rea mucho ms amplia que la de una
biopsia. En muchos casos permite detectar lesiones no visibles a ojo desnudo (Ejemplos: lavado
peritoneal, examen de Papanicolaou).
Limitaciones del Examen Citolgico
Para el diagnstico de tumores malignos, se basa fundamentalmente en los caracteres celulares
de malignidad (heterotipa); el extendido no permite ver directamente la distorsin de la
microarquitectura ni la invasin. En algunos casos es difcil distinguir entre caracteres citolgicos
de cncer y anaplasia de regeneracin. La aplicacin de tcnicas de inmunohistoqumica es ms
dificultosa que en los cortes histolgicos. Finalmente, es necesario destacar que un diagnstico
negativo para cncer no descarta la existencia de un tumor maligno, especialmente cuando ese
diagnstico no demuestra una lesin benigna especfica (tumor benigno, agente etiolgico de un
proceso infeccioso). Esta aseveracin es vlida para todos los mtodos de diagnstico.

En relacin al estudio inmunohistoquimico?

Corresponde a un grupo de tcnicas de inmunotincin que permiten demostrar una
variedad de antgenos presentes en las clulas o tejidos utilizando anticuerpos marcados.
Estas tcnicas se basan en la capacidad de los anticuerpos de unirse especficamente a
los correspondientes antgenos.
Esta reaccin es visible slo si el anticuerpo est marcado con una sustancia que absorbe
o emite luz o produce coloracin.
Corresponde a un grupo de tcnicas de inmunotincin que permiten demostrar una variedad de
antgenos presentes en las clulas o tejidos utilizando anticuerpos marcados. Estas tcnicas se
basan en la capacidad de los anticuerpos de unirse especficamente a los correspondientes
antgenos. Esta reaccin es visible slo si el anticuerpo est marcado con una sustancia que
absorbe o emite luz o produce coloracin.
En las tcnicas de inmunofluorescencia se utilizan como marcadores compuestos de fluorescena
que bajo luz ultravioleta emiten luz de longitud de onda visible, que depende de la naturaleza del
compuesto. El isotiocianato de fluorescena emite luz verde amarillenta intensa. Estas tcnicas
necesitan muestras en fresco y congeladas, sin fijacin convencional, pues los antgenos estn
presentes en superficies celulares o son muy lbiles a la fijacin en formalina. La
inmunofluorescencia directa, es decir con anticuerpos conjugados con fluorescena, se aplica
corrientemente en el diagnstico de las enfermedades cutneas en donde tiene indicacin y
utilidad muy precisas como en enfermedades ampollares, vasculitis y mesenquimopatas. Esta
tcnica pese a ser muy sensible, presenta inconvenientes como la falta de permanencia de la
fluorescencia, requiere de microscopa especializada y el detalle morfolgico es pobre. Para
documentar cada caso, es necesario fotografiar la reaccin.
En las tcnicas de inmunoperoxidasa se utilizan como marcadores enzimas capaces de hacer
cambiar de color un sustrato incoloro. Por ejemplo, las enzimas ms frecuentemente utilizadas son
peroxidasa y fosfatasa alcalina y los sustratos diaminobenzidina (color pardo), aminoetilcarbazol

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(color rojo) y nitroazul de tetrazolio (color azul). Estos marcadores pueden unirse (conjugarse)
directamente al anticuerpo primario o bien indirectamente mediante otros anticuerpos (secundarios)
o sustancias como biotina o protena A.
Las tcnicas inmunohistoqumicas enzimticas permite una localizacin ms precisa de las
reacciones, ya que la tincin es permanente, estable, puede contrastarse y puede ser evaluada
con microscopio de luz. El material as estudiado puede archivarse por aos sin prdida de la
intensidad de la reaccin. Los anticuerpos monoclonales han permitido aumentar la especificidad,
sensibilidad y gama de esta tcnica. Desventajas existen: presencia de reaccin inespecfica,
especialmente cuando se utilizan anticuerpos policlonales, algunos reactivos son potencialmente
carcingenos y su manipulacin debe ser cuidadosa, requieren estandarizacin precisa y estricto
control de calidad. Existen diversos tipos de tcnicas, cuya indicacin depender del anticuerpo a
utilizar (monoclonal o policlonal), material disponible (fresco, congelado o fijado en formalina) y
antgenos a estudiar (de superficie o membrana, citoplasmticos o nucleares).
Estas tcnicas necesitan de controles internos o paralelos, usualmente positivos y negativos. El
control negativo se obtiene realizando la misma tcnica, pero con omisin del paso de incubacin
con anticuerpo primario. Existen sistemas automatizados que permiten la tincin de un gran
nmero de casos simultneamente con la ventaja de pasos definidos y estandarizacin de las
variables usuales con costo relativamente bajo y en mucho menor tiempo.
La inmunohistoqumica tiene utilidad diagnstica en identificacin de diferenciacin y de
marcadores pronsticos de neoplasias (marcadores tumorales). Por ejemplo, es posible la
identificacin de los productos de oncogenes y de genes supresores de tumores con anticuerpos
monoclonales, especialmente contra c-erbB-2, bcl-2, p21, Rb1 y p53; la identificacin de
marcadores de diferenciacin como HMB-45 para melanocitos (melanoma), AE1 para carcinomas,
vimentina para sarcomas y CD45 para leucocitos (linfomas).
Un elemento importante a considerar es la ptima preservacin del tejido y por ende de los
antgenos. La mayora de los antgenos se conservan adecuadamente despus de la fijacin en
formalina e inclusin en parafina. Algunos son ms lbiles y slo se detectan en cortes de
congelacin.
Uno de los problemas actuales con estas tcnicas no es la tcnica en s, manual o automatizada, o
la posibilidad de acceder a los numerosos anticuerpos existentes, sino la interpretacin de los
resultados. Los errores de interpretacin disminuyen a nivel aceptable cuando el patlogo y sus
colaboradores tiene experiencia en estas tcnicas y los resultados se analizan a la luz de los
dems hallazgos clnico-patolgicos.
Biologa molecular aplicada a histopatologa
Este conjunto de tcnicas, que han sido tomadas tanto de la gentica molecular como de la
bioqumica, nos permite analizar fenmenos biolgicos y patolgicos en el nivel molecular. Al igual
que la microscopa electrnica y la inmunohistoqumica, estas tcnicas pueden aplicarse para
refinar el diagnstico en Anatoma Patolgica.
Pueden enumerarse las siguientes tcnicas: hibridacin in situ, reaccin en cadena de polimerasa
(PCR), in situ-PCR , anlisis de polimorfismo de fragmentos de restriccin, Southern blot, Western
blot y Northern blot. Todas las tcnicas mencionadas pueden aplicarse al material obtenido por
biopsia, autopsia e incluso muestras citolgicas.
La tcnica de Sotuer blot permite el anlisis de ADN genmico o fragmentos definidos de ADN
despus de digestin con endonucleasas de restriccin. La tcnica de Northern blot permite
estudiar ARN en forma anloga. El Western blot es una tcnica inmunolgica derivada, que se
utiliza para analizar antgenos proteicos. Las protenas se separan mediante electroforesis y se
transfieren a una membrana slida o membrana o filtro. La membrana se incuba con anticuerpos,
los que se detectan ulteriormente con sondas marcadas radioactivamente o con enzimas.

PATOLOGA | GENERALIDADES | Daniela Pinto