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Instituto Politcnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas


Laboratorio de Mtodos de Anlisis
Estudio de algunos factores que afectan el
establecimiento de un mtodo
espectrofotomtrico.
Profesora: Guillermina Rosas Sandoval
Alumno: Miranda Onofre Jos Manuel
Grupo: 4IV1
Fecha de entrega: 11 de abril de 2016

Estudio
de
algunos
factores
que
afectan
establecimiento de un mtodo espectrofotomtrico.

el

Fundamento.
La espectrometra es un mtodo qumico que se utiliza para cuantificar la
concentracin de analitos utilizando la luz. A los mtodos que se auxilian con la
luz para llevar a cabo un anlisis cuantitativo se le conoce como mtodos
espectrofotomtricos, estos pueden tener una sub-clasificacin dependiendo
de la longitud de onda que utilicen para el anlisis entre los ms conocidos
estn: espectrometra de absorcin visible (colorimetra), ultravioleta e
infrarrojo.
Para considerar a un mtodo espectrofotomtrico como cuantitativo primero
debe de cumplir ciertas reglas como:

El mtodo seleccionado deber ser especfico para cuantificar un analito


de nuestro inters.
Que el mtodo est libre de todas las interferencias posibles al momento
de hacer la determinacin o en su defecto tratar de controlar lo ms
posible estas interferencias.
Debe de tener alta precisin y alta exactitud.
El mtodo debe tener una alta sensibilidad y adems el lmite de
deteccin debe de corresponder a una concentracin baja.

Experimentalmente para el establecimiento de un mtodo espectrofotomtrico,


despus de optimizar las condiciones qumicas del sistema (pH, temperatura,
control de interferentes, concentracin adecuada de reactivos, solvente
apropiado, proteccin a la luz para evitar reacciones fotoqumicas, etc.) que
garanticen que se tiene la especie de inters en condiciones adecuadas para la
medida, se establecen los siguientes parmetros:
Longitud de onda analtica, intervalo ptimo de concentraciones, curva de
calibracin, sensibilidad del mtodo analtico y lmite de deteccin.

Objetivos.

Seleccionar tubos comunes de laboratorio para usarlos como cubetas


para el espectrofotmetro.
Manejar algunos de los parmetros que intervienen en el
establecimiento de un mtodo espectrofotomtrico.
Establecer las condiciones ptimas de los parmetros probados para la
aplicacin del mtodo.

Datos e informe experimental.


Resultados de la seleccin de tubos.
Para la seleccin de los tubos con paredes pticamente equivalentes se
tomaron 25 tubos, se llenaron 5 mL de agua y se midi su transmitancia a 400

nm, se seleccionaron 15 tubos que estuvieran entre el intervalo de 93-97 d


%T y que al rotarlos esta no cambiara de manera considerable.
A los 15 tubos seleccionados se les midi su %T a 400 nm con NiSO 4
Tabla 1. Seleccin de tubos comunes para usarlos como celdas.
Tubo No
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15

%T 400 (NiSO4 )
21.8
21.3
21.5
21.5
22.6
22
22.4
22.3
21.6
21.6
21.3
21.7
22.5
22.4
21.6

El dimetro interno equivalente hace referencia a que los tubos deben de tener
la misma medida de dimetro a lo largo del tubo para evitar
variaciones
en
los resultados, y superficies pticamente equivalentes se
refiere a que en la superficie del tubo debe de ser de tal manera que la luz
pase de manera homognea a travs de l, y del resto de los tubos.
Curva de calibracin.
Tabla 2. Curva de calibracin de Fe 3+ por el mtodo del NH4SCN.
Tubo No

Fe3+ (g/mL)

A480

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12

0,11634375
0,34903125
0,6980625
1,1634375
1,74515625
2,326875
2,90859375
3,4903125
4,07203125
4,65375
5,8171875
8,1440625

0,01772877
0,05948352
0,11463878
0,19314197
0,35556141
0,37468755
0,45717457
0,57675413
0,67366414
0,71896663
0,90308999
1,21467016

A ajustada por
regresin
lineal.
0,0734438
0,10553141
0,15366282
0,21783803
0,29805705
0,37827606
0,45849508
0,53871409
0,61893311
0,69915213
0,85959016
1,18046622

13

12,7978125

1,74472749

1,82221834

Grfica 1. Curva de calibracin.


f(x) = 0.14x + 0.06
R = 0.99

Para el ajuste de la absorbancia por regresin lineal se utiliza la ecuacin


obtenida con cada una de las concentraciones de Fe 3+.
Que nos diera como resultado una lnea recta nos indica que se cumple con la
ley de Bouger y Beer ya que se observa que la cantidad de luz absorbida es
directamente proporcional a la concentracin de la muestra por
medio de la ecuacin.
Mtodo de Ringbom para determinar el %Ep.
Tabla 3. Datos para aplicar el mtodo de Ringbom en la determinacin de Fe 3+
por el mtodo del SCN-.
Tubo No

Fe3+
(g/mL)

0,1163437
5

0,3490312
5

0,6980625

Log [Fe3+]
0,9342569
4
0,4571356
9
0,1561056
9

A480

%T

Absortan
cia

0,0177287
7

96

0,0594835
2

87,2

12,8

0,1146387
8

76,8

23,2

1,1634375

1,7451562
5

2,326875

2,9085937
5

3,4903125

4,0720312
5

10

4,65375

11

5,8171875

12

8,1440625

13

12,797812
5

0,0657430
58
0,2418343
17
0,3667730
54
0,4636830
67
0,5428643
13
0,6098111
02
0,6678030
49
0,7647130
62
0,9108410
98
1,1071357
43

0,1931419
7
0,3555614
1
0,3746875
5
0,4571745
7
0,5767541
3
0,6736641
4
0,7189666
3
0,9030899
9
1,2146701
6
1,7447274
9

64,1

35,9

44,1

55,9

42,2

57,8

34,9

65,1

26,5

73,5

21,2

78,8

19,1

80,9

12,5

87,5

6,1

93,9

1,8

98,2

Grfica 2. Grfica de Ringbom

El intervalo de concentracin elegido se basa en la parte de la grfica donde se


puede observar un comportamiento lineal el cual es desde 1,1634375 a
4,07203125 g/mL. Estas concentraciones corresponden a los valores de A de
0,19314197 a 0,67366414.
Para el porcentaje de error fotomtrico (%Ep) se utiliz la siguiente formula:

%Ep=

230.3
pendiente

Donde la pendiente corresponde al tramo donde la curva presenta un


comportamiento lineal.
Sustituyendo nos da el siguiente valor:

%Ep=

230.3
=3.11
73.908

Efecto del tiempo en la estabilidad del color.


Tabla 4. Estabilidad del color respecto del tiempo.
Tiempo (min)
0
30
60
90
120

A480
0.550
0.482
0.456
0.423
0.399

Grfica 3. Estabilidad del color respecto del tiempo

Como se puede observar el color no es estable a lo largo del tiempo por lo que
las lecturas se deben hacer inmediatamente despus de haber agregado el
NH4SCN.
Efecto de la concentracin del cromgeno.
Tabla 5. Efecto de la concentracin de SCN- en la determinacin de Fe 3+.

SCN(g/mL)
290,412
871,236
2904,12
5808,24
8712,36
11616,48
14520,6

Tubo No
1
2
3
4
5
6
7

Fe3+ (g/mL)

SCN-/Fe3+

A480

4,188375
4,188375
4,188375
4,188375
4,188375
4,188375
4,188375

69,3376309
208,012893
693,376309
1386,75262
2080,12893
2773,50524
3466,88155

0,24033216
0,40011693
0,54515514
0,62525165
0,65560773
0,69250396
0,74472749

Grfica 4. Concentracin del cromgeno

En este caso como se puede ver en la grfica falta un poco ms para alcanzar
el punto de saturacin pero la mejor concentracin que se puede usar segn la
grfica es 14520,6 g/mL.
Efecto del pH en el desarrollo de la reaccin entre el Fe 3+ y el SCN- .
Tabla 6. Efecto del pH.
Tubo No
1
2
3
4
5

pH
1
2
3
7
9

A480
0.892
0.926
0.919
0.026
0.037

Grfica 5. Efecto del pH

Como se puede observar a pH alcalino la reaccin pierde color y registra


absorbancias bajas.
Efecto de algunos aniones sobre la absorbancia absoluta.
Tabla 7. Efecto de algunos aniones en la reaccin Fe 3+ - SCN-.
Anin
Fluoruro
Oxalato
Tartrato
Fosfato

A480 inicial
0.899
0.899
0.899
0.899

A480 final
0.317
0.130
0.867
0.844

A480
0.582
0.769
0.032
0.055

Lo que se puede observar es una competencia entre algunos aniones, como el


fluoruro o el oxalato por el hierro. Ya que el fluoruro al ser muy electronegativo
se ve atrado por las cargas positivas del hierro, y el oxalato tiende a formar un
nuevo complejo de tres molculas de oxalato por un catin frrico.
Parmetros obtenidos para el mtodo sulfocianuro de amonio para determinar
fierro frrico.
Parmetro
pH
Tiempo
Concentracin de SCNLmites de concentracin con
%Ep mnimo

Valor optimo
2
Inmediatamente despus de agregar
el cromgeno.
14520,6 g/mL.
1,1634375 a 4,07203125 g/mL y

3.11

Aniones que interfieren (orden


creciente)
Lmite de deteccin del mtodo
(LDD)

Tartrato, Fosfato, Fluoruro y Oxalato


1.0288 g/mL

Calculo de lmite de deteccin del mtodo.


El lmite de deteccin del analito se puede definir como la concentracin de
analito que proporciona una seal igual a la seal del blanco ms tres veces la
desviacin estndar del blanco. Esto nos sirve para calcular la
concentracin
mnima
de analito que puede detectar nuestro mtodo
espectrofotomtrico.

LDD=

3 Sb
m

Donde Sb es la desviacin estndar del blanco y m es la pendiente de la curva


tipo.

y ^
yi 2

Sb=
LDD=

3 ( 0.04729 )
g
=1.0288
0.1379
mL

Discusin.
Como se puede observar hay diversos factores que se deben tomar en cuenta
para la implementacin de un mtodo espectrofotomtrico, lo primero es la
seleccin de las celdas que como ya vimos, deben ser pticamente
equivalentes y de dimetro interno equivalente ya que si no cumplen con estos
requisitos puede provocarse luz parasita lo que afectara en las lecturas de
absorbancia y transmitancia.
Otro factor que afecta en este tipo de mtodos es el tiempo de duracin del
producto colorido, porque no se sabe con exactitud si el reactivo que se va a
producir es estable en un periodo largo de tiempo, en el caso se la reaccin
que se llev a cabo nos pudimos dar cuenta que esta es muy poco estable por
lo que a los pocos minutos el color de la reaccin comenzara a decaer
dndonos falsos negativos por lo que se debe realizar la lectura
inmediatamente despus de comenzar la reaccin.

La concentracin del cromgeno es otro factor que tambin hay que tomar en
cuenta ya que de este depende que haya una mxima absorbancia, adems de
que si se agrega mas esta absorbancia no cambiara por lo cual se estara
desperdiciando reactivo. Debido a esto es importante saber el punto de
saturacin.
El pH tambin afecta a la reaccin por lo cual hay que saber en cual se
desempea mejor la reaccin, en nuestro caso pudimos darnos cuenta que la
reaccin se debe llevar a cabo en un pH acido de alrededor de 2 porque en pH
alcalino el cromgeno (SCN-) se neutraliza evitando la reaccin con el ion Fe 3+
haciendo que no haya desarrollo de color y por lo tanto nos de falsos
negativos.
Y por ltimo pudimos notar que la presencia de cierto aniones en la reaccin
hacen que esta se modifique e intervenga con el desarrollo de color, en este
caso se us tartrato de sodio, fluoruro de sodio, oxalato de sodio y fosfato de
potasio. Lo que se pudo observar es que el tartrato y el fosfato casi no
interfieren en la reaccin pero el fluoruro y el oxalato si, esto es porque el
hierro es mas a fin con el fluoruro debido a su alta electronegatividad y al
oxalato porque forma compuestos de coordinacin lo cual hace que haya una
competencia entre los iones y el SCN - para unirse con el hierro.

Conclusin.
Para un buen establecimiento de un mtodo espectrofotomtrico es necesario
elegir inicialmente tubos con superficies pticas equivalentes y dimetros
similares, al igual que controlar variables como pH, tiempo, concentracin de
analitos y presencia de interferencias. Adems de que debe realizarse un
amplio estudio del elemento a analizar y ver si este mtodo es el mejor para l.

Bibliografa.
D.A. Skoog, J.J. Leary, 1994, Anlisis Instrumental, McGraw-Hill, 4ta. Edicin,
Apndice 1.
Torres Cartas Sagrario, Gmez Benito Carmen. Tcnicas instrumentales.
Manual de Laboratorio. Editorial Universidad Politcnica de Valencia. pp. 6061.