El Anlisis Qumico Toxicolgico

Intoxicacin debe fundamentarse

parmetros analticos.

en

la

valoracin

de

Los datos obtenidos mediante el anlisis qumico de la

sustancia: en medios biolgicos (fluidos orgnicos, tejidos) y
otros (bebidas, alimentos, etc.).
Los mtodos qumico-analticos, es aportar datos que
contribuyan a comprender la sintomatologa y dictaminar el
diagnstico clnico.
En la prctica todo diagnstico toxicolgico se basa en:
Observacin de los sntomas.
Evaluacin de las funciones fisiolgicas, conseguidas a
travs de la experimentacin con animales, ensayos
inmunolgicos y anlisis qumicos.
La analtica toxicolgica, est orientada a detectar
vestigios del txico y/o sus metabolitos

Caractersticas del Procedimiento Analtico

Toma y preparacin de la muestra.

Eleccin de la tcnica analtica.
Medidas para eliminar las posibles interferencias.
Separacin y purificacin del analito problema.
Identificacin y valoracin del analito.
Lmite de deteccin,
Deben aplicarse Mtodos Normalizados, aquellos que
cumplen con factores de calidad que garantizan la
fiabilidad de sus resultados: especificidad, exactitud,
lmite
de
deteccin,
precisin,
repetibilidad,
reproductibilidad, seguridad y sensibilidad.
En resumen dos propiedades importantes:
Sencillez en el manejo de las muestras.
Rapidez en aportar resultados

Objetivos del Anlisis Qumico Toxicolgico

Deteccin y cuantificacin de aquellos xenobiticos que

se encuentran a niveles de vestigios o trazas.
Caracterizacin de las formas qumicas bajo las que se
encuentra la estructura del xenobitico.
Reconocer aquellos metabolitos producidos en su
biotransformacin.
Esclarecer la presencia de txicos ignorados

Significacin de los Resultados

Factores que impiden la atribucin de un carcter absoluto, o
definitivo,

a) El txico no se detecta en la muestra, porque ya fue

eliminado cuando sta fue tomada.

b) Deficiencias inherentes a la metodologa analtica, que

dan lugar a la destruccin del txico.
c) Escasa sensibilidad de la tcnica.
d) Interferencias ocasionadas por otras sustancias.
En la correcta interpretacin de los resultados
a) Aspecto metodolgico, posibles limitaciones de las
tcnicas, imprecisiones, interferencias.
b) Aspecto analtico, correlacin significativa entre los
datos numricos y el fenmeno txico.
c) Aspecto fisiolgico, existencia de una relacin entre las
alteraciones detectadas y alguna patologa concreta.
d) Aspecto clnico

Pruebas Analticas y Prevencin del Riesgo Txico

No siempre resulta factible evitar el contacto de los txicos con el
ser vivo.
La toxicologa trata de:

a) Salvaguardar la salud publica.

b) Estudiar las perturbaciones funcionales ocasionadas, a
fin de detectarlas antes de que alcancen niveles txicos.

Las pruebas analticas permiten establecer un diagnstico

Las estructuras xenobiticas, primarias o secundarias,

dan lugar a interferencias metablicas, manifiestas por
perturbaciones funcionales, detectables en los anlisis
de orina, sangre y aire espirado.
Es importante tambin la valoracin de tales sustancias
en los diferentes tejidos del organismo vivo: CAUSA

Posibilidades de actuacin de un Xenobitico

Ambiental

Esquema de la metabolizacin y eliminacin del

benceno

Pruebas Analticas y Prevencin del Riesgo Txico

Triple actuacin analtica:
Investigacin
xenobitico.

valoracin

de

la

estructura

primaria

del

Investigacin de los metabolitos en los medios biolgicos.

Caracterizacin de las perturbaciones observadas, que darn idea
acerca de ciertas lesiones bioqumicas

Mtodos Experimentales de Evaluacin de la

Toxicidad
Dependen de dos factores:
a) Del uso que vaya a tener el compuesto
(medicamentos, aditivos alimentarios,
compuestos de uso industrial).
b) De su importancia econmica, por ejemplo
preparaciones de uso domstico.
Primer Grupo, ensayos diseados para evaluar efectos
globales de los qumicos.
a) Pruebas de toxicidad
DL , DL
y DL
.
01
50
100

aguda,

permiten

determinar

b) Ensayos de toxicidad subcrnica, abarcan la dcima

parte del tiempo vital del organismo. Varias tomas
regulares o irregulares. Ponen de manifiesto posible
acumulacin del txico.
c) Estudios crnicos de toxicidad a largo plazo, abarcan
2/3 de la vida del animal. Ponen de manifiesto algunas
formas de toxicidad, sugieren pruebas complementarias.

d) Estudios bioqumicos, informan sobre

transformaciones
metablicas
e
identificacin
de
metabolitos.
Segundo Grupo, permiten prever algn aspecto especfico y
concreto de la toxicidad causada por cierto agente.
a) Estudios sobre funciones de reproduccin, evala
efectos embriotxicos, antes, durante y despus
del periodo embrionario.
b) Estudios sobre potencialidades mutagnicas,
incidencia sobre el genoma.
c) Estudios sobre carcinogenicidad, desarrollo de
tumores.
d) Estudios sobre comportamiento, manifestaciones
neurotxicas de algunos compuestos.
e) Estudios inmunolgicos, alteraciones del sistema
inmune.
f) Estudios sobre efectos de potencializacin, la
toxicidad se ve incrementada en ciertos estados
(alcoholismo, hipopproteinemia, etc).

Criterios sobre el Diseo de la Experimentacin

Toxicolgica
Las propiedades moleculares de las sustancias a ensayar.
Especies animales a elegir.
Dosis a ensayar y vas de administracin.
Duracin de la experiencia.
Otros factores importantes:
Naturaleza y pureza del compuesto en estudio.
Disponibilidad de mtodos analticos adecuados.
Comprobar la estabilidad del compuesto si va ha ser
administrado en dosis repetidas.
Solubilidad del compuesto (agua y suero fisiolgico),
(aceite vegetal, propilnglicol).
Tamao del animal elegido, limita el volumen
requerido para administrar cierta dosis.

Estudios de Toxicidad Aguda

No deben considerarse como estudios de letalidad, diseados
para determinar la dosis mortal.
Actualmente permiten caracterizar los efectos agudos del
compuesto (rganos diana, signos clnicos, datos de
intoxicacin).
Deben aplicarse a todos los compuestos qumicos de inters
biolgico.
Se administra una sola toma en dosis crecientes: actividad
txica y nivel de letalidad.
Observacin sintomatolgica no sobrepasa los 14 das.
Especies: ratn y rata, si se trata de evaluar la dosis mxima
tolerada: conejos, perros, primates.
Tipos de efectos observables: sensibilidad al dolor, sonido,
tacto,
alteraciones
de
la
actividad
refleja,
del
comportamiento, respiracin, defecacin, SNC, etc. Examen
macro y microscpico durante y despus de la autopsia.

Estudios de Toxicidad Subcrnica o Prolongada

la administracin diaria de dosis para reconocer y valorar los
efectos producidos por una exposicin peridica.
Debe elegirse dos especies animales: ratas o
ratones, perros o monos, en base a ello la duracin
de las pruebas oscila entre 14 das y tres meses
(1/10 parte de la vida de los animales).
La va de administracin debe ser cuidadosamente
elegida.
Es imprescindible la observacin semanal del estado de salud
de los animales:
estado general, comportamiento, alimentacin,
peso.
Pruebas hematolgicas: leucocitos, hematocrito,
Hb., etc.
Pruebas bioqumicas: Na, K, Cl, Ca, protenas, N
ureico, transaminasas, etc.
Pruebas de orina: pH, densidad, sedimentos,
bilirrubina, etc.
Localizacin y distribucin del
xenobitico/metabolitos: en diferentes rganos, por
fluorescencia, autorradiografa, etc.
Pruebas de sensibilizacin y adiccin: reacciones
alrgicas.
Necropsia de todos los animales al final del estudio,
peso de rganos, anlisis histopatolgico de rganos
y tejidos.

Estudios de Toxicidad a Largo Plazo o Crnica

Durante

Datan sobre los efectos resultantes

de la
administracin diaria de un compuesto qumico, aun
a dosis reducidas, por un largo periodo de tiempo.
determinar la toxicidad que requiere un largo
periodo de latencia.
Permiten detectar afecciones cardiacas o renales
relacionadas con la edad.
Duracin entre 2 y 7 aos.
La va de administracin debe ser la misma a la que
podra someterse el ser humano.
todo el ensayo se controla peridicamente:
Peso corporal y examen fsico cada semana.
Pruebas analticas de sangre y orina cada 3-6 meses.
Test funcionales a intervalos de 3-6 meses.
Sacrificio
frecuente
de
algunos
animales,
verificacin de lesiones histopatolgicas y evolucin
en el tiempo.

Introduccin a la Ciencia
Toxicolgica
Relaciones Efecto-Dosis-Tiempo
En la prctica se manejan dos conceptos de efecto txico:
Efecto txico gradual, que aumenta de modo progresivo
con el incremento de la dosis hasta llegar a una dosis en la
que se alcanza el efecto mximo . Aparece en estudios in
vitro sobre rganos aislados, tejidos o clulas
Ej. Tasa de crecimiento, peso de rganos, presin
sangunea, glicemia, etc.
Efecto txico cuntico, un individuo puede manifestar
una alteracin, que ser la mxima posible o no presentar
modificacin alguna.

Representaciones de la Relacin Dosis Efecto

Debido a la variabilidad biolgica las curvas dosisrespuesta de letalidad suelen mostrar una distribucin
normal.
Si se efecta una representacin acumulativa de
frecuencia, se obtiene curvas sigmoideas en las que
fcilmente se reconoce la DL
50.

Representacin Grfica de las Relaciones DosisRespuesta en una Distribucin Normal de la

Frecuencia de la Mortalidad y en una Acumulativa

Relaciones Efecto-Dosis-Tiempo
Para calcular las dosis letales, se trabaja con un nmero suficiente de
animales a fin de que los resultados sean aceptados.
De esta manera se pueden calcular:
a. Dosis letal absoluta (DL100), mnima cantidad desustancia
capaz de provocar la muerte de todos los animales del grupo
ensayado.
b. Dosis letal 50 (DL50), cantidad de sustancia que mata al 50% de
la poblacin.
c. Dosis letal mnima (DL
), menor cantidad de sustancia capaz
01
de provocar la muerte de algn animal en el grupo experimental.
d. Dosis umbral (Du), nivel de sustancia debajo del cual no deben
aparecer efectos nocivos.

Relaciones Efecto-Dosis-Tiempo
Para indicar la potencia de cualquier tipo de txico, se utiliza una
escala de valores basada en la DL

50

Patrones de Referencia sobre la

Peligrosidad de una Sustancia
1. Extremadamente txico

2. Altamente txico

3. Moderadamente txico

de la sustancia

DL 50
< 1 mg/Kg
1 - 50 mg/Kg
50 - 500 mg/Kg

4. Ligeramente txico

0.5 5 g/Kg

5. Prcticamente no txico

5 15 g-Kg

Si se trata de cuantificar la magnitud del efecto txico, se

debe considerar el Tiempo de Exposicin.
En intoxicaciones agudas, dosis alta y nica, genera
efectos inmediatos y graves.
En intoxicaciones crnicas, dosis pequeas, acumulativas,
dan lugar a efectos tardos.
Periodo de latencia, tiempo transcurrido desde la exposicin
hasta la aparicin de sntomas
La DL

resulta insuficiente para estimar la toxicidad de

50
una sustancia ante una exposicin crnica.
La DL
actualmente slo se usa referencialmente y su
50
determinacin es til para calcular otros parmetros toxico
mtricos

Clasificacin para Evaluar la

Sustancia

Potencialidad de una

Potencialidad

CATA

CATC

1. Sumamente
txica

<6

> 10,0

2. Muy txica

< 18

> 5.0

3.
Moderadamente
txica

< 50

> 2,5

4. Ligeramente
txica

> 50

< 2,5

 Coeficiente de accin txica aguda (CATA)

CATA = DL50
Du
Coeficiente de accin txica crnica (CATC)
CATC = Du (nica exposicin)
Du ( exposicin frecuente)

Selectividad, Sensibilidad y Margen de Seguridad

Selectividad, se refiere a la actuacin preferencial de la
sustancia txica sobre ciertos tipos de clulas o sistemas
biolgicos.
Sensibilidad, diferente capacidad de respuesta de los
organismos vivos a una determinada sustancia txica
(Grupos normales, hiposensibles, hipersensibles).
Margen de seguridad, est determinado por dos
extremos en las dosis administradas: Dosis inocua (Di) y
Dosis letal (DL).
Respuestas de Individuos Normales (A), Hiposensibles (B) e
Hipersensibles (C) en una Representacin Grfica DosisRespuesta

Representacin Grfica de Mrgenes de Seguridad

para las Sustancias A, B y C

Margen de Seguridad
En la toxicologa ambiental y en la alimentaria
Se emplean dos parmetros importantes:
a. Ingesta diaria admisible (IDA), mxima cantidad que
diariamente puede ingerirse de un aditivo dentro de la
alimentacin, sin que aparezcan efectos nocivos.
b. Valor umbral lmite (VUL), concentracin de un agente al que
un organismo vivo puede estar sometido durante 8 hrs.
diarias y 5 das por semana, sin que esto dae su salud.

Factores Moleculares que influyen en la Toxicidad de

una Sustancia
Coeficiente
fisicoqumica
miscibles.

de
reparto
lpido/agua:
medida
de su distribucin entre dos disolventes no

Constante y grado de ionizacin: el pH del medio as como el pK

a
de la sustancia txica, determinarn la magnitud de las
fracciones ionizadas o no ionizadas
Accin catropa o desestabilizacin de membrana: efecto
disruptivo del estado normal de la membrana celular, que consiste en
la integracin de ciertas sustancias qumicas dentro de la estructura
de las membranas biolgicas, con lo que modifican su funcionalidad.
Puede ser reversible o irreversible
Afinidad
por
algunos
compuestos
celulares:
algunos
xenobiticos poseen afinidad por compuestos tisulares, esto facilita
su transporte.
Accin quelante: formacin de un complejo qumico con un agente
quelante, bloqueando as la actividad biolgica del xenobitico.
Particularidades
estructurales:
algunas
caractersticas
estructurales de familias de compuestos ponen de manifiesto su
actividad txica: