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UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO

VILLARREAL

FACULTAD: CIENCIAS NATURALES Y MATEMATICA


ESCUELA: QUIMICA
CURSO: INVESTIGACION QUIMICA I
PROFESOR: BARRETO YAYA, DANILO ARTURO

Extraccin de saponina en Cucumis dipsaceus


Ehrenberg ex Spach y evaluacin de su actividad cicatrizante
PROYECTO:

TRABAJO: OBJETIVOS, HIPOTESIS Y METODOLOGIA


ALUMNO: MIGUEL OCTAVIO MORALES CENTENO

Investigacin Qumica
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1.
2.
3.
4.
5.

6.

7.
8.

9.
10.
11.
12.

RESUMEN
INTRODUCCION
OBJETIVOS
3.1. OBJETIVO GENERAL
3.2. OBJETIVO ESPECIFICO
HIPOTESIS
CLASIFICACION BOTANICA
5.1 UBICACION SISTEMATICA DE LA ESPECIE CUCUMIS
DIPSACEUS
5.2 HABITAT
5.3. USOS POPULARES
SAPONINAS
6.1. CONCEPTO
6.2. IMPORTANCIA DE LAS SAPONINAS
6.2.1 ACCIONES FARMACOLGICAS
CICATRIZANTE
PARTE EXPERIMENTAL
8.1. MATERIALES, APARATOS Y REACTIVOS
8.2. PREPARACION DE LA MUESTRA, CARACTERISTICAS Y
VALORACION.
8.2.1. PREPARACION DE LA MUESTRA
8.2.1.1. RECOLECCION
8.2.1.2. ESTABILIZACION
8.2.1.3. MOLIENDA
8.3.2. EXTRACCION DE SAPONINAS
8.3.2.1. EXTRACCION ETANOLICA
8.3.2.2. DESENGRASADO Y DESPIGMENTACION
8.3.2.3. EXTRACCION BUTANOLICA
8.3.2.4. ENSAYO DE RECONOCIMIENTO
8.3.2.5. ANALISIS CROMATOGRAFICO
RESULTADOS
DISCUSIONES DE RESULTADOS
CONCLUSIONES
BIBLOGRAFIA

ndice de figuras

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Figura
N1
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Figura
N2
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Figura
N3
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Figura
N4
25
Figura
N5
.26
Figura
N6
.27
Figura
N7
.27
Figura
N8
..28
Figura
N9
..29
Figura
N10
30

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Figura
N11
31
Figura
N12
31
Figura
N13
32
Figura
N14
33
Figura
N15
33
Figura
N16
34
Figura
N17
.35
Figura
N18
.38
Figura
N19
.33

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1. RESUMEN

Se ha realizado el estudio del Cucumis dipsaceus, planta originario de la


regin del Merriteraneo y Oceana; debido al uso comn que brinda a los
pobladores de la Costa, Sierra y Selva, quienes usan el fruto como
detergente para el lavado de cabello, ropa; como tambin actividad
farmacologica. Esta es materia de investigacin el estudio farmacolgico
de la planta, obteniendo las saponinas a las que se debe el efecto
cicatrizante y antiinflamatorio.
El uso popular que se le dio al boliche al Jaboncillo de campo, vuelve a
tomar relevancia en Cucumis dipsaceus, del que a travs de la tcnica
de extraccin etanolica, desengrasado y dispegmentada con ter de
petrleo, de la extraccin butanolica y de la deshidratacin con sulfato
de sodio anhidro, se obtuvo un slido y mediante la tcnica de
coloracin,

formacin

de

espuma

se

demostr

la

presencia

de

saponinas, adems con el reactivo de salkowski y el reactivo de


Lieberman burchard he podido demostrar que tipo de saponinas
triterpenicas o

de tipo esteroides se encuentra en muestra , luego

realice cromatografa de capa fina, capa preparativa columna (CC), lo


cual va a purificar

la muestra y obtener el principio activo que nos

interesa como es la saponina para su posterior lectura por el

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espectrofotometro Infrarrojo y UV-visible para poder confirmar la
presencia de saponina, presente en el fruto de Cucumis dipsaceus.
2. ANTECEDENTE

Las plantas medicinales constituyen unos de los principales recursos


teraputicos tanto en el medio rural como en el suburbano, siendo los
tradicionales la nica alternativa mdica para la casi toda la poblacin
peruana. Esto es debido a que como bien se ha documentado, las
plantas medicinales juegan un papel importante en la salud humana,
principalmente en regiones donde todava se conserva su prctica y su
uso milenario. El conocimiento medico tradicional se trasmite y se
conserva mediante tradicin oral y son los etnobotanicos y mdicos
tradicionales los principales recopiladores de dicho conocimiento. Sin
embargo es importante tener cuidado en la desaparicin de diversas
plantas, si como el conocimiento que solo lo manejan las personas
mayores que resguardan el saber de las plantas medicinales (Osuna et
al..2005).
Las plantas han sido siempre una buena fuente de alimentos y la
medicina y la relevancia de los productos a base de plantas ha ganado
mucho inters debido a su nutracutico propiedad con menos efectos

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secundarios. Los efectos de nutrientes son dosis - dependiente y la
escasez se llaman deficiencias (Audrey, 1994)
Las plantas medicinales se han utilizado para tratar una gran variedad
de enfermedades como la diabetes, cncer, artritis, enfermedades
infecciosas, tumores, heridas entre otras. Debido al inters del presente
a continuacin describiremos investigaciones realizadas con plantas
medicinales y su efecto cicatrizante.
Uno de los cicatrizantes naturales ms estudiados es el rbol conocido
como Sangre de Grado,Croton lechleri L. (Euphorbiaceae) crecido en la
jungla Peruviana. Diversos estudios In vivo e in vitro demuestran dicho
efecto, siendo el alcaloide taspina identificado como el responsable de
dicho evento. Algunos de los estudios que validan esto son el realizado
por Vaisberg et al.(1989), donde evalu al alcaloide en fibroblastos de
piel

humana

diferentes

concentraciones

tiempos

sobre

su

proliferacin y toxicidad.

En cuanto a la planta Peperomia galioides H.B.K. (Piperaceae), conocida


como congolona, es una planta suculenta utilizada en forma de
compresa, aplicada en cortadas y heridas para acelerar la cicatrizacin.
Trabajos realizados por Hammond et al. (1997) demostraron que el
extracto etanolico in vivo acelera el proceso de cicatrizacin.

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En tanto que Juana QUE? ,et al.(2004), elaboraron una crema hecha a
base del extracto etanlico de cera de caa, que es un producto natural
derivado de la industria azucarera compuesto por alcoholes superiores,
cidos grasos y fitoesteroles; la cual fue evaluada en diferentes
concentraciones que van de 2.5 a 40% del extracto sobre heridas
hechas en la regin escapular de ratones, utilizando como control
positivo a la crema de pantenol al 5%; las aplicaciones se realizaron
diariamente de manera tpica durante un periodo de 21 das.
As mismo, el extracto acuoso de la hoja de Alcalypha langiana Muell.
(Euphorbiaceae), es una hierba que crece en Mxico y es conocida
comnmente como arlomo, fue evaluado mediante experimentos de
cicatrizacin de heridas producidas quirrgicamente (incisin) y por un
rasguo profundo (excisin) en animales de experimentacin (ratas
Wistar).
En tanto la planta Anredera diffusa (Bassellaceae), conocida como Lloto,
es usada tradicionalmente para lavados de heridas externas en Per. Un
estudio preliminar del extracto etanolico de hojas frescas y tallos de
dicha planta demostr tener una actividad cicatrizante del 37% en
ratones con heridas de tipo incisin a una concentracin de 25 mg/ml.
Sin embargo, este extracto fue hidrolizado en una mezcla de cido
sulfrico y tolueno para eliminar todos los glucsidos y fue aplicado en
ratones a una dosis de 4 mg/ml y observndose que su actividad
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cicatrizante no se perdi. Posteriormente, el extracto hidrolizado se pas
por una cromatografa con tolueno, en donde se obtuvo al cido
oleanlico (triterpeno pentacclico), el cual fue probado de la manera
antes mencionada, mostrando una actividad cicatrizante del 42.9%, en
tanto que el control que fue el terpeno +-aminol a una concentracin de
50 mg/ml fue del 17.6%. Estos datos sugieren que el cido oleanlico
obtenido de la planta A. difusa es el metabolito responsable de la
actividad cicatrizante, por lo que fue comparado con cido oleanlico
comercial de Sigma-Aldrich, con el cual se observ que la mayor
actividad cicatrizante (39.3%) se present con una concentracin de 40
g/Kg/peso de ratn (Moura-Letts et al., 2006)
As mismo, Buddleja globosa (Buddlejaceae), conocida comnmente
como mtico, especie nativa de Chile, Per y Argentina, presenta
tambin propiedades cicatrizantes. Esto debido a que la infusin de sus
hojas es usada en forma tpica para el tratamiento de heridas,
quemaduras y lceras externas e internas. La evaluacin farmacolgica
de extractos seriados obtenidos a partir de sus hojas ha permitido
demostrar las propiedades antiinflamatoria, analgsica, cicatrizante y
antioxidante de los extractos hexnico, diclorometano y metanlico
resultando ms activos los dos ltimos .Del extracto hexnico se ha
aislado una mezcla de y amirinas como sus componentes
mayoritarios. Del extracto bioactivo de diclorometano se ha aislado una
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mezcla de esteroides siendo el glucsido de -sitosterol el ms
abundante, junto con estigmasterol, estigmastenol, estigmastanol,
campesterol y -sitosterol. Los feniletanoides y flavonoides fueron los
compuestos ms abundantes del extracto metanlico, en especial
verbascsido, 7-O-glucsido de luteolina, quercetina, 7-O-glucsido de
apigenina siendo los dos primeros los mayoritarios (Backhouse et al.,
2008)

En resumen la cicatrizacin que se ve favorecido con el empleo de


algunas plantas con accin astringente (plantas con taninos), antisptica
(plantas con esencia) y antiinflamatoria (plantas con taninos, muclago,
azuleno) o bien con aquellas que contienen sustancias como la alantona
o el asiaticsido que favorecen la regeneracin epitelial. Ya que por
ejemplo, los taninos son de gran utilidad en la curacin de heridas y
cuidado de la piel al cicatrizar, en detener el sangrado e impedir el
desarrollo de bacterias, etc., debido a su actividad astringente. En el
tratamiento de quemaduras, los taninos hacen que las protenas de los
tejidos

expuestos

se

precipiten,

formando

una

capa

protectora

ligeramente antisptica debajo de la cual se lleva a cabo la regeneracin


de tejido (D a
melio, 1999).
En Brasil, la planta Chamomilla recutita L . Rauschert , pertenece a la
familia Asteraceae y es una de las plantas ms usadas en este pas. Un
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anlisis comparativo entre esta planta y diferentes corticoesteroides:
como el propionato de clobetasol y la acetonita de triamcinolona (uno de
los

tratamientos

para

el

control

de

lceras

enfermedades

inflamatorias), en la cicatrizacin demostr en un modelo de ratones que


el proceso de cicatrizacin era ms rpido en el grupo de ratones
tratados con C. recutita (5 das) que con el corticoesteroide (14 das)
(Domnguez et al., 2008).

3. OBJETIVOS
Objetivo general
Aislar e identificar cualitativamente saponina en la de
la especie vegetal Cucumis dipsaceus Ehrenberg ex
Spach.
Objetivo especifico

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Determinar la factibilidad de la actividad cicatrizante
del

extracto

del

fruto

del

Cucumis

dipsaceus

Ehrenberg ex Spach en la industria farmacutica.


Evaluar la actividad cicatrizante en el extracto del
fruto del Cucumis dipsaceus Ehrenberg ex Spach.
4. HIPOTESIS
Las saponinas presentes en el fruto de Cucumis dipsaceus
Ehrenberg ex Spach presentan efectos cicatrizantes.

5. CLASIFICACION BOTANICA
5.1 UBICACION SISTEMATICA DE LA ESPECIE CUCUMIS
DIPSACEUS
Reino

Plantae

Divisin

Magnoliophyta

Clase

Equisetopsida

Orden

Cucurbitales

Familia

Cucurbitaceae

Gnero

Cucumis

Especie

dipsaceus

Nombre cientfico

Cucumis dipsaceus

Familia:
Las cucurbitaceae son hierbas perennes, trepadoras, rastreras
y el tallo usualmente anguloso, viven en todas las regiones sub
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tropicales y tropicales del mundo, las hojas son alternas
palmatipartidas o palmatilobadas, a veces ubicados en lado
superior

de

la

base

del

peciclo,

inflorescencia

cimosa,

racemosa, axilar o terminal, raramente flores solitarias, la flor


unisexual,

actinoforma,

caliz,

corola

acampanada

en

el

androceo, cinco estambre, que aparecen como si fueran tres


por dos pares que se sueldan y uno se separa. Los filamentos y
las anteras se unen total o parcialmente y so curvos o
retorcidos, el gineceo, el ovario es nfero, tricarpelar y casi
siempre unilocular. Los vulos son ms o menos numerosos
con placentacin parietal, los frutos son bayas con envoltura o
pericarpio blando o duro.
Esta familia de plantas abarca unas 760 especies que habitan
en pases clidos, algunas se cultivan con valores alimenticios.
5.2. HABITAT
Estas plantas habitan en cumbreras, cunetas y baldos.
Florecen en los meses a partir de abril a octubre, aunque no es
extrao encontrarlas en flor fuera de esta poca.
Su distribucin es muy comn en toda la Regin Mediterrnea
y Oceania, aunque en la actualmente es cosmo polita, en el
Per se encuentra en el departamento de Amazonas, Ancash,
Junn y Lima.
5.3. USOS POPULARES
Esta planta es usada para las siguientes avtividades:
Ictiotoxicas(pesca)
Lavado de cabello
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Lavado de ropa

6. SAPONINAS
6.1 CONCEPTO
Las saponinas son una clase de compuestos estructurales
diversos, que se encuentran ampliamente distribuidos en el
reino vegetal. Se trata de glicosidos formados por una o ms
residuos oligosacridos unidos covalente mente a una aglicona
de carcter hidrofobico (Hostettmann, 1995). Segn el tipo de
aglicona, que es denominado el ncleo lipofilico, por el grupo
que esta enlazado a un tomo de carbono anomerico, que es
el tomo de carbono de carbono enlazado a dos oxgenos, o a
un oxgeno y cualquier otro heteroatomo, como el nitrgeno
(wade, 2004), la naturaleza qumica del aglicon se suele
clasificar

en

dos

grupos,

como

saponina

esteroidal

triterpenoide. El nombre de saponina deriva del trmino en


latn sapo qu significa jabn. Este se debe a que las
saponinas son capaces de formar espuma al ser agitadas en
soluciones acuosas.
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De modo general, algunas de las caractersticas de este
amplio

grupo

de

compuestos

son

sus

propiedades

emulsionantes, detergentes, deterrente, antiinflamatorio y


hemolticas.
Historicamente se han definido a dichos compuestos en base a
estas propiedades, pero en los ltimos aos se ha optado por
una definicin ms precisa, en base a su estructura molecular,
segn su origen biosintetico.

Figura N1.

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Por hidrolisis se genera un aglucon (sapogenina) que puede
ser tipo esteroide o triterpenoide.
La industria aprovecha esta propiedad emplendola en
detergentes y jabones. Estas actan en la planta como
sistema

de

defensa,

reguladoras

de

crecimiento

antifngicas. (ANAYA LANG, 2003). Existen dos tipos de


saponinas:

Esteroides: son neutras. Se encuentran principalmente


en las monocotiledneas. Estas pueden ser utilizadas para
la elaboracin de hormonas sexuales y corticoides. (ANAYA
LANG, 2003).
Las geninas

esterodicas

derivan

de

un

esqueleto

hexacclico de 27 tomos de carbono, que es el ncleo


espirostano. Algunas saponinas esteroidales son de gran
inters e importancia por su relacin con compuestos
como

las

hormonas

sexuales,

cortisona,

esteroides

diurticos, vitamina D y hetersidos cardacos. Por este


motivo, algunos son utilizados como material de partida
para la sntesis de estos compuestos. En este sentido,
destaca el uso de la diosgenina, saponina que se obtiene,
principalmente a partir de las partes subterrneas de

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distintas especies de lianas herbceas tropicales del
gnero Dioscorea.
Para que stas posean inters industrial, su contenido en
diosgenina debe ser superior al 3%. Adems, hay otras
plantas utilizadas como fuente de diosgenina, como la
alholva (Trigonella foenum-graecum), que es bastante
interesante por tener un ciclo de cultivo corto (las semillas
se obtienen en 3-5 meses). Tambin se utiliza mucho la
hecogenina, que es un saponsido muy semejante a la
diosgenina.

La

hecogenina

se

obtiene

de

distintas

especies de agaves o sisales.

Triterpnicas son cidas. Se encuentran principalmente


en las dicotiledneas. (ANAYA LANG, 2003). Las saponinas
triterpenoides

de

importancia

comercial,

aunque

la

mayora de las sapogeninas triterpenoides se obtienen de


las

saponinas

correspondientes

por

hidrlisis

cida,

existen algunas en estado libre, como por ejemplo el cido


urslico,

C30H48O3, los

cidos

elemlicos

y el cido

boswlico. (CYTED, 1993)


Las saponinas triterpenoides se emplean en la fabricacin
de

ladrillo

acstico,

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placas,

pelculas

papeles

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fotogrficos, cermica, extinguidores de incendios del tipo
de espuma y pastas dentrficas; tambin sirve para
producir espuma en bebidas (refrescos y cervezas), en
champes, jabones lquidos y preparados cosmticos y en
emulsificacin de aceites para pulverizar en rboles
frutales.
Tambin se utilizan para la determinacin del oxgeno en
la sangre. Las sapogeninas de las saponinas triterpenoides
no tienen aplicaciones comerciales. (Nohara, T.1989)

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Figura N2. Tipos de genina
en las tres clases principales de saponinas (Hostettmann y Marston,
1995)

Por su capacidad espumante las saponinas se utilizan en la


elaboracin de cerveza, en la industria farmacutica la
elaboracin sinttica de hormonas, industria farmacutica,
industria cosmtica en shampoos.(TAPIA, et al, 1979).
Tanto los tritepenoides tetraciclicos como los pentaciclicos
presentan un enlace glicosidico en el C3 y tiene un origen
biogentico

comn,

va

cido

mevalonico

unidades

en

mezclas

isoprenoides.
6.2 IMPORTANCIA DE LAS SAPONINAS
En

general,

las

saponinas

son

solubles

hidroalcoholicas e insolubles en disolventes orgnicos de media


y baja polaridad. Sin embargo, las geninas libres no son
solubles en agua y si en disolventes apolares.
Su principal propiedad fsica es que en solucin acuosa son
agentes

tensoactivos, es

decir,

son

capaces

de

formar

espumas (poder afrogeno) y formar emulsiones. Son difciles de


cristalizar.
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6.2.1 ACCIONES FARMACOLOGICAS


Desde el punto de vista farmacolgico, las drogas con
saponinas pueden tener diferentes acciones, las cuales se
deben, sobre todo, a las saponinas triterpenicas. Sin embargo,
hay que tener en cuenta que, por va oral y en dosis altas, las
saponinas irritan la mucosa bucofarngea y digestiva, causando
dolor abdominal, vmitos y diarrea.
A continuacin, comentaremos las acciones farmacolgicas
ms destacables de la drogas con saponinas.
Accin expectorante
Es una de las acciones ms clsicas de las drogas con
saponinas, la cual deriva de la estimulacin de la secrecin
traqueobronquial por un reflejo autonmico con origen en la
mucosa gstrica.
Efecto diurtico
Las saponinas tienen la capacidad de aumentar la circulacin
sangunea a nivel renal, con lo que la filtracin glomerular se
ve aumentada y, por tanto, se da un efecto diurtico.
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Efecto antiedematoso y antiinflamatorio
Algunas saponinas presentan este efecto (p. ej., la escina del
castao de Indias, sobre todo en cuanto a la insuficiencia
venosa en las extremidades inferiores).
Accin adaptgena
Algunas saponinas pueden tener un efecto estimulante,
tonificante y antiestrs.
Efecto molusquicida

Muchas saponinas resultan txicas para los moluscos, motivo


por el cual en los pases tropicales se recurre a ellos como
molusquicidas, ya que con ello se rompe la cadena de
transmisin

de

las

esquistosomiasis.

nicamente

son

molusquicidas las saponinas monodesmosdicas, pero por


hidrlisis

las

bidesmosdicas

se

pueden

convertir

en

monodesmosdicas.
Algunos beneficios ms de la saponina:

Puede descomponer la grasa, acelerar la absorcin de


nutrientes y digestin

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Efectos Antioxidantes

Efectos anticancergenos

Ayuda en funcin erctil.

Revitaliza la actividad enzimtica en las clulas apoyando el


metabolismo.

Incrementa la energa, revigoriza, ayuda a recuperacin de


fatiga.

Ayuda en casos de letargo y falta de apetito.

Mejora la protena de sntesis del suero.

Estimula la actividad enzimtica involucrada en el proceso


de reparacin y construccin de hueso, e incrementa la
deposicin de calcio por las clulas de la mdula sea.

Mejora la flexibilidad de forma significativa y baja la presin


arterial.

Ayuda en casos de depresin al incrementar los niveles de


ciertos neurotransmisores como serotonina, dopamina y
noradrenalina.

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En la actualidad se ha determinado que las saponinas tienen


beneficiosas propiedades para la salud, entre las cuales se
pueden mencionar diversos efectos biolgicos: por su actividad
antiviral, como analgsico, antiinflamatorio, antimicrobiano,
antioxidante, y cito txico, tiene un importante efecto sobre la
absorcin

de

minerales

vitaminas,

produce

efecto

inmunoestimulador, aumenta la permeabilidad de la mucosa


intestinal y tiene accin neuroprotectora. Adems acta como
hipolipemiante (Gl-stndag and Mazza, 2007).
Por lo anteriormente expuesto se puede afirmar que las
saponinas tienen

importantes aplicaciones en el campo

industrial y farmacutico.

7. CICATRIZANTE
Es un proceso en el cual se regenera la piel, frente a una lesin
provocada por cualquier tipo de mecanismo. (TROTT, 2007).
Comienza el proceso de cicatrizacin normal de la herida cuando
son agudas mientras, que las heridas crnicas no cicatrizan bien,
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debido a que existe infeccin, tejido muerto o algn tipo de
patologa. (LEONG Y PHILLIPS, 2013)
Son esteroides polihidroxilados, compuestos que actan en la
defensa

de

la

planta

tambin

presentan

propiedades

teraputicas como anti- osteoportico, ayudan en el proceso de


curacin de heridas. Adems son considerados como compuestos
bioactivos, ya que ayudan a reducir el estrs. El principal
fitecdisteroide ecdiesterona este puede ayudar al tratamiento y la
prevencin de la diabetes, disminuyendo significativamente los
niveles de glucosa en la sangre.Estos aceites pueden intervenir en
diferentes procesos de agregacin plaquetaria e inflamacin
actuando como mediadores celulares (CAIGERAL, 2003).
8. PARTE EXPERIMENTAL
8.1. MATERIALES, APARATOS Y REACTIVOS
Materiales
Papel kraffs.
Frasco de vidrio de color ambar con tapa rosca.
Lamina portan objeto.
Tubos de ensayo.
Vasos precipitados.
Peras de decantacin.
Esptulas.
Probetas.
Embudos.
Mortero.
Papel filtro.
Erlermeyer

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Aparatos
Sistema de destilacin.
Sistema soxhlet.
Balanza.
Estufa.
Desecador.
Cocinilla Elctrica.

Reactivos
n_Butanol.
Eter de Petrleo.
Etanol 70.
cido Sulfrico.
cido Clorhdrico.
Sulfato de sodio Anhidro.
Cloroformo
Metanol

8.2. PREPARACION DE LA MUESTRA.


8.2.1. PREPARACION DE LA MUESTRA
8.2.1.1. RECOLECCION
Para la presente investigacin, las muestras del fruto de
Cucumis

dipsaceus jaboncillo se recolectaron en el

mes de setiembre del 2015 en la Provincia de Barranca en el


Departamento de Lima.
Los frutos se lavaron manualmente para separar toda partcula
de tierra que pudiera estar adherida al fruto ya que se
desarrollan al ras del suelo.

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Figura N

3.

8.2.1.2. ESTABILIZACION
Se efectu el secado del fruto al medio ambiente (bajo techo),
durante cinco das sobre papel kraffs, con la finalidad de
deshidratarlo, luego se agreg vapores de etanol de 96 y aire
caliente

para

inactivar

posibles

enzimas

que

pudieran

descomponer al fruto. Luego se prosigui con el secado en


estufa a una temperatura que oscilaba entre 40C y 45C,
durante cinco das. La droga seca se guard en frascos de
vidrio de color mbar con tapa rosca hermticamente cerrada.

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Figura N4.

8.2.1.3. MOLIENDA
La molienda se realiz con un mortero, prosiguindose con el
secado por 48 horas, obtenindose polvo seco de la muestra,
guardndose luego en frascos limpios y secos para utilizacin
posterior.

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Figura N5.

8.3.2. EXTRACCION DE SAPONINAS


8.3.2.1. EXTRACCION ETANOLICA
Teniendo en cuenta que las saponinas son solubles en agua,
soluciones hidro-alcoholicas, etanol absoluto, entre otras,
realizamos la extraccin con etanol de 80, para cuyo efecto se
pes 80 gramos de la muestra seca y pulverizada, que
deposita en un beaker de 0.5 litros de capacidad y se agrega
0.25 litros de alcohol de 80, dejamos en maceracin por 72
horas con la finalidad de ablandar los tejidos celulares.
Luego se decanta y el residuo se exprime obtenindose un
volumen de 0.21 litros, esta solucin presenta un aspecto
grasoso.

Figura
N6.

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Figura N7.

8.3.2.2. DESENGRASADO Y DESPIGMENTACION


A los 0.21 litros de extracto etanolico, obtenindose se le
adiciona 0.1 litros de alcohol etlico al 40, y se le trasvasa a
una pera de decantacin, agitndose la mezcla, se obtiene en
dos fases al realizar la separacin se obtienen 0.3 litros de una
fase hidroalcoholica, la parte til y una fraccin lipdica, que se
desecha.
La solucin hidroalcoholica es sometida a una extraccin
mltiple con bencina con la finalidad de eliminar pigmentos y
residuos grasos, obtenindose fraccin etanolica til.

Investigacin Qumica
28

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Figura N8.

8.3.2.3. EXTRACCION BUTANOLICA


En el extracto etanolica previamente desengrasado se extraen
las saponinas con n-Butanol aprovechado que dicho solvente
posee mayor capacidad de disolucin, esta operacin se realiz
en un embudo de separacin.
Al extracto butanolico se le adiciono SO4Na2 anhidro con la
finalidad de secar la fase orgnica, luego se decant. Este
extracto butanolico se concentr por calentamiento hasta
obtener un residuo slido.

Figura
N9.

8.3.2.4.
ENSAYO
DE
RECONOCIMIENTO
Investigacin Qumica
29

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VILLARREAL
a. Ensayo de la Espuma
Las saponinas son solubles en agua y pueden disminuir la
tensin superficial del agua, formando abundante espuma.
Se agreg en un tubo de ensayo 0.1 gramos de muestra y
tambin se agrega agua destilada a una altura de un dedo, por
ltimo se agita por 30 segundos.

Figura N10.

b. Ensayo de Salkowsky
Una pequea muestra se pone en un tubo de ensayo y se
agrega un ml de cido sulfrico y
anhdrido actico. Se va observar una
coloracin rojo o amarillo.

Investigacin Qumica
30

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Figura N11.

8.3.2.5. ANALISIS CROMATOGRAFICO


Las tcnicas cromatografas utilizadas en esta investigacin
para la separacin y aislamiento son: Cromatografa de capa
fina y cromatografa de capa preparativa.

Figura
N12.

A.
Cromatografa de Capa Fina
Preparamos una capa sobre una placa de 10cmx5cm, un
absorbente de silica gel sobre la placa de
vidrio. Luego buscamos un eluyente adecuado
por ese motivo requer probar con varios
disolventes de diferente polaridad o con
mezclas.

Investigacin Qumica
31

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VILLARREAL

Figura N13.

Figura N14.

Figura N15.

B. Cromatografa de Capa
Preparativa.
La cromatografa preparativa se llev a
cabo en placas de gel de slice sobre un
soporte de vidrio de 15x15cm. Hemos
Investigacin Qumica
32

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VILLARREAL
utilizado esta tcnica para la separacin y aislamiento del
componente interesado.
Con una pipeta Pasteur trazamos una lnea continua con la
muestra disuelta y despus se introduce la placa en posicin
vertical en la cubeta y se tapa, para evitar la evaporacin del
disolvente.

Figura N16.

Despus

que

la

fase

mvil llegue a la marca


indicada, se le lleva a un
equipo

de

uv

para

observar la fluorescencia que presenta la placa, lo que se pudo


observar dos colores, el primer color en el uv es un rosado y el
segundo un amarillo. Despus de marca la zona donde estn
los dos colores, raspamos las manchas de colores y lo
colocamos cada uno en un vaso precipitado, para despus
Investigacin Qumica
33

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VILLARREAL
disolverlo en etanol y lo filtramos la solucin .Por ltimo el
filtrado

lo

guardamos

para

su

posterior

lectura

en

espectrmetro de UV- visible.


Figura N17.

9. RESULTADOS
A. Ensayo de la Espuma
Esta prueba sali positiva
demostrando la presencia de
saponina en el fruto de Cucumis
dipsaceus

Investigacin Qumica
34

el

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B. Ensayo de Salkowsky

Esta

prueba

indicar

se

la

realiz

para

presencia

de

triterpenoides
C.

dando

coloracin

esteroides
rojo

que

significa que hay presencia de


triterpenoide

en

Cucumis dipsaceus
Cromatografa de Capa Fina

Rf a=

4.5
=0.833
5.4

Rf b=

4.2
=0.778
5.4

Investigacin Qumica
35

el

fruto

de

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D. Espectrmetro de ultravioleta visible


La solucin enfriada se lleva para su posterior lectura en el
espectrofotmetro con solvente etanol destilado. Luego la solucin
con etanol se coloca en la celda y se lleva al UV-VIS, el espectro
aparece en esta imagen.

Compuesta a

Absorbancia
0.829

Figura N18.

Investigacin Qumica
36

Longitud de Onda
270.065

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Compuesta b

Absorbancia
0.729

Figura N19.

10.

DISCUSIONES DE RESULTADOS

Investigacin Qumica
37

Longitud de Onda
270.009

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VILLARREAL
La prueba de la espuma se realiz con el fin de determinar si haba
o no presencia de saponinas aprovechando la propiedad de
detergencia. Al agregar agua, las saponinas disminuyen la tensin
superficial de esta, aumentando la capacidad de penetracin del
agua lom cual facilita la formacin de pequeas gotas, es por eso
que al momento de sacudir o agitar la solucin, se forme
pequeas gotas, es por eso que al momento de sacudir o agitar la
solucin, se forma una espuma abundante y relativamente estable
formando un sistema coloidal. En la experiencia se observ que
solo en una muestra (avena) no se form espuma debido a que la
avena da resultado positivo con agua caliente.
La prueba con el reactivo de Salkowski se realiz con la finalidad
de

indicar

la

presencia

de

saponinas

triterpenoidales

esteroidales dando como resultado coloracin rojo sangre la cual


se observ, no se pudo realizar la prueba de Liebermann- Burchard
para determinar la presencia de saponinas esteroidales debi a
que la planta tambin tiene cucurbitacina que es un esteroide.

11.

CONCLUSIONES
Ya que las saponinas

tienen

propiedades

detergentes,

comprobamos su presencia al generar espuma por agitacin en


diferentes tipos de muestras, de esta manera pudimos
Investigacin Qumica
38

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VILLARREAL
observar la cantidad de saponinas en relacin a la espuma
producida en cada planta.

Comprobamos la presencia de saponinas as como el tipo de


saponinas para poder diferenciarlas:
La reaccin de Salkowski indica la presencia de saponinas que
podran ser triterpenicas o esteroidales a travs de una coloracin de

amarillo a rojo sangre.


La Cromatografa preparativa se utiliza para purificar suficiente la
cantidad de sustancia. Para su uso posterior mas que para un
anlisis, en este trabajo se purifico las saponinas.

12.
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Centres d'intérêt liés