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Universidad de San Carlos de Guatemala

Facultad de Agronoma
rea Tecnolgica
Subarea de Proteccin de Plantas
Laboratorio de Introduccion a la Fitopatologia
Dr. Edin Orozco
Jorge Rubn Zumeta Portillo
Carn: 201318207
Fecha: 13/04/2016
Mtodos para la Extraccin de Nematodos

Introduccin
Existen diversos mtodos para la extraccin de nematodos usados habitualmente
en los laboratorios de Fitopatologia. La seleccin del mtodo a utilizarse para la
extraccin de nematodos depende varios factores siendo la eficiencia deseada y el
equipo disponible las ms determinantes para la seleccin. Hay que tener en
cuenta que ningn mtodo es capaz de extraer el 100% de los nematodos de la
muestra.
Hay dos principales procesos para la extraccin de nematodos pueden ser
extrados del suelo o del material vegetal. Uno de ellos depende de la movilidad y
disponibilidad de los nematodos para que sean extrados, mientras que el otro
mtodo tiene la capacidad de extraer nematodos de formas inactivas y estados no
mviles por medio de una corriente de agua que asciende. Las tcnicas de
extraccin estn basadas en procesos o combinacin de los mtodos, lo
primordial es la eleccin del mtodo en base al objeto de estudio. Los mtodos de
extracciones nematodos que existen en diversos laboratorios de microbiologa
son: embudo de Baerman, tcnica de cribado y centrifugacin en solucin
azucarada, mtodo de cribado y decantacin de Cobb, elutriador de Oostenbrink,
aparato de Fenwick para extraccin de quistes
Mtodos de Extraccin de Nematodos
Embudo de Baerman
El embudo de Baerman, se trata de una tcnica donde se requiere que los
nematodos se muevan a travs de la muestra para su extraccin, los
requerimientos de esta tcnica consiste en un embudo plstico, y en su parte
inferior se le ajusta una manguera de hule suave, que se cierra mediante una
pinza de presin tipo mohr.
El embudo de Baerman consiste en suspender el suelo en un determinado
volumen de agua, y despus de un corto perodo de reposo, la suspensin se
vierte sobre un juego superpuesto de cribas de 100 y 400 mallas. El suelo
retenido en la criba ms fina, se transfiere a un cilindro con fondo de tela, que
posteriormente se coloca en el embudo. Despus de 24 a 48 horas, todas las
formas activas de nematodos han pasado a travs de la tela o papel y pueden ser
recogidas en un pequeo volumen de agua al retirar la pinza mohr de la
manguera.
Entre las ventajas de este mtodo estn el bajo costo y lo portabilidad del equipo,
mientras que dentro de las desventajas cabe mencionar: la dependencia del
mtodo de la movilidad de los nematodos, que difiere entre especies y estados del
ciclo de vida, la cual adems puede ser afectada desde que la muestra es tomada
en el campo.
Tcnica de Centrifugacin y Flotacin

Esta tcnica para la extraccin de nematodos consiste en mezclar y centrifugar


pequeas muestras de suelo con agua, seguidamente de una segunda mezcla
centrifugacin con solucin azucarada, los nematodos sern recuperados del
suelo. El principio de las tcnicas es la recuperacin de los nematodos por
flotacin, mediante soluciones de gravedad especifica superior a los fluidos del
nematodo.
En Algunos laboratorios se utiliza soluciones azucaradas a partir de caa de
azcar, sin embargo tambin pueden ser utilizadas soluciones de sulfato de
magnesio y sulfato de zinc tambin pueden ser utilizadas. Cuando se tratan
muestras de suelo arcilloso se le debe de agregar algn tipo de detergente para
que ayude a la dispersin de partculas de la muestra de suelo. (Alejandro
Esquivel, 2013)
El estrs osmtico ocasionado por estas soluciones puede matar o distorsionar
los nematodos, por lo tanto es necesario enjuagarlos con suficiente agua para
ayudar a la recuperacin. Actualmente la tcnica, es utilizada rutinariamente en
muchos laboratorios, debido especialmente a que es efectiva para extraer
huevos, estados inmviles, formas inactivas y nematodos muertos. Adems es un
mtodo rpido, que permite procesar y leer gran cantidad de muestras en pocas
horas. (Alejandro Esquivel, 2013)
Procedimiento:
1. Tomar una alcuota de 100 gr de suelo bien homogeneizado. Eliminar las
races, piedras y otros desechos
2. 2. Colocar la muestra en una cubeta y lavarla directamente bajo un chorro de
agua a presin, la cantidad de agua agregada no debe superar la mitad de la
misma
3. 3. La suspensin resultante se agita bien y se deja reposar alrededor de 30
segundos.
4. 4. Posteriormente se procede a decantar la solucin sobre un juego de tamices
superpuesto de 100 y 400 mallas. La operacin se puede repetir una vez ms
con el suelo remanente en la cubeta
5. 5. Con la ayuda de un frasco lavador (pizeta) los residuos retenidos en la criba
de 400 mallas se transfieren a tubos de centrifuga de 50 ml, con el cuidado de
que stos una vez colocados en la centrifuga queden balanceados.
6. Se procede a centrifugar de 4 a 5 minutos alrededor de 3000 r.p.m. Se
decanta cuidadosamente el sobrenadante y se agrega una solucin de azcar
(484 gr. de azcar de caa y aforar a un litro).
7. Se suspende nuevamente el suelo y se centrifuga a la misma velocidad de 1.5
a 3 minutos.
8. El sobrenadante que contiene los nematodos es vertido sobre una criba de 400
mallas, y el exceso de azcar adherida a los nematodos, es removido lavando
con suficiente agua. Por ltimo, se transfieren a un plato de conteo o siracuza
para su examen. Por medio de esta tcnica se pueden recuperar
prcticamente todos los tipos de nematodos del suelo, y el proceso entero
puede realizarse en menos de 10 minutos.