UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN

MARCOS
(Universidad del Per, DECANA de Amrica)
FACULTAD DE ODONTOLOGA
Pregrado

Agricultura Ecolgica en finca Casa Blanca

Docente de Prctica: Jeannette Albino Picoy
Docente: Sylvia Chein
Integrantes:
Anglas Valqui, Ingrid Estefany
Benavente Ramos, Jessica Indyra
Curo Rosales, Mariel Indira
Delgado Barros, Margot
Marcatoma Cerro, Mayli
Vidal Chvez, Daniel Emerson
Estomatologa Integrada I
Lima- Per
2016

NDICE
1.
INTRODUCCIN
2.
PROBLEMA DE INVESTIGACIN
2.1. rea Problema
2.2. Formulacin
2.3.

Objetivos

2.3.1. Objetivo General

2.3.2. Objetivos Especficos
2.4.

Justificacin
2.5. Limitacin
3.
MARCO TERICO
3.1. Antecedentes
3.1.1. Contaminacin biolgica
3.1.1.1.
Contaminacin biolgica del aire
3.2. Bases Tericas
3.2.1. Tcnicas de Cultivo
3.2.1.1.
Mtodo de siembra por estra en placa
3.2.1.2.
Mtodos de vertido en placa y extensin en placa
3.2.1.3.
Tipos de Medios de Cultivo
3.2.1.4.
Observacin de Bacterias
3.2.2. Microorganismos
3.2.2.1.
Endotoxinas
3.2.2.2.
Hongos
3.2.2.3.
Micotoxinas
3.2.2.4.
Protozoos
3.2.2.5.
Antgenos
3.3. Definicin de Trminos
3.4. Hiptesis
4.
METODOLOGA
4.1. Tipo de Investigacin
4.2. Tcnica y Procedimiento
4.2.1. Tcnicas
4.2.2. Materiales y Equipo
4.2.3. Procedimientos
4.2.3.1.
Recoleccin de la Muestra (Fig. 1.3)
4.2.3.2.
Aislamiento de Microorganismos
4.2.3.3.
Identificacin de Bacterias (Fig. 1.4)
4.2.3.4.
Identificacin de Hongos (Fig. 1.5)
5.
RESULTADOS

6.
7.
8.
9.

DISCUSIN
CONCLUSIONES
Bibliografa
Anexos

1. INTRODUCCIN
El aire es un medio para la dispersin de diferentes microorganismos, entre ellos los
hongos y las bacterias que pueden proceder de otros ambientes. Algunos han creado
adaptaciones especializadas que favorecen su supervivencia y permanencia.
Los hongos y bacterias dispersados por el aire tienen una gran importancia biolgica
porque producen enfermedades en plantas, animales y humanos, en el caso de los seres
humanos, las enfermedades transmitidas por el aire son: las respiratorias (neumona,
tosferina, tuberculosis, resfriado, gripe), sistmicas (meningitis, sarampin, varicela,
micosis) y alrgicas.
Es por eso, que la presente investigacin tiene como finalidad determinar la existencia
de microorganismos tanto bacteriano como fngicos que puedan ocasionar
enfermedades, afectando la salud de las personas que se encuentran tanto dentro como
en los alrededores de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Los resultados
que se obtuvieron en el estudio servirn como principio bsico en el enfoque de futuras
investigaciones.
Finalmente esta investigacin se desarrolla en tres captulos: el primer captulo contiene
el planteamiento del problema, los objetivos de la investigacin: especficos y
inespecficos, y la justificacin. El segundo captulo presenta los antecedentes de la
investigacin, el desarrollo de las bases tericas y definicin de trminos bsicos. El

tercer captulo est constituido por el tipo de investigacin, las tcnicas y los
procedimientos del estudio.

2. PROBLEMA DE INVESTIGACIN
2.1. rea Problema
Los efectos de la contaminacin en la atmsfera se puede deber a diversos
tipos de agentes que se encuentran en el medio entre ellos, las bacterias y los
hongos. Estos agentes contaminantes atmosfricos causan graves daos a la salud
de las personas.
Existen muchos mtodos para identificar estos microorganismos, nosotros
tomamos muestras con placas AGAR y TSA al exterior de la universidad (La
interseccin de la Av. Venezuela con la Av. Universitaria) y el preparado de los
medios de cultivo se realizaron en el laboratorio de microbiologa de la Facultad de
Odontologa, el cual contribuy al muestreo de bacterias GRAM negativas y
positivas as como la de los hongos.
2.2. Formulacin
Qu tipo de contaminacin microbiolgica se encuentra en la muestra de
aire en placas AGAR y TSA?
2.3. Objetivos
2.3.1 Objetivo General

Encontrar e identificar microorganismos (bacterias, hongos; etc.) que se

encuentran en la muestra de aire tomada al exterior de la universidad (La
interseccin de la Av. Venezuela y Av. Universitaria).
2.3.2 Objetivos Especficos

Clasificar las bacterias encontradas en dos tipos: en GRAM+ o GRAMMencionar las caractersticas de bacterias y hongos que se encontraron en las

placas Petri TSA y AGAR.

Reconocer la relacin entre estos microorganismos y las enfermedades que

pueden afectar la salud de las personas.

Concientizar a las personas respecto a la contaminacin de la atmsfera y su
responsabilidad en el cuidado y conservacin de esta.

2.4. Justificacin
En el presente trabajo buscamos conocer los agentes contaminantes de la
atmsfera que se encuentran en la muestra de aire tomada al exterior de la
universidad (La interseccin de la Av. Venezuela y Av. Universitaria), as
conoceremos el grado de contaminacin de la atmsfera y su efecto en la salud
humana. Las personas podrn estar informadas de las enfermedades y los daos
irreparables que afectan de manera directa el sistema respiratorio, sobre todo en
nios, ancianos y personas con enfermedades crnicas o preexistentes; y as evitar
la contaminacin (no arrojar desperdicios, evitar la quema de basura, reciclar, etc.)
ya que como principales actores de esta contaminacin atmosfrica, tambin
podemos ser aquellos quienes cuiden y conserven la salud de la atmsfera y la
nuestra.
2.5. Limitacin
Al elaborar el presente experimento de investigacin se encontr la
siguiente limitacin:
Con respecto a la observacin de los resultados de la muestra en el
laboratorio de microbiologa, en resultados no se poda precisar de manera ms
especfica algunos microorganismos (solo en GRAM+ y GRAM-), ya que se
necesita de pruebas ms especficas.
3. MARCO TERICO

3.1. Antecedentes
La contaminacin es la presencia de toda sustancia que al incorporarse o
actuar en la atmsfera, agua, suelo, flora, fauna o cualquier elemento natural, altere
o modifique su composicin y condicin natural, causando desequilibrio ecolgico.
Uno de los ms graves problemas que tenemos los habitantes del planeta
Tierra es la contaminacin del aire que respiramos, primordial para la vida. Los
contaminantes del aire tienen distinto potencial para producir dao a la salud
humana, lo cual depende de sus propiedades fsicas y qumicas, de la dosis que se
inhala, del tiempo y frecuencia de exposicin as como tambin de las
caractersticas de la poblacin expuesta. Cuando el txico llega al organismo,
dependiendo de la va de exposicin, entra en contacto con las superficies
epiteliales del tracto digestivo, del aparato respiratorio o de la piel. Cruza esas
membranas y alcanza el torrente sanguneo, en este momento se considera que el
txico penetr al organismo, la sangre lo transporta a los distintos rganos y en uno
o en varios de ellos puede llegar a causar un dao permanente (Pea y col., 2001).
La magnitud de la exposicin se determina midiendo o estimando la
cantidad del agente que est presente en la superficie de contacto (pulmones,
intestino, piel, etc.) durante un perodo especificado (Pea y col., 2001).
Las Naciones Unidas revelan que las personas ms pobres, los nios y
habitantes del tercer mundo tienen mayor ndice de riesgo de exposicin a la
contaminacin ambiental.
La exposicin a la contaminacin del aire est relacionada con serios
trastornos a la salud entre los que destacan:

El incremento en la frecuencia de enfermedades respiratorias crnicas y

agudas.
Aumento en la frecuencia de muertes asociadas a la contaminacin

atmosfrica.
Disminucin de la capacidad respiratoria.
Aumento de ataques de asma.
Incremento de casos de enfermedades cardiacas.
Aumento en la frecuencia de cnceres pulmonares (Primer Diagnstico
Nacional de Salud Ambiental y Ocupacional, Secretaria de Salud, 2002).

Las exposiciones se clasifican de acuerdo a la magnitud del perodo de

exposicin en:
Exposiciones crnicas.- Son las exposiciones que duran
entre el 10% y el 100% del perodo de vida. Para el caso del
hombre entre 7 y 70 aos.
Exposiciones subcrnicas.- Son exposiciones de corta
duracin, menores que el 10% del perodo vital.
Exposiciones agudas.- Son exposiciones de un da o menos

y que suceden en un solo evento.

3.1.1. Contaminacin biolgica
Tratar de definir qu es contaminacin biolgica es complejo. En los
ecosistemas, los organismos formamos parte de cierto nivel trfico y
participamos activamente en las cadenas y tramas alimenticias.
En este contexto, ningn organismo es despreciable. En pocas horas nos
veramos inundados por basura, desechos y materia orgnica si no fuera por la
presencia de desintegradotes donde las bacterias y otros microorganismos tienen
un papel muy relevante.
Finalmente, la contaminacin biolgica considerara como contaminante
aquellos seres o productos biolgicos que afectan al hombre y su entorno, ya sea
amenazando a su salud o a su disponibilidad de alimento.
Tambin consideraremos el efecto contaminante que se utiliza con fines
blicos, a travs de las formas modernas de hacer guerra.
Algunos contaminantes biolgicos pueden provocar reacciones alrgicas,
incluyendo neumonitis por hipersensibilidad, rinitis alrgica y ciertas formas de
asma. Las reacciones alrgicas slo tienen lugar despus de una exposicin
reiterada a un alrgeno biolgico especfico. Sin embargo, estas reacciones
pueden producirse tanto inmediatamente despus de la reexposicin al agente en
cuestin como luego de una exposicin a largo plazo. Personas que han
experimentado solamente reacciones alrgicas leves o que no han presentado
ninguna reaccin en absoluto pueden, repentinamente, volverse muy sensibles a
determinados alrgenos.

Enfermedades infecciosas, como la gripe, el sarampin, la tuberculosis y

la varicela, se transmiten a travs del aire.
Algunos tipos de musgo y mildiu liberan toxinas patgenas que atacan
diversos rganos y tejidos, incluyendo el hgado, el sistema nervioso central, el
tubo digestivo y el sistema inmunolgico. Ciertas enfermedades como la fiebre
del humificador, son causadas por microorganismos que crecen en los sistemas
de calefaccin y aire acondicionado. Sin embargo, no se sabe bien si estas
enfermedades constituyen una reaccin alrgica o una respuesta txica.
Los sntomas por exposicin a contaminantes biolgicos incluyen
estornudos, ojos llorosos, accesos de tos, insuficiencia respiratoria, mareos,
letargo, fiebre y problemas digestivos. Los nios, los ancianos y las personas que
sufren de problemas respiratorios, alergia y enfermedades pulmonares son
particularmente susceptibles a los agentes biolgicos patgenos que se hallan en
espacios cerrados.
3.1.1.1.

Contaminacin biolgica del aire

Los contaminantes biolgicos del aire se encuentran en todo

hogar, escuela y lugar de trabajo. Las fuentes incluyen el aire exterior y

las personas que dejan virus y bacterias, los animales (insectos y otros
artrpodos, y mamferos) que eliminan alergenos, y las superficies
interiores y reservorios de agua donde los hongos y bacterias pueden
crecer, como en los deshumedecedores. Varios factores permiten que los
agentes biolgicos crezcan y se liberen al aire. Una humedad relativa alta
es muy importante ya que ayuda al crecimiento de las poblaciones de
caros del polvo en el hogar y al crecimiento de hongos en las superficies
hmedas. La contaminacin por caros y hongos puede originarse debido
a inundaciones, alfombras que estn continuamente hmedas (ocurre
cuando se instala en suelos de concreto con mala ventilacin), mala
ventilacin en los baos o humedad generada por la cocina. Los aparatos
como los humedecedores, deshumedecedores, aire acondicionado y
fuentes para recoger agua bajo espirales de enfriamiento (como en las
refrigeradoras) ayudan al crecimiento de bacterias y hongos.

Las

reacciones

alrgicas

constituyen

una

preocupacin

primordial relacionada con la exposicin a contaminantes biolgico.

Estas reacciones alrgicas van desde la rinitis, congestin nasal,
inflamacin de la conjuntiva y urticaria hasta el asma. Los factores que
desencadenan estas enfermedades son los alergenos derivados de los
caros del polvo de los hogares; otros artrpodos, incluidas las
cucarachas; mascotas (gatos, perros, aves, roedores); y artculos con
protenas, incluidas las plumas, material de relleno, etc. En los ambientes
laborales, los alergenos ms inusuales (por ejemplo: enzimas de
bacterias, algas) han ocasionado epidemias de asma. Es probable que la
mayora de protenas de origen no humano puedan provocar asma en
subgrupos de cualquier poblacin expuesta.
3.2. Bases Tericas
La atmsfera no tiene una microbiota autctona pero es un medio para la
dispersin de muchos tipos de microorganismos (esporas, bacterias, virus y hongos)
procedentes de otros ambientes. Algunos han creado adaptaciones especializadas
que favorecen su supervivencia y permanencia.
Los microorganismos dispersados por el aire tienen una gran importancia
biolgica y econmica. Producen enfermedades en plantas, animales y humanos,
causan alteracin de alimentos y materiales orgnicos y contribuyen al deterioro y
corrosin de monumentos y metales.
Para efectuar el estudio de los microorganismos, se han diseado diversos
mtodos que permiten cultivarlos bajo condiciones artificiales y experimentales.
Una de las tcnicas ms usadas en el laboratorio de microbiologa consiste en
transferir una muestra microbiolgica de un ambiente determinado a un medio de
cultivo, lo que permite obtener cultivos microbianos.
Al efectuar este procedimiento es necesario considerar que en el rea de
trabajo existen muchos otros microorganismos; debido a esto, es necesario tomar
precauciones ,estos incluyen el lavado de las manos, la esterilizacin de todos los
utensilios y medios de cultivo a emplear; adems las condiciones ambientales de su
hbitat natural, por lo que en el medio de cultivo se debe ajustar el pH ;ya que,

favorecer el crecimiento del microorganismo de inters y la obtencin del cultivo

y concentracin de sales y durante la incubacin condiciones tales como la
temperatura, aireacin, la luminosidad.
El crecimiento ptimo de los microorganismos se presenta a temperaturas
que la mayora de las veces estn relacionadas con la de su hbitat natural. Algunos
microorganismos crecen por debajo de 15C, otros requieren temperaturas ms
elevadas (30 a 45C) y algunos hasta 80C. Para alcanzar y mantener estas
temperaturas se puede usar una incubadora microbiolgica o un bao de agua a
temperatura constante, en tanto que para los microorganismos que presentan su
crecimiento ptimo a temperaturas entre 20 y 25C se pueden incubar en la gaveta o
cajn del laboratorio

a temperatura ambiente, la desventaja que tienen las

incubadoras microbiolgicas es que funcionan con aire seco, lo que determina la

deshidratacin de los medios de cultivo; por lo tanto, no debe prolongare por ms
de nueve das.
Con respecto a las necesidades gaseosas; no todos los microorganismo
crecen en presencia de oxgeno atmosfrico, primer grupo crecen en presencia de
aire se llaman aerobios obligados, segundo grupo crecen en ausencia de oxgeno se
denominan anaerobios obligados o estrictos, un tercer grupo se adapta a las dos
condiciones y se le conoce como facultativos y un cuarto grupo que comprende
bacterias que requieren oxgeno, pero solo lo utilizan cuando ste existe en
concentraciones reducidas llamados microaeroflicos.
El desarrollo de estos diferentes grupos se da mediante la agitacin de los
cultivos o mediante la exclusin de oxgeno para lo que se emplean sustancias
reductoras o equipos especiales. En el estudio de cultivos bacterianos algunos de
los criterios que se emplean para caracterizarlas incluyen: tamao, morfologa
celular, forma de agrupacin, reaccin a la tincin de Gram, formacin de esporas,
movilidad, presencia de inclusiones de reserva y caractersticas culturales en
medios lquidos y slidos en los que presentan patrones de desarrollo en cuanto a la
forma, tamao, elevacin y color de las colonias.
Al conjunto de procedimientos realizados para prevenir o evitar la
contaminacin se le llama tcnica asptica; el seguimiento cuidadoso y detallado de
la misma evita accidentes tales como:

-Contaminacin y prdida del cultivo en estudio.

- La salida y dispersin de microorganismos del cultivo, lo que ocasionara
la contaminacin de utensilios, productos y del personal, esta medida es importante
en particular cuando se trabaja con cultivos de microorganismos patgenos.
Un error frecuente consiste en tomar muestras grandes, lo que es
innecesario. Una colonia de bacterias del tamao de la cabeza de un alfiler contiene
varios millones de microorganismos, es decir, una cantidad nfima que se adhiera
ser suficiente para efectuar una transferencia exitosa. Dispositivos empleados en la
transferencia de muestras microbianas: hisopo, pipeta (para uso microbiolgico son
terminales y la parte superior o boquilla debe estar protegida con filtro de algodn),
pipeta pasteur, cable de Kolleo portasa con alambre de platino dispuesto en forma
de: aguja, asa, esptula y/o gancho; que debern esterilizarse previamente.
La aplicacin de estos procedimientos ha permitido propagar a los
microorganismos en diferentes cultivos, as como su aislamiento y la obtencin de
cultivos puros, facilitando de este modo el estudio, caracterizacin, aplicacin y
control de los mismos. La forma de sembrarlos y cultivarlos depende del tipo de
microorganismo y propsito especfico del estudio.
3.2.1. Tcnicas de Cultivo
Tratar de definir qu es contaminacin biolgica es complejo. En los
ecosistemas, los organismos formamos parte de cierto nivel trfico y
participamos activamente en las cadenas y tramas alimenticias.
3.2.1.1.

Mtodo de siembra por estra en placa

Es el mtodo ms fcil y el ms usado para obtener cultivos

axnicos. Para ello, con un asa de siembra se toma una muestra de la

poblacin mixta y a continuacin se hacen estras sobre la superficie de
un medio slido preparado en una placa Petri. Conforme se van haciendo
estras en zigzag con el asa, cada vez se van depositando en la superficie
del medio menos microorganismos. A continuacin, se flamea el asa, se
toca en la regin donde se han realizado las ltimas estras y se contina
la siembra con la misma tcnica, en la superficie de medio sin sembrar

an. Repitiendo este proceso varias veces se logra separar clulas

individuales. A continuacin, las placas se incuban en un lugar adecuado,
permitiendo que las clulas aisladas experimenten un nmero suficiente
de divisiones para formar colonias visibles. Aunque cada colonia
posiblemente representa un clon derivado de una sola clula, no podemos
asegurarlo; por lo tanto, para asegurarnos de que hemos obtenido un
cultivo axnico, conviene repetir el procedimiento a partir de una colonia
bien aislada en la primera placa. Las colonias que se desarrollen la
segunda vez, sern, casi con toda seguridad, cultivos axnicos. Para
obtener un cultivo axnico:
1. Esterilizar un asa de siembra por flameado en la llama de un mechero.
2. Introducirla en la suspensin bacteriana para recoger una muestra.
3. Sembrar haciendo estras sobre la superficie de un medio slido en una
placa Petri.
4. Volver a esterilizar el medio de cultivo, tocar en la zona de la placa ya
sembrada y hacer un segundo grupo de estras en una regin nueva de la
placa. Repetir el proceso una tercera y una cuarta vez, hasta conseguir
que los grupos de clulas se diluyan y se separen clulas aisladas.
5. Despus de la incubacin, se desarrollan colonias aisladas. Para estar
seguro de que el cultivo es puro, repetir el proceso entero; para ello tomar
una colonia aislada y sembrar por estras una segunda placa.
3.2.1.2.

Mtodos de vertido en placa y extensin en placa

Las suspensiones de clulas microbianas se diluyen antes de su

siembra en placa; estas tcnicas se utilizan cuando la muestra contiene

tantos microorganismos, que la dilucin no se puede realizar en una sola
etapa, por lo tanto se realizan diluciones seriadas (en varias etapas),
normalmente de diez en diez, pero a veces de cien en cien. Se puede
proceder de dos maneras diferentes:
En el mtodo de vertido en placa, las muestras diluidas se
mezclan con agar fundido y se vierten en placa. Algunas colonias

quedarn embebidas en el agar y otras crecern en la superficie. Las

colonias superficiales se extendern y sern ms grandes.
En el mtodo de extensin en placa, las muestras diluidas se
siembra directamente en la superficie de la placa de agar, extendindolas
con ayuda de un asa de Diralsky de cristal estril. La suspensin se
absorbe en el agar, dejando las clulas microbianas sobre la superficie.
En ambas tcnicas las placas se incuban hasta la aparicin de las
colonias; adems presentan la ventaja de que permiten obtener un mayor
nmero de colonias aisladas que el mtodo de siembra por estra, por
tanto se eligen cuando se ha de seleccionar una cepa a partir de una
mezcla con varios tipos de microorganismos.
Para obtener un cultivo axnico mediante este mtodo:
1. Hacer diluciones seriadas de la suspensin bacteriana hasta
obtener una muestra con pocos cientos de bacterias.
2. Verter la muestra en un tubo con agar a sobrefusin, mezclar y
verter el contenido en una placa Petri.
3. Despus de la incubacin, se desarrollan colonias las
pequeas y de amplia superficie en el agar.
3.2.1.3.

Tipos de Medios de Cultivo

El tipo de medio que utiliza el experimentador depende del

microorganismo que est cultivando y el porqu de dicho cultivo.

Los microorganismos presentan una enorme variedad de
requerimientos nutricionales. Se utiliza un medio mnimo para
determinar los requerimientos nutricionales de un organismo y un medio
rico si se desea obtener masa celular de una forma rpida.
Medios definidos:

Un medio definido es aquel del cual conocemos su composicin

qumica exacta, porque ha sido preparado a partir de compuestos
qumicos puros.
Los medios definidos se usan generalmente para realizar
estudios genticos, pero sus inconvenientes a menudo
sobrepasan sus ventajas. As, se requiere un tiempo considerable
para preparar un medio definido y las bacterias crecen ms
despacio en ellos. Adems, no conocemos los requerimientos
nutricionales de todas las bacterias; por tanto, no siempre
pueden utilizarse
Medios complejos:
Se desconoce la composicin qumica exacta de un medio
complejo. Estos medios se preparan a partir de extractos de
productos naturales, un medio lquido complejo se denomina
caldo. La casena u otras protenas que se aaden a los medios
son usualmente hidrolizadas con enzimas o en medio cido, para
hacerlas ms solubles ; en consecuencia , ms fciles de utilizar
nutricionalmente. Cuando este medio se solidifica con agar se
denomina agar nutritivo. Generalmente se prefiere la utilizacin
de los medios complejos; ya que, son fciles de preparar y
permiten un crecimiento rpido de los microorganismos.
Medios selectivos:
Un medio selectivo favorece el crecimiento de ciertos
microorganismos, mientras suprime el crecimiento de otros. Los
medios selectivos se utilizan para aislar especies particulares a
partir de una mezcla compleja contienen un producto qumico,
como la azida sdca, el telurito potsico o el cristal violeta, que
inhiben el desarrollo de microorganismos.
Medios de enriquecimiento:

Se utiliza para aislar un tipo particular de microorganismo a

partir de una poblacin mixta de gran tamao. Los eclogos
microbianos usan frecuentemente medios de enriquecimiento.
Por ejemplo, para encontrar un microorganismo que degrade un
determinado compuesto qumico txico, se puede inocular la
muestra de suelo en un medio en el cual la nica fuente de
carbono sea dicho compuesto. El microorganismo que prospere
en l podr ser utilizado en biomediacin.

3.2.1.4.

Observacin de Bacterias
El tipo de medio que utiliza el experimentador depende del

microorganismo que est cultivando y el porqu de dicho cultivo.

a) Observacin macroscpica: El tamao de las bacterias impide
verlas a simple vista. Sin embargo, las colonias que forman
sobre medios slidos s son visibles y en ellas se puede estudiar
una serie de caractersticas que nos ayudan a su identificacin. A
nivel morfolgico, podemos estudiar la forma de las colonias, su
tamao, aspecto del borde (liso, rugoso, ondulado, ramificado,
etc.), presencia de brillo, color, etc. Incluso sobre medio lquido
las bacterias producen modificaciones de inters para su
clasificacin y que tienen que ver esencialmente con las
caractersticas de su metabolismo.
b) Observacin microscpica: Puesto que la inmensa mayora de
las bacterias son incoloras, la nica forma de observarlas bien en
el microscopio ptico consiste en incrementar su contraste con
respecto al medio. Esto se consigue mediante su teido con
colorantes o mediante la disposicin de una ptica especial de
contraste, generalmente en fases. Inicialmente se prepara un
frotis partir de medio lquido o dispersando en una gota de agua
una porcin de clulas crecidas en slido, luego se deshidrata el
frotis por calentamiento suave utilizando el reverso de la mano

como control de temperatura tras pasar repetidamente el

portaobjetos sobre la llama del mechero. Tras la fijacin por
calor se procede a la tincin, entonces recin se procedern a
observar las bacterias.
3.2.2. Microorganismos
Los contaminantes ambientales de procedencia biolgica (bioaerosoles)
estn constituidos por las partculas, las molculas de tamao grande o los
compuestos orgnicos voltiles que estn vivos o que proceden de un organismo
vivo. En los bioaerosoles se pueden encontrar los microorganismos (cultivables,
contables y los microorganismos muertos), y los fragmentos, toxinas y partculas
producto de los desechos de todo tipo, cuyo origen es la materia viva.
3.2.2.1.

Bacterias

Por lo general, en ambientes en los que no se ha detectado ninguna

amplificacin

especfica,

las

bacterias

dominantes

deberan

ser

las

correspondientes a la flora bacteriana normal humana, es decir, bacterias Gram

positivo pertenecientes a los gneros Micrococcus y Staphilococcus.
Las concentraciones ambientales elevadas de estos tipos de bacterias, que
se encuentran en la piel y en las secreciones respiratorias, indican que los niveles
de ocupacin son altos y/o que la renovacin del aire es insuficiente.
Si las bacterias dominantes son Gram negativo, eso indicara la existencia
de focos de contaminacin inusuales; por ejemplo, niveles elevados de bacterias
Gram negativo, oxidasa negativa y fermentadoras de la glucosa sugieren un foco
de contaminacin de origen gastrointestinal (extracciones de los lavabos); si las
bacterias encontradas son Gram negativo, oxidasa positiva y sus colonias son de
color amarillo, el foco de contaminacin ms probable son aguas estancadas y
contaminadas.
3.2.2.2.

Endotoxinas

Las endotoxinas son componentes (lipopolisacridos) de las membranas

externas de las bacterias Gram negativas. Son compuestos altamente txicos que
pueden causar fiebre y malestar, alteraciones en el nmero de leucocitos,
alteraciones respiratorias, etc.

3.2.2.3.

Hongos

El origen de los hongos que habitualmente se encuentran en los

ambientes interiores es mayoritariamente el exterior, por lo que preferentemente
se utilizar ste como ambiente control.
Las diferencias en las relaciones entre los hongos del interior y del
exterior dependen, fundamentalmente, del sistema de ventilacin disponible.
Esta relacin es prcticamente idntica cuando el edificio est ventilado de
forma natural, mientras que, en edificios ventilados de forma mecnica, incluso
en los que el sistema de filtracin es deficiente, la concentracin de hongos
encontrados en el interior debera ser inferior a la presente en el exterior. En
cualquier caso, los diferentes tipos de hongos encontrados del interior deberan
corresponder a las especies del exterior propias de la estacin climtica.
Los niveles de hasta 100 ufc/m3 de hongos saprofitos pueden ser
considerados normales, siempre y cuando se trate de ambientes en los que no
exista poblacin con deficiencias o enfermedades del sistema inmunitario.
3.2.2.4.

Micotoxinas

Durante los procesos de destruccin de la materia orgnica, utilizada

como fuente de energa por los hongos, se producen metabolitos secundarios;
algunos de ellos son txicos para las bacterias (antibiticos), mientras que otros
lo son para los animales y los seres humanos (micotoxinas: tricotecenos y
aflatoxinas).
La exposicin a estos compuestos se relaciona, bsicamente, con
ambientes agrcolas y el almacenamiento de grano. Los efectos para la salud que
han sido descritos son: su potencialidad para inducir procesos cancergenos, el
deterioro del sistema inmunitario y daos en diversos rganos como son el
corazn, el hgado o los riones.
En la actualidad se dispone de algunos datos sobre las dosis a las que
algunas micotoxinas producen efectos adversos para la salud.
La identificacin y evaluacin de los riesgos debidos a la exposicin a
micotoxinas es compleja y requiere, en general, del muestreo tanto de los hongos

que las producen como de cada tipo de micotoxinas. El hecho de encontrar

hongos productores de micotoxinas en muestras ambientales no siempre es
evidencia de que exista exposicin a las mismas.
Muchas de las cepas de los hongos denominados toxignicos no
producen micotoxinas de una forma rutinaria y algunos slo las producen en
condiciones de laboratorio. En muestreos ambientales con medios de cultivo
inespecficos, algunos de estos hongos no pueden competir con otras especies de
hongos, por lo que los niveles de hongos toxignicos son inferiores a los niveles
ambientales reales.
No obstante, el hecho de encontrar niveles inusuales de hongos
toxignicos debera ir acompaado del muestreo ambiental de toxinas
especficas.
3.2.2.5.

Protozoos

El tamao de estos organismos hace que su presencia en los bioaerosoles

sea menos frecuente, ya que tienden a sedimentar con organismos patgenos de
este grupo, se deberan analizar sus reservorios (humidificadores, aguas
estancadas), para poder determinar el origen de los problemas y eliminar los
focos de contaminacin.
3.2.2.6.

Antgenos

Desde los aos 20 se han reconocido las alergias al polvo domstico. En

las ltimas dcadas se ha realizado un progreso considerable en la identificacin,
purificacin y caracterizacin de los alrgenos producidos por los caros del
polvo domstico, sobre todo los producidos por las especies del caro
Dermatophagoides.
Algunos autores han propuesto los valores de antgeno de caros en
polvo que pueden causar sensibilizacin y la aparicin de sntomas en personas
sensibilizadas.
Sin embargo, todava no se han propuesto valores lmite de concentracin
para otros antgenos ambientales; no obstantes, debido a que los individuos

sensibilizados reaccionan frente a dosis muy bajas de antgeno, no se debera

aceptar ningn valor de concentracin como seguro para esas personas.
A causa de estos microorganismos en el medio ambiente los seres
humanos sufren diferentes enfermedades:

3.3. Definicin de Trminos

Cultivar un microorganismo: promover intencionalmente el desarrollo de
ste en medios de cultivo y condiciones de laboratorio controladas.
Cultivo: la poblacin de microorganismos desarrollada en un medio.
Cultivo puro o axnico: cuando ste contiene una sola especie de
microorganismo.
Cultivo mixto: cuando

ste contiene ms de una especie de

microorganismos.
Cultivo

tipo:

cuando

ste

contiene

una

especie

conocida

de

microorganismos y es conservada en el laboratorio para realizar diversos ensayos y

estudios.
3.4. Hiptesis
Se plantea la probable contaminacin atmosfrica a las afuera de la
Universidad Nacional Mayor de San Marcos (cruce de la Av. Venezuela con la Av.
Universitaria), y para averiguarlo se entiende que ste lugar es uno de los focos ms
infectados por agentes biolgicos que se propagan por el aire, generando diversas
afecciones en el ser humano y su entorno.

4. METODOLOGA
4.1. Tipo de Investigacin
La investigacin es de tipo experimental debido a que deseamos determinar
la existencia de microorganismos bacterianos y fngicos en los exteriores de la
Universidad Nacional Mayor de San Marcos.
4.2. Tcnica y Procedimiento
4.2.1. Tcnicas
Las tcnicas utilizadas para nuestra investigacin fueron los medios de
cultivo, la tincin de Gram y azul de metileno.
Medios de Cultivo: Es un sustrato o solucin de nutrientes en los que
crecen y se multiplican los microorganismos en el laboratorio, con el objeto de
aislar diferentes especies bacterianas, proceder a su identificacin y llevar a cabo
una serie de estudios complementarios.
En la primera parte de nuestro trabajo utilizamos los medios de cultivo:
Triptina Soya Agar (TSA) y Saboraud.
a) Agar Triptina Soya: Medio utilizado para propsitos generales,
favorece el desarrollo y aislamiento de una gran variedad de
microorganismos exigentes y no exigentes como son los aerobios, y
anaerobios facultativos y estrictos. La aportacin de triptena y
peptonas hace el medio muy nutritivo por el suministro de nitrgeno
orgnico, particularmente aminocidos, vitaminas, minerales

pptidos de cadena ms larga. La peptona de soya en el medio es

fuente de hidratos de carbono que permite el cultivo de una gran
variedad de grmenes aerobios y anaerobios que crecen rpidamente,
as como los del gnero Candida. Tambin permite el crecimiento de
algunos grmenes exigentes como estreptococos, pneumococos,

Brucella, corinebacterias, Erysipelothrix y Pasteurella. El cloruro de

sodio mantiene el balance osmtico y el agar es el agente que le da
solidez.
b) Agar Saboraud: Es un medio utilizado para el cultivo, recuento,
identificacin, conservacin de hongos saprofitos y patgenos, y
levaduras. Tiene componentes como la peptona de carne, la triptena
y la glucosa que son nutrientes necesarios para el desarrollo de
microorganismos. El alto contenido de glucosa y el pH cido,
favorecen el crecimiento de hongos y levaduras y as evitar la
contaminacin por bacterias, el agar es el agente que le da
consistencia.
En la segunda parte de nuestro trabajo para identificar los
microorganismos utilizamos la tincin de Gram y el azul de metileno.
Tincin de Gram: Esta tcnica se utilizo para el reconocimiento de las
bacterias y es la ms utilizada en los laboratorios de bacteriologa, tambin nos
permite, de acuerdo con la estructura y grosor de la pared bacteriana, agrupar las
bacterias en Gram positivas (poseen una capa gruesa de peptidoglucano y
carecen de membrana externa) y en Gram negativas (tienen una capa ms
delgada de peptidoglucano y poseen una membrana externa). A continuacin sus
pasos:

Tincin inicial; las clulas se tien con cristal violeta (colorante

primario), aqu todas las clulas se tien de morado.

Mordente; se adiciona yoduro (lugol) que reacciona con el cristal violeta

y forma un complejo cristal violeta-yoduro.

Decoloracin; se adiciona un solvente no polar, el cual acta lavando el
complejo. De esta manera las bacterias Gram positivas continan
moradas y las Gram negativas quedan incoloras. Este es un paso crtico
pues si se exagera la tincin, decolora las Gram positivas y si se hace

dbil no decolora a las Gram negativas.

Contratincin; se vuelve a teir con safranina o fucsina, de manera que
las bacterias Gram negativas, que haban sido decoloradas, se tien de
rosado a fucsia segn el colorante empleado; en tanto, las bacterias Gram

positivas no se afectan con la contratincin y permanecen moradas

debido a lo intenso de esta coloracin.

Tincin de Azul de Metileno: Su nombre cientfico es Cloruro de

Metiltionina y posee caractersticas tincionales suficientes que nos permite
observar cada uno de los componentes fngicos y apreciar de forma fcil las
estructuras con una alta calidad y contraste para una adecuada identificacin.
Este colorante tiene componentes qumicos que tien el citoplasma y la quitina
presente en las clulas fngicas.
4.2.2. Materiales y Equipos

Autoclave (Fig. 1.1)

Microscopio (Fig. 1.1)

Asa de col (Fig. 1.1)

Porta laminilla

Mechero de ron (Fig. 1.1)

Alcohol acetona (Fig. 1.1)

Cristal violeta (Fig. 1.1)
Lugol
Safranina (Fig. 1.1)
Azul de Metileno (Fig. 1.1)

Agar Saboraud (Fig. 1.2)

Agar TSA (Fig. 1.2)

4.2.3. Procedimientos
4.2.3.1. Recoleccin de la Muestra (Fig. 1.3)
Las muestras se tomaron en el ambiente externo de la
Universidad Nacional Mayor de San Marcos, el lunes 9 de mayo del
2016, en el cruce avenida Venezuela y Universitaria.
4.2.3.2.

Aislamiento de Microorganismos
La placa petri con el Agar TSA se incub a 37 por un lapso de

tiempo de 24 a 72 horas; mientras la de Agar Saboraud tambin lo

colocaron en autoclave por 24 horas y luego a temperatura ambiente por

6 das.

4.2.3.3.

Identificacin de Bacterias (Fig. 1.4)

Se esteriliza el asa de col y la laminilla para evitar

microorganismos externos en los resultados, se coge una colonia de

bacterias del medio de cultivo TSA con el asa de col y se esparce en la
laminilla conjuntamente con una gota de agua o suero fisiolgico. A
continuacin seguimos los pasos de la Tincin de Gram.
1 Seguidamente se agrega a la muestra cristal violeta por un
minuto. Se lava con abundante agua
2 Se adiciona lugol por un minuto. Se lava con abndate agua
3 Se aade alcohol acetona para decolorarla en 30 segundos. Se
lava con abundante agua
4 Se le agrega safranina por 30 segundo Despus se deja secar
y pasa a la observacin en el microscopio a un objetivo de 100x a la
muestra se le agrega una gota de aceite de inmersin.
4.2.3.4.

Identificacin de Hongos (Fig. 1.5)

Se esteriliza el asa de col y la laminilla para evitar

microorganismos externos en los resultados, se coge una colonia de

bacterias del medio de cultivo de Agar Saboraud con el asa de col y se
esparce en la laminilla pero en este caso de manera previa se agreg el
azul de metileno.
Despus se deja secar y pasa a la observacin en el microscopio
a un objetivo de 100x a la muestra se le agrega una gota de aceite de
inmersin.

5. RESULTADOS
TSA (Tripticasa Soya Agar) (Fig. 1.6)
En la muestra de TSA pudimos observar que hubo crecimiento
bacteriano, identificndose dos tipos de colonias, de esos cultivos tomamos dos
muestras las cuales colocamos en una lmina portaobjetos cada una y luego fue
coloreada con Tincin Gram, observndose:
La pared celular bacteriana de una de las muestras se tio de color
morado lo que significa que las bacterias presentes en esa muestra son de
tipo Gram positivo.
La pared bacteriana de la siguiente muestra tomo una coloracin rosada,
lo que nos indica que se trata de una bacteria de tipo Gram negativa.
Agar Sabouraud (Fig. 1.7)
En la muestra de agar Sabouraud se observ el crecimiento de hongos,
tomamos una muestra de este cultivo, lo colocamos en una lmina portaobjetos y
visualizamos en el microscopio. En el caso de estos no se les pudo hacer una
clasificacin debido a que se necesitara ms tiempo y pruebas de mayor rigor.
6. DISCUSIN
La contaminacin ambiental es un problema que afecta a todos, hoy en
da los ambientes contaminados son mucho ms amplios y diversos pudiendo
encontrar bacterias y hongos en el aire de nuestros hogares, centros de labores,
centro de estudios, etc.
Los resultados obtenidos en el laboratorio confirman aquellos
antecedentes tericos hallados en nuestra investigacin. La presencia de agentes
biolgicos como contaminantes y generadores de enfermedades sobre todo de
tipos respiratorios y alrgicos que se propagan beneficiados por las condiciones
climticas (humedad y temperatura) de esta ciudad.

7. CONCLUSIONES
El anlisis por medio de medios de cultivo Agar TSA y Agar Saboraud resulta un buen
mtodo de evaluacin en cuanto a bacterias u hongos se refiere.
Los organismos encontrados en las muestras requieren un estudio posterior para
identificarlas adems de que esto ayudara a determinar la causa de las mismas.
La contaminacin area en las afueras de la Universidad Nacional Mayor de San
Marcos nos indica que hay alta probabilidad de que se contraiga alguna enfermedad.
La tcnica del colorante de Gram resulta ser un mtodo efectivo para diferenciar los
diferentes tipos de organismos presentes en los anlisis.
El conocimiento de la contaminacin por microorganismos en los alimentos es
fundamental para los consumidores, ya que de esta forma se pueden prevenir
enfermedades.

8. Bibliografa
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las enfermedades infecciosas. Editorial Panamericana. 2ed. Mxico 2001.pg.257-405.
reas Limpias y ambientes controlados asociados- Control de biocontaminantes.
Parte

1:

Principios

mtodos

http://www.ispch.cl/sites/default/files/documento_tecnico/2011/01/Muestreo
%20Microbiol%C3%B3gico%20de%20Aire.pdf

generales.

9. ANEXOS
(Fig. 1.1)

Autoclave

Microscopio

Mechero

Asa de col

Azul de metileno

(Fig. 1.2)

Agar TSA

Agar Saboraud

(Fig. 1.3)

(Fig. 1.4)

Agregar Lugol
Agregar Safranina

(Fig. 1.5)

Agregar Azul de
metileno

(Fig. 1.6)

GRAM POSITIVOS

GRAM NEGATIVOS

(Fig. 1.7)

HONGOS CON HIFAS