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SPECTROPHOTOMETRIE ATOMIQUE

DABSORPTION-EMISSION


Introduction

1 Principe


1.1 Excitation des atomes
1.2 Retour ltat fondamental

2 Spectromtrie dabsorption atomique en flamme (SAAF)


3 Spectromtrie dabsorption atomique lectrothermique (SAAE)
4 Spectromtrie dmission atomique en flamme (photomtrie de
flamme = PF)
5 Spectromtrie dmission atomique en plasma coupl induit
haute frquence

Dfinitions

Strectroscopie = Terme gnral qui est utilis pour dcrire des mthodes danalyse base sur
labsorption, lmission ou la fluorescence de certaines molcules. (Rc = il)

Spectromtrie Mthodes qui met en uvre un lment dispersif. (Rc nest pas lil)

Mthodes spectroscopiques = mthodes bases sur linteraction des radiations


lectromagntiques avec la matire

Spectre = graphique qui reprsente labsorption, lmission ou la fluorescence en fct de la


longueur (ou du nombre donde pour lIR)
o Spectre continu bande continu de longueur donde (soleil)
o Spectre discontinu :
spectre de raies / atomes
spectres de bandes / molcules

Introduction

Mthodes danalyse qui permet la dtection et la quantification de la grande majorit des


lments de la classification priodique.
Met en jeu des atomes libres ltat de vapeur (ne faisant plus partie dune molcule)
Lappareillage va donc :
o produire une vapeur atomique partir de lchantlllon.
o Induire la destruction de la molcule analyser pas dinformation sur la nature des
molcules initiales (sauf couplage)
Possibilit de doser simultanment toutes les formes dun mme lment

1 Principe gnral

Labsorption et lmission atomique sont 2 facettes dune mme proprit des atomes nonc par
Kirchhoff : un corps, soumis certaines conditions dexcitation, ne peut mettre que des
radiations quil est susceptible dabsorber dans les mmes conditions .
Ainsi, si on introduit du sodium dans une flamme et que lon tudie le spectre de la lumire mise,
on met en vidence une raie brillante caractristique du sodium 589nm.
Si on tudie le spectre dune source continue (lampe incandescence) traversant la flamme
prcdente en prsence de sodium, on observe une raie noire lemplacement de la raie brillante
prcdente.
o

Raie dabsorption de latome Spectromtrie dABSOPTION atomique


Photomtrie de flamme
Torche plasma

Raie dmission de latome Spectromtrie dEMISSION atomique


SAAF
SAAE

1.1 Excitation des atomes

A la diffrence de la spectro molculaire, ici la source dexcitation peut tre :


o Chaleur (/ spectro dmission)
o Lumire (/ spectro dabsorption)
o Choc

Lorsque quun atome ltat fondamental va recevoir un apport dnergie correspondant ces
transitions lectroniques, llectron priphrique peut passer sur une orbitale plus externe (en fct
de lenergie) EXCITATION
Absorption ou mission une longueur donde prcise Haute spcificit, mme si milieu
complexe.
NB : le nombre datomes ltat excit est trs infrieur au nb datomes ltat fondamental. La
formule de Boltzmann permet de calculer le raport entre le nb datomes dans ces 2 tats :

Ce rapport va donc varier pour chaque atome en fct de la T dexcitation :

On peut sapercevoir que pour les non-alcalinoterreux, la quantit datome excit ces
tempratures nest pas suffisantes pour les tudier en photomtrie de flamme (mission).
Nanmoins, si la T est nettement plus leve (torche plasma), tous les lments sont alors
analysable.

1.2 Retour ltat fondamental

Latome ne reste ltat excit que 10-9 secondes


Le retour ltat fondamental saccompagne dune libration dnergie gale la diffrence entre
2 niveaux lectroniques.
Elle peut se faire de manire non radiative (si excitation = choc), ou radiative EMISSION du
rayonnement de longueur donde caractristique

2 Spectromtrie dabsorption atomique en flamme (SAAF)


2.1 Principe

Un chantillon liquide est introduit sous forme darosol dans une flamme
Lors de la traverse de la flamme, les atomes ltat fondamental vont absorber le rayonnement
spcifique mis par une source lumineuse.
La mesure de cette absorption (rapport des intensit incidentes et transmises), est proportionnelle
la quantit datomes de llment doser et permet donc de dterminer la concentration de
llment dans la solution par rapport une gamme de calibration.
Lintensit de labsorption dpend directement du b de particules absorbant la lumire selon la loi
de BEER-LAMBERT A = . c . l

2.2 Appareillage

Systme dintroduction de lchantillon :


o Nbuliseur pneumatique aspire lchantillon et le fragmente en fines gouttelettes
o Larosol form arrive dans une chambre de nbulisation qui limine les gouttelettes les
plus grosses

Atomiseur :
o Constitu par un bruleur fente
o Aliment par un mlange air/actylne ou air/protoxyde dazote (N2O)
o Production dune flamme laminaire
o En modifiant les dbits de gazs, il est possible dobtenir une flamme rductrice ou
oxydante selon les besoins danalyses.

Une source de rayonnement spcifique de llment doser :


o Lampe cathode creuse :
Remplie dargon sous faible pression et comporte 2 lectrodes.
La cathode est constitue de llment doser ou dun alliage (utilisable pour pls
lments)
Mise sous tension de la lampe ionisation des atomes dargon qui vont venir
percuter la cathode provoquant lexcitation des atomes de celle-ci
Ces derniers vont alors mettent un rayonnement intense dirig vers la flamme
quil traverse longitudinalement EXCITATION des atomes de lchantillon.
o

Lampes EDL :
Ampoule en quartz contenant un sel mtallique
Soumise un champ lectromagntique induit par une bobine dinduction
Permet de diminuer la largeur des raies et augmente lintensit
Surtout utilise pour les mtallodes tels que lAs ou le Se.

Un systme optique :
o Permet de focaliser le faisceau et de slectionner les longueurs donde grce un
rseau.
o Un photomultiplicateur permet de transformer lnergie lumineuse en courant
lectrique.

2.3 Phnomne intervenant dans la flamme

Lors de la traverse de la flamme, lchantillon va subir une succession de transformations :


o Evaporation du solvant
o Fusions des sels
o Dissociation des molcules
o Production datomes libres
o Excitation
o Ionisation

Ces 2 derniers phnomnes sont dfavorables car ils diminuent le nb datomes ltat
fondamental et donc les possibilits dabsorption.
Lionisation obit la loi daction de masse elle diminue donc avec la concentration en
lectrons, mais augmente quand lnergie dionisation diminue ou quand le T augmente.
Lorsque due lon dose des lments facilement ionisable, il est intressant dajouter lchantillon
un lment plus facilement ionisable (Csium par ex.) qui dplacera lquilibre prcdent Cest
ce que lon appelle un tampon dionisation.

2.4 Interfrences

Interfrences spectrales = recouvrement des raies atomiques :


o Absorption par des molcules (halognures) Correction par une lampe deutrium
o Diffusion de la lumire par des particules solides idem
o Emission de lumire par la flamme elle mme Correction par un systme dispersif.

Interfrences dues au transport de lchantillon :


o Viscosit d lchantillon Utilisation dune pompe pristaltique
o Tension de surface (modifie la taille des goutelletes)

Interfrence en phase vapeur :


o Lies la production datomes excite ou dions.

2.5 Application / Avantages

La plus ancienne des techniques, mais parfaitement approuve et rependue (mais svt remplace
par la SAAE voir le plasma).

Avantage :
o Grande simplicit dutilisation et rapidit dutilisation
o Prix relativement modeste

Inconvnients :
o Mais peu sensible (seuil de dtetction = 0,1 10 mg/L CV < 1%)
o Ne permet de doser que qq lments dans les milieux biologiques :
Ca, Fe, Mg, Li, Cu, Zn
o Consomme un grand volume dchantillon (jusqu 1mL)
o Technique mono-lmentaire (mais peu gnant en biologie)

3 Spectromtrie dabsorption atomique lectrothermique (SAAE)


3.1 Principe

Idem SAAF, mais le bruleur est ici remplac par un dispositif de chauffage lectrothermique
constitu dun four graphite chauffe par effet joule.
Lanalyse est ici discontinue contrairement la SAAF
Toutes les tapes depuis lintroduction de lchantillon jusqu latomisation (pdt laquelle se fait la
lecture) vont ici tre contrles au niveau de la temprature grce la programmation thermique
dtapes successives.

3.2 Appareillage

Introduction de lchantillon :
o Echantillon = 5 20 L
o Introduction en une ou pls fois dans le four grce un capillaire
o Certains dispositifs permettent lanalyse dchantillons sous forme de suspension
(poudres) ou solides.
o Lchantillonneur automatis permet le dpt simultan ou squentiel de diluant, dtalons
ou de ractifs tels les modificateurs de matrice.

Atomiseur :
o Le four est un cylindre creux en graphite de 2 3 cm de long et de 0,5 cm de diamtre,
muni dun orifice sur le dessus pour lintroduction de lchantillon.
o Tous les fours sont revtus dune couche de carbone pyrolytique dont la structure
cristalline rend le four moins poreux et plus rsistant lusure.
o Certains fours comportent en plus une plate-forme dans le four, pour recevoir lchantillon
(sinon lchantillon est directement dpos sur les paroi du four).
o Le four est plac entre 2 lectrodes de graphite qui assure le chauffage par effet joule
gradient de T (le centre est + chaud) (= inconvnients, car lchantillon nest vaporis
homognement)
o Le four est constamment balay par un courant dargon (sinon air ou oxygne qui le
protge de laction de lair aux T leves).

3.3 Programme thermique et phnomne intervenant dans le four

Dsolvatation (90-200C)

Pyrolyse (300-700C) et minralisation (500-1300C) :


o Elimination les composs de la matrice qui entraineraient des absorptions non spcifique
lors de latomisation ( !! pertes en analyte)

Atomisation (1000-2900C) :
o Etape ou lieu labsorption atomique
o Le programme comprend une dure et une T adapte chaque lment et chaque
milieu analys (volatilit variable).
o NB : la nature de la matrice influe normment sur les processus de minralisation et
datomisation

Nettoyage du four (2700-2900C) :

3.4 Interfreces et modificateurs de matrice

Lies la matrice :
o Correction = Modificateurs de matrice :
Forment un complexe avec les composs de la matrice qui va dcomposer un
temprature plus basse Devient liminable
Ils sont introduit en mme temps que lchantillon
Ex : NH4OH Elimination de NaCl de la matrice
Lexcs de modificateurs de matrice est aisment dcompos basse
temprature.
o

Correction = Modificateurs danalyte :


Forment des complexes thermiquement plus stables avec les composs de la
matrice, autorisant des T e minralisation plus leves.
Ex : palladium+++, Ni, Cu, (PO3Al pour le Pb et le cadmium).
Ces composs sont efficaces des concentrations trs nettement suprieures
celles de llment doser

NB : les modificateurs de matrice sont indispensables en SAAE !

Lies au four :
o Si chauffage brutal pdt la phase datomisation passage en vapeur datomes libre, de
molcules non dissocies, de fumes et de particules absorption non spcifique
o Correction :
Importance du pr-ttt de lchantillon (sparation sur colonne, chlation,
prcipitation)
Optimiser les tape de minralisation (limination de NaCl)

Correction du bruit de fond Mesures de labsorption non-spcifique :


o Lampes deutrium (faisceau align celui de la cathode creuse)
o Correction par effet ZEEMAN (champ magntique) +++

3.5 Applications / Avantages

Sensibilit >>> SAAF (seuil de dtection : 0,1 100 g/L CV = 1,5%)


Spcificit
Faibles volumes dchantillon
Cot raisonnable
Emploi ais
Analyse de la quasi-totalit des lments dintrt clinique + les lments prsent dans le sang
des concentrations < 20 nmol/L (Cr, Co, Ni, Mo, V, Mn).
Technique mono-lementaire (certains appareils rcents permettent lanalyse simultane de 4
lments.

Technique trs rependue en raison du cot lev de la torche plasma.

4 Spectromtrie dmission atomique en flamme (photomtrie de


flamme = PF)
4.1 Principe

Un chantillon liquide est introduit sous forme darosol dans une flamme qui va atomiser
lchantillon et exciter les atomes pour les faire passer ltat excit.
Lintensit de la lumire mise lors du retour ltat fondamental est proportionnelle la
concentration de llment dans la solution.

4.2 Appareillage

Similaire la SAAF
Une pompe pristaltique permet de daspirer simultanment lchantilon, un diluant et un standard
interne
La flamme est le plus souvent produite par un mlange air/propane (#1900C).

4.3 Phnomne intervenant dans la flamme

Idem SAAF

4.4 interfrences

La temprature relativement basse de la flamme limite lmission due ax autres lments Un


systme de filtres est donc suffisant pour slectionner les longueurs donde.
Lionisation est un phnomne parasite mais reste mineur cette T (<2% des atomes)
Utilisation dun standard interne pour palier aux fluctuations de la pompe et de a flamme (ex :
Utilisation du Li pour le dosage du Na et du K) (le Cesium peut tre utilis pour ces 3 lments).

4.5 Application / Avantages

La faible proportion datomes ltat excit limite ltude de lmission atomique de la PF aux
alcalin voire aux alcalinoterreux :
o Na, Li, K (seuil de dtection = 0,1 10 mg/L), aussi Ca++ et Mg++ mais moins
performant.
Dosage dans le sang ou dans les urines
Technique en retrait depuis lapparition dlectrodes spcifiques du Na+ et du K+

5 Spectromtrie dmission atomique en plasma coupl induit


haute frquence (ICP-OES)
5.1 Principe

Identique la PF mais ici, la source thermique est remplace par du plasma dargon (bc plus
nergtique !!!)
Plasma = gaz totalement ionis, lectriquement neutre
Le plasma est cre par un cham lectromgntique haute frquence produit par une bobine
dinduction alimente par un gnrateur haute frquence.
Un flux dargon qui traverse ce champ est partiellement ionis et forme le plasma.
Lnergie du gnrateur va acclrer les atomes et les lectrons qui subissent de nombresuses
collisions provoquant lchauffement du plasma, dont la T varie de 3000 10 000 K !
Dans de telles conditions de T, les phnomnes dexcitation de la pluspart des lments sont
conserns Analyse de tous les lments possible.



5.2 Appareillage

Nbuliseur :
o Lchantillon liquide est introduit dans le plasma sous forme darosol grce au nbuliseur
coup une chambre de nbulisation
o Choix du type de nbuliseur en fct de la nature de lchantillon, le volume, et la sensibilit
recherche.
Nbulisateurs pneumatiques
Nbulisateurs ultrasoniques (quartz piezo-electrique)

Torche plasma :
o Permet de crer le plasma partir de largon
o Constitue de 3 tubes concentriques :
Injecteur central vhicule larosol jusqu la base du plasma
Tube intermdiaire
Tube externe
o Le flux daron plasmagne circule dans le tube intermdiaire+externe un dbit de
12L/mn
o Il cre le plasma et refroidit le tube externe en lisolant du plasma.
o Lextrmit suprieure de la torche est place lintrieur des spires de la bobine
dinduction Cest ce niveau que se forme le plasma.

Optique et dtecteur :
o Une partie du rayonnement mis par le plasma est focalis grce une lentille dans le
systme optique
o Le faisceau arrive sur un rseau qui permet de sparer les diffrentes .
o La lumire est ensuite capte par un dtecteur, qui peut tre :
Un photomultiplicateur (1 lecture la fois)
Un capteur CCD (Coupled Charge Device) (analyse de lensemble du spectre)

























5.3 Applications / avantages

De nbs lments sont accessibles cette mthode, (tous en biologie !)


Trs grande linarit (intressant si les concentrations tudies sont trs variables)
Bc moins sensible aux effets de matrice que la SAAE
Sa sensibilit se situe entre la SAAF et la SAAE.
Trs onreuse
Cependant, la limite de dtetction de nb lments est encore trop leve pour permettre leur
dosage aux concentrations physiologique (Se, Co, Cr, Mn, Ni)
Cest pourquoi cette mthode reste peu rpandue dans les labo de biologie clinique.

Conclusion
Toutes techniques ne fournissent aucune indication sur la forme chimique des lments doss
(Ex : Cr III et Cr VI / toxicit)
Interet de la chromatographie et des couplages.


Choix de la mthode

Interfrences
(spcificit)

Vitesse de
lanalyse


+++


++++


+/-


La +
longue

Alcalins
Li, Na, K, Rb, Cs

Calcium (forme
facilement des oxydes)
Tous les lments du
tableau priodique



++



++++
Car
atomisation
de tout ce qui
est dans la
torche




++

Nature de llment

Sensibilit

Prcision

Photomtrie
de flamme
SAA-flamme

Alcalins
(Li, Na, K)
Mtaux de transition
(Fe, Cu, Mn, Co)

SAA-four

Mg, Al, Si
Mtaux de transition
Mtaux lourds

SEA-flamme

SEA-ICP

Cot

--

-

Nombre ou type
dchantillons


Analyses
ponctuelles ou
rptes sur un
lment
Faibles volumes
Cas difficiles
Faible teneur en
lment dos
Analyses
ponctuelles ou
rptes sur un
lment

Routine
ou
multilmentaire