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Métodos de Separación Cromatografía

Cromatografía “Like light rays in the spectrum, the different components of a pigment
mixture, obeying a law, are resolved on the calcium carbonate column and then
can be qualitatively and quantitatively determined. I call such a preparation a
chromatogram and the corresponding method the chromatographic method”.
Mikhail Tswett, 1906

FASE
Técnica para separar ESTACIONARIA
componentes de una mezcla Líquido La cromatografía implica un
(soportado) CGL
por su diferente velocidad proceso entre fases
Gas CG Sólido (interfases) y, por ello, se
de avance a través de una poroso CGS verá muy favorecido cuando
FASE
FASE ESTACIONARIA, cuando MÓVIL Líquido hay mucho contacto entre
son transportados por una CLL ambas fases. Esto se
(soportado)
FASE MÓVIL. Líquido CL consigue trabajando con FE
Sólido muy finamemente divididas
poroso CLS
(cuanto más, mejor).
Métodos de Separación Cromatografía
Tipos de Cromatografías
Retraso diferencial
de los solutos Clase de Reparto/Interacción TIPO DE CROMATOGRAFÍA Fase Estacionaria SUBTIPO
promovido por …
Polar FASE NORMAL
Solubilidad REPARTO
Apolar FASE INVERSA
Reparto
Tamaño PENETRABILIDAD

Aniónica INTERCAMBIO DE CATIONES


Electrostática INTERCAMBIO IÓNICO
Catiónica INTERCAMBIO DE ANIONES

Hidrofóbica INTERACCIÓN HIDROFÓBICA


Interacción
Afinidad Biológica AFINIDAD

ej.: Cromat. sobre Hidroxiapatito


Inespecífica ADSORCIÓN o Cromat. sobre colorantes
inmovilizados

Modos Cromatográficos
Métodos de Separación Cromatografía

CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA

Resolución Cromatográfica

Tiempo de Retención
Métodos de Separación Cromatografía
CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA

Bomba
peristáltica

Colector de
fracciones
Métodos de Separación Cromatografía
CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA
Perfil de Elución

Midiendo manualmente
la absorbancia de las fracciones

espectrofotómetro

fracciones
El volumen de las
fracciones incide
sobre la
resolución final
Métodos de Separación Cromatografía
CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA

Mejora de la resolución mediante


modificación del gradiente de elución

Elución en
Gradiente

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