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Presentado por:
Hernán Mauricio Rivera Escobar
PROFESOR:
DR. JAIME CASAS MATEUS
Fe = (E / d) * q
Fr = 6 Π r η v
(E / d)* q = Fr = 6 Π r η v
La relación (v / E) reconocida como movilidad electroforética (µi) equivale a:
q/6Πrηd
µi = K*x q/M
Donde M refiere al peso molecular. Se sustituye por r ya que existe relación directa
entre el radio y la masa de la partícula.
Ahora bien, si el valor absoluto de los cocientes es el mismo pero la carga de signo
contrario, la magnitud de migración será la misma pero con dirección contraria del punto
de aplicación.
V=µeE
PAGE-nativa
SDS-PAGE
Isoelectroenfoque
El agar- agar es un polímero de origen natural que se extrae de determinadas algas rojas,
por ejemplo de Gelidium. Es un polímero lineal formado por la repetición de unidades del
disacárido agarobiosa, cuya estructura es:
Figura 1. -(1-3)-b-D-Galactosa-(1-4)[3,6 anhidro]-a-L-galactosa-
Las cadenas resultantes son de longitud elevada. Se ha estimado que su peso molecular
medio es del orden de 120000, es decir, alrededor de unas 400 unidades del disacárido
fundamental. Puede presentar grupos sulfato, piruvato o metoxilo en mayor o menor grado.
La electroforesis en gel de agarosa, que separa a las lipoproteínas por carga y por
tamaño, es, entre otros, un método aplicable para el diagnóstico de la
disbetalipoproteinemia, ya que detectaría la ausencia de LDL característica de esta
dislipidemia. La ausencia de ß-lipoproteína no puede detectarse en una electroforesis
corriente, dado que se encuentra encubierta por la lipoproteína de movilidad beta, que es
patognomónica de la hiperlipemia tipo III. La relación colesterol-VLDL / triglicéridos
plasmáticos es muy útil para documentar esta hiperlipemia. Cuando la relación es mayor
0,3 se puede afirmar que el individuo padece una hiperlipemia tipo III.
PROTOCOLO DIAGRAMA
3.
11.
RESULTADOS
1 2 3 Patrón 5 6 7
OBJETIVO No.3. AVERGUAR LOS PERFILES ELECTROFORETICOS DE
LIPOPROTEÍNAS SÉRICAS EN SUERO DE ADULTOS SANOS
BIBLIOGRAFIA:
• www.saegre.org.ar/docs/lipidos_DiagnosticoBioquimicoDislipemiasActaLat_.rtf
INTRODUCCION
Cada una de estas proteínas ocupa un espacio y cumple una función importante en el
organismo del ser humano. A continuación se enuncian y se muestran las principales
características.
ALBUMINA: Su principal función es la estabilización del volumen sanguíneo y la
regulación del intercambio de fluidos vasculares.
ALFA - MACROGLOBULINA (α 2 M): Responsable del 25% del valor de la fracción alfa-
2 elevada en síndrome nefrótico, gastroenteropatías con pérdida de proteínas, cirrosis
hepática y diabetes mellitus.
IgA: Normalmente responsable del 12% del valor de gamma. Esta fracción puede
estimarse observando el grado de depresión entre beta-2 y gamma. Sus componentes
mejor conocidos son antitoxina, aglutininas, antibacterianas, isoaglutininas y
crioaglutininas. Se observa marcadamente elevada en cirrosis hepática y
moderadamente elevada en endocarditis bacteriana sub-aguda, tiroiditis autoinmune,
linfogranuloma venéreo y varias enfermedades del colágeno.
IgG: Normalmente responsable del 85% del valor de gamma. Una buena forma de
estimarla es observando la altura del pico gamma. Un poco a la derecha del centro.
Contiene anticuerpos contra bacterias, virus y toxinas. Elevación se observa en
numerosas enfermedades sub-agudas crónicas inflamatorias y proliferativas, incluyendo
neumonías, tuberculosis, cistitis, pielitis, colecistitis, endocarditis, procesos poli artríticos,
enfermedades del colágeno, triquinosis, mononucleosis infecciosa, psitacosis, tifus, sífilis
y hepatitis viral. Estas elevaciones se observan en todas las curvas y no deben
confundirse con aquellas que se muestran en una sola zona estrecha y que representa
gamopatías monoclonales.
Como se menciono anteriormente, las fracciones proteicas del suero que se separan
por electroforesis en acetato de celulosa son la albúmina y las globulinas α , α , β y γ.
1 2
En condiciones normales, los porcentajes de cada fracción que se obtiene con el
análisis densitométrico de las tiras, son los siguientes:
PROTEÍNAS SÉRICAS %
Albúmina 53-67
Globulinas α 2,5-5
1
Globulinas α 7-13
2
Globulinas β 9-14
Globulinas γ 10-21
MATERIAL Y REACTIVOS
Material
- Tiras de acetato de celulosa - Placa de vidrio
- Papel de filtro - Aplicador
- Cubeta de electroforesis - Pinzas
- Fuente de poder
Reactivos
-Tampón: ácido bibarbiturico + H2O dla - pH=8,6
5.4019 g dietilbarbiturico sódico
300 ml acido barbitúrico
H2O destilada, desionizada
l. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
PREPACION
Cuando una molécula cargada se coloca en un campo eléctrico se moverá hacia uno u
otro electrodo dependiendo de:
1) Carga eléctrico
2) Tamaño
3) Intensidad del campo eléctrico
4) Temperatura del medio
(-)
M1 M2 P M3
(+)
Sus puntos isoeléctricos están entre 4,9 (Albúmina) y 7,4 (Gamma-globulinas). Al realizar
la electroforesis con un tampón de pH = 8,6, todas las proteínas del suero tendrán carga
negativa.
La albúmina, al tener el punto isoeléctrico más alejado del pH, tiene más carga negativa y
avanza más rápido, quedando más cerca del polo positivo que la gamma-globulina, que
migran muy poco por ser el pH próximo a su pI. Las restantes proteínas séricas quedan
situadas entre estas dos.