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  .

Conjunto de pruebas cuyo objetivo es evaluar la calidad sanitaria de productos farmacéuticos

(materias primas, productos intermedios y terminados), mediante el recuento de
microorganismos mesofilicos aerobios, hongos filamentosos y levaduras; asi como, la investigación
de microorganismos objetables en dichos productos.


   

—Ê Vas muestras deben de trabajarse bajo condiciones asepticas

—Ê ½l tiempo transcurrido desde la preparación de la primera dilución hasta su incorporación
con el medio de cultivo no debe de exceder de 1h.
—Ê Vas muestras de prueba deben, incubarse de 30°C a 35°C durante 24 h a 48 h, a menos
que se especifiquen otras condiciones.

u  
  
    .

1.- solución amortiguadora de fosfatos pH 7.2

Solución concentrada.

Fosfato monobásico de potasio 34.0g

Agua purificada 500mV

½n un matraz volumétrico de 1000mV, disolver el fosfato en el agua y ajustar el pH a 7.2 +/-0.1 con
una solución de hidróxido de sodio 1.0N (aproximadamente 175mV) llevar a volumen, mezclar,
envasar y esterilizar. Almacenar en refrigeración.

u    

Cloruro de sodio 8.5g

Agua purificada 1000mV

c   

Aquí lleva los medios͙ no lo pongo porque es extenso͙

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Staphylococus aureus ATCC 6538P

Psudomonas aeruginosa ATCC 25619

½scherichia coli ATCC 10536

Salmonella typhi ATCC 6539 o Salmonella typhimurium NCTC 6017 o CIP 8039
   

 

A partir de cultivos de 18 a 24 horas de incubación en caldo soya tripticaseina, de cada uno de los
microroganismos control, preparar diluciones decimales en el diluyente apropiado por lo menos
hasta 10ª la menos 6.

Inocular 1.0mV de la suspensión que contiene 1000UFC/mV en la primera dilución del producto,
preparada como se indica en la sección de investigación de microorganismos objetables, continuar
con el procedimiento para cada uno de los microorganismos control.

c 

Va tome de muestras debe de seguir un plan de muestreo bien definido, este debe considerar:
tamaño de lote, características del producto, riesgo a la salud y su nivel de contaminación
esperado. Va muestra de producto para cada determinación no debe de ser menor de 10g o 10mV.

 


Preparación de la muestra. De acuerdo a las características físicas de la muestra elegir el método

adecuado para obtener un solución, suspensión o emulsión sin alterar el numero y calse de
microorganismos presentes en el producto.

Vos métodos de preparación de la muestra se describen a continuación, constituyes la primera

dilución del producto (10ª la menos 1), dilución que puede prepararse con solución diluida de
fosfatos 7.2.

   
  !pesar o medir exactamente 10g o 10mV de la muestra, transferirlo
a 90mV del diluyente seleccionado adicionado con polisorbato 20.

Recuento de microorganismos mesofilicos aerobios.

½n muestras solubles la técnica de elección es el método de vaciado en placa, para otro tipo de
muestras utilizar el método del Numero mas Probable (NMP).

c"½fectuar las diluciones decimales necesarias para que 1.0mV contenga entre 30
UFC/mV y 300UFC/mV.

Inocular por triplicado 1.0mV de cada dilución del producto en cajas de petri estériles, añadir a
cada caja de 15mV a 20mV de medio agar soya tripticaseina-lecitina de soya-polisorbato80 antes
de su uso fundir y mantener en baño de agua maría a una temperatura de 45-48°C. con
movimientos rotatorios con movimientos rotatorios suaves, mezclar la alícuota de la muestra con
el medio de cultivo, evitar derrama de liquido. Permitir que el medio de cultivo solidifique e
incubar las placas en posición invertida entre 30 y 35°C durante 48 a 72 h.

c"#$c   Colocar 12 tubos conteniendo 9mV del medio agar soya tripticaseina-
lecitina de soya-polisorbato80, en cuatro hileras de tres tubos cada una. Inocular 1.0mV de las
diluciones 10-1, 10-2 y 10-3 en la primera, segunda y tercera hilera de tubos. Identificar cada hilera
de tubos con la dilución inoculada.

Marcar la cuarta hilera como testigo. Agitar los tubos e incubar entre 30 y 35°C durante 48h.

Recuento de hongos filamentosos y levaduras.

Proceder como se indica en el recuento de microorganismos mesofilicos, excepto que se utiliza el

medio agar dextrosa sabourand o agar papa dextrosa en lugar de los medio 2 y 4, e incubar entre
20 y 25°C de 5-7 dias.

Tabla 0571.2 numero mas probable de microorganismos.

Numero de tubos Numero mas

positivos mg o mV de probable de
muestra por tubo microorganismos
por G o mV
o
 o
 o
 (NMP/G o
(0.1) (0.01) (00.01) NMP/mV)
3 3 3 >1 100
3 3 2 1 100
3 3 1 500
3 3 0 200
3 2 3 290
3 2 2 210
3 2 1 150
3 2 0 90
3 1 3 160
3 1 2 120
3 1 1 70
3 1 0 40
3 0 3 95
3 0 2 60
3 0 1 40
3 0 0 23

Investigación de microroganismos objetables:

½n función de la via de administración proceder a la investigación de los microroganismos

señalados a continuación:

Productos dérmicos, rectales y vaginales:

Staphylococus aureus y Psudomonas aeruginosa

Productos orales: ½scherichia coli y Salmonella typhi ATCC 6539 o Salmonella typhimurium.