Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
Microinyección.
Se evita la degradación lisosomal y citoplasmática del material.
Técnica laboriosa que requiere células bien aisladas. La modificación de la
línea germinal permite en mamíferos la producción de transgénicos.
Técnicas no virales limitadas a aplicaciones “in vitro”
Electroporación.
Aplicación de alto voltaje a una mezcla de ADN y células en
suspensión. La eficiencia de la transferencia depende del pulso eléctrico,
distancia entre electrodos, fuerza iónica del tampón de suspensión celular y
de la naturaleza de las células. Muchas células de mamíferos no sobreviven al
pulso eléctrico.
Técnicas no virales con aplicaciones “in vitro” e “in vivo”
Liposomas
Liposomas catiónicos. Forman complejos con el ADN. Están formados por un
lípido negativamente cargado y un colípido (“lípidos ayudantes”: DOPE,
DOPC). Un lípido catiónico ampliamente utilizado es la lipofectina (1987.
Mezcla de cloruro de N-[1-(2,3-dioleyiloxy))propil]-N-N-N-trimetil amonio –
DOTMA- y DOPE). ADN y lipofectina interaccionan espontáneamente
formando complejos con una eficiencia del 100%. Inmediatamente después
de la administración intravenosa de estos complejos tanto pulmón como
hígado muestran una afinidad marcada por su incorporación y la expresión
del transgen.
Liposomas sensible a pH (liposomas negativamente cargados). No forman
complejos. ADN queda atrapado en la fase acuosa interior del liposoma.
Aplicaciones: 1.- Pueden transferir moléculas negativa- o positivamente
cargadas. 2.- Ofrecen un grado de protección al ADN de procesos
degradativos. 3.- Pueden llevar trozos grandes de ADN. 4.- Pueden ser
dirigidos específicamente a tejidos u órganos.
Transfección por
Lípidos catiónicos
Técnicas no virales con aplicaciones “in vitro” e “in
vivo”
Herpesvirus