Introducción

El proceso digestivo es necesario para que el cuerpo pueda

utilizar los nutrientes. Tiene lugar en el tracto buco-gastro-intestinal y
es posible gracias a la actuación de enzimas hidrolíticas que actúan
sobre los componentes de la dieta. La primera de ellas es la α -
amilasa salival, que degrada el almidón a una mezcla de hidratos de
carbono más sencillos (según el nivel de actividad y el tiempo de
actuación, pueden llegar a maltosa e incluso glucosa libre) y un resto,
inatacable por ella, llamado dextrina límite. El contenido en α -
amilasa en saliva es variable, y puede ir desde 0 a 3 mg/ml, puesto
que algunas personas no poseen esta actividad, sin que ello suponga
ningún problema para ellos si disponen de niveles adecuados de α -
amilasa pancreática.

La saliva es una mezcla derivada de la secreción de 3 pares de

glándulas, las parótidas, submaxilar y sublingual, como también de
pequeñas glándulas mucosas ubicadas difusamente sobre la mucosa
de la boca. La cantidad normal secretada en una persona adulta es de
1 a 1,5 Iitros en 24 horas. La composición de la saliva es un 99,5%
H2O y 0,5 % de sólidos orgánicos e inorgánicos, el pH oscila entre 6,2
y 7,4.

Los principales componentes orgánicos son las glicoproteínas,

proteínas (albúmina, globulinas) y carbohidratos. Los componentes
inorgánicos principales son calcio, sodio, potasio, magnesio y fósforo.

La enzima a-amilasa, presente en la saliva, inicia la degradación

del almidón, la principal fuente de carbohidratos de la dieta humana.
Esta enzima hidroliza al azar los enlaces a (14) que unen residuos
de glucosa en el almidón, a excepción de los enlaces cercanos a los
extremos y a los puntos de ramificación de las cadenas. La alta
concentración de protones del estómago inactiva la a-amilasa
salival. La digestión del almidón continúa en el intestino delgado
por la acción de la a-amilasa pancreática. No obstante, el proceso
digestivo propiamente dicho tiene lugar en el intestino delgado. De la
mezcla de enzimas que llegan a él, formando parte del llamado jugo
pancreático, nosotros estudiaremos en esta práctica la lipasa
pancreática, que consigue la hidrólisis de triacilgliceroles (TAG) a
ácidos grasos (AG).
Objetivos

• Determinar la presencia o ausencia de la actividad enzimática

de las enzimas de amilasa de acuerdo a las diferentes
propiedades que presentan los reactantes y productos de las
reacciones catalizadas.

• Demostrar la actividad catalítica de la amilasa salival,

determinando; la presencia de almidón (sustrato residual) y la
presencia de carbohidratos reductores (productos de reacción).

Fundamento

El método se basa en la hidrólisis del almidón (sustrato), en

condiciones de pH y temperatura fisiológicos, por acción de una
amilasa presente en la saliva. Los productos de reacción son
polisacáridos de menor peso molecular hasta llegar a disacáridos
(maltosa), no evidenciables con el reactivo de Lugol (pero sí con
Fehling).

Materiales y Métodos

MATERIAL BIOLÓGICO – REACTIVOS

♦
♦ Preparado de Amilasa
♦ Almidón al 1%
♦ Cloruro de Sodio 0.0025M
♦ Buffer fosfato 0.01M
♦ Lugol
♦ Agua destilada
♦
MATERIAL DE LABORATORIO

♦ Tubos de Ensayo ♦ Gradilla

♦ Vaso de precipitación ♦ Pipetas graduadas
♦ Balones ♦
♦ Algodón
Procedimiento

PREPARACIÓN DE LA AMILASA SALIVAL

♦ Enjuagarse la boca con agua de caño, manteniendo en la boca

unos 40ml de agua destilada tibia durante 2minutos.
♦ Vaciar en un vaso de precipitación.
♦ Filtrar esta solución por Lana de Vidrio.
♦ Mantenerla en hielo hasta el momento de usar.

ENSAYO DE LA ACTIVIDAD DE LA PREPARACIÓN DE AMILASA

SALIVAL

Tubo Tubo Tubo

REACTIVOS Tubo 4
1 2 3
Preparado de amilasa 0.025 0.050 0.75 0.10

Almidón al 1% 1.0 1.0 1.0 1.0

NaCl 0.0025 M (ml) 0.75 0.7 0.5 0.5

Buffer fosfato 0.01M 2.225 2.25 1.75 2.4

Incubar a temperatura ambiente durante 13 minutos

Detener la reacción agregando 2 gotas de solución de

Lugol
 Resultados

Conclusiones
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TUBOS MOSTRANDO LAS DIFERENTES

REACTIVOS USADOS PARA ESTA
COLORACIONES A LOS REACTIVOS POR
PRÁCTICA
ACCIÓN DE LA AMILASA SOBRE ELLOS

♦ En los tubos donde hay menos coloración azul indica que hay
una alta actividad enzimática, pero donde el color azul es más
prominente se entiende que la actividad está reducida o
ausente.
♦ El color es un factor muy importante por ello la utilización del
Lugol para lograrlas, la menor presencia de color, indica que
hay mayor amilasa y por tanto mayor degradación del almidón.
♦ La mayor degradación del almidón hace que el color azul o
violeta desparezca casi por completo, indicando así, la mayor
actividad enzimática que existe en el medio estudiado o
experimentado, por parte de la amilasa.

Referencias Bibliográficas
 BROCK, T. y M. MADIGAN. 1997. BIOLOGÍA DE LOS
MICROORGANISMOS. 8va. Edición. Editorial Prentice Hall. España