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28 RADICE, Silvia
3 Histología de la morfogénesis do. Estas células son capaces de dividirse o
de transformarse en embriones según las
Después de 48 horas de realizada la siem- condiciones del medio de cultivo. Seguida-
bra del explante en el medio de cultivo ade- mente, las células que no desarrollan
cuado, a partir de una célula epidérmica o del proembriones comienzan el proceso de dife-
mesófilo foliar, como ocurre en las coníferas, renciación, es decir, se vacuolizan, disminuye
se suceden una serie de divisiones mitóticas. el volumen de núcleo y nucléolo y desapare-
Así se pueden observar, a través del estudio cen los gránulos de almidón.
histológico, pequeñas masas de células que Las experiencias demuestran que las cé-
contienen un citoplasma denso y grandes lulas embriogénicas se desarrollan sólo cuan-
nucléolos. Este conjunto de células agrupa- do se modifican las condiciones de cultivo.
das a modo de esferas fueron denominadas En general ocurren cuando se reducen las
meristemoides por Torrey en 1966, y son los cantidades de auxina y citocinina o cuando
responsables de la diferenciación de los nue- se elimina la auxina.
vos órganos. Este tipo de meristema puede Las células embriogénicas desarrollan
iniciarse en forma directa a partir de células como embriones cuando las condiciones ex-
diferenciadas, pertenecientes a un explante perimentales permiten que éstas expresen
cultivado in vitro o, indirectamente, a partir su potencial. Pueden ocurrir dos situaciones
de una célula o grupo de células diferencia- ontogénicas diferentes, es decir que su ori-
das que promueven la proliferación celular gen sea unicelular o pluricelular. En el caso de
(Fig. 4 A). Su evolución determinará el creci- iniciarse a partir de una célula, ocurre que es-
miento de un órgano como, por ejemplo, tas células embriogénicas se aíslan unas de
una yema adventicia (Fig. 4 B). otras por una importante modificación en su
Las células embriogénicas son similares a pared celular, en particular por la gelificación
las células meristemáticas debido a que no de la laminilla media. Esta célula, que está
son demasiado voluminosas, tienen gran can- rodeada por un polisacárido mucilaginoso,
tidad de ribosomas, citoplasma denso, un sufre divisiones polarizadas formando un
nucléolo agrandado y pequeños granos de embrión globular, en donde pueden diferen-
almidón. Estas células en general se agrupan ciarse deposiciones de almidón en una eta-
y pueden variar en tamaño y número. Den- pa previa a la polarización de este proem-
tro de un grupo de células embriogénicas, el brión. Luego ocurre la formación de la epi-
desarrollo de las mismas no está sincroniza- dermis y adquiere la simetría bilateral. Sucesi-
vamente se observa el crecimiento de uno
o más cotiledones, el desarrollo de los teji-
dos provasculares, la iniciación de los ápices
radicales y de tallo y una progresiva acumu-
lación de sustancias del tipo almidón, lípidos
y proteínas.
En el caso de que los embriones somáti-
cos se originen de un grupo de células pue-
Figura 4: A-E) Cortes histológicos de diferentes
explantes cultivados in vitro. A) Meristemoides
(flechas) observados en cultivo de Silybum
marianum L. en MS + 1 mg l-1 de AIA + 5 mg l-1 de
BAP 10 x. B) yemas adventicias (flechas) en ápices
de Fragaria x ananassa Duch. cultivados en Boxus
+ 0,1 mg l-1 de IBA + 0.5 mg l-1 de BAP + 0,1 mg l-1 de
GA3 4 x. C) grupo de células embriogénicas
(flechas) en Codiaeum variegatum (L) Blume
cultivados en 1 mg l-1 de tidiazurón. 20 x. D)
Embriones somáticos en Codiaeum variegatum (L)
Blume cultivados en 1 mg l-1 de tidiazurón 10 x. E)
Embriogénesis secundaria en Codiaeum
variegatum (L) Blume cultivados en 1 mg l-1 de
tidiazurón 10 x.
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• Varios son los compuestos químicos que se incorporan por difusión al medio de culti-
influyen en los patrones morfogénicos in vo.
vitro dentro de los cuales podemos conside- 5. Agar. Otro aspecto importante a te-
rar: ner en cuenta es la consistencia del medio
1. La composición salina del medio de de cultivo. Puede emplearse como semisólido
cultivo. La composición salina más emplea- o líquido. El agente gelificante más emplea-
da para inducir la formación de callo, la do en el cultivo in vitro es el agar extraído
organogénesis directa o indirecta en la ma- de diversas algas marinas. Las diferentes cali-
yoría de las especies vegetales, es la de dades existentes en el mercado modifican la
Murashige & Skoog (1962) (MS). Sin embar- expresión morfogénica debido a que pueden
go, existen otras formulaciones diseñadas contener sustancias inhibitorias o promoto-
para inducir determinados patrones ras del crecimiento. Tal es el caso del cultivo
morfogénicos. Existe, además, una estrecha de hojas de Actinidia chinensis, cultivadas
relación entre la composición hormonal del en una solución de MS con el agregado de
explante y la concentración de reguladores 0,1 mg.L-1 de AIA + 1 mg.L-1 de BAP, donde
del crecimiento agregada al medio de culti- se observó una respuesta morfogénica diver-
vo. sa según el tipo de agar seleccionado. Por
2. Reguladores del crecimiento. Estos ejemplo, cuando el gelificante empleado fue
compuestos pueden promover la morfogé- Chubut-agar, de producción nacional, se ob-
nesis aun cuando la concentración salina no servó una gran diferenciación de yemas ad-
sea la adecuada. En condiciones óptimas de venticias, mientras que con el agregado de
cultivo pueden incrementar significativamen- agar SIGMA R sólo se indujo la proliferación
te la diferenciación de órganos. En muchas de callo.
de las especies vegetales, para la inducción En caso de seleccionar medios de cultivo
de embriones somáticos, es necesario el agre- líquidos, la respuesta morfogénica observa-
gado de auxinas como ocurre en Tilia spp.; da varía de manera considerable. El cultivo
sin embargo, para otras, como es el caso del líquido es imprescindible cuando se busca
crotón (Codiaeum variegatum), es suficien- promover la morfogénesis indirecta a través
te con el agregado de thidiazurón. El de suspensiones celulares. Para ello es nece-
genotipo y el tipo y concentración de regula- sario cultivar los callos en medio líquido con
dores del crecimiento empleados están es- agitación para permitir que las células se dis-
trechamente relacionados. greguen y puedan diferenciar raíces, brotes
3. Antibióticos. En procesos de transfor- o embriones somáticos en forma aislada.
mación es muy común el agregado de La selección del medio de cultivo líquido
antibióticos del tipo cefotaxime, kanamicina o sólido depende, además, de la especie
y carbenicilina para la eliminación de empleada. En Cymbidium spp, por ejemplo,
Agrobacterium tumefaciens. En explantes se ha observado que el empleo de medio de
de hoja de diferentes cultivares de Malus do- cultivo líquido promueve una mayor diferen-
mestica se ha encontrado que 250 mg. L–1 ciación de protocormos respecto del mismo
de cefotaxime aumentan significativamente medio gelificado. A su vez, este proceso pue-
la regeneración de brotes mientras que 500 de mantenerse durante varios subcultivos
mg. L–1 de carbenicilina promueven la forma- mientras que en medio de cultivo gelificado
ción de callo y la kanamicina inhibe los pro- se observó que los protocormos tienden a
cesos morfogénicos. formar tallos.
4. Carbón activado. En general se usa 6. Atmósfera gaseosa. Es un factor de-
para absorber compuestos tóxicos de la terminante en los procesos morfogénicos y
microatmósfera gaseosa o el exceso de regu- está condicionada por el tipo y tamaño de
ladores del crecimiento presentes en el me- envase seleccionado así como también el sis-
dio de cultivo. E.K. Pettersson y su equipo de tema de cobertura del mismo. Las tapas usa-
colaboradores de la Swedish University of das en cultivo in vitro varían desde el tapón
Agriculture, Suecia, demostraron que este de algodón, papel de aluminio, película de
compuesto puede promover la embriogéne- resinite transparente o tapas rígidas de
sis somática debido a ciertos compuestos que polipropileno. El intercambio gaseoso es di-
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pués de seis semanas de cultivo in vitro pre- 5 Lecturas recomendadas
via inmersión del explante en una solución
de IBA (1 mg l–1) durante 20 minutos (Fig. 5). BUDDENDORF-JOOSTEN, J.M.C. and WOLTERING, E.J.
1994. Components of the gaseous environment and their
effects on plant growth and development in vitro. Plant
Growth Regulation 15: 1-16.