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PROCESO DE BIOTRANSFORMACIÓN
Los humanos y muchos otros animales están constantemente expuestos en su medio
ambiente a una vasta variedad de agentes xenobióticos; los cuales pueden ser de origen natural o
formados por intervención del hombre, En general los compuestos más lipofílicos son más
fácilmente absorbidos a través de la piel, pulmones o del tracto gastrointestinal. La constante
exposición a este tipo de sustancias podría resultar en su acumulación dentro del organismo, al
menos que se presente un sistema eficaz de eliminación. Con excepción de la exhalación, para
que un agente xenobiótico pueda ser eliminado del organismo, requiere que sea soluble en fase
acuosa, lo anterior funciona para compuestos no volátiles y en consecuencia serán excretados por
la orina y las heces, que son las predominantes rutas de eliminación. Sin embargo, los
compuestos lipofílicos que se encuentran en los fluidos de excreción tienden a difundir hacia las
membranas y en consecuencia son reabsorbidos, mientras que los compuestos solubles en agua
son excretados, lo que dejaría aparentemente una acumulación de los agentes xenobióticos
lipofílicos dentro del organismo (Caldwell and Paulson, 1964; Klaassen et al, 1986).
1. Panorama general.
De acuerdo a la estructura de la membrana celular, esta le confiere una selectividad en la
absorción tanto de las sustancias endógenas como xenobióticas. Esta selectividad permite que
existan vías de absorción específica para los nutrimentos hidrosolubles con un gasto energético
(transporte activo), pero por otra parte aunque la mayoría de los organismos vivos son casi
impermeables a la gran mayoría de las sustancias hidrosolubles no deseables, no pueden prevenir
la absorción de la mayoría de las sustancias liposolubles. En la Figura 1.1. tenemos resumido en
un esquema ilustrativo, las principales vías de absorción y eliminación tanto de compuestos
endógenos como exógenos (Anders, 1985; Manahan, 1990; Shibamoto y Bjeldanes, 1996).
FIGURA 1.1
Principales vías de excreción y absorción de xenobióticos
RECTAL
(ABSORCIÓN)
INGESTIÓN HECES
TRACTO GASTROINTESTINAL
(ABSORCIÓN) (EXCRECIÓN)
BILIS
VENA
CUTÁNEA
PORTA
HÍGADO (ABSORCION)
INHALACIÓN
(ABSORCIÓN)
SISTEMA SANGUINEO Y PIE
SISTEMA TEJIDO
MEMBRANA CELULAR ÓSEO ADIPOSO ORINA
RECEPTORES RESPUESTA ACUMULACIÓN (EXCRECIÓN
MOLECULARES BIOQUÍMICA DE TÓXICOS
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ABSORCIÓN
FIGURA 1.2
Integración del proceso de Biotransformación de xenobióticos
(adaptada de Klaasen et al, 1986)
REACCIONES REACCIONES
DE FASE I DE FASE II
OXIDACIÓN
A REDUCCIÓN CONJUGACIÓN
B HIDRÓLISIS
XENOBIÓTICO S PRODUCTO PRODUCTO
O PRIMARIO SECUNDARIO
R Exposición o Biosíntesis
C adición de por adición
I grupos de grupos
Ó funcionales endógenos
N
EXCRECIÓN
CARACTER CARACTER
LIPOLÍTICO HIDROFÍLICO
O NO-POLAR O POLAR
2. Reacciones fase I.
La función de este tipo de reacciones, es modificar la estructura química de la molécula,
por introducción de grupos funcionales como son hidroxilo, amino, carboxilo entre otros. También,
se puede obtener una mayor polaridad del agente xenobiótico por exposición de grupos
funcionales como es el proceso de hidrólisis. Posiblemente la oxidación es la reacción más
importante de las reacciones de fase I; en general estas reacciones están mediadas por el sistema
de oxidación microsomal que contiene el citrocromo P-450, también conocido como “ sistema
oxidasa de función mixta” , el cual requiere del cofactor nicotin-adenin-dinucleótido-reducido
(NADPH) como donador inicial de electrones y oxígeno molecular como oxidante, según se
observa en la Figura 2.1 (Repetto, 1981; Klaassen et al, 1985; Manahan, 1990).
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FIGURA 2.1
Sistema de transporte de electrones de Citocromo P-450 y oxidación
de un xenobiótico (RH)
RH
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FIGURA 2.1.1
Metabolitos aromáticos de la hidroxilación del benceno
OH
(MAYOR METABOLITO)
O
fenol OH OH
O OH
+ +
OH OH
benceno O catecol OH
resorcinol
OH quinol
OH
OH
1,2,4 Trihidroxibenceno
Sin embargo, hay que mencionar que la hidroxilación aromática procede vía la formación
de un epóxido como intermediario. Lo anterior se puede ilustrar en la hidroxilación del naftaleno,
ya que generalmente se forma tanto el 1-naftol como el 2-naftol, la cual se realiza vía la formación
del epóxido intermediario 1, 2-óxido como se observa en la Figura 2.1.2. Cabe mencionar que
precisamente el naftaleno es el precursor de los denominados hidrocarburos aromáticos
policíclicos (HAP), donde el efecto carcinogénico de algunos de ellos se debe a la formación de un
epóxido intermediario.
FIGURA 2.1.2
Hidroxilación del naftaleno a través de la formación de epóxido (adaptada de
Timbrell, 1985)
naftaleno
O CIT P-450
O
naftalen-1,2 óxido
(epoxido)
H O H
O
+ H
+ H
H H
O
H O
H
OH
OH
+
2 naftol
1 naftol
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La oxidación vía formación de epóxidos es muy importante, ya que estos metabolitos
intermediarios pueden reaccionar con biomoléculas celulares; así tenemos, que los epóxidos
estabilizados pueden reaccionar con sitios nucleofílicos de constituyentes celulares como son
ciertos ácidos nucleicos, y producir un evento mutagénico. Eventos de este tipo se presentan con
algunos hidrocarburos aromáticos policíclicos, así como en algunas micotoxinas.
FIGURA 2.2.1
Hidroxilación microsomal de priridina y quinoteina
OH
CIT P-450
O
N N
piridina 3-hidroxi-piridina
OH
O
N
3-hidroxi-quinoleína
N
HO
quinoleína O
N
6-hidroxi-quinoleína
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FIGURA 2.2.2
Hidroxilación microsomal del anillo heterocíclico de cumarina
CIT P-450
[o]
O O HO O O
cumarina 7 hidroxi-cumarina
2.3 N-Dealquilación.
FIGURA 2.3.1
Dealquilación mediada por oxidación microsomal enzimática
CH 3 CH3
N NH 2
HCHO HCHO
[O] [O]
anilina
N,N-dimetilanilina
2.4. N-Hidroxilación.
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FIGURA 2.4.1
N-hidroxilación de la anilina
NH2 NH-OH
CIT P-450
NADPH/O 2
anilina fenilhidroxilamina
FIGURA 2.4.2
N-hidroxilación del 2-acetil-aminofluoreno (Tomado de Timbrell, 1985)
O HO O
HN-C-CH 3 C-CH 3
N
CIT P-450
NADPH/O 2
2-acetil-aminofluoreno N-hidroxil-2-acetil-aminofluoreno
(POTENTE CARCINOGENICO)
2.5. Desulfuración.
La sustitución del átomo de azufre por un átomo de oxígeno en una molécula orgánica por
oxidación microsomal, se conoce como desulfuración y es un proceso común para la
Biotransformación de los insecticidas organofosforados, los cuales se usan ampliamente en las
actividades agrícolas. En la Figura 2.5.1 se tiene un ejemplo ilustrativo como es la desulfuración
del paratión, con lo cual se obtiene el metabolito oxidado que tiene mayor efecto inhibidor sobre la
acetilcolinestarasa. (Timbrell, 1985; Miyamoto et al, 1988).
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FIGURA 2.5.1
Desulfuración oxidativa del paratión
s O
CH 3-CH 2-O CH 3-CH 2-O
P CIT-P450 P
CH 3-CH 2-O O NO2 [O] CH 3-CH 2-O O NO2
paraoxón
paratión
FIGURA 2.6.1
Oxidación no-microsomal de putrescina y 5-hidroxitriptamina
DIAMINO-OXIDASA
NH 2-(CH 2)4-NH 2 CHO-(CH 2)2-CHO
putrescina adipicaldehído
HO CH 2-CHO
HO CH 2-CH 2-NH 2
MONOAMINO-OXIDASA
N
N H
H
3 acetaldehído-5-hidroxi-indol
5-hidroxitriptamina
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FIGURA 2.6.2
Oxidación del etanol hasta ácido-acético
ALCOHOL DESHIDROGENASA O
CH 3-CH2-OH CH 3-C
H
etanol acetaldehído
O ALDEHIDO DESHIDROGENASA
CH 3-COOH
CH 3-C
H ácido acético
acetaldehído
FIGURA 2.6.3
Oxidación no-microsomal del alcohol alílico
O
ALCOHOL DESHIDROGENASA
CH 2=CH-CH 2-OH CH 2=CH-C
H
alcohol alílico Acroleína
(HEPATOTOXICO)
2.7. Reducción.
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influencia en este proceso de reducción; ya que estos microorganismos tienen su sistema de
oxidación microsomal normal, pero debido al medio en que se encuentran (reducción de la tensión
de oxígeno), pueden llevar a cabo el proceso de reducción en lugar de la oxidación (Hodgson and
Guther; 1980; Klaassen et al, 1986).
FÍGURA 2.7.1
Reacciones de reducción del sistema microsomal con participación de citrocromo P-450
(Adaptada de Klaassen et al, 1986)
CIT P-450
AZO-REDUCCION R1-N=N-R 2 R1-NH 2 + R2-NH 2
ausencia de O 2
R1 R1
CIT P-450
REDUCCION DE NITROAROMATICOS
ausencia de O 2
NO 2 NH 2
X X
DESHALOGENACION REDUCTIVA R1-C-X CIT P-450 2H +
ausencia de O 2
R1-C-H + HX
X X
2.8. Hidrólisis.
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FIGURA 2.8.1
Hidrólisis de ésteres por acción de esterasas
ESTERASA
R1-C-O-R2 + H20 R1-C-OH + R2-OH
O O
éster agua ácido orgánico alcohol
NH2
NH2 CH3
CH 3
CH2
ESTERASA
CH2
H20 HO-CH2-CH2-N
C-O-CH 2-CH2-N-CH 2-CH3
CH2
O C-OH
O CH3
procaína ácido p-aminobenzóico N,N-dietil-amino-etanol
La hidrólisis de amidas es catalizada por amidasas; sin embargo, este proceso hidrolítico
es más lento en comparación al proceso de hidrólisis de los ésteres. Adicionalmente, el plasma no
es un lugar de alta actividad de hidrólisis de amidas, sino que ésta se presenta en otros tejidos,
como es el caso de algunas carboxil-amidasas microsomales del hígado (Repetto, 1981; Timbrell,
1985). En la Figura 2.8.2 se presenta el esquema genérico y un ejemplo de la hidrólisis de una
amida.
FIGURA 2.8.2
Hidrólisis de amidas por amidasas
O
AMIDASA
R1-C-NH-R2 + H20 R1-C-OH + R2-NH 2
O
amida agua ácido orgánico amina
O
NH-C-CH3 NH2
AMIDASA
+ CH3-COOH
H2O
O-CH2-CH3 O-CH2-CH3
Los epóxidos que son anillos de tres miembros que contienen un átomo de oxígeno,
pueden ser metabolizados por la enzima epóxido-hidratasa; esta enzima adiciona una molécula de
agua al epóxico produciendo un transdihidrodiol. Este tipo de reacción es de suma importancia en
el proceso de biotransformación, ya que en la hidroxilación de xenobióticos que es común y se
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producen epóxidos como metabolitos intermediarios, los cuales son moléculas muy reactivas que
pueden generar un evento mutagénico.
FIGURA 2.8.3
Hidr+olisis de epóxidos por acción de la epóxico-hidratasa
O OH
EPOXIDO-HIDRATASA
R1-CH-CH-R2 + H2O R1-CH-CH-R2
agua OH
époxido dihidrodiol (trans)
OH
EPOXIDO-HIDRATASA
H
O H
H2O
OH
3.1. Glucuronidación.
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FIGURA 3.1.1
Formación del ácido uridin difosfo glucurónico (UDPGA)
CH 2OH CH2OH
O O
OH
+ UTP + Pirofosfato
O P OH
O-UDP
O
glucosa-1-fosfato uridin-trifosfato uridin difosfato α-D-glucosa
(UDPG)
CH 2COO
O
UDPG-DESHIDROGENASA O
UDPG + 2NAD + O O
H2O O P O P O CH 2 NH
O N O
O O
ácido uridin-difosfo-glucurónico
(UDPGA)
La conjugación del UDPGA con los xenobióticos involucra un ataque nucleofílico de estos
compuestos a través de los átomos de oxígeno, nitrógeno o azufre al carbono C-1 del ácido
glucurónico, y se observa una inversión de dicho enlace ya que pasa de forma α a β , como se
puede observar en la Figura 3.1.2, donde se ilustra el ataque nucleofílico del fenol sobre el ácido
uridín difosfo glucurónico.
FIGURA 3.1.2
Inversión del enlace α a β en la formación del glcurónido
(Adaptado de Trimbell, 1985)
COOH .. COOH
O HO O O
UDP-GLUCORONOSIL
O-UDP TRANSFERASA
+ UDP
(UDPGA) fenol
glucoronil-fenil-éter uridin difosfato
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FIGURA 3.1.3
Principales tipos de glucurónidos donde se muestra el grupo nucleofílico
ACIDO: O
alifático G-C ésteres glucurónidos
aromático
OH
..
α−β-insaturado
.. N-glucurónidos
ARILAMINAS: G-NH
alifático
..
N-HIDROXIL: (G)2-N-OH O-glucurónidos
alifático
aromático
TIOLES: ..
alifático G-SH S-glucurónidos
aromático
FIGURA 3.1.4
Glucuronidación del N-hidroxiaceilaminofluoreno
OH COCH 3
N-COCH 3 N
UDP-GLUCURONOSIL
O-aciglucurónico
TRANSFERASA
N-hidroxiacetilaminofluoreno N-hidroxiacetilaminofluoren-glucuronido
(CARCINOGENICO)
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3.2.- Sulfatación.
En los mamíferos, una importante conjugación para varios tipos de grupos hidroxilo es la
formación de ésteres de sulfato. Esta misma reacción también se puede presentar con grupos
amino; así, pueden ser substratos de esta conjugación: alcoholes alifáticos, aminas aromáticas,
fenoles y compuestos endógenos tales como esteroides y carbohidratos. En este proceso de
conjugación el donador del compuesto endógeno (sulfato) es el 3’-fosfoadenosin-5’-fosfosulfato
(PAPS), el cual a su vez requiere ATP para su formación, como se observa en la Figura 3.2.1. El
sulfato inorgánico precursor del PAPS puede ser agotado cuando concentraciones significativas
son requeridas para este proceso de conjugación.
FIGURA 3.2.1
Formación del fosfoadenosin-fosfosulfato (PAPS)
NH 2
N
O O N
-O-S-O-P-O-CH 2
O N N
O O
ATP + HSO 3
O OH
adenosintrifosfato
sulfato O=P-O
inorgánico
OH
3'-fosfoadinosin- 5 '-fosfosulfato
(PAPS)
FIGURA 3.2.2
Formación de conjugados de sulfato para etanol y fenol
ETANOL
SULFOTRANSFERASA
CH3-CH2-OH + PAPS CH3-CH2-O-SO3H
etanol etil-sulfato
OH FENOL O-SO3H
SULFOTRANSFERASA
+ PAPS
fenol fenil-sulfato
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3.3. Conjugación con glutatión.
FIGURA 3.3.1
Conjugación con glutatión hasta la formación del derivado de ácido mercaptúrico
O RS O
··
HS CH2 CH C NH CH 2 COOH CH 2 CH C NH CH 2 COOH + HX
GLUTATION-S-TRANSFERASA
NH C CH 2 CH 2 CH COOH NH C CH 2 CH 2 CH COOH
O NH 2 O NH 2
RX Conjugado con glutatión
Glutatión Xenobiótico
γ -GLUTAMIL-TRANSPEPTIDASA
COOH CH 2 CH 2 CH COOH
NH 2
Acido glutámico
NH 2 CH 2 COOH
Glicina
RS CH 2 CH COOH RS CH 2 CH C NH CH 2 COOH
CISTENIL-GLICINASA
NH 2 NH 2
Conjugado con cisteina
Conjugado de cistenilglicina
RS CH 2 CH COOH
ACETIL-CoA
NH C CH 3
N-ACETIL-TRANSFERASA
O
Derivado del ácido mercaptúrico
NH2
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Precisamente a través de la conjugación con glutatión se pueden eliminar los epóxidos,
como es el ejemplo clásico de la conjugación del naftaleno que es un hidrocarburo aromático, y
que se observa en la Figura 3.3.2. También, la conjugación con glutatión se ha observado que se
presenta con los hidrocarburos aromáticos policíclicos y las aflatoxinas
FIGURA 3.3.2
Conjugación con glutatión del naftalen 1,2-óxido (epóxido)
(Adaptada de Timbrell, 1985)
:SH-GLUTATION
O +
O
REACCION
DE FASE I
S-CH 2-CH-COOH
S-GLUTATION
NH 2 GLICINIL GLUTAMIL
OH OH
ACETIL-CoA/H +
S-CH 2-CH-COOH
NH-C-CH 3
2 H2O
O
ácido naftalen-mercaptúrico
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3.4. Otros procesos de conjugación
Hay otros procesos de conjugación; sin embargo, la conjugación con ácido glucurónico es
la de mayor capacidad en los animales superiores. Dentro de otros procesos de conjugación cabe
destacar la acetilación, ya que es un proceso importante en el metabolismo de las aminas
aromáticas, sulfonamidas e hidrazinas. Las enzimas que cataliza la acetilación de aminas se
designa como Acetil CoA: amina N-acetil-transferasa, teniendo como cofactor a la acetil coenzima
A. La enzima responsable de esta conjugación se encuentra en el citosol de las células de
diversos tejidos; un dato importante es que los perros y especies relacionadas, son deficientes en
este sistema de conjugación y por lo tanto son incapaces de acetilar a un amplio número de
substratos. En la figura 3.4.1 se ilustra el tipo de aminas que pueden sufrir la acetilación
(Klaassen et al, 1986; Gorrod et al, 1988).
FIGURA 3.4.1
N-acetilación de algunos compuestos aminados
(Adaptación de Klaassen, et al, 1986)
SUSTRATO
PRODUCTO
O
NH 2 NH-C-CH 3
aril-amina
N-ACETILACIÓN
O
R-NH-NH 2
R-NH-NH-C-CH 3
hidrazina sustituída
O
SO 2-NH 2 SO 2-NH-C-CH 3
aril-sulfonamida
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FIGURA 3.4.2
Conjugación del ácido benzóico con glicina
COOH CO-S-CoA
ATP/CoA-SH
+ AMP + PPi
+ NH 2-CH2-COOH
+ CoA-SH
glicina
ácido hipúrico
FIGURA 4.1
Variación iterespecie en la conversión metabólica del fenol
(Adaptada de Hodgson and Guthrie, 1980)
0S03- 0S03-
SULFOTRANSFERASA SULFOTRANSFERASA
PAPS PAPS
HO
OH OH
Fenil sulfato Sulfato de quinol
HIDROXILACION
REACCION
REACCION REACCI0N DE
DE DE FASE II
FASE II FASE I
Fenol OH
Quinol
Del proceso de biotransformación del fenol ilustrado con anterioridad en las diferentes
especies, se puede deducir que es de suma importancia poder conocer las similitudes y
diferencias en el metabolismo hacia los diferentes agentes xenobióticos. Precisamente, esta
información sustenta a la Toxicología Comparativa, de tal manera se puede seleccionar el modelo
biológico más adecuado para su extrapolación al humano (Williams, 1974; Hodgson and Guthrie,
1980).
Finalmente, en los Cuadros 4.2 y 4.3 se tienen algunas consideraciones generales del
proceso de biotransformación en el humano en condiciones normales de salud, donde cabe
mencionar que es de suma importancia el aspecto alimenticio (Netter, 1994). De los cuadros
mencionados, se puede deducir que la mayoría de los xenobióticos son eliminados como
glucurónidos y el riñón es la vía de eliminación mayoritaria (Klaasen et al, 1986).
CUADRO 4.2.
Capacidad relativa de las reacciones de conjugación
(Adaptado de Klaassen et al, 1986).
Glucuronidación Alta
Sulfonación Baja
Acetilación Variable
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CUADRO 4.3.
Rutas preferidas de excreción de conjugados de xenobióticos
(Adaptado de Klaassen et al, 1986).
VÍA DE
METABOLITOS FORMADOS
ELIMINACIÓN
Sulfatos Riñón
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