BIOI NDICATION

(1) Cornite Regional Nord-Pas de Calais de I'APPA

(2) Laboratoire de Botanique, Faculte de Pharmacie, Universite de Lille 2

Damien CUNY (1), Chantal VAN HAlUWYN (2), Brigitte CARON (2)

LA BI-OINDICATION 'DE

L'OZONE PAR LE TABAC

DANS LA REGION NORD - PAS DE CALAIS

'OZONE est devenu I'un des polluants posant Ie plus de problemes, Son impact sanitaire a ete etabli depuis longternps et sa chimie se revele tres complexe. Dans l'agglomeration Iilloise c'est Ie polluant responsable, avec les NOx, des procedures d'alertes.

Dans un tel contexte, il est important de disposer de methodes de mesure - fiables et diverses qui permettent de suivre ce polluant et ses effets. II s'agit en premier lieu, des capteurs du reseau de mesure automatique. Ceux-ci sont completes par un laboratoire mobile et un reseau de biostations base sur la bioindication. L'objet de cet article est de faire Ie point sur les biostations et sur les differentes etudes menees dans la region.

I. LA NOTION DE BIOINDICATION

Schematiquernent, la bioindication consiste a utiliser un organisme vivant pour caracteriser l'environnement dans lequel il est place. II existe de multiples possibilites de faire de la bioindication et nous concentrerons notre propos sur la bioindication de . la pollution atrnospherique par les vegetaux superieurs.

IMPENS et DELCARTE (1995) ont presente un tableau d'especes pouvant etre utilisees en bioindication etlou bioaccumulation de polluants atrnospheriques. Parmi les polluants cites, nous retrouvons : Ie 502, les composes fluores, .les elements traces rnetalliques, Ie peroxyacetylnitrate-Pxt-l, l'ozone, les NOx, La bioindication est basee sur l'impact des polluants sur les vegetaux utilises. Cela se traduit par des necroses, des chloroses, des taches sur les feuilles, des modifications de la croissance des feuilles, une reduction du nombre de fleurs ou merne par Ie decollement de l'epiderrne foliaire. Ces differents syrnptornes sont utilises pour appre-

cier un taux relatif de polluants. Ainsi, avec une serie de plants de tabac i I est possible de comparer la contamination par ,I'ozone entre differents sites. II n'est pas possible par contre de donner une valeur absolue de la concentration atrnospherique de ce polluant.

Differentes plantes peuvent etre utilisees pour indiquer la presence d'ozone : Glycina max (le soja), Trifolium subterraneum (le trefle semeur), Nicotiana tabacum (le tabac). Les effets de l'ozone sur Ie tabac sont conn us depuis les annees 1940 par les planteurs de Virginie. Cette plante est utilises de rnaniere importante en bioindication depuis les annees 1970.

II. LES BASES PHYSIOLOGIQUES DE LA RELATION TABAC-OZONE.

Pour utiliser un bioindicateur, il est bon de comprendre les rnecanismes qui sous-tendent les reactions que l'on observe. Ainsi, l'ozone provoque chez Ie tabac des necroses, petites, nombreuses, visibles sur les deux faces, blanc ivoire puis brunes - noires (photo 1).

L'ozone, comme la plupart des gaz, entre dans la plante par les stomates.

Les stomates sont des ensembles de pores lirnites par des cellules dites de garde. En fonction de leur forme, elles permettent l'ouverture du pore (appele aussi ostiole), qui laisse entrer les gaz dans une crypte. Les stomates sont l'une des premieres cibles de l'ozone, De nombreux auteurs ont etudie les effets de l'ozone sur les stomates et les resultats de ces travaux sont tres variables et d'interpretation complexe, en fonction des doses employees et des especes etudiees. La photo 2 represente un stomate de tabac non atteint par l'ozone. On remarque que les deux cellulesde garde ont une forme et des bords regul iers. La photo 3 presente un stomate d'une plante exposee a l'ozone sur laquelle on - observe une atteinte des cellules de garde.

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Necroses foliaires dues a I'ozone chez Ie tabac

. (photo: Unlversite de Gembloux)

Vue d'un stomate de feuille de tabac non

expose a l'ozone

(microscopie electronique a balayage et photo: D. Cuny).

Vue d'un stomatede feuille de tabac expose a I'ozone (rnicroscopie electronique a balayage et Photo: D. Cuny).

que les effets indirects de l'ozone sur les stomates (i.e. via des perturbations de la photosynthese) sont preponderants sur les effets directs (MANSFIELD & PEARSON, 1996). Cependant, les effets benefiques de cette fermeture sont tres limites car par ailleurs les tissus sont endomrnages et perrnettent l'entree de l'ozone. MANSFIELD & PEARSON (1996) observent queI'ozone diminue la reaction de la plante face au stress hydrique. Celle-ci pour eviter les pertes d'eau ne ferme plus ses stomates. Ce mecanisme serait l'une des perturbations les plus importantes dues a l'ozone,

Les donnees physiologiques montrent que l'ozone peut tout aussi bien provoquer louverture que la ferrneture des stomates. Par exemple chez 'certaines varietes de radis, l'ozone perturbe les cellules epiderrniques qui entourent les stomates. Celles-ci ne jouent plus leur role de « contre-pression » et de.ce fait les stomates restent plus ouverts. D'autre part au sein des cellules tout agent qui interagit avec un elementdu metabol isme de lei photosynthese est susceptible de causer la fermeture des stomates par accumulation du C02 dans les tissus. Differents auteurs tendent a considerer

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Au niveau deI'apoplasme, une grande partie de

'I'ozone est detruite. Cependant, une fraction peut penetrer dans les cellules. L'ozone est un oxydant qui induit une serie de reactions complexes. Selon KLEY et al. (1999), les effets de I'ozone sur Ie tabac peuvent etre aigus ou chroniques, l.es effetsaigus se manifestentlorsque les rnecanismes de detoxication de l'ozone sont depasses et se traduisent par les necroses foliaires. Cela peut avoir ounon des

, consequences sur la croissance et la productivite.

Au contraire, ,Ieseffets chroniques concernent II existe differents protocoles d'utilisation du tabac. directemerit les mecanisrnes de croissance et' Dans cet article, nous presenterons les deux qui affectent la productivite. lis s'accompagnent ou ont ete utilises dans notre region: Le premier fait non de necroses foliaires. appel a des plants alors que Ie, deuxierne fait appel L'intoxication chronique implique des expositions a des plantules (methode des kits). Quelle que soit

'repetees qui entralnent de nornbreux stress et des la methode utilisee, deux varietes differentes de,

mecanisrnes de compensation et de reparation. tabac sont placees sur les sites: ,

Au sein des cellules, I'ozone a de nornbreuses - Nicotiana tabacum L. Cv Bel W3 variete sensible cibles. Ces effets s'exprimerit par I'intermediairea I'ozone

d'especes reactives de l'oxygene (ERO), principa- - Nicotiene tebecum L. Cv Bel B variete resistante lement 02- (anion surperoxyde) et H202 (peroxy- al'ozone.

de ,d'hydrogenei. Ces ERO, issues des L'utilisation de deux varietes s'explique par Ie fait reactions entre l'ozone et I'eau,vont directernent que diverses causes peuvent provoquer des ou indirectement provoquer les effets deleteres et. necroses foliaires chez Ie tabac.

les mecanisrnes de compensation dans les cellules. La variete resistante nous sert dans ce cas' de Parmi les principales cibles, nous pouvons donc ternoin. Si elle est necrosee, il y a une tres forte citer les membranes (phenomene de peroxydation probabilite pour que I'agent responsable des lipidique, VANGRONSVELD et al.,1997), les chlo- necroses sur la variete sensible ne soit pas l'ozone. roplastes '(perturbation de la photosynthese), Ie' l.es plantes sont constamment sous une toile d'ornmateriel genetique ... Les impacts sur la photosyn- brage fixee sur ur: chassis. L'ombre ainsi formee these sont tres contrastes en fonction des etudes. II ' "permet d'avoir constamment l'ouverture des stosemble cependant que chez Ie tabac sensible a mates. En effet, ceux-ci se fermentnaturellement l'otone(Nicotiana tabacum cy Bel W3), I'ozone en cas de forte insolation pour eviter les pertes provoque une diminution de l'activite photosyn- 'd'eau chez la plante (d. §2).

thetique. Cette diminution se ferait notamment par la perturbation du fonctionnement". des

-photosysremes intervenant dans Ie transfert d'electrons ainsi ,que par la perturbation du fonctionnement d'une enzyme fondamentale pour la photosynthese : la Rubisco. Les ERO en provoquant un stress oxydant mobilisentle NADPH,

, agent reducteur produit a la fin de la phase claire et qui est utilise lors du debut de la phasesombre. Par contre l'ozone semble stimuler la respiration cellulaire et I'utilisation des hydrates de carbone. II se cree donc uri desequilibre entre lei. production ~t I'utilisation des sucres (ACADEMIE DES SCIENCES, 1993).

Les ERO sont capables d'activer de nombreux genes, y cornpris ceux codant des hormones de stress (KLEY et al., 1999). De plus, les ERO semblent activer la production d'ethylene O,U' encore d'acide salicylique, qui sontdes mediateurs, des rnessagers intercellulaires (SCHRAUDNER et al., 1998). L'ozone declenche des, mecanisrnes qui sont assez : similaires a ceuxobserves lors de I'attaque de la plante par un agent pathogene comme un virus ou une bacterie. II faut ajouter que les mecanisrnes antioxydants entrent en jeu. Ainsi, chez Ie sedurn, l'ozone provoque une augmentation de lactivite des peroxydases, chez Ie soja etle

, haricot on observe une augmentation de l'activite des superoxydes dismutases (enzymes qui permettent la transformation 02- en H202) ; enfin, chez

differentes especes, les experiences iont rnontre une augmentation de la concentration 'en glutathion total (VANGRONSVELD et al., 1997). l.es recherches recentes tendent egalernent a montrer que I'ozone initialiserait directement ou indirectement lamort cellulaire programmee.,

III. LES METHODES D'UTILISATION DU TABAC , EN BIOINDICATION.

a) L'utilisation des plants.

Ce protocole a ete utilise dans la ville de Lille lors d'une etude europeenne de bioindication (:;.':ABA-

. WINSKI etal., 1996). Les semis sont effectues 6 a 8 semaines avant la peri ode d'expositiori. Les plants sont installes au stade 5 feuilles pour une duree d'un mois a raison de 5 plants de Bel W3 et 3 plants de Bel B. Les « lectures» des feuilles sont realisees toutes les semaines.

Les degats dus a I'ozone sent estirnes par Ie pourcentage de surface foliaire necrosee. Sur chaque feuille de chaque plant ilconvient de, faire ce rele-, ve. Neuf classes de surfaces sont ainsi definies :

(d'apres ZABAWINSKI et al., 1996)

Classe % surface touchee
0 0
1 >0-5 '
2 >5-10
3 >10-15
4 >15-20
5 >20-25
6 >25-30
7 >30-40
8 >40 .

Ce systerne de classe permet Ie calcul de I'indice de

lesion foliaire: LII = Lno (Cn-Cn.1)/N OU:'

N est Ie nombre de feuilles repertoriees pour la semaine n-1 ; , Cn est la classe de la feuille pour la semaine n ;

Cn.1 est la classe de la feuille pour la semaine n-1. (d'apres SAisON & VAN HALUWYN, 1997),

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b) La methode des kits (LORENZINI, 1994)

Dans cette methode ce sont des plantules qui sont utilisees, 12 de Bel W3 et 12 de Bel B. l'exposition de ces kits dure 10 jours. L'estimation des degats se fait par I'estimation du pourcentage de necroses foliaires. Cette technique a ete utilisee dans la region par GARREC & KINTS (1996) lors d'une etude sur la zone littorale de Dunkerque.

Pour chaque feuille, un indice est attribue en fonction de la surface attei nte :

1 : 0% de surface necrosee ;

2 : 0-10% de la surface necrosee ; 3 : 10-25% de la surface necroses ;

4 : 25 - 50 % de la surface necroses ; 5 : > 50% de la surface necrosee.

Les indices obtenus sont rnoyennes ce qui permet . d'obtenir un indice pour Ie site d'observation.

IV. EXEMPLES DE RESULTATS OBTENUS DANS LA REGION NORD-PAS DE CALAIS.

a) Cartographic de I'ozone sur Ie littoral Calais - Dunkerque (1995)

Ce travail a ete effectue dans Ie cadre d'un suivi pluriannuel des effets de la pollution de l'air sur la sante des vegetaux sur Ie littoral CalaisDunkerque; initiee par Ie SPPPI.

Les resu Itats de ce trava i I sont presentes figu re 1 .

Cette etude, cornpletee des donnees du reseau, a perm is de montrer une presence d'ozone irnportante sur la zone Boulogne-Dunkerque. Les nombreuses zones industrielles et urbaines (Calais, Dunkerque) ainsi que les conditions climatiques du secteur sont favorables a la formation de ce polluant.

b) Etude europeenne de 1996-1997.

II s'agissait d'un programmeeuropeen mene a. I'instigation de la DeXI dans differentes villes dont Li lie. Le but etait de val ider et de standardiser dif-

Fig. 1 : cartograph ie de la presence d'ozone sur Ie littoral DunkerqueBoulogne grace aux plants de . tabac (d'apres Carree et Kints, 1996).

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ferentes techniques de bioindication pour qu'elles puissent etre proposees comme alternative dans

.les villes depourvues de reseau de mesure de la pollution atmospherique. Cette etude a donc fait appel a differentes plantes bioindicatrices. Nous ne presenterons ici que les resultats obtenus pour Ie tabac (ef. SAISON & VAN HALUWYN, 1997). La figure 2 presente les 8 sites d'etude : (1) Tourcoing, (2) Bondues, (3) Marcq en Baroeul, (4) l.ille-Vauban, (5) Lille-Faidherbe, (6) Lille-Fives, (7) Haubourdin et (8) Seclin.

Fig. i : repartition des stations de . tabac durant l'etude de 1996.

Les auteurs de cette etude (SAISON & VAN HALUWYN, 1997) ont confirrne la pertinence du tabac. lis ont observe d'une part l'aspect global de la pollution pbotochirnique mais aussi un dephasage entre les stations en fonction de leur localisation.

10 11 12 '13 14 15 1& 17 ,. ,.

7 .

c) le programme FEDER: premiere etape 1999.

Ce programme s'intitule « Investigation sur la pollution atrnospherique aux echelles fines, micro-expertises sur Ie territoire de la rnetropo!e lilloise » et est gere par Ie Comite Regional Nord-Pas de Calais. Ce programme est une suite du precedent. Les sites choisis sont differents et directement en centre ville.

Fig. 4 : localisation des sites de l'etude FEDER:

1 : Stade Bois-Blanc; 2 : Wazemmes ; 3 : Jardin Vauban ; 4 : Square Foch ; 5 : Mairie de Lille ; 6 : Jardin Botanique ; 7 : Fenne des Dondaines; 8 : Couvent des Doniinicains; 9 : Jardin des meres (Fives).

Ce choix s'explique tout d'abord par la thernatique rnerne du programme qui s'interesse en premier lieu au milieu urbain et ensuite par la volonte d'obtenir des informations sur la vi lie de Li lie ..

c) le programme FEDER, deuxierne etape 2000

Les resultats obtenus en 1999 nous ont pousse a poursuivre ces travaux. Tout d'abord, pour completer les precedentes donnees et obtenir suffisamment d'informations pour avoir Ie recul necessaire a une interpretation' complete. Nous avons repris la plupart des stations de la premiere phase a I'exception de celie de « Bois Blanc» rernplacee par celie situee a la Faculte de Pharmacie de Lille etcelle de Vauban rernplacee par celie du Jardin Botanique de la Faculte Catholique. Nous travaillons en collaboration avec Ie lycee Horticole de Lomme qui se charge du semis et de la production des plants; une station a ete placee dans I'enceinte de ce lycee. Trois autres stations ont ete irnplantees a proxirnite des capteurs du reseau de mesure AREMA LM : Arrnentieres, Villeneuve d'Ascq et Marcq en Baroeul. Enfin, dans Ie cadre d'une action pedagogique menee aupres d'eleves de l'lnstitut Horticoie d'Hazebrouck, une biostation a ete placee dans.l'enceinte de cet institut et a fait l'objet d'un suivi de la part des eleves et de leur professeur,

Cette etude a debute en mai et sera achevee en octobre.

V. PERSPECTIVES

Ces travaux s'integrent dans des actions rnenees sur Ie long terme. En effet, ces travaux ont rnontre Ie potentiel

scientifique mais aussi pedagogique d'un tel reseau. D'un point de vue scientifique, il complete efficacement les donnees du reseau de mesure. NOLis pouvons ainsi

. obtenir des informations qualitatives dans des zones depourvues d'instruments automatiques. D'un point de vu pedagogique, les biostations se sont revelees etre de bons outils pour expliquer la bioindication et les effets des polluants sur la vegetation.

Nous proposons de perenniser Ie reseau mais aussi de placer des plants sur des terrasses vegetalisees. Cette demarche originale a' pour but d'obtenir des informations sur l'ozone a des hauteurs ou ce polluant n'est pas rnesure et ainsi de fournir des donnees en 3 dimensions.

BIBLIOGRAPHIE

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