Contribution À La Chimie Des Flavonoïdes - Accès À Des Analogues de Pigments Du Vins Rouges

UNIVERSITE LOUIS PASTEUR DE STRASBOURG ECOLE DOCTORALE DE CHIMIE THESE Prsente en vue de lobtention du grade de DOCTEUR de LUNIVERSITE LOUIS
PASTEUR STRASBOURG I SPECIALITE : CHIMIE ORGANIQUE
Graldine Isorez
Contribution la chimie des flavonodes : Accs des analogues de pigments du vins rouges
Soutenue le 13 dcembre 2007 devant la commission dexamen :
Pr. R. Brouillard Dr. H. Callot Dr. S. Chassaing Dr. A. Fougerousse Pr. V. Lattanzio Pr. C. Tarnus
Directeur de thse Rapporteur interne, Prsident du jury Examinateur Directeur de thse Rapporteur externe Rapporteur externe
Contribution la chimie des flavonodes : Accs des analogues de pigments du vin rouge
A mes parents, mon frre et Jean-Christophe

ii
REMERCIEMENTS
Ce travail a t ralis au Laboratoire de Chimie des Polyphnols de Strasbourg, sous la direction du Pr. Raymond Brouillard et du Dr. Andr Fougerousse. Je les remercie de mavoir accueillie dans leur quipe et de mavoir initie la chimie des polyphnols. Je remercie le Dr. Henry Callot et les Pr. Cline Tarnus et Vicenzo Lattanzio davoir accept de juger et de corriger ce travail. Je tiens remercier particulirement le Pr. Raymond Brouillard qui ma toujours encourage et accompagne dans mes projets, ce qui ma permis de me sentir utile et efficace au sein de lquipe. Son soutien a grandement contribu laboutissement de cette thse et lenthousiasme ressenti lors ce travail. Mes remerciements les plus amicaux sont pour Marie Kueny-Stotz et Stefan Chassaing, collgues et amis : le trio infernal Une fine et belle quipe sans qui les trois annes de thse nauraient pas t aussi riches et formatrices. Stefan, MERCI pour ton enseignement, tes conseils et ta disponibilit qui mont tant aide dans la recherche, lenseignement et la vie de tous les jours. Jai normment appris grce toi et jespre voluer, maintenant, en conservant ta philosophie du travail et de lentraide dans une quipe. Marie, mille mercis pour ta prsence plus quapprcie depuis presque 4 ans, les liens qui se sont crs entre nous sont solides et trs sincres. Durant ces annes, il y a galement eu de belles rencontres avec plusieurs personnes de la facult de chimie. Je tiens remercier toute lquipe du Laboratoire de Synthse et Ractivit Organique : Yann, Simon, Carmen, Marie-Paule, Annabelle. Merci au Pr. Patrick Pale et au Dr. Jean-Marc Weibel pour votre sympathie et de mavoir toujours ouvert votre porte pour un conseil ou une discussion. De plus, grce vous, jai pu apprendre enseigner et amliorer mon travail. Merci
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Aurlien Alix pour sa gentillesse et son aide en chimie. Un merci particulier Alban Orsini pour son soutien, son coute et ses bons dlires. Je souhaite galement remercier lquipe du laboratoire de Chimie Organominrale : Julie, Marilyne, Yann, Jack, Damien et jai une pense toute particulire pour Benot et Christian qui vont beaucoup me manquer. Merci au personnel du magasin de chimie et de la RMN, les aller-retours rguliers taient toujours bien agrables grce eux. Les tudiants qui mont encore plus fait apprcier lenseignement.
Je tiens galement exprimer ma reconnaissance tous mes proches : Hlne DN., Sinan D., Aude MG. ainsi que Cline G. et Hlne S. : des amis essentiels que jai toujours plaisir revoir. Les nouveaux copains mais pas des moindres : Nico, Hali, Chris, Julia, Franz, Silvia, Grard, Natasha, Andy, Nicole, Jean-Marie et Evelyne Les collgues fous de JC : Bastien F., Cdric H., Mick K., Yoyo K., Brunch et Laulau K. Jean-Christophe, merci de mavoir embarque dans ta vie, merci pour ton soutien qui est exceptionnel, merci pour tout ce que tu me fais dcouvrir ! Mes parents et Matthieu, merci dtre l, tout simplement : merci de mavoir toujours encourage, recadre, rassure et merci pour tous les bons moments passs avec vous. Bonne lecture Graldine
iv
Introduction : Prsentation de flavonodes

A. Bref aperu sur la biosynthse des flavonodes et leur tonnante biodiversit structurale.
1. La classe des flavonodes 2. Biosynthse des anthocyanes 2.1 Les chalcones Vers les chalcones : tape biosynthtique Chalcones naturelles et proprits associes Vers les chalcones : voies de synthse
p.5 p.5 p.7 p.9 p.9 p.9 p.10 p.11 p.11 p.12 p.13 p.14 p.14 p.14 p.15 p.16 p.16 p.17 p.18 p.20 p.20 p.21 p.22
2.1.1 2.1.2 2.1.3 2.2
Les flavanones Vers les flavanones : tape biosynthtique Flavanones naturelles et proprits associes Vers les flavanones : voies de synthse
2.2.1 2.2.2 2.2.3 2.3
Les flavones Vers les flavones : tape biosynthtique Flavones naturelles et proprits associes Vers les flavones : voies de synthse
2.3.1 2.3.2 2.3.3 2.4
Les dihydroflavonols Vers les dihydroflavonols : tape biosynthtique Dihydroflavonols naturels et proprits associes Vers les dihydroflavonols : voies de synthse
2.4.1 2.4.2 2.4.3 2.5
Les flavonols Vers les flavonols : tape biosynthtique Flavonols naturels et proprits associes Vers les flavonols : voies de synthse
2.5.1 2.5.2 2.5.3
2.6
Les anthocyanes et leurs drivs Vers les drivs anthocyaniques : tape biosynthtique Drivs anthocyaniques naturels et proprits associes Vers les drivs anthocyaniques : voies de synthse
p.24 p.24 p.25 p.27 p.29
2.6.1 2.6.2 2.6.3
B. Pigments naturels et leur comportement en solution aqueuse

1. Les pigments anthocyaniques 1.1 1.2 Types danthocyanes Changements de structures Nature et concentration des anthocyanes Autres facteurs pH du mileu
p.29 p.29 p.31 p.31 p.32 p.32 p.34 p.35 p.35 p.36 p.38 p.39 p.40 p.40 p.40 p.41 p.41 p.42
1.2.1 1.2.2 1.2.3
2. Stabilisation naturelle de la couleur 2.1 Copigmentation Copigmentation intermolculaire Copigmentation intramolculaire
2.1.1 2.1.2 2.2 2.3
Interactions avec les ions mtalliques Utilisation des anthocyanes
3. Stabilit de la couleur dans la solution vin rouge 3.1 La vinification Foulage - Egrappage Cuvaison Fermentation - Macration Ecoulage - Pressurage La fermentation malo-lactique
3.1.1 3.1.2 3.1.3 3.1.4
vi
3.1.5 3.2
Remarques
p.42 p.43 p.43 p.43 p.44 p.45 p.45 p.46 p.48
Composition en anthocyanes Composition selon le cpage Climat Au cours de la vinification
3.2.1 3.2.2 3.2.3 3.3
Maturation du vin et volution des pigments Pigments responsables de la couleur du vin rouge Ractivit de la malvidine 3-O-glucoside
3.3.1 3.3.2
3.3.3 Pigments sophistiqus forms partir de la malvidine-3-Oglucoside
Voies daccs des motifs pyranoanthocyanidiques

A. Contexte actuel
p.57 P.57 p.57 p.57 p.59 p.60 p.61 p.61 p.62 p.63
1. Prparation de pyranoanthocyanidines 1.1 Accs aux pyranoanthocyanes : Voies classiques Synthse Pyranoanthocyane phnolique
1.1.1 1.1.2
1.2 Accs aux 3-doxy-pyranoanthocyanidines phnoliques: alternative originale 1.2.1 1.2.2 1.2.3 Formation du sel de 4-mthylflavylium 95 Ractivit du sel de 4-mthylflavylium 95 Hypothse mcanistique de ltape de condensation
2. Optimisation de la stratgie
vii
2.1 2.2
Confirmation de la stratgie sur une srie de flavones modles Validation de la stratgie sur une srie de flavonols modles
p.63 p.66 p.68 p.69 p.70 p.71 p.71 p.71 p.72 p.74 p.74 p.74 p.75 p.75 p.76 p.77 p.78
3. Objectifs et analyse de la stratgie 3.1 3.2 Limites au niveau du cycle B. Limites au niveau du groupement R
B.
Accs au motif flavonol
1. Stratgie B1 1.1 1.2 1.3 Prsentation de la stratgie Application de la stratgie Bilan et inconvnients de cette stratgie Instabilit du produit dlimination Raction de ctohydroxylation
1.3.1 1.3.2 2. Stratgie B2 2.1 2.2
Prsentation de la stratgie Formation d-O-actophnones 110 -hydroxylation par une N-sulfonyloxaziridine : Conditions B2A -hydroxylation par le diactate de iodosobenzne : Conditions
2.2.1 2.2.2 B2B 2.2.3 B2C 2.2.4 3. Stratgie B3 3.1 3.2
-actoxylation par le triactate de manganse: Conditions
p.82
Bilan de la stratgie B2
p.84 p.84 p.85 p.89
Prsentation et rsultats de la synthse biomimtique B3 Bilan et extension de la stratgie B3
viii
4. Bilan des stratgies B 4.1 4.2 Bilan Perspectives
p.94 p.94 p.95 p.97 p.97 p.97 p.100 p.100 p.102 p.103 p.103 p.104 p.106 p.109 p.109 p.111 p.111 p.112 p.113 p.114 p.115 p.117 p.118 p.119 p.119
C. Accs au motif sel de 4-mthylflavylium

1. Stratgie C 1.1 1.2 Prsentation de la stratgie Synthse de 1,3-diones ou -dictones Mthodes classiques Alternative originale
1.2.1 1.2.2 1.3
Application de la stratgie C Formation de l-aminonitrile 118 Formation de lintermdiaire propargylique 119 Formation de la 1-phnyl-butan-1,3-dione 117 Bilan de la formation de 1-phnyl-butan-1,3-diones.
1.3.1 1.3.2 1.3.3 1.3.4 1.4
Accs au motif sel de 4-mthylflavylium
2. Extension de la stratgie C 2.1 2.2 -oxygnation de la benzoylactone 117a Alternative pour lobtention de 1-phnyl-butan-1,3-dione -chloration de 117 -oxygnation de 121a
2.2.1 2.2.2 2.3 2.4 2.5
Formation de sels de 4-mthylflavylium oxygns en position 3 Alternative pour accder des sels de 4-mthylflavylium 120 Perspectives
D. Accs au motif pyranoanthocyanidine

1. Formation du cycle D et substitution
ix
1.1 1.2 Prsentation de la stratgie Premire application de la stratgie Synthse de produits condenss Proprits physico-chimiques des produits condenss p.119 p.120 p.120 p.125 p.128 p.128 p.130 p.131 p.131 p.134 p.135 p.136 p.140 p.143 p.144 p.147 p.147 p.147 p.149
1.2.1 1.2.2 1.3
Seconde application de la stratgie Tentative daccs de nouveaux pigments Rflexion sur le mcanisme de condensation
1.3.1 1.3.2
2. Etude sur le mcanisme de condensation. 2.1 Screening de molcules et de solvants Observations Extension Bilan et hypothse
2.1.1 2.1.2 2.1.3 2.2 2.3 3. Bilan
Ractivit des espces par calculs assists par informatique Nouvelle hypothse
E. Conclusion
1. Contexte et objectifs 2. Bilan 3. Perspectives
Annexes
Partie exprimentale Partie bibliographique
p.153 p.207
Ac ADP AL APCI Ar ATP Bn

t
actyle Adnosine DiPhosphate acide de lewis
M m/z MA Me mg mL mol mmol MO MOM NCS [O] PF Ph Pi ppm PPTS py rdt Rf RMN RPE SM TA TBAI TEMPO Tf THF TFA PTSA ou
nombre dondes en cm-1 mol.L-1 Rapport masse sur charge (en SM) MicroAnalyse Mthyle milligramme milliLitre mole millimole Micro-Ondes MthOxyMthyle N-ChloroSuccinimide raction dOxydation Point de Fusion Phnyle Phosphate inorganique Partie par million
Atmospheric Pressure Chemical Ionization

aryle Adnosine Triphosphate benzyle
t
Bu
-butyle
cat. CCM DDQ DEPT DMDO DMF DMSO DPPH dr
catalytique Chromatographie sur couche mince 2,3-Dichloro-5,6-DicyanobenzoQuinone
Distortionless Enhancement by Polarization Transfer

DiMthylDiOxirane N,N-DiMthylFormamide DiMthylSulfOxide 2,2-DiPhnyl1-PicrylHydrazyl
Para-ToluneSulfonate de Pyridinium
pyridine rendement Rapport frontal Rsonance Magntique Nuclaire Rsonance paramagntique Electronique Spectromtrie de Masse Temprature Ambiante
diastereomeric ratio
coefficient dabsorption molaire en mol .L.cm
-1 -1
ee q. ESI Et g HIV HMDS HR Hz IR L LDA
excs enantiomrique quivalent
ElectroSpray Ionization
Ethyle gramme
Human Immunodeficience Virus

HexaMthylDisilazane Haute Rsolution Hertz Infra-Rouge Litre longueur donde en nm Diisopropylamidure de lithium
TtraButylAmmonium Iodide
2,2,6,6-TEtraMthyl-1-PipridinylOxy Triflate TtraHydroFurane Acide TrifluoroActique Para-TolueneSulfonic Acid UltraViolet-Visible
p-TsOH
UV-Vis
Introduction : Prsentation de flavonodes
A. Bref aperu sur la biosynthse des flavonodes et leur tonnante biodiversit structurale (p. 5-28)
B. Pigments naturels et leur comportement en solution aqueuse (p. 29-53)
A. Bref aperu sur la biosynthse des flavonodes et leur tonnante biodiversit structurale.
1. La classe des flavonodes Les flavonodes appartiennent la famille des polyphnols : ce sont des molcules aromatiques polysubstitues ayant un rle de mtabolites secondaires chez les plantes. La classe des flavonodes est lune des plus abondantes et ce jour, plus de 9000 structures naturelles ont t isoles et caractrises.1 Ces composs sont rputs pour leur caractre anti-oxydant, neutralisant les radicaux libres et limitant ainsi certains dommages oxydatifs responsables de maladies. Ils sont donc lorigine deffets physiologiques bnfiques pour lorganisme humain et mritent lintrt croissant que la recherche leur porte.2 La structure dun flavonode sorganise toujours autour dun squelette 1,3diphnylpropane C6-C3-C6 (Figure 1), dcrit par une nomenclature spcifique. Les deux cycles benzniques sont nomms cycle A et cycle B. Le chanon propyle C3 peut tre complt par une fonction ther formant ainsi un cycle central, appel cycle C.
C6 C3 C6
6' 8 7 6 9 1
5'
O C
2 1' 3
B
2'
4' 3'
A
5 10
Squelette 1,3-diphnylpropane
Structure tricyclique commune aux flavonodes
Figure 1 : Structures des flavonodes : enchanement C6-C3-C6
Harborne, J. B. ; Baxter, H. ; The handbook of natural flavonoids, John Wiley & Sons : Chichester, 1999. Harborne, J. B. ; The flavonoids. Advances in research since 1986 ; Chapman & Hall : London, 1994. Harborne, J. B. ; The flavonoids. Advances in research since 1980 ; Chapman & Hall : London, 1988. Harborne, J. B. ; Mabry T. J. ; Advances in flavonoid research, 1975-1980 ; Chapman & Hall : London, 1982. Harborne, J. B. ; Mabry, T. J. ; The flavonoids ; Chapman & Hall : London, 1975. 2 Raskin, I. ; Ribnicky, D. ; Komarnytsky, S. ; Ilic, N. ; Poulev, A. ; Borisjuk, N. ; Brinker, A. ; Moreno, D. ; Ripoll, C. ; Yaboki, N. ; ONeal, J. ; Cornwell, T. ; Pastor, I. ; Fridlender, B. ; Trends Biotechnol., 2002, 20, pp 522-531.
Les flavonodes se divisent en plusieurs sous-classes qui se distinguent par une diversit fonctionnelle au niveau des positions 2, 3 et 4 du cycle C (Figure 1). Par ailleurs, au sein dune mme sous-classe, les possibilits de substitution des cycles A et B sont multiples : onze carbones du squelette flavonode peuvent porter un substituant de type hydroxyle, mthoxyle, mthyle, isoprnyle ou benzyle. Chaque groupement hydroxyle, ainsi que certains carbones, peuvent tre conjugus avec un sucre et le glycoside correspondant peut tre acyl partir dun acide phnolique ou aliphatique (Figure 2).3,4
OH HO HO HO HO OH O O O O HO O OH Me OH O Me O O O
Une flavanone naturelle: Le mattucinol-7-0-(4",6"-0-(S)-hexahydroxydiphenylglucoside) isol de Miconia myriantha (Melastomataceae)
Figure 2 : Exemple de la complexit dun flavonode naturel
A cette multiplicit de structures, sassocient les diffrentes proprits bio-physicochimiques des flavonodes. Par exemple, les drivs anthocyanique (du grec anthos : fleur, kuanos : bleu), grce leur squelette 2-phnylbenzopyrylium, prsentent des proprits de chromophores et sont donc en partie responsables de la couleur des fleurs et des fruits dans le rgne vgtal. Ces molcules jouent un rle trs important chez les plantes, leurs diverses proprits seront exposes dans le chapitre B. Nous avons utilis plusieurs sous-classes de flavonodes au cours de ce travail et nous proposons de les prsenter selon le fil conducteur de leurs voies mtaboliques.
Williams, C. A. ; Grayer, R. J. ; Nat. Prod. Rep., 2004, 21, 539-573. Harborne, J. B. ; Williams, C. A. ; Nat Prod. Rep., 2001, 18, 310-333. 4 Li, X.-C. ; Jacob, M. R. ; Pasco, D. S. ; Elsohly, H. N. ; Nimrod, A. C. ; Walker, L. A. ; Clarck, A. M. ; J. Nat. Prod., 2001, 64, 1282-1285.
2. Biosynthse des flavonodes Depuis plusieurs dcennies, lanalyse et la comprhension du mtabolisme phnolique, plus particulirement celui des flavonodes, constituent un rel dfi pour un grand nombre dquipes scientifiques.5,6 Ce sont dabord des mthodes classiques didentification, qui ont permis les premires analyses,7 : comme lextraction de micro-organismes et la recristallisation des enzymes. Puis ces vingt dernires annes, des techniques plus performantes ont fait leur apparition, comme le gnie gntique prcisant le rle et le comportement de certains gnes ou encore la manipulation de lADN et de lARN (extraction, digestion enzymatique, amplification, squenage, quantification) .8 Toutes les tapes de la biosynthse des flavonodes ne sont pas encore clairement lucides, mais elle constitue lune des plus labores en rapport avec les mtabolites secondaires (Schma 1).6,7 Grce des ractions enzymatiques, un grand nombre de sous-classes de flavonodes deviennent des intermdiaires, dont nous proposons de dcrire quelques tapes clefs (Tableau 1).
Enzymes 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 2.6 CHS (Chalcone synthase) CHI (Chalcone Isomrase) FS (Flavone Synthase) F3H (Flavanone-3-Hydroxylase) FLS (Flavonol Synthase) Chane enzymatique (FNR, ANS, GT) Intermdiaires synthtiss Chalcone Flavanone Flavone Dihydroflavonol Flavonol Drivs anthocyaniques
Tableau 1 : Molcules impliques dans la biosynthse des flavonodes

5 6
Stafford, H. A. ; Flavonoid metabolism , CRC Press : Boca Raton, 1990. Heller, W. ; Forkmann, G. ; The flavonoids. Advances in research since 1986 ; Chapman & Hall : London, 1994. Harborne, J. B. ; Secondary Plant Products. Encyclopedia of plant physiology, Springer-Verlag : Berlin, 1980, pp 329-402. 7 Macheix, J. J. ; Fleuriet A. ; Jay-Allemand C. ; Les composs phnoliques des vgtaux ; Presses polytechniques et universitaires romandes : Lausanne, 2005 ; pp 39-54. 8 Davies K. M. ; Schwinn K. E. ; Flavonoids. Chemistry, Biochemistry and Applications ; O. M. Andersen & K. R. Markham : CRC Press : Boca Raton, 2006, pp 143-171.
p-coumaroyl CoA + 3 actyl CoA CHS OH HO OH Chalcones OH O Flavanones IFS FS
OH O CHI HO Flavan-4-ol ANS OH HO O F3H FNR OH O
Isoflavones HO O
OH
OH O
Flavones
OH OH 3-Doxyanthocyanidines HO O OH FLS HO O OH Flavonols OH HO O OH Anthocyanidines OH O OGlycoside Anthocyanines OH
OH O
Dihydroflavonols DFR ANS ou LDOX
OH O
OH HO O OH O ? OH OH Tannins condenss ? n OH
Flavane-3,4-diols (Leucoanthocyanes) FDR HO O OH
OH HO
OH HO
OH GT
OH
OH
Flavan-3-ols (Catchines)
Schma 1 : Schma biosynthtique simplifi des flavonodes. Abbrviations: CHS= Chalcone Synthase; CHI= Chalcone Isomrase FS= Flavone Synthase; IFS=Isoflavone Synthase; FNR= Flavanone rductase; F3H= Flavanone-3-Hydroxylase; FLS= Flavonol Synthase; DFR= DihydroFlavonol Rductase; ANS= Anthocyanidine Synthase; GT= GlucosylTransfrase
2.1 Les chalcones 2.1.1 Vers les chalcones : tape biosynthtique
Le motif chalcone est important puisquil ouvre la voie de la biosynthse des flavonodes, avec la formation du squelette diphnylpropane C6-C3-C6 (Schma 2). Dans le schma prsent ci-dessous, une chalcone, la naringnine 1, isole de Vitex
leptobotrys (Verbenaceae), est obtenue par action dune enzyme, la Chalcone

Synthase (CHS) : elle engendre une squence ractionnelle de dcarboxylation, condensations, cyclisation intramolculaire et aromatisation entre un ester CoA de pcoumaryle 2 et trois molcules dester CoA de malonyle 3.9,10
2 Ester CoA de p-Coumaryle fragment C3-C6 CoAS O B +3 CoAs CHS OH OH A OH O Une Chalcone: squelette C6-C3-C6 (la chalcone naringnine) B O 3 OH O OH Ester CoA de malonyle fragment C6 (A)
1 HO
Schma 2 : Formation du squelette C6-C3-C6
2.1.2
Chalcones naturelles et proprits associes
Un grand nombre de chalcones ont t dcrites dans la littrature. Ces molcules naturelles sont toutes hydroxyles et / ou mthoxyles et diverses combinaisons de trois six groupements peuvent fonctionnaliser les cycles A et B du squelette
Thuy, T. T. ; Porzel, A. ; Ripperger, H. ; Sung, T. V. ; Adam, G. ; Phytochemistry, 1998, 49(8) , 2603-2605. 10 Davies K. M. ; Schwinn K. E. ; Flavonoids. Chemistry, Biochemistry and Applications ; O. M. Andersen & K. R. Markham : CRC Press : Boca Raton, 2006 ; pp 154-155.
chalcone (Figure 3).11,12,13,14 Elles ont, entre autres, un rle de chromophore dans le rgne vgtal car elles se caractrisent par une couleur jaune vif (bande dabsorption empitant dans le visible).
4 O O
4' 2 4
5 OH O
4' 4
6 OH O
4'
OH
3
O
3' 2' 6'
OH
4
O O Glypallichalcone isole de Glycyrrhiza pallidiflora (Leguminosae)
3'
2'
OH
OH
Hliannone A isole de Helianthus annuus (Asteraceae)
Hamilcone isole de Uvaria hamiltonii (Annonaceae)
Figure 3 : Exemples de chalcones naturelles
Lhliannone A 5, isole de Heliantus annuus (ou tournesol) en 1999 par Macias et
al., prsente une activit allomone : action dune molcule scrte par une plante
sur une espce diffrente (plante ou organisme vivant), avec un effet positif pour la plante mettrice et ngatif pour lorganisme rcepteur (Figure 3).13 Ainsi, lhliannone A joue le rle dherbicide naturel en protgeant la plante. 2.1.3 Vers les chalcones : voies de synthse
En tant que principaux prcurseurs diphnylpropanes, les chalcones sont des intermdiaires trs importants dans la synthse des flavonodes : la mthode daccs la plus utilise fait intervenir une 2-hydroxyactophnone 7 avec un benzaldhyde 8 dans une condensation de type Claisen-Schmidt. Cette aldolisation-limination peut
11
Grayer, R. J. ; Veitch, N. C. ; Flavonoids. Chemistry, Biochemistry and Applications ; O. M. Andersen & K. R. Markham : CRC Press : Boca Raton, 2006 ; pp 1003-1036. Harborne, J. B. ; Baxter, H. ; The handbook of natural flavonoids, Vol.2, John Wiley & Sons : Chichester, 1999. Bohm, B. A. ; The Flavonoids : Advances in research since 1986 ; Chapman & Hall : London, 1993. Bohm, B. A. ; The Flavonoids : Advances in research since 1980 ; Chapman & Hall : London, 1988. Bohm, B. A. ; The Flavonoids : Advances in research ; Chapman & Hall : London, 1982. Bohm, B. A. ; The Flavonoids ; Chapman & Hall : London, 1975. 12 Cai, L. N. et al. ; Yaoxue Xuebao, 1992, 27, 748. 13 Macias, F. A. Oliva ; R. M., Varela ; R. M., Torres, A. ; Molinillo, M. G. ; Phytochemistry, 1999, 52 , 613-621. Macias, F. A ; Molinillo, M. G. ; Torres, A. ; Varela, R. M. ; Castellano, D. ; Phytochemistry, 1997, 45, 683-687. 14 Huang, L. ; Wall, M. E. ; Wani, M. C. ; Navarro, H. ; Santisuk, T. ; Reutrakul, V. ; Seo, E. K. ; Famsworth, N. R. ; Kinghom, A. D. ; J. Nat. Prod ., 1998, 61, 446-450.
10
se faire en conditions acides ou basiques,15 bien que le milieu basique soit le plus souvent dcrit dans la littrature (Schma 3).16 La formation de la chalcone 9 dbute par une tape de dprotonation de lactophnone 7 conduisant lnolate correspondant. Laddition nuclophile de cet nolate sur le benzaldhyde 8 forme un intermdiaire aldol qui subit ensuite une tape dlimination. Selon la substitution (RA et RB) des cycles A et B, les temps de raction et les rendements varient. Loptimisation de la synthse de chalcones reste un sujet dactualit pour les quipes de recherche qui y sont impliques.17,18
RA A 7 RB B 8 O OH O Condensation de Claisen-Schmidt NaOH/EtOH/TA ou KOH, H2O-EtOH (1/1) RA A OH O 9 B RB
Schma 3 : Synthse de chalcones par condensation de Claisen-Schmidt en milieu basique
2.2 Les flavanones 2.2.1 Les flavanones Vers les flavanones : tape biosynthtique sont des isomres de 2-hydroxychalcones, issues de la
transformation du motif linaire en motif cyclique (cycle C).19 La Chalcone Isomrase (CHI) catalyse la cyclisation, de type 6-endo-trig, de la chalcone 1 en flavanone
15
Marais, J. P. J. ; Ferreira D. ; Slade, D. ; Phytochemistry, 2005, 66(18), 2145-2176. Augustyn J. A. N., Bezuidenhoudt B. C. B. ; Swanepoel, A. ; Ferreira D. ; Tetrahedron, 1990, 46, 4429-4442. 16 Cabrera, M. ; Simoens, M. ; Falchi, G. ; Lavaggi, M. L. ; Piro, O. E. ; Castellano, E. E. ; Vidal, A. ; Aztequa, A. ; Monge, A. ; Lopez de Cerain, A. ; Sagrega, G. ; Seoane, G. ; Ceretto, H. ; Gonzales, M. ; Bioorg. Med. Chem., 2007, 15, 3356-3367. Wang, Y. ; Tan, W. ; Li, W. Z. ; Li, Y. ; J. Nat. Prod., 2001, 64, 196-199. 17 Chassaing S. ; Thse de Doctorat, Contribution la chimie des flavonodes : Voie daccs aux dihydroflavonols : vers une synthse biomimtique de flavonols et une synthse de tannins condenss. Vers une synthse de pigments anthocyaniques sophistiqus , 2006, Strasbourg I. 18 Stoyanov, E. V. ; Champanier, Y. ; Simon, A. ; Basly, J. P. ; Bioorg. Med. Chem. Lett., 2002, 12 , 2685-2687. Wattanasin, S. ; Murphy W. S. ; Synthesis, 1980, 647-650. 19 Grayer R. J. ; Veitch, N. C. ; Flavonoids. Chemistry, Biochemistry and Applications ; O. M. Andersen & K. R. Markham : CRC Press : Boca Raton, 2006 ; pp 917-918.
11
naringnine 10, crant un centre strogne en position 2.10 Ainsi, grce la strospcificit de cette raction enzymatique, la grande majorit des flavanones sont de configuration (2S)-flavanones (Schma 4).
1 HO OH OH CHI HO 10 O
2
OH
OH
OH
Chalcone
une (2S)-Flavanone: la naringnine
Schma 4 : Isomrisation strospcifique dune chalcone en (2S)-flavanone
2.2.2
Flavanones naturelles et proprits associes
Les flavanones sont abondantes chez les agrumes, mais peu rencontres chez les autres fruits. Le genre Citrus est caractris par une forte accumulation de flavanones glucosides et de quatre aglycones (Figure 4) : la naringnine 10, lriodictyol 11a, lisosakurantine 11b et lhesprtine 11c.20
R3' 11 HO
7 3'
R4'
4'
O
5
OH
Eriodictyol 11a: R3'= OH, R4'= OH Isosakurantine 11b: R3'= H, R4'= OCH3 Hesprtine 11c: R3'= OH, R4'= OCH3
Figure 4 : Aglycones de flavanones isoles du genre Citrus
Par ailleurs, les flavanones interviennent dans la relation structure - degr damertume. Par exemple la naringine (naringnine lie au 2-rhamnosylglucose) est amre alors que la naringnine 10 et la narirutine (naringnine lie au 6rhamnosylglucose) ne le sont pas. Louverture de lhtrocycle central C peut conduire des dihydrochalcones qui ont un got sucr. Ainsi, par ses proprits organoleptiques, la naringine et ses drivs sont exploitables dun point de vue alimentaire en tant quagents damertume ou initiateurs de produits sucrs.21
20
Macheix, J. J. ; Fleuriet, A. ; Billot, J. ; Jay-Allemand C. ; Fruit phenolics ; CRC Press : Boca Raton, 1990 ; pp 75-76. 21 Macheix, J. J. ; Fleuriet A. ; Jay-Allemand C. ; Les composs phnoliques des vgtaux ; Presses polytechniques et universitaires romandes : Lausanne, 2005 ; p. 131.
12
2.2.3
Vers les flavanones : voies de synthse
La mthode standard de synthse de flavanones est lisomrisation de la 2hydroxychalcone 9 qui conduit un mlange racmique de flavanones 12 (Schma 5). Trois conditions classiques de cyclisation, en milieu acide ou basique donnent de bons rsultats.16,22 Par contre, ces ractions ne sont pas quantitatives, il faut engager plusieurs fois la chalcone 9 dans lquilibre pour obtenir un rendement satisfaisant.
9 B RA A OH O RB 12 RA O C
4
Conditions A et B et C
RB B
2
O Flavanone Conditions opratoires: A: AcOH / reflux; B: NaOAc (3,0 eq.) / EtOH / reflux C: KF (1,0 eq.) / MeOH / reflux.
+/-
Chalcone
Schma 5 : Isomrisation dune chalcone en flavanone.
22
Des fins industrielles ont justifi lamlioration de la synthse de flavanones par de nouveaux travaux : par exemple, une catalyse en milieu htrogne a t mise au point en 2005 par Choudary et al., avec des structures nanocristallines doxyde de magnsium MgO.23 Lune des caractristiques du motif flavanone est son centre strogne en position 2 ; sa synthse asymtrique est donc galement envisageable et des synthses organocatalyses ont t dveloppes. En 2005, Chandrasekhar et al. utilisent la Lproline et en 2007, Biddle et al., une mthode faisant intervenir des thioures chirales comme la molcule 13 (Schma 6).24,25
22 23
Rao, Y. K. ; Rao, C. V. ; Kishore, P. H. ; Gunasekar, D. ; J. Nat. Prod, 2001, 64, 368-369. Choudary, B. M. ; Ranganath, K. V. S. ; Yadav J. ; Kantam, M. L. ; Tet. Lett., 2005, 46(8) , 13691371. 24 Biddle, M. M. ; Lin, M. ; Scheidt, K. A. ; J. Am. Chem. Soc., 2007, 129, 3830-3831. 25 Chandrasekhar, S. ; Vijeender, K. ; Reddy, K. V. ; Tet. Lett., 2005, 46(41), 6991-6993. Ramadas, S. ; Krupadanam, G. L. D. ; Tet. : Asym., 2004, 15(21) , 3381-3391.
13
CO2tBu
1) 10% thioure cat./ -25C / tolune 2) p-TsOH / 80C
H Ph
OH
Ph
O N
S N H N H
Rdt(%): 92, ee(%): 94 Catalyseur thioure:
Ar 13
BnO H N H
Schma 6 : Synthse catalytique et nantioslective de flavanones.
24
2.3 Les flavones 2.3.1 Vers les flavones : tape biosynthtique
Par rapport aux flavanones, les flavones possdent en plus une double liaison entre les carbones 2 et 3 du cycle C. La flavanone 10 peut tre oxyde par la Flavone Synthase (FS) pour former une flavone, lapignine 14 (Schma 7).7 La transformation (2S)-flavanone en flavone entrane la perte du centre strogne en position 2.
10 HO A OH O C
4 2
OH B FS HO A OH
14 O C
4 2 3
OH B
Une flavanone: la naringnine
Une flavone: l'apignine
Schma 7 : Oxydation enzymatique dune flavanone en flavone
2.3.2
Flavones naturelles et proprits associes
Les flavones sont abondantes chez les plantes suprieures sous forme aglycones ou glycosyles. Certaines, comme la lutoline 15, sont en partie responsables de laspect blanc ou ivoire de certaines fleurs, comme les roses et les oeillets (Figure 5). Ce sont des molcules peu colores, mais qui absorbent des longueurs donde caractristiques ( = 210-270 nm, 310 nm). Par exemple, elles sont parfaitement
14
discernables par les abeilles, dont la perception visuelle stend une partie de lultra-violet.26
OH 15 HO A OH O C
4
OH B
2 3
O O A O O
16 O C
4
O B
2 3
La lutoline isole de Rhizobium meliloti
La tangrtine isole de Citrus sinensis et de Citrus reticulata tangerina (Rutaceae)
Figure 5 : Exemples de flavones naturelles
La tangrtine 16 est une flavone naturelle polymthoxyle (Figure 5). Elle est isole de loranger doux (Citrus sinensis) ou encore dun hybride (Citrus reticulata
tangerina) issu du croisement entre la mandarine (Citrus reticulata) et lorange

amre (Citrus
aurantium).
Ces
flavones
ont
des
activits
physiologiques
remarquables pour lhomme et lanimal, notamment des proprits antimicrobiennes et antivirales.27,5 2.3.3 Vers les flavones : voies de synthse
Une des principales mthodes de synthse de flavones 19 a t mise au point par Allan et Robinson en 1924 (Schma 8).17,28 Elle consiste en la condensation, temprature leve, dune 2-hydroxyactophnone 7 avec un anhydride benzoque 17, en milieu basique. La raction est initie par la dprotonation de 7 par le benzoate mtallique 18. Cette stratgie donne des rendements infrieurs 20%, elle a donc subi, depuis, plusieurs amliorations. Une des plus connues est celle de Looker et al. qui, dans les annes quatre-vingt, ont remplac le benzoate mtallique 18 par une amine tertiaire. Celle-ci joue la fois le rle de base et de solvant, permettant ainsi daugmenter les rendements au-del de 60%.17,29
26
Macheix, J. J. ; Fleuriet A. ; Jay-Allemand C. ; Les composs phnoliques des vgtaux ; Presses polytechniques et universitaires romandes : Lausanne, 2005 ; pp 122-123. 27 Huet, R. ; Fruits, 1982, 37, 267. 28 Allan, J. ; Robinson, R. ; J. Chem. Soc., 1924, 2192-2194. 29 Looker, J. H. ; McMechan J. H. ; Mader, J. W. ; J. Org. Chem., 1978, 43(12) , 2344-2347.
15
7 RA A OH O H
17 O O O RB
RB
18 O- M+ O RA A OH
19 O C
3
RB B
RB reflux O
Schma 8 : Mthode de Allan et Robinson.
28
Par ailleurs, dautres mthodes ont t dveloppes, comme les couplages au palladium ou encore la catalyse htrogne supporte (Schma 9).30,31 On peut notamment citer une cyclocondensation dune 1-(2-hydroxy-phnyl)-3-phnylpropanedione 20 en flavone 21, catalyse par un acide organique sur support solide ( base de isopropoxide de titane). Selon la nature du catalyseur, les conversions varient de 5 60 %.31
20 RA A OH O O Catalyseur B RB Tolune / reflux 60% RA A O 21 O B RB
Catalyseur: Acide trifluoromthanesulfonique + mlange de titane form 100C = TriTi100
Schma 9 : Exemple dune catalyse htrogne supporte.
31
2.4 Les dihydroflavonols 2.4.1 Vers les dihydroflavonols : tape biosynthtique
Les dihydroflavonols se caractrisent par un groupe hydroxyl sur lhtrocycle central C, crant ainsi un centre strogne supplmentaire (par rapport aux flavanones) en position 3. Les (2S)-flavanones sont converties strospcifiquement en (2R,3R)-dihydroflavonols par action de la Flavanone 3--Hydroxylase (F3H)
30 31
Dahln, K. ; Walln, E. A. A. ; Grotli, M. ; Luthman K. ; J. Org. Chem., 2006, 71, 6863-6871. Bennardi, D. O. ; Romanelli, G. P. ; Autino, J. C. ; Pizzio, L. R. ; Applied Catalysis A., 2007, 324 , 62-68.
16
(Schma
10).
Cette
tape
biosynthtique
consiste
en
l-hydroxylation
nantiospcifique en position 3 de la naringnine 10 en dihydrokaempfrol 22.32 Remarque : Il est important de prciser que la configuration du centre strogne 2 nest pas modifie au cours de cette tape. Linsertion dun hydroxyle en alpha du carbone 2 inverse la priorit, selon les rgles IUPAC, de ses atomes voisins.
10 HO O
2
OH F3H HO
22 O
2
OH
OH
OH
OH
Une flavanone : la naringnine
Un dihydroflavonol : le dihydrokaempfrol
Schma 10 : 3-Hydroxylation dune flavanone en dihydroflavonol
2.4.2
Dihydroflavonols naturels et proprits associes
Par rapport dautres sous-classes de flavonodes, les dihydroflavonols sont moins frquents dans le rgne vgtal. Par exemple, le dihydrokaempfrol 22 est contenu dans le pricarpe et lendocarpe du raisin (aprs hydrolyse du sucre en position 3), mais en quantit moins importante que la flavanone correspondante, la naringnine 10.33 De nombreuses quipes de recherche travaillent sur lextraction de nouveaux composs partir dextraits bruts de plantes mdicinales traditionnelles. On peut citer lespce Monotes africanus qui manifeste in vitro des proprits anti-HIV. Plusieurs flavonodes sont contenus dans cette plante, dont deux dihydroflavonols prnyls, 23 et 24, isols en 2001 par Meragelman et al. (Figure 6).34 Le dihydroflavonol 23, isol et caractris par cette quipe, est le compos le plus
32
Davies K. M. ; Schwinn K. E. ; Flavonoids. Chemistry, Biochemistry and Applications ; O. M. Andersen & K. R. Markham : CRC Press : Boca Raton, 2006 ; p. 156. 33 Macheix, J. J. ; Fleuriet, A. ; Billot, J. ; Jay-Allemand C. ; Fruit phenolics ; CRC Press : Boca Raton, 1990 ; p. 78. 34 Meragelman, K. M. ; Mckee, T. ; Boyd, M. R. ; J. Nat. Prod., 2001, 64, 546-548.
17
abondant du matriel extrait. Le produit 24, quant lui avait dj t caractris en 1985 par Bruno et al.35
23 HO OH HO
6 8 7 6 5 3
24 O
4' 2
OH
25
OH
5'
OH
HO
6
2'
OH OH
OH
OH
OH
OH
O Bonnaniol A isol de Monotes africanus (Dipterocarpaceae) Diosalol isol de Dioclea grandiflora (Leguminosae)
6,8-diprnylaromadendrine isol de Monotes africanus (Dipterocarpaceae)
Figure 6 : Exemples de dihydroflavonols naturels
Dioclea grandiflora, plante originaire du Brsil, est utilise sous forme dinfusion pour
le traitement de problmes de prostate et le traitement de calculs rnaux. Plusieurs flavonodes ont t extraits des racines de D. grandiflora, le constituant majoritaire tant la 2,5,5-trihydroxy-6,7-dimthoxyflavanone, appele diocline. Elle est reconnue pour avoir des effets sur le systme nerveux et donc une activit analgsique.36 En 1999, Jenkins et al. ont isol et caractris de cette matire premire, deux nouvelles flavanones ainsi que le dihydroflavonol 25, nomm diosalol (Figure 6).37 2.4.3 Vers les dihydroflavonols : voies de synthse
Rcemment, Stefan Chassaing (Laboratoire de Chimie des Polyphnols, 2002-2006) a tudi lors de sa thse, la transformation flavanone 26 en dihydroflavonol 27.38 Deux mthodes stroslectives du diastroisomre trans, font appel loxydation de lnolate dune flavanone 26 ou 26* par un agent oxydant.39
35 36
Bruno, M. ; Savona, G. ; Lamartina, L. ; Lentini, F. ; Heterocycles, 1985, 23, 1147-1153. Batista, J. S. ; Almeida, R. N. ; Bhattacharyya, J. ; J. Ethnopharmacol., 1995, 45, 207-210. Bhattacharyya, J. ; Batista, J. S. ; Almeida, R. N. ; Phytochemistry, 1995, 38(1) , 277-278. 37 Jenkins, T. ; Bhattacharyya, J. ; Majetich, G. ; Teng, Q. ; De Fatima, A. M. ; Almeida, R. ; Phytochemistry, 1999, 52(4) , 723-730. 38 Chassaing S. ; Thse de Doctorat, 2006, Strasbourg I, pp. 119-131. 39 Todokori, T. ; Saito, A. ; Tanaka, A. ; Biosc. Biotechnol. Biochem., 2002, 66(8) , 1772-1774. Adam, W. ; Mller, M. ; Prechtl, F. ; J. Org. Chem, 1994, 59, 2358-2364.
18
26 O 1. Base / THF / -78C puis L3MCl 2. DMDO / actone/ -78C puis NH4F / H2O Base: L3MCl: Rdt (dr%): NaHMDS / 51%(80) LDA Me3SiCl
27 O OH O LDA Cp2TiCl2 64%(>96) (+/-)
O O O
(+/-)
DMDO=
85%(>96 )
Schma 11a : Oxydation dnolates de flavanones par la mthode dAdam et al.

26* O NaHMDS / 28 / THF / -85C / 4 heures 80% O 28 (+/-) Ph O N SO2Ph O 27 O OH
39
Schma 11b : Oxydation dnolates de flavanones par la mthode de Todokori et al.
39
Adam et al. utilisent le dimthyldioxirane (DMDO), avec une base et un acide de Lewis pour obtenir diastroslectivement le 2,3-trans-dihydroflavonol 27 (Schma 11a). La mthode de Todokori et al. est, quant elle, nantioslective et utilise la 2(phnylsulfonyl)-3-phnyloxaziridine 28 (Schma 11b). Une troisime mthode, diastroslective, a t dcrite en 1985 par Moriarty et Prakash (Schma 12).40 Cette stratgie correspond loxydation par le diactate diodosobenzne de la flavanone 26 ou de la chalcone correspondante 26 pour donner lintermdiaire oxyd 29. Les conditions plus ou moins douces de lhydrolyse acide permettent dobtenir diastroslectivement le produit 2,3-transdihydroflavonol 27 ou 2,3-cis-dihydroflavonol 27.
40
Moriarty, R. M. ; Prakash, Om. ; J. Org. Chem., 1985, 50, 151-153. Moriarty, R. M. ; Prakash, Om. ; Freeman, A. M. ; J. Chem. Soc., Chem. Comm., 1984, 927-929.
19
26 O
26'
(+/-)
O PhI(OAc)2 / KOH / MeOH
OH
HCl (concentr) / actone / 2 heures O
O 27 OH (+/-) O O 27' OH
29 (+/-) O O OH conditions acides douces A, B, C
A: HCl (3M) / EtOH / 30 minutes O B: AcOH (50%) / 50-70C / 6 heures C: p-TsOH (cat) / Actone-H2O (100-2) / 3 jours
(+/-)
Schma 12 : Oxydation dune flavanone par le diactate diodosobenzne.
40
2.5 Les flavonols 2.5.1 Vers les flavonols : tape biosynthtique
Les flavonols se caractrisent par une liaison insature entre les carbones 2 et 3 et par une fonction hydroxyle en position 3 (3-hydroxyflavone) du cycle C. Le kaempfrol 30 est form partir du dihydroflavonol correspondant 22, par action de la Flavonol Synthase (FLS) (Schma 13).7 La transformation (2R,3R)dihydroflavonol en flavonol entrane la perte des centres strognes en 2 et 3 du dihydroflavonol initial.
22 HO O
2
OH FLS OH OH HO
30 O
2
OH
OH
OH
Un dihydroflavonol : le dihydrokaempfrol
Un flavonol : le kaempfrol
Schma 13 : Etape biosynthtique du motif flavonol
20
2.5.2
Flavonols naturels et proprits associes
Les flavonols sont trs rpandus dans le rgne vgtal. De ce fait, ils sont abondants dans lalimentation. On citera le kaempfrol 30, la querctine 31 et la myrictine 32 (Schma 13 et Figure 7).41 Ils peuvent participer la couleur jaune de certaines fleurs (primevre, chrysanthme jaune, fleur du cotonnier). On retrouve les flavonols principalement sous forme glycosyle dans les fruits et les lgumes.
OH 31 HO
7 3' 2 4'
OH OH HO
7
32 O
2
3'
4'
OH OH
5'
OH
OH
OH
OH
Querctine ou 3',4',5,7-ttrahydroxyflavonol
Myrictine ou 3',4',5,5',7-pentahydroxyflavonol
Figure 7 : Deux flavonols abondants dans lalimentation
Une plante dEgypte, Cornulaca monacantha (Chenopodiaceae), est utilise en mdecine traditionnelle pour le traitement dictres (coloration jaune de la peau). Dans un premier temps, lanalyse de cette plante a rvl la prsence de triterpnodes et de flavonodes.42 Puis dautres analyses, publies par Kandil et Grace en 2001, ont permis disoler et de caractriser trois nouveaux composs dont, la querctine-4-O--D-galactoside (Figure 8).43
OH
3' 4'
OGal
HO
OH OH Gal= H HO H
H O H OH OH H
OH
OH
Figure 8 : Flavonol isol de C. monacantha (Chenopodiaceae)
41
Aherne, S. A. ; OBrien, N. M. ; Nutrition, 2002, 18(1) , 75-81. Crozier, A. ; Lean, M. E. J. ; McDonald, M. S. ; Black, C. ; J. Agric. Food Chem., 1997, 45, 590-595. 42 Amer, M. A. ; Dawidar, A. M. ; Fayez, M. B. ; Planta Med., 1974, 26(3) , 289. 43 Kandil, F. E. ; Grace, M. H. ; Phytochemistry., 2001, 58, 611-613.
21
Deux drivs de la myrictine 32, trs originaux, ont t isols en 2003 par Elegami
et al. de Nymphaea lotus (Figure 9).44 Cette plante est un nnuphar (ou fleur de
lotus) qui pousse au bord du Nil. Ses racines et ses feuilles sont utilises traditionnellement comme traitement de la dysenterie, de tumeurs ou comme antibactrien.45 Cependant, pour le moment, aucun des composs 33 et 34 isols de cette plante, ne prsente dactivit contre Escherichia coli et Staphylococcus
aureus.44
HOHO OH O O HO HO 33 OH O O OH O O O OH OH 34 OH O HO HO H O OH O O HOHO OH O OH OH
6"-p-coumaroyl-myrictine-3'-O-glucoside
Nympholide
Figure 9 : Flavonols originaux isols de N. Lotus.
44
2.5.3
Vers les flavonols : voies de synthse
Plusieurs mthodes de synthse de flavonols datent du dbut des annes trente. Une voie classique est loxydation dune 2-hydroxychalcone 9 par le peroxyde dhydrogne en milieu acide.46 Une autre stratgie, dveloppe par Baker et Venkataraman fait appel un intermdiaire de type 1,3-diaryl-1,3-dione 35 (Schma 14).47 Cette mthode a lavantage de former le motif flavone 21 ou flavonol 38 selon la nature de la
44
Elegami, A. A. ; Bates, C. ; Gray, A. I. ; Mackay, S. P. ; Skellern, G. G. ; Waigh, R. D. ; Phytochemistry, 2003, 63, 727-731. 45 Elegami, A. A. ; Almagboul, A. Z. ; Omer, M. E. A. ; El Tohami, M. S. ; Fitoterapia, 2001, 72, 810817. El Ghazali, G. E. B. ; El Tohami, M. S. ; Elegami, A. A. ; Medicinal Plants of the White Nile Provinces ; Khartoum University Press, Khartoum, 1994, p. 74. 46 Oyamada, T. ; Bull. Chem. Soc. Jpn., 1935, 10, 182-186. Murakami and Irie ; Proc. Imp. Acad. (Tokyo) , 1935, 11, 229. Flynn, J. P. ; Proc. Roy. Irish Acad., 1934, 42B, 1. 47 Mahal, H. S. ; Venkataraman, K. ; J. Chem. Soc., 1934, 1767-1769. Mahal, H. S. ; Venkataraman, K. ; Curr. Sci. India, 1933, 2, 214-215. Baker, W. J. ; J. Chem. Soc., 1933, 1381-1389.
22
fonction Y. La premire tape est une cyclisation 6-exo-trig de 35 en 36. Cet intermdiaire est ensuite dshydrat pour donner le compos 37 qui, par dprotonation conduit au produit 21 (Y=H) ou 38 (Y=OH).48
21: Y=H 38: Y=OH RB milieu acide RA O Y OH O O + H+ O OH2 Y O 36 - H+ + RA - H2O + H2O RA O Y O 37 O RB
35 RA Y
RB
RB
Schma 14 : Mthode de Baker et Venkataraman.
47
En 2000, une synthse de flavonols a t mise au point au Laboratoire de Chimie des Polyphnols par Fougerousse et Gonzalez, utilisant la mthode dcrite par Baker et Venkataraman cit ci-dessus.48,49 Le prcurseur ester benzoque 39 permet, aprs bromation puis substitution, la formation de lintermdiaire 35, avec Y = OBz. La cyclisation en milieu acide fort, suivie de la saponification du benzoate, conduit au flavonol 38 (Schma 15).
48 49
Chassaing S. ; Thse de Doctorat, 2006, Strasbourg I, pp. 66-72. Fougerousse, A. ; Gonzalez, E. ; Brouillard R. ; J. Org. Chem., 2000, 65, 583-586.
23
39 O RA O
RB 1. PhNMe3+, Br3- / RA THF / TA 2. PhCOOK / CH3CN / TA O O O O
RB RA NaH / THF / OBz 65C OH O
35 OBz RB
O 1. H2SO4 / AcOH / 60C 2. NaOH / EtOH-H2O / 60C RB
38 RA O OH O
Schma 15 : Synthse de flavonols par Fougerousse et Gonzalez.
49
2.6 Les anthocyanes et leurs drivs Il existe trois catgories de pigments anthocyaniques, le chromophore flavylium tant commun aux trois. On distinguera : les 3-doxyanthocyanidines (R3 = H), les anthocyanidines (R3 = OH) et les anthocyanes (R3 = O-glycoside) (Figure 10). 2.6.1 Vers les drivs anthocyaniques : tape biosynthtique
Plusieurs interrogations subsistent encore quant aux enzymes qui interviennent dans la formation des pigments anthocyaniques. Cette cascade denzymes soppose la simplicit des transformations prsentes jusqu prsent : - A ce jour, on pense que les 3-doxyanthocyanidines sont formes partir des flavanones. La naringnine 10 serait rduite par la Flavanone Reductase (FNR) pour former lapifrol 40, qui ragirait alors avec lAnthocyanidine Synthase (ANS) pour conduire une 3-doxyanthocyanidine, lapigninidine 41 (Schma 16).50
50
Davies K. M. ; Schwinn K. E. ; Flavonoids. Chemistry, Biochemistry and Applications ; O. M. Andersen & K. R. Markham : CRC Press : Boca Raton, 2006 ; p. 150 et pp 157-161.
24
10 HO O
OH HO FNR
40 O
OH HO
Cl-
41 O
OH
OH
OH
OH
ANS
OH Une 3-doxyanthocyanidine: l'apigninidine
Une flavanone: la naringnine
Apifrol
Schma 16 : Formation du motif 3-doxyanthocyanidine
- Le dihydroflavonol 22 est rduit par la Dihydroflavonol Reductase (DFR) pour former la leucoanthocyanidine 42. LAnthocyanidine Synthase (ANS) conduit ensuite lanthocyanidine plargonidine 43 qui va, son tour, tre glycosyle par la GlycosylTransferase (GT) formant une anthocyane, la plargonidine-3-O-glucoside 44 (Schma 17).53 LANS est le nom utilis gnralement pour lenzyme qui permet la transformation de 42 43. Cependant, le nom de Leucoanthocyanidine DiOXidase (LDOX) peut galement apparatre en raison du type de la raction.
22 HO O OH OH O DFR OH OH OH HO 42 O OH OH HO ANS ou LDOX Cl43 O OH OH Une anthocyanidine: la plargonidine GT OH Une anthocyane: la plargonidine-3-O-glucoside OH HO 44 O OGlu OH
Cl-
Un dihydroflavonol: le dihydrokaempfrol
Une leucoanthocyanidine: la leucoplargonidine
Schma 17 : Formation des anthocyanidines et des anthocyanes
2.6.2
Drivs anthocyaniques naturels et proprits associes
Comme annonc ci-dessus, les 3-doxyanthocyanidines, les anthocyanidines et les anthocyanes ont en commun le squelette flavylium 45 (Figure 10). Ce motif a la particularit dtre un chromophore, ainsi ces flavonodes sont des pigments naturels trs frquemment rencontrs chez les vgtaux.51 Ils sont en partie responsables des
51
Iacobucci, G. A. ; Sweeny, J. G. ; Tetrahedron, 1983, 39(19) , 3005-3038. Harborne, J. B. ; Mabry, T. J. ; Hrazdina, G. ; The Flavonoids : Advances in Research, Chapman & Hall, London, 1982, p. 135. Timberlake, C. F. ; Bridle P. ; Friend J. ; Rhodes, M. J. C. ; Recent Advances in the Biochemistry of
25
nuances de couleur rouge ( = 490-500 nm), violet ( = 560-580 nm) et bleu ( = 580-595 nm) des fruits et des fleurs.52 Par exemple, la lutolinidine 46 isole du genre Sorghum, crales dAfrique et dAsie, est une 3-doxyanthocyanidine de couleur orange. La delphinidine 47, isole de la banane bleue, a une couleur violette. Enfin, la malvidine-3-O-galactoside 48 contenue dans les myrtilles, intervient dans la couleur rouge de la baie.53
XO A C B
Squelette flavylium 45 46 X47 OH O

3 3
OH
OH OH
48 X-
O OH
HO
XHO O OH
OH
HO
O
3
O OGalactoside
OH Une 3-Doxyanthocyanidine : La luteolinidine isole de Sorghum bicolor (Poaceae)
OH Une Anthocyanidine : La delphinidine isole de Musa laterita (Musaceae)
OH Une Anthocyane : La 3-O-galactoside-malvidine isole de Vaccinum corymbosum (Ericaceae)
Figure 10 : Composs drivs du squelette flavylium
En raison de leurs proprits physicochimiques et tant des composs de fruits consommables par lhomme, ces pigments anthocyaniques font lobjet dtudes en tant que colorants alimentaires et alicaments (Chapitre B1).51,54 Une consommation rgulire de ces flavonodes est associe une rduction du risque de plusieurs maladies comme les cancers, les maladies cardiovasculaires ou encore la maladie dAlzheimer.53,55
Fruits and Vegetables ; Academic Press : London, 1981, p. 221. Geissman, T. A. ; Hayashi, K. ; The Chemistry of Flavonoids Compounds ; Pergamon Press : Oxford, 1962, p. 248. 52 Andersen, O. M. ; Jordheim, M. ; Flavonoids. Chemistry, Biochemistry and Applications ; O. M. Andersen & K. R. Markham : CRC Press : Boca Raton, 2006 ; pp 472-522. 53 Mazza, G. ; Miniati, E. ; Anthocyanins in Fruits, Vegetables and Grains ; CRC Press : Boca Raton, 1993, p. 234, 132, 88. 54 Delgado-Vargas, F. ; Jimenez, A. R. ; Paredes-Lopez, O. ; Crit. Rev. Food Sci. Nutr ., 2000, 40, 173. Bridle, P. ; Timberlake, C. F. ; Food Chem., 1996, 58(1-2), 103-109. 55 Rice-Evans, C. A. ; Miller, N. J. ; Paganga, G. ; Free Rad. Biol. Med., 1996, 20, 933-956. Renaud, S. ; De Lorgeril, M. ; Delaye, J. ; Guidollet, J. ; Jacquard, F. ; Mamelle, N. ; Martin, J. L. ; Monjaud, I. ; Salen, P. ; Toubol, P. ; Am. J. Clin. Nutr., 1995, 61, 1360S-1367S. Block, G. ; Patterson, B. ; Subar, A. ; Nutr. Cancer, 1992, 18, 1-29.
26
2.6.3
Vers les drivs anthocyaniques : voies de synthse
Deux voies ont t privilgies pour la synthse des anthocyanes :56 lune delles inclut la condensation dun 2-hydroxybenzaldhyde avec une actophnone, lautre, dcrite ci-dessous, privilgie les drivs flavonodes comme prcurseurs.57 La synthse de 3-doxyanthocyanidines a t envisage en 1997, par Bernini et al. (Schma 18) :58 cette mthode est base sur linsertion dun oxygne (ou oxyfonctionnalisation) en position benzylique C2 de la flavanone 49. Lagent oxydant utilis est le dimthyldioxirane (DMDO), qui prsente lavantage de ne pas ouvrir lhtrocycle central C et forme un intermdiaire hmiactal 50. Un traitement doux avec de la silice permet dliminer lactate en position 4 sous forme dacide actique et de conduire au motif 2-hydroxyflav-3-ne 51. Enfin la dshydratation en milieu acide forme le sel de flavylium ou la 3-doxyanthocyanidine 45.
49 O H
2
50 OH
2
51 OH
2
45 XO HX
2
O DMDO
O SiO2
OAc 4-Actoxy-flavanone
OAc Hmiactal 2-Hydroxy-flav-3-ne Sel de flavylium
Schma 18 : Synthse dune anthocyane par oxyfonctionnalisation de la position C2
Une autre stratgie de synthse danthocyanes a t mise au point au Laboratoire de Chimie des Polyphnols, en 1995, par Elhabiri, Fougerousse et al. (Schma 19). 59 Elle consiste en la rduction, suivie de la dshydratation dun flavonol 52 en anthocyane 53 par un amalgame de zinc : Zn(Hg). Par rapport LiAlH4 et NaBH4, ce rducteur prsente plusieurs avantages : son potentiel rdox est plus lev que celui des amalgames daluminium. Il est utilis sur des temps courts de raction. De plus,
56 57
Iacobucci, G. A. ; Sweeny, J. G. ; Tetrahedron, 1983, 39(19), 3005-3009. Andersen, O. M. ; Jordheim, M. ; Flavonoids. Chemistry, Biochemistry and Applications ; O. M. Andersen & K. R. Markham : CRC Press : Boca Raton, 2006 ; pp 513-514. 58 Bernini, R. ; Mincione, E. ; Sanetti, A. ; Bovicelli, P. ; Lupattelli, P. ; Tet. Lett., 1997, 38(26) , 46514654. 59 Elhabiri, M. ; Figueiredo, P. ; Fougerousse, A. ; Brouillard, R. ; Tet. Lett ., 1995, 36(26) , 4611-4614.
27
son comportement dans des solvants comme le mthanol et leau permet une utilisation facile et en particulier de le rcuprer par filtration.
OH OH Zn(Hg) / MeOH-HCl O HO OH O O OH O O HO HO HO OH HO O OH 10 minutes 60% OH HO ClO O HO OH OH OH O 53 OH OH
52 HO O
Schma 19 : Synthse dune anthocyane par rduction dun flavanol.
59
Rcemment, lors de sa thse, Marie Kueny-Stotz avec Stefan Chassaing a mis au point au laboratoire, une mthode pratique et efficace de synthse de 3doxyanthocyanidines. Plusieurs voies daccs ont t dveloppes et permettent ainsi une grande diversit de substituants au niveau des cycles A et B.60 Le chapitre suivant approfondit le comportement des drivs anthocyaniques.
60
Kueny-Stotz, M. ; Isorez G. ; Chassaing, S. ; Brouillard, R. ; Synlett, 2007, 7, 1067-1070. Chassaing, S. ; Kueny-Stotz, M. ; Isorez, G. ; Brouillard, R. ; Eur. J. Org. Chem. ; 2007, 15, 24382448.
28
B. Pigments naturels et leur comportement en solution aqueuse

1. Les pigments anthocyaniques 1.1 Types danthocyanes Les anthocyanes sont les 3-O-glycosides des drivs polyhydroxyls et
polymthoxyls des sels de flavylium 45 (ou 2-phnylbenzopyrylium). Quatre-vingtdix pour cent des anthocyanes sont construites autour de six anthocyanidines naturelles qui sont la plargonidine 54, la cyanidine 55, la ponidine 56, la ptunidine 57, la malvidine 58 et la delphinidine 47 (Figure 11).61
54: Plargonidine, R5= R7=R4'= OH R4' O C
3
R3' XA R5 Squelette anthocyanidine B R5' OH
55: Cyanidine, R5= R7=R4'= R3'=OH 56: Ponidine, R5= R7=R4'= OH, R3'=OMe 57: Ptunidine, R5= R7=R4'= R5'=OH, R3'=OMe 58: Malvidine, R5= R7=R4'= OH, R3'=R5'=OMe 47: Delphinidine, R5= R7=R4'= R3'=R5'=OH
R7
Figure 11 : Principales structures des anthocyanes X- est souvent Cl-
Leur diversit sexplique par les nombreuses possibilits de substitution des cycles A, B et la nature du sucre en position 3. Elles diffrent par le nombre de fonctions hydroxyles et leur degr de mthylation. Leur complexit augmente avec le nombre, la nature, la position des sucres conjugus, ainsi que ceux des acides aliphatiques ou aromatiques associs.62 Par exemple, en 1998, Tatsuzawa et al. ont, entre autres, isol et caractris cinq anthocyanes acyles des fleurs de Sophronitis coccinea (Orchidaceae) , dont lanthocyane 59. Cest un driv de la cyanidine 55 qui porte
61
Andersen, O. M. ; Jordheim, M. ; Flavonoids. Chemistry, Biochemistry and Applications ; O. M. Andersen & K. R. Markham : CRC Press : Boca Raton, 2006, pp. 475-506. 62 Mazza, G. ; Miniati, E. ; Anthocyanins in Fruits, Vegetables and Grains, CRC Press : Boca Raton, 1993, pp 1-6.
29
trois glycosides conjugus avec un acyle aliphatique ou aromatique (Figure 12) et montre la richesse de la substitution de ces molcules.63
O O HO O HO OH O OH OH OH Anthocyane isole de Sophronitis coccinea (Orchidaceae) O 59 XO HO O OH OH O O O OH OH HO O O OH OH OH
Figure 12 : Exemple de la complexit des anthocyanes X- est souvent Cl-
Les drivs anthocyaniques contribuent la couleur des fleurs oranges (absorption vers 480-490 nm), rouges (absorption vers 490-500 nm) ou encore bleues (absorption vers 580-595 nm) et cette coloration a pour fonction essentielle dattirer les pollinisateurs par signal visuel. Cependant, les insectes et les oiseaux ne peroivent pas les couleurs de la mme manire que lhomme : par exemple, les abeilles sont trs sensibles aux couleurs jaune et bleu, ainsi quaux UV proches mais ne reprent pas la couleur rouge. Elles vont donc prfrentiellement se diriger vers les fleurs riches en delphinidine, mais aussi en flavones et flavonols qui ont une teinte blanc crme et dont labsorption UV est importante. La slection naturelle a contribu la distribution des anthocyanes chez les angiospermes. La couleur dpend dau moins six facteurs : pH du milieu, nature et concentration des pigments, phnomne de copigmentation, interactions avec des ions mtalliques, forme des cellules pidermiques ou encore traitements technologiques, qui vont tre dcrits ci-dessous.64
63
Tatsuzawa, F. ; Saito, N. ; Yokoi, M. ; Shigihara, A. ; Honda, T. ; Phytochemistry, 1998, 49(3) , 869-874. 64 Macheix, J. J. ; Fleuriet A. ; Jay-Allemand C. ; Les composs phnoliques des vgtaux ; Presses polytechniques et universitaires romandes : Lausanne, 2005 ; pp 89-91, p. 125. Harborne, J.B. ; Introduction to Ecological Biochemistry ; Academic Press : London, 1988, pp. 356.
30
1.2 Changements de structure 1.2.1 Nature et concentration des anthocyanes

X8 7 6 5 4 3' 2' 4'
O C
2 3
B
1' 6'
5'
45
Figure 13 : Squelette flavylium
Le degr de substitution des anthocyanes intervient dans la coloration de ces molcules. Par exemple, quand le nombre de groupements hydroxyles sur le cycle B augmente, labsorbance maximale des anthocyanes dans le visible est dplace vers les grandes longueurs donde et la couleur passe du rouge-orang vers le violet.65 Il est important de noter quun hydroxyle en position 3 entrane un dplacement du jaune (3-doxyanthocyanidine) vers le rouge orang et dstabilise le pigment : les 3doxyanthocyanidines et les anthocyanes sont plus stables que les anthocyanidines.66 Un hydroxyle en position 5 et un substituant en position 4 stabilisent les formes colores gnant des ractions dhydratation en positions 2 et 4 (paragraphe 1.2.3).60 Les glycosides jouent un rle dans lintensit de la couleur : les 3-O-glycosideanthocyanidines sont plus colores que les 3,5- et 5-O-glycosides correspondants, avec 50% dintensit en plus. Lhydrolyse des glycosides en milieu acide est lente et contribue la stabilit des anthocyanes bas pH. Enfin, des esters phnoliques ont une tendance maintenir stables les pigments pH neutre et pH acide grce des liaisons hydrogne et du -stacking intramolculaire (paragraphe B.2.1).65
65
Macheix, J. J. ; Fleuriet A. ; Jay-Allemand C. ; Les composs phnoliques des vgtaux ; Presses polytechniques et universitaires romandes : Lausanne, 2005 ; pp 124-127. Mazza, G. ; Miniati, E. ; Anthocyanins in Fruits, Vegetables and Grains, CRC Press : Boca Raton, 1993, pp 10-12. 66 Keppler, K. ; Humpf, H. U. ; Bioorg. Med. Chem., 2005, 13(17), 5195-5205. Jurd, L. ; Adv. Food Res. Suppl., 1972, 2, 123.
31
1.2.2
Autres facteurs65
Outre les paramtres bio-physico-chimiques, des facteurs externes, comme la temprature ou laction de lhomme, provoquent des modifications structurelles. Pour une utilisation des fins conomiques (colorants alimentaires, cosmtologiques), les industriels ralisent des tapes de broyage, fermentation, dshydratation, strilisation et ces processus nuisent la stabilit des anthocyanes, altrant leur couleur initiale. Par exemple, lajout de conservateurs, pour diminuer les risques de dtrioration oxydative, sont trs souvent des rducteurs qui peuvent interagir avec les anthocyanes et altrer leur couleur par rupture du noyau benzopyrylium. 1.2.3 pH du milieu
La structure des pigments anthocyaniques volue en milieu aqueux. Ils se comportent comme des indicateurs de pH puisque leur couleur varie en fonction de ce facteur fondamental (Figure 14 et Schma 20).
pH<3 XO A C rgression progressive de l'ionisation Formation progressive de B Formation de C colore
Sel de flavylium prdominant AH+
2 Rouge vif ou orange 3
4 Rouge /orange moins intense
6 Incolore 8 Bleu -
10 vert - jaune
Figure 14 : Evolution des structures des anthocyanes selon le pH
Depuis la fin des annes soixante-dix, Brouillard et al. ont grandement contribu la comprhension des transformations des anthocyanes en solution aqueuse. En milieu acide neutre, on peut observer quatre structures diffrentes en quilibre : le sel de
32
flavylium AH+, la base quinonique A , la pseudobase carbinol B et la chalcone C (Schma 20).67 La transformation du pigment natif AH+ en dautres formes, de couleurs diffrentes voire incolores, dpend de deux volutions possibles de AH+ (Schma 20).
O
O AHO O R3 O - H+ dprotonation O OH OH - H+ Xdprotonation O OH - H+ dprotonation
AO R3
AO R3 OH
A O R3
OH
- H+ dprotonation
A HO O R3 O
A HO O R3 OH
- H+ Xdprotonation OH O
2
- H+ Xdprotonation HO + H2O / -H+ Xhydratation en 4 B4 OH
X-
OH
R3
+ H2O / -H+ Xhydratation en 2 B2 HO O OH

2
AH+
OH
HO
O R3
R3 OH OH OH O R3
OH
OH CE
CZ OH R3 OH Isomrisation HO
HO
OH
OH
Schma 20 : Comportement des anthocyanes en solution aqueuse. Si R3 = H : Exemple de lapigninidine X- est souvent Cl-
67
Brouillard, R. ; Phytochemistry, 1983, 22(6) , 1311-1323. Brouillard, R. ; Anthocyanins as Food Colors ; Academic press, New-York, 1982, pp. 1-40. Brouillard, R. ; Dubois, J. E. ; J. Am. Chem. Soc., 1977, 99, 1359-1364. Brouillard, R. ; Delaporte, B. ; J. Am. Chem. Soc, 1977, 99, 8461-8468.
33
A pH infrieur 2, lanthocyane existe sous sa forme cationique AH+. Quand le pH augmente, AH+ se dprotone rapidement pour conduire aux structures quinoniques neutres A de couleur rouge ou bleu. Si la molcule porte deux fonctions phnoliques, une deuxime dprotonation peut avoir lieu, formant alors les bases quinoniques anioniques A-. En parallle, se droulent des ractions dhydratation en position 2 et 4 de AH+ : elles conduisent aux pseudobases carbinol B quasiment incolores. B2 (provenant de laddition nuclophile deau en position 2) est en quilibre avec la rtrochalcone CZ de configuration Z, issue de louverture de lhtrocycle central C ; elle sisomrise en rtrochalcone CE, de configuration E plus stable. Les rtrochalcones se caractrisent par une couleur jaune ple.68 Lanalyse de cette succession dquilibres permet une meilleure comprhension du comportement des pigments anthocyaniques en milieu aqueux. A pH suprieur 3, les squences ractionnelles senchanent, entranant la rupture de laromaticit au niveau de lhtrocycle C et altrent la couleur de ces molcules. Ces pigments anthocyaniques sont, au sein de la plante, solubiliss dans les vacuoles des cellules pidermiques dont le pH est proche de 5. Il est donc tonnant dobserver une forte coloration de ces solutions pH physiologique : on explique ce paradoxe par des processus naturels qui stabilisent la forme AH+, intensifient ou font varier les nuances de couleur. 2. Stabilisation naturelle de la couleur Il est important de noter quon ne peut pas attribuer la couleur dune fleur ou dun fruit une seule anthocyane. Elle rsulte gnralement de la prsence dun ensemble de molcules : pigments anthocyaniques, chalcones, flavones, flavonols, autres composs phnoliques, carotnodes
68
Mazza, G. ; Miniati, E. ; Anthocyanins in Fruits, Vegetables and Grains, CRC Press : Boca Raton, 1993, pp 6-10.
34
2.1 Copigmentation La copigmentation est un phnomne naturel qui fait interagir par -stacking, un chromophore plan (anthocyane) avec une autre molcule aromatique gnralement incolore, appele copigment. Cet effet peut tre intra- ou intermolculaire et consiste en un processus de stabilisation des anthocyanes utilis par la nature. Lassociation anthocyane-copigment peut entraner des variations de nuance par rapport la couleur initiale. Mais, elle protge surtout les positions 2 et 4 du sel AH+ et gne ainsi les ractions dhydratation : les formes pseudobases carbinol B, incolores, ne se forment plus et la couleur sintensifie (Figure 15b). Les diffrentes molcules de la copigmentation sont reprsentes de faon simplifie en Figure 15a.61,66
Copigment Anthocyane
Partie glucidique
Partie acylante
Figure 15a : Illustration simplifie des protagonistes de la copigmentation
XO
2
Figure 15b : Illustration de la protection des positions 2 et 4 par association par -stacking
2.1.1
Copigmentation intermolculaire
Les anthocyanes sassocient par des interactions lectroniques avec des drivs hydroxycinnamiques ou dautres flavonodes, qui sont des copigments prsents dans la vacuole (Figure 16).
35
Le maximum du spectre dabsorption peut tre dplac vers les grandes longueurs donde, modifiant la couleur initiale de lanthocyane vers le violet et le bleu. 69 Lintensit colorante lie la copigmentation peut augmenter jusqu 600%.
Figure 16 : Une reprsentation simplifie de la copigmentation intermolculaire
Elle est dpendante de plusieurs facteurs : nature et concentration des anthocyanes et des copigments, pH et temprature du milieu ou encore des substituants ports par lanthocyane. Des tudes physicochimiques ont montr que la copigmentation sobserve des pH allant de 1 la neutralit. En gnral, le maximum deffet est pH 3,5 mais peut varier selon le complexe pigment-copigment.70 2.1.2 Copigmentation intramolculaire
La copigmentation intramolculaire est responsable de la stabilit de la couleur des anthocyanes qui contiennent au moins deux groupements acyles aromatiques. Ce phnomne est caractris par une structure sandwich, forme grce des interactions de type -stacking entre le cycle pyrylium C et les groupements esters aromatiques ports par lanthocyane. On peut observer ce phnomne des pH faiblement acides ou neutres (Figure 17a et 15b).69,71
Figure 17a : Une reprsentation simplifie de la copigmentation intramolculaire

69
Mazza, G. ; Miniati, E. ; Anthocyanins in Fruits, Vegetables and Grains, CRC Press : Boca Raton, 1993, pp 12-19. Brouillard, R. ; Mazza, G. ; Saad, Z. ; Albrecht-Gary, A. M. ; Cheminat, A. ; J. Am. Chem. Soc., 1989, 111, 1604-1614. Osawa, Y. ; Anthocyanins as Food Colors, Academic Press : NewYork, 1982, p. 41. Chen, L. J. ; Hrazdina, G. ; Phytochemistry, 1981, 20, 297-303. Asen, S. ; Stewart, R. N. ; Norris, K. H. ; Phytochemistry, 1972, 11, 1139-1144. 70 Mazza, G. ; Brouillard, R. ; Phytochemistry, 1990, 29, 1097-1102. 71 Dangles, O. ; Saito, N. ; Brouillard, R. ; Phytochemistry, 1993, 34 (1), 119-124.
36
OH HO XO O HO HO HO O O OH O O O O OH OH O O OH OH
HO
OH
OH
OH OH
anthocyane 60 isole de Pharbitis nil.
Figure 17b : Exemple de copigmentation intramolculaire. X- est souvent Cl-
72
En 1993, Dangles et al. ont tudi la stabilit de quatre structures plus ou moins complexes de pigments isols du liseron Pharbitis nil (Convolvulaceae) (Figure 17b).72 Ces quatre anthocyanes, drives de la plargonidine 54, prsentent selon leur degr de complexit, zro, un ou deux groupements esters aromatiques. Dans le cas de deux acyles, le bras glycoside ou espaceur, en position 3 de 60, permet une flexibilit suffisante de la molcule pour former le complexe sandwich stabilisant. En calculant les constantes dhydratation des quatre pigments, Dangles et al. ont montr que la prsence de deux groupements esters aromatiques lis la molcule permet la copigmentation intramolculaire et stabilise la structure face aux ractions dhydratation. La nature dispose de diffrents processus de copigmentation. Le premier, intermolculaire, fait intervenir des molcules libres et le second, intramolculaire, utilise les groupements aromatiques lis sur lanthocyane par des bras glycosides. Un autre phnomne de stabilisation se caractrise par un complexe de molcules et dions mtalliques prsents dans la vacuole, associs par chlation.66
72
Dangles, O. ; Saito, N. ; Brouillard, R. ; J. Am. Chem. Soc., 1993, 115, 3125-3132.
37
2.2 Interactions avec les ions mtalliques Des sels minraux se trouvent en solution dans les vacuoles des cellules pidermiques et reprsentent une source disponible de mtaux sous forme cationique. Par exemple, si une anthocyane possde un groupement catchol (odiphnol), comme la cyanidine ou la delphinidine, elle peut se complexer ce niveau avec des mtaux, tels que Al3+, Fe3+, Mg2+ (Figure 18a).66
O XHO O OR OH
Mg O
Figure 18a : Reprsentation de la chlation entre la fonction catchol dune cyanidine et un mtal
Mg Mg
Figure 18b : Une reprsentation simplifie dune association anthocyanes-Mg2+-copigments
Il est possible davoir simultanment lassociation anthocyanes-mtal et une copigmentation intermolculaire avec dautres flavonodes (Figure 18b). Cet ensemble complexe va alors modifier la couleur initiale de la fleur, gnralement vers le bleu. En 1992, Kondo et al. ont caractris la structure de la commlinine 61 par rayons X. Cest une molcule extraite de Commelina communis (Commelinaceae) qui est une plante utilise dans la pharmacope traditionnelle en Amrique du Sud : sa couleur bleue caractristique est due lexceptionnel pigment 61. Et ce phnomne est un exemple rare de complexe supramolculaire mtallo-anthocyanique, associ des flavones par copigmentation intermolculaire. Il correspond une structure
38
organise de six anthocyanes malonylawobanine 62, relies par deux atomes de magnsium Mg2+ et associes six flavones flavocommline 63 (Figure 19).73
OH XHO O HO HO HO O O O OH O O HO O O O HO HO HO OH O 2 Mg2+ OH OH O O O O HO OH O HO OH O OH OH OH OH
6 malonylawobanines 62
6 flavocommlines 63
Figure 19 : Protagonistes du pigment supramolculaire commlinine 61. X- est souvent Cl-
73
2.3 Utilisation des anthocyanes Linstabilit des anthocyanes en milieu aqueux rend difficile leur utilisation des fins conomiques : si on souhaite les dvelopper comme colorants industriels, il faut conserver un pH infrieur 3. Pour se librer de cette contrainte, les chercheurs observent et tentent de reproduire les processus naturels stabilisants. En plus des diffrentes copigmentations, un autre phnomne exceptionnel, stabilisateur de couleur, est observ dans le vin rouge. Il nous intresse tout particulirement et va tre dvelopp dans la partie suivante.
73
Oyama, K. ; Kondo, T. ; J. Org. Chem., 2004, 69, 5240-5246. Kondo, T. ; Yoshida, K. ; Nakagawa, A. ; Kawai, T. ; Tamura, H. ; Goto, T. ; Nature , 1993, 385, 515.
39
3. Stabilit de la couleur dans la solution vin rouge Le vin est considr comme un produit trs labor de lagriculture. Outre leau (65 80%), plus dune centaine de molcules entrent dans la composition du vin : des substances minrales et des substances organiques dont les alcools (4,5 16%), les acides organiques, les polyphnols, les enzymes ou encore les vitamines. Lespce de vigne Vitis vinifera (Vitaceae) permet de produire la plus grande quantit du vin consomm dans le monde. Elle se divise en diffrentes varits, ou cpages, qui vont intervenir dans les caractres organoleptiques du vin. La fabrication du vin se divise en trois priodes : la vinification, la maturation et le vieillissement du vin. Nous proposons de prsenter brivement la vinification du vin rouge. 3.1 La vinification du vin rouge74 La vinification est lensemble des oprations ncessaires la transformation du raisin en vin. Plusieurs tapes de base interviennent : le foulage-grappage, les fermentations, la macration et le pressurage (Figure 20).
FoulageEgrappage
CuvaisonFermentationMacration
EcoulagePressurage
Fermentation malo-lactique
Priode de vinification
Figure 20 : Etapes de vinification du vin rouge
3.1.1
Foulage-grappage
Le foulage est la premire opration qui suit la cueillette des grappes. Il sagit de faire clater les grains sans craser ni les ppins, ni les rafles et de librer le jus des raisins. Cette opration permet une bonne macration pour les vins rouges et active la fermentation en arant la vendange. Lgrappage (ou raflage) consiste en la
74
Peynaud, E. ; Sudraud, P. ; Ribreau-Gayon, J. ; Sciences et techniques du vin : Vinifications, Transformations du vin. Ed. Dunod, Vol. 3, 1976.
40
sparation des rafles du reste du mlange pour donner le mot : mlange de peau, de pulpe et de ppins. Cette tape confre plus de souplesse et de finesse au vin, le rendant moins dur et astringent en liminant lexcs de tannins concentrs dans la rafle. 3.1.2 Cuvaison-Fermentation-Macration
Les mots sont verss dans des cuves de fermentation, o ils fermentent et macrent pendant cinq vingt jours, selon les cpages. Les fermentations sont des transformations chimiques de divers composs organiques, inities par les enzymes de micro-organismes. Les levures, prsentes dans le raisin, transforment les sucres du mot en alcool (un degr dalcool pour 15 18 grammes de sucre), en dioxyde de carbone et en nergie, cest la fermentation alcoolique (Schma 21). C6H12O6 + 2 ADP + 2 Pi 2 C2H5OH + 2 CO2 + 2 ATP
Schma 21 : Raction biochimique de fermentation alcoolique
Le dioxyde de carbone, qui se dgage, concentre en haut de la cuve tous les lments solides du mot qui forment le chapeau (ou marc). Toute la technique de la macration consiste faire remonter, par un systme de pompe, le jus de fermentation sur le chapeau de marc pour extraire sans cesse tannins, pigments acides et sels. Le contact entre le mot et les lments solides du marc (la peau, les ppins) va donner en partie le corps et la couleur du vin. 3.1.3 Ecoulage-Pressurage
Aprs la priode de macration, le jus de fermentation est spar des lments solides de la cuve vers les tonneaux par coulage (ou soutirage), on obtient alors le vin de goutte. Le marc, quant lui, est soumis au pressurage afin dextraire le jus quil contient, plus riche en tannins et qui se nomme le vin de presse . Ces deux
41
solutions obtenues peuvent tre traites ensemble ou sparment, sachant que le vin de goutte est de meilleure qualit. 3.1.4 La fermentation malo-lactique
Une autre fermentation, appele fermentation malo-lactique, a lieu aprs le pressurage, quelques semaines voire quelques mois plus tard, une temprature entre 18 et 20C. Elle correspond la transformation de lacide malique du vin en acide lactique, sous linfluence de bactries prsentes naturellement dans la solution vin (Schma 22). Cette opration entrane une baisse de lacidit, une stabilit et un assouplissement du vin. Elle est particulirement utilise dans la vinification des vins rouges.
OH HOOC COOH HOOC OH + CO2
Schma 22 : Raction biochimique de fermentation malo-lactique
3.1.5
Remarques
La diffrence entre les processus de vinification du vin rouge et du vin blanc repose non pas sur la couleur du raisin, mais sur la succession des tapes de vinification. Pour le vin blanc, le pressurage a lieu avant toute fermentation et macration, empchant lextraction des anthocyanes vers le liquide. Il est important de noter quen plus des drivs anthocyaniques, dautres flavonodes, acides phnoliques et composs organiques sont dans le vin et peuvent participer aux caractres organoleptiques de la solution. Dans la suite de cet expos, nous nous intresserons la couleur du vin rouge et ses origines. Seuls les procds du vin rouge et les pigments associs seront prsents.
42
3.2 Composition en anthocyanes Les anthocyanes du raisin sont en partie responsables de la couleur des vins rouges. Cependant, la composition et le taux de ces molcules varient selon lespce, le cpage, la maturit et les conditions externes associes la fabrication du vin (climat, techniques utilises).75 3.2.1 Composition selon le cpage
On observe, selon le cpage, des pourcentages diffrents pour une mme anthocyane : trois drivs 64, 65 et 66 de la malvidine-3-O-glucoside (anthocyane majoritaire de Vitis vinifera) ont t compars dans quatre varits de raisin (Figure 21). Dautres anthocyanes prsentes dans V. vinifera ne dpassent pas les 10%, elles drivent principalement des anthocyanidines 47, 54, 55, 56, 57 et 58.76
O XHO O OGlc* OH 64: OGlc*= 3-O-monoglucoside 65: OGlc*= 3-O-monoglucoside-actate 66: OGlc*=3-O-monoglucoside-cafoate OH O 64 Cabernet Sauvignon: 40,57 Merlot: Syrah: Tempranillo: 40,69 36,4 36,68 65 20,46 11,53 9,4 1,21 66 0,14 traces 2,4 0,15
Figure 21 : Distribution (en %) de trois anthocyanes isoles de Vitis vinifera X- est souvent Cl-
3.2.2
Climat
Lumire, temprature, vent et humidit sont autant dlments qui interviennent sur la qualit du vin et le taux en anthocyanes : par exemple, lensoleillement va
75
Macheix, J. J. ; Fleuriet A. ; Jay-Allemand C. ; Fruit Phenolics ; CRC Press : Boca Raton, 1990 ; pp. 324-327. 76 Mazza, G. ; Miniati, E. ; Anthocyanins in Fruits, Vegetables and Grains, CRC Press : Boca Raton, 1993, pp. 150-152. Ribreau-Gayon, P. ; Markakis, P. ; Anthocyanins as Food Colors, Academic Press : New-York, 1982, p. 209.
43
influencer lintensit de la couleur rouge du vin.77 Une diminution de lensoleillement de 15% entrane une baisse de 58% de laccumulation des anthocyanes dans la baie de raisin. Une coloration optimale se fait des tempratures allant de 15 25C le jour et 10 20C la nuit.78 Lorsque les tempratures dpassent 30C, la biosynthse des anthocyanes est compltement inhibe pour les cpages les plus sensibles (Tokay).77,79 3.2.3 Au cours de la vinification
- Un foulage vigoureux augmente lextraction des anthocyanes des lments solides vers le jus, mais peut craser les rafles et les ppins riches en tannins et donner des vins trs astringents. - Le taux en anthocyanes peut augmenter au cours de la macration : une lvation de la temprature de plusieurs dizaines de degrs favorisant lextraction de ces composs. Il faut nanmoins contrler cette opration car les levures responsables de la fermentation sont sensibles des tempratures suprieures 32C. Le temps de macration est galement important, il est optimal pour une dure de cinq six jours.79 - Des ractions chimiques modifient la composition du vin et donc sa couleur : par exemple, loxydation enzymatique des produits phnoliques entrane le brunissement du mot et du jus. Cest pourquoi des antioxydants et des antiseptiques, comme le dioxyde de soufre (appel communment sulfite), sont ajouts pour viter ces processus doxydation nfastes la qualit du vin. En revanche, un ajout trop important de SO2 dans le mot peut altrer la couleur et les armes du vin : fermentation alcoolique incomplte, dcomposition des anthocyanes.80
77
Kliewer, W. M. ; Am. J. Enol. Vitic., 1977, 28, 96. Kliewer, W. M. ; J. Am. Soc. Hortic. Sci, 1970, 95, 693. 78 Crippen, D. D. ; Morrison, J. C. ; Am. J. Enol. Vitic., 1986, 37, 4. 79 Mazza, G. ; Miniati, E. ; Anthocyanins in Fruits, Vegetables and Grains, CRC Press : Boca Raton, 1993, pp. 167-168. 80 Bakker, J. ; Bridle, P. ; Bellworthy, S. J. ; Garcia-Viguera, C. ; Reader, H. P. ; Watkins, S. J. ; J. Sci. Food Agric., 1998, 78, 297-307. Mazza, G. ; Miniati, E. ; Anthocyanins in Fruits, Vegetables and Grains, CRC Press : Boca Raton, 1993, pp. 170-173.
44
3.3 Maturation du vin et volution des pigments Une fois les processus de vinification termins, le vin est stock dans des cuves, pendant la priode de maturation. Elle a pour but de faire voluer la solution vin et dinfluencer les caractres organoleptiques : au niveau du got, des armes, de laspect et de la couleur. Les cuves en acier inoxydable ou en rsine sont neutres vis-vis de la solution, tandis que les cuves en bois ou les barriques vont intervenir au niveau des armes. Le vin est ensuite conditionn en bouteille et est conserv dans des conditions optimales de vieillissement. Au cours de la maturation et du vieillissement, le vin volue via des ractions spontanes. Ces transformations modifient et amliorent le caractre du vin, on dit quil se bonifie. Outre la quantit des anthocyanes prsentes suite aux tapes de vinification, il faut considrer certains paramtres de la solution pour expliquer la couleur du vin. En effet, le pH dun vin se situe gnralement entre 3,5 et 4, pH auquel les anthocyanes sont moins stables sous leur forme cationique colore AH+.
On peut alors sinterroger sur la relle nature de la couleur du vin rouge.

3.3.1 Pigments responsables de la couleur du vin rouge
Plusieurs quipes sintressent la composition en pigments du vin rouge et ont dmontr une volution chimique des anthocyanes.81,82 En plus des phnomnes de copigmentation, les anthocyanes ragissent avec certaines molcules prsentes dans la solution pour former des pigments plus complexes (Schma 23) : lors des processus de maturation et de vieillissement du vin, on observe une baisse significative du taux des anthocyanes au profit de ces autres pigments. Ce phnomne se remarque particulirement par tude spectrophotomtrique UV-Visible
81
Kunsagi-Mat, S. ; Szabo, K. ; Nikfardjam, M. ; Kollar, L. ; J. Biochem. Biophys. Methods, 2006, 69 , 113-119. Gomez-Miguez, M. ; Gonzales-Manzano, S. ; Escribano-Bailon, M. T. ; Heredia, F. J. ; Santos-Buelga, C. ; J. Agric. Food Chem., 2006, 54, 5422-5429. 82 Brouillard, R. ; Chassaing, S. ; Fougerousse, A. ; Phytochemistry, 2003, 64, 1179-1186. VivarQuintana, A. M. ; Santos-Buelga, C. ; Rivas-Gonzalo, J. C. ; Anal. Chim. Acta , 2002, 458, 147-155.
45
et par les changements de couleur de la solution.83 Les anthocyanes natives du raisin ou dun vin jeune ont une couleur rouge (max vers 520 nm) alors que les nouveaux pigments forms, responsables de 50% de la densit de la couleur, sont jaunes (max vers 420 nm), oranges ou encore bleus (max vers 575 nm), nuances caractristiques dun vin rouge qui a vieilli. En raison de leurs structures, ils sont plus stables et donc plus rsistants aux changements de pH, aux ractions dhydratation et aux sulfites.83,84 Les ractions qui interviennent au cours du vieillissement du vin autour de lanthocyane majoritaire de Vitis vinifera, la malvidine-3-O-glucoside 64, vont tre brivement dcrites. 3.3.2 Ractivit de la malvidine 3-O-glucoside
Une anthocyane, comme la malvidine 3-O-glucoside 64, possde diffrents sites ractifs et peut jouer le rle dlectrophile ou de nuclophile (Figures 22 et 23).85 Son cycle central C est une fonction carbonyle ,-insature. Cet accepteur de Michael se caractrise par deux sites lectrophiles en position 2 et 4 de la molcule (Figure 22a). Le motif phloroglucinol (3,5-dihydroxyphnol) du cycle A confre, quant lui, un caractre nuclophile aux carbones 6 et 8 de lanthocyane (Figure 22b). Enfin, les fonctions phnoliques sont riches en lectrons et peuvent galement agir en tant que nuclophiles (Figure 23).
83
Vivar-Quintana, A. M. ; Santos-Buelga, C. ; Rivas-Gonzalo, J. C. ; Anal. Chim. Acta, 2002, 458, 147-155. 84 Mateus, N. ; De Pascual-Teresa, S. ; Rivas-Gonzalo, J. C. ; Santos-Buelga, C. ; de Freitas, V. ; Food Chem., 2002, 76, 355-342. 85 Cheynier, V ; Flavonoids. Chemistry, Biochemistry and Applications ; O. M. Andersen & K. R. Markham : CRC Press : Boca Raton, 2006, pp. 289-301.
46
O XOH O OGlc O
64
O OH HO O C OGlc OH XO
HO
OH
Figure 22a : Illustration de la ractivit lectrophile de la malvidine-3-O-glucoside
O H O
6 8
O OH O HO A OGlc OH O XOH O
X-
OGlc OH
Figure 22b : Illustration de la ractivit nuclophile de la malvidine-3-O-glucoside
O XOH O OGlc E+ OH
HO A
Figure 23 : Illustration de la ractivit nuclophile de la fonction phnolique en position 5 de la malvidine-3- O-glucoside
La multi-ractivit des anthocyanes permet un grand nombre de ractions de condensation pour former des structures plus complexes. La malvidine-3-O-glucoside ragit avec des lectrophiles comme un aldhyde ou une anthocyane et avec des nuclophiles comme les flavan-3-ols ou des phnols vinyliques (Figure 24).
47
Vinyl-flavan-3-ol 71 : vinylcatchine COOH COOH HO OH OH 67: Vinylphnol OH 68: Vinylcatchol OH 69: Acide p-coumarique OH 70: Acide cafique O O OH OH - H 2O OH Acide pyruvique 72: CH3COCOOH Actaldhyde 73 : CH3CHO HO O OH OH Flavan-3-ol 74 : (+)-catchine OH OH OH
OH
Figure 24 : Molcules susceptibles de ragir avec une anthocyane
3.3.3
Pigments forms partir de la malvidine-3-O-glucoside
En 2006, Alcalde-Eon et al. ont publi les changements de composition pigmentaire dun vin rouge (tempranillo, Vitis vinifera) pendant les tapes de maturation et de vieillissement.86 La malvidine 3-O-glucoside volue vers quatre types de drivs anthocyaniques plus complexes (Schma 23).86,87,88,89,90,91,92,93,94
86
Alcalde-Eon, C. ; Escribano-Bailon M.T. ; Santos-Buelga, C. ; Rivas-Gonzalo, J. C. ; Anal. Chim. Acta, 2006, 563, 238-254. 87 Chassaing S. ; Thse de Doctorat, 2006, Strasbourg I, pp. 205-211. 88 Duenas, M. ; Fulcrand, H. ; Cheynier, V. ; Anal. Chim. Acta, 2006, 563, 15-25. Jurd, L. ; Tetrahedron, 1967, 23(3), 1057-1064. 89 Salas, E. ; Atanasova, V. ; Poncet-Legrand, C. ; Meudec, E. ; Mazauric, J. P. ; Cheynier, V. ; Anal. Chim. Acta, 2004, 513, 325-332. 90 Atasanova, V. ; Fulcrand, H. ; Le Guenerv, C. ; Cheynier, V. ; Moutounet, M. ; Tet. Lett., 2002, 43, 6151-6153. 91 Escribano-Bailon, T. ; Dangles, O. ; Brouillard, R. ; Phytochemistry, 1996, 41(6) , 1583-1592. Dallas, C. ; Ricardo-da-Silva, J. M. ; Laureano, O. ; J. Agric. Food Chem., 1996, 44, 2402-2407. 92 Mateus, N. ; Oliveira, J. ; Santos-Buelga, C. ; Silva, A. M. S. ; De Freitas, V. ; Tet. Lett., 2004, 45, 3455-3457. Mateus, M. ; Oliveira, J. ; Santos-Buelga, C. ; Silva, A. M. S. ; De Freitas, V. ; J. agric. Food. Chem., 2002, 2110-2116. 93 Fulcrand, H. ; Cameira dos Santos, P. J. ; Sarni-Manchado, P. ; Cheynier, V.; Favre-Bonvin, J. ; J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 1996, 735-739. Schwartz, M. ; Wabnitz, T. C. ; Winterhalter, P. ; J. Agric. Food. Chem., 2003, 51, 3682-3687. 94 Morata, A. ; Calderon, F. ; Gonzales, M. C. ; Gomez-Cordoves, M. C. ; Suarez, J. A. ; Food Chem., 2007, 100, 1144-1152. Schwartz, M. ; Quast, P. ; Von Baer, D. ; Winterhalter, P. ; J. Agric. Food. Chem., 2003, 51, 6261-6267. Romero, C. ; Bakker, J. ; J. Agric. Food Chem., 1999, 47, 3130-3139.
48
Vers les anthocyanes-(48)-flavan-3-ol 75
Lexcs lectronique des carbones 6 et 8 dun flavan-3-ol, la catchine 74, permet denvisager deux additions nuclophiles sur le site lectrophile 4 de 64. Laddition de la position 8 conduit un intermdiaire de type flav-2-ne, qui aprs oxydation (aromatisation) donne le driv anthocyanique 75 appel anthocyane-(48)-flavan3-ol (max= 280, 531 nm) (Schma 23).88,95
76 OH O OGlc OH HO O OH OH
Addition nuclophile de 7488
OH 77 OH OH O OH O XO OGlc HO O O XHO O OH CHCH3 O O OH O OGlc OH GlcO OH
75 XHO
O HO
O OH OH OH OH HO
X-
Raction de 64 avec un driv de 7489,96
64 O XHO O OGlc O R OH O
Condensation avec 67, 68, 69, 70,93 71, 72 ou 7394
O OH
Additions nuclophiles de 64 sur CH3CHO90
XHO O OGlc OH
Condensation avec 7192
Additions nuclophiles de 64 et 74 sur CH3CHO92,96
OH O OH HO HO OH HO 78 OH OH 79 OH HO O OH CHCH3 O
80: Pyranoanthocyanes R= COOH, CH3, HO
XO OGlc OH O HO O
O OH O OGlc
X-
OH OH OH OH
OH
OH
Schma 23 : De la malvidine-3-O-glucoside vers les pigments du vin rouge. X- est souvent Cl-
87
95
Escribano-Bailon, T. ; Dangles, O. ; Brouillard, R. ; Phytochemistry, 1996, 41(6) , 1583-1592. Salas, E. ; Fulcrand, H. ; Meudec, E. ; Cheynier, V. ; J. Agric. Food Chem. ; 2003, 51, 7951-7961.
49
Vers les dimres 77 et 78
Singleton et al. ont dcrit pour la premire fois le rle de lactaldhyde dans la rsistance aux effets de pH des pigments du vin.96 Cette molcule ragit avec 64 ou 74 pour former les pigments 77 ou 78. La condensation se fait avec lactaldhyde et lintensit de la couleur de ce type de pigment augmente avec un dplacement des longueurs dondes vers le violet (max= 280, 536 / 542 nm).97 Vers les anthocyanes-vinyl-flavan-3-ol 79
En 2003, Mateus et al. ont isol du vin rouge une nouvelle classe de pigments, deux types de structures bases sur le squelette 79 ont t caractriss (Figure 25).98 Le plus simple est un driv coumarique de 79. Les autres structures (81 et 82) ont un squelette pyranoanthocyane 80 associ via un pont vinylique deux entits flavan3-ol.
O XHO O OGlc* O OH HO O OH 81: Glc*=glucose 82: Glc*=coumarate de glucose OH HO O OH OH OH OH OH OH O
Figure 25 : Pigments bleus isoles du vin rouge.
98
X- est souvent Cl-
96 97
Singleton, V. ; Berg, H. ; Guyomon, J. ; Am. J. Enol. Vitic., 1964, 15, 75. Timberlake, C. F. ; Bridle, P. ; Am. J. Enol. Vitic., 1976, 27, 97. 98 Mateus, N. ; Silva, M. S. ; Rivas-Gonzalo, J. C. ; Santos-Buelga, C. ; De Freitas, V. ; J. Agric. Food Chem., 2003, 51, 1919-1923. Mateus, N. ; de Pascual-Teresa, S. ; Rivas-gonzalo, J. C. ; SantosBuelga, C. ; De Freitas, V. ; Food Chem., 2002, 76, 335-342.
50
Ces pigments de couleur bleue absorbent vers 575 nm et montrent la complexit des pigments rencontrs dans le vin rouge et les vins de Porto. Les pigments pyranoanthocyanes 80
Notre travail se concentre particulirement sur les pigments pyranoanthocyaniques 80. Les motifs les plus connus sont la vitisine A 83 et la vitisine B 84 (Schma 24). La malvidine-3-O-glucoside est la fois lectrophile en position 4 et nuclophile par la fonction phnolique en position 5. Elle va ragir avec lacide pyruvique pour conduire 83 ou avec lactaldhyde pour donner 84, formant un quatrime cycle, appel cycle D.85,94 La question du mcanisme de ces ractions sera aborde dans le chapitre suivant.
83 Vitisine A XHO A O D COOH H2O O HOOC Acide pyruvique
5
O OH B O OGlc XHO A OH
4
84 Vitisine B XHO A 64 + O O OH B O OGlc H Actaldhyde O O H 2O D O C
O OH B O OGlc
O C
Schma 24 : Formation des vitisines A et B X- est souvent Cl-
Les autres pyranoanthocyanes sont formes partir de phnols vinyliques, deux hypothses mcanistiques sont proposes pour leur obtention. Chacune dentre-elles est base sur les doubles ractivits de la malvidine-3-O-glucoside et des phnols vinyliques (schma 25).87,93 La premire alternative (voie A), avance par Fulcrand
et al. en 1996, fait intervenir une dcarboxylation enzymatique de lacide pcoumarique 69 qui implique que la conversion ait lieu pendant ou juste aprs la fermentation au moment de ltape de vinification. La seconde alternative (Voie B), propose par Schwartz et al., en 2003, ne considre que les transformations chimiques, elle nest donc pas limite la vinification. Les deux voies se basent sur la
51
formation du cycle D par cyclisation 6-exo-trig, suivie de loxydation des intermdiaires pour former les espces aromatiques 85 et 85. Dans lalternative de Schwartz et al., une tape de dcarboxylation a lieu avant dobtenir la pyranoanthocyane phnolique 86.
Voie A XHO 64 O OGlc OH O OH O Dcarboxylation enzymatique HO Voie B XO OGlc COOH 64 O OH O
OH
67 OH OH Cycloaddition O OH HO O OGlc O O HO O Cycloaddition
69
O OH O OGlc O OH
OH Oxydation O OH O OGlc XO
OH Oxydation XO HO O OGlc O O 85 H O OH O
HO
X-
X- O
85' -H+ XHO O OGlc O OH O OH Dcarboxylation -CO2
OH
86 OH
Schma 25 : Propositions mcanistiques pour la formation dune pyranoanthocyane phnolique, X- est souvent Cl-
52
Les pyranoanthocyanes 87 sont des pigments oranges, mais selon leur substitution, ils peuvent voluer vers le bleu. Leur squelette a lavantage de prsenter un cycle D supplmentaire qui joue le rle de groupement protecteur de la position 4 lectrophile (Figure 26). La prsence de ce cycle permet la dlocalisation des lectrons sur les cycles C et D, entranant une stabilit supplmentaire. Ainsi, ces pigments sont plus rsistants aux ractions dhydratation et la dcoloration due aux sulfites.99 De plus, les pyranoanthocyanes sont bien plus rsistantes aux effets de pH : par rapport aux anthocyanes natives du raisin, lintensit de couleur est moins rduite pour une gamme de pH allant de 2,2 2,7.85,96
R3' XHO O R3 O R
Positions 2 et 4 "protges": stabilit 87
R3' R4'
87
R3' R4'
R4' R5'
4
XHO O R3
R5'
HO
O R3
R5'
OH
X- O R
Electrophile, sensible aux additions nuclophiles : instabilit
Figure 26 : Illustration de la stabilit des pyranoanthocyanes
Tous ces pigments issus du vieillissement du vin, peuvent tre forms partir de toutes les anthocyanes natives du raisin. Selon lanthocyane et le substrat condens, les proprits et donc la couleur vont tre modifies. Ces pyranoanthocyanes prsentent un atout considrable en terme de stabilit, pouvant intresser les industries cosmtiques ou agroalimentaires. Dans lobjectif daccder de faon varie et efficace divers motifs pyranoanthocyanidiques, nous avons entrepris un travail de synthse de ces pigments.
99
Bakker, J. ; Timberlake, C. F. ; J. Agric. Food Chem., 1997, 45, 35-43. Sarni-Manchado, P. et al. ; J. Food. Sci., 1996, 61, 938.
53
54
Voies daccs des motifs pyranoanthocyanidiques
A. Contexte actuel (p. 57-70)
B. Accs au motif flavanol (p. 71-96)
C. Accs au motif sel de 4-mthylflavylium (p. 97-118)
D. Accs au motif pyranoanthocyanidine (p. 119-146)
E. Conclusion (p. 147-149)
55
56
A. Contexte actuel
1. Prparation de pyranoanthocyanes 1.1 Accs aux pyranoanthocyanes : Voies classiques Lvolution, pendant le vieillissement du vin, des anthocyanes natives du raisin vers de nouveaux pigments polymriss a t propose pour la premire fois par Somers en 1966.100 Depuis, plusieurs quipes de recherche travaillent sur lanalyse de ces nouveaux pigments. On peut notamment citer les travaux de Timberlake et Bakker ainsi que ceux de Moutounet et Fulcrand qui, au milieu des annes quatre-vingt-dix, ont grandement contribu lisolement de pyranoanthocyanes.101,102 1.1.1 Synthse
En revanche peu de travaux ont t publis concernant laccs synthtique ce type de pigments. Lu et Foo ont propos, en 2001, la formation de pyranoanthocyanes 91 partir de lactone et de lanthocyane correspondante 88 (Schma 26a).103 Le mcanisme suggr par Lu et Foo annonce que la forme nolique de lactone est pige par la fonction phnolique en position 5 de lanthocyane 88 et sadditionne ensuite sur la position 4 lectrophile de 88. La pyranoanthocyane 91 est forme aprs ractions de dshydratation et oxydation. Le mcanisme de cette raction peut tre reconsidr, une hypothse mcanistique est propose dans le Schma 26b. La fonction phnolique sadditionne sur lactone sous sa forme carbonyle donnant lintermdiaire 89. Aprs limination dune molcule deau et dprotonation, la fonction nolique rsultante sadditionne en
100 101
Somers, T. C. ; Nature, 1966, 209, 368. Fulcrand, H. ; Benabdeljalil, C. ; Rigaud, J. ; Cheynier, V. ; Moutounet, M. ; Phytochemistry, 1998, 47(7), 1401-1407. 102 Bakker, J. ; Bridle, P. ; Honda, T. ; Kuwano, H. ; Saito, N. ; Terahara, N. ; Timberlake, C. F. ; Phytochemistry, 1997, 44(7) , 1375-1382. 103 Lu, Y. ; Foo, L. Y. ; Tet. Lett., 2001, 42, 1371-1373.
57
position 4, par cyclisation 6-exo-trig, et conduit lespce 90 qui soxyde pour former la molcule aromatique pyranoanthocyane 91 (Schma 26b).
88 ClR3' OH HO O OGly R5' 3 jours, 40C O D CH3 OGly O HO 91 ClO R3' OH R5'
OH
HO
R3' OH
R3' OH
HO
O OGly
R5'
-H2O
HO
O OGly
R5'
D ClO H
ClOH R3'= OH ou OCH3 R5'= H, OH ou OCH3 Gly= rutinose ou glucose
Schma 26a : Mcanisme de formation dune pyranoanthocyane propos par Lu et Foo.
103
88 Cl-
R3' OH O HO R5' OGly 3 jours, 40C O
91 ClO
R3' OH R5' OGly -H+ -2e-
HO
5
D CH3
OH
R3' OH
H R3' Cl-
O R3' OH OH HO - H2O OGly O HO ClO R5' HO ClO OGly R3'
HO
O OGly 90
R5'
OH R5'
O Cl-
D CH3
HO
O OGly
R5'
O 89 H2O
Schma 26b : Autre mcanisme propos
58
1.1.2
Pyranoanthocyanes phnoliques
Les pyranoanthocyanes phnoliques ont t observes pour la premire fois en 1996, par Fulcrand et Winterhalter93 et ont t synthtises ensuite par Hakanson et
al. en 2003.104 Schwartz et al. ont propos, la mme anne, une voie daccs aux
pyranoanthocyanes 93 partir dun driv de lacide cinnamique substitu en para 92 (Schma 27a).105 Par cette mthode, ils ont russi obtenir des drivs 93 non disponibles dans la nature, de couleur orange-brun, utilisables en tant que colorants dans lindustrie alimentaire.
93 88 HO A
4
R3' OH B R5' OGly
R3' OH B R5' OGly COOH R3' = OH, R5' = H R3'= R5'= OCH3 Gly= Glucose O pH 1,5 HO A
Cl-
O C
Cl
OH 92 N E
E N
Addition nuclophile
R3' OH
-CO2 / -4H+ /-4e-
R3' OH
HO
O OGly OH OH O
R5' ClN
HO
O OGly O OH O
R5'
N Cl-
Schma 27a : Mcanisme de formation de 93, propos par Schwartz et al.
105
Une autre hypothse mcanistique est propose dans le Schma 27b. Elle consiste en laddition nuclophile de la double liaison de lacide cinnamique par assistance du doublet libre de latome dazote, suivie de laddition nuclophile, de type 6-exo-trig, de la fonction phnolique en position 5 sur le carbone en alpha du cycle aromatique
104
Hakanson, A. E. ; Pardon, K. ; Hayasaka, Y. ; De Sa, M. ; Herderich, M. ; Tet. Lett., 2003, 44 , 4887-4891. 105 Schwartz, M. ; Winterhalter, P. ; Tet. Lett., 2003, 44, 7583-7587.
59
activ. Une tape de dcarboxylation et une doxydation conduisent finalement au compos 93.
88 HO A
4
R3' OH B R5' OGly COOH pH 1,5 O HO
ClO
R3' OH R5' OGly -CO2 et -H+ / -2eR3' OH O OGly OH ClO O R5' OGly E N -H+ / -2eH O R5'
Cl-
OH 92 N E
E N
HO
Addition nuclophile par assistance du doublet libre HO O
R3' R3' OH R5' OGly HO -H+ClO O E N H O
H N Cl-
OH O
Schma 27b : Autre mcanisme propos
1.2
Accs
aux
3-doxy-pyranoanthocyanidines
phnoliques:
alternative originale En 2001, au laboratoire de Chimie des Polyphnols, Roehri-Stoeckel et al. ont mis au point une voie daccs aux 3-doxy-pyranoanthocyanidines 94 (Stratgie A ), base sur la condensation, dans lthanol, dun sel de 4-mthylflavylium 95 avec le pdimthylaminobenzaldhyde (Schma 28).106
94 R7 A O D Condensation E ClO C R3' R4' B R5' R7 A OH 95 ClO C
4
R3' R4' B R5'
E N
106
N Roehri-Stoeckel, C. ; Gonzalez, E. ; Fougerousse, A. ; Brouillard, R. ; Can. J. Chem., 2001, 79 , 1173-1178. : Schma rtrosynthtique dune stratgie daccs 94.106 Schma 28
60
1.2.1
Formation du sel de 4-mthylflavylium 95
Un sel de 4-mthylflavylium 95 est obtenu par addition nuclophile du bromure de mthylmagnsium en position 4 dune flavone 21, suivie de la dshydratation de lintermdiaire 96 en milieu acide (Schma 29). Les sels de 4-mthylflavylium sont obtenus avec de trs bons rendements et absorbent des longueurs dondes entre 370 et 460 nm.106
21 R7 O R3' R4' R7 R5' THF / Reflux / 2-5 h 96 O R3' R4' R7 R5' NH4Cl ou HCl dilu OMgBr H+ Cl95 O R3' R4' R5'
+
R5
BrMgOH
R5
O BrMg CH3
R5 H C 3
Schma 29 : Formation dun sel de 4-mthylflavylium
1.2.2
Ractivit du sel de 4-mthylflavylium 95
Un sel de 4-mthylflavylium prsente une ractivit nuclophile particulire (Schma 30) : la base conjugue 97 tant stabilise par msomrie, les hydrognes du mthyle en position 4 sont relativement acides. Ainsi, en plus de la fonction phnolique en position 5 (quand elle est prsente), le carbone dproton substituant la position 4 prsente galement un excs lectronique.
R3' R4' R5' -H+ ClR7
4
95 R7 ClO
97 O
R3' R4' R5' R7
97 O
R3' R4' R5'
R5 H Sel de 4-mthylflavylium
R5
R5
Schma 30 : Illustration de la nuclophilie de la base conjugue dun sel de 4-mthylflavylium
61
1.2.3
Hypothse mcanistique de ltape de condensation
Une hypothse mcanistique de la condensation dun sel de 4-mthylflavylium avec un benzaldhyde a t propose par Roehri-Stoeckel et al. (Schma 31a et 31b), cette raction se fait dans lthanol, reflux pendant 3 heures.106 Laddition nuclophile de la base conjugue de 95 sur la fonction carbonyle du benzaldhyde (p-dimthylaminobenzaldhyde), suivie dune dshydratation, conduit un intermdiaire anti-98 (la double liaison est en anti du substituant en 5) (Schma 31a). Cette reprsentation anti-98 de la molcule nest pas fige : elle correspond linterprtation de lanalyse de spectres RMN NOESY et semble tre la conformation la plus probable. La nature de la fonction en position 5 du sel de 4-mthylflavylium est trs importante : une fonction phnolique est indispensable pour accder au motif 3-doxy-pyranoanthocyanidique 94. La formation du cycle D se fait par addition nuclophile du phnol sur le driv syn-98, pour donner lintermdiaire 99, qui par oxydation conduit 94 (Schma 31b). En revanche si la position 5 ne prsente pas de fonction phnolique, on obtient le produit condens 98 avec R5= H.
95 ClR3' R4' O R5' R7 -H+ ClR5 N O N O 97 R3' R4' R5' R7 -H2O R5
anti-98
ClO
R3' R4' R5'
R7
R5 R5= H, OH
Schma 31a : Etapes communes daddition et de dshydratation

syn-98
R7 ClO R3' R4' R5' -H+ ClOH O R7 99 O O -H+ -2eO R3' R4' R5' R7 94 ClO R3' R4' R5'
anti-98
R5= OH N
Schma 31b : Formation de 94 par cyclisation 6- exo-trig, R5 = OH
62
2. Optimisation de la stratgie
En 2003 et 2004, au Laboratoire de Chimie des Polyphnols, la stratgie A a t confirme sur plusieurs flavones 21 et a t optimise pour accder des motifs oxygns en position 3.107 Les sels de 4-mthylflavylium obtenus ont t condenss avec le p-dimthylaminobenzaldhyde dans lthanol, reflux pour donner les produits de condensation correspondants (Schma 32).
R3' R4' 21 : R3 = H 100 : R3 = OMe R7 O R3 R5 O R3' R4' R5' i : 1) 2) R5 R5=OH R7 R3' 95 : R3 = H 95' : R3 = OMe PF6O R3 R7 R4' R5' ii R5=H ou OMe R5 98 : R3= H 98' : R3= OMe PF6R7 O R3 R R3' R4' R5' O R3 R5'
R3 = H ou OCH3 R= N R5, R7, R3', R4', R5'= H ou OH ou OCH3
94 : R3 = H O 94': R3 = OMe R
Schma 32 : Schma ractionnel de la stratgie A i: 1) MeMgBr / THF / reflux / 2h ou MeLi / THF / 0C / 1h. 2) HPF6 / MeOH / reflux / 1h ii: p-dimthylaminobenzaldhyde / EtOH / reflux .
2.1 Confirmation de la stratgie sur une srie de flavones modles Dans un premier temps, le contre-ion chlorure utilis dans les travaux de RoehriStoeckel et al. est remplac par lanion hexafluorophosphate PF6- : il est moins hygroscopique et permet ainsi une purification et une utilisation plus facile des sels de 4-mthylflavylium. Par ailleurs, les caractrisations RMN nen sont que plus nettes.
Quatre flavones modles ont t slectionnes pour confirmer la stratgie A mise au point en 2001 : deux flavones sont commerciales, la flavone 21a et la chrysine 21b ; les deux autres, 21c et 21d, sont des drivs mthyls de 21b (Schma 33). La chrysine 21b est mono- ou dimthyle selon les conditions ractionnelles utilises :
107
Isorez, G. ; Chassaing, S. ; Brouillard, R ; Rapport de DEA COMS, Synthse danalogues de vitisines, molcules supposes lorigine du vieillissement du vin. , 2004, Strasbourg I.
63
les fonctions phnoliques des positions 5 et 7 nont pas la mme ractivit, le phnol en 5 est stabilis par liaison hydrogne entre latome doxygne du carbonyle et le proton phnolique de la position 5. On peut donc diffrencier ces deux phnols et obtenir facilement et distinctement 21c (conditions i) ou 21d (conditions ii).108 Quant aux conditions iii, le dimthylformamide dissocie la liaison hydrogne et les deux fonctions phnoliques prsentent une ractivit semblable face lagent mthylant.107
5-hydroxy-7mthoxyflavone 21c O i O HO
7
87%
4
OH ii O
O 92% O
O Flavone 21a
OH
iii 81%
Chrysine 21b O O
5,7-dimthoxyflavone 21d
Schma 33 : Formation d'une srie de flavones modles. 108 i: Me2SO4 / K2CO3 / Actone / reflux / 12h. ii: Me2SO4 / NaOH / TBAI / CH2Cl2-H2O / 5h. Me2SO4 / DMF / reflux / 3h
107
iii:
Ces quatre flavones ragissent avec le bromure de mthylmagnsium et la dshydratation par lacide hexafluorophosphorique se fait dans le mthanol. Les rsultats de la stratgie A , applique aux flavones 21a, 21b, 21c et 21d, figurent dans le Tableau 2. Il est facile de suivre lavancement de la raction de condensation par spectrophotomtrie UV-Visible. Le maximum dabsorption du sel de 4-mthylflavylium 95 diminue au profit dun autre maximum dabsorption correspondant 98, forme condense ouverte, cette premire tape est rapide. Si R5 = OH, progressivement nous observons lapparition dune troisime bande dabsorption, une longueur donde plus leve, qui correspond au produit condens ferm ou 3-doxy108
Wang, Y. ; Tan, W. ; Li, W. Z. ; Li, Y. ; J. Nat. Prod., 2001, 64(2) , 197.
64
pyranoanthocyanidine phnolique 94. La raction est considre comme termine lorsquil ny a plus dvolution de la bande correspondant 94.106 Le changement de couleur pendant la manipulation est galement un bon indicateur de lvolution qui a lieu au fur et mesure de lavancement de la raction.
Sel de 4mthylflavylium : rdta
95a
PF6O
Entre
Flavone
Produit condens : rdta

98a
PF6O
Produit condens : tempsb
21a
3 heures
52%
95b
PF6PF6R
90%
94b
HO O
HO
21b
OH
O
12 heures
90%
71%
95c
PF6-
94c
PF6O O
21c
OH
3 heures
54%
73%
95d
PF6-
98d
PF6O O
21d
O
3 heures
95%
107
40%
Tableau 2 : Rsultats de la stratgie A applique quatre flavones. a b Rendements aprs purification. Temps au bout duquel la conversion est complte (suivi par spectrophotomtrie UV-Vis). R=
N
Daprs les rsultats, la stratgie A est confirme sur la srie de flavones modles 21a 21d.
65
2.2 Validation de la stratgie sur une srie de flavonols modles Les structures naturelles des pyranoanthocyanes prsentent un groupement 3-Oglycoside (Schma 24), il est donc intressant de valider la stratgie A sur de nouveaux prcurseurs et dobtenir des squelettes pyranoanthocyanidines 94 oxygns en position 3. Les flavonols 38 sont les candidats appropris : en plus de leur fonction hydroxyle en position 3, ils prsentent une ractivit semblable celle des flavones (motif accepteur de Michael du cycle C). La manipulation des sucres tant difficile, il nous a paru judicieux de mimer le fragment sucr par un groupement lectrodonneur mthyle : partir de produits commerciaux, le flavonol et la querctine 31, une srie de trois flavonols mthyls 100a, 100b et 100c a t prpare (Schma 34).
O i OH O Flavonol OH OH HO O OH OH O i 83% O O O O O 95%
O O O 3-mthoxyflavone 100a O O ii 60% OH O O O O O O
Querctine 31
3,3',4',5,7-pentamthoxyflavone 100b
5-hydroxy-3,3',4',7-ttramthoxyflavone 100c
Schma 34 : Formation d'une srie de flavonols modles. 109 i: Me2SO4 / K2CO3 / Actone / reflux / 12h. ii: AlCl3 / CH3CN / 70C / 14h.
107
La querctine 31 est permthyle en 100b dans des conditions classiques dalkylation. En revanche, il nest pas possible de ttramthyler slectivement 31 par les mthodes standard de mthylation. Pour obtenir la 5-hydroxy-3,3,4,7ttramthoxyflavone 100c, nous avons eu recours une mthode de monodmthylation rgioslective de 100b mise au point par Horie et al. en 1987.109 Elle
109
Horie, T. ; Tsukayama, M. ; Kawamura, Y. ; Seno, M. ; J. Org. Chem., 1987, 52(21) , 4702-4709.
66
fait intervenir le chlorure daluminium AlCl3 dans lactonitrile. Ce sel daluminium chlate loxygne du cycle C et permet la monodmthylation en position 5, slectivement par rapport la position 3 (dmthylation rgioslective position 5 / position 3 : 3 / 2).
La stratgie A (Schma 32) a t applique la srie des trois flavonols mthyls 100a, 100b et 100c. Les rsultats sont reports dans le Tableau 3.
Entre
Flavonol

95a
PF6-
Produit condens : rdt

98a
PF6O
Produit condens : tempsb
100a
12 heures
O
quantitatif
95b
O
76%
O
98b
O PF6O O O
100b
O
PF6O O O
24 heures
95%
O O
95%
95c
O O O O OH
94c
PF6O O O
100c
PF6O
12 heures
50%
107
75%
O R
Tableau 3 : Rsultats de la stratgie A appliques trois flavonols mthyls. a b Rendements aprs purification. Temps au bout duquel la conversion est complte (suivi par spectrophotomtrie UV-Vis). R=
N
Le flavonol mthyl 100a est le modle simple de la srie. Lobtention, avec de bons rendements, de 95a et 98a (Entre 1) est encourageante et valide la stratgie A sur un motif flavonol substitu par un mthoxyle en position 3. Les rsultats obtenus sur 100b et 100c (Entres 2 et 3) confirment la mthode sur des molcules plus 67
complexes : le grand nombre de groupements mthoxyles ou encore la substitution du cycle B nempchent pas la formation du sel de flavylium ou du produit condens correspondant. Par contre, les temps de raction sont plus longs, laissant penser que la complexit des structures intervient au niveau de la ractivit. Grce cette mthode, nous avons pu synthtiser pour la premire fois un driv mthyl dune pyranocyanidine (94c). 3. Objectifs et analyse de la stratgie Les pyranoanthocyanes 80, pigments naturels du vin rouge, sont connues pour lintensit et la stabilit de leur couleur en milieu aqueux. En raison de ces proprits exceptionnelles, ils sont des cibles de choix en tant que colorants potentiels de lindustrie. Dans cette tude, nous nous proposons de mettre au point une mthode efficace daccs un grand panel de 3-doxy-pyranoanthocyanidines et de pyranoanthocyanidines 101 (Figure 28). Trois sites cibles du squelette 101 ont t envisags pour augmenter la diversit danalogues pyranoanthocyanidiques. Dans un premier temps, le niveau de substitution du cycle B reflte la varit des anthocyanes natives du raisin prsentes dans le vin rouge, il est donc indispensable dtre en mesure de proposer les diffrentes combinaisons naturelles. Laccs des motifs oxygns en position 3 est une priorit puisque cette position est naturellement O-glycosyle. Enfin, la nature du groupement R condens est galement une source de diversit supplmentaire comme le montrent les structures issues du vieillissement du vin (Schma 23).
R3' PF6R7 A O D R O C R3 O R4' B R5' R7 A D R PF6O C R3
R3' R4' B R5' R7 A O D R PF6O C R3
R3' R4' B R5'
Figure 28 : Cibles de diversit du squelette pyranoanthocyanidine 101
68
La stratgie A dveloppe ci-dessus prsente de bons rsultats. Elle est valide sur des motifs flavones et flavonols et semble tre une mthode de choix pour la synthse de drivs pyranoanthocyanidiques. Cependant, elle est limite par rapport aux objectifs prsents en Figure 28. 3.1 Limites au niveau du cycle B.
La stratgie A permet lobtention de drivs pyranoanthocyanidiques oxygns en position 3 partir de flavonols 38, mais les flavones et flavonols, prcurseurs de la squence ractionnelle, sont de source commerciale. La disponibilit au niveau de la substitution du cycle B est donc trs limite. Cest pourquoi nous nous sommes intresss la synthse du squelette C6-C3-C6. La construction de la structure tricyclique peut se faire au niveau des flavones ou flavonols prcurseurs, mais galement au niveau du sel de 4-mthylflavylium via la formation dun squelette C6C4-C6 (Schma 35). Quatre stratgies ont t envisages pour dvelopper la construction de ces noyaux : trois dentre elles, B1, B 2 et B3 sont bases sur la B1 construction du motif flavonol, tandis que la stratgie C est fonde sur la synthse directe de sels de 4-mthylflavylium.
101 R3' PF6R7 A O D R Stratgie C O C R3 OH R4' B R5' R7 A PF6O C R3 OH O Sel de 4-mthylflavylium R3' R4' B R5' R7 A O C R3 B R5' Stratgies B1, B2 et B3 21 : R3 = H 38 : R3 = OH
R3' R4'
Schma 35 : Quatre stratgies envisages R3 = H ou OR; R 3', R4',R5' et R 7 = H, OH ou OMe
69
3.2 Limites au niveau du groupement R
La
stratgie
est
valide
pour
la
condensation
avec
le
p-dimthyl-
aminobenzaldhyde et le p-dimthylaminocinnamaldhyde. Pour varier la nature du groupement R, plusieurs aldhydes ont t condenss. Un chapitre complet sera consacr cette tape de condensation (Chapitre D).
70
B. Accs au motif flavonol

Trois stratgies ont t envisages pour la construction du motif C6-C3-C6 des flavonols 38 (Schma 36). La stratgie B1 consiste en une hmisynthse de flavonols, fonde sur une tape de ctohydroxylation dun flav-3-ne 102.110 La stratgie B2 correspond une synthse totale partir dune -O-2-
hydroxyactophnone 103. Enfin, la stratgie B3 est une synthse biomimtique de flavonols, labore par Stefan Chassaing au Laboratoire de Chimie des Polyphnols.111
R3' 102 R7 A Stratgie B1 38 : R3 = OH R7 A R5 O C R3 O R3' R4' B R5' Stratgie B2 R7 A R3 OH O O R7 A Stratgie B3 Voie biomimtique OH O R5 + R3' R4' B R5' OH O R5 103 R5 R7 A R5 O C R4' B R5'
R3 = OH ou OR R5 = H ou OH ou OR R3', R4', R5', R7= H ou OR
Schma 36 : Construction du motif flavonol : stratgies B1, B2 et B3 B1
1. Stratgie B1 1.1 Prsentation de la stratgie En 2004, Plietker a mis au point une raction de ctohydroxylation dolfine, catalyse par le chlorure de ruthnium.110 Le cycle C dun flavonol correspondant la
110
Plietker, B. ; Eur. J. Org. Chem., 2005, 1919-1929. Plietker, B. ; J. Org. Chem., 2004, 69(24) , 8287-8296. 111 Chassaing S. ; Thse de Doctorat, 2006, Strasbourg I, pp. 111-168.
71
forme oxyde dune fonction -ctohydroxyle, nous nous sommes intresss la ctohydroxylation dun flav-3-ne (Schma 37). La squence ractionnelle envisage se droule en quatre tapes : la flavanone 12 est rduite par le borohydrure de sodium pour donner le flavan-4-ol 12r.112 La dshydratation, par catalyse acide de 12r, conduit au flav-3-ne 12e113 et cet intermdiaire est engag dans la raction de ctohydroxylation pour former deux rgioisomres : 12ch et 12ch.111 Enfin, une tape doxydation permet dobtenir le flavonol 38.
R3' 12 R7 O R4' R5' B1 R5 i R3' 12r R7 O ii R5 OH R5 R4' R5' R7 12e O R3' R4' R5' iii R7 R5 O + 12ch' O O R5 OH R3' R4' R5' O R5 O O R7 R7 38 O OH 12ch O OH R3' R4' R5' R3' R4' R5'
R5=R7=R3'=R4'=R5'=H
Schma 37 : Stratgie B1 envisage 112 113 i: NaBH4 / EtOH / 0C TA / 12h. ii: PTSA / CH2Cl2 / reflux / 12h. 110 iii: RuCl3(cat) / oxone / NaHCO3 / AcOEt-CH3CN-H2O (6-6-1) / TA.
1.2 Application de la stratgie
La stratgie B1 a t tente sur trois substrats modles : le premier est la chromanone 104, structure simple, non substitue sur le cycle pyrane C, le second est la 2,2-dimthylchromanone 105 (Schma 38)114 et le dernier, la flavanone 106, non substitue sur les cycles A et B.
112 113
Snider, B. B. ; Conn, R. S. E. ; Carras, M. ; Tet. Lett., 1979, 20(19), 1679-1682. Lim, J. ; Kim, I. H. ; Kim, H. H. ; Ahn, K. S. ; Ahn, H. ; Tet. Lett., 2001, 42, 4001-4003. 114 El-Essawy, F. A. G. ; Yassin, S. M. ; El-Sakka, I. A. ; Khattab, A. F. ; Solofte, I. ; Madsen, J. O. ; Senning, A. ; J. Org. Chem., 1998, 63(26), 9840-9845. Kabbe, H. J. ; Synthesis, 1978, 886-887.
72
O OH
/ N H
Tolune / Reflux / 24h / 23% O O 2,2-dimthylchromanone 105
Schma 38 :Formation de la 2,2-dimthylchromanone.
114
Les trois molcules modles 104, 105 et 106 ont t utilises dans la stratgie B1 (Schma 37) et les rsultats apparaissent dans le Tableau 4.
Entre
Produit de dpart
104
Produit de rduction : rdta

104r
O
Produit dliminationb
104e
O
Produits ctohydroxylation : rdta

104ch
O OH O OH
104ch
O O
Chromanone
OH
87%
O
Traces / Traces 104 : Traces

105e
O
105r
O
105ch
O OH O
105ch
O O OH
105
OH
49%
106 106r
O Ph OH O
Traces / _c
Ph
106e
O Ph
106ch
O Ph OH O
106ch
O
Flavanone
Ph O
OH
95%
10 % / 12%
Tableau 4 : Rsultats provenant de la stratgie B1 a b Rendement aprs purification. Produit non isol dont le brut a t directement engag dans c ltape de ctohydroxylation. Aucune trace na t observe.
La formation des produits de rduction se fait avec de bons rendements, mais lobtention des rgioisomres ctohydroxyls est moins efficace : seules des traces de produits sont observes pour 104ch, 104ch et 105ch (Entres 1 et 2) et le rendement des deux isomres 106ch et 106ch ne dpasse gure 20% (Entre 3). Les rsultats obtenus avec la stratgie B1 sont dcevants, ils sexpliquent par plusieurs difficults rencontres au cours de cette tude.
73
1.3 Bilan et inconvnients de la stratgie B1
1.3.1
Instabilit du produit dlimination
Lintermdiaire 106e nest pas stable, il est en quilibre avec un isomre moins instable, le flav-2-ne 106e (Figure 29). Il est donc difficile de le purifier sans lisomriser. Cest pourquoi nous avons engag directement le brut ractionnel, mlange majoritaire du flav-3-ne (106e/106e : 3/1), dans la raction de ctohydroxylation. La 2,2-dimthylchromanone a t choisie comme molcule modle puisque son produit dlimination 105e ne peut pas sisomriser, mais il nest pas plus stable sur silice que 104e ou 106e et ne peut donc tre isol.
106e O
Isomrisation
106e' O
Figure 29 : Isomrisation du flav-3-ne en flav-2-ne
Lutilisation directe des bruts 104e, 105e et 106e, mlanges disomres, est un inconvnient trop important pour optimiser la raction de ctohydroxylation ellemme. 1.3.2 Raction de ctohydroxylation
Plietker a tudi la raction de ctohydroxylation sur une grande varit de substrats, la plupart dentre eux donnent de trs bons rsultats. Cependant, une tude ralise sur des olfines htrocycliques est moins probante : la tension de cycle des intermdiaires forms au cours de la transformation par ctohydroxylation peut conduire la fragmentation du cycle central C.116 Les rsultats obtenus ne sont pas exploitables pour accder facilement au squelette flavonol et ne remplissent pas les objectifs de notre recherche (Figure 28) : nous avons donc envisag une synthse totale de flavonols : cest la stratgie B2. B2 74
2. Stratgie B2 2.1 Prsentation de la stratgie La synthse totale de flavonols semble tre un choix judicieux pour accder une grande diversit de molcules. Celles, labores jusqu prsent, font intervenir un prcurseur 1,3-diaryle-1,3-dione qui conduit au flavonol correspondant par une tape-clef de type 6-exo-trig (Baker et Venkataraman : Schma 14, Fougerousse et Gonzalez : Schma 15).47,48,49 La stratgie B2 est base sur le prcurseur -O-2hydroxyactophnone 103 (Schma 39a). La condensation de 103 avec un benzaldhyde, en milieu basique, forme lintermdiaire 107. Une raction de type 6-
exo-tet entre 107 et 108 est ltape-clef et originale de cette stratgie. Puis, la
fonction hydroxyle en position 3 du produit cyclique 108 est dprotge et oxyde pour conduire au flavonol 38 (Schma 39b).
R3' 38 R7 A R5 O C R3 O B R5' Stratgie B2 R3=OH ou OAc R4' R7 A R3 OH O 103 R5
Schma 39a : Schma rtrosynthtique de la stratgie B2

R3' 103 R7 A OR OH O R5 Stratgie B2 R7 A R5 38 O C OR O Dprotection / oxydation de la position 3 R3' R4' R7 A R5 -HLG O C OR O 108 B R5' B R5' R4'
Dprotonation / addition sur un benzaldhyde R3' LG R5 A OR OH O 107 B R4' R5' 6-exo-tet
R7
Schma 39b : Squence ractionnelle envisage : LG = leaving group ou groupe partant
75
Dans
un
premier
temps,
une
tude
sur
les
ractions
d-oxygnation
dactophnones 109, a t ralise pour accder des -O-actophnones 110 (Figure 30).
110 R7 R5 R3 R2 O Stratgies B2A / B2B / B2C 109 R7 R5
R3 = OH ou OAc
R2
Figure 30 : Trois voies tudies
2.2 Formation d-O-actophnones 110

109a 109b O O O i OH O ii O 109c 109d OH O O O O O O iv O 109f O O O O O iii O 111a OH O 109e 2,4,6-trihydroxyactophnone HO OH Actophnones commerciales
Schma 40 : Actophnones commerciales et drivs i: MeI / K2CO3 / Actone / reflux. ii: MOMCl / K2CO3 / DMF / 50C. iii: Me2SO4 / K2CO3 / Actone / reflux. iv: MOMCl / NaH / THF / 0C.
Une srie de six actophnones 109 a t prpare pour ltude des diffrentes mthodes d-oxygnation (Schma 40) : lactophnone 109a est le modle simple de la srie, permettant la validation des conditions utilises pour le motif actophnone. La 2-hydroxyactophnone 109b et ses drivs alkoxyls 109c et 109d correspondent des composs substitus en position 2, cette position doit tre imprativement hydroxyle pour former, par la suite, le cycle C du flavonol. Le mthoxymthyle est le groupe protecteur le mieux adapt pour rpondre cette
76
exigence, puisquil est rsistant en milieu basique et se clive facilement en conditions acides. Le substrat 109f prsente le motif phloroglucinol, frquemment rencontr chez les flavonodes naturels. Il est donc le prcurseur de choix pour dterminer la mthode d-oxygnation optimale dans le contexte de la stratgie B2. B2
Stefan Chassaing a ralis, au cours de sa thse (Laboratoire de Chimie des Polyphnols, Strasbourg I, 2002-2006), une tude trs complte des mthodes envisageables pour la transformation flavanone 12 en dihydroflavonol. En raison de la compatibilit des fonctions entre 12 et 109 ainsi que le motif dihydroflavonol et 110, nous avons test trois de ces transformations pour l-oxygnation des actophnones.111
2.2.1
-hydroxylation par une N-sulfonyloxaziridine : Conditions B2A
La chimie des N-sulfonyloxaziridines a principalement t dveloppe par Davis dans les annes quatre-vingt et prsente un trs grand nombre dapplications. Ce sont des oxydants de choix permettant le transfert doxygne sur des carbanions, des sulfures, des disulfures, des slniures, des olfines et des nolates.111,115 Dans un premier temps, lagent oxydant ()-trans-2-phnylsulfonyl-3-phnyloxaziridine 28 a t prpar partir de prcurseurs commerciaux selon la mthode propose par Davis et al. (Schma 41a).116 Puis, les conditions utilises par Couch et al. ont t testes sur lactophnone 109a (Schma 41b).117 Lhexamthyl-disilylamidure de potassium dprotone le mthyle en alpha du carbonyle de 109a. Lnolate ainsi form ragit avec lagent oxydant 28 pour conduire l-hydroxyactophnone 110a. Malgr plusieurs tentatives, le produit 110a na jamais t isol et nous obtenons un mlange de produits de dgradation.
115
Davis, F. A. ; Chen, B. C. ; Chem. Rev., 1992, 92, 919-920. Davis, F. A. ; Sheppard, A. C. ; Tetrahedron, 1989, 45, 5703-5742. 116 Vishwakarma, L. C. ; Stringer, O. D. ; Davis, F. A . ; Org. Synth., 1988, 66, 203-210. Davis, F. A. ; Chattopadhyay, S. ; Towson, J. C. ; Lal, S. ; Reddy, T. ; J. Org. Chem., 1988, 53, 2087-2089. 117 Couch, E. ; Fkyerat, A. ; Tabacchi, R. ; Helvetica Chimica Acta, 2003, 86(1) , 210-221.
77
O Ph + PhSO2NH2
i Ph
SO2Ph
28 ii (+/-) Ph O N SO2Ph
Schma 41a : Formation de la (+/-)-trans-2-phnylsulfonyl-3-phnyloxaziridine 28. i: Amberlyst 15 / Tamis molculaire 5 / PhCH3 / Reflux (Dean-Starck) / 12 h / 80%. ii: Oxone / K2CO3 / PhCH3-H2 O (3-2) / TA / 2 h / 46%.
110a
116
109a
iii
OH O O
Schma 41b : Conditions B2A.117 iii: KHMDS (1,0 q.) / 28 (1,5 q.) / THF / -78C 0C / 4 h.
La mthode B2A nest donc pas adapte des molcules du type actophnone 109. Nous nous sommes donc dirigs vers une alternative qui a dj fait lobjet dune tude sur les actophnones. 2.2.2 B2B -hydroxylation par le diactate de iodosobenzne : Conditions
La mthode B2B a t dveloppe par Moriarty et al., dans les annes quatre-vingt, sur des motifs actophnones 109 : elle fait intervenir la chimie de liode hypervalent en milieu basique (Schma 42a). Le mcanisme pour la transformation 109 110, propos par Moriarty et Prakash, se fait en deux tapes : la premire (i) consiste en loxydation par le diactate diodosobenzne et conduit lactal 109 (Schma 42b), celui-ci est hydrolys en milieu acide (ii) pour former l-hydroxyactophnone 110.40,111,118
118
Moriarty, R. M. ; Prakash, Om. ; Acc. Chem. Res., 1986, 19, 244-250.
78
109 R7 R5
i: PhI(OAc)2 / NaOH / MeOH / 10C TA / 12h ii: 0,3 p-TsOH / Actone-H2O (5-3) / 50C / 2 h
110 R7 R5 OH R2 O
R2
Schma 42a : Squence ractionnelle propose par Moriarty et al.
118
PhI(OAc)2
in situ Echange de ligands

Enolisation 109 R7 R5 CH3OCH3OH R7 PhI(OCH3)2
R7 Echange de ligand R2
R5
OCH3
R5
IPh(OCH3) O Addition nuclophile
R2 109' R7
O Ouverture rgioslective de l'poxyde R 7 MeOH O OH
R2
O PhI R5 R7 Formation d'un poxyde O-substitu R5
R5
R2 O
R2
R2 O
I O-
Ph OCH3
Schma 42b : Mcanisme de la transformation i, propos par Moriarty et Prakash.
40,111
Les essais raliss en 1981 par Moriarty et al. sur des actophnones substitues ont donn de bons rsultats avec des rendements allant de 45 71%.119 Ainsi, les actophnones 109a 109f ont t engages dans la mthode B2B, les rsultats B2B sont regroups dans le Tableau 5.
119
Moriarty, R. M. ; Hu, H. ; Gupta, S. C. ; Tet. Lett., 1981, 20(14) , 1283-1286.
79
Entre
Prcurseur 109
Intermdiaire ia
109a
-hydroxyactophnone : rdtb
110a
OH
109a
O OH O
O
34%
110b
OH
109b
109b
OH O O OH
OH
_c
109c
110c
OH
109c
O O OH O
O O
40%
110d
OH
109d
109d
O O O O OH
59%
O O
109e
110e
OH O
109e
O O OH
_c
OH
O OH
6
O O
O O
11%
O OH O O
O OH
7
O O
O O
19%
O OH
O O OH O O
8
O O
O O
_c,d
O
109f
110f
O OH
109f
O OH
O O O
O O
_c
Tableau 5 : Rsultats de la stratgie B2B sur une srie dactophnones a b Intermdiaires de la transformation i, non isols. Rendements sur les deux tapes aprs purification. Bilan de la stratgie dB2B c 111 Aucune trace nest observe. Rsultats obtenus par Stefan Chassaing.
80
Quelques rsultats sont satisfaisants (Entres 1,3 et 4) et en concordance avec ceux obtenus par Moriarty et al. en 1981.119 En revanche, dans le cas de substrats plus substitus, les rendements sont nuls (Entres 5, 8, 9) ou infrieurs 20% (Entres 6, 7). Dans tous les cas, le produit de dpart a t consomm, mais volue vers plusieurs sous-produits non caractriss. Ces rsultats montrent une ractivit particulire, dpendante de la substitution du cycle benznique. En effet, la confrontation des rsultats obtenus par Moriarty et al. et ceux prsents ci-dessus permet une meilleure comprhension de la ractivit des substrats face cette raction. Les conditions proposes sont optimales pour des motifs benzniques peu substitus et/ou portant un halogne lectroattracteur,119 mais les actophnones substitues par des groupements lectrodonneurs, comme les mthoxyles, ne permettent pas ou trs peu de formation de l-hydroxyactophnone 110 correspondante (Tableau 5). Llectrophilie du carbonyle de lactophnone dpend de la substitution du cycle benznique : un cycle substitu par des groupements lectrodonneurs va fortement diminuer la ractivit du carbonyle, ce qui peut ralentir laddition nuclophile du mthanolate (Schma 41b). Dautres transformations peuvent avoir lieu plus rapidement que la formation de lpoxyde et empcher la formation de lactal 109 et donc de l-hydroxyactophnone 110.111
La 2,4,6-trimthoxyactophnone (Entre 8) et 109f (Entre 9) sont trs importantes car elles miment le motif phloroglucinol des flavonols naturels. Malheureusement, les transformations correspondantes nont pas t probantes pour les conditions de Moriarty et al.119 Cette mthode nest donc pas adapte pour former les prcurseurs dune synthse totale de flavonols.
Suites aux rsultats dcevants des mthodes B2A et B2B, nous avons considr une B2B alternative correspondant cette fois-ci une -actoxylation des actophnones.
81
2.2.3
-actoxylation par le triactate de manganse: Conditions B2C
Lutilisation dactates mtalliques comme le ttraactate de plomb ou le triactate de manganse est souvent rencontre dans la synthse de produits naturels.120 Leur application principale correspond lactoxylation de motifs nones, le mcanisme de cette raction par le ttraactate de plomb a t propos par Henbest et al. en 1961.121 Quant au mcanisme associ au triactate de manganse, il nest pas encore clairement tabli et ce jour, deux voies distinctes ont t suggres (Schma 43).122
Voie A : Mn(OAc)3 AcOH O O O Mn OAc AcOH O O Mn(OAc)
OAc
Voie B : Mn(OAc)3 Mn(OAc)2
Mn(OAc)3 OAc
O Mn(OAc)2
Schma 43 : Hypothses de mcanismes d'actoxylation envisageables par le triactate 122,111 de manganse.
La voie A est assimile au mcanisme propos pour le ttraactate de plomb : elle correspond la formation dun nolate de manganse, suivie de llimination rductrice intramolculaire dactate de manganse, via un tat de transition sept centres. La voie B est une proposition radicalaire qui fait intervenir loxydation de la forme nolique par le manganse III, suivie dun transfert de ligand actate en alpha de la fonction none. Le triactate de manganse est un oxydant monolectronique
120
Demir, A. S. ; Jeganathan, A. ; Synthesis, 1992, 235-247. Dunlap, N. K. ; Sabol, M. R. ; Watt, D. S. ; Tet. Lett ., 1984, 25, 5839-5842. 121 Henbest, H. B. ; Jones, D. N. ; Slater, G. P. ; J. Chem. Soc., 1961, 4472-4478. 122 Snider, B. B. ; Chem. Rev., 1996, 96, 339-363. Iqbal, J. ; Bhatla, B. ; Nayyar, N. K. ; Chem. Rev., 1994, 94, 519-564.
82
et est connu pour ses ractions radicalaires, la voie B semble donc tre la plus probable.111 En 2004, Demir et al. ont optimis loxydation par le triactate de manganse en utilisant de lacide actique comme co-solvant.123 Dans le but dobtenir des actophnones -oxygnes, ayant un cycle aromatique substitu, nous avons engag les actophnones 109e et 109f dans la raction d-actoxylation de Demir et al. (Schma 44 et Tableau 6).
109 R7 R5 1,3 Mn(OAc)3, 2H2O / R7 110Ac R5 OAc R2 O
PhH-AcOH (10-1) / reflux (Dean-Starck) R2 O
Schma 44 : Actoxylation par le Mn(OAc)3 dans les conditions de Demir et al.
123
Entre
Prcurseur
O O O
Produit obtenua
O O O
Tempsb 8h
109e
110Ace
OAc
47%
O
109f
109f
3h
O O O O O O
Aucune conversion observe

O
111a
109f
OH O
16h Clivage du mthoxymthyle
Tableau 6 : Rsultats de la stratgie B2C applique une srie dactophnones substitues a b Rendement et produit obtenu aprs purification sur colonne de silice. Temps au bout duquel la conversion semble complte (suivi par CCM).
Lobtention de 110Ace montre que la raction d-actoxylation, selon les conditions de Demir et al., est efficace sur certaines actophnones substitues. En revanche, encore une fois, la substitution de type phloroglucinol ne permet pas loxygnation en alpha du carbonyle. Cette mthode nest donc pas approprie notre tude.
123
Demir, A. S. ; Reis, O. ; Igdir, A. C. ; Tetrahedron, 2004, 60, 3427-3423.
83
2.2.4
Bilan de la stratgie B2
Au vu de ces rsultats dcevants pour lobtention dactophnones -oxygnes, il est difficile dentrevoir la synthse totale de flavonol par la stratgie B 2. Nous 2 navons donc pas continu nos investigations dans cette voie. Stefan Chassaing a labor au cours de sa thse, une synthse biomimtique de flavonols, qui a permis lobtention de drivs mthoxyls de flavonols naturels. Cette approche va tre brivement prsente. 3. Stratgie B3 Loriginalit de la synthse de flavonols, mise au point par Stefan Chassaing, est quelle suit la voie biosynthtique des flavonols (Schmas 1 et 45).111
RB B A OH O CHI RA A RB B F3H RA A RB B FLS OH +/O +/O O RA A RB B
RA
12 O C
112 O C
38 O C OH
Schma 45 : Biosynthse des flavonols CHI = CHalcone Isomrase, F3H = Flavanone-3-Hydroxylase, FLS = FlavonolSynthase
Les
ractions
naturelles,
catalyses
par
les
enzymes,
sont
possibles
thermodynamiquement. En ce qui concerne laccs par voie chimique, il faut dterminer les conditions optimales qui permettront ces transformations dun point de vue cintique : plusieurs investigations ont donc t menes pour dfinir quelle substance catalyse au mieux chaque raction (Schma 46). Par ailleurs, les trois transformations enzymatiques de la biosynthse des flavonols font intervenir quatre sous-classes de flavonodes qui sont les composs 9, 12, 112 et 38, intermdiaires de la squence ractionnelle B3. Il est donc envisageable B3 dengager chacune de ces espces synthtiques dans des tests biologiques.
84
Le choix du groupe protecteur mthoxyle nest pas anodin : certaines tudes ont montr que les drivs mthyls et/ou mthoxyls des flavonodes peuvent prsenter un potentiel anti-prolifratif sur les cellules cancreuses, bien suprieur celui des motifs hydroxyls correspondants.124 On peut notamment citer les travaux de Philippe Chabert (Laboratoire de Chimie des Polyphnols de Strasbourg), qui a synthtis des drivs mthyls du resvratrol, stilbne naturel reconnu pour ses multiples activits biologiques bnfiques pour ltre humain. En partenariat avec Francis Raul (Laboratoire dOncologie Nutritionnelle de Strasbourg), plusieurs tests biologiques ont t raliss sur ces molcules : il sest avr que lisomre Z mthyl est beaucoup plus actif sur une ligne de cellules cancreuses du colon que la forme libre du resvratrol.125
3.1 Prsentation et rsultats de la synthse biomimtique B3
Les prcurseurs 2-hydroxyactophnone
111
et
benzaldhyde 113 de la
biosynthse B3 sont des substrats simples et faciles daccs (source commerciale), ils permettent un grand choix de substitution pour les futurs cycles A et B du flavonol 38 (Schma 46). La premire tape (conditions i) est une condensation de ClaisenSchmidt entre 111 et 113 pour former la chalcone correspondante 9111, qui cyclise en milieu acide, conduisant la flavanone 12 (ii).126 La transformation par voie chimique de 12 en dihydroflavonol 112 est peu dcrite dans la littrature, plusieurs mthodes ont t tentes, comme loxydation de lnolate de 12 par une Nsulfonyloxaziridine, ou encore son oxydation par le diactate diodosobenzne.117,119 Malgr des tentatives varies, aucune condition na permis dobtenir efficacement le dihydroflavonol 112. Cest pourquoi, une alternative faisant intervenir un nouvel intermdiaire 114 a t exploite : la 3-actoxylation de la flavanone 12 par le
124
Kandaswani, C. ; Perkins, E. ; Soloniuk, D. S. ; Drezewiecki, G. ; Middleton Jr, E. ; Cancer Lett., 1991, 56, 147-152. 125 Schneider, Y. ; Chabert, P. ; Stutzman, J. ; Coelho, D. ; Fougerousse, A. ; Gosse, F. ; Launay, J. F. ; Brouillard, R. ; Raul, F. ; Int. J. Cancer, 2003, 107, 189-196. 126 Solladi, G. ; Gehrold, N. ; Meignan, J. ; Eur. J. Org. Chem., 1999, 2309-2314.
85
triactate de manganse, a t mise au point en utilisant les conditions de Demir et
al. pour donner la ()-trans-3-actoxy-flavanone 114.123
111 R5 R7 + R5' OH O i
113 O R7 R3' R4' R5 O 38 O OH
R3' R4' R5'
v R3' 9 R4' R5' ii R7 12 O R3' R4' R5' Aucune R5 O +/procdure efficace.117,119 R3' 114 R7 O OAc +/R5 iv R4' R5' O R7 112 O OH +/R3' R4' R5'
R5
R7
OH
iii R3', R4',R5', R5, R7= H ou OMe
R5
Schma 46 : Squence ractionnelle de la synthse biomimtique B3 des flavonols. 111 126 i: NaH / DMF / 0C TA / 4 h. ii: AcOH / Reflux / 12 h. iii: Mn(OAc)3 / PhH-AcOH (10-1) / 4123 127 10 h. iv: Sc(OTf)3 / H2O-THF-MeOH / 7 jours. v: SO3.Py / DMSO / Et3 N / CH2Cl2 / -15C TA / 128 12 h.
Ensuite, pour accder au dihydroflavonol 112, plusieurs conditions de dactylation ont t testes : afin dviter un maximum de produits secondaires, une mthode de clivage chimioslective de la fonction -actoxyctone par le triflate de scandium a t slectionne (Kajiro et al.).127 La transformation du dihydroflavonol 112 en flavonol 38 se fait dans les conditions de Parikh-Doering128 : cette dernire tape consiste en loxydation de la fonction -hydroxyctone de 112 en -dictone, qui par quilibre cto-nolique, correspond au motif flavonol du cycle C (Schma 47).
127
Kajiro, H. ; Mitamura, S. ; Mori, A. ; Hiyama, T. ; Bull. Chem. Soc., 1999, 72, 1553-1560. Kajiro, H. ; Mitamura, S. ; Mori, A. ; Hiyama, T. ; Tet. Lett ., 1999, 40, 1689-1692. 128 Parikh, J. R. ; Doering, W. von E. ; J. Am. Chem. Soc., 1967, 89(21), 5505-5507.
86
R3' 112 R7 O OH R5 O R5 O R4' R5' O R7 O O
R3' R4' Equilibre R R5' cto-nolique 7 38 O OH R5 O
R3' R4' R5'
Schma 47 : Formation de 38 par oxydation de 112
Les travaux de Stefan Chassaing ont permis lobtention de cinq drivs mthyls de flavonols sur de petites quantits. Trois dentre eux ont t synthtiss plus grande chelle, les rsultats sont regroups dans le Tableau 7.
87
Entres
1
111a + 113a
O
2
111a + 113b
O
3
111a + 113c
Prcurseurs
O
O
O O
9a
9b
O O
9c
O O O O O
Chalconesa
OH
52%
12a
O O
OH
64%
12b
O +/O O O O
OH
57%
12c
O O
Flavanones
O
+/O O
91%
114a 114b
O
OAc O O
90%
O
+/-
75%
114c
O O
3-actoxyflavanonesc
O +/-
O OAc O O
O O OAc O O
+/-
50%
112a 112b
O
OH O O O +/O
40%
O O OH O O
O
+/-
66%
112c
O O
Dihydroflavonolsd
O OH O O
+/-
84%
38a
38b
O
OH O O
61%
O O OH O O
+/-
97%
38c
O O
Flavonols
O OH
75% Rendement global

f
Driv mthyl de la galangine : 15%
85% Driv mthyl du kaempfrol : 12%
80% Driv mthyl de la myrictine : 22%

O O
Tableau 7 : Rsultats de lapplication de la synthse biomimtique B3. a b Rendement selon les conditions i, aprs purification. Rendement selon les conditions ii, aprs purification. c d Rendement selon les conditions iii, aprs purification. Rendement selon les conditions iv aprs e f purification. Rendement selon les conditions v, aprs purification. Rendement sur les cinq tapes aprs purification.
88
Les rsultats obtenus pour les trois sries de flavonodes sont satisfaisants. Les rendements totaux de la biosynthse des drivs mthyls de flavonols vont de 12 22% sur les cinq tapes. En partenariat avec le Laboratoire dOncologie Nutritionnelle de Strasbourg, dirig par Francis Raul, les cinq sries de flavonodes, obtenus par la synthse biomimtique B3, ont t engages dans une tude biologique. Elle consiste B3 principalement valuer le potentiel anti-prolifratif des molcules synthtises sur la ligne Caco-2, cellules tumorales du colon. Parmi les trois sries de flavonols prsentes dans le Tableau 7, trois structures prsentent un potentiel antiprolifratif intressant sur la ligne cancreuse du colon SW620 (Figure 31).
9a O O O 38a O OH OH O O O O O O 38b O OH O
IC50 = 12,5-25 M
IC50 = 5-12,5 M
IC50 = 4 M
Figure 31 : Molcules actives sur une ligne cancreuse du colon SW620
3.2 Bilan et extension de la stratgie B3
Lensemble des rsultats sur la synthse biomimtique des flavonols est trs intressant : il est possible dobtenir un grand nombre de flavonols diffrant par la substitution du cycle A et du cycle B, avec des rendements satisfaisants. La formation dintermdiaires appartenant la classe des flavonodes a permis de tester tous les substrats dans une potentielle activit biologique et didentifier trois molcules actives. Par ailleurs, lors de llaboration de la squence ractionnelle, ltude de la transformation flavanone 12 en dihydroflavonol 112 a montr des rsultats inattendus. Lutilisation du diactate diodosobenzne en tant quagent hydroxylant a gnr des produits secondaires de type flavone 21 (Schma 48, Tableau 8)111 : selon la substitution du cycle A, la formation de la flavone devient majoritaire par rapport celle du dihydroflavonol (produit initialement attendu). 89
R3' 12 R7 O R4' R5' i / ii R7 112 O OH R5 O R5 O
R3' R4' R5' R7 21 O
R3' R4' R5'
+
R5 O
et chalcone 9
(+/-) cis et trans
Schma 48 : Oxydation par l'iode hypervalent i: PhI(OAc)2 (1,1 q.) / KOH (1,0 q.) / MeOH. ii: Trans : HCl (3M) / EtOH / TA Cis : HCl (3M) / Actone / TA.
Entres
Flavanone
106
O
Dihydroflavonol
27
O OH O
Flavone
21a
O
1
(+/-)
(+/-)
68%
23%
21d
O O
12a
112a
O O OH O O
O
(+/-)
(+/-)
_
12b
O
82%
21e
O
112b
O O O OH O O
O O
(+/-)
(+/-)
_c
c
84%
Tableau 8 : Rsultats de lapplication de loxydation par liode hypervalent. _ a Rendement aprs purification par recristallisation suite lhydrolyse acide dans les conditions ii. b Rendement aprs purification par chromatographie sur colonne de silice suite lhydrolyse acide c d dans les conditions ii. Aucune trace nest observe. Rendement aprs purification par e chromatographie sur colonne de silice suite loxydation (pas dhydrolyse). Rendement aprs purification par recristallisation suite loxydation (pas dhydrolyse).
En effet, la flavanone 106 est majoritairement -hydroxyle par liode hypervalent, pour donner le ()-trans-dihydroflavonol 27 avec un rendement de 68% aprs hydrolyse acide. Le produit secondaire (flavone 21a) est minoritaire avec 23% de rendement (Entre 1). En revanche, pour les substrats prsentant un cycle A substitu, la formation de la flavone devient majoritaire (lorsquelle est monosubstitue sur le cycle A), voire exclusive (Entres 2 et 3).111
90
Le rapport dihydroflavonol / flavone est dpendant du motif du cycle A : plus la substitution est importante (motif phloroglucinol : positions 5 et 7 oxygnes) plus la transformation volue vers la flavone. Ces rsultats renforcent les observations faites lors de ltude de la stratgie B2B. Stefan Chassaing a propos une hypothse base B2B sur les contraintes lectroniques et striques imposes par les substituants prsents sur le cycle A. Au cours du mcanisme d-hydroxylation (Schma 42b et 49), laddition nuclophile du mthanolate sur le carbonyle en position 4 de 12IPh est une tape limitante si le cycle A est fortement substitu : le carbonyle est moins lectrophile et donc moins ractif. Dans ces conditions, un quilibre dpimrisation plus rapide est envisageable entre 12IPh et 12IPh. Lhydrogne en position 2 de 12IPh se trouve alors en position anti-priplanaire par rapport au groupe iod sortant, situation permettant une limination de type E2 pour donner la flavone 21.111
12 R7 O R3' R4' R5' Enolisation CH3OCH3OH R7 O R3' R4' R5'
R5
R5
in situ Echange de ligands PhI(OCH3)2 PhI(OAc)2
CH3OR3' 12IPh Addition nuclophile R7 sur le carbonyle O R4' Equilibre d' R7 R5' pimrisation IPh(OCH3) R5 O
CH3O12IPh' O R3' H R4' R5' IPh(OCH3) R5 O
R3'
Etape limitante si R5=R7=OR

R4'
Elimination et limination rductrice de l'iode
PhI R3'
R7
O OH
R5' 21 R7 O O
R4' R5'
R5 O
R5
Schma 49 : Hypothse mcanistique de la formation de la flavone 21 par liode 111 hypervalent.
91
Daprs les rsultats et cette hypothse mcanistique, la mthode avec liode hypervalent nest pas adapte pour la transformation flavanone 12 en dihydroflavonol 112, mais elle peut tre une voie efficace pour accder des flavones 21, substitues en position 5 et 7. Lobtention de drivs mthyls des flavones chrysine 21b et apignine 13 dans les conditions i (Schma 48, Tableau 8) valide la mthode pour le groupe protecteur mthoxyle. Dans le but de synthtiser des flavones naturelles, nous avons reproduit ces conditions sur des prcurseurs protgs par des groupements mthoxymthyles, facilement clivables en milieu acide (Schma 50)129, les rsultats obtenus sont rpertoris dans le Tableau 9.
111 R5 R7 + R3' OH O i R3' 9 R7 R5 R4' R5' R7 ii R5 O 12 O +/R4' R5' R5 O iii / iv R3' R4' R5' 113 O R7 21 O R3' R4' R5'
OH
Schma 50 : Squence ractionnelle pour la formation de flavones naturelles 111 16 i: NaH / DMF / 0C TA / 4 h. ii: NaOAc / EtOH / reflux. iii: PhI(OAc)2 / KOH / MeOH. 129 iv: HCl / MeOH / reflux.
129
Yongqiang W. ; Wenfei, T. ; Weidong, Z. Li. ; Yulin, L. ; J. Nat. Prod., 2001, 64, 196-199.
92
Entres Prcurseurs
1
111b (R5=R7=OMOM) 113a (R4=H) 9f
O
2
111b (R5=R7=OMOM) 113g (R4=OMOM) 9g
O
O
O
O O
Chalconesa
O O OH
O O
60%
O O
OH
48%
O O +/-
12f
12g
O
Flavanonea
O O O O
+/-
64%
64%
O O
21f
21g
O O O
Flavone protgea
O O O O
30%
42%
13
OH O
21b
Flavone dprotgea
HO
HO
OH
Rendement globalb
quantitatif Chrysine 21b : 11%
OH
quantitatif Apignine 13 : 12%
Tableau 9 : Rsultats concernant la formation de flavones naturelles. a b Rendement aprs purification. Rendement sur les quatre tapes aprs purification
Lutilisation de liode hypervalent dans la formation de flavones naturelles, comme la chrysine 21b ou lapignine 13 est efficace, avec des rendements, sur quatre tapes, suprieurs 10%.
93
4. Bilan des stratgies B 4.1 Bilan La construction du motif C6-C3-C6 correspondant au motif flavonol 38 a t tudie et trois stratgies ont t envisages (Schma 36 et Schma 51). Malgr les trs bons rsultats obtenus par Plietker, la stratgie B1, fonde sur la B1 ctohydroxylation dun flav-3-ne 102, nest pas adapte la structure tricyclique des flavonodes.110 En effet, la tension de cycle gnre lors de la formation dintermdiaires au cours de la ctohydroxylation, entre lagent oxydant au ruthnium et le cycle central C, entrane une fragmentation du substrat.
R3' 102 R7 O R4' R5'
R5 Stratgie B1 : raction de cto-hydroxylation R3' 38 : R3 = OH R7 Stratgie B2 : Synthse totale 103 R7 R5 R3 OH B2A O B2B et B2C selon substitution du cycle benznique R5 21 OH O R7 O OH O R5 O R7 R5 + R3' R4' R5' O R3 R3 = OH ou OR R5 = H ou OH ou OR R3', R4', R5', R7= H ou OMe R4' R5'
Stratgie B3 Synthse biomimtique O
Utilisation de l'iode hypervalent R3' R4' R5'
R7
R5
Schma 51 : Bilan des stratgies B
94
Lhmisynthse de flavonols par la stratgie B1 ne sappliquant pas aux flavonodes, nous nous sommes concentrs sur la synthse totale de flavonols en laborant la stratgie B2. Cette mthode sappuie sur une tape originale 6-exo-tet partir dB2
O-2-hydroxyactophnones 103. Trois alternatives ont t envisages pour accder

aux substrats 103 (Schma 51) : les stratgies B2A et B2B pour former directement des -hydroxyactophnones et la stratgie B2C pour conduire des intermdiaires de type -actoxyactophnones. B2A na donn aucun rsultat positif contrairement B2B et B2C , mais lefficacit de ces mthodes est dpendante du motif de substitution du cycle benznique (futur cycle A) du prcurseur actophnone 109. Cette contrainte ne permet donc pas dlaborer la synthse totale B2 envisage.
La stratgie B3 mise au point par Stefan Chassaing prsente des rendements trs satisfaisants pour laccs des drivs mthyls de flavonols. Grce une tude approfondie pour chaque transformation, une voie de synthse de flavones naturelles a pu tre labore. Cette mthode est de loin la plus adapte pour lobtention dun grand nombre de squelettes C6-C3-C6 de type flavonols ou flavones. 4.2 Perspectives
La synthse totale B2 reste une mthode envisageable pour laccs au squelette flavonol, il serait intressant de tenter dautres mthodes d-oxygnation dactophnones 109, qui ne dpendraient pas du motif de substitution du cycle benznique. Par ailleurs, certaines -hydroxy et -actoxyactophnones obtenues (110c, 110d et 110Ace) peuvent tre engages dans la squence ractionnelle envisage B2 (Schma 39).
95
Une autre alternative pour construire le squelette C6-C3-C6, prcurseur des pyranoanthocyanidines 101, est laccs direct au motif sel de 4-mthylflavylium (Schma 35). La stratgie C , que nous allons prsenter dans le chapitre suivant, se base sur une synthse de type C6 + C4-C6.
96
C. Accs au motif sel de 4-mthylflavylium

1. Stratgie C 1.1 Prsentation de la stratgie
Les stratgies B labores pour la construction du motif flavonol C6-C3-C6 38 nont pas donn les rsultats attendus. Nous avons donc orient notre tude vers lobtention directe du sel de 4-mthylflavylium 115, intermdiaire incontournable de la squence ractionnelle des pyranoanthocyanidines 101 (Schma 35). Outre les conditions de synthse proposes dans le chapitre A, addition nuclophile du bromure de mthylmagnsium sur une flavone ou un flavonol, une autre stratgie, mise au point par Bulow et Wagner en 1901, consiste en une association C6 + C4-C6 de deux entits carbones.130 La condensation rgioslective en milieu acide fort (acide actique et acide hexafluorophosphorique) dun phnol 116 (C6) et dune 1-phnyl-butan-1,3-dione 117 (C4-C6) conduit en 24 heures au sel de 4mthylflavylium correspondant (Schma 52a). Le mcanisme de cette transformation nest pas clairement tabli, on suppose quaprs activation des carbonyles de la 1-phnyl-butan-1,3-dione 117 par un proton, ont lieu deux additions nuclophiles rgioslectives successives de 116. Puis, llimination de deux molcules deau conduit au sel de 4-mthylflavylium. La force motrice de la raction est la formation dun cycle six centres aromatique. La rgioslectivit de la raction sexplique par les caractres lectrophiles et nuclophiles de chaque espce. Des calculs de mcanique molculaire ont t effectus sur les ractifs de dpart par Aurlien Alix (Doctorant au Laboratoire de
130
Robinson, R. ; Walker, J. ; J. Chem. Soc., 1934, 1435. Malkin, T. ; Robinson, R. ; J. Chem. Soc., 1925, 127, 1190. Bulow, C. ; Wagner, H. ; Ibid., 1903, 36, 1941. Bulow, C. ; Wagner, H. ; Ber. Dtsch. Chem. Ges., 1901, 34, 1782. Bulow, C. ; Von Sicherer, W. ; Ber. Dtsch. Chem. Ges., 1901, 34, 3889.
97
Synthse et Ractivit Organique, Strasbourg I) avec le logiciel Hyperchem Release 7.5 (Schma 52b) et permettent dexpliquer la rgioslectivit de la raction.
116 117 PF6R5 A
9 10
115
R3' R4'
R7
OH
O R3' B R4' R5'
R7 AcOH / HPF6 TA / 24 heures
O C R3
A
10
R5'
11
OH 116a : R5=H, R7=OH 116b : R5=R7=OMe 116c : R5=R7=OH
R3
4 11
R5
117a : Benzoylactone R3=R3'=R4'=R5'=H
Schma 52a : Construction de sels de 4-mthylflavylium par la stratgie C

HOMO LUMO
HO Calculs des charges, mthode MM+
OH
-0,1038
O
0,489
O
0,271
0,51 -0,67
OH
H HO OH Ph OH O O Addition nuclophile 1 HO
H O
OH
Ph
HO Prototropie
OH
Ph
OH
OH H 6-exo-trig
O Addition nuclophile 2 OH
HO
Ph
HO - H 2O
Ph - H2O / HO + H+ H OH2
OH2 Ph
+ H+
HO
Ph
OH
Elimination E1 / Aromatisation OH
OH
OH
Raromatisation/ Protonation / Elimination
OH
OH
Schma 52b : Proposition du mcanisme de condensation rgioslective entre 116c et 117a
Trois phnols ont t condenss avec la benzoylactone 117a : le rsorcinol 116a, le 3,5-dimthoxyphnol 116b et le phloroglucinol 116c. Les sels de 4mthylflavylium synthtiss de type 115 (R3 = H) sont rcuprs par prcipitation dans lther et filtration, les rsultats apparaissent dans le Tableau 10.
98
Entres
Prcurseurs
116a + 117a
HO OH OH O

115a
PF6HO O
1
116b + 117a
O O OH O
73%
95d
PF6O O
2
OH
91%
95b
O
116c + 117a
HO
OH
OH
PF6HO
OH
OH
95%
Tableau 10 : Rsultats de la condensation de phnols avec la benzoylactone 117a. a Rendement du sel de 4-mthylflavylium aprs prcipitation dans lther, filtration et lavages lther.
Les sels de 4-mthylflavylium 95b et 95d (Entres 2 et 3) sont obtenus avec dexcellents rendements : ils prsentent tous les deux le motif phloroglucinol, frquemment rencontr chez les molcules naturelles. Le sel 115a est, quant lui, form avec un rendement correct de 73 % (Entre 1). Ces premiers rsultats sont trs encourageants et valident la synthse de sels de 4mthylflavylium partir dune stratgie C6 + C4-C6. Notre objectif principal reste laccs une grande varit de motifs 115 (Figure 28), ainsi en nous basant sur les bons rsultats prsents ci-dessus, nous avons dvelopp la stratgie C (Schma 53).
99
117 R7 A OH R5' 116 R5 A OH R7 OH 117' O R3' OR B R4' R5' OH O R3' B R4'
116 115 PF6R7 A OH O C R3 R3 ' R4' B R5' R5
Schma 53 : Schma rtrosynthtique de la stratgie C
Le motif de substitution du cycle A dpend du phnol 116 et celui du cycle B dpend de la nature de la 1-phnyl-butan-1,3-dione 117. Nous avons donc considr dans un premier temps une synthse de molcules 117, proposant une large gamme de substitution du cycle B. Laccs aux motifs oxygns 117 a galement t dvelopp partir de la stratgie C et sera prsent dans une seconde partie.
1.2 Synthse de 1,3-diones ou -dictones Les -dictones sont considres comme des units structurales trs importantes, notamment dans la synthse dhtrocycles comme les pyrazoles ou les benzopyran4-ones.131 De plus, elles sont largement utilises en tant que ligands chlatants pour les lanthanides et les mtaux de transition. Ainsi, un grand nombre de mthodes ont t dveloppes pour lobtention de ces molcules (Schma 54). 1.2.1 Mthodes classiques
Lune des approches les plus classiques est la raction daldolisation croise A. Laddition nuclophile de lnolate de la fonction ctone sur un aldhyde conduit un intermdiaire aldol, qui est ensuite oxyd pour donner la -dictone correspondante
131
Nagpal, A. ; Unny, R. ; Joshi, Y. C. ; Heterocycl. Commun., 2001, 32, 589-592. Raston, C. L. ; Salem, G. ; J. Chem. Soc., Chem. Commun., 1984, 1702-1703.
100
avec de trs bons rendements. Certaines prcautions doivent pourtant tre prises pour viter la formation de la ctone ,-insature, produit dlimination de laldol : la fonction hydroxyle de cet intermdiaire slimine, par raction de type E1CB en milieu basique ou de type E1 en milieu acide. De plus, si la ractivit lectrophile des deux substrats est trop proche, une polymrisation de la ctone peut avoir lieu.
M O R !+ + !" O R'
A : Raction d'aldolisation croise #-dictone O B : Raction d'aldolisation avec un ther d'nol silyl R O R' C : Condensation de Claisen C-acylation AL O R' !+ Y R' + !" O R
SiR3 O R !+ + !" O
R, R' = CH3 ou aryle M = Na, Li, Mg... Y = Groupe partant (Cl, OR'...) AL = Acide de Lewis (BF3...)
+ Produits de 0-acylation
Schma 54 : Mthodes classiques daccs aux -dictones
Une version B, trs souvent utilise, de la raction daldolisation fait intervenir un ther dnol silyl. Cet nol a lavantage dtre stable temprature ambiante, contrairement aux nolates de lithium qui se manipulent -78C (nolates utiliss pour la version A). Lalternative C est la C-acylation dune ctone partir de sa forme nolate avec un agent acylant, comme un chlorure dacyle ou un ester.132 Cette mthode conduit directement la -dictone, mais elle peut aussi former le produit de O-acylation. Il est impratif que les deux molcules de dpart ne soient pas lune et lautre trop ractives. De plus des ractions de polymrisation peuvent galement avoir lieu.
132
Wiles, C. ; Watts, P. ; Haswell, S. J. ; Pombo-Villar, E. ; Tet. Lett., 2002, 43, 2945-2948. Katritzky, A. R. ; Pastor, A. ; J. Org. Chem., 2000, 65, 3679-3682. Tang, Q. ; Sen, S. E. ; Tet. Lett ., 1998, 39, 2249-2252. Le Roux, C. ; Mandrou, S. ; Dubac, J. ; J. Org. Chem., 1996, 61, 3885-3887. Beck, A. K. ; Hoeckstra, M. S. ; Seebach, D. ; Tet. Lett., 1977, 18, 1187-1190. McElvain, S. M. ; Weber, K. ; J. Am. Chem. Soc., 1941, 105, 2182-2186.
101
Toutes ces voies de synthse ont fait leurs preuves, mais prsentent encore certaines contraintes. Ainsi, laccs aux -dictones reste un sujet dactualit pour un grand nombre dquipes de recherche.133 1.2.2 Alternative originale
Une nouvelle stratgie, propose par Mahalingam et Aidhen fait intervenir lagent acylant en tant que nuclophile134, cette voie daccs originale aux 1-phnyl-butan1,3-diones a attir notre attention (Schma 55). Laddition nuclophile successive du cyanure de sodium et du chlorure de morpholinium sur un benzaldhyde conduit lintermdiaire -aminonitrile 118. Celui-ci est ensuite dproton en alpha du nitrile par lhydrure de sodium, formant ainsi un agent acylant latent, nuclophile. Il ragit alors avec du bromure de propargyle pour donner lintermdiaire 119. Enfin, lhydratation par le cuivre II permet lobtention de la 1-phnyl-butan-1,3-dione 117.
O 113 i R3' R4' R5' R3' R4' R5' 118 CN N O ii R3' R4' R5' 119 CN N O iii R3' R4' R5' 117 OH O
Schma 55 : Stratgie propose par Mahalingam et Aidhen. i: NaCN / Chlorure de morpholinium / MeOH-H2 O / 30C / 4 heures. ii: NaH / Bromure de propargyle / DMF / TA / 2 heures. iii: CuSO4 . 5 H2O / MeOH-H2O / 60C / 30 minutes.
134
Les rendements annoncs pour chaque transformation sont suprieurs 90% et le substrat 118 se manipule aisment temprature ambiante, contrairement aux conditions contraignantes des acylations classiques : milieu anhydre, bases fortes et basses tempratures. Ainsi, malgr une tape supplmentaire par rapport aux synthses prsentes en Schma 54, nous avons slectionn cette stratgie pour la synthse de plusieurs 1-phnyl-butan-1,3-diones.
133
Fargeas, V. ; Myriam, B. ; Metay, E. ; Baffreau, J. ; Mnard, D. ; Gosselin, P. ; Berg, J. P. ; Barthomeuf, C. ; Lebreton, J. ; Tetrahedron, 2004, 60, 10359-10364. 134 Mahalingam, S. M. ; Aidhen, I. S. ; J. Org. Chem., 2006, 71(1), 345-351.
102
1.3
Application de la stratgie C
Quatre benzaldhydes ont t choisis pour lapplication de la stratgie de Mahalingam et Aidhen : le p-anisaldhyde 113b est le prcurseur modle, le 3,4,5trimthoxybenzaldhyde 113c et le 4-fluorobenzaldhyde 113d permettent de valider la mthode pour des motifs plus substitus ou portant un groupement lectroattracteur. Enfin, le 3,5-dimthoxy-4-(mthoxy-mthoxy)benzaldhyde 113e est un prcurseur de choix puisquil prfigure le cycle B de la malvidine-3-O-glucoside 64 (anthocyane majoritaire de Vitis vinifera) (Schma 56).
113b O 113c O 113d O 113e O MOMCl / K2CO3 / Actone / reflux O O O O F O PF6 HO
-
O O OH O OGLc O
O O
O OH
64 : malvidine 3-0-glucoside
OH
Schma 56 : Prcurseurs de la stratgie C
1.3.1
Formation de l-aminonitrile 118
Loriginalit de la stratgie, propose par Mahalingam et Aidhen, est base sur le concept umpolung du prcurseur : la transformation du benzaldhyde lectrophile en -aminonitrile 118 entrane la formation dun nuclophile latent. Cette mthode a dj fait lobjet de travaux qui ont permis de former de faon efficace une liaison carbone-carbone dans la synthse de 2-doxy-C-arylglycosides et de 1,4dictones.135 Cette raction se fait facilement en conditions hydroalcooliques (mlange mthanol - eau), donnant les intermdiaires 118 avec de trs bons
135
Vijayasaradhi, S. ; Aidhen, I. S. ; Org. Lett ., 2002, 4(10) , 1739-1742. Selvamurugan, V. ; Aidhen, I. S. ; Tetrahedron, 2001, 57, 6065-6069.
103
rendements (Schma 57 et Tableau 11) : la transformation i est efficace pour les quatre benzaldhydes tests.
113 O i: NaCN / O N H2 ClR3' R4' R5 ' 118 CN N O
R3 ' R4'
R5'
MeOH-H2O / 30C / 4 heures
Schma 57 : Formation de l'-amino-nitrile 118
Entres Prcurseur -aminonitrile : Rendementa
1
113b 118b
CN N O O
O O O
2
113c 118c
CN N O
3
113d 118d
CN N F O
O O O
4
113e 118e
CN N O
87%
85%
85%
95%
Tableau 11 : Rsultats de la transformation i a Rendement aprs purification par chromatographie sur colonne de silice.
1.3.2
Formation de lintermdiaire propargylique 119
La transformation 118 en 119 est ltape-clef de la squence ractionnelle propose par Mahalingam et Aidhen : elle correspond la construction de lunit C4-C6.134 Lintermdiaire 118 est dproton en alpha des fonctions nitrile et morpholine pour donner une espce nuclophile 118. La subtitution nuclophile de 118 sur le bromure de propargyle conduit lintermdiaire propargylique C4-C6 119, les rsultats de cette transformation sont rpertoris dans le Tableau 12 (Schma 58). Les conditions proposes par Mahalingam et Aidhen font intervenir les ractifs de dpart dans des proportions non stoechiomtriques et lintermdiaire 119 nest pas isol, tant directement engag dans ltape dhydratation par le cuivre. Les rsultats obtenus daprs ce mode opratoire ont t trs dcevants, avec des rendements sur les deux tapes entre 10 et 30%. Nous avons donc dcid de modifier la faon de procder : dans un premier temps, la raction a t ralise en conditions
104
stoechiomtriques, pour limiter les ractions secondaires. Puis nous avons extrait avec du dithylther la place du dichloromthane : par rapport au solvant de la raction, le dimthylformamide, le coefficient de partage du dithylther est plus appropri. Enfin, chaque produit a t purifi par chromatographie sur colonne de silice avant dtre engag dans la dernire tape.
118 CN R3' R4' R5 ' N ii : NaH / Br DMF / TA / 2 heures 118' R3 ' R4 ' R5 ' CN N O R3' R4' R5 ' 119 CN N O
Schma 58 : Formation de lintermdiaire propargylique 119
Entres Prcurseurs Intermdiaires propargyliques Rendementa
1
118b 119b
2
118c 119c
O
O
3
118d 119d
CN N
O
O O O O
4
118e 119e
CN N
CN N
CN N O
O O
87%
84%
72%
75%
Tableau 12 : Rsultats de la transformation ii a Rendement aprs purification par chromatographie sur colonne de silice, transformation en conditions stoechiomtriques.
En appliquant ces conditions, nous avons obtenu les intermdiaires propargyliques 119b 119e avec des rendements corrects, suprieurs 70%. La transformation ii, dans des conditions stoechiomtriques, est ainsi efficace pour tous cycles benzniques tests.
105
1.3.3
Formation de la 1-phnyl-butan-1,3-dione 117
La dernire transformation de cette squence ractionnelle est assez originale puisquelle fait intervenir des sels de cuivre (CuSO4.5H2O) pour hydrater le groupement propargylique. En effet, le cuivre nest pas frquemment dcrit dans la littrature pour ce type de transformation, contrairement dautres sels inorganiques comme les sels de platine.136 La fonction alcyne de lunit propargylique de 119 est active par chlation avec le cuivre II et laddition de deux molcules deau conduit aux 1-phnyl-butan-1,3-diones 117. Les rsultats obtenus pour cette dernire tape sur les drivs 119 sont rpertoris dans le Tableau 13 (Schma 59).
119 CN R3' R4' R5' N O iii: CuSO4 . 5 H2O / MeOH-H2O / 60C / 30 minutes R3' R4' R5' 117 OH O
Schma 59 : Formation de 1-phnyl-butan-1,3-diones 117
Entres Prcurseur 1-phnylbutan-1,3dione Rendementa Rendement sur les trois tapes
1
119b 117b
OH O
O
2
119c 117c
OH O
3
119d 117d
OH O
O
4
119e 117e
OH O
F
O
50%
38%
64%
46% 27%
44%
40%
29%
Tableau 13 : Rsultats de la transformation iii a Rendement aprs purification par chromatographie sur colonne de silice.
Les rsultats obtenus pour la transformation iii sont dcevants : part un rendement honorable de 64% pour 117c (Entre 2), les 1-phnyl-butan-1,3-diones 117b, 117d et 117e ont des rendements compris entre 40 et 50%.
136
Baidossi, W. ; Lahav, M. ; Blum, J. ; J. Org. Chem., 1997, 62, 669-672.
106
Dans le but damliorer les rendements de cette transformation, plusieurs essais de conditions exprimentales diffrentes ont t raliss, comme la variation du temps de raction ou de la temprature, mais des produits secondaires apparaissent toujours au bout de 30 minutes de raction. Par contre, le prcurseur nest pas totalement consomm, malgr des tempratures plus leves ; nayant pas obtenu damlioration, nous nous sommes intresss une technique rcente. Technique du four micro-ondes
Le four micro-ondes a fait son apparition en chimie dans les annes quatre-vingt et est devenu dun usage quotidien dix ans plus tard.137 Il sapplique des ractifs prsentant une certaine polarit : quand les diples sont exposs au champ lectromagntique, ils tournent alternativement dans un sens ou dans lautre, selon le sens du champ lectrique. Les molcules absorbent alors les micro-ondes sous forme dnergie rotationnelle. Cependant elles ne conservent pas cette nergie et la restituent sous forme de chaleur : cest le chauffage micro-ondes qui peut atteindre 10C par seconde. Il est beaucoup plus efficace et homogne que le chauffage traditionnel par bain dhuile, ce qui permet une nette augmentation des rendements et une diminution considrable des temps de raction. De plus, les nergies des tats de transition de la raction sont abaisses par ce chauffage : les molcules sont plus ordonnes, ce qui correspond une diminution de lentropie et donc une diminution de lnergie dactivation, la raction nen est que plus facile. Lutilisation des micro-ondes entre dans les principes de la chimie verte.138 En effet, il est possible de travailler avec des dilutions de ractifs faibles, voire sans solvant si lun des prcurseurs est un liquide. Il est important de noter que la raction aux microondes marchera dautant mieux avec un solvant non polaire quavec un solvant polaire : ce dernier va interfrer avec le champ lectromagntique et donc surchauffer, ce qui va altrer lefficacit du chauffage micro-onde.
137 138
Loupy, A. ; Microwaves in Organic Synthesis, Wiley-VCH, Verlag Gmbh & Co. : Weinheim, 2006. Varma, R. S. ; Green Chem., 1999, 1(3) , 115-125.
107
Dans les conditions proposes par Mahalingam et Aidhen, la transformation 119 en 117 conduit un ou plusieurs produits secondaires. Dans le but de favoriser slectivement la formation du produit 1-phnyl-butan-1,3-dione 117, nous avons test la technique micro-ondes. Les rsultats obtenus sur la transformation 119b en 117b sont rpertoris dans le Tableau 14 (Schma 60).
119b CN N O O Conditions x O 119b 117b Produit secondaire 117b OH O
AE/H 2/3
Schma 60 : Formation de la 1-phnyl-butan-1,3-dione 117b
Entres
Conditions x iii (Schma 58) MOb : 60C / P=0,5 bar / MeOH /5 minutes MOb : 60C / 0,5 bar / MeOH / 2 minutes MOb : 90C / 0,5 bar / MeOH / 2 minutes MOb : 60C / 0,5 bar / MeOH-H2O / 2minutes MOb : 60C / 0,5 bar / THF / 2 minutes MOb : 60C / 0,5 bar / THF-H2O / 2 minutes THF-H2O / 60C / 30 minutes
b
Proportiona 50-50 / rdt (117b)=50% 50-50
1 2
70-_c
_c
_c
Aucune conversion
_c
_c
Tableau 14 : Essais sur la transformation 119b 117b.

a
Proportion 117b - produit secondaire dtermin par RMN 1H. Raction ralise avec un four c micro-ondes Discover, CEM. Prsence de plusieurs produits secondaires.
108
Par rapport la mthode de Mahalingam et Aidhen (Entres 1 et 8), une srie dexpriences a t ralise par micro-ondes (Entres 2 7) : les meilleurs rsultats sont obtenus pour les conditions classiques iii (Entre 1) et pour une squence micro-ondes, 60C pendant deux minutes (Entre 3). Le changement de pression, de temprature ou mme de solvant ne permet pas dviter la formation du produit secondaire. Ainsi, malgr ces diffrents essais, nous navons pas amlior les rendements : lutilisation dun four micro-ondes nest donc pas adapte cette raction. 1.3.4 Bilan de la formation de 1-phnyl-butan-1,3-diones.
Quatre 1-phnyl-butan-1,3-diones ont t obtenues avec des rendements allant de 27 46% (Tableau 13), ce qui est dcevant par rapport aux rsultats annoncs par Mahalingam et Aidhen.134 En effet, les ractions i et ii se font avec de trs bons rendements, pour tout type de substrat (Tableaux 11 et 12), mais la transformation 119 en 117 (iii) reste ltape limitante de cette squence ractionnelle. Malgr cette dernire tape, nous avons synthtis les 1-phnyl-butan1,3-diones 117b, 117c, 117d et 117e avec des rendements acceptables. Lobtention de ces molcules permet la poursuite de notre tude, toujours dans lobjectif daccder des sels de 4-mthylflavylium substitus sur le cycle B. 1.4 Accs au motif sel de 4-mthylflavylium
Maintenant que nous avons notre disposition des motifs C4-C6 diffremment substitus sur le cycle benznique, nous pouvons envisager la formation des sels de 4-mthylflavylium correspondants. Les 1-phnyl-butan-1,3-diones 117b 117e ont t engages dans la raction de condensation avec un phnol pour former de nouveaux squelettes C6-C4-C6 (Schma 52). Les rsultats sont regroups dans le Tableau 15.
109
Entres
Prcurseurs engags
116c + 117b
HO OH OH O
Rendement sel de 4mthylflavyliuma

115b
PF6HO O O
1
OH
O
OH
81%
O O
116c + 117c
HO OH O O O
OH
O
PF6HO O
115c
2
OH
OH
quantitatif
115c
O PF6O O O O
116b + 117c
O O OH O O O O
3
OH
26%
115d
PF6F O
116c + 117d
HO OH
OH
O
HO
4
OH
F
OH
57%
OH
116c + 117e
HO OH O
OH
O
PF6HO O
115e
O
OH
MOMO O
OH
mlange
Tableau 15 : Formation dune nouvelle srie de sels de 4-mthylflavylium. a b Rendement obtenu aprs prcipitation dans lther, filtration et lavages lther. Le groupe protecteur mthoxymthyle est cliv dans les conditions acides: AcOH / HPF6
Cinq sels de 4-mthylflavylium, substitus sur le cycle B par des groupements lectrodonneurs ou lectroattracteurs ont t obtenus avec des rendements assez varis : 115b et 115c ont t forms avec plus de 80% de rendement (Entres 1 et 2) et la condensation du phloroglucinol avec 117d conduit un nouveau sel de 4mthylflavylium 115d, portant un groupement lectroattracteur sur le cycle B (Entre 4). Par contre, la condensation du 3,5-dimthoxyphnol avec 117c ne donne quen faible quantit le sel 115c : il est connu que la prsence de mthoxyles dstabilise la structure sel de flavylium. La formation de 115e est plus difficile : le groupe protecteur mthoxymthyle est cens tre cliv en conditions acides (Entre
110
5). Or, nous obtenons un mlange de deux sels de 4-mthylflavylium : 115e et son homologue protg en position 4. Les quatre sels de 4-mthylflavylium 115b 115d ont t engags dans la raction de condensation avec diffrents benzaldhydes pour former les 3-doxypyranoanthocyanidines phnoliques correspondantes. Les rsultats seront prsents dans le chapitre D. 2. Extension de la stratgie C La mthode dveloppe ci-dessus nous permet de former de faon efficace plusieurs sels de 4-mthylflavylium substitus sur le cycle B et portant un hydrogne en position 3. Or, lun de nos objectifs est la formation de molcules oxygnes sur cette position (Schma 61). Nous avons donc exploit la stratgie C pour accder des sels de 4-mthylflavylium 120 (R3 = OR), prsentant une fonction hydroxyle ou alkoxyle en position 3 : nous avons donc prospect les mthodes d-oxygnation de 1-phnyl-butan-1,3-diones 117.
116 120 PF6R7 A R5 O C OR Stratgie C OR R = H, Ac, Ar B R4' R5' R5' R3' R4' B R5' O R5 A OH 117' O R3' !"oxygnation B R4' R7
+
117 OH O R3'
Schma 61 : Accs des sels de 4-mthylflavylium oxygns en position 3
2.1 -oxygnation de la benzoyactone 117a Dans un premier temps, nous avons tent l-oxygnation de 117a : nous avons test les conditions de Moriarty et al. faisant intervenir liode hypervalent, ainsi que celles de Demir et al. utilisant le triactate de manganse, dveloppes dans le 111
chapitre B2 (Schma 62).118,119,123 Malheureusement, dans aucun cas nous navons pu obtenir l-O-benzoylactone 117a : la prsence dun second hydrogne labile en alpha des deux carbonyles entrane des ractions secondaires incontrlables. Nous obtenons donc un mlange de produits difficilement sparables.
117'a 117a O O 1) PhI(OAc)2 / KOH / MeOH 2) PPTs / Actone-H2O O Mn(OAc)3 / Benzne-AcOH / Systme Dean-Starck OAc () O O
OH O
()
Schma 62 : Tentatives de formation de drivs 2-oxo des 1-phnyl-butan-1,3-diones 117a
2.2 Alternative pour lobtention de drivs 2-oxo des 1-phnyl-butan-1,3diones Loxygnation directe sur le motif 117 semblant compromise, nous avons donc envisag la squence ractionnelle suggre par Langer et al. en 2006139 : elle fait intervenir un intermdiaire halogn 121.140 Lhalogne est ensuite substitu par un ester de sodium dans le dimthylsulfoxyde, formant ainsi une 1-phnyl-butan-1,3dione oxygne en alpha des deux carbonyles de 117 (Schma 63).
117 OH R3' R4' R5' O i R3' R4' R5' Cl () 121 O O ii R3' R4' R5' OR () 117' O O
R = Ac, Bz
Schma 63 : Squence ractionnelle pour accder 117'. 139 140 i: N-chlorosuccinimide / CCl4 / reflux. / 4 heures. ii: NaOR / DMSO / reflux / 3 heures.
139
Ahmed, Z. ; Fischer, C. ; Spannenberg, A. ; Langer, P. ; Tetrahedron, 2006, 62, 4800-4806. Valgimigli, L. ; Brigati, G. ; Pedulli, G. F. ; Dilabio, G. A. ; Mastragostino, M. ; Arbizzani, C. ; Pratt, D. A. ; Chem. Eur. J., 2003, 9, 4997-5010. 140 Roshchupkina, G. I. ; Gatilov, Y. V. ; Rybalova, T. V. ; Reznikov, V. A. ; Eur. J. Org. Chem., 2004, 1765-1773.
112
2.2.1
-chloration de 117
Dans un premier temps, les conditions i dcrites par Roshchupkina et al. ont t testes sur la benzoylactone 117a et la 1-phnyl-butan-1,3-dione plus substitue 117c, les rsultats apparaissent dans le Tableau 16 (Schma 64).140
117 OH R3' R4' R5' NCS: O i: NCS / CCl4 / reflux / 4 heures O N Cl O R3' R4' R5' Cl () + 121 O O Succinimide O N H O
Schma 64 : -chloration de 117 par le N-chlorosuccinimide (NCS) en 121. Entres Prcurseur

117a
OH O
140
Intermdiaire chlor : rdt

121a
O O
Cl ()
65%
117c
OH O
121c
O O O Cl O
O O O
()
84%
140
Tableau 15 : Rsultats d-chloration de 1,3-dictones 117.

a b
Rendement du brut ractionnel aprs filtration et schage sous pression rduite. Rendement aprs purification par chromatographie sur colonne de silice.
La formation de la 3-chloro-benzoylactone 121a est dlicate : bien quun seul produit se forme au cours de la raction (suivi par chromatographie sur couche mince), nous avons observ sa dgradation lors de sa purification par chromatographie sur colonne de silice. Nous avons donc envisag de ne pas purifier la 3-chloro-benzoylactone. Il est important de noter que la raction se fait en conditions stoechiomtriques et que le succinimide, produit secondaire, prcipite dans le ttrachlorure de carbone : le brut ractionnel ne devrait prsenter que la molcule 121a. Cette hypothse a t vrifie par spectroscopie RMN qui indique la prsence seule du produit 121a. Nous avons donc travaill directement sur le brut ractionnel de la transformation i. En revanche, lintermdiaire chlor 121c est
113
obtenu, aprs purification, avec un bon rendement de 84%, ce qui valide la mthode d-chloration de Roshchupkina et al. pour des motifs substitus sur le cycle benznique. 2.2.2 -oxygnation de 121a
Une fois ces intermdiaires chlors obtenus, nous avons engag le brut 121a dans la raction d-oxygnation dans les conditions ii139 : lhalogne subit une substitution nuclophile par lactate de sodium ou le benzoate de sodium pour former les 2-O1-phnyl-butan-1,3-diones correspondantes. Les rsultats sont regroups dans le Tableau 17 (Schma 65).
121 O R3' R4' R5' Cl () O ii: NaOR / DMSO / Reflux / 3 heures R3' R4' OR R5' () O O 122 : R = Ac 123 : R = Bz
Schma 65 : -oxygnation de 121.
139
Entres
Prcurseurs
-O -1-phnyl-butan-1,3a dione : rendement

122
O O
121a + NaOAc
()
45%
123
O O
121a + NaOBz
O ()
Tracesb
Tableau 17 : Rsultats de la transformation ii sur 121a. a Rendement aprs purification par chromatographie sur colonne de silice. b Traces observes parmi un mlange de produits
La 2-actoxy-1-phnyl-butan-1,3-dione 122 est obtenue avec un rendement de 45%, mais la 2-benzoyloxy-1-phnyl-butan-1,3-dione 123 se forme avec dautres produits. Ces rsultats sont moins bons que ceux annoncs par Langer et al. (72%),
114
mais nous avons, par cette mthode, notre disposition une -0-butan-1-phnyl1,3-dione 117, lun des prcurseurs de sels de 4-mthylflavylium oxygns en position 3. 2.3 Formation de sels de 4-mthylflavylium oxygns en position 3 Nous avons engag la 2-actoxy-1-phnyl-butan-1,3-dione 122, ainsi que le mlange rsultant de la transformation 121a en 123, dans ltape de condensation avec le 3,5-dimthoxyphnol 116b, les rsultats apparaissent dans le Tableau 18 (Schma 66). Malheureusement, nous navons pas obtenu les sels acyls de 4mthylflavylium (R = Ac ou Bz), ni les sels de 3-hydroxy-4-mthylflavylium (R = H), issus de lhydrolyse des esters.
116b 122 ou 123 PF6O O O O i O O ou OR R = Ac ou Bz OR O O OH O 120 PF6O
+
OH
Schma 66 : Condensation en milieu acide de 122 ou 123 avec un phnol. i: AcOH / HPF6 / TA / 24 heures.
Entres
Prcurseurs
116b + 122 116b + mlange 123
Sels de 3-O -4-mthylflavylium
1 2
_a _a
Tableau 18 : Rsultats de la condensation entre 116b et 122 ou 123 a Aucune trace nest observe.
On sait que lobtention dun sel de 4-mthylflavylium dans les conditions i est caractrise par la coloration du milieu ractionnel, suivie de la formation dun prcipit. Aprs filtration et diffrents lavages au dithylther, le sel de 4mthylflavylium est rcupr sous forme de poudre colore. Dans le cas des deux transformations prsentes dans le Schma 66 nous navons observ ni coloration, ni prcipitation et nous avons obtenu aprs filtration un solide blanc. De plus la
115
caractrisation par RMN du proton ne montre aucun signal mis part celui du solvant. Pour expliquer ces rsultats, nous proposons deux hypothses. - La premire consiste en lhydratation du sel de 3-hydroxy-4-mthylflavylium en position 2, la prsence dun hydroxyle en position 3 conduit la rupture du squelette C6-C3-C6. Ce phnomne a t dcrit pour les anthocyanidines (Schma 67a).72 - La deuxime hypothse est base sur lhydrolyse de lester au niveau des 2-Obutan-1-phnyl-1,3-diones 122 et 123, conduisant la 2-hydroxy-1-phnyl-butan1,3-dione 117a. Cette espce est en quilibre avec diffrentes formes noliques, dont certaines prsentent une fonction 1,2-dictone instable (Schma 67b), la dgradation empche ainsi toute raction de condensation. Il ne reste alors, dans le milieu, que des espces sous forme non cationique, solubles dans le dithylther qui sont limins au cours des lavages. La seconde hypothse est celle qui explique le mieux labsence de coloration, prcipitation et de tout produit sur le spectre RMN.
R3' XR7 O OH R5 R4 R5 R4 R5' R6' H2O R7 O OH R6' OH R5 R4 H 2O R7 OH CHO + HO R5 R4 O R3' R5' R7 OH O O R3' R5' R6'
Anthocyanidine : R4 = H R4 = Me
R3' R4' R5'
Schma 67a : Instabilit des structures flavylium hydroxyles en position 3

117' O O OH O OH O O OH
OH
OH
O 1,2-dictone : instabilit Dgradation OH Ph O HO O
OH
Schma 67b : Instabilit de la 2-hydroxy-1-phnyl-butan-1,3-dione 117
116
2.4 Alternative pour accder des sels de 4-mthylflavylium 120 Dans le but daccder des sels de 4-mthylflavylium 120 stables, nous nous sommes intresss une autre fonction ester, plus rsistante aux conditions acides : le 3,4,5-trimthoxybenzoate de sodium qui est un driv de lacide gallique, motif frquemment rencontr chez les molcules dorigine vgtale. Dans un premier temps, lacide 3,4,5-trimthoxybenzoque 124 est prpar par permthylation de lacide gallique (Schma 68a).141 Puis le 3,4,5-trimthoxybenzoate de sodium est form in situ et ragit directement avec la 2-chloro-1-phnyl-butan-1,3-dione 121a par substitution nuclophile, pour conduire la 2-(3,4,5-trimthoxybenzoate)-1butan-phnyl-1,3-dione 125 (Schma 68b).
O OH Me2SO4 / NaOH / H2O / TA reflux / 1 heure OH OH Acide gallique 22% O O Acide 3,4,5-trimthoxybenzoque O OH
HO
Schma 68a : Permthylation de lacide gallique en acide 3,4,5-trimthoxybenzoque.

124 O OH 1) NaH / DMF / TA 2) 121a / DMF / TA / 3 heures 51% O O Cl
()
141
125 O () O O O
O O
O Na+ O
O O
O O
Schma 68b : Formation de la 2-O-1,3-dictone 125
Le produit 125 est form avec un rendement de 51%. Il est ensuite engag dans ltape de condensation avec un phnol pour accder au sel de 4-mthylflavylium correspondant, les rsultats sont regroups dans le Tableau 19.
141
Li, X. ; Li, Y. ; Xu, W. ; Bioorg. Med. Chem., 2006, 14, 1287-1293.
117
Entres
Prcurseurs
116b + 125
O O O () O OH O O O O O
Sel de 4-mthylflavylium : rendementa

120b
PF6O O O O O O O O
15%
O
HO
116c + 125
O HO OH () O OH O O O
120c
PF6O O OH O O O O
24%
Tableau 19 : Formation de sels de 3-(3,4,5-trimthoxybenzoate)- 4mthylflavylium. a Rendement aprs filtration, lavages au dithylther et schage sous pression rduite.
Nous avons obtenu deux sels de 4-mthylflavylium oxygns en position 3 avec des rendements faibles de 15% pour 120b et 24% pour 120c. Nanmoins, la fonction ester choisie rsiste en partie aux conditions acides de la raction et nous avons russi synthtiser la structure sel de 4-mthylflavylium acyl en position 3. 120c a t engag dans la raction de condensation avec un benzaldhyde pour former la pyranoanthocyanidine phnolique correspondante. Les rsultats seront indiqus dans le chapitre D qui suit. 2.5 Perspectives Maintenant que nous avons dtermin les conditions adquates pour lobtention de sels de 4-mthylflavylium oxygns en position 3, il reste dvelopper cette mthode sur les 1-phnyl-butan-1,3-diones 117b 117e pour obtenir une grande diversit de structures. Ainsi, laccs des sels de 4-mthylflavylium acyls en position 3 et substitus sur le cycle B serait valid avec la stratgie C . Le chapitre D est consacr laccs aux motifs pyranoanthocyanidiques 101, ainsi qu ltude de la dernire tape de condensation. 118
D. Accs au motif pyranoanthocyanidine

Dans les chapitres prcdents, nous nous sommes principalement intresss lobtention des motifs flavones ou flavonols et sels de 4-mthylflavylium. Toutes ces structures interviennent en tant quintermdiaires de la squence ractionnelle permettant daccder aux 3-doxy-pyranoanthocyanidines ou aux pyranoanthocyanidines de type 101 (Schma 34). Nous avons russi, grce la stratgie C , synthtiser des sels de 4-mthylflavylium qui prsentent une diversit au niveau de la substitution du cycle B, ainsi que la possibilit dtre acyls ou non en position 3 : ce sont les intermdiaires de choix pour accder aux structures 101. Pour atteindre tous les objectifs prsents dans le chapitre A (Figure 28), un dernier site doit encore tre contrl, cest la substitution du cycle D (Figure 32).
R3' PF6R7 A R = Ar, CH3, COOH, H O D R O C R3 R4' B R5'
Figure 32 : dernier objectif : contrler la substitution du cycle D
1. Formation du cycle D et substitution 1.1 Prsentation de la stratgie Pour former les motifs pyranoanthocyanidines phnoliques 126, Roehri-Stoeckel et
al. ont condens le p-dimthylaminobenzaldhyde avec des sels de 4-mthylflavylium

dans lthanol reflux. Daprs leurs rsultats et lhypothse mcanistique propose, (Schmas 31a et 31b) tout type daldhyde peut tre condens (Schma 68).106 Cette voie a donc t explore avec les sels de 4-mthylflavylium synthtiss, selon la description donne dans le chapitre prcdent, pour former les 3-doxypyranoanthocyanidines et pyranoanthocyanidines phnoliques 126 correspondantes.
119
R3' PF6R7 A OH O C R3 115 : R3 = H 120 : R3 = OAr' R4' B R5' O EtOH / reflux R7 A O D R PF6O C R3 101 : R = CH3, COOH, H 126 : R = Aryle R3' R4' B R5'
R = Ar, CH3, COOH, H
Schma 69 : Raction de condensation
1.2 Premire application de la stratgie 1.2.1 Synthse de produits condenss
Les premiers rsultats ont t dcrits dans le chapitre A, plusieurs produits condenss ont t obtenus avec des rendements satisfaisants : la condensation des sels de 4-mthylflavylium 95a, 95d, 95a et 95b ont donn les produits ouverts 98a, 98d, 98a et 98b. De mme, les sels 95b, 95c et 95c ont conduit aux drivs pyranoanthocyanes 94b, 94c et 94c. Suite ces premiers rsultats, nous avons engag les sels de 4-mthylflavylium 95b, 95d, 115a, 115b 115d et 120c, synthtiss par la stratgie C , dans ltape de condensation avec plusieurs aldhydes. Dans un premier temps, nous avons slectionn des benzaldhydes prsentant la mme ractivit que le p-dimthylaminobenzaldhyde, cest--dire portant un ou plusieurs groupements lectrodonneurs. Les rsultats sont regroups dans le Tableau 20 (Schma 70).
120
115 ou 120 PF6R7 A R5 O C R3
R3' R4' B R5'
113 O EtOH / reflux R5" R4" Rii" = NMe2, OMe, OH R3" E R7 A O D E
126 PF6O C R3
R3' R4' B R5' R7 A R5 PF6-
127 O C R3
R3' R4' B R5'
R3"
ou
pour R5 = OH
Ri' = H, OMe, F R5 = H ou OMe ou OH
pour R5 = H ou OMe R5" R4"
R5" R4"
R3"
Schma 70 : Condensation dun sel de 4-mthylflavylium avec un benzaldhyde
Entres
Sel de 4mthylflavylium
115a
PF6-
Benzaldhyde
113c
O
Produit condens: a Rendement

127a
PF6HO O
Couleur de la poudre et (en M-1.cm-1)b
HO
Pourpre
O O
O O O
113g
O
HO
127b
PF6O
90%
115a
O OH
O OH O
Violet
O
72%
95d
PF6-
113h
PF6-
127c
O O
O
O
Brun = 40200
OH
OH
81%
95b
PF6-
126a
HO O
HO
PF6-
113h
Pourpre = 10500
OH
OH
75%
121
113b
PF6-
126b
HO O
95b
O
Rouge = 21810
O
80%
126c
O
113c
O
HO
PF6-
95b
O O O
O
Bordeaux = 11700
O
79%
126d
O
115b
PF6O O
113i
PF6-
HO
HO
Vert
OH
N
N
83%
126e
O O
113b
PF6-
HO
115b
O
Rouge
77%
126f
O O O O
115c
O
113h
O
PF6HO
HO
PF6-
O O O
OH
Rouge = 39000
OH
OH
65%
126g
O O
113c
O
HO PF6
-
10
115c
O O
O O O
Rouge = 19800
52%
122
115c
O
113b
O
PF6 O
127d
O
-
O O O
11
PF6-
O O O
O
O
O
_
F
115d
PF6F O
113i
PF6-
126h
HO O
12
HO
Rouge = 12000
N
OH
78%
126i
120c
PF6-
PF6
HO
O O
13
HO
O O OH O O O O
N
113i
O O O
Violet = 55200 50%
113b
PF6-
126j
HO O O O O O O O O
14
120c
Rouge = 18100 60%
Tableau 20 : Condensation de sels de 4-mthylflavylium avec des benzaldhydes. a b Rendement aprs filtration, lavages au dithylther et schage sous pression rduite. Coefficient dabsorption molaire pour la longueur donde correspondant au maximum dabsorption, dtermine daprs la loi de Beer-Lambert, pour des concentrations de 20.10-5 mol.L-1. Molcule synthtise par 142 d Stefan Chassaing. Produit de conformation anti interprte par analyse du spectre RMN NOESY. e Conversion incomplte.
c
La
condensation
dun
benzaldhyde
portant
un
ou
plusieurs
groupes
lectrodonneurs est efficace pour la formation de produits condenss ouverts 127 (Entres 1,2,3), de 3-doxypyranoanthocyanidines phnoliques (Entres 4 10 et 12) et de pyranoanthocyanidines phnoliques (Entres 13 et 14).142 Seule la
142
Chassaing S. ; Thse de Doctorat, 2006, Strasbourg I, pp 212-221.
123
conversion de 115c ne donne pas un rsultat satisfaisant, avec un mlange de 115c et de 127d (Entre 11). - Lobtention des molcules 126i et 126j valide la stratgie pour laccs des pyranoanthocyanidines phnoliques : motifs acyls en position 3 (Entres 13 et 14). - Outre la formation de plusieurs produits condenss avec une diversit au niveau des cycles B et E, quelques molcules originales ont t synthtises. Les deux 3-doxy-pyranoanthocyanidines phnoliques 126e et 126g (Entres 8 et 10) portent les mmes substituants sur les cycles B et E. Par dlocalisation des lectrons, on remarque une symtrie de type C2 au sein de la molcule (Schma 71), ce qui est confirm par la spectromtrie RMN du proton, o les signaux reprsentent les protons quivalents sous forme de cinq singulets pour la molcule 126g.
O PF6HO O O O Msomrie O PF6- O O HO O O O O HO PF6O O O O
O O
O O
O O
Symtrie C2
Schma 71 : Illustration dune symtrie C2 au sein de 126g
La molcule 126h est une 3-doxy-pyranoanthocyanidine phnolique substitue par un groupement lectroattracteur halogn. A Part latome de brome chez les produits naturels marins, ce type de groupement nest pas frquemment rencontr chez les molcules naturelles. Cependant, les composs organofluors sont, quant eux, connus pour prsenter certaines activits biologiques143 : ils peuvent jouer un rle
143
Banks, R. E. ; Smart, B. E. ; Tatlow, J. C. ; Organofluorine Chemistry : Principle and Commercial Applications ; Plenum Press : New-York, 1994. Banks, R. E. ; Organofluorine Chemicals and Their Industrial Applications ; Ellis Horwood Ltd : Chichester, 1979.
124
dans la synthse dinhibiteurs ou de substrats analogues de certaines enzymes.144 De plus, latome de fluor, en raison de ses proprits chimiques et physiques (petite taille, lectrongativit), est souvent utilis pour remplacer un atome dhydrogne et modifier les proprits de la molcule et donc sa ractivit.145 1.2.2 Proprits physico-chimiques des produits condenss
Pouvoir colorant
Les produits condenss obtenus lors de cette tude sont des analogues de pigments du vin rouge, qui, en fonction des substituants de chaque molcule, vont avoir des proprits physico-chimiques diffrentes. Dans le Tableau 20 et titre dexemple, la couleur ltat solide de chaque produit est indique ainsi que, pour la plupart dentre-eux, le coefficient dabsorption molaire . Cette valeur est calcule grce la loi de Beer-Lambert, qui donne la perte dintensit dun faisceau lumineux monochromatique traversant une paisseur finie de substance (Figure 33).
A = .c.l
Figure 33 : Loi de Beer-Lambert A = Absorbance. = Coefficient dabsorption molaire (M-1.cm-1). c = Concentration en mol.L-1 . l= Trajet optique (cm).
Le coefficient dabsorption molaire correspond labsorbance pour une concentration molaire dfinie et un trajet optique de 1 cm : il permet la comparaison du pouvoir absorbant , longueur donde donne, des molcules, ici des colorants. Les coefficients dabsorption molaire mesurs pour les sels de 4mthylflavylium sont compris entre 20000 et 30000 M-1.cm-1. En ce qui concerne les produits condenss synthtiss ci-dessus (Tableau 20), leurs coefficients se situent
144
Meyer, O. ; Grosdemange-Billiard, C. ; Tritsch, D. ; Rohmer, M. ; Tet. Lett., 2007, 48, 711-714. Schirlin, D. ; Baltzer, S. ; Altenburger, J. M. ; Tarnus, C. ; Remy, J. M. ; Tetrahedron, 1996, 52(1), 305-318. 145 Seebach, D. ; Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1990, 29, 1320-1367. Wang, Y. ; Burton, D. J. ; Tet. Lett., 2006, 47, 9279-9281.
125
entre 10500 et 55200 M-1.cm-1. Les groupements htroatomiques sont appels auxochromes. Ce sont des groupes saturs comportant des doublets libres qui, quand ils sont relis un chromophore, modifient la fois la longueur donde et lintensit dabsorption. Cest pourquoi, selon la substitution des produits 101, le maximum de valeur des coefficients dabsorption molaire se situent dans le domaine 370 700 nm. Ces valeurs sont trs rvlatrices du pouvoir colorant des molcules 126 qui sont ainsi des pigments vraiment intressants. Stabilit des pigments 101 et 126
Depuis les annes quatre-vingt, la chimie des anthocyanes sest normment dveloppe. Les raisons en sont nombreuses, et lune dentre-elles est leur tonnant pouvoir de coloration. Les drivs du squelette flavylium ont donc t tudis en vue dune utilisation industrielle, par exemple en tant que colorants alimentaires : les anthocyanes sont consommes par ltre humain, quotidiennement dans son alimentation, sans tre nfastes pour sa sant, bien au contraire. Elles sont solubles en milieu aqueux, ce qui facilite leur incorporation dans les produits alimentaires.146 Mais, elles prsentent galement des inconvnients, comme leur instabilit chimique en solution aqueuse pH suprieur 3 (Schma 20)67,68 et leur dcoloration par action du dioxyde de soufre.147 Ce ractif est souvent utilis en tant que conservateur dans un grand nombre de produits alimentaires, notamment les jus de fruits et le vin.148 Des travaux raliss dans les annes soixante, par Jurd et Timberlake et al., montrent que le dioxyde de soufre, sous forme dhydrognosulfite de sodium (NaHSO3) sadditionne en position 2 et/ou 4 dun sel de flavylium,153,149 le produit form 128 est incolore (Schma 72).150 Cette dcoloration se fait dautant mieux pH 3, mais est rversible par acidification.
146 147
Mazza, G. ; Brouillard, R. ; J. Agric. Food. Chem., 1987, 35, 422-426. Timberlake, C. F. ; Bridle, P. ; J. Sci. Food Agric., 1967, 18, 479-485. 148 Bakker, J. ; Timberlake, C. F. ; J. Agric. Food. Chem., 1997, 45, 35-43. 149 Jurd, L. ; J. Food. Sci., 1964, 29, 16-19. 150 Brouillard, R. ; El Hage Chahine, J. M. ; J. Am. Chem. Soc., 1980, 102, 5375-5378.
126
OH PF6HO O S OR OH O O OH Na+ NaHSO3 HO pH 1 OR PF6

-
128 Na+ O SO3H
OH OH Addition nuclophile en position 2
incolore
Schma 72 : Mcanisme de dcoloration dun sel de flavylium par lhydrognosulfite de 150 sodium.
Lorsque le sel de flavylium est substitu en position 4 par un groupement alkyle ou aryle, il est plus stable : les vitisines A et B sont connues pour rsister un milieu contenant des sulfites.148 Dans le cas des produits condenss, synthtiss dans cette tude, certains dentre eux ont t mis dans une solution de bisulfite de sodium et ont rvl une remarquable rsistance la dcoloration (Figure 34) : ce sont les pigments 94c et 94c, les produits condenss 98d et 98b et les sels de 4mthylflavylium 95b et 95d ; contrairement au sel de flavylium 129 qui se dcolore instantanment.
129
PF6HO O HO
95b
PF6O
O
95d
PF6O
O
98d
PF6O
98b
PF6O O O
O O
OH
OH
94c
PF6O O
94c
PF6O O O
O O
Solution hydroalcoolique, (H2O / EtOH : 78/12), pH 3,0 2 g. L-1 de NaHSO3
Figure 34 : Molcules en solution dhydrognosulfite de sodium
127
1.3
Seconde application de la stratgie 1.3.1 Tentative daccs de nouveaux pigments
Maintenant que nous avons obtenu des 3-doxy-pyranoanthocyanidines et des pyranoanthocyanidines phnoliques 126 avec des cycles E substitus par un ou plusieurs groupements lectrodonneurs, nous souhaitons accder de nouveaux motifs au laboratoire. Pour cela, nous avons engag des sels de 4-mthylflavylium synthtiss, dans des ractions de condensation avec dautres aldhydes. Daprs le mcanisme de raction propos par Roehri-Stoeckel et al. (Schmas 31a et 31b), il nous est possible de condenser tout type daldhyde : lhypothse mcanistique retenue jusqu maintenant tant fonde sur la nuclophilie de la base conjugue du sel de 4-mthylflavylium et llectrophilie de laldhyde : on peut considrer que plus ce dernier sera lectrophile, plus la raction sera efficace. Dans un premier temps, nous avons test des benzaldhydes portant un groupement lectroattracteur et le benzaldhyde lui-mme, ainsi que la condensation de 95b avec des aldhydes non aromatiques comme lactaldhyde ou lacide glyoxylique qui permettraient de donner des substitutions du cycle D trouves chez les molcules naturelles (Vitisine A et Vitisine B) (Schma 24), les rsultats apparaissent dans le Tableau 21 (Schma 73).
128
95b PF6 HO
-
101 ou 126 O PF6HO O
R EtOH / reflux
OH R = CH3, COOH, NO2

,
O R
Schma 73 : Autres expriences de condensation
Entres
Aldhyde
O
Produit condens : rdt

PF6HO O
_a
PF6-
HO
2
NO2
NO2
PF6-
_a
HO
Actaldhyde
O
HO
CH3
_b
PF6O
HOOC
O COOH
Acide glyoxylique
_a
Tableau 21 : Rsultats de la condensation de 95b avec quatre aldhydes. a b Aucune conversion mme aprs 92 heures dagitation reflux. Conversion faible mme aprs 92 heures dagitation reflux.
A notre grand tonnement, aucune des transformations tentes na t fructueuse : mise part une faible conversion observe de 95b avec lactaldhyde (Entre 3), les ractions avec le benzaldhyde, le 4-nitrobenzaldhyde et lacide glyoxylique (hydrat) ont chou. Ces rsultats sont surprenants puisque tous ces aldhydes sont plus lectrophiles que les benzaldhydes substitus par un ou plusieurs groupes lectrodonneurs. Or, lhypothse mcanistique propose par Roehri-Stoeckel et al. est fonde sur un principe lectronique daddition nuclophile.106
129
On peut alors sinterroger sur le mcanisme rel de la condensation entre un sel de 4-mthylflavylium et un aldhyde.
1.3.2 Rflexion sur le mcanisme de condensation
Observations
Ce qui semble poser problme lors des transformations prsentes en Schma 73, cest la nature de laldhyde engag dans la condensation. Entre les benzaldhydes 130 (un ou plusieurs groupements lectrodonneurs) et les autres aldhydes (131 pour un benzaldhyde avec un groupement lectroattracteur), la diffrence rside dans le caractre lectrophile du carbonyle, mais aussi dans leurs moments dipolaires permanents (Figure 35) : ceux de 130 et de 115 sont compatibles pour favoriser la raction de condensation, ce qui nest pas le cas dun benzaldhyde de type 131. Lactaldhyde et lacide glyoxylique ont des moments dipolaires qui sont galement en concordance avec celui de 115 pour former la 3-doxypyranoanthocyanidine correspondante, par contre ils ne sont pas aromatiques.
130 O 131 O O R' D A D = Groupement lectrodonneur A = Groupement lectroattracteur
!+
115 PF6RO O
OR R' = CH3 ou COOH Aldhydes non aromatiques R = H ou Me
Figure 35 : Illustrations des moments dipolaires permanents
Un sel de 4-mthylflavylium 115 est un chromophore plan, un benzaldhyde est une molcule aromatique, ces deux espces rappellent les protagonistes de la copigmentation, que sont les anthocyanes et les acides cinnamiques.66,69 Il est donc possible que ces deux structures sassocient par -stacking et forment un complexe stable (Schma 74).
130
Hypothse
Daprs les rsultats et observations ci-dessus, deux critres concernant laldhyde paraissent ncessaires la condensation: - Compatibilit optimale des moments dipolaires des deux espces. - Prsence dun cycle aromatique riche en lectrons (le substrat optimal est un benzaldhyde avec au moins un groupement lectrodonneur en para). A partir de ces critres, nous pouvons envisager un mcanisme dirig par diffrentes interactions non-covalentes, en supposant que le benzaldhyde 130 joue le rle de copigment et interagit avec 115, par des interactions de type -stacking. Lassociation des deux espces se fait alors selon lorientation des moments dipolaires (Schma 74).
115 PF6 RO
-
130 D EtOH
PF6RO O
OR
OR O Rle de copigment
Formation d'un complexe par copigmentation intermolculaire
D = Groupement lectrodonneur R = H ou Me
Schma 74 : Illustration dune association envisageable entre 115 et 130
Afin de mesurer la valeur de cette hypothse, nous avons dcid dtudier le dit mcanisme par un screening dexpriences et aussi des calculs assists par ordinateur. 2. Etude sur le mcanisme de condensation. 2.1 Screening de molcules et de solvants Daprs les rsultats obtenus dans ce chapitre et prsents dans les Tableaux 20 et 21, il apparat clairement que la transformation du sel de 4-mthylflavylium en 3doxy-pyranoanthocyane est dpendante de laldhyde : soit la conversion est complte, soit aucune conversion nest observe. Dans aucun cas, la raction ne
131
sarrte lintermdiaire 127. Ainsi, il semble que ltape dterminante soit la formation de la liaison carbone - carbone entre 115 et le carbonyle de laldhyde, conduisant directement 127. Cest pourquoi, dans un premier temps, nous avons ralis une srie de ractions, dans plusieurs solvants, entre le sel de 4mthylflavylium 95d et diffrents benzaldhydes pour obtenir le produit condens ouvert 127 correspondant. Les benzaldhydes modles sont lanisaldhyde 132 et le nitrobenzaldhyde 133. Les expriences ont t testes sur les diffrents isomres
ortho, mta et para, pour tenter de dterminer une relation structure-ractivit des
benzaldhydes. Notre proposition de mcanisme est fonde sur une interaction de type -stacking entre 115 et 130, avec minimisation des interactions dipolaires. Afin de vrifier cette hypothse, nous avons test des solvants de nature diffrente : lthanol tant le solvant modle, protique polaire, nous avons choisi un solvant aprotique polaire (lactonitrile) et des solvants aprotiques, moins polaires (le ttrahydrofurane et le dichloromthane). De plus, principalement pour vrifier la formation du complexe par copigmentation intermolculaire, nous avons test un solvant aromatique aprotique apolaire (le benzne) et un solvant aromatique aprotique polaire (le chlorobenzne). Nous considrons que si la conversion se fait dans ces solvants aromatiques, il est fort possible que le complexe de copigmentation ne soit pas lorigine de la transformation : ces solvants pourraient sintercaler entre 115 et 130, et dfavoriser toute association de substrat (Figure 36).
PF6RO O D peu probable RO PF6O D
OR
OR
Figure 36 : Illustration dune association entre un solvant aromatique et 115 ou 130
Les rsultats du screening de solvants et de benzaldhydes sur le sel 95d apparaissent dans le Tableau 22 (Schma 75)
132
95d O PF6
-
O Solvant + R R = OMe ou NMe2 TA ou reflux O
127 PF6O
Schma 75 : Screening quant la condensation de 95d
Benzaldhyde
132p
O
Conditions
EtOH A a Complet/48h Complet/2h c b a
CH3CN B c Complet/30h c b a
THF C c c
CH2Cl2 D c c
Benzne E c Complet/80h c b a
TA Reflux
Chlorobenzne F c Complet/3h c a a
132o
O
TA Reflux TA Reflux
Faible c
Faible a c
Faible /
d
Complet/4h c
132m
Complet/28h c b
Complet/48h c c
c c c b
Complet/12h c
133p
TA Reflux
Faible c c c c
Faible c
Complet/6h _c
a
NO2
O
133o
NO2
TA Reflux TA Reflux
Complet/70h /
d
Incompletb _c
133m
c a
Complet/24h
Complet/24ha
NO2
Tableau 22 : Screening de solvants pour la transformation sel de 4-mthylflavylium en produit condens (la conversion est dtermine par spectrophotomtrie UV-Visible). a b Conversion complte au bout du temps indiqu. Conversion incomplte ou faible au bout de 78 heures . c d Aucune conversion na t observe. Lexprience na pas t ralise
133
2.1.1
Observations
Le p-anisaldhyde 132p dans lthanol sert de substrat modle cette tude, puisquil est caractristique dun benzaldhyde avec un groupement lectrodonneur en para, dans le solvant usuel de la condensation. A/ A reflux, dans lthanol, 95d est compltement condens avec 132p en 2 heures (Entre A1) ; en revanche aucun nitrobenzaldhyde 133 nest converti (Entres A4, A5, A6). Selon la position du mthoxyle sur le benzaldhyde, on observe une diffrence de comportement : le m-anisaldhyde 132m nest compltement transform quaprs 28 heures de raction (Entre A3) et lo-anisaldhyde 132o ne ragit quasiment pas (Entre A2). La position du substituant lectrodonneur (mthoxyle) influence la ractivit du benzaldhyde, on peut dterminer un classement de ractivit de la position (du plus au moins ractif) : para > mta > ortho. Il est possible quun substituant en position
ortho gne dun point de vue strique la formation de la liaison carbone-carbone, on

peut aussi envisager que cette position modifie trop la polarit du substrat et que 132o et 95d ne soient pas compatibles au niveau des moments dipolaires. B/ Dans lactonitrile, solvant aprotique polaire (constante dilectrique de 37,5), on observe peu prs les mmes transformations que dans lthanol. Mais aucune ne se fait temprature ambiante et les temps de raction chaud sont plus longs. Lutilisation dun solvant protique semble favoriser la raction de condensation, mais ne parat pas indispensable. C/ et D/ Le ttrahydrofurane et le dichloromthane sont galement des solvants aprotiques mais dune polarit moindre (constantes dilectriques respectivement de 7,6 et 8,9). Seule la condensation avec 132p a t ralise et na conduit aucune transformation (Entres C1 et D1). Un solvant trs polaire semble tre indispensable la raction, ce qui conforte lhypothse dune intervention dinteractions dipolaires.
134
E/ Dans le benzne, solvant aprotique, apolaire et aromatique, les rsultats sont surprenants : on observe effectivement une conversion complte aprs plusieurs jours pour 132p (Entre E1), le benzne dfavorisant les interactions de type stacking entre les deux ractifs. Cela expliquerait galement les rsultats correspondant aux condensations de 132m et 132o (Entres E2 et E3). Nous observons une transformation complte, reflux, de 95d avec 133m et 133o, qui plus est, avec des temps de raction infrieurs 70 heures (Entres E5 et E6). Il est important de noter que la raction avec le p-nitrobenzaldhyde na pas march : encore une fois le rle de la position du substituant peut tre consquent.
Quelles sont les consquences de la prsence dun solvant aromatique sur le mcanisme ?
F/ Enfin, nous avons choisi le chlorobenzne (constante dilectrique de 5,6), qui est plus polaire que le benzne, afin dintgrer ce paramtre et mieux comprendre ce qui sy produit : toutes les conversions sont compltes, reflux, avec des temps de raction infrieurs 24 heures. Seul 133o na pas t totalement transform (Entre F5). La temprature dbullition du chlorobenzne (Teb = 132C) est plus leve que celle du benzne (Teb = 80C), cette lvation de temprature devrait acclrer la raction. De plus, la polarit du solvant peut jouer un rle important dans le mcanisme de condensation. Un solvant aromatique polaire, avec une haute temprature dbullition, tel que le chlorobenzne, semble tre le solvant optimal pour ltape de condensation. 2.1.2 Extension
Puisque le chlorobenzne permet de conduire de manire efficace et rapide aux produits condenss 127, nous avons test ce solvant pour former des 3-doxypyranoanthocyanes 101. Nous avons donc ralis la raction avec le sel de 4mthylflavylium 95d et les aldhydes 132p (Schma 76a), 133p, le 4fluorobenzaldhyde 113d et lactaldhyde (Schma 76b).
135
95b PF6HO O +
132p O
Cl HO
PF6O
O OH O
Schma 76a : Condensation de 95b et 132p dans le chlorobenzne

Cl 95b PF6HO O + R O OH R = CH3, NO2 , F R O PF6HO O
Schma 76b : Condensation de 95b avec diffrents aldhydes dans le chlorobenzne
Bien que le chlorobenzne soit un solvant efficace pour la formation de produits condenss 127 avec des benzaldhydes de type 130 et 131, il ne lest pas pour conduire aux 3-doxy-pyranoanthocyanidines 101 et 3-doxypyranoanthocyanidines phnoliques 126. 2.1.3 Bilan Bilan et hypothse
Daprs les expriences, le processus de condensation semble tre rgi par lintervention dinteractions dipolaires. Ltape dterminante correspond la formation de la liaison C-C entre le sel de 4-mthylflavylium et le carbonyle du benzaldhyde, mais ce processus ne semble pas provenir dune ractivit de type addition nuclophile. De plus, un solvant benznique favorise la raction de condensation, permettant la formation de produits 127 avec des benzaldhydes
136
131. On peut alors sinterroger quant au phnomne de complexation par -stacking
entre les deux espces ? Quelles possibilits sont envisageables ?

La chimie par transfert dlectrons
Des travaux mens par Ferreira da Silva et al., publis en 2004 et 2005, ont attir notre attention,151 ils ont russi mettre en vidence que le complexe dun sel de 4mthylflavylium avec un acide benzoque, issu dune copigmentation intermolculaire, est galement stabilis par transfert dlectrons (Schma 77). Or, le sel de 4-mthylflavylium est un bon accepteur dlectrons et un benzaldhyde de type 130 un trs bon donneur, lexcitation lectronique dun tel complexe peut induire un transfert dlectron trs rapide du benzaldhyde vers ltat excit du sel 115.
Exemple de sel de flavylium AH+ : le 3-O-glucoside de plargonidine OH HO O OGL OH Exemple de copigment : l'acide protocatchique O OH
Partie glucidique
HO OH
Copigmentation intermolculaire
Schma 77 : Illustration de lassociation AH+ avec un acide benzoque.
151
La chimie des complexes molculaires a t bouscule en 1949 par la dcouverte dun complexe diiode-benzne par Benesi et Hildebrand.152 Dautres tudes ont suivi, bases
151
Ferreira da Silva, P. ; Lima, J. C. ; Freitas, A. A. ; Shimizu, K. ; Maanita A. L. ; Quina, F. H. ; J. Phys. Chem. A , 2005, 109, 7329-7338. Ferreira da Silva, P. ; Lima, J. C. ; Quina, F. H. ; Maanita, A. L. ; J. Phys. Chem. A , 2004, 108, 10133-10140. 152 Benesi, H. A. ; Hildebrand, J. H. ; J. Am. Chem. Soc., 1949, 71, 2703-2707. Benesi, H. A. ; Hildebrand, J. H. ; J. Am. Chem. Soc., 1948, 70, 2832-2833.
137
sur lidentification dun grand nombre de complexes molculaires153 et sur le phnomne de transfert de charge.154 Les complexes, dans lesquels interagissent lectroniquement un donneur et un accepteur dlectrons, sont entre autres ceux avec une molcule halogne (accepteur) ou encore les systmes .155 - Par exemple la raction de substitution nuclophile aromatique SRN1 a t largement tudie, par Bunnett, Ashby, et Savant qui ont dmontr un mcanisme par transfert monolectronique (Schma 78).156,157,158
ArX + eArXAr + Nu+ ArX
ArXAr + XArNuArNu + ArXArNu + X-
ArNu-
ArX + Nu-
Schma 78 : Illustration du transfert monolectronique dans la substitution nuclophile 158 aromatique.
Dautres ractions, comme la rduction de ctones par des nolates de lithium, a galement fait lobjet dune tude mcanistique. La voie privilgie tait un mcanisme via des procds lectroniques, de type addition nuclophile, mais Ashby
et al. ont dmontr un processus par transfert monolectronique.159 De mme, pour

laddition dun ractif de Grignard sur les ctones, o le mcanisme via un transfert monolectronique a t mis pour la premire fois en vidence par Ashby et al. en 1980 (Schma 79).160
153 154
Mulliken, R. S ; Person, W. B. ; Annu. Rev. Phys. Chem., 1962, 13, 107-126. Mulliken, R. S. ; J. Am. Chem. Soc., 1950, 72, 600-608. 155 Hunter, C. A. ; Sanders, J. K. M. ; J. Am. Chem. Soc., 1990, 112, 5525-5534. 156 Bunnett, J. F. ; Acc. Chem. Res., 1978, 11, 413-420. 157 Ashby, E. C. ; Acc. Chem. Res., 1988, 21, 414-421. 158 Savant, J. M. ; Acc. Chem. Res., 1993, 26, 455-461. Savant, J. M. ; Acc. Chem. Res., 1980, 13, 323-329. 159 Ashby, E. C. ; Argyropoulos, J. N. ; Tet. Lett., 1986, 27, 465-468. Ashby, E. C. ; Argyropoulos, J. N. ; J. Org. Chem., 1986, 51, 472-476. 160 Ashby, E. C. ; Bowers, J. ; Depriest, R. ; Tet. Lett., 1980, 21, 3541-3542.
138
O RMgX
Ph Ph O Ph R Mg X
Ph O Ph R SET Mg X
Ph
OH R Produit d'addition 1,2 Ph Ph
Ph OMgX + R Ph
HO
OH
Produit d'addition 1,6
Pinacol
Schma 79 : Mcanisme daddition 1,2 dun ractif de Grignard sur la benzophnone. SET = single electron transfer ou transfert monolectronique
160
- Les complexes molculaires forms par des molcules aromatiques rsultent dune forte interaction entre les lectrons des molcules donneur et accepteur (A + D [AD]). La gomtrie, rgie par des effets lectrostatiques, correspond souvent un empilement vertical de deux structures planes, qui permet une distribution des charges au sein du complexe.155,161 Parmi les exemples de transfert de charge pour les complexes , on peut citer les travaux de Fukuzumi et Kochi, qui ont reconsidr le mcanisme de la raction de Diels-Alder via un electron donor-acceptor complex .162 Plus rcemment, Talukdar et al. ont communiqu sur une application de complexes de transfert de charge, de couleur mauve, obtenus par association entre le dialkoxynaphtalne (DAN) (donneur dlectrons) et le naphthalnediimide (NDI) (accepteur dlectrons). Les interactions entre lespce aromatique donneuse et lespce aromatique attractrice permettent la construction de tunnels ions synthtiques pouvant souvrir par stimulation chimique. Ainsi, le complexe entre DAN
161 162
Zimmerman, S. C. ; VanZyl, C. M. ; Hamilton, G. S. ; J. Am. Chem. Soc., 1989, 111, 1373-1381. Fukuzumi, S. ; Kochi, J. K. ; Tetrahedron, 1982, 38, 1035-1049.
139
et NDI aurait un rle de porte qui souvrirait ou se fermerait selon les consquences dun transfert dlectrons.163 Dans le cas de notre tude, nous pouvons envisager, daprs les rsultats de Ferreira da Silva et al. quun sel de 4-mthylflavylium associ un benzaldhyde forment un nouvel exemple de complexe de transfert de charge. Cette hypothse expliquerait la ractivit des benzaldhydes dans lthanol: il faut une molcule forte en densit lectronique et laction favorable dun solvant aromatique comme le benzne qui favorise les espces radicalaires.151 Dans le but de confirmer en partie lhypothse de complexe par transfert de charge, nous avons ralis une srie de calculs de mcanique molculaire et thorique sur les molcules susceptibles dintervenir dans le mcanisme. 2.2 Ractivit des espces par calculs assists par informatique Ces calculs ont t raliss par Aurlien Alix (Doctorant du Laboratoire de Synthse et Ractivit Organique, Strasbourg I) avec le logiciel Hyperchem Release 7.5. Les rsultats apparaissent dans le Tableau 23. Dans un premier temps, la gomtrie des structures analyses a t optimise par des calculs de mcanique molculaire MM+, puis dautres calculs de type AM1 et ab initio ont t effectus. Remarque : Pour une question dhomognit, seules les valeurs issues des calculs raliss avec un champ AM1 sont compares. Le squelette sel de 4-mthylflavylium (95b et 95d) a t analys sous trois formes diffrentes : la premire est cationique (Entres 7 et 10), la seconde correspond la forme dprotone (Entre 8) et la dernire est une espce cationique radicalaire (Entres 9 et 11). De ces trois formes, les structures cationiques radicalaires de 95b et 95d sont les plus hautes en nergie (Entres 9 et 11). Dans
163
Talukdar, P. ; Bollot, G. ; Mareda, J. ; Sakai, N. ; Matile, S. ; J. Am. Chem. Soc., 2005, 127, 65286529 .
140
chaque cas, 95b et 95d sont susceptibles de ragir avec les benzaldhydes 132 qui ont des LUMO de plus hautes nergies que celles de 133 (Entres 1, 2 et 3). Par ailleurs, daprs les nergies HOMO des formes cationiques et/ou dprotones de 95b ou 95d et les nergies LUMO des benzaldhydes 133, la raction est favorable entre les espces, ce qui est en contradiction avec nos rsultats. En revanche, la forme cationique radicalaire est la plus favorable dun point de vue nergtique. En ce qui concerne les benzaldhydes 133, les diffrences dnergies ne permettent pas de raction avec la forme cationique radicalaire puisque les nergies des LUMO sont plus basses que les nergies SOMO (Entres 4, 5 et 6). Cette constatation est tout fait en accord avec les rsultats obtenus ci-dessus. Pour dterminer le rle dun solvant aromatique dans le mcanisme de condensation, deux substrats ont t analyss dans une pseudo-cage de benzne (Entres 2 et 5). On observe une volution des nergies LUMO qui sont plus leves : cest le cas pour 133o qui est alors en mesure de ragir avec la forme radicalaire (Entres 2 et 5), encore une fois, ceci est en accord avec nos rsultats.
141
Dans cage de PhH (homo) Dans cage de PhH (lumo)
Entres
Substrat
132p
O
E(HOMO)
E(LUMO)a
-6,82 eV -8,73 eV
5,85 eV 2,64 eV
/
b a
132o
O
-8,78 eV -8,89 eV
2,24 eV 2,17 eV
-7,13 eV -9,17eV /
5,75 eV 2,52 eV /
132m
133p
O
-7,46 eV
3,98 eV 0,75 eV
4
NO2
O
/
b a
-10,32 eV
133o
NO2
5 6
O
-10,64 eV -10,40 eV
0,59 eV 0,73 eV
-7,62 eV
4,44 eV 1,10 eV /
133m
-10,60 eV /
NO2
95d
PF6O
-10,49 eV
-1,18 eV
-5,47eV
5,62 eV
O PF6-
SOMO
2,33 eV
a
95b
10
PF6HO O
-12,27 eV
-3,66 eV
OH
PF6HO O
SOMO
2,19 eV
a
11
OH
Tableau 23 : Calculs thoriques a b Calculs en champ AM1. Calculs en champ medium 6-31G*, mthode ab initio .
142
Daprs ces calculs thoriques, la forme cationique radicalaire est la plus compatible avec tous les rsultats obtenus, quel que soit le solvant. 2.3 Nouvelle hypothse Daprs les rsultats, nous pouvons supposer quil y ait formation dun complexe (donneur accepteur) par -stacking entre 115 (pauvre en densit lectronique) avec un benzaldhyde riche en lectrons, de type 130. En raison de cette association, les transferts dlectrons sont exacerbs et nous pouvons envisager un mcanisme bas sur le transfert de charge. Une proposition mcanistique dans lthanol, fonde sur des espces ioniques radicalaires et inspire du mcanisme utilisant la dichlorodicyanoquinone DDQ pour la dprotection dun benzyle, est prsente dans le Schma 80.
PF6RO O D Formation d'un complexe par copigmentation intermolculaire : Activation des ractifs
!+
132 O
OR
!"
O O O O
PF6-
O PF6-
O PF6-
O PF6-
115 RO O
PF6Ph RO O Ph RO O Ph + H
OR
OR H
OR
O PF6-
O + HPF6
Schma 80a : Proposition dun mcanisme par transfert dlectrons dans lthanol
PF6RO O Ph + OR OR H OH H O RO PF6O Ph -H2O RO PF6O Ph
H+
OR
Schma 80b : Formation du produit condens par addition nuclophile
143
Lhypothse mcanistique fait intervenir une initiation par transfert dlectrons conduisant aux deux espces ractives du mcanisme propos par Roehri-Stoeckel et
al. (Schma 31a).106

Dautres expriences sont raliser pour essayer de confirmer ce mcanisme et daccder aux motifs pyranoanthocyanidiques pour tout type daldhyde. 3. Bilan Plusieurs pigments ont t obtenus par condensation dun sel de 4-mthylflavylium 115 ou 120 avec des benzaldhydes. Nous sommes capables de former des produits condenss de type 127 avec des cycles aromatiques substitus par un ou plusieurs groupements lectrodonneurs, mais aussi par un groupement lectroattracteur si la condensation est ralise dans le chlorobenzne (Figure 37).
PF6RO O R = H ou Me R5 = H ou OMe R4" = OH, OMe, NMe2, NO2 R2", R3", R5" = H, OMe, NO2
R5 R2" R5" R4" R3"
Figure 37 : Produits condenss 127 synthtiss
En ce qui concerne la formation des produits condenss ferms 126, nous avons russi les prparer par condensation dans lthanol avec des benzaldhydes portant un ou plusieurs groupements lectrodonneurs (Figure 38). Nous avons synthtis, grce la stratgie C, un grand nombre de 3-doxy-
pyranoanthocyanidines phnoliques dont les cycles B et E prsentent diffrentes substitutions.
144
R5' PF6RO O R4' R3' R = H ou Me R3", R5" = H, OMe R4" = OH, OMe, NMe2 R3',R4',R5'= H, OMe, F
R5" R4"
R3"
Figure 38 : 3-doxy-pyranoanthocyanidines phnoliques 126 synthtises
Enfin, nous avons synthtis avec succs deux pyranoanthocyanidines phnoliques 126i et 126j (Figure 39). Lobtention de ces deux molcules est trs encourageante puisque la position 3 est acyle. Il reste encore synthtiser ces molcules partir de 3-O- 1-butan-phnyl-1,3-diones dont les cycles B sont substitus selon la stratgie C .
126i PF6HO O O O O O O O N O HO 126j PF6O O O O O O O
Figure 39 : Deux pyranoanthocyanidines phnoliques
Par contre, nous ne sommes pas en mesure de former des pyranoanthocyanidines dont le cycle D est substitu par un mthyle, une fonction acide carboxylique ou encore un benzaldhyde substitu par un groupement lectroattracteur. Ltude ralise sur le mcanisme de condensation nous a permis de proposer une hypothse mcanistique base sur le transfert dlectrons. Dautres essais permettront peut-tre daccder tout type de substitution du cycle D.
145
146
E. Conclusion
1. Contexte et objectifs Linstabilit des drivs anthocyaniques en solution aqueuse est un rel inconvnient pour lutilisation de ces molcules en tant que colorants dans lindustrie. Lorsque nous observons les moyens entrepris par la nature pour conserver la couleur des fruits et des fleurs, nous pouvons citer plusieurs phnomnes trs ingnieux qui stabilisent et/ou intensifient la pigmentation au sein de la plante. Outre les processus de stabilisation par copigmentation, celui qui intervient au niveau de la nature de la couleur du vin rouge a attir notre attention : au cours du vieillissement du vin rouge, les anthocyanes natives du raisin voluent vers des pigments plus complexes. Nous nous sommes particulirement intresss aux pyranoanthocyanes 80 qui prsentent un cycle D supplmentaire six chanons : il joue le rle de groupe protecteur face aux additions deau en position 2 et 4 du squelette flavylium, leffet msomre stabilisant ces deux sites sensibles. Dans le but daccder des pigments plus stables que les anthocyanes, nous avons dvelopp une mthode de synthse de drivs pyranoanthocyanidiques. Notre principale stratgie est base sur trois cibles du squelette pyranoanthocyanidine 101 : la nature de substitution des cycles B et D, ainsi que la position 3 oxygne (Schma 81). Cest pourquoi notre synthse a t organise autour de la construction de lintermdiaire sel de 4-mthylflavylium 115 avec une 1-phnylbutan-1,3-dione 117 ou une 2-O-1-phnyl-butan-1,3-dione 117. 2. Bilan Nous avons synthtis plusieurs drivs pyranoanthocyanidiques phnoliques 126 par les stratgies A et C . Deux des trois objectifs ont t atteints avec succs. Ainsi, nous sommes capables de contrler la nature des substitutions du cycle B et loxygnation de la position 3.
147
126 PF6R7 A O D O C R3
R3' R4' B R5'
E R3" R4" Condensation dans l'thanol 115 : R3 = H 120 : R3 = OAr PF6R7 A Stratgie A R = Me OH O C R3
E
R5" O R3" = R5" = H, OMe R4" = OH, OMe, NMe2
R3" R4" R3' R4' B R5'
R5"
117 O O R3' Stratgie C R = acyle R4' R5' R7
116 OH
+
OH
38 R7 O OH OH O
R3' R4' R5'
R7 = OH, OMe R4' = H,OMe, F R3' = R5' = H, OMe O
125 O O R3'
(+/-)
O R5'
R4'
O O
Schma 81 : Accs des drivs pyranoanthocyanidiques phnoliques 126 : Bilan
Le contrle de la nature des substitutions du cycle D reste un objectif optimiser : nous avons russi synthtiser des pyranoanthocyanidines phnoliques 126 substitues sur le cycle E par des groupements lectrodonneurs. Par contre, ce jour, nous ne sommes pas en mesure daccder un cycle E portant des groupes lectroattracteurs, ni des pyranoanthocyanidines directement substitues sur le cycle D par un mthyle, un hydrogne ou encore une fonction acide carboxylique, qui sont des motifs dorigine vgtale. Une tude du mcanisme de ltape de condensation entre 115 et un benzaldhyde a t ralise. Grce ces travaux, une hypothse mcanistique dans lthanol a pu
148
tre propose. De plus, dautres pigments ont t obtenus dans le chlorobenzne, tels que les produits condenss de type 127. 3. Perspectives Maintenant que nous avons notre disposition plusieurs pigments 126 et 127, le prochain objectif est danalyser la stabilit de ces molcules en milieu aqueux et/ou en prsence de dioxyde de soufre. Des expriences physico-chimiques comparatives de stabilit entre les molcules synthtises et les sels de flavylium correspondants vont tre menes au laboratoire. On peut notamment penser une tude pH acide sur une dure de plusieurs mois, ou encore aux calculs des constantes dhydratation des diffrentes espces.
Enfin, partir de la stratgie C dveloppe, de nouveaux pyranoanthocyanidines phnoliques, ayant un cycle B substitu et une position 3 acyle seront synthtiss : notamment, laccs un analogue 134 dun pigment du vin, la pinotine A, est envisag (Figure 40).103
134 PF6HO O O O O O O OH OH Molcule cible O OH Un pigment naturel du vin rouge : la Pinotine A.93 OH O O OH O HO ClO OGlc O OH O
Figure 40 : Accs un driv dune pyranomalvidine
Il est galement possible denvisager des tudes biologiques sur ces molcules qui appartiennent la classe des flavonodes. En tant que tel, elles peuvent prsenter un intrt bnfique pour la sant. On peut notamment citer les bienfaits au niveau cardiovasculaire dune consommation rgulire MAIS modre de vin rouge164
164
Gronbaek, M. ; Pathophysiology, 2004, 10, 83-92.
149
150
Contribution la chimie des flavonodes : accs des analogues de pigments du vin rouge.
Partie exprimentale (p. 153-205)
Rfrences bibliographiques (p.207-216)
151
152
1. Solvants et ractifs
Les solvants anhydres ont t prpars par distillation sous argon, aprs avoir t schs sur leur agent dshydratant respectif : Dichloromthane (CH2Cl2) Trithylamine (Et3 N) N,N-dimthylformamide (DMF) Na/Benzophnone
CaH2 Tamis molculaire 4
Le ttrahydrofurane (THF) et le ttrachlorure de carbone (CCl4) ont t passs deux fois sur colonne dalumine avant chaque utilisation. Sauf mention particulire, les autres solvants et ractifs commerciaux ont t utiliss sans purification particulire.
2. Matriel et mthodes
2.1 Chromatographie :
Les chromatographies sur couche mince (CCM) ont t effectues sur des plaques de silice Merck de 0,25 mm dpaisseur (Kieselgel 60 F254, 40-60 m, 230-400 mesh ASTM). Aprs lution, la rvlation des plaques a t ralise par illumination ultraviolette 254 nm. Les chromatographies sur colonne ont t effectues avec de la silice Merck Kiesegel 60 (40-60 m, 230-400 mesh ASTM). Pour chaque purification, lluant utilis est prcis. 2.2 Point de fusion (PF)
Les mesures des points de fusion ont t effectues laide dun banc Koeffler : Bibby-Stenlin Stuart ou Apparatus SMP3. 2.3 Spectroscopie infra-rouge (IR)
Les spectres dabsorption infra-rouge ont t enregistrs laide de spectromtres transforme de Fourier Perkin-Elmer 1600 FT-IR et Bruker IFS 25. Les chantillons ont t examins sous forme de pastille de bromure de potassium. Lattribution des bandes les plus caractristiques est indique entre parenthses et les nombres dondes sont exprims en cm-1. 2.4 Spectroscopie ultraviolet-visible (UV-Vis)
Les spectres dabsorption UV-Visible ont t enregistrs laide dun spectrophotomtre HewlettPackard 8452A barrettes de photodiodes quip dune cellule thermostate et dun dispositif dagitation. Les chantillons ont t examins en solution dans une cuve en quartz transparente et les longueurs donde sont exprimes en nm et les coefficients dabsorption molaires en mol-1.L.cm-1. 2.5 Spectroscopie de rsonance magntique nuclaire (RMN)
Les expriences de rsonance magntique nuclaire ont t ralises au service commun de RMN de lInstitut de Chimie de Strasbourg. Les spectres RMN ont t enregistrs sur des appareils Brcker B-ACS60 (300 MHz pour la rsonance du noyau 1H et 75 MHz pour la rsonance du noyau 13C) et Brcker AC-300 (300 MHz pour la rsonance du noyau 1H et 75 MHz pour la rsonance du noyau 13C).
153
Les dplacements chimiques sont exprims en ppm par rapport une rfrence interne dont le dplacement chimique est connu : pour la RMN 1H, la rfrence interne est le signal des noyaux 1H rsiduels du solvant deutr et pour la RMN 13C, la rfrence interne est le signal du solvant : Solvant Rfrence
1
H dplacement chimique (ppm) 7,26
13
C dplacemnt chimique (ppm) 77,0
CDCl3 CD3OD CD3CN
CHCl3 CD2HOD CD2HCN
3,31
49,0
1,94
1,24
Concernant la RMN 1H, les dplacements chimiques , les intgrations et les constantes de couplage ont t lues directement sur le spectre et les abrviations utilises sont les suivantes : pour la multiplicit des signaux : s (singulet) d (doublet) t (triplet) dd (doublet de doublet) m (multiplet) etc pour les constantes de couplage : nJX-Y exprime en hertz (Hz) avec n dsignant le nombre de liaisons sparant les noyaux X et Y concerns par le couplage.
Concernant la RMN 13C, les expriences ont t ralises avec dcouplage du noyau 1H et les dplacements chimiques ont t lus directement sur le spectre. De plus, la multiplicit des atomes de carbone a t dtermine grce une squence DEPT 135 qui est une exprience de routine la facult de chimie. Pour lucider certaines structures (produits condenss ouverts), des expriences de RMN bidimensionnelles (NOESY) ont t effectues laide dun appareil Brcker B-ACS60. 2.6 Spectromtrie de masse (SM)
Les expriences de spectromtrie de masse ont t effectues au service de Spectromtrie de Masse de lInstitut de Chimie de Strasbourg sur une plateforme Fisons VG. Le mode dionisation (ESI : Electrospray Ionisation, APCI : Atmospheric Pressure Chemical Ionisation) est indiqu entre parenthses suivis par la liste des pics de masse ( m/z) dtects, de leur attribution respective et de leur intensit relative par rapport au pic le plus intense.
154
3. Modes opratoires et analyses Remarque : La numrotation des squelettes carbons utiliss pour lattribution des signaux de RMN ne correspond pas forcment la numrotation propose par la nomenclature IUPAC. 21c : 5-hydroxy-7-mthoxyflavone ou 7-mthylchrysine
3' 2' 4' 5' 6' 6 5 10 3 4
1'
C16H12O4 M= 268,26 Solide beige
OH
Monomthylation de la chrysine 21b
A une solution de 1,0 g de chrysine 21b (1,0 q. - 3,9 mmol) dans 110 mL dactone, sont ajouts 1,6 g de carbonate de potassium (3,0 q. - 11,8 mmol), suivi de laddition goutte goutte, temprature ambiante, de 490 L de dimthylsulfate (2,0 q. - 7,8 mmol). Le milieu ractionnel est port reflux et laiss sous agitation pendant 12 heures (suivi CCM). Aprs filtration et concentration sous pression rduite, le rsidu est solubilis dans 80 mL dactate dthyle. La phase organique est lave avec une solution dacide chlorhydrique 10% (1 x 30 mL). La phase aqueuse est extraite lactate dthyle (3 x 80 mL). Lensemble des phases organiques est successivement lav leau (3 x 80 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 120 mL), sch sur MgSO4, filtr et concentr sous pression rduite. Le rsidu est purifi par recristallisation dans lthanol pour donner 914 mg de 21c. Rendement = 87% CCM : Rf= 0,71 (Actate dthyle / Cyclohexane : 1/1) PF : 176C RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 3,88 (s, 3H, Ha) ; 6,37 (d, 1H, 4J6-8=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,50 (d, 1H, 4 J8-6=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,66 (s, 1H, H3) ; 7,51-7,56 (m, 3H, H3+H4+H5) ; 7,87-7,90 (m, 2H, H2+H6) ; 12,72 (s, 1H, OH). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 55,8 (Ca) ; 92,7 (C6) ; 98,2 (C8) ; 105,5 (C10) ; 105,9 (C3) ; 126,3 (C2+C6) ; 129,1 (C3+C5) ; 130,7 (C1) ; 131,8 (C4) ; 159,1/162,2/164,0/165,6 (C2/C5/C7/C9) ; 182,5 (C4). 21d : 5,7-dimthoxyflavone ou 5,7-dimthylchrysine
3' 2' 4' 5' 6' 6 5 10 3 4
1'
C17H14O4 M= 282,29 Solide blanc
a) Mthylation de 21c b) Dimthylation de 21b
a) A une solution de 268 mg de 21c (1,0 q. - 1 mmol) dans 9 mL de dichloromthane, sont additionns, successivement goutte goutte, 6 mL dune solution dhydroxyde de sodium 1M (1,5 q. 1,5 mmol 60 mg) et 47 mg de iodure de ttrabutylammonium (0,1 q. 0,1 mmol). Puis, temprature ambiante, 130 L de dimthylsulfate sont ajouts goutte goutte (1,2 q. 1,2 mmol). Le milieu ractionnel est mis sous agitation pendant 5 heures temprature ambiante (suivi CCM). La phase aqueuse est spare de la phase organique et est extraite au dichloromthane (4 x 10 mL). Lensemble des phases organiques est successivement lav avec une solution sature de chlorure dammonium (3 x 20 mL), leau (3 x 20 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 25 mL), sch sur MgSO4, filtr et concentr sous pression rduite. Le rsidu est purifi par recristallisation dans lthanol pour donner 260 mg de 21d.
155
Rendement = 92%
b) A une solution de 635 mg de chrysine 21b (1,0 q. 2,5 mmol) dans 10 mL de dimthylformamide anhydre, sont ajouts 2,4 g de carbonate de potassium (7,0 q. 17,5 mmol), suivi de laddition goutte goutte, temprature ambiante, de 943 L de dimthylsulfate (6,0 q. - 15 mmol). Le milieu ractionnel est chauff 50C et laiss sous agitation pendant 5 heures (suivi CCM). Aprs retour temprature ambiante, le mlange est solubilis dans 60 mL deau et la phase aqueuse est extraite lactate dthyle (3 x 50 mL). Lensemble des phases organiques est successivement lav leau (3 x 50 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 60 mL), sch sur MgSO4, filtr et concentr sous pression rduite. Le rsidu est purifi par recristallisation dans lthanol pour donner 514 mg de 21d. Rendement = 81% CCM : Rf = 0,28 (Actate dthyle) PF : 147-148C UV/Vis : max= 216, 246, (p.), 268, 308 nm. RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 3,91 et 3,95 (s, 3H, Ha et Hb) ; 6,37 (d, 1H, 4J6-8=2,3 Hz, H6) ; 6,57 (d, 1H, 4J8-6=2,2 Hz, H-8) ; 6,68 (s, 1H, H3) ; 7,46-7,52 (m, 3H, H3+H4+H5) ; 7,85-7,89 (m, 2H, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 56,4/57,7 (Ca/Cb) ; 92,8 (C6) ; 96,2 (C8) ; 109,1 (C3) ; 109,3 (C10) ; 125,9 (C2+C6) ; 128,9 (C3+C5) ; 131,2 (C4) ; 131,5 (C1) ; 159,9/160,6/160,9/164,0 (C2/C5/C7/C9) ; 182,5 (C4). 100a : 3-mthoxyflavone ou 3-mthylflavonol
3' 2' 4' 5' 6'
8
7 6 5
2 3
1'
C16H12O3 M= 252,26 Solide jaune Mthylation du flavonol
10
O
a
A une solution de 500 mg de flavonol (1,0 q. 2,1 mmol) dans 20 mL dactone, sont ajouts 1,01 g de carbonate de potassium (3,5 q. 7,3 mmol) suivie de laddition goutte goutte, temprature ambiante, de 1 mL de dimthylsulfate (3,5 q. - 7,3 mmol). Le milieu ractionnel est port reflux et laiss sous agitation pendant 12 heures (suivi CCM). Aprs filtration et concentration sous pression rduite, le rsidu est solubilis dans 50 mL dactate dthyle. La phase organique est successivement lave avec une solution dacide chlorhydrique 10% (1 x 30 mL), leau (3 x 30 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 50 mL), sche sur MgSO4 , filtre et concentre sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Cyclohexane : 1/3) pour donner 525 mg de 100a. Rendement = 99% CCM : Rf = 0,37 (Actate dthyle / Cyclohexane : 1/3) PF : 124C RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 3,90 (s, 3H, Ha) ; 7,39-7,41 (m, 1H) ; 7,50-7,56 (m, 4H) ; 7,66-7,68 (m, 1H) ; 8,08-8,11 (m, 2H) ; 8,25-8,28 (dd, 1H, 3J= 8,0 Hz, 4J= 1,5 Hz). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 60,2 (Ca) ; 118,0 (=CH) ; 124,3 (=CH) ; 124,7 (=CH) ; 125,8 (=CH) ; 128,5 (Cq) ; 130,8 (=CH) ; 131,0 (=CH) ; 131,2 (Cq) ; 133,5 (=CH) ; 141,6/155,3/155,6 (Cq); 175,2 (C4).
156
100b : 3,3,4,5,7-pentamthoxyflavone ou 3,3,4,5,7-pentamthylquerctine
c
O
3' 2'
O
4' 5' 6'
O
6
1'
C20H20O7 M= 372,37 Solide jaune
10
O
e
Permthylation de la querctine 31
A une solution de 1,0 g de querctine 31 (1,0 q. 2,9 mmol) dans 100 mL dactone, sont ajouts 2,9 g de carbonate de potassium (18,0 q. 51,8 mmol), suivi de laddition goutte goutte, temprature ambiante, de 5,50 mL de dimthylsulfate (18,0 q. 51,8 mmol). Le milieu ractionnel est port reflux et laiss sous agitation pendant 12 heures (suivi CCM). Aprs filtration et concentration sous pression rduite, le rsidu est solubilis dans 80 mL dactate dthyle et le dimthylsulfate est neutralis avec une solution aqueuse dhydroxyde dammonium (10 mL) pendant une nuit. Le mlange est dilu avec 60 mL deau et est extrait avec de lactate dthyle (3 x 120 mL). Lensemble des phases organiques est successivement lav leau (3 x 80 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 150 mL), sch sur MgSO4, filtr et concentr sous pression rduite. Le rsidu est purifi par recristallisation dans lactate dthyle pour donner 2,770 g de 100b. Rendement = 99% CCM : Rf = 0,22 (Actate dthyle) PF : 148C IR (KBr): max = 1627 (C=O), 1605 1269, 1235, 1213, 1155, 1108, 1056, 1014 cm-1 RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 3,86/3,88 (s, 3H, Ha/Hb) ; 3,94 (s, 9H, Hc+Hd+He) ; 6,32 (d, 1H, 4 J6-8=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,48 (d, 1H, 4 J8-6=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,95 (d, 1H, 3J5-6=8,1 Hz, H5) ; 7,66 (dd, 1H, 3J6-5=8,1 Hz, 4J6-2=2,1 Hz, H6) ; 7,69 (d, 1H, 4J2-6=2,1 Hz, H2). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 55,7/55,9/56,0/56,4/59,9 (Ca/Cb/Cc/Cd/Ce) ; 92,4 (C8) ; 95,7 (C6) ; 109,5 (C10) ; 110,7/111,2/121,6 (C2/C6/C5) ; 123,2 (C1) ; 141,0 (C3) ; 148,6 (C2) ; 150,8/152,6/158,8/161,0 (C5/C9/C3/C4) ; 163,9 (C7) ; 173,5 (C4). 100c : 5-hydroxy-3,3,4,7-ttramthoxyflavone ou 3,3,4,7-ttramthylquerctine
c
O
3' 2'
O
4' 5' 6'
O
6
1'
10
O
e
OH
Monodmthylation rgioslective de 100b
A une solution de 5,2 g de chlorure daluminium (26,0 q. 39 mmol) dans un minimum dactonitrile, sont ajouts 613 mg de 100b (1,0 q. 1,5 mmol). Le milieu ractionnel est chauff 70C et laiss sous agitation pendant 12 heures (suivi CCM). A temprature ambiante, une solution dacide chlorhydrique 2% (30 mL) est ajoute et le mlange ractionnel est chauff 70C pendant 30 minutes. A temprature ambiante, de leau est ajoute (40 mL) et la phase aqueuse est extraite avec de lactate dthyle (3 x 60 mL). Lensemble des phases organiques est lav avec une solution sature de chlorure de sodium, sch sur MgSO4, filtr et concentr sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Cyclohexane : 1/1 pour donner 326 mg de 100c. Rendement = 60% CCM : Rf = 0,65 (Actate dthyle) PF : 159C
157
RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 3,87 (s, 3H, Ha) ; 3,88/3,96/3,97 (s, 3H, Hc/Hd/He) ; 6,36 (d, 1H, 4 J6-8=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,45 (d, 1H, 4 J8-6=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,00 (d, 1H, 3J5-6=8,4 Hz, H5) ; 7,69 (d, 1H, 4J2-6=2,1 Hz, H2) ; 7,75 (dd, 1H, 3J6-5=8,1 Hz, 4J6-2=2,1 Hz, H6) ; 12,65 (s, 1H, OH). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 55,8/56,0/56,1/60,2 (Ca/Cc/Cd/Ce) ; 92,2 (C8) ; 95,8 (C6) ; 106,0 (C10) ; 110,8/111,2/122,2 (C2/C6/C5) ; 122,9 (C1) ; 141,0 (C3) ; 148,6 (C2) ; 151,4/155,8/156,7/ 162,0 (C5/C9/C3/C4) ; 165,4 (C7) ; 178,7 (C4). 95a : Hexafluorophosphate de 4-mthylflavylium
3' 2' 2 3 4 11 1' 6' 5 10 4' 5'
PF68
7 6 9
C16H13OPF6 M= 366,24 Poudre verte Formation de 95a
a) A une solution de 667 mg de flavone 21a (1,0 q. - 3,0 mmol) dans 20 mL de ttrahydrofurane, sont additionns goutte goutte, 2 mL de bromure de mthylmagnsium 3M dans le THF (2,0 q. 6,0 mmol). Le milieu ractionnel est port reflux et laiss sous agitation pendant 2 heures (suivi CCM). b) A une solution de 333 mg de flavone 21a (1,0 q. 1,5 mmol) dans 15 mL de ttrahydrofurane, sont additionns, goutte goutte, 0C, 1,88 mL de mthyllithium 1,6M dans le THF (2,0 q. 3,0 mmol). Le milieu ractionnel est rchauff progressivement jusqu temprature ambiante et laiss sous agitation pendant 2 heures (suivi CCM). Traitement identique : Une solution sature de chlorure dammonium (1 x 50 mL) est ajoute. La phase aqueuse est extraite avec de lactate dthyle (3 x 60 mL). Lensemble des phases organiques est successivement lav leau (1 x 70 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 70 mL), sch sur MgSO4, filtr et concentr sous pression rduite. Le rsidu est solubilis dans 50 mL de mthanol et quelques gouttes dacide hexafluorophosphorique sont ajoutes. Le mlange ractionnel est port reflux et laiss sous agitation 30 minutes. La solution est concentre sous pression rduite, filtre et lave plusieurs fois lther pour donner 95a. Rendement (MeMgBr) = 52% Rendement (MeLi) = 70% UV/Vis : max (MeOH)= 390 nm RMN 1H (300 MHz, CD3CN) : = 3,15 (s, 3H, H11) ; 7,80 (m, 1H) ; 7,92-8,05 (m, 2H) ; 8,33-8,36 (m, 2H) ; 8,28 (s, 1H, H3) ; 8,45-8,54 (m, 3H) ; 8,62-8,64 (m, 1H). RMN 13C (75 MHz, CD3CN) : = 20,7 (C11) ; 118,8 (C8) ; 119,8 (C3); 124,9 (C10) ; 127,2 (C6) ; 128,7 (C2+C6) ; 130,1 (C1) ; 130,3 (C3+C5) ; 130,4 (C5) ; 137,3 (C4) ; 139,7 (C7) ; 155,7/173,3/173,4 (C2/C4/C9). 95b : Hexafluorophosphate de 5,7-dihydroxy-4-mthylflavylium
PF6HO
6 5 7 3' 2' 2 3 4 11 1' 6' 10 4' 5'
C16H13O3PF6 M= 398,24 Poudre bordeaux Formation de 95b
OH
a/ A une solution de 540 mg de chrysine 21b (1,0 q. - 2,12 mmol) dans 20 mL de ttrahydrofurane, sont additionns goutte goutte, 4,25 mL de bromure de mthylmagnsium 3M dans le THF (6,0 q. 12,75 mmol). Le milieu ractionnel est port reflux et laiss sous agitation pendant 2 heures (suivi CCM). Une solution sature de chlorure dammonium (1 x 50 mL) est ajoute. La phase aqueuse est
158
extraite lactate dthyle (3 x 60 mL). Lensemble des phases organiques est successivement lav leau (1 x 70 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 70 mL), sch sur MgSO4 , filtr et concentr sous pression rduite. Le rsidu est solubilis dans 50 mL de mthanol et quelques gouttes dacide hexafluorophosphorique sont ajoutes. Le mlange ractionnel est port reflux et laiss sous agitation 30 minutes. La solution est concentre sous pression rduite, filtre et lave plusieurs fois lther pour donner 849 mg de 95b. Rendement =71% b/ A une solution de 417 mg de phloroglucinol dihydrat 116c (1,0 q. - 2,52 mmol), solubilis dans un minimum dacide actique, sont ajouts 413 mg de benzoylactone 117a (1,0 q. - 2,52 mmol). Puis quelques gouttes dacide hexafluorophosphorique 60 % sont additionnes et le milieu ractionnel est mis sous agitation temprature ambiante pendant 24 heures. Le mlange est ensuite vers dans lther et le prcipit form est isol par filtration et lav abondamment lther pour donner 854 mg de 95b. Rendement = 95% UV/Vis : max(MeOH / 5% HCl 10%) ( en M-1.cm-1)= 260, 292, 416 (28600) nm IR (KBr): max = 3099 (O-H), 1639 (C=O ), 1422, 1358, 1262, 853 cm-1 RMN 1H (300 MHz, CD3CN / 1% CF3COOD) : = 3,11 (s, 3H, H11) ; 6,77 (d, 1H, 4 J6-8=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,06 (d, 1H, 4J8-6=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,68-7,74 (m, 2H, partie AA dun systme de spins AABMM, H3+H5) ; 7,79-7,85 (m, 1H, partie B dun systme de spins AABMM, H4) ; 7,98 (s, 1H, H3) ; 8,29-8,33 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AABMM, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CD3CN / 1% CF3COOD) : = 26,2 (C11) ; 97,1 (C6) ; 104,4 (C8) ; 115,9 (C3) ; 118,7 (C10) ; 129,6 (C3+C5) ; 129,7 (C1) ; 130,9 (C2+C6) ; 136,4 (C4) ; 159,9/161,5/169,2/169,8 (C4/C5/C7/C9) ; 173,0 (C2). 95c : Hexafluorophosphate de 5-hydroxy-7-mthoxy-4-mthylflavylium
+
PF6a
3' 2' 2 3 4 1' 6' 4' 5'
O
6
10
C17H15O3PF6 M= 412,26 Poudre brune Formation de 95c
OH
11
A une solution de 805 mg de 21c (1,0 q. 3,0 mmol) dans 20 mL de ttrahydrofurane, sont additionns goutte goutte, 4,25 mL de bromure de mthylmagnsium 3M dans le THF (4,0 q. 12,0 mmol). Le milieu ractionnel est port reflux et laiss sous agitation pendant 2 heures (suivi CCM). Une solution sature de chlorure dammonium (1 x 50 mL) est ajoute. La phase aqueuse est extraite avec de lactate dthyle (3 x 60 mL). Lensemble des phases organiques est successivement lav leau (1 x 70 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium, sch sur MgSO4, filtr et concentr sous pression rduite. Le rsidu est solubilis dans 50 mL de mthanol et quelques gouttes dacide hexafluorophosphorique sont ajoutes. Le mlange ractionnel est port reflux et laiss sous agitation 30 minutes. La solution est concentre sous pression rduite, filtre et lave plusieurs fois lther pour donner 900 mg de 95c. Rendement = 73% UV/Vis : max (MeOH)= 540 nm RMN 1H (300 MHz, CD3OD) : = 3,12 (s, 3H, H11) ; 3,90 (s, 3H, Ha) ; 6,76 (d, 1H, 4J6-8=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,33 (d, 1H, 4J8-6=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,70-7,73 (m, 2H, partie AA dun systme de spins AABMM, H3+H5) ; 7,78-7,80 (m, 1H, partie B dun systme de spins AABMM, H4) ; 8,23 (s, 1H, H3) ; 8,39-8,43 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AABMM, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CD3OD) : = 18,8 (C11) ; 56,3 (Ca) ; 93,1 (C6) ; 102,4 (C8) ; 114,7 (C3) ; 128,5 (C3+C5) ; 129,6 (C2+C6) ; 135,2 (C4) ; 139,5/159,2 (C1/C10) ; 160,9/168,4/160,6/170,4 (C4/C5/C7/C9) ; 180,4 (C2).
159
95d : Hexafluorophosphate de 5,7-dimthoxy-4-mthylflavylium
PF6a
3' 2' 2 3 4 11 1' 6' 6 5 10 4' 5'
C18H17O3PF6 M= 426,29 Poudre orange
Formation de 95d
a/ A une solution de 197 mg de 21d (1,0 q. 0,7 mmol) dans 10 mL de ttrahydrofurane, sont additionns goutte goutte, 0,46 mL de bromure de mthylmagnsium 3M dans le THF (2,0 q. 1,4 mmol). Le milieu ractionnel est port reflux et laiss sous agitation pendant 2 heures (suivi CCM). Une solution sature de chlorure dammonium (1 x 50 mL) est ajoute. La phase aqueuse est extraite avec de lactate dthyle (3 x 60 mL). Lensemble des phases organiques est successivement lav leau (1 x 70 mL) et avec avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 70 mL), sch sur MgSO4, filtr et concentr sous pression rduite. Le rsidu est solubilis dans 50 mL de mthanol et quelques gouttes dacide hexafluorophosphorique sont ajoutes. Le mlange ractionnel est port reflux et laiss sous agitation 30 minutes. La solution est concentre sous pression rduite, filtre et lave plusieurs fois lther pour donner 117 mg de 95d. Rendement =40% b/ A une solution de 745 mg de 3,5-dimthoxyphnol 116b (1,0 q. - 4,69 mmol), solubilis dans un minimum dacide actique, sont ajouts 769 mg de benzoylactone 117a (1,0 q. - 4,69 mmol ). Puis quelques gouttes dacide hexafluorophosphorique 60 % sont additionnes et le milieu ractionnel est mis sous agitation temprature ambiante pendant 24 heures. Le mlange est ensuite vers dans lther et le prcipit form est isol par filtration et lav abondamment lther pour donner 1,80 g de 95d. Rendement = 91% UV/Vis : max (MeOH)= 520 nm PF : 242C + IR (KBr): max = 3421, 1636 (C=O ), 1463, 1359, 1257, 1061, 832 cm-1 RMN 1H (300 MHz, CD3CN / 1% CF3COOD) : = 3,11 (s, 3H, H11) ; 4,09 (s, 3H, Hb) ; 4,10 (s, 1H, Ha) ; 6,87 (d, 1H, 4J6-8=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,32 (d, 1H, 4J8-6=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,70-7,75 (m, 2H, partie AA dun systme de spins AABMM, H3+H5) ; 7,81-7,83 (m, 1H, partie B dun systme de spins AABMM, H4) ; 8,08 (s, 1H, H3) ; 8,32-8,35 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AABMM, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3 / 1% CF3COOD) : = 25,5 (C11) ; 57,0 (Cb) ; 57,2 (Ca) ; 93,9 (C6) ; 100,4 (C8) ; 112,8 (C1) ; 115,7 (C3) ; 116,6 (C10) ; 128,6 (C3+C5) ; 129,9 (C2+C6) ; 135,6 (C4) ; 156,4/156,9/157,5/168,0 (C4/C5/C7/C9) ; 173,0 (C2). 95a : Hexafluorophosphate de 3-mthoxy-4-mthylflavylium
3'
8
7 6 5
PF69
2' 2 3 1' 6'
4' 5'
C17H15O2PF6 M= 396,26 Poudre brune Formation de 95'a
10
4 11
O
a
A une solution de 757 mg de 100a (1,0 q. 3,0 mmol) dans 20 mL de ttrahydrofurane, sont additionns goutte goutte, 2,0 mL de bromure de mthylmagnsium 3M dans le THF (2,0 q. 6,0 mmol). Le milieu ractionnel est port reflux et laiss sous agitation pendant 2 heures (suivi CCM). Une solution sature de chlorure dammonium (1 x 50 mL) est ajoute. La phase aqueuse est extraite lactate dthyle (3 x 60 mL). Lensemble des phases organiques est successivement lav leau (1 x 70 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 70 mL), sch sur MgSO4, filtr et concentr sous pression rduite. Le rsidu est solubilis dans 50 mL de mthanol et quelques gouttes dacide hexafluorophosphorique sont ajoutes. Le mlange ractionnel est port reflux et laiss sous
160
agitation 30 minutes. La solution est concentre sous pression rduite, filtre et lave plusieurs fois lther pour donner 1,18 g de 95a. Rendement = quantitatif UV/Vis : max (MeOH / 5% HCl 10%) ( en M-1.cm-1 ) = 210, 250 (16621), 400 (16630) nm RMN 1H (300 MHz, CD3CN) : = 3,10 (s, 3H, H11) ; 3,86 (s, 3H, Ha) ; 7,80 (m, 2H, partie AA dun systme de spins AABMM, H3+H5) ; 7,90-7,92 (m, 1H, partie B dun systme de spins AABMM, H4) ; 8,01-8,04 (m, 1H) ; 8,28-8,32 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AABMM, H2+H6) ; 8,47 (m, 2H) ; 8,57-8,59 (m, 1H). RMN 13C (75 MHz, CD3CN) : = 14,2 (C11) ; 62,0 (s, 3H, Ha) ; 118,6 (C8) ; 125,7 (C10) ; 127,1 (C6) ; 128,4 (C3) ; 130,0 (C2+C6) ; 130,4 (C3+C5) ; 131,5 (C5) ; 136,4 (C4) ; 136,7 (C1) ; 138,6 (C7); 150,3/154,8/167,1 (C2/C4/C9). 95b : Hexafluorophosphate de 3,3,4,5,7-pentamthoxy-4-mthylflavylium
c
O PF6a
3' 2' 2 1' 6' 6 5 10 4 11 3
O
4' 5'
C21H23O6PF6 M= 516,37 Poudre rouge Formation de 95'b
O
e
A une solution de 409 mg de 100b (1,0 q. 1,0 mmol) dans 20 mL de ttrahydrofurane, sont additionns goutte goutte, 660 L de bromure de mthylmagnsium 3M dans le THF (2,0 q. 2,0 mmol). Le milieu ractionnel est port reflux et laiss sous agitation pendant 2 heures (suivi CCM). Une solution sature de chlorure dammonium (1 x 50 mL) est ajoute. La phase aqueuse est extraite avec de lactate dthyle (3 x 60 mL). Lensemble des phases organiques est successivement lav leau (1 x 70 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 70 mL), sch sur MgSO4 , filtr et concentr sous pression rduite. Le rsidu est solubilis dans 50 mL de mthanol et quelques gouttes dacide hexafluorophosphorique sont ajoutes. Le mlange ractionnel est port reflux et laiss sous agitation 30 minutes. La solution est concentre sous pression rduite, filtre et lave plusieurs fois lther pour donner 490 mg de 95b. Rendement = 95% UV/Vis : max (MeOH)= 500 nm RMN 1H (300 MHz, CD3CN) : = 3,05 (s, 3H, H11) ; 3,79/3,99 (s, 6H, Ha/Hb) ; 4,01/4,08 (s, 9H, Hc/Hd/He) ; 6,85 (d, 1H, 4J6-8=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,24 (d, 1H, 3J5-6=8,8 Hz, H5) ; 7,28 (d, 1H, 4J84 3 4 6=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,98 (d, 1H, J2-6=2,2 Hz, H2) ; 7,28 (dd, 1H, J6-5=8,8 Hz, J6-2=2,2 Hz, H6). 13 RMN C (75 MHz, CD3CN) : = 17,0 (C11) ; 55,8 (Cb) ; 56,1 (Ca) ; 57,1/57,2/61,1 (Cc/Cd/Ce) ; 93,2 (C6) ; 100,4 (C8) ; 112,1/112,2/126,6 (C2/C5/C6) ; 113,5 (C1) ; 120,3 (C10) ; 137,0/149,8 (C3/C4) ; 155,9/157,2/160,7/163,2/164,7/169,1 (C2/C3/C4/C5/C7/C9). 95c : Hexafluorophosphate mthylflavylium
c
de
5-hydroxy-3,3,4,7-ttramthoxy-4-
PF62'
O
3' 1' 6'
O
4' 5'
O
6
C20H21O6PF6 M= 487,31 Poudre rouge Formation de 95'c
10
4 11
O
e
OH
A une solution de 394 mg de 100c (1,0 q. 1,0 mmol) dans 20 mL de ttrahydrofurane, sont additionns goutte goutte, 1,33 mL de bromure de mthylmagnsium 3M dans le THF (4,0 q. 4,0 mmol). Le milieu ractionnel est port reflux et laiss sous agitation pendant 2 heures (suivi CCM).
161
Une solution sature de chlorure dammonium (1 x 50 mL) est ajoute. La phase aqueuse est extraite avec de lactate dthyle (3 x 60 mL). Lensemble des phases organiques est successivement lav leau (1 x 70 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 70 mL), sch sur MgSO4 , filtr et concentr sous pression rduite. Le rsidu est solubilis dans 50 mL de mthanol et quelques gouttes dacide hexafluorophosphorique sont ajoutes. Le mlange ractionnel est port reflux et laiss sous agitation 30 minutes. La solution est concentre sous pression rduite, filtre et lave plusieurs fois lther pour donner 269 mg de 95c. Rendement = 75% UV/Vis : max (MeOH)= 490 nm RMN 1H (300 MHz, CD3CN ) : = 3,05 (s, 3H, H11) ; 3,77 (s, 3H, Ha) ; 3,98/4,03/4,06 (s, 9H, Hc /Hd/He) ; 7,00 (d, 1H, 4J6-8=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,19 (d, 1H, 4J8-6=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,23 (d, 1H, 3 J5-6=8,8 Hz, H5) ; 7,96 (d, 1H, 4J2-6=2,2 Hz, H2) ; 8,25 (dd, 1H, 3J6-5=8,8 Hz, 4J6-2=2,2 Hz, H6). RMN 13C (75 MHz, CD3CN) : = 16,8 (C11) ; 55,8 (Ca) ; 56,1/56,9/61,1 (Cc/Cd/Ce) ; 93,2 (C6) ; 103,0 (C8) ; 112,1/112,2/126,6 (C2/C5/C6) ; 118,1 (C1) ; 120,3 (C10) ; 146,5/149,8 (C3/C4) ; 155,8/156,8/159,8/163,2/164,4/168,8 (C2/C3/C4/ C5/ C7/ C9). Remarque : A 75 MHz, lintensit des signaux des carbones des drivs condenss est trs faible. Seulement deux analyses aux 13C ont t ralises 500 MHz et ont donn quelques informations supplmentaire. 94b : Hexafluorophosphate de dimthylamino)phnyl-1,6-dioxaphnalne 8-hydroxy-5-phnyl-2-(4-(N,N)-
PF6HO
6 5 7
3' 2' 2 3 4 11 1' 6' 4' 5'
10
O
18 17 13 12
C25H20O3NPF6 M= 527,40 Poudre grise Condensation de 95b
14 15 16
N
19 19
A une solution de 200 mg de 95b (1,0 q., 0,5 mmol) dans lthanol (15 mL) sont additionns 90 mg de 4-dimthylaminobenzaldhyde (1,2 q., 0,6 mmol). Le mlange ractionnel est port reflux et laiss sous agitation 5 heures (suivi UV-Vis). Lthanol est vapor et le rsidu est vers dans lther. Le prcipit est filtr et lav plusieurs fois lther pour donner 272 mg de 94b. Rendement = 90% UV/Vis : max (MeOH / 5% HCl 10%) ( en M-1.cm-1 ) = 260, 552 (44200) nm RMN 1H (300 MHz, CD3CN / 1 % CF3COOH) : = 3,28 (s, 6H, H19) ; 7,26 (d, 1H, 4J6-8=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,28 (d, 1H, 4J8-6=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,52 (s, 1H, H3) ; 7,56-7,61 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AAMM, H15+H17) ; 7,67-7,71 (m, 2H, partie AA dun systme de spins AABMM, H3+H5) ; 7,74-7,80 (m, 1H, partie B dun systme de spins AABMM, H4) ; 8,17-8,21 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AABMM, H2+H6) ; 8,25-8,29 (m, 2H, partie AA dun systme de spins AAMM, H14+H18). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 382 (100) [M]+.
162
94c : Hexafluorophosphate de dimthylamino)phnyl-1,6-dioxaphnalne
3' 2' 2 3 4 11 12 14 15 16 1' 6' 6 5 10 4' 5'
8-mthoxy-5-phnyl-2-(4-(N,N)-
PF67
O
18 17 13
C26H22O3NPF6 M= 541,62 Poudre brune Condensation de 95c
N
19 19
A une solution de 206 mg de 95c (1,0 q., 0,5 mmol) dans lthanol (30 mL) sont additionns 87 mg de 4-dimthylaminobenzaldhyde (1,2 q., 0,6 mmol). Le mlange ractionnel est port reflux et laiss sous agitation 2 heures (suivi UV-Vis). Lthanol est vapor et le rsidu est vers dans lther. Le prcipit est filtr et lav plusieurs fois lther pour donner 144 mg de 94c. Rendement = 54% UV/Vis : max (MeOH / 5% HCl 10%) ( en M-1.cm-1) = 206, 352 (18300), 556 (54100) nm RMN 1H (300 MHz, CD3CN) : = 3,06 (s, 6H, H19) ; 3,99 (s, 3H, Ha) ; 6,69 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AAMM, H15+H17) ; 7,07 (d, 1H, 4J6-8=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,09 (s, 1H, H3 ou H11) ; 7,11 (d, 1H, 4J8-6=2,2 Hz, H6 ou H8); 7,16 (s, 1H, H3 ou H11) ; 7,59 (m, 2H, partie AA dun systme de spins AABMM, H3+H5 ) ; 7,68 (m, 1H, partie B dun systme de spins AABMM, H4) ; 7,82 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AABMM, H2+H6) ; 7,98 (m, 2H, partie AA dun systme de spins AAMM, H14+H18). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 396(100) [M]+ C26H2203N [M]+ Calcul : 396,1594 / Trouv : 396,1551 98a : Hexafluorophosphate dimthylamino)styryl)flavylium de 3-mthoxy-4-(4-((N,N)-
PF68
7 6 5 9
3' 2' 2 3 1' 6' 4' 5'
10 11
O
12 13 a
18 17
14 15 16
C26H24O2NPF6 M= 527,44 Poudre verte Condensation de 95'a
N
19
19
A une solution de 905 mg de 95a (1,0 q., 2,2 mmol) dans lthanol (15 mL) sont additionns 388 mg de 4-dimthylaminobenzaldhyde (1,2 q., 2,6 mmol). Le mlange ractionnel est port reflux et laiss sous agitation 12 heures (suivi UV-Vis). Lthanol est vapor et le rsidu est vers dans lther. Le prcipit est filtr et lav plusieurs fois lther pour donner 680 mg de 98a. Rendement = 76%
163
UV/Vis : max (MeOH)= 665 nm RMN 1H (300 MHz, CD3CN) : = 3,27 (s, 6H, H19) ; 3,62 (s, 3H, Ha) ; 6,93 m, 2H, partie MM dun systme de spins AAMM, H15+H17) ; 7,62-7,70 (m, 5H) ; 7,80 (m, 1H) ; 7,89-8,00 (m, 3H) ; 8,238,27 (m, 2H, partie AA dun systme de spins AAMM, H14+H18) ; 8,47 (d, 1H, H11) ; 8,88 (d, 1H, H12). 94c : Hexafluorophosphate de 4,8-dimthoxy-5-(3,4-dimthoxyphnyl)-2-((4(N,N)-dimthylamino)phnyl)-1,6-dioxaphnalne
O
a c d 3' 2' 2 3 5 10 4 11 12 14 15 16 1' 6' 4' 5'
PF67 6
O
e
O
18 17 13
C29H28O6NPF6 M= 631,50 Poudre violette Condensation de 95'
N
19 19
A une solution de 30 mg de 95c (1,0 q., 0,08 mmol) dans lthanol (10 mL) sont additionns 14 mg de 4-dimthylaminobenzaldhyde (1,2 q., 0,09 mmol). Le mlange ractionnel est port reflux et laiss sous agitation 12 heures (suivi UV-Vis). Lthanol est vapor et le rsidu est vers dans lther. Le prcipit est filtr et lav plusieurs fois lther pour donner 20 mg de 94c. Rendement = 50% UV/Vis : max (MeOH / 5% HCl 10%) ( en M-1.cm-1) = 202, 270 (28800), 568 (18000) nm RMN 1H (300 MHz, CD3CN) : = 3,20 (s, 6H, H19) ; 3,81 (s, 3H, Ha ou Hb ou Hc ou Hd) ; 3,94 (s, 3H, Ha ou Hb ou Hc ou Hd) ; 3,95 (s, 3H, Ha ou Hb ou Hc ou Hd) ; 4,05 (s, 3H, Ha ou Hb ou Hc ou Hd) ; 6,93 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AAMM, H15+H17) ; 7,16 (d, 1H, 3J5-6=8,8 Hz, H5) ; 7,24 (d, 1H, 4J6-8=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,26 (d, 1H, 4J8-6=2,2 Hz, H6 ou H8); 7,35 (s, 1H, H11) ; 7,80 (d, 1H, 4J2-6=1,8 Hz, H2) ; 7,95 (dd, 1H, 4J6-2=1,8 Hz ; , 3J6-5=8,8 Hz, H6) ; 8,13 (m, 2H, Partie AA dun systme de spins AAMM, H14+H18). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 486(100) [M]+ C30H3206N [M]+ Calcul : 486,1911 / Trouv : 486,1906 109c : 2-mthoxyactophnone
5
4 3 2 a 1 6 7 8
C9H10O2 M= 150,17 Huile incolore Mthylation de la 2-hydroxyactophnone
A une solution de 716 L de 2-hydroxyactophnone 109b (1,0 q. 6,0 mmol) dans 25 mL dactone, sont ajouts 1,3 g de carbonate de potassium (4,0 q. 24,0 mmol), suivi de laddition goutte goutte, temprature ambiante, de 1,12 mL de iodure de mthyle (3,0 q. 18,0 mmol). Le milieu ractionnel est port reflux et laiss sous agitation pendant 12 heures (suivi CCM). Aprs filtration et concentration sous pression rduite, le rsidu est solubilis dans 30 mL dactate dthyle. La phase organique est lave avec une solution dacide chlorhydrique 10% (1 x 20 mL). La phase aqueuse est extraite lactate dthyle (3 x 80 mL). Lensemble des phases organiques est successivement lav leau (3 x 30 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 60 mL), sch sur MgSO4, filtr et concentr sous pression rduite. Le rsidu est purifi par
164
chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Heptane : 1/5) pour donner 344 mg de 109c. Rendement = 39% CCM : Rf = 0,39 (Actate dthyle / Heptane : 1/4) RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : 2,54 (s, 3H, H8) ; 3,81 (s, 3H, Ha) ; 6,87-6,93 (m, 2H, H3+H5) ; 7,357,41 (m, 1H, H4) ; 7,65-7,68 (dd, 1H, 4 J6-4=1,8 Hz, 3J6-5=7,3 Hz, H6) RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 31,8 (C8) ; 55,4 (Ca) ; 111,6 (C3) ; 120,4 (C5) ; 128,1 (C1) ; 130,2 (C6) ; 133,7 (C4) ; 158, 9 (C2) ; 199,6 (C7). 111a : 2-hydroxy-4,6-dimthoxyactophnone
O
3
OH
C10H12O4 M=196,17 Solide blanc 7 8 Dimthylation rgioslective de la O 2,4,6-trihydroxyactophnone O

b
A une solution de 3,75 g de 2,4,6-trihydroxyactophnone monohydrate (1,0 q. 20,2 mmol) dans 75 mL dactone, sont ajouts 4,2 g de carbonate de potassium (1,5 q. 30,4 mmol), suivi de laddition goutte goutte, temprature ambiante, de 4,0 mL de dimthylsulfate (2,1 q. 42,3 mmol). Le milieu ractionnel est port reflux et laiss sous agitation pendant 12 heures (suivi CCM). Aprs vaporation partielle de lactone, le milieu est vers dans 150 mL deau. Le prcipit obtenu est alors filtr et lav leau. Le rsidu est purifi par recristallisation dans lthanol pour donner 3,6 g de 111a. Rendement = 91% CCM : Rf = 0,45 (Actate dthyle / Heptane : 1/3) PF : 78-79C UV-Vis : max (MeOH) = 214, 226 (p.), 288, 324 (p.) nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : 2,59 (s, 3H, H8) ; 3,80 (s, 3H, Ha ou Hb) ; 3,83 (s, 3H, Ha ou Hb) ; 5,90 (d, 1H, 4J5-3=2,5 Hz, H5) ; 6,03 (d, 1H, 4J3-5=2,5 Hz, H3) ; 14,01 (s,1H, OH intra). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 32,9 (C8) ; 55,9 (Ca+Cb) ; 90,7 (C5) ; 93,5 (C3) ; 105,9 (C1) ; 162,9 (C6) ; 166,1 (C4) ; 167,5 (C2) ; 203,1 (C7). 110a : -hydroxyactophnone
5
4 3 2 1 6 7 8
OH
C8H8O2 M= 136,15 Solide blanc !-hydroxylation de 109a, stratgie B2B
- A une solution de 1,7 g dhydroxyde de potassium (10,0 q. 30,0 mmol) dans un minimum de mthanol, sont ajouts 0C, 348 L de 109a (1,0 q. 3,0 mmol) solubilise dans un minimum de mthanol. 718 mg de diactate diodosobenzne (2,0 q. 6,0 mmol) sont ajouts en quatre fois sur 20 minutes. Le milieu ractionnel est rchauff progressivement temprature ambiante et laiss sous agitation pendant 12 heures (suivi CCM). Le milieu est concentr sous pression rduite et on y ajoute 30 mL deau, 30 mL dune solution sature en chlorure dammonium, ainsi que 10 mL dune solution 10% dacide chlorhydrique. La phase aqueuse est extraite avec de lactate dthyle (3 x 40 mL) et lensemble des phases organiques est sch sur Na2SO4, filtr et concentr sous pression rduite. Le brut obtenu 109a est directement engag dans lhydrolyse acide. - A une solution de 109a, dans un mlange actone / eau (5/3) sont additionns 200 mg dacide ptolunesulfonique (0,3 q. 1,06 mmol). Le milieu ractionnel est chauff 50C pendant 2 heures (suivi CCM). Le milieu est concentr sous pression rduite et le rsidu est solubilis dans 50 mL
165
dactate dthyle. La phase organique est successivement lave avec une solution sature de carbonate de sodium (1 x 40 mL), leau (3 x 30 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 50 mL), sche sur Na2SO4 , filtre et concentre sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : Actate dthyle / Heptane : 1/4) pour donner 200 mg de 110a. Rendement sur les deux tapes = 34% CCM : Rf = 0,48 (Actate dthyle / Heptane : 1/2) RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : 3,52 (t, 1H, 3JOH-8=4,2 Hz, OH) ; 4,87 (d, 2H, 3J8-OH=4,2 Hz, H8) ; 7,47752 (m, 2H, H3+H5) ; 7,60-7,63 (m, 1H, H4) ; 7,90-7,93 (m, 2H, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 65,4 (C8) ; 127,7 (C3+C5) ; 128,9 (C2+C6) ; 133,3 (C1) ; 134,3 (C4) ; 198,4 (C7). 110c : -hydroxy-2-mthoxyactophnone
5
4 3 2 a 1 6 7 8
OH !-hydroxylation de 109c, stratgie B2B
C9H10O3 M= 166,17 Solide blanc
- A une solution de 1,3 g dhydroxyde de potassium (10,0 q. 23,1 mmol) dans un minimum de mthanol, sont ajouts 0C, 344 mg de 109c (1,0 q. 2,31 mmol) solubilise dans un minimum de mthanol. 718 mg de diactate diodosobenzne (2,0 q. 6,0 mmol) sont ajouts en quatre fois sur 20 minutes. Le milieu ractionnel est rchauff progressivement temprature ambiante et laiss sous agitation pendant 12 heures (suivi CCM). Le milieu est concentr sous pression rduite et on y ajoute 30 mL deau, 30 mL dune solution sature en chlorure dammonium, ainsi que 10 mL dune solution 10% dacide chlorhydrique. La phase aqueuse est extraite lactate dthyle (3 x 40 mL) et lensemble des phases organiques est sch sur Na2 SO4, filtr et concentr sous pression rduite. Le brut obtenu 109c est directement engag dans lhydrolyse acide. - A une solution de 109c, dans un mlange actone / eau (5/3) sont additionns 130 mg dacide ptolunesulfonique (0,3 q. 0,7 mmol). Le milieu ractionnel est chauff 50C pendant 4 heures (suivi CCM). Le milieu est concentr sous pression rduite et le rsidu est solubilis dans 50 mL dactate dthyle. La phase organique est successivement lave avec une solution sature de carbonate de sodium (1 x 40 mL), leau (3 x 30 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 40 mL), sche sur Na2SO4 , filtre et concentre sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : Actate dthyle / Heptane : 1/3) pour donner 141 mg de 110c. Rendement sur les deux tapes = 40% CCM : Rf = 0,28 (Actate dthyle / Heptane : 1/2) RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : 3,74 (t, 1H, 3JOH-8=4,2 Hz, OH) ; 3,94 (s, 3H, Ha) ; 4,77 (d, 2H, 3J83 OH=4,2 Hz, H8) ; 6,99-7,09 (m, 2H, H3+H5) ; 7,52-7,58 (m, 1H, H4) ; 8,03-8,07 (dd, 1H, J6-5=8,1 Hz, 4 J6-4=1,8 Hz, H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 55,5 (Ca) ; 69,9 (C8) ; 111,7 (C3) ; 120,9 (C5) ; 123,3 (C1) ; 131,0 (C6) ; 135,3 (C4) ; 160,2 (C2) ; 199,1 (C7). 110d : -hydroxy-2-(mthoxy-mthoxy)actophnone
5
4 3 2 1 6 8 7
OH
C10H12O4 M=196,20 Huile incolore
O
b a
!-hydroxylation de 109d, stratgie B2B
- A une solution de 659 mg dhydroxyde de potassium (10,0 q. 11,7 mmol) dans un minimum de mthanol, sont ajouts 0C, 210 mg de 109f (1,0 q. 1,17 mmol) solubilise dans un minimum de
166
mthanol. 280 mg de diactate diodosobenzne (2,0 q. 2,34 mmol) sont ajouts en quatre fois sur 20 minutes. Le milieu ractionnel est rchauff progressivement temprature ambiante et laiss sous agitation pendant 12 heures (suivi CCM). Le milieu est concentr sous pression rduite et on y ajoute 30 mL deau, 30 mL dune solution sature en chlorure dammonium, ainsi que 10 mL dune solution 10% dacide chlorhydrique. La phase aqueuse est extraite lactate dthyle (3 x 40 mL) et lensemble des phases organiques est lav avec une solution de chlorure de sodium (1 x 70 mL), sch sur Na2SO4, filtr et concentr sous pression rduite. Le brut obtenu 109d est directement engag dans lhydrolyse acide. - A une solution de 109d, dans un mlange actone / eau (5/3) sont additionns 55 mg dacide ptolunesulfonate de pyridinium (0,3 q. 0,28 mmol). Le milieu ractionnel est chauff 50C pendant 2 heures (suivi CCM). Le milieu est concentr sous pression rduite et le rsidu est solubilis dans 50 mL dactate dthyle. La phase organique est successivement lave avec une solution sature de carbonate de sodium (1 x 40 mL), leau (3 x 30 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 40 mL), sche sur Na2SO4, filtre et concentre sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : Actate dthyle / Heptane : 1/3) pour donner 134 mg de 110d. Rendement sur les deux tapes = 59% CCM : Rf = 0,18 (Actate dthyle / Heptane : 1/3) RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : 3,51 (s, 3H, Hb) ; 3,74 (t, 1H, 3JOH-8=4,2 Hz, OH) ; 4,80 (d, 2H, 3J8OH=4,2 Hz, H8) ; 5,94 (s, 2H, Ha) ; 7,07-7,12 (m, 1H, H3) ; 7,20-7,25 (m, 1H, H5) ; 7,48-7,54 (m, 1H, H4) ; 8,01-8,05 (dd, 1H, 3J6-5=8,1 Hz, 4J6-4=1,8 Hz, H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 56,6 (Cb) ; 69,8 (C8) ; 94,2 (Ca) ; 114,6 (C3) ; 121,9 (C5) ; 123,6 (C1) ; 130,9 (C6) ; 135,2 (C4) ; 157,7 (C2) ; 199,1 (C7). 110Ace : -actoxy-3,4-dimthoxyactophnone
b
O O
a
5
6 1 7 8
O O
10 c
C12H14O5 M= 238,24 Solide blanc !-ctoxylation de 109e stratgie B2C
A une solution de 551 mg de 109e (1,0 q. 3,0 mmol) dans 60 mL dun mlange de benzne / acide actique (9/1), 2,5 g de triactate de manganse dihydrat (3,0 q. 9 mmol) sont ajouts. Le milieu ractionnel est port reflux (systme Dean-Starck) et laiss sous agitation pendant 8 heures (suivi CCM). Aprs filtration, et plusieurs rinages lactate dthyle, la phase organique est successivement lave leau (3 x 40 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 50 mL). Puis elle est sche sur Na2SO4 , filtre et concentre sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Heptane : 1/3) pour donner 350 mg de 110Ace. Rendement = 48% CCM : Rf = 0,23 (Actate dthyle / Heptane : 1/1) RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : 2,20 (s, 3H, Hc) ; 3,90 (s, 3H, Ha ou Hb) ; 3,92 (s, 3H, Ha ou Hb) ; 5,28 (s, 2H, H8) ; 6,85-6,88 (m, 1H, H5) ; 7,45-7,50 (m, 2H, H2+H6) RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 20,6 (Cc) ; 55,7/55,9 (Ca/Cb) ; 65,7 (C8) ; 109,8 (C5) ; 110,1 (C2) ; 123,7 (C6) ; 128,6 (C1) ; 148,7 (C3) ; 153,2 (C4) ; 170,5 (C10) ; 196,9 (C7).
167
9a : 2-hydroxy-4,6-dimthoxy-trans-chalcone ou flavokawine B
5 6 " ! 1 4 3 2
O
a
4' 3'
5' 6' 2' 1'
C17H16O4 M=284,31 Solide jaune
OH
Condensation de Claisen-Schmidt entre 111a et 113a
A une suspension de 1,2 g dhydrure de sodium (4,0 q. 24,1 mmol) dans 12 mL de dimthylformamide anhydre, est additionne goutte goutte et 0C, une solution, dans 20 mL de dimthylformamide anhydre, de 1,2 g de 111a (1,0 q. - 6,02 mmol) et de 689 L de benzaldhyde 113a (1,05 q. 6,32 mmol). Aprs 30 minutes dagitation 0C, le milieu ractionnel est laiss sous agitation temprature ambiante pendant 4 heures (suivi CCM). Aprs neutralisation de la raction avec 20 mL deau, le milieu ractionnel est dilu dans 150 mL de dichloromthane. La phase organique est successivement lave leau (3 x 60 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 90 mL), sche sur Na2SO4 , filtre et concentre sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle/Heptane : 1/3) pour donner 795 mg de 9a. Rendement = 52% CCM : Rf = 0,35 (Actate dthyle/Heptane : 1/3) PF : 90-91C IR (KBr): max= 3123 (O-H, bande large et faible), 1635 (C=O), 1344, 1285, 1221, 1157, 1114 cm-1 UV/Vis : max (MeOH) = 214, 284, 340 nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 3,83 (s, 3H, Ha) ; 3,91 (s, 3H, Hb) ; 5,96 (d, 1H, 4J5-3= 2,2 Hz, H5) ; 6,11 (d, 1H, 4J3-5= 2,2 Hz, H3) ; 7,38-7,43 (m, 3H, H3+H4+H5) ; 7,58-7,62 (m, 2H, H2+H6) ; 7,78 (d, 1H, 3 J-=15,7 Hz, H) ; 7,90 (d, 1H, 3 J-=15,7 Hz, H) ; 14,31 (s, 1H, OH intra). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 55,6 et 55,9 (Ca + Cb) ; 91,3 (C5) ; 93,8 (C3) ; 106,3 (C1) ; 127,5 (C) ; 128,3 (C2 + C6) ; 128,9 (C3 + C5) ; 130,1 (C4) ; 135,6 (C1) ; 142,3 (C) ; 162,6 (C6) ; 166,3 (C4) ; 168,4 (C2) ; 192,6 (C=O). 9b : 2-hydroxy-4,4,6-trimthoxy-trans-chalcone ou flavokawine A
b 5 6 " ! 1 4 3 2
O
a
5' 4' 6' 3' 2' 1'
OH
Condensation de Claisen-Schmidt entre 111a et 113b
A une suspension de 800 mg dhydrure de sodium (4,0 q. 20,0 mmol) dans 12 mL de dimthylformamide anhydre, est additionne goutte goutte et 0C, une solution, dans 25 mL de dimthylformamide anhydre, de 1,0 g de 111a (1,0 q. - 5,0 mmol) et de 652 L de p -anisaldhyde 113b (1,05 q. 5,25 mmol). Aprs 30 minutes dagitation 0C, le milieu ractionnel est laiss sous agitation temprature ambiante pendant 4 heures (suivi CCM). Aprs neutralisation de la raction avec 20 mL deau, le milieu ractionnel est dilu dans 150 mL de dichloromthane. La phase organique est successivement lave leau (3 x 60 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 100 mL), sche sur Na2SO4, filtre et concentre sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle/Heptane : 1/3) pour donner 1,0 g de 9b. Rendement = 64% CCM : Rf = 0,55 (Actate dthyle/Heptane : 1/1) PF : 113-114C
168
IR (KBr): max = 3125 (O-H, bande large et faible), 1638 (C=O), 1341, 1292, 1258, 1223, 1208, 1158, 1114 cm-1 UV/Vis : max (MeOH) = 212, 276, 362 nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 3,81 (s, 6H, Ha ou Hc) ; 3,83 (s, 3H, Ha ou Hc) ; 3,91 (s, 3H, Hb) ; 5,94 (d, 1H, 4J5-3= 2,2 Hz, H5) ; 6,09 (d, 1H, 4J3-5= 2,2 Hz, H3) ; 6,91 (m, 2H, Partie AA dun systme de spins AAMM, H3+H5) ; 7,55 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AAMM, H2+H6) ; 7,75 (d, 1H, 3 J-=15,7 Hz, H) ; 7,81 (d, 1H, 3 J-=15,7 Hz, H) ; 14,44 (s, 1H, OH intra). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 55,4/55,5 (Ca/Cc) ; 55,8 (Cb) ; 91,2 (C5) ; 93,8 (C3) ; 106,3 (C1) ; 114,3 (C3+C5) ; 125,1 (C) ; 128,3 (C1) ; 130,1 (C2+C6) ; 142,4 (C) ; 161,4 (C4) ; 162,4 (C6) ; 166,0 (C4) ; 168,4 (C2) ; 192,6 (C=O). 9c : 2-hydroxy-3,4,4,5,6-pentamthoxy-trans-chalcone
c 5 b 6 " ! 1 5' 4' 6' 3' 2' 1'
O
4 3 2
O O
d e
O
a
OH
Condensation de Claisen-Schmidt entre 111a et 113c
A une suspension de 800 mg dhydrure de sodium (4,0 q. 20,0 mmol) dans 13 mL de dimthylformamide anhydre, est additionne goutte goutte et 0C, une solution, dans 10 mL de dimthylformamide anhydre, de 1,0 g de 111a (1,0 q. 5,0 mmol) et de 1,05 g de 113c (1,05 q. 5,25 mmol). Aprs 30 minutes dagitation 0C, le milieu ractionnel est laiss sous agitation temprature ambiante pendant 4 heures (suivi CCM). Aprs neutralisation de la raction avec 20 mL deau, le milieu ractionnel est dilu dans 150 mL de dichloromthane. La phase organique est successivement lave leau (3 x 60 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 100 mL), sche sur Na2SO4, filtre et concentre sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle/Heptane : 1/1) pour donner 1,07 g de 9c. Rendement = 57% CCM : Rf = 0,40 (Actate dthyle/Heptane : 1/1) PF : 174-175C IR (KBr): max = 3000 (O-H, bande large et faible), 1636 (C=O), 1327, 1279, 1244, 1221, 1157, 1122 cm-1 UV/Vis : max (MeOH) = 222, 288, 356 nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 3,83 (s, 6H, Ha ou Hb ou Hd) ; 3,85 (s, 3H, Ha ou Hb ou Hd) ; 3,90 (s, 3H, Ha ou Hb ou Hd) ; 3,91 (s, 6H, Hc+He) ; 5,95 (d, 1H, 4J5-3= 2,2 Hz, H5) ; 6,10 (d, 1H, 4J3-5= 2,2 Hz, H3) ; 6,83 (s, 2H, H2+H6) ; 7,69 (d, 1H, 3J-=15,7 Hz, H) ; 7,80 (d, 1H, 3J-=15,7 Hz, H) ; 14,28 (s, 1H, OH intra). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 55,6/55,8 (Ca/Cb) ; 56,1 (Cc+Ce) ; 61,0 (Cd) ; 91,3 (C5) ; 93,9 (C3) ; 105,6 (C2+C6) ; 106,3 (C1) ; 126,9 (C) ; 131,1 (C1) ; 140,1 (C4) ; 142,4 (C) ; 153,4 (C3+C5) ; 162,4 (C6) ; 166,2 (C4) ; 168,4 (C2) ; 192,3 (C=O).
169
12a : ()-5,7-dimthoxyflavanone ou ()-5,7-dimthylpinocembrine
5' 6' 4' 3' 2' 8
O
a 6
2 3 4
1'
C17H16O4 M=284,31 Solide beige Cyclisation intramolculaire de 9a
10
O
b
Une solution de 867 mg de chalcone 9a (1,0 q. 3,05 mmol) dans un minimum dacide actique est porte reflux et aprs une nuit dagitation, le milieu ractionnel est concentr sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : Gradient Actate dthyle / Heptane : 1/2 3/2) pour donner la flavanone 12a et la chalcone rsiduelle 9a qui est engage dans un nouveau cycle (cyclisation sparation). Aprs deux cycles successifs, 789 mg de 12a sont rcuprs. Rendement = 91% CCM : Rf = 0,30 (Actate dthyle/Heptane : 1/1) PF : 158-159C IR (KBr): max = 1671 (C=O), 1606, 1262, 1244, 1217, 1199, 1161, 1110, 1067 cm-1 UV/Vis : max (MeOH) = 216, 284, 316 (p.) nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 2,79 (dd, 1H, 2J3eq-3ax= 16,5 Hz, et 3J3eq-2= 2,9 Hz, H3eq) ; 3,01 (dd, 1H, 2 J3ax-3eq= 16,5 Hz, et 3J3ax-2= 13,2 Hz, H3ax) ; 3,81 (s, 3H, Ha ou Hb) ; 3,89 (s, 3H, Ha ou Hb) ; 5,40 (dd, 1H, 3J2-3eq= 2,9 Hz, 3J2-3ax= 13,2 Hz, H2) ; 6,09 (d, 1H, 4J6-8= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,15 (d, 1H, 4J8-6= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,33-7,47 (m, 5H, H2+H3+H4+H5+H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 45,7 (C3) ; 55,6 (Ca) ; 56,2 (Cb) ; 79,2 (C2) ; 93,1 (C6) ; 93,5 (C8) ; 106,0 (C10) ; 126,1 (C2+C6) ; 128,7 (C4) ; 128,8 (C3+C5) ; 138,8 (C1) ; 162,3 (C9) ; 165,0 (C5) ; 165,9 (C7) ; 189,2 (C4). SM (APCI, mode positif) : m/z(%) 285(100) [M + H]+ , 283(65), 181(40) 12b : ()-4,5,7-trimthoxyflavanone ou ()-4,5,7-trimthylnaringnine
c 5' 6' 8 4' 9
O
3'
O
a 6
2 3 4
1'
2'
C18H18O5 M=314,33 Solide blanc Cyclisation intramolculaire de 9b
10 b
Une solution de 1,372 g de chalcone 9b (1,0 q. 4,36 mmol) dans un minimum dacide actique est porte reflux et aprs une nuit dagitation, le milieu ractionnel est concentr sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : Gradient Actate dthyle / Heptane : 2/3 3/2) pour donner la flavanone 12b et la chalcone rsiduelle 9b qui est engage dans un nouveau cycle (cyclisation sparation). Aprs deux cycles successifs, 1,235 g de 12b sont rcuprs. Rendement = 91% CCM : Rf = 0,25 (Actate dthyle/Heptane : 1/1) PF : 125-126C IR (KBr): max = 1671 (C=O), 1611, 1264, 1215, 1205, 1176, 1159, 1111, 1069, 1029 cm-1 UV/Vis : max (MeOH) = 228, 282, 314 (p.) nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 2,74 (dd, 1H, 2J3eq-3ax= 16,5 Hz, et 3J3eq-2= 2,9 Hz, H3eq) ; 3,01 (dd, 1H, 2 J3ax-3eq= 16,5 Hz, et 3J3ax-2= 13,2 Hz, H3ax) ; 3,79 (s, 3H, Ha ou Hb) ; 3,80 (s, 3H, Ha ou Hb) ; 3,87 (s, 3H, Hc) ; 5,33 (dd, 1H, 3J2-3eq= 2,9 Hz, 3J2-3ax= 13,2 Hz, H2) ; 6,06 (d, 1H, 4J6-8= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,11 (d, 1H, 4J8-6= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,92 (m, 2H, partie AA dun systme de spins AAMM, H3+H5) ; 7,36 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AAMM, H2+H6).
170
RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 45,4 (C3) ; 55,3 (Cc) ; 55,6 (Ca) ; 56,1 (Cb) ; 78,9 (C2) ; 93,1 (C6) ; 93,5 (C8) ; 105,9 (C10) ; 114,1 (C3+C5) ; 127,7 (C2+C6) ; 130,8 (C1) ; 159,9 (C4) ; 162,2 (C9) ; 165,1 (C5) ; 165,9 (C7) ; 189,4 (C4). SM (APCI, mode positif) : m/z(%) 315(100) [M + H]+ , 313(75), 181(30) 12c : ()-3,4,5,5,7-pentamthoxyflavanone
c
O
6' 5' 4' 9
O
3'
O
a 6
2 3 4
1'
2'
O
e
C20H22O7 M=374,38 Solide blanc Cyclisation intramolculaire de 9c
10 b
Une solution de 1,038 g de chalcone 9c (1,0 q. 2,77 mmol) dans un minimum dacide actique est porte reflux et aprs une nuit dagitation, le milieu ractionnel est concentr sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : Gradient Actate dthyle / Heptane : 1/1 3/1) pour donner la flavanone 12c et la chalcone rsiduelle 9c qui est engage dans un nouveau cycle (cyclisation sparation). Aprs deux cycles successifs, 780 g de 12c sont rcuprs. Rendement = 75% CCM : Rf = 0,30 (Actate dthyle/Heptane : 3/1) PF : 171-172C IR (KBr): max = 1663 (C=O), 1618, 1269, 1257, 1221, 1165, 1109, 1073 cm-1 UV/Vis : max (MeOH) = 214, 282 nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 2,77 (dd, 1H, 2J3eq-3ax= 16,5 Hz, et 3J3eq-2= 2,9 Hz, H3eq) ; 3,01 (dd, 1H, 2J3ax-3eq= 16,5 Hz, et 3J3ax-2= 13,1 Hz, H3ax) ; 3,82 (s, 3H, Ha ou Hb ou Hd) ; 3,84 (s, 3H, Ha ou Hb ou Hd) ; 3,88 (s, 6H, Hc+He) ; 3,89 (s, 3H, Ha ou Hb ou Hd) ; 5,32 (dd, 1H, 3J2-3eq= 2,9 Hz, 3J24 4 3ax= 13,1 Hz, H2) ; 6,09 (d, 1H, J6-8= 2,6 Hz, H6 ou H8) ; 6,16 (d, 1H, J8-6= 2,6 Hz, H6 ou H8) ; 6,66 (s, 2H, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 45,7 (C3) ; 55,6/56,2 (Ca/Cb/Cc/Ce) ; 60,8 (Cd) ; 79,4 (C2) ; 93,2 et 93,6 (C6+C8) ; 103,2 (C2+C6) ; 105,9 (C10) ; 134,3 (C1) ; 138,1 (C4) ; 153,5 (C3+C5) ; 162,3 (C9) ; 164,8 (C5) ; 166,0 (C7) ; 189,1 (C4). SM (APCI, mode positif) : m/z (%) 375(100) [M + H] +, 373(50), 338(80), 181(10). 114a : ()-2,3-trans-3-actoxy-5,7-dimthoxyflavanone 5,7-dimthylpinobanksine
5' 6' 4' 1' 3 6 5 10 4 3' 2' 8
()-2,3- trans-3-actyl-
O
a
C19H18O6 M=342,34 Solide blanc
O
11
Actoxylation de 12a
c
O
b
A une solution de 934 mg de flavanone 12a (1,0 q. 3,29 mmol) dans 50 mL dun mlange benzne / acide actique (10/1), sont ajouts 1,057 g de triactate de manganse dihydrat (1,2 q. 3,94 mmol) et le milieu ractionnel est port reflux (appareil de Dean-Starck adapt au montage). Une fois la conversion termine (suivi CCM), les sels de manganse sont filtrs et lavs lactate dthyle. La phase organique est successivement lave leau (3 x 40 mL), avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 70 mL), sche sur Na2SO4, filtre et concentre sous pression rduite. Le
171
rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : Gradient Actate dthyle / Heptane : 1/2 1/1) pour donner 533 mg de 114a. Rendement = 50% Remarque : Si le triactate de manganse nest pas sch selon les conditions de Watt, un nouvel quivalent de triactate de manganse doit tre ajout au mlange ractionnel au bout de 3 heures de reflux (Dunlap, N. K. ; Sabol, M. R. ; Watt, D. S. ; Tet. Lett., 1984, 25, 5839-5842). CCM : Rf = 0,52 (Actate dthyle/Heptane : 2/1) IR (KBr): max = 1741 (C=O ester), 1684 (C=O), 1363, 1248, 1232, 1208, 1144, 1105, 1067, 1011 cm-1 UV/Vis : max (MeOH) = 212, 228 (p.), 282, 322 (p.) nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 2,00 (s, 3H, Hc) ; 3,79 (s, 3H, Ha ou Hb) ; 3,86 (s, 3H, Ha ou Hb) ; 5,33 (d, 1H, 3J3-2trans= 12,1 Hz, H3) ; 5,65 (d, 1H, 3J2-3trans= 12,1 Hz, H2) ; 6,09 (d, 1H, 4 J6-8= 2,2 Hz, H6) ; 6,11 (d, 1H, 4J8-6= 2,2 Hz, H8) ; 7,36-7,49 (m, 5H, H2+H3+H4+H5+H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 20,4 (Cc) ; 55,6/56,2 (Ca/Cb) ; 73,6 (C3) ; 81,0 (C2) ; 93,5 (C6 et C8) ; 104,2 (C10) ; 127,4 (C2+C6) ; 128,4 (C4) ; 128,8 (C3+C5) ; 135,7 (C1) ; 162,5 (C9) ; 165,0 (C5) ; 166,5 (C7) ; 169,5 (C11) ; 189,2 (C4). SM (ESI) : m/z(%) 343(100) [M + H]+ SM-HR (ESI) : C19H19O6 [M + H]+ Calcul : 343,1176 / Trouv : 343,1172 114b : ()-2,3-trans-3-actoxy-4,5,7-trimthoxyflavanone actyl-4,5,7-trimthylpinobanksine
c 5' 6' 8 4' 9
ou
()-2,3-trans-3-
O
3'
O
a 6
2 3
1'
2'
10 b
O
11
Actoxylation de 12b
d
A une solution de 1,235 g de flavanone 12b (1,0 q. 3,93 mmol) dans 60 mL dun mlange benzne / acide actique (10/1), sont ajouts 1,580 g de triactate de manganse dihydrat (1,5 q. 5,89 mmol) et le milieu ractionnel est port reflux (appareil de Dean-Starck adapt au montage). Une fois la conversion termine (suivi CCM), les sels de manganse sont filtrs et lavs lactate dthyle. La phase organique est successivement lave leau (3 x 40 mL), avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 70 mL), sche sur Na2SO4, filtre et concentre sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : Gradient Actate dthyle / Heptane : 1/2 1/1) pour donner 579 mg de 114b. Rendement = 40% Remarque : Si le triactate de manganse nest pas sch selon les conditions de Watt, un nouvel quivalent de triactate de manganse doit tre ajout au mlange ractionnel au bout de 3 heures de reflux (Dunlap, N. K. ; Sabol, M. R. ; Watt, D. S. ; Tet. Lett., 1984, 25, 5839-5842). CCM : Rf = 0,30 (Actate dthyle/Heptane : 2/1) PF : 145-146C IR (KBr): max = 1736 (C=O ester), 1697 (C=O), 1615, 1371, 1253, 1233, 1219, 1168, 1111, 1084, 1024 cm-1 UV/Vis : max (MeOH) = 218, 228, 284, 320 (p.) nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 2,02 (s, 3H, Hd) ; 3,81 (s, 3H, Ha ou Hb ou Hc) ; 3,82 (s, 3H, Ha ou Hb ou Hc) ; 3,88 (s, 3H, Ha ou Hb ou Hc) ; 5,30 (d, 1H, 3J3-2trans= 12,1 Hz, H3) ; 5,67 (d, 1H, 3J2-3trans= 12,1 Hz, H2) ; 6,10 (d, 1H, 4J6-8= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,11 (d, 1H, 4J8-6= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,93 (m, 2H, partie AA dun systme de spins AAMM, H3+H5) ; 7,40 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AAMM, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 20,4 (Cd) ; 55,3/55,6/56,1 (Ca/Cb/Cc) ; 73,6 (C3) ; 80,8 (C2) ; 93,4 et 93,5 (C6+C8) ; 104,2 (C10) ; 114,1 (C3+C5) ; 128,8 (C2+C6) ; 130,8 (C1) ; 160,3 (C4) ; 162,4 (C9) ; 164,3 (C5) ; 166,5 (C7) ; 169,5 (C11) ; 185,0 (C4).
172
SM (ESI, mode positif ) : m/z(%) 411(13) [M + K]+, 395 (29) [M + Na]+, 373(100) [M + H]+ , 313(47), 385(7). SM-HR (ESI, mode positif) : C20H21O7 [M + H]+ Calcul : 373,1281 / Trouv : 373,1271 114c : ()-2,3- trans-3-actoxy-3,4,5,5,7-pentamthoxyflavanone trans-3-actyl-3,4,5,5,7-pentamthylpinobanksine
c
ou
()-2,3-
O
6' 5' 4' 9
O
3'
O
a 6
O
4 b
2 3
1'
2'
O
e
C22H24O9 M=432,42 Solide jaune Actoxylation de 12c
10
O
11
A une solution de 806 mg de flavanone 12c (1,0 q. 2,15 mmol) dans 30 mL dun mlange benzne / acide actique (10/1), sont ajouts 866 mg de triactate de manganse dihydrat (1,5 q. 3,23 mmol) et le milieu ractionnel est port reflux (appareil de Dean-Starck adapt au montage). Une fois la conversion termine (suivi CCM), les sels de manganse sont filtrs et lavs lactate dthyle. La phase organique est successivement lave leau (3 x 40 mL), avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 50 mL), sche sur Na2SO4, filtre et concentre sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : Gradient Actate dthyle / Heptane : 3/2 2/1) pour donner 610 mg de 114c. Rendement = 66% Remarque : Si le triactate de manganse nest pas sch selon les conditions de Watt, un nouvel quivalent de triactate de manganse doit tre ajout au mlange ractionnel au bout de 3 heures de reflux (Dunlap, N. K. ; Sabol, M. R. ; Watt, D. S. ; Tet. Lett., 1984, 25, 5839-5842). CCM : Rf = 0,40 (Actate dthyle/Heptane : 3/1) IR (KBr): max = 1742 (C=O ester), 1688 (C=O), 1619, 1327, 1258, 1248, 1218, 1165, 1111, 1069 cm-1 UV/Vis : max (MeOH) = 210, 230 (p.), 286, 316 (p.) nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 2,05 (s, 3H, Hf) ; 3,81 (s, 3H, Ha ou Hb ou Hd) ; 3,86 (s, 3H, Ha ou Hb ou Hd) ; 3,87 (s, 6H, Hc+He) ; 3,88 (s, 3H, Ha ou Hb ou Hd) ; 5,13 (d, 1H, 3J3-2trans= 12,1 Hz, H3) ; 5,67 (d, 1H, 3J2-3trans= 12,1 Hz, H2) ; 6,11 (d, 1H, 4J6-8= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,14 (d, 1H, 4J8-6 = 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,69 (s, 2H, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 20,5 (Cf) ; 55,7/56,2 (Ca/Cb/Cc/Ce) ; 60,9 (Cd) ; 73,4 (C3) ; 81,2 (C2) ; 93,6 (C6+C8) ; 104,5 (C2+C6) ; 108,5 (C10) ; 131,0 (C1) ; 138,7 (C4) ; 153,4 (C3+C5) ; 162,5 (C9) ; 164,0 (C5) ; 166,5 (C7) ; 169,5 (C11) ; 184,8 (C4). SM (ESI) : m/z(%) 433(100) [M + H]+ SM-HR (ESI) : C22H25O9 [M + H]+ Calcul : 433,1493 / Trouv : 433,1492 112a : ()-2,3-trans-5,7-dimthoxy-dihydroflavonol dimthylpinobanksine
5' 6' 4' 1' 3 6 5 10 4 3' 2' 8
ou
()-2,3-trans-5,7-
O
a
O H
!
O
b
A une solution de 423 mg de 114a (1,0 q. 1,3 mmol) dans un mlange ttrahydrofurane / mthanol / eau (2/4/1) sont ajouts 197 mg de trifluoromthanesulphonate de scandium (0,2 q.
173
0,4 mmol). Le milieu ractionnel est laiss sous agitation temprature ambiante pendant 7 jours (suivi CCM), puis il est concentr sous pression rduite. Le rsidu est solubilis dans 50 mL dactate dthyle et la phase organique est successivement lave leau (3 x 30 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 50 mL), sche sur Na2SO4 , filtre et concentre sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Heptane : 3/2) pour donner 312 mg de 112a. Rendement = 84% Remarque : le trifluoromthanesulphonate de scandium peut tre recycl en extrayant plusieurs fois les phases aqueuses au dichloromthane et en concentrant lensemble des phases organiques sous pression rduite. Le rsidu est ensuite mis scher sous la pompe palette une nuit 60C. CCM : Rf = 0,50 (Actate dthyle/Heptane : 3/1) IR (KBr): max = 3455 (O-H), 1692 (C=O), 1610, 1365, 1241, 1229, 1202, 1144, 1102, 1059, 1014 cm-1 UV/Vis : max (MeOH) = 212, 228 (p.), 282, 322 (p.) nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 3,79 (s, 3H, Ha ou Hb) ; 3,89 (s, 3H, Ha ou Hb) ; 4,06 (d, 1H, 3 J-3= 1,8 Hz, H) ; 4,42 (dd, 1H, 3J3-=1,8 Hz, 3J3-2trans= 12,1 Hz, H3) ; 5,01 (d, 1H, 3J2-3trans= 12,1 Hz, H2) ; 6,10 (d, 1H, 4J6-8= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,11 (d, 1H, 4J8-6= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,38-7,45 (m, 3H, H3+H4+H5) ; 7,52-7,58 (m, 2H, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 55,7/56,2 (Ca/Cb) ; 72,7 (C3) ; 83,2 (C2) ; 93,3 et 93,7 (C6 et C8) ; 102,9 (C10) ; 127,5 (C2+C6) ; 128,7 (C3+C5) ; 129,2 (C4) ; 136,6 (C1) ; 162,1 (C9) ; 164,9 (C5) ; 167,0 (C7) ; 190,7 (C4). SM (ESI) : m/z(%) 301(100) [M + H]+ SM-HR (ESI) : C17H17O5 [M + H]+ Calcul : 301,1071 / Trouv : 301,1063 112b : ()-2,3-trans-4,5,7-trimthoxy-dihydroflavonol trimthylaromadendrine
c 5' 6' 8 4' 9
ou
()-2,3-trans-5,7-
O
3'
O
a 6
2 3
1'
2'
10 b
O H
!
A une solution de 550 mg de 114b (1,0 q. 1,5 mmol) dans un mlange ttrahydrofurane / mthanol / eau (2/4/1) sont ajouts 225 mg de trifluoromthanesulphonate de scandium (0,2 q. 0,44 mmol). Le milieu ractionnel est laiss sous agitation temprature ambiante pendant 7 jours (suivi CCM), puis il est concentr sous pression rduite. Le rsidu est solubilis dans 50 mL dactate dthyle et la phase organique est successivement lave leau (3 x 30 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 40 mL), sche sur Na2SO4 , filtre et concentre sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : Gradient Actate dthyle / Heptane : 3/2 2/1) pour donner 300 mg de 112b. Rendement = 61% Remarque : le trifluoromthanesulphonate de scandium peut tre recycl en extrayant plusieurs fois les phases aqueuses au dichloromthane et en concentrant lensemble des phases organiques sous pression rduite. Le rsidu est ensuite mis scher sous la pompe palette une nuit 60C. CCM : Rf = 0,45 (Actate dthyle/Heptane : 3/1) IR (KBr): max = 3456 (O-H), 1693 (C=O), 1612, 1364, 1251, 1229, 1174, 1107, 1084, 1012 cm-1 UV/Vis : max (MeOH) = 218, 228 , 284, 320 (p.) nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 3,81 (s, 3H, Ha ou Hb ou Hc) ; 3,89 (s, 3H, Ha ou Hb ou Hc) ; 3,91 (s, 3H, Ha ou Hb ou Hc) ; 4,05 (d, 1H, 3J-3= 1,8 Hz, H) ; 4,44 (dd, 1H, 3J3-=1,8 Hz, 3J3-2trans= 12,1 Hz, H3) ; 4,97 (d, 1H, 3J2-3trans= 12,1 Hz, H2) ; 6,10 (d, 1H, 4J6-8= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,11 (d, 1H, 4J86= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,97 (m, 2H, partie AA dun systme de spins AAMM, H3+H5) ; 7,48 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AAMM, H2+H6).
174
RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 55,3/55,7/56,2 (Ca/Cb/Cc) ; 72,6 (C3) ; 83,0 (C2) ; 93,3 et 93,6 (C6 et C8) ; 102,9 (C10) ; 114,1 (C3+C5) ; 128,6 (C1) ; 138,9 (C2+C6) ; 160,3 (C4) ; 162,1 (C9) ; 165,0 (C5) ; 167,0 (C7) ; 190,9 (C4). SM (ESI, mode positif ) : m/z(%) 331(100) [M + H]+ SM-HR (ESI, mode positif) : C18H19O6 [M + H]+ Calcul : 331,1176 / Trouv : 331,1163 112c : ()-2,3-trans-3,4,5,5,7-pentamthoxy-dihydroflavonol ou ()-2,3-trans3,4,5,5,7-pentamthylamplopsine
c
O
6' 5' 4' 9
O
3'
O
a 6
2 3
1'
2'
O
e
10 b
O H
!
A une solution de 116 mg de 114c (1,0 q. 0,27 mmol) dans un mlange ttrahydrofurane / mthanol / eau (2/4/1) sont ajouts 41 mg de trifluoromthanesulphonate de scandium (0,2 q. 0,08 mmol). Le milieu ractionnel est laiss sous agitation temprature ambiante pendant 7 jours (suivi CCM), puis il est concentr sous pression rduite. Le rsidu est solubilis dans 25 mL dactate dthyle et la phase organique est successivement lave leau (3 x 20 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 30 mL), sche sur Na2SO4 , filtre et concentre sous pression rduite. Le rsidu est purifi par recristallisation dans lactate dthyle pour donner 101 mg de 112c. Rendement = 97% Remarque : le trifluoromthanesulphonate de scandium peut tre recycl en extrayant plusieurs fois les phases aqueuses au dichloromthane et en concentrant lensemble des phases organiques sous pression rduite. Le rsidu est ensuite mis scher sous la pompe palette une nuit 60C. CCM : Rf = 0,50 (Actate dthyle/Heptane : 3/1) IR (KBr): max = 3448 (O-H), 1685 (C=O), 1608, 1345, 1245, 1217, 1195, 1158, 1010 cm-1 UV/Vis : max (MeOH) = 218, 284, 320 (p.) nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 3,82 (s, 3H, Ha ou Hb ou Hd) ; 3,86 (s, 3H, Ha ou Hb ou Hd) ; 3,90 (s, 6H, Hc + He) ; 3,91 (s, 3H, Ha ou Hb ou Hd) ; 4,10 (d, 1H, 3J-3= 1,8 Hz, H) ; 4,44 (dd, 1H, 3J33 3 4 =1,8 Hz, J3-2trans= 12,1 Hz, H3) ; 4,95 (d, 1H, J2-3trans = 12,1 Hz, H2) ; 6,12 (d, 1H, J6-8= 2,2 Hz, H6 4 ou H8) ; 6,14 (d, 1H, J8-6= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,77 (s, 2H, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 55,8/56,3 (Ca/Cb) ; 56,1 (Cc/Ce) ; 3,90 (Cd) ; 72,6 (C3) ; 83,6 (C2) ; 93,4/93,7 (C6/C8) ; 102,8 (C10) ; 104,6 (C2+C6) ; 131,9 (C1) ; 138,6 (C4) ; 153,4 (C3+C5) ; 162,2 (C9) ; 164,8 (C5) ; 167,1 (C7) ; 190,6 (C4). SM (ESI, mode positif ) : m/z(%) 391(100) [M + H]+ SM-HR (ESI, mode positif) : C20H23O8 [M + H]+ Calcul : 391,1393 / Trouv : 391,1384 38a : 5,7-dimthoxyflavonol ou 5,7-dimthylgalangine
5' 6' 4' 3' 2' 8
O
a 6
2 3
1'
C17H14O5 M=298,29 Solide beige
10
O H
!
O
b
Oxydation de Parikh-Doering de 112a
A une solution de 312 mg de 112a (1,0 q. 1,09 mmol) dans un mlange dimthylsulfoxyde / dichloromthane (1/2), sont ajouts -15C, 764 L de trithylamine anhydre (5,0 q. 5,48 mmol) et 708 mg du complexe SO3-pyridine (4,0 q. 4,36 mmol) en trois portions sur 10 minutes (la
175
premire portion tant ajoute avant laddition de la trithylamine). Le milieu ractionnel est agit 30 minutes -10C et laiss sous agitation temprature ambiante pendant 12 heures (suivi CCM). Le milieu est ensuite dilu avec 45 mL dactate dthyle puis la phase organique est successivement lave leau (3 x 30 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 40 mL), sche sur Na2SO4 , filtre et concentre sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Heptane : 3/1) pour donner 231 mg de 38a. Rendement = 75% CCM : Rf = 0,35 (Actate dthyle/Heptane : 3/1) PF : 173-174C IR (KBr): max = 3313 (O-H), 1614 (C=O), 1298, 1232, 1158, 1135, 1051, 1007 cm-1 UV/Vis : max (MeOH) = 214, 238 (p.), 262, 348 nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 3,92 (s, 3H, Ha ou Hb) ; 3,99 (s, 3H, Ha ou Hb) ; 6,36 (d, 1H, 4J6-8= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,57 (d, 1H, 4J8-6= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,42-7,54 (m, 4H, H+H3+H4+H5) ; 8,21 (m, 2H, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 55,8/56,4 (Ca/Cb) ; 92,4 (C8) ; 95,7 (C6) ; 106,2 (C10) ; 127,1 (C2+C6) ; 128,5 (C3+C5) ; 129,6 (C4) ; 131,1 (C1) ; 138,3 (C3) ; 141,7 (C2) ; 159,0/160,5 (C5/C9) ; 167,5 (C7) ; 172,1 (C4). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 299(100) [M + H]+ SM-HR (ESI, mode positif) : C17H15O5 [M + H]+ Calcul : 299,0914 / Trouv : 299,0891 38b : 4,5,7-trimthoxyflavonol ou 4,5,7-trimthylkaempfrol
c 5' 6' 8 4' 9
O
3'
O
a 6
2 3
1'
2'
10 b
O H
!
Oxydation de Parikh-Doering de 112b
A une solution de 100 mg de 112b (1,0 q. 0,30 mmol) dans un mlange dimthylsulfoxyde / dichloromthane (1/2), sont ajouts -15C, 208 L de trithylamine anhydre (5,0 q. 1,5 mmol) et 194,8 mg du complexe SO3-pyridine (4,0 q. 1,2 mmol) en trois portions sur 10 minutes (la premire portion tant ajoute avant laddition de la trithylamine). Le milieu ractionnel est agit 30 minutes -10C et laiss sous agitation temprature ambiante pendant 12 heures (suivi CCM). Le milieu est ensuite dilu avec 35 mL dactate dthyle puis la phase organique est successivement lave leau (3 x 20 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 30 mL), sche sur Na2SO4 , filtre et concentre sous pression rduite. Le rsidu est purifi par recristallisation dans lactate dthyle pour donner 81 mg de 38b. Rendement = 82% CCM : Rf = 0,40 (Actate dthyle/Heptane : 3/1) PF : 176-177C IR (KBr): max = 3200 (O-H), 1617 (C=O), 1258, 1221, 1183, 1134, 1101, 1055, 1028 cm-1 UV/Vis : max (MeOH) = 208, 230 (p.), 258, 310, 356 nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 3,88 (s, 3H, Ha ou Hb ou Hc) ; 3,90 (s, 3H, Ha ou Hb ou Hc) ; 3,97(s, 3H, Ha ou Hb ou Hc) ; 6,33 (d, 1H, 4J6-8= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,53 (d, 1H, 4J8-6= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,01 (m, 2H, partie AA dun systme de spins AAMM, H3+H5) ; 7,36 (s, 1H, H) ; 8,16 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AAMM, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 55,4/55,8/56,4 (Ca/Cb/Cc) ; 92,4 (C8) ; 95,6 (C6) ; 106,2 (C10) ; 114,0 (C3+C5) ; 123,6 (C1) ; 128,9 (C2+C6) ; 137,4 (C3) ; 142,2 (C2) ; 158,8/160,5/160,6 (C5/C9/C4) ; 164,3 (C7) ; 171,9 (C4). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 329(100) [M + H]+ SM-HR (ESI, mode positif) : C18H17O6 [M + H]+ Calcul : 329,1020 / Trouv : 329,1001
176
38c : 3,4,5,5,7-pentamthoxyflavonol ou 3,4,5,5,7-pentamthylmyrictine
c
O
6' 5' 4' 9
O
3'
O
a 6
2 3
1'
2'
O
e
C20H20O8 M=388,35 Solide beige
10 b
O H
!
Oxydation de Parikh-Doering de 112c
Une solution de 74 mg de 112c (1,0 q. 0,19 mmol) dans un mlange dimthylsulfoxyde / dichloromthane (1/2), sont ajouts -15C, 132 L de trithylamine anhydre (5,0 q. 0,95 mmol) et 123 mg du complexe SO3-pyridine (4,0 q. 0,76 mmol) en trois portions sur 10 minutes (la premire portion tant ajoute avant laddition de la trithylamine). Le milieu ractionnel est agit 30 minutes -10C et laiss sous agitation temprature ambiante pendant 12 heures (suivi CCM). Le milieu est ensuite dilu avec 35 mL dactate dthyle puis la phase organique est successivement lave leau (3 x 20 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 30 mL), sche sur Na2SO4 , filtre et concentre sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Chloroforme : 1/10) pour donner 60 mg de 38c. Rendement = 80% CCM : Rf = 0,26 (Actate dthyle/Heptane : 2/1) PF : 231-232C IR (KBr): max = 3258 (O-H), 1617 (C=O), 1260, 1214, 1179, 1130, 1058, 1022 cm-1 UV/Vis : max (MeOH) = 212, 250, 262 (p.), 306, 356 nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 3,93 (s, 6H, Hc+He) ; 3,94 (s, 3H, Ha ou Hb ou Hd) ; 3,97 (s, 6H, Ha ou Hb ou Hc) ; 6,37 (d, 1H, 4J6-8= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,55 (d, 1H, 4J8-6= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,47 (s, 1H, H) ; 7,49 (s, 2H, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 55,9/56,4 (Ca/Cb) ; 56,3 (Cc + Ce) ; 61,0 (Cd) ; 92,4 (C8) ; 95,8 (C6) ; 104,9 (C2+C6) ; 106,2 (C10) ; 126,3 (C1) ; 138,3 (C3) ; 139,7 (C2) ; 141,6 (C4) ; 153,2 (C3+C5) ; 158,8 (C9) ; 160,5 (C5) ; 164,5 (C7) ; 171,9 (C4). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 389(100) [M + H]+, 338(45) SM-HR (ESI, mode positif) : C20H21O8 [M + H]+ Calcul : 389,1231 / Trouv : 389,1233 21e : 4,5,7-trimthoxyflavone ou 4,5,7-trimthylapignine
c 5' 6' 8 4'
O
3'
O
a 6
10 b
C18H16O5 M=312,32 1' Solide blanc 2' 3 Produit secondaire issu de la transformation flavanone 12b-dihydroflavonol 112b
CCM : Rf = 0,20 (Actate dthyle) PF : 156-157C UV/Vis : max (MeOH) = 212, 250 (p.), 268, 314 nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 3,87 (s, 3H, Ha ou Hb ou Hc) ; 3,90 (s, 3H, Ha ou Hb ou Hc) ; 3,95 (s, 3H, Ha ou Hb ou Hc) ; 6,36 (d, 1H, 4J6-8= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,55 (d, 1H, 4 J8-6= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,58 (s, 1H, H3) ; 6,99 (m, 2H, partie AA dun systme de spins AAMM, H3+H5) ; 7,81 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AAMM, H2+H6).
177
RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 55,5/55,7/56,4 (Ca/Cb/Cc) ; 92,8 (C6) ; 96,1 (C8) ; 107,7 (C3) ; 109,2 (C10) ; 114,3 (C3+C5) ; 123,8 (C1) ; 127,6 (C2+C6) ; 159,8/160,7/160,9 (C2/C5/C7) ; 162,0 (C4) ; 163,9 (C9) ; 177,7 (C4). MA : Calcul : C% 69,22 - H% 5,16 / Trouv : C% 68,99 - H% 5,23 111b : 2-hydroxy-4,6-di(mthoxymthoxy)actophnone
O
c
O
3
O
7
b 8
O
d
C12H16O6 M=256,25 Huile incolore
2 !
OH
Protection rgioslective de la 2,4,6trihydroxyactophnone
A une solution de 570 mg de 2,4,6-trihydroxyactophnone monohydrate (1,0 q. 3,0 mmol) dans 40 mL dactone, sont ajouts 2,5 g de carbonate de potassium (6,0 q. 18,0 mmol), suivi de laddition goutte goutte, temprature ambiante, de 895 L de chlorure de mthoxymthyle (4,0 q. 12,0 mmol). Le milieu ractionnel est laiss sous agitation 30 minutes temprature ambiante, puis il est port reflux et laiss sous agitation pendant 2 heures (suivi CCM). Aprs vaporation partielle de lactone, 40 mL deau sont ajouts. La phase aqueuse est extraite avec de lactate dthyle (3 x 50 mL). Lensemble des phases organiques est lav avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 70 mL), sch sur Na2SO4 , filtr et concentr sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Heptane : 1/2) pour donner 486 mg de 111b. Rendement = 63% CCM : Rf = 0,69 (Actate dthyle / Heptane : 1/1) RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : 2,64 (s, 3H, H8) ; 3,45 (s, 3H, Hc ou Hd) ; 3,50 (s, 3H, Hc ou Hd) ; 5,15 (s, 2H, Ha ou Hb) ; 5,24 (s, 2H, Ha ou Hb) ; 6,23 (d, 1H, 4J5-3=2,5 Hz, H3 ou H5) ; 6,24 (d, 1H, 4J35=2,5 Hz, H3 ou H5) ; 13,7 (s,1H, OH intra). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 32,9 (C8) ; 56,4/56,6 (Cc/Cd) ; 93,9 (C5) ; 94,4 (Ca+Cb) ; 97,1 (C3) ; 106,9 (C1) ; 160,3 (C2) ; 163,4 (C6) ; 166,8 (C4) ; 203,2 (C7). 113g : 4-(mthoxymthoxy)benzaldhyde
O
1' 2' 3' 4' 6' 5'
H! C9H10O3 M=166,17 Solide beige O Protection du 4-hydroxybenzaldhyde

b
A une solution de 877 mg de 4-hydroxybenzaldhyde (1,0 q. - 7 mmol) dans un minimum dactone, sont ajouts 1,45 g de carbonate de potassium (1,5 q. - 10,5 mmol) et 783 L de chlorure de mthoxymthyle (1,5 q. - 10,5 mmol). Le milieu ractionnel est port reflux et laiss sous agitation pendant 12 heures (suivi CCM). Aprs filtration, la solution est concentre sous pression rduite. Le rsidu est solubilis dans 50 mL dactate dthyle. Puis la phase organique est successivement lave leau (3 x 40 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 60 mL), sche sur Na2SO4 , filtre et concentre sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Heptane : 1/2) pour donner 986 mg de 113g. Rendement = 80% CCM : Rf = 0,65 (Actate dthyle / Heptane : 1/1) RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 3,47 (s, 3H, Hb) ; 5,24 (s, 2H, Ha) ; 7,14 (dd, 2H, 3 J3-2=6,9 Hz, 4J34 3 5=2,2 Hz, H3+H5) ; 7,82 (dd, 2H, J2-6=6,9 Hz, J2-3=2,2 Hz, H2+H6) ; 9,89 (s, 1H, H). 13 RMN C (75 MHz, CDCl3) : = 56,3 (Cb) ; 94,1 (Ca) ; 116,3 (C3+C5) ; 130,7 (C1) ; 131,8 (C2+C6) ; 162,2 (C4) ; 190,1 (C=O).
178
9f : 2-hydroxy-4,6-di(mthoxy-mthoxy)-trans-chalcone
d b
O O
"
5 6 1 ! 4 3 2
O
c a
5' 4' 6' 3' 2' 1'
OH
Condensation de Claisen-Schmidt entre 111b et 113a
A une suspension de 200 mg dhydrure de sodium (4,0 q. 5,0 mmol) dans 2,5 mL de dimthylformamide anhydre, est additionne, goutte goutte et 0C, une solution, dans 3 mL de dimthylformamide anhydre, de 320 mg de 111b (1,0 q. 1,25 mmol) et de 135 L de benzaldhyde 113a (1,05 q. 1,32 mmol). Aprs 30 minutes dagitation 0C, le milieu ractionnel est laiss sous agitation temprature ambiante pendant 4 heures (suivi CCM). Aprs neutralisation de la raction avec 30 mL deau, la phase aqueuse est extraite au dichloromthane (3 x 60 mL). Lensemble des phases organiques est successivement lav leau (3 x 50 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 70 mL), sch sur Na2SO4, filtr et concentr sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Heptane : 1/2) pour donner 257 mg de 9f. Rendement = 60% CCM : Rf = 0,63 (Actate dthyle/Heptane : 2/3) RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 3,48 (s, 3H, Hc ou Hd) ; 3,53 (s, 3H, Hc ou Hd) ; 5,18 (s, 2H, Ha ou Hb) ; 5,25 (s, 2H, Ha ou Hb) ; 5,29 (d, 1H, 4J5-3= 2,5 Hz, H3) ; 6,32 (d, 1H, 4J3-5= 2,5 Hz, H5) ; 7,39-7,42 (m, 3H, H3+H4+H5) ; 7,59-7,62 (m, 2H, H2+H6) ; 7,78 (d, 1H, 3J-=15,7 Hz, H) ; 7,92 (d, 1H, 3J-=15,7 Hz, H) ; 12,82 (s, 1H, OH intra). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 56,4/56,8 (Cc/Cd) ; 94,0/95,1 (Ca/Cb) ; 94,7 (C5) ; 97,5 (C3) ; 107,5 (C1) ; 127,4 (C) ; 128,3 (C2+C6) ; 128,9 (C3+C5) ; 130,2 (C4) ; 135,4 (C1) ; 142,5 (C) ; 159,9 (C6) ; 163,5 (C4) ; 167,3 (C2) ; 192,9 (C=O). 9g : 2-hydroxy-4,4,6-tri(mthoxy-mthoxy)-trans-chalcone
e b
O
"
5 6 1 !
4 3
O
c
O
d a
5' 4' 6' 3' 2' 1'
OH
C21H24O8 M=404,41 Huile jaune Condensation de Claisen-Schmidt entre 111b et 113g

2
A une suspension de 400 mg dhydrure de sodium (4,0 q. 6,24 mmol) dans 4 mL de dimthylformamide anhydre, est additionne, goutte goutte et 0C, une solution, dans 2 mL de dimthylformamide anhydre, de 400 mg de 111b (1,0 q. 1,56 mmol) et de 440 mg de 113g (1,7 q. 2,64 mmol). Aprs 30 minutes dagitation 0C, le milieu ractionnel est laiss sous agitation temprature ambiante pendant 4 heures (suivi CCM). Aprs neutralisation de la raction avec 50 mL deau, le milieu ractionnel est dilu dans 100 mL de dichloromthane et la phase organique est extraite au dichloromthane (2 x 50 mL). Lensemble des phases organiques est successivement lav leau (3 x 50 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 70 mL), sch sur Na2SO4 , filtr et concentr sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Heptane : 1/3) pour donner 300 mg de 9g. Rendement = 48% CCM : Rf = 0,43 (Actate dthyle/Heptane : 1/1) RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 3,48 (s, 6H, Hd ou He ou Hf) ; 3,49 (s, 3H, Hd ou He ou Hf) ; 3,54 (s, 3H, Hd ou He ou Hf) ; 5,19 (s, 2H, Ha ou Hb ou Hc) ; 5,22 (s, 2H, Ha ou Hb ou Hc) ; 5,28 (s, 2H, Ha ou Hb ou Hc) ; 6,24 (d, 1H, 4J5-3= 2,2 Hz, H5) ; 6,31 (d, 1H, 4J3-5= 2,2 Hz, H3) ; 7,05-7,08 (m,
179
2H, Partie AA dun systme de spins AAMM, H3+H5) ; 7,54-7,58 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AAMM, H2+H6) ; 7,76 (d, 1H, 3J-=15,7 Hz, H) ; 7,83 (d, 1H, 3J-=15,7 Hz, H) ; 13,89 (s, 1H, OH intra). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 56,1/56,4/56,9 (Cd/Ce/Cf) ; 94,0/94,1/95,1 (Ca/Cb/Cc) ; 94,7 (C5) ; 97,8 (C3) ; 107,5 (C1) ; 116,5 (C3+C5) ; 125,4 (C) ; 129,2 (C1) ; 129,9 (C2+C6) ; 142,4 (C) ; 158,9 (C4) ; 159,8 (C6) ; 163,3 (C4) ; 167,3 (C2) ; 192,8 (C=O). 12f : ()-5,7-di-(mthoxy-mthoxy)flavanone mthoxy)pinocembrine
5' 6' 4' 3' 2' 8
ou
()-5,7-di(mthyl-
O
c a
O
6
O
4
2 3
1'
5 d
10
O
b
Cyclisation intramolculaire de 9f
A une solution de 257 mg de 9f (1,0 q. 0,45 mmol) dans un minimum dthanol, sont additionns 186 mg dactate de sodium (3,0 q. 2,24 mmol). Le milieu ractionnel est port reflux et aprs une nuit dagitation, il est concentr sous pression rduite. 50 mL dactate dthyle sont ajouts et la phase organique est successivement lave leau (3 x 40 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 50 mL), sche sur Na2SO4, filtre et concentre sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Heptane : 1/1) pour donner 181 mg de 12f. Rendement = 64% CCM : Rf = 0,41 (Actate dthyle/Heptane : 1/1) RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 2,81 (dd, 1H, 2J3eq-3ax= 16,8 Hz, et 3J3eq-2= 2,9 Hz, H3eq) ; 3,02 (dd, 1H, 2J3ax-3eq= 16,8 Hz, et 3J3ax-2= 13,2 Hz, H3ax) ; 3,47 (s, 3H, Hc ou Hd) ; 3,54 (s, 3H, Hc ou Hd) ; 5,18 (s, 2H, Ha ou Hb) ; 5,28 (s, 2H, Ha ou Hb) ; 5,42 (dd, 1H, 3J2-3eq= 2,9 Hz, 3J2-3ax= 13,2 Hz, H2) ; 6,37 (d, 1H, 4J6-8= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,42 (d, 1H, 4J8-6= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,38-7,47 (m, 5H, H2+H3+H4+H5+H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 45,8 (C3) ; 56,4/56,5 (Cc/Cd) ; 79,1 (C2) ; 94,1/94,9 (Ca/Cb) ; 97,4 (C6) ; 98,0 (C8) ; 106,0 (C10) ; 126,1 (C2+C6) ; 128,6 (C3+C5) ; 128,7 (C4) ; 138,7 (C1) ; 159,5 (C9) ; 163,3 (C5) ; 164,5 (C7) ; 189,2 (C4). 12g : ()-4,5,7-tri(mthoxy-mthoxy)flavanone mthoxy)naringnine
5' 6' 8 4' 9
ou
()-4,5,7-tri(mthyl-
O
3'
O
d a
O
6
2 3 4
1'
2'
10
C21H24O8 M=404,41 Huile jaune
O
b
Cyclisation intramolculaire de 9g
A une solution de 300 mg de 9g (1,0 q. 0,74 mmol) dans un minimum dthanol, sont additionns 184 mg dactate de sodium (3,0 q. 2,22 mmol). Le milieu ractionnel est port reflux et aprs une nuit dagitation, il est concentr sous pression rduite. 50 mL dactate dthyle sont ajouts et la phase organique est successivement lave leau (3 x 30 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 60 mL), sche sur Na2SO4, filtre et concentre sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Heptane : 2/3) pour donner 198 mg de 12g. Rendement = 64% CCM : Rf = 0,57 (Actate dthyle/Heptane : 1/1)
180
RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 2,77 (dd, 1H, 2J3eq-3ax= 16,8 Hz, et 3J3eq-2= 2,9 Hz, H3eq) ; 3,02 (dd, 1H, 2J3ax-3eq= 16,8 Hz, et 3J3ax-2= 13,2 Hz, H3ax) ; 3,46 (s, 6H, Hd ou He ou Hf) ; 3,48 (s, 3H, Hd ou He ou Hf) ; 3,53 (s, 3H, Hd ou He ou Hf) ; 5,16 (s, 2H, Ha ou Hb ou Hc) ; 5,19 (s, 2H, Ha ou Hb ou Hc) ; 5,27 (s, 2H, Ha ou Hb ou Hc) ; 5,36 (dd, 1H, 3J2-3eq= 2,9 Hz, 3J2-3ax= 13,2 Hz, H2) ; 6,37 (d, 1H, 4 J6-8= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,42 (d, 1H, 4J8-6= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,06-7,09 (m, 2H, partie AA dun systme de spins AAMM, H3+H5) ; 7,36-7,39 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AAMM, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 45,6 (C3) ; 56,0/56,4/56,6 (Cd/Ce/Cf); 78,8 (C2) ; 94,0/94,3/95,0 (Ca/Cb/Cc) ; 97,4 (C6) ; 98,0 (C8) ; 107,5 (C10) ; 116,4 (C3+C5) ; 127,6 (C2+C6) ; 131,9 (C1) ; 157,5 (C4) ; 159,5 (C9) ; 163,2 (C5) ; 164,5 (C7) ; 189,3 (C4). 21f : ()-5,7-di-(mthoxy-mthoxy)flavone mthoxy)chrysine
5' 6' 4' 3' 2' 8
ou
()-5,7-di(mthyl-
O
c a
O
6 d
O
4
2 3
1'
5 b
10
Produit d'limination de 12f
A une solution de 293 mg dhydroxyde de potassium (10,0 q. 5,21 mmol) dans un minimum de mthanol, sont ajouts 0C, 211 mg de 12f (1,0 q. 0,52 mmol) solubiliss dans un minimum de mthanol. 343 mg de diactate diodosobenzne (2,0 q. 1,04 mmol) sont ajouts en quatre fois sur 10 minutes. Le milieu ractionnel est rchauff progressivement temprature ambiante et laiss sous agitation pendant 12 heures (suivi CCM). Le milieu est concentr sous pression rduite et 40 mL deau sont ajouts. La phase aqueuse est extraite avec de lactate dthyle (3 x 50 mL) et lensemble des phases organiques est lav avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 70 mL), sch sur Na2SO4, filtr et concentr sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Heptane : 3/2) pour donner 62 mg de 21f. Rendement = 30% CCM : Rf = 0,31 (Actate dthyle/Heptane : 3/2) RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 3,52 (s, 3H, Hc ou Hd) ; 3,57 (s, 3H, Hc ou Hd) ; 5,26 (s, 2H, Ha ou Hb) ; 5,34 (s, 2H, Ha ou Hb) ; 6,66 (s, 1H, H3) ; 6,76 (d, 1H, 4J6-8= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,87 (d, 1H, 4 J8-6= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,48-7,53 (m, 3H, H3+H4+H5) ; 7,86-7,90 (m, 2H, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 56,5 et 56,6 (Cc/Cd) ; 94,3 et 95,5 (Ca/Cb) ; 97,2 (C6) ; 101,9 (C8) ; 108,9 (C3) ; 110,7 (C10) ; 126,0 (C2+C6) ; 128,9 (C3+C5) ; 121,2 (C4) ; 131,5 (C1) ; 158,1/159,4/160,9/161,3 (C2/C5/C7/C9) ; 177,4 (C4). 21g : ()-4,5,7-tri(mthoxy-mthoxy)flavone ou ()-4,5,7-tri(mthyl-mthoxy)apignine
5' 6' 8 4' 9
O
3'
O
d a
O
6
2 3 4
1'
2'
5 e
10
C21H22O8 M=402,39 Solide blanc Produit d'limination de 12g
A une solution de 272 mg dhydroxyde de potassium (10,0 q. 4,85 mmol) dans un minimum de mthanol, sont ajouts 0C, 167 mg de 12g (1,0 q. 0,48 mmol) solubiliss dans un minimum de mthanol. 319 mg de diactate diodosobenzne (2,0 q. 1,04 mmol) sont ajouts en quatre fois sur 10 minutes. Le milieu ractionnel est rchauff progressivement temprature ambiante et laiss sous agitation pendant 12 heures (suivi CCM). Le milieu est concentr sous pression rduite et 40 mL deau sont ajouts. La phase aqueuse est extraite lactate dthyle (3 x 50 mL) et lensemble des
181
phases organiques est lav avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 50 mL), sch sur Na2SO4 , filtr et concentr sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Heptane : 1/2) pour donner 70 mg de 21g. Rendement = 42% CCM : Rf = 0,13 (Actate dthyle/Heptane : 2/3) RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 3,51 (s, 3H, Hd ou He ou Hf) ; 3,52 (s, 3H, Hd ou He ou Hf) ; 3,56 (s, 3H, Hd ou He ou Hf) ; 5,24 (s, 2H, Ha ou Hb ou Hc) ; 5,26 (s, 2H, Ha ou Hb ou Hc) ; 5,29 (s, 2H, Ha ou Hb ou Hc) ; 6,57 (s, 1H, H3) ; 6,34 (d, 1H, 4J6-8= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,86 (d, 1H, 4J8-6= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,14 (m, 2H, partie AA dun systme de spins AAMM, H3+H5) ; 7,82 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AAMM, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 56,2/56,5/56,6 (Cd/Ce/Cf) ; 94,2/94,3/95,5 (Ca/Cb/Cc) ; 97,2 (C6) ; 101,9 (C8) ; 107,7 (C3) ; 110,6 (C10) ; 116,4 (C3+C5) ; 124,8 (C1) ; 127,6 (C2+C6) ; 158,1/159,3/159,7/160,8/161,1 (C2/C4/C5/C7/C9) ; 177,4 (C4). 21b : Chrysine
5' 6' 4' 3' 2' 8
HO
6
2 3 4
1'
C15H10O4 M=254,24 Solide beige Dprotection en milieu acide de 21f
10
OH
A une solution de 116 mg de 21f (1,0 q. 0,34 mmol) dans 10 mL de mthanol, sont additionns 1,35 mL dune solution dacide chlorhydrique 10% (12,0 q. 4,05 mmol). Le milieu ractionnel port reflux et laiss sous agitation pendant 3 heures (suivi CCM). 50 mL deau sont ajouts et la phase aqueuse est extraite lactate dthyle (3 x 40 mL). Lensemble des phases organiques est successivement lav leau (3 x 50 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 70 mL), sch sur Na2SO4 , filtr et concentr sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Heptane : 2/3) pour donner 84 mg de 21b. Rendement = quantitatif CCM : Rf = 0,60 (Actate dthyle/Heptane : 1/1) RMN 1H (300 MHz, MeOD) : = 6,23 (d, 1H, 4J6-8= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,47 (d, 1H, 4J8-6= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,71 (s, 1H, H3) ; 7,54-7,60 (m, 3H, H3+H4+H5) ; 7,92-96 (m, 2H, H2+H6). 13 : Apignine
5' 6' 8 4' 9
OH
3'
HO
6
2 3 4
1'
2'
10
OH
C15H10O5 M=270,24 Solide brun Dprotection en milieu acide de 21g
A une solution de 62 mg de 21g (1,0 q. 0,15 mmol) dans 6 mL de mthanol, est additionn 1 mL dune solution dacide chlorhydrique 10% (18,0 q. 2,77 mmol). Le milieu ractionnel port reflux et laiss sous agitation pendant 3 heures (suivi CCM). 50 mL deau sont ajouts et la phase aqueuse est extraite lactate dthyle (3 x 50 mL). Lensemble des phases organiques est successivement lav leau (3 x 40 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 50 mL), sch sur Na2SO4 , filtr et concentr sous pression rduite. Le rsidu est purifi par recristallisation dans lthanol pour donner 40 mg de 13. Rendement = quantitatif
182
CCM : Rf = 0,11 (Actate dthyle/Heptane : 2/3) RMN 1H (300 MHz, MeOD) : = 6,20 (d, 1H, 4J6-8= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,45 (d, 1H, 4J8-6= 2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,58 (s, 1H, H3) ; 6,91-7,93 (m, 2H, partie AA dun systme de spins AAMM, H3+H5) ; 7,82-7,85 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AAMM, H2+H6). 115a : Hexafluorophosphate de 7-hydroxy-4-mthylflavylium
3' 2' 4' 5' 6' 6 5 10 3 4 11 1'
PF6HO
7
C16H13O2PF6 M= 382,24 Poudre jaune Condensation de 116a et 117a
A une solution de 660 mg de rsorcinol 116a (1,0 q. - 6,0 mmol), solubilis dans un minimum dacide actique, sont ajouts 970 mg de benzoylactone 117a (1,0 q. - 6,0 mmol). Puis quelques gouttes dacide hexafluorophosphorique 60 % sont additionnes et le milieu ractionnel est mis sous agitation temprature ambiante pendant 24 heures. Le mlange est ensuite vers dans lther et le prcipit form est isol par filtration et lav abondamment lther pour donner 1,67 g de 115a. Rendement = 73% PF : 214C UV/Vis : max (MeOH / 5% HCl 10%) ( en M-1.cm-1) = 260, 292, 416 (28600) nm IR (KBr): max = 3072 (O-H), 1630 (C=O ), 1461, 1371, 1239, 1083, 858 cm-1 RMN 1H (300 MHz, CD3CN/ 1% CF3COOD) : = 3,03 (s; 3H; H11) ; 7,49 (dd, 1H, 3J6-5=9,1 Hz, 4J64 8=2,2 Hz, H6) ; 7,56 (d, 1H, J8-6=2,2 Hz, H8) ; 7,68-7,75 (m, 2H, partie AA dun systme de spins AABMM, H3+H5) ; 7,79-7,85 (m, 1H, partie B dun systme de spins AABMM ; H4) ; 8,30 (s, 1H, H3) ; 8,33 (d, 1H, 3J5-6=9,1 Hz, H5) ; 8,35-8,39 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AABMM, H2+H6) . ) 13 RMN C (75 MHz, CD3CN/ 1% CF3COOD) : = 20,1 (C11) ; 102,9 (C8) ; 115,4 (C3) ; 120,4 (C10) ; 121,6 (C6) ; 128,9 (C1) ; 129,0 (C3+C5) ; 129,6 (C5) ; 130,0 (C2+C6) ; 135,9 (C4) ; 156,5/157,0/157,6/158,1 (C2/C4/C7/C9). 113e : 3,5-dimthoxy-4-(mthoxymthoxy)benzaldhyde
O
1' 2' b 3' 6' b 4' 5' a
H! C11H14O5 M=226,23 Solide blanc Protection du 3,5-dimthoxy4-hydroxybenzaldhyde

c
O O
A une solution de 930 mg de 4-hydroxy-3,5-dimthoxybenzaldhyde (1,0 q. - 5 mmol) dans un minimum dactone, sont ajouts 1,04 g de carbonate de potassium (1,5 q. - 7,5 mmol) et 560 L de chlorure de mthoxymthyle (1,5 q. - 7,5 mmol). La solution est porte reflux et laisse sous agitation pendant 12 heures (suivi CCM). Le milieu ractionnel est filtr et concentr sous pression rduite. Le rsidu est solubilis dans 50 mL dactate dthyle, la phase organique est successivement lave leau (3 x 35 mL) et avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 60 mL), sche sur Na2SO4 , filtre et concentre sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Heptane : 2/3) pour donner 1,05 g de 113e. Rendement = 92% CCM : Rf = 0,40 (Actate dthyle / Heptane : 2/3) RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 3,55 (s, 3H, Hc) ; 3,87 (s, 6H, Hb) ; 5,17 (s, 2H, Ha) ; 7,09 (s, 2H, H2+H6) ; 9,82 (s, 1H, H).
183
RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 56,4 (Cb) ; 57,2 (Cc) ; 98,1 (Ca) ; 106,6 (C2+C6) ; 132,1 (C1) ; 140,1 (C4); 153,8 (C3+C5) , 190,7 (C=O). 118b : 1-Cyano-(4-mthoxyphnyl)-1-morpholinomthane
CN
1' 6' 5' 2
2' 3'
N
A
A B
C13H16O2N2 M= 232,28 Solide beige Formation de 118b
O
a
4'
A une solution aqueuse (20 mL) de 1,00 g de chlorure de morpholinium (1,2 q. - 8,03 mmol) et de 406 mg de cyanure de sodium (1,2 q. - 8,03 mmol), sont ajouts 815 L de 113b (1,0 q. - 6,7 mmol) solubiliss dans un minimum de mthanol. La solution est chauffe 30C pendant 4 heures (suivi CCM). 50 mL deau sont ajouts et la phase aqueuse est extraite lther (3 x 50 mL). Les phases organiques sont laves successivement avec une solution sature de mtabisulfite de sodium (2 x 75 mL), de leau (3 x 50 mL) et une solution sature de chlorure de sodium (1 x 70 mL), sches sur Na2SO4 , filtres et concentres sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Heptane : 1/2) pour donner 1,354 g de 118b. Rendement = 87% CCM : Rf = 0,39 (Actate dthyle / Heptane : 2/3) PF : 82-83C IR (KBr): max = 2220, 1723, 1590, 1328, 1235, 1131, 1070 cm-1 UV/Vis : max (MeOH) ( M-1. cm-1)= 228 (8980), 274 (1520) nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 2,56 (m; 4H; HA) ; 3,69 (m; 4H; HB) ; 3,80 (s, 3H, Ha) ; 4,74 (s, 1H, H2) ; 6,90 (dd, 2H, 3 J3-2=6,6 Hz, 4J3-5=2,2 Hz, H3+H5) ; 7,42 (dd, 2H, 3J2-3=6,6 Hz, 4J2-6=2,2 Hz, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 49,8 (CA) ; 55,3 (Ca) ; 61,8 (C2) ; 66,6 (CB) ; 114,1 (C3+C5) ; 115,5 (CN) ; 124,4 (C1) ; 129,3 (C2+C6) ; 160,1 (C4). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 255 (100) [M + Na]+ C13H1602N2 [M + Na]+ calcul : 255,1104 / Trouv : 255,1103 118c : 1-Cyano-(3,4,5-trimthoxyphnyl)-1-morpholinomthane
b
O O
a
3'
2' 1'
CN
2
N
A
A B
C15H20O4N2 M= 292,33 Solide blanc
4'
6'
5' b
O Formation de 118c
A une solution aqueuse (20 mL) de 597 mg de chlorure de morpholinium (1,2 q. - 4,8 mmol) et de 243 mg de cyanure de sodium (1,2 q. - 4,8 mmol), sont ajouts 801 mg de 113c (1,0 q. - 4,0 mmol ) solubiliss dans un minimum de mthanol. La solution est chauffe 30C pendant 4 heures (suivi CCM). 50 mL deau sont ajouts et la phase aqueuse est extraite lther (3 x 50 mL). Les phases organiques sont laves successivement avec une solution sature de mtabisulfite de sodium (2 x 75 mL), de leau (3 x 50 mL) et une solution sature de chlorure de sodium (1 x 70 mL), sches sur Na2SO4 , filtres et concentres sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Heptane : 1/1) pour donner 993 mg de 118c. Rendement = 85% CCM : Rf = 0,26 (Actate dthyle / Heptane : 1/1)
184
PF : 143-144C IR (KBr): max = 2222, 1590, 1452, 1329, 1247, 1130, 1069 cm-1 UV/Vis : max (MeOH) ( M-1. cm-1)= 218 (13800), 272 (2400) nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 2,60 (m; 4H; HA) ; 3,75 (m; 4H; HB) ; 3,86 (s, 3H, Ha) ; 3,89 (s, 3H, Hb) ; 4,75 (s, 1H, H2) ; 6,76 (s, 2H, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 49,9 (CA) ; 56,3 (Cb) ; 60,9 (Ca) ; 62,5 (C2) ; 66,7 (CB) ; 104,9 (C2+C6) ; 115,2 (CN) ; 127,9 (C1) ; 138,4 (C3+C5) ; 153,5 (C4). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 591 (100) [M + Li]+ , 266 (65) C15H2004N2 [M + Li]+ Calcul : 299,1578 / Trouv : 299,1576 118d : 1-Cyano-(4-fluorophnyl)-1-morpholinomthane
CN
1' 6' 5' 2
2' 3'
N
A
A B
C12H13ON2F M= 220,2 Solide blanc
4'
O Formation de 118d
A une solution aqueuse (20 mL) de 596 mg de chlorure de morpholinium (1,2 q. - 4,8 mmol) et de 243 mg de cyanure de sodium (1,2 q. - 4,8 mmol), sont ajouts 430 L de 113d (1,0 q. - 4,0 mmol) solubiliss dans un minimum de mthanol. La solution est chauffe 30C pendant 4 heures (suivi CCM). 50 mL deau sont ajouts et la phase aqueuse est extraite lther (3 x 50 mL). Les phases organiques sont laves successivement avec une solution sature de mtabisulfite de sodium (2 x 75 mL), de leau (3 x 50 mL) et une solution sature de chlorure de sodium (1 x 70 mL), sches sur Na2SO4 , filtres et concentres sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Heptane : 1/2) pour donner 749 mg de 118d. Rendement = 85% CCM : Rf = 0,41 (Actate dthyle / Heptane : 2/3) PF : 66-67C IR (KBr): max = 2224, 1726, 1454, 1327, 1227, 1112, 1071 cm-1 UV/Vis : max (MeOH) ( M-1 . cm-1)= 210 (5980), 264 (p.) (640) nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 2,56 (m, 4H, HA) ; 3,72 (m; 4H; HB) ; 4,78 (s, H, H2) ; 7,06-7,14 (m, 2H, H3+H5) ; 7,49-7,55 (m, 2H, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 49,8 (CA) ; 61,8 (C2) ; 66,6 (CB) ; 114,9 (CN) ; 115,7 (C3+C5, 2 J=21,1 Hz) ; 128,3 (C1) ; 129,7 (C2+C6) ; 164,6 (C4, 1J=249,3 Hz). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 243(100) [M + Na]+ C12H130N2F [M + Na]+ Calcul : 243,0904 / Trouv : 243,0884 118e : 1-Cyano-[3,5-dimthoxy-4-(mthoxymthoxy)phnyl]-1morpholinomthane
b
O O O
c a
3'
2' 1'
CN
2
N
A
A B
4'
6'
5' b
O Formation de 118e
A une solution aqueuse (20 mL) de 639 mg de chlorure de morpholinium (1,2 q. ; 5,13 mmol) et de 260 mg de cyanure de sodium (1,2 q. ; 5,13 mmol), sont ajouts 967 mg de 113e (1,0 q. ; 4,27 mmol) solubiliss dans un minimum de mthanol. La solution est chauffe 30C pendant 4 heures (suivi CCM). 50 mL deau sont ajouts et la phase aqueuse est extraite lther (3 x 50 mL). Les phases organiques sont laves successivement avec une solution sature de mtabisulfite de sodium (2 x 75 mL), de leau (3 x 50 mL) et une solution sature de chlorure de sodium (1 x 70 mL), sches
185
sur Na2SO4 , filtres et concentres sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Heptane : 1/2) pour donner 1,307 g de 118e. Rendement = 95% CCM : Rf = 0,40 (Actate dthyle / Heptane : 1/1) PF : 117-118C IR (KBr): max = 2225, 1736, 1438, 1333, 1244, 1160, 1082 cm-1 UV/Vis : max (MeOH) ( M-1 . cm-1)= 216 (13850), 272 (2830) nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 2,60 (m, 4H, HA) ; 3,60 (s, 3H, Hc) ; 3,74 (m; 4H; HB) ; 3,87 (6H, Hb) ; 4,75 (s, 1H, H2) ; 5,12 (s, 2H, Ha) ; 6,76 (s, 2H, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 49,8 (2CA) ; 56,1 (2Cb) ; 57,2 (Cc) ; 62,5 (C2) ; 66,6 (2 CB) ; 98,1 (Ca) ; 104,8 (C2+C6) ; 115,1 (CN) ; 128,3 (C1) ; 134,8 (C3+C5) ; 153,6 (C4). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 345(100) [M + Na]+, 296 (70) C16H22N205 [M +Na]+ Calcul : 345,1421 / Trouv : 345,1428 119b : 4-cyano-4-(4-mthoxyphnyl)-4-morpholino-but-1-yne
CN
1' 6' 5' 2 3 4 11 A B B
2' 3'
N
A
O
a
4'
O Formation de 119b
A une solution de 220 mg dhydrure de sodium (1,0 q. - 5,5 mmol) dans le dimthylformamide anhydre (5 mL), est additionne goutte goutte, une solution de 1,28 g d-aminonitrile 118b (1,0 q. - 5,5 mmol) dans le dimthylformamide anhydre (17,5 mL). Le mlange ractionnel est mis sous agitation 30 minutes temprature ambiante, puis 613 L de bromure de propargyle (1,0 q. - 5,5 mmol) dans le dimthylformamide anhydre (17,5 mL) sont additionns goutte goutte. La solution est laisse sous agitation temprature ambiante pendant 2 heures (suivi CCM). Une solution de chlorure dammonium (1 x 40 mL) est ajoute et la phase aqueuse est extraite au dichloromthane (3 x 50 mL). Les phases organiques sont laves avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 70 mL), sches sur Na2SO4, filtres et concentres sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Heptane : 2/3) pour donner 1,296 g de 119b. Rendement = 87% CCM : Rf = 0,55 (Actate dthyle / Heptane : 1/1) PF : 124-125C UV/Vis : max (MeOH) ( M-1 . cm-1)= 232 (9850), 274 (1570) nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 2,06 (t, 1H, 4J11-3a=2,6 Hz, 4J11-3b=2,9 Hz, H11) ; 2,56 (m, 4H, HA) ; 2,84 (dd, 1H, 4J3a-11=2,9 Hz, 4J3a-3b=16,4 Hz, H3a) ; 2,99 (dd, 1H, 4 J3b-11=2,6 Hz, 4J3b-3a=16,4 Hz, H3b) ; 3,73 (m; 4H; HB) ; 3,82 (s, 3H, Ha) ; 6,91 (dd, 2H, 3J3-2=6,6 Hz, 4J3-5=2,2 Hz, H3+H5) ; 7,56 (dd, 2H, 3J2-3=6,6 Hz, 4J2-6=2,2 Hz, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 30,9 (C3) ; 48,6 (CA) ; 55,3 (Ca) ; 60,5 (C2) ; 66,7 (CB) ; 68,8 (C11) ; 73,4 (C4) ; 113,9 (C3+C5) ; 116,5 (CN) ; 127,9 (C2+C6) ; 128,9 (C1) ; 160,0 (C4). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 520 (100) [M +Li]+ , 277 (39) C16H1802N2 [M + Li]+ Calcul : 277,1523 / Trouv : 277,1497
186
119c : 4-cyano-4-(3,4,5-trimthoxyphnyl)-4-morpholino-but-1-yne
b 4 11 A B B
O O
a
3'
2' 1'
CN
2
N
A
4'
6'
5' b
C18H22O4N2 M= 330,4, Solide beige Formation de 119c
A une solution de 162 mg dhydrure de sodium (1,0 q. - 4,04 mmol) dans le dimthylformamide anhydre (3 mL), est additionne goutte goutte, une solution de 1,18 g d-aminonitrile 118c (1,0 q. - 4,04 mmol) dans le dimthylformamide anhydride (12 mL). Le mlange ractionnel est mis sous agitation 30 minutes temprature ambiante, puis 450 L de bromure de propargyle (1,0 q. ; 4,04 mmol) dans le dimthylformamide anhydre (12 mL) sont additionns goutte goutte. La solution est laisse sous agitation temprature ambiante pendant 2 heures (suivi CCM). Une solution de chlorure dammonium (1 x 40 mL) est ajoute et la phase aqueuse est extraite au dichloromthane (3 x 50 mL). Les phases organiques sont laves avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 70 mL), sches sur Na2SO4 , filtres et concentres sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Heptane : 2/3) pour donner 1,128 g de 119c. Rendement = 84% CCM : Rf = 0,43 (Actate dthyle / Heptane : 2/3) PF : 139-140C IR (KBr): max = 3240, 1593, 1335, 1240, 1134, 1070 cm-1 UV/Vis : max (MeOH) ( M-1 . cm-1)= 218 (15310), 272 (2270) nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 2,13 (t, 1H, 4J11-3a=2,6 Hz, 4J11-3b=2,9 Hz, H11) ; 2,62 (m, 4H, HA) ; 2,91 (dd, 1H, 4 J3b-11=2,9 Hz, 4 J3b-3a=16,4 Hz, H3b) ; 2,96 (dd, 1H, 4J3a-11=2,6 Hz, 4J3a-3b=16,4 Hz, H3a) ; 3,76 (m; 4H; HB) ; 3,86 (s, 3H, Ha) ; 3,88 (s, 6H, Hb) ; 6,91 (s, 2H, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 31,0 (C3) ; 48,6 (CA) ; 56,2 (Cb) ; 57,1 (Ca) ; 60,8 (C2) ; 66,7 (CB) ; 69,3 (C11) ; 73,6 (C4) ; 103,7 (C2+C6) ; 116,3 (CN) ; 132,4 (C1) ; 138,3 (C4); 153,3 (C3+C5). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 326 (100) [M + Na]+, 353 (23) C18H2204N2 [M + Na]+ Calcul : 353,1472 / Trouv : 353,1445 119d : 4-cyano-4-(4-fluorophnyl)-4-morpholino-but-1-yne
2' 3' 1' 6' 5'
CN
2
4 A B
N
A
4'
C15H15ON2F M= 258,3 B Solide beige Formation de 119d O

11
A une solution de 224 mg dhydrure de sodium (1,0 q. - 5,60 mmol) dans le dimthylformamide anhydre (4 mL), est additionne goutte goutte, une solution de 1,23 g d-aminonitrile 118d (1,0 q. - 5,60 mmol) dans le dimthylformamide anhydride (15 mL). Le mlange ractionnel est mis sous agitation 30 minutes temprature ambiante, puis 624 L de bromure de propargyle (1,0 q. ; 5,60 mmol) dans le dimthylformamide anhydre (15 mL) sont additionns goutte goutte. La solution est laisse sous agitation temprature ambiante pendant 2 heures (suivi CCM). Une solution de chlorure dammonium (1 x 40 mL) est ajoute et la phase aqueuse est extraite au dichloromthane (3 x 50 mL). Les phases organiques sont laves avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 70 mL), sches sur Na2SO4 , filtres et concentres sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Heptane : 1 / 3) pour donner 1,053 g de 119d. Rendement = 72% CCM : Rf = 0,47 (Actate dthyle / Heptane : 2/3) PF : 90-92C
187
IR (KBr): max = 1603, 1507, 1337, 1227, 1111 cm-1 UV/Vis : max (MeOH) ( M-1 . cm-1)= 216 (989), 266 (1830) nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 2,06 (t, 1H, 4J11-3a=2,6 Hz, 4J11-3b=2,9 Hz, H11) ; 2,48 (m, 4H, HA) ; 2,84 (dd, 1H, 4J3b-11=2,9 Hz, 4J3b-11b=16,4 Hz, H3b) ; 2,98 (dd, 1H, 4J3a-11=2,6 Hz, 4J3a-3b=16,4 Hz, H3a) ; 3,73 (m; 4H; HB) ; 6,89-6,94 (m, 2H, H3+H5) ; 7,53-7,58 (m, 2H, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 48,7 (2CA) ; 66,8 (2CB) ; 71,1 (C11) ; 80,9 (C3) ; 94,7 (C4) ; 114,8 (C2) ; 115,9 (C3+C5, 2J=21,1 Hz) ; 127,8 (C2 + C6) ; 128,3 (C1) ; 191,7 (C4, 1J=249,4 Hz). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 265(100) [M + Li]+ , 238(39) C15H150N2F [M + Li]+ Calcul : 265,1323 / Trouv : 265,1326 119e : 4-cyano-4-[(3,5-dimthoxy-4-(mthoxymthoxy))phnyl]-4-morpholinobut-1-yne
O O O
c a
3'
2' 1'
CN 3
2
4 11 A B B
N
A
C16H22O5N2 M= 322,3 Solide blanc Formation de 119e
4'
6'
5' b
A une solution de 148 mg dhydrure de sodium (1,0 q. - 3,71 mmol) dans le dimthylformamide anhydre (3 mL), est additionne goutte goutte, une solution de 1,19 g d-aminonitrile 118e (1,0 q. - 3,71 mmol) dans le dimthylformamide anhydride (12 mL). Le mlange ractionnel est mis sous agitation 30 minutes temprature ambiante, puis 413 L de bromure de propargyle (1,0 q. ; 3,71 mmol) dans le dimthylformamide anhydre (12 mL) sont additionns goutte goutte. La solution est laisse sous agitation temprature ambiante pendant 2 heures (suivi CCM). Une solution de chlorure dammonium (1 x 40 mL) est ajoute et la phase aqueuse est extraite au dichloromthane (3 x 50 mL). Les phases organiques sont laves avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 70 mL), sches sur Na2SO4 , filtres et concentres sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Heptane : 2 / 3) pour donner 1,004 g de 119e. Rendement = 75% CCM : Rf = 0,50 (Actate dthyle / Heptane : 1/1) PF : 136-138C IR (KBr): max = 3266, 1736, 1502, 1334, 1271, 1087 cm-1 UV/Vis : max (MeOH) ( M-1 . cm-1)= 216 (16790), 272 (3230) nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 2,06 (t, 1H, 4J11-3a=2,6 Hz, 4J11-3b=2,9 Hz, H11) ; 2,40 (m, 4H, HA) ; 2,84 (dd, 1H, 4J3a-11=2,6 Hz, 4J3a-3b=16,4 Hz, H3a) ; 2,97 (dd, 1H, 4 J3b-11=2,6 Hz, 4J3b-3a=16,4 Hz, H3b) ; 3,48 (s, 3H, Hc) ; 3,73 (m; 4H; HB) ; 3,86 (s, 6H, Hb) ; 5,18 (s, 2H, Ha) ; 6,91 (s, 2H, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 31,0 (C3) ; 48,6 (CA) ; 56,1 (Cb) ; 57,1 (Cc) ; 66,7 (CB) ; 69,3 (C2) ; 70,9 (C11) ; 73,6 (C4) ; 98,1 (Ca) ; 103,6 (C2+C6) ; 116,4 (CN) ; 132,9 (C1) ; 138,1 (C4) ; 153,4 (C3+C5). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 383(100) [M + Na]+ C16H24N205 [M + Na]+ Calcul : 383,1577 / Trouv : 383,1583
188
117b : 1-(4-mthoxyphnyl)-butan-1,3-dione
2' 3' 1' 6' 5'
OH
2 3
O
4 11
O
a
4'
Formation de 117a
A une solution hydromthanolique (H2 O / MeOH : 1/3 ; 12 mL) de 281 mg de sulfate de cuivre pentahydrat (2,0 q. - 1,11 mmol ) sont additionns 150 mg de lintermdiaire propargylique 119b (1,0 q. - 0,55 mmol). Le mlange ractionnel est chauff 60C pendant 30 minutes. Puis, la solution est concentre sous pression rduite, 40 mL deau sont ajouts et la phase aqueuse est extraite au dichloromthane (3 x 40 mL). Les phases organiques sont laves avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 60 mL), sches sur Na2SO4, filtres et concentres sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : Gradient Actate dthyle / Heptane : 2/3 1/1) pour donner 105 mg de 117b. Rendement = 50% CCM : Rf = 0,55 (Actate dthyle / Heptane : 2/3) PF : 56-58C IR (KBr): max = 1603, 1261, 1173, 1115, 1023 cm-1 UV/Vis : max (MeOH) ( M-1 . cm-1)= 228 (6910), 322 (19100) nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 2,16 (s, 3H, H11) ; 2,85 (s, 3H, Ha) ; 6,11 (s, 1H, H3) ; 6,93 (dd, 2H, 3J3-2=7,1 Hz, 4J3-5=1,8 Hz, H3+H5) ; 7,9 (dd, 2H, 3J2-3=6,9 Hz, 4J2-6=1,9 Hz, H2+H6). Remarque : une autre forme nol est prsente, = 2,27 (s) ; 4,04 (s) ; 7,90 (d) RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 25,3 (C11) ; 55,5 (Ca) ; 95,8 (C3) ; 113,9 (C3+C5) ; 127,5 (C1) ; 129,1 (C2+C6) ; 163,1 (C4) ; 184,1 (C2 ) ; 191,6 (C4). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 199 (100) [M + Li]+ , 353 (27) C11H1203 [M + Li]+ Calcul : 199,0941 / Trouv : 199,0939 117c : 1-(3,4,5-trimthoxyphnyl)-butan-1,3-dione
b
O O
a
3'
2' 1'
OH
2 3
O
4 11
4'
6'
C13H16O5 M= 252,4, Solide beige Formation de 117c
5' b
A une solution hydromthanolique (H2O / MeOH : 1/3 ; 24 mL) de 1,73 g de sulfate de cuivre pentahydrat (2,0 q. - 6,83 mmol ) sont additionns 1,128 g dintermdiaire propargylique 119c (1,0 q. - 3,41 mmol). Le mlange ractionnel est chauff 60C pendant 30 minutes. Puis, la solution est concentre sous pression rduite, 50 mL deau sont ajouts et la phase aqueuse est extraite au dichloromthane (3 x 50 mL). Les phases organiques sont laves avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 70 mL), sches sur Na2SO4, filtres et concentres sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : Gradient Actate dthyle / Heptane : 2/3 1/1) pour donner 592 mg de 117c. Rendement = 64% CCM : Rf = 0,55 (Actate dthyle / Heptane : 3/2) PF : 102-103C IR (KBr): max = 1699, 1232, 1123, 995 cm-1 UV/Vis : max (MeOH) ( M-1 . cm-1)= 224 (11330), 322 (15610) nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 2,16 (s, 3H, H11) ; 3,90 (s, 3H, Ha) ; 3,92 (s, 6H, Hb) ; 6,11 (s, 1H, H3) ; 7,12 (s, 2H, H2+H6). Remarque : une autre forme nol est prsente, = 2,28 (s) ; 4,04 (s) ; 7,21 (s) RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 25,3 (C11) ; 56,2 (Cb) ; 60,9 (Ca) ; 96,3 (C3) ; 104,4 (C2+C6) ; 130,3 (C1) ; 141,8 (C4) ; 153,2 (C3+C5) ; 184,1 (C2) ; 191,6 (C4).
189
SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 253(100) C13H1605H Calcul : 253,1071 / Trouv : 253,1082 117d : 1-(4-fluorophnyl)-butan-1,3-dione
OH
1' 6' 5' 2 3
2' 3'
O
4 11
C10H9O2F M= 180,17 Solide beige
4'
Formation de 117d
A une solution hydromthanolique (H2O / MeOH : 1/3 ; 24 mL) de 2,4 g de sulfate de cuivre pentahydrat (2,0 q. - 9,56 mmol) sont additionns 1,05 g dintermdiaire propargylique 119d (1,0 q. - 4,78 mmol). Le mlange ractionnel est chauff 60C pendant 30 minutes. Puis, la solution est concentre sous pression rduite, 50 mL deau sont ajouts et la phase aqueuse est extraite au dichloromthane (3 x 50 mL). Les phases organiques sont laves avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 70 mL), sches sur Na2SO4, filtres et concentres sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Heptane : 1/4) pour donner 379 mg de 117d. Rendement = 44% CCM : Rf = 0,47 (Actate dthyle / Heptane : 1/2) UV/Vis : max (MeOH) ( M-1 . cm-1)= 214 (5930), 252 (4900), 308 (10950) nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 2,19 (s, 3H, H11) ; 6,12 (s, 1H, H3) ; 7,09-7,15 (m, 2H, H2+H6) ; 7,87-7,92 (m, 2H, H3+H5). Remarque : une autre forme nol est prsente, = 2,28 (s) ; 7,89 (s) ; 7,92 (s) RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 25,5 (C11) ; 96,3 (C3) ; 115,6 (C3+C5, 2J=21,1 Hz) ; 129,3 (C2+C6) ; 129,5 (C1) ; 164,9 (C4, 1J=254,3 Hz) ; 182,9 (C2) ; 192,8 (C4). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 187(100) [M + Li]+ , 285 (35) C10H902F [M + Li]+ Calcul : 187,0781 / Trouv : 187,0741 117e : 1-[3,5-dimthoxy-4-(mthoxymthoxy)phnyl)]-butan-1,3-dione
OH
1' 2 3
O O
3'
2'
O
4 11
4' a
6' 5'
O
c
C14H18O6 M= 282,3 Solide blanc Formation de 117e
A une solution hydromthanolique (H2O / MeOH : 1/3 ; 16 mL) de 1,31 g de sulfate de cuivre pentahydrat (2,0 q. - 5,16 mmol) sont additionns 928 mg dintermdiaire propargylique 119e (1,0 q. - 2,58 mmol). Le mlange ractionnel est chauff 60C pendant 30 minutes. Puis, la solution est concentre sous pression rduite, 50 mL deau sont ajouts et la phase aqueuse est extraite au dichloromthane (3 x 50 mL). Les phases organiques sont laves avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 70 mL), sches sur Na2SO4, filtres et concentres sous pression rduite. Le rsidu est purif par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Heptane : 1/2) pour donner 291 mg de 117e. Rendement = 40% CCM : Rf = 0,49 (Actate dthyle / Heptane : 2/3) PF : 86-88C IR (KBr): max = 1582, 1241, 1161, 1127, 1080 cm-1 UV/Vis : max (MeOH) ( M-1 . cm-1)= 220 (12430), 320 (17060) nm RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 2,19 (s, 3H, H11) ; 3,58 (s, 3H, Hc) ; 3,90 (s, 6H, Hb) ; 5,18 (s, 2H, Ha) ; 6,0 (s, 1H, H3) ; 7,12 (s, 2H, H2+H6).
190
RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 25,3 (C11) ; 56,2 (Cc) ; 57,2 (2Cb) ; 96,3 (C3) ; 98,1 (Ca) ; 104,3 (C2+C6) ; 130,8 (C1) ; 138,3 (C4) ; 153,3 (C3+C5) ; 184,1 (C2) ; 191,6 (C4). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 305(100) [M + Na]+ C14H1806 [M + Na]+ Calcul : 305,0996 / Trouv : 305,0986 115b : Hexafluorophosphate de 5,7-dihydroxy-4-mthoxy-4-mthylflavylium
PF6HO
6 5 7 3' 2' 1' 6' 10 3 4 11 4' 5'
C17H15O4PF6 M= 428,26 Poudre orange Condensation de 116c et 117b
OH
A une solution de 167 mg de phloroglucinol dihydrat 116c (1,0 q. - 1,01 mmol), solubilis dans un minimum dacide actique, sont ajouts 200 mg de 117b (1,0 q. - 1,01 mmol). Puis quelques gouttes dacide hexafluorophosphorique 60 % sont additionnes et le milieu ractionnel est mis sous agitation temprature ambiante pendant 24 heures. Le mlange est ensuite vers dans lther et le prcipit form est isol par filtration et lav abondamment lther pour donner aprs schage 320 mg de 115b. Rendement = 81% PF > 260C (dcomposition) IR (KBr): max = 3740 (O-H), 1683, 1464, 1354, 1181, 850 cm-1 UV/Vis : max (MeOH / 10% HCl 10%) ( en M-1 .cm-1) = 206, 276 (22040), 458 (27550) nm RMN 1H (300 MHz, CD3CN / 1% CF3COOD) : = 3,04 (s, 3H, H11) ; 3,95 (s, 3H, Ha) ; 6,71 (d, 1H, 4 J6-8=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,97 (d, 1H, 4J8-6=2,2 Hz, H8 ou H6) ; 7,18 (dd, 2H, 3J3-2=9,15 Hz, H3+H5) ; 7,82 (s, 1H, H3) ; 8,27 (dd, 2H, 3 J2-3=9,15 Hz, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CD3CN / 1% CF3COOD) : = 24,9 (C11) ; 55,7 (Ca) ; 95,9 (C6) ; 102,9 (C8) ; 109,0 (C10) ; 113,6 (C3) ; 115,5 (C3+C5) ; 120,3 (C1) ; 126,4 (C9) ; 131,4 (C2+C6) ; 159,8/166,1/166,8,4/168,3/170,2 (C2/C4/C4/C5/C7). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 283(100) ; 240(5) ; 343(7) C17H15O4 [M]+ Calcul : 283,0965 / Trouv : 283,0940 115c : Hexafluorophosphate mthylflavylium
b
de
5,7-dihydroxy-3,4,5-trimthoxy-4-
O
3' 4'
PF6 HO
6 5 7
2' 2 3 4 11 1' 6'
O O
b
5'
10
OH
Condensation de 116c et 117c
A une solution de 94 mg de phloroglucinol dihydrat 116c (1,0 q. - 0,56 mmol), solubilis dans un minimum dacide actique, sont ajouts 164 mg de 117c (1,0 q. - 0,56 mmol). Puis quelques gouttes dacide hexafluorophosphorique 60 % sont additionnes et le milieu ractionnel est mis sous agitation temprature ambiante pendant 24 heures. Le mlange est ensuite vers dans lther et le prcipit form est isol par filtration et lav abondamment lther pour donner aprs schage 270 mg de 115c. Rendement = quantitatif PF > 260C (dcomposition) IR (KBr): max = 3724 (O-H), 1639, 1468, 1356, 1256, 1130, 48 cm-1
191
UV/Vis : max (MeOH / 10% HCl 10%) ( en M-1 .cm-1) = 204, 280 (21740) , 464 (23940) nm RMN 1H (300 MHz, CD3CN / 1% CF3COOD) : = 3,09 (s, 3H, H11) ; 3,93 (s, 3H, Ha) ; 3,98 (s, 6H, Hb) ; 6,75 (d, 1H, 4J6-8=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,08 (d, 1H, 4J8-6=2,2 Hz, H8 ou H6) ; 7,54 (s, 2H, H2+H6) ; 7,97 (s, 1H, H3). RMN 13C (75 MHz, CD3CN /1% CF3COOD) : = 24,9 (C11) ; 56,2 (Cb) ; 60,3 (Ca) ; 96,1 (C6) ; 103,1 (C8) ; 106,4 (C2+C6) ; 109,0 (C1) ; 114,6 (C3) ; 116,5 (C10) ; 123,2 (C9) ; 153,9/159,0/160,1/167,9/168,1/170,8 (C2/C3/C5/C4/C4/C5/C7). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 343(100) [M]+ C19H19O6 [M]+ Calcul : 343,1176 / Trouv : 343,1165 115c : Hexafluorophosphate de 3,4,5,5,7-pentamthoxy-4-mthylflavylium
b
O
3' 4'
PF6O
c 6 5 d 10 3 4 11 7
2' 2 1' 6'
O O
b
5'
Condensation de 116b et 117c
A une solution de 189 mg de 3,5-dimthoxy-phnol 116b (1,0 q. - 1,19 mmol), solubilis dans un minimum dacide actique, sont ajouts 300 mg de 117c (1,0 q. - 1,19 mmol). Puis quelques gouttes dacide hexafluorophosphorique 60 % sont additionnes et le milieu ractionnel est mis sous agitation temprature ambiante pendant 24 heures. Le mlange est ensuite vers dans lther et le prcipit form est isol par filtration et lav abondamment lther pour donner aprs schage 146 mg de 115c. Rendement = 26 % PF > 260C (dcomposition) UV/Vis : max (MeOH / 10% HCl 10%) ( en M-1.cm-1) = 202, 278 (19950), 462 (21400) nm RMN 1H (300 MHz, CD3CN /1% CF3COOD) : = 3,09 (s, 3H, H11) ; 3,94 (s, 3H, Ha ou Hc ou Hd) ; 4,00 (s, 6H, Hb) ; 4,08 (s, 3H, Ha ou Hc ou Hd) ; 4,11 (s, 3H, Ha ou Hc ou Hd) ; 6,85 (d, 1H, 4J64 8=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,38 (d, 1H, J8-6=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,58 (s, 2H, H2+H6) ; 8,09 (s, 1H, H3). 13 RMN C (75 MHz, CD3CN /1% CF3COOD) : = 25,5 (C11) ; 56,4 (Cb) ; 57,1/57,3 (Cc/Cd) ; 60,5 (Ca) ; 94,0 (C6) ; 100,3 (C8) ; 106,5 (C2+C6) ; 115,6 (C1) ; 115,6 (C3) ; 116,5 (C10) ; 123,1 (9) ; 154,0/159,2/161,2/167,9/170,1/170,5 (C2/C3+C5/C4/C4/C5/C7). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 371 (100) [M]+ C21H23O6 [M]+ Calcul : 371,1489 / Trouv : 371,1475 115d : Hexafluorophosphate de 4-fluoro-5,7-dihydroxy-4-mthylflavylium
PF6HO
6 5 7
3' 2' 2 3 4 1' 6'
4' 5'
F C16H12O3PF7 M= 416,23 Poudre orange Condensation de 116c et 117d
10
OH
11
A une solution de 154 mg de phloroglucinol dihydrat 116c (1,0 q. - 0,93 mmol), solubilis dans un minimum dacide actique, sont ajouts 168 mg de 117d (1,0 q. - 0,93 mmol). Puis quelques gouttes dacide hexafluorophosphorique 60 % sont additionnes et le milieu ractionnel est mis sous agitation temprature ambiante pendant 24 heures. Le mlange est ensuite vers dans lther et le prcipit form est isol par filtration et lav abondamment lther pour donner aprs schage 220 mg de 115d.
192
Rendement = 57% PF > 260C (dsomposition) IR (KBr): max = 3671 (O-H), 1636, 1418, 1356, 1166, 848 cm-1 UV/Vis : max (MeOH / 10% HCl 10%) ( en M-1.cm-1) = 206, 304 (16550), 384 (21150) nm RMN 1H (300 MHz, CD3CN / 1% CF3COOD) : = 3,11 (s, 3H, H11) ; 6,78 (d, 1H, 4J6-8=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,36 (d, 1H, 4J8-6=2,2 Hz, H8 ou H6) ; 7,42-7,48 (m, 2H, H3+H5) ; 7,95 (s, 1H, H3) ; 8,36-8,40 (m, 2H, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CD3CN /1% CF3COOD) : = 25,2 (C11) ; 96,1 (C6) ; 103,4 (C8) ; 109,1 (C10) ; 114,7 (C3) ; 117,1 (C3+C5) ; 120,4 (C1) ; 131,4 (C2+C6) ; 158,8/160,4/167,2/168,7/172,0/175,3 (C2/C4/C4/C5/C7/C9). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 271 (100) [M]+ C16H12FO3 Calcul : 271,0765 / Trouv : 271,0745
121a : 2-chloro-1-phnyl-butan-1,3-dione
O
1' 6' 5' 2
2' 3' 4'
C10H9O2Cl M= 196,63 3 4 Huile rose 11 Cl () !-chloration de 117a O
A une solution de 616 mg de benzoylacetone 117a (1,0 q. - 3,2 mmol) dans 8 mL de ttrachlorure de carbone, sont ajouts 436 mg de N-chlorosuccinimide (1,0 q. - 3,2 mmol). La solution est porte reflux et laisse sous agitation pendant 4 heures (suivi CCM). Le mlange ractionnel est filtr sur Bchner et la solution organique est concentre sous pression rduite, pour donner une huile de 400 mg de 121a.
Rendement = 65% CCM : Rf = 0,46 (Actate dthyle/Heptane : 1/4) RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 2,34 (s, 3H, H11) ; 5,28 (s, 1H, H3) ; 7,96 (m, 2H, partie B dun systme de spins AABMM, H4) ; 7,78(m, 2H, partie AA dun systme de spins AABMM, H2+H6) ; 7,98 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AABMM, H3+H5). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 25,6 (C11) ; 64,2 (C3) ; 128,7 (C2+C6) ; 128,9 (C3+C5) ; 131,3 (C4) ; 133,7 (C1) ; 189,8 (C2) ; 198,7 (C4).
121c : 2-chloro-1-(3,4,5-trimthoxyphnyl)-butan-1,3-dione
O
b a
O
3 4 11 ()
O
4'
3'
2'
1' 6'
O
b
Cl
C13H15O5Cl M= 286,71 Solide beige
5'
!-chloration de 117c
A une solution de 270 mg de 117c (1 q. - 1,07 mmol) dans 4 mL de ttrachlorure de carbone, sont ajouts 153 mg de N-chlorosuccinimide (1 q. - 1,07 mmol). La solution est porte reflux est laisse sous agitation pendant 4 heures (suivi CCM). Le mlange ractionnel est filtr sur Bchner et la solution organique est concentre sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Heptane : 1/3) pour donner 203 mg de 121c. Rendement = 84% CCM : Rf = 0,56 (Actate dthyle/Heptane : 1/1) RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 2,40 (s, 3H, H11) ; 3,88 (s, 6H, Hb) ; 3,94 (s, 3H, Ha) ; 6,60 (s, 1H H3) ; 7,35 (s, 2H, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 25,0 (C11) ; 56,9 (Cb) ; 61,1 (Ca) ; 87,2 (C3) ; 108,2 (C2+C6) ; 137,8 (C1) ; 143,9 (C4) ; 152,8 (C3+C5) ; 184,4 (C2) ; 191,9 (C4).
193
122 : 2-actoxy-1-phnyl-butan-1,3-dione
O
1' 6' 5' () 2 3
2' 3' 4'
O
4 11
C12H12O4 M= 220,22 Huile brune !-actoxylation de 121a
O
12 a
A une solution de 500 mg de 2-chlorobenzoylactone 121a (1,0 eq - 2,55 mmol) dans 6 mL de dimthylsulfoxyde, sont additionns 421 mg dactate de sodium (2,0 q. - 5,08 mmol). Le milieu ractionnel est port reflux et laiss sous agitation pendant 3 heures (suivi CCM). 80 mL deau sont ajouts et la phase aqueuse est extraite lther (3 x 50 mL). Les phases organiques sont laves avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 80 mL), sches sur Na2SO4 , filtres et concentres sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Heptane : 1/3) pour donner 239 mg de 122. Rendement = 43% CCM : Rf = 0,33 (Actate dthyle/Heptane : 1/3) RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 2,22 (s, 3H, Ha ou H11) ; 2,28 (s, 3H, Ha ou H11) ; 5,33 (s, 1H, H3) ; 7,98-8,00 (m, 1H, partie B dun systme de spins AABMM, H4) ; 8,03-8,05 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AABMM, H3+H5) ; 8,10 (m, 2H, partie AA dun systme de spins AABMM, H2+H6). Remarque : dautres formes sont prsentes : = 2,11 (s) ; 2,14 (s) ; 6,26 (s) ; 7,52 (m) ; 7,70 (d). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 20,5 (Ca) ; 26,8 (C11) ; 82,2 (C3) ; 128,7 (C3+C5) ; 129,4 (C2+C6) ; 133,9 (C1) ; 134,3 (C4) ; 170,5 (C12) ; 190,8 (C2) ; 191,8 (C4). 124 : Acide 3,4,5-trimthoxybenzoque
O
1" 6" b 5"
OH
12 2" 3" 4"

b
O
a
Permthylation de l'acide gallique
A 20 mL dune solution aqueuse dhydroxyde de sodium 4M et 2,00 g dacide gallique (1,0 q. - 11,52 mmol), sont additionns goutte goutte 2,6 mL de dimthylsulfate (2,5 q. - 22,28 mmol) en maintenant la temprature en-dessous de 30C. Aprs 20 minutes dagitation temprature ambiante 2,6 mL de dimthylsulfate sont additionns goutte goutte (2,5 q. - 22,28 mmol) ainsi que 20 mL dune solution aqueuse dhydroxyde de sodium 4M. Le mlange ractionnel est chauff 90C pendant une heure puis port reflux et laiss sous agitation pendant 2 heures. Le mlange ractionnel est refroidi temprature ambiante et acidifi jusqu pH 2 avec une solution aqueuse dacide chlorydrique 10 %. Le prcipit obtenu est alors filtr sur Bchner et rinc plusieurs fois avec de leau. Le rsidu obtenu est recristallis dans un mlange thanol / eau pour donner 580 mg de 124. Rendement = 29% CCM : Rf = 0,62 (Actate dthyle) RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 3,92 (s, 3H, Ha) ; 3,93 (s, 6H, Hb) ; 7,38 (s, 2H, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 56,2 (Cb) ; 60,9 (Ca) ; 107,2 (C2+C6) ; 124,1 (C1) ; 142,9 (C4) ; 152,9 (C3+C5) ; 171,5 (C12).
194
125 : 2-(3,4,5-trimthoxybenzoate)-1-phnyl-butan-1,3-dione
O
1' 6' 5' () b 6" 5" 2 3
2' 3' 4'
O
4 11
O
12 1''
O
2" 3" 4"
C20H20O7 M= 372,37 Solide jaune Formation in situ de 125

b
O
a
A une solution de 79 mg dhydrure de sodium (1,0 q. - 1,98 mmol) dans 2 mL de dimthylformamide anhydre, sont additionns goutte goutte une solution de 420 mg dacide 3,4,5-trimthoxybenzoque 124 (1,0 q. - 1,98 mmol) dans 2 mL de dimthylformamide anhydride. Le mlange ractionnel est mis sous agitation 30 minutes temprature ambiante, puis 389 mg de 3-chlorobenzoylactone 121a (1,0 q. - 1,98 mmol) dans 2 mL de dimthylformamide sont additionns goutte goutte. La solution est laisse sous agitation temprature ambiante pendant 3 heures (suivi CCM). 40 mL deau sont ajouts et la phase aqueuse est extraite lther (4 x 50 mL). Les phases organiques sont laves avec une solution sature de chlorure de sodium (1 x 60 mL), sches sur Na2SO4 , filtres et concentres sous pression rduite. Le rsidu est purifi par chromatographie sur colonne de silice (Eluant : isocratique Actate dthyle / Heptane : 1/3) pour donner 378 mg de 125. Rendement = 51% CCM : Rf = 0,31 (Actate dthyle / Heptane : 1/2) RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : = 2,40 (s, 3H, H11) ; 3,87 (s, 6H, Hb) ; 3,91 (s, 3H, Ha) ; 6,43 (s, 1H, H3) ; 7,32 (s, 2H, H2+H6) ; 7,51 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AABMM, H3+H5) ; 7,63 (m, 1H, partie B dun systme de spins AABMM, H4) ; 8,07 (m, partie AA dun systme de spins AABMM, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CDCl3) : = 27,0 (C11) ; 56,2 (Cb) ; 60,9 (Ca) ; 82,8 (C3) ; 107,3 (C2+C6) ; 123,3 (C1) ; 128,7 (C2+C6) ; 129,6 (C3+C5) ; 134,3 (C4) ; 134,5 (C4) ; 149,1 (C1) ; 153,6 (C3+C5) ; 164,5 (C12) ; 191,1 (C2) ; 199,3 (C4). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 395 (100) [M + Li]+ , 379 (51) C20H2007Li [M + Li]+ Calcul : 379,1364 / Trouv : 379,1403 120c : Hexafluorophosphate de 5,7-dihydroxy-3-(3,4,5-trimthoxybenzoate)-4mthylflavylium
3'
PF6HO
7 6 5 10 4 11 8 9
2'
4' 5' 6' 12 1" 2" 3" 6"
2 3
1'
C26H23O8PF6 M= 608,42 Poudre orange O

5" 4" b
O O
OH
Condensation de 116c et 125

b a
A une solution de 200 mg de 2-(3,4,5-trimthoxybenzoate)-butan-1-phnyl-1,3-dione 125 (1,0 q. - 0,537 mmol) dans lacide actique sont additionns 88 mg de phloroglucinol dihydrat 116c (1,0 q. - 0,537 mmol) et quelques gouttes dacide hexafluorophosphorique. La raction est laisse sous agitation temprature ambiante pendant 48h. Le mlange ractionnel est vers dans de lther 0C et laiss 12 heures temprature ambiante. Puis il est filtr. Aprs avoir t rinc plusieurs fois lther froid, le rsidu est sch sous pression rduite pour donner 73 mg de 120c.
195
Rendement = 24% UV/Vis : max (MeOH / 5% HCl 10%) ( en M-1 .cm-1) = 286, 386 (20120), 464 (13080) nm RMN 1H (300 MHz, CD3CN) : = 3,01 (s, 3H, H11) ; 3,87 (s, 3H, Ha) ; 3,92 (s, 6H, Hb) ; 6,88 (d, 1H, 4 J6-8=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,11 (d, 1H, 4J8-6=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,49 (s, 2H, H2+H6) ; 7,62 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AABMM, H3+H5) ; 7,72 (m, 1H, partie B dun systme de spins AABMM, H4) ; 8,21 (m, 2H, partie AA dun systme de spins AABMM, H2+H6). RMN 13C (75 MHz, CD3CN) : = 17,7 (C11) ; 56,1 (Cb) ; 60,1 (Ca) ; 96,3 (C6) ; 104,2 (C8) ; 107, 9 (C2+C6) ; 113,6 (C10) ; 124,8/125,3/125,6/127,8 (C1/C1/C3/C9) ; 129,6 (C3+C5) ; 129,8 (C2+C6) ; 134,7 (C4) ; 144,2 (C4) ; 153,6 (C3+C5) ; 158,4/160,9/163,2/166,5/169,6 (C2/C4/C5/C7/C9). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 463 (100) C26H2308 [M]+ Calcul : 463,1387 / Trouv : 463,1393
127a : Hexafluorophosphate trimthoxy)styryl]flavylium
PF6HO
7 6 5 3' 2' 2 3 10 11 4 12 13 18 b 17 14 15 16 1' 6' 4' 5'
de
(E)-7-hydroxy-4-[(3,4,5-
C26H23O5PF6 M=560,42 Poudre pourpre
Condensation de 115a et 113c
O
a
A une solution de 100 mg de 115a (1,0 q. 0,26 mmol) dans lthanol (10 mL) sont additionns 70 mg de 113c (1,3 q. 0,34 mmol). Le mlange ractionnel est port reflux et laiss sous agitation pendant 12 heures (suivi UV-Vis). Lthanol est vapor et le rsidu est vers dans lther. Le prcipit est filtr et lav plusieurs fois lther pour donner 131 mg de 127a. Rendement = 90% UV/Vis : max (MeOH / 5% HCl 10%) = 264, 584 nm RMN 1H (300 MHz, CD3CN / 1 % CF3COOD) : = 3,88 (s, 3H, Ha) ; 3,97 (s, 6H, Hb) ; 7,30 (s, 2H, H14+H18) ; 7,46 (dd, 1H, 4J6-8=2,2 Hz, 3J6-5=9,0 Hz, H6) ; 7,51 (d, 1H, 4J8-6=2,2 Hz, H8) ; 7,75-7,79 (m, 2H, parties AA dun systme de spins AABMM, H3+H5) ; 7,81-7,85 (m, 1H, partie B sun systme de spins AABMM, H4) ; 8,06 (d, 1H, 3J11-12=15,6 Hz, H11) ; 8,42-8,49 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AABMM, H2+H6) ; 8,39 (d, 1H, 3J12-11=15,4 Hz, H12) ; 8,50 (s, 1H, H3) ; 8,71 (d, 1H, , 3J5-6=9,0 Hz, H5). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 415 (100) [M]+ C25H2105 [M]+ Calcul : 415,1540 / Trouv : 415,1548
196
127b : Hexafluorophosphate dimthoxy)styryl]flavylium

3' 2' 2 3 5 10 11 4 12 13 18 b 17 14 15 16 1' 6'
de
(E)-7-hydroxy-4-[(4-hydroxy-3,5-
PF6HO
7 6
4' 5'
C25H21O5PF6 M=546,40 Poudre violette Condensation de 115a et 113g
OH
A une solution de 10 mg de 115a (1,0 q. 0,26 mmol) dans lthanol (10 mL) sont additionns 60 mg de 113g (1,3 q. 0,34 mmol). Le mlange ractionnel est port reflux et laiss sous agitation pendant 4 heures (suivi UV-Vis). Lthanol est vapor et le rsidu est vers dans lther. Le prcipit est filtr et lav plusieurs fois lther pour donner 128 mg de 127b. Rendement = 90% RMN 1H (300 MHz, CD3CN / 1 % CF3COOD) : = 3,28 (s, 6H, Hb) ; 7,28 (s, 2H, H14+H18) ; 7,42 (dd, 2H, 4J8-6=2,2 Hz, 3J6-5=12,4 Hz, H6+H8) ; 7,71-7,84 (m, 3H, parties AA et B dun systme de spins AABMM, H3+H4+H5) ; 7,91 (d, 1H, 3J11-12=15,4 Hz, H11) ; 8,38 (s, 1H, H3) ; 8,39 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AABMM, H2+H6) ; 8,48 (d, 1H, 3J12-11=15,4 Hz, H12) ; 8,65 (d, 1H, 3J5-6=12,3 Hz, H5). 126a : Hexafluorophosphate dioxalphnalne.
PF6HO
6 5 7
de
8-hydroxy-5-phnyl-2-(4-hydroxyphnyl)-1,63'
2' 2 3 4 11 1' 6'
4' 5'
10
O
18 17 13 12
C23H15O4PF6 M= 500,33 Poudre pourpre Condensation de 95b et 113h
14 15 16
OH
A une solution de 100 mg de 95b (1,0 q. - 0,25 mmol) dans lthanol (10 mL) sont additionns 40 mg de 113h (1,3 q. - 0,33 mmol). Le mlange ractionnel est port reflux et laiss sous agitation pendant 6 heures (suivi UV-Vis.). Lthanol est vapor et le rsidu est vers dans lther. Le prcipit est filtr et lav plusieurs fois lther pour donner 95 mg de 126a. Rendement = 75% UV/Vis : max (MeOH / 5% HCl 10%) ( en M-1.cm-1 ) = 260, 374 (8300), 452 (10500) nm RMN 1H (300 MHz, CD3CN / 1 % CF3COOD) : = 7,07-7,11 (dd, 4J15-17=1,8 Hz, 3J15-14= 9,5 Hz, H15+H17) ; 7,23 (d, 1H, 4J6-8=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,25 (d, 1H, 4J8-6=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,67 (s, 1H, H3 ou H11) ; 7,70 (s, 1H, H3 ou H11) ; 7,65-7,70 (m, 2H, partie AA dun systme de spins AABMM, H3+H5) ; 7,72-7,78 (m, 1H, partie B dun systme de spins AABMM, H4) ; 8,11-8,14 (dd, 2H, 4J143 18=1,8 Hz, J14-15= 9,5 Hz, H14+H18) ; 8,15-8,19 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AABMM, H2+H6). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 355 (100) [M]+ C23H1504 [M]+ Calcul : 355,0965 / Trouv : 355,0968
197
126b : Hexafluorophosphate de 8-hydroxy-5-phnyl-2-(4-mthoxyphnyl)-1,6dioxaphnalne.
PF6HO
6 5 7 3' 2' 2 3 4 11 12 14 15 16 1' 6' 10 4' 5'
O
18 17 13
C24H17O4PF6 M= 514,35 Poudre rouge Condensation de 95b et 113b
A une solution de 100 mg de 95b (1,0 q. - 0,25 mmol) dans lthanol (10 mL) sont additionns 43 L de 113b (1,2 q. 0,33 mmol) puis le mlange ractionnel est port reflux et laiss sous agitation pendant 6 heures (suivi UV-Vis.). Lthanol est vapor et le rsidu est vers dans lther. Le prcipit est filtr et lav plusieurs fois lther pour donner 103 mg de 126b. Rendement = 80% UV/Vis : max (MeOH / 5% HCl 10%) ( en M-1.cm-1 ) = 268, 372 (22370), 478 (37810) nm RMN 1H (300 MHz, CD3CN / 1% CF3COOD): = 3,92 (s, 3H, Ha) ; 7,13-7,16 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AAMM, H15+H17) ; 7,99 (s, 2H, H6+H8) ; 7,41 (s, 1H, H3 ou H11); 7,44 (s, 1H, H3 ou H11) ; 7,61-7,73 (m, 3H, parties AA et B dun systme de spins AABMM, H3+H4+H5) ; 8,118,15 (m, 4H, partie MM dun systme de spins AABMM et partie AA dun systme de spins AAMM, H2+H6 et H14+H18). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 396(100) [M]+, 369(42) C24H1704 [M]+ Calcul : 369,1121 / Trouv : 369,1150 126c : Hexafluorophosphate de 8-hydroxy-5-phnyl-2-(3,4,5-trimthoxyphnyl)1,6-dioxaphnalne.
3' 2' 2 3 4 11 12 14 15 16 1' 6' 6 5 10 4' 5'
PF6HO
7
O
18 b 13
C26H21O6PF6 M= 574,41 Poudre bordeaux Condensation de 95b et 113c
17
O
a
A une solution de 100 mg de 95b (1,0 q. 0,25 mmol) dans lthanol (30 mL) sont additionns 66 mg de 3,4,5-trimthoxybenzaldhyde 113c (1,2 q. 0,33 mmol) puis le mlange ractionnel est port reflux et laiss sous agitation pendant 6 heures (suivi UV-Vis.). Lthanol est vapor et le rsidu est vers dans lther. Le prcipit est filtr et lav plusieurs fois lther pour donner 113 mg de 126c. Rendement = 79% UV/Vis : max (MeOH / 5% HCl 10%) ( en M-1.cm-1) = 210, 386 (11690), 494 (38730)nm RMN 1H (300 MHz, CD3CN / 1% CF3COOD) : = 3,97 (s, 9H, Ha + Hb) ; 7,19 (d, 1H, 4J6-8=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,24 (d, 1H, 4J8-6=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,40 (s, 1H, H3 ou H11) ; 7,43 (s, 2H, H14+H18) ; ) 7,49 (s, 1H, H3 ou H11) ; 7,61-7,76 (m, 2H, partie AA dun systme de spins AABMM, H3+H5) ;
198
7,70-7,72 (m, 1H, partie B dun systme de spins AABMM, H4) ; 8,12-8,15 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AABMM, H2+H6). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 415(100) [M]+ C26H2106 [M]+ Calcul : 415,1176 / Trouv : 415,1231 126d : Hexafluorophosphate de 8-hydroxy-5-(4-mthoxyphnyl)-2-(4-(N,N)dimthylaminophnyl)-1,6-dioxaphnalne.
PF6HO
6 5 7 3' 2' 2 3 1' 6' 10 4 11 12 14 15 16 19 4' 5'
O
18 17 13
C26H22O4NPF6 M= 557,42 Poudre verte
Condensation de 115b et 113i
19
A une solution de 34 mg de 115b (1,0 q. 0,08 mmol) dans lthanol (10 mL) sont additionns 15 mg de 113i (1,2 q. 0,096 mmol) puis le mlange ractionnel est port reflux et laiss sous agitation pendant 4 heures (suivi UV-Vis.). Lthanol est vapor et le rsidu est vers dans lther. Le prcipit est filtr et lav plusieurs fois lther pour donner 37 mg de 126d. Rendement = 83% RMN 1H (300 MHz, CD3CN / 1% CF3COOD) : = 3,29 (s, 6H, H19) ; 3,91 (s, 3H, Ha) ; 7,09-7,12 (dd, 2H, partie MM dun systmes de spins AAMM, H15+H17 ou H3+H5) ; 7,16 (d, 1H, 4J6-8=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,18 (d, 1H, 4J8-6=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,41 (s, 1H, H3 ou H11) ; 7,43 (s, 1H, H3 ou H11) ; ) 7,69-7,72 (dd, 2H, partie MM dun systme de spins AAMM, H15+H17 ou H3+H5) ; 8,08-8,12 (dd, 2H, partie AA dun systme de spins AAMM, H14+H18 ou H2+H6) ; 8,21-8,24 (dd, 2H, partie AA dun systme de spins AAMM, H14+H18 ou H2+H6). 126e : Hexafluorophosphate de 8-hydroxy-5-(4-mthoxyphnyl)-2-(4-mthoxyphnyl)-1,6-dioxaphnalne.
PF6HO
6 5 7 3' 2' 2 3 4 11 12 14 15 16 1' 6' 10 4' 5'
O
18 17 13
C25H19O5PF6 M= 557,42 Poudre rouge
Condensation de 115b et 113c
A une solution de 107 mg de 115b (1,0 q. 0,25 mmol) dans lthanol (10 mL) sont additionns 34 L de 113b (1,2 q. 0,273 mmol) puis le mlange ractionnel est port reflux et laiss sous agitation pendant 12 heures (suivi UV-Vis.). Lthanol est vapor et le rsidu est vers dans lther. Le prcipit est filtr et lav plusieurs fois lther pour donner 105 mg de 126e.
199
Rendement = 77% RMN 1H (300 MHz, CD3CN / 1% CF3COOD) : = 3,93 (s, 6H, Ha+Hb) ; 7,15 (s, 2H, H3+H11 ou
H6+H8) ; 7,13-7,16 (dd, 4H, H15+H17+H3+H5) ; 7,35 (s, 2H, H3+H11 ou H6+H8) ; 8,09-8,12 (dd, ) 4H, H14+H18+H2+H6). 126f : Hexafluorophosphate de 8-hydroxy-5-(3,4,5-trimthoxyphnyl)-2-(4hydroxyphnyl)-1,6-dioxaphnalne.
b
O
3' 4'
PF6 HO
6 5 7
2' 2 3 4 11 1' 6'
O O
a b
5'
10
O
18 17 16 13 12
C26H21O7PF6 M= 590,40 Poudre rouge Condensation de 115c et 113h
14 15
OH
A une solution de 50 mg de 115c (1,0 q. 0,102 mmol) dans lthanol (10 mL) sont additionns 16 mg de 113h (1,2 q. 0,123 mmol) puis le mlange ractionnel est port reflux et laiss sous agitation pendant 8 heures (suivi UV-Vis.). Lthanol est vapor et le rsidu est vers dans lther. Le prcipit est filtr et lav plusieurs fois lther pour donner 39 mg de 126f. Rendement = 65% UV/Vis : max (MeOH / 5% HCl 10%) ( en M-1.cm-1) = 216, 260, 486 (38990)nm RMN 1H (300 MHz, CD3CN/ 1% CF3COOD) : = 3,89 (s, 3H, Ha) ; 3,97 (s, 6H, Hb) ; 7,05- 7,08 (dd, 2H, 4J15-17=2,2 Hz, 3J15-14=9,1 Hz, H15+H17) ; 7,19 (d, 1H, 4J6-8=2,2 Hz , H6 ou H8) ; 7,24 (d, 1H, 4J86=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,34 (s, 1H, H3 ou H11) ; 7,40 (s, 2H, H2+H6) ; 7,49 (s, 1H, H3 ou H11) ; 8,07-8,10 (dd, 2H, 4J14-18=2,2 Hz, 3J14-15=9,1 Hz, H14+H18). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 445(100) [M]+ C26H2107 [M]+ Calcul : 445,1282 / Trouv : 445,1029 126g : Hexafluorophosphate de 8-hydroxy-5-(3,4,5-trimthoxyphnyl)-2-(3,4,5trimthoxyphnyl]-1,6-dioxaphnalne.
b
O
3' 4'
PF6 HO
6 5 7
2' 2 3 4 11 1' 6'
O O
a b
5'
10
O
18 b 17 13 12
C29H27O9PF6 M= 664,48 Poudre rouge
Condensation de 115c et 113c

14 15 b
16
O
a
A une solution de 50 mg de 115c (1,0 q. 0,102 mmol) dans lthanol (10 mL) sont additionns 25 mg de 113c (1,2 q. 0,123 mmol) puis le mlange ractionnel est port reflux et laiss sous agitation pendant 12 heures (suivi UV-Vis.). Lthanol est vapor et le rsidu est vers dans lther. Le prcipit est filtr et lav plusieurs fois lther pour donner 35 mg de 126g.
200
Rendement = 52% UV/Vis : max (MeOH / 5% HCl 10%) ( en M-1.cm-1) = 210, 268, 490 (19820) nm RMN 1H (300 MHz, CD3CN, 1% CF3COOD) : = 3,90 (s, 6H, Ha) ; 3,98 (s, 12H, Hb) ; 7,28 (s, 2H, H6+H8 ou H3+H11) ; 7,42 (s, 4H, H2+H6+H14+H18) ; 7,52 (s, 2H, H6+H8 ou H3+H11). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 519 (100) [M]+ C29H2709 [M]+ Calcul : 519,1650 / Trouv : 519,1363
126h : Hexafluorophosphate de 5-(4-fluorophnyl)-8-hydroxy-2-(4-(N,N)dimthylaminophnyl)-1,6-dioxaphnalne.
PF6HO
6 5 7 3' 2' 2 3 4 11 12 14 15 16 19 1' 5' 6' 10 4'
O
18 17 13
C25H19O3NPF7 M= 545,39 Poudre rouge Condensation de 115d et 113i
19
A une solution de 68 mg de 115d (1,0 q. - 0,16 mmol) dans lthanol (15 mL) sont additionns 41 mg de 113i (1,7 q. - 0,27 mmol) puis le mlange ractionnel est port reflux et laiss sous agitation pendant 12 heures (suivi UV-Vis.). Lthanol est vapor et le rsidu est vers dans lther. Le prcipit est filtr et lav plusieurs fois lther pour donner 70 mg de 126h. Rendement = 75% UV/Vis : max (MeOH / 5% HCl 10%) ( en M-1.cm-1) = 204, 346 (12080), 494 (37860)nm RMN 1H (300 MHz, CD3CN / 1% CF3COOD) : = 3,15 (s, 6H, H19) ; 6,83-6,68 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AAMM, H15+H17) ; 7,07- 7,08 (m, 2H, H6 ou H8 ou H3 ou H11) ; 7,23-7,24 (m, 2H, H6 ou H8 ou H3 ou H11) ; 7,37-7,40 (m, 2H, H3+H5) ; 7,99- 8,03 (m, 2H, H14+H18) ; 8,128,15 (m, 2H, partie AA dun systme de spins AAMM, H2+H6). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 400(100) [M]+ C25H1903NF [M]+ Calcul : 400,1343 / Trouv : 400,1311 126i : Hexafluorophosphate de 8-hydroxy-4-(3,4,5-trimthoxybenzoate)-5phnyl-2-(4-(N,N)-dimthylaminophnyl)-1,6-dioxalne.
PF6HO
6 5 7 3' 2' 2 1' 5' 3 10 4 11 12 14 15 16 19 b 19 6' 4'
C35H30O8NPF6 M=737,58 Poudre violette
O
20
O
18 17 13
O
6"
1"
2"
3"
O O
b a
4" 5"
O Condensation de 120c et 113i
A une solution de 41 mg de 120c (1,0 q. - 0,067 mmol) dans lthanol (10 mL) sont additionns 15 mg 113i (1,5 q. 0,096 mmol) puis le mlange ractionnel est port reflux et laiss sous agitation pendant 12 heures (suivi UV-Vis.). Lthanol est vapor et le rsidu est vers dans lther. Le prcipit est filtr et lav plusieurs fois lther pour donner 20 mg de 126i.
201
Rendement = 50% UV/Vis : max (MeOH / 5% HCl 10%) ( en M-1.cm-1) = 280, 352 (15790), 568 (55210) nm RMN 1H (300 MHz, CD3CN / 1% CF3COOD) : = 2,36 (s, 6H, H19) ; 3,08 (s, 3H, Ha) ; 3,12 (s, 6H, Hb) ; 6,047-6,065 (dd, 2H, 4J15-17=1,8 Hz ; 3J15-14=9,4 Hz, H15+H17) ; 6,28 (s, 1H, H11) ; 6,30 (d, 1H, 4 J6-8=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 6,38 (d, 1H, 4J8-6=2,2 Hz, H6 ou H8); 6,69 (s, 2H, H2+H6) ; 6,74-6,77 (m, 3H, parties AA et B dun systme de spins AABMM, H3+H4+H5) ; 7,21-7,23 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AABMM, H2+H6) ; 7,27-7,28 (dd, 2H, 4 J14-18=1,8 Hz ; 3J14-15=9,4 Hz, H14+H18). RMN 13C (500 MHz, CD3CN / 1% CF3COOD) : = 40,7 (C19) ; 57,1 (Cb) ; 61,16 (Ca) ; 96,4 (C6) ; 101,3 (C8) ; 101,4 (C11) ; 109,26 (C2+C6) ; 113,5 (C15+C17) ; 116,0 (C10) ; 123,9 (C1) ; 129,7 (C3+C5) ; 130,2 (C2+C6) ; 132,4 (C14+C18) ; 133,8 (C4) ; 145,2/146 (C3/C20) ; 153,5/154,1/154,3/156,8/159,4/154,8/166,2/170,8 (C1/C2/C3/C4/C4/C5/C5/C7/C9/C13/C16). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 592 (100) C35H3008N [M]+ Calcul : 592,1966 / Trouv : 592,1829
126j : Hexafluorophosphate de 8-hydroxy-4-(3,4,5-trimthoxybenzoate)-5phnyl-2-(4-mthoxyphnyl)-1,6-dioxaphnalne.
3' 2' 2 1' 5' 3 5 10 4 11 12 14 15 16 b 6'
PF6HO
6 7
4'
C34H27O9PF6 M=724,54 Poudre rouge
O
20
O
18 17 13
O
6"
1"
2"
3"
O O
b b
4" 5"
O Condensation de 120c et 113b
O
c
A une solution de 41 mg de 120c (1,0 q. - 0,067 mmol) dans lthanol (10 mL) sont additionns 13 L de 113b (1,5 q. - 0,1005 mmol) puis le mlange ractionnel est port reflux et laiss sous agitation pendant 10 heures (suivi UV-Vis.). Lthanol est vapor et le rsidu est vers dans lther. Le prcipit est filtr sur entonnoir (plus papier filtre) et lav plusieurs fois lther pour donner 29 mg de 126j. Rendement = 60% UV/Vis : max (MeOH / 5% HCl 10%) ( en M-1.cm-1 ) = 202, 272 (39730), 486 (23070) nm RMN 1H (300 MHz, CD3CN / 1% CF3COOD) : = 3,88 (s, 3H, Hc) ; 3,93 (s, 6H, Hb) ; 3,94 (s, 3H, Ha) ; 7,15-7,18 (dd, 2H, 4J15-17=1,8 Hz ; 3J15-14=6,9 Hz, H15+H17) ; 7,29 (d, 1H, 4 J6-8=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,35 (d, 1H, 4 J8-6=2,2 Hz, H6 ou H8); 7,36 (s, 1H, H11) ; 7,51 (s, 2H, H2+H6) ; 7,56-7,66 (m, 3H, parties AA et B dun systme de spins AABMM, H3+H4+H5) ; 8,09-8,11 (m, 2H, partie MM dun systme de spins AABMM, H2+H6) ; 8,22-8,25 (dd, 2H, 4 J14-18=1,8 Hz ; 3J14-15=6,9 Hz, H14+H18). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 579 (100) C34H2709 [M]+ Calcul : 579,1650 / Trouv : 579,1958
202
Procdure gnrale pour ltape de condensation pour lexprience sur le screening de solvants
A une solution de 95d (1,0 q. - 0,15 mmol) dans le solvant-test (10 mL) le benzaldhyde 113 (1,5 q. - 0,18 mmol) est additionn, puis le mlange ractionnel est port reflux et laiss sous agitation (suivi UV-Vis.). Lthanol est vapor et le rsidu est vers dans lther. Le prcipit est filtr et lav plusieurs fois lther pour donner le produit condens. Hexafluorophosphate de (E)-5,7-dimthoxy-4-(3-mthoxystyryl)flavylium
3' 2' 2 3 5 a 18 17 16 10 4 12 13 14 15 c 1' 6' 4' 5'
PF6O
b 6 7
C26H23O4PF6 M=544,42
11
Condensation de 95d et 132m
UV/Vis : max (MeOH / 5% HCl 10%) ( en M-1.cm-1) = 204, 272 (24190), 442 (29510) nm RMN
1
H (300 MHz, CD3CN / 1% CF3COOD) : = 3,91 (s, 3H, Hc) ; 4,12 (s, 3H, Ha ou Hb) ; 4,16 (s,
3H, Ha ou Hb) ; 6,90 (d, 1H, 4J6-8=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,14-7,16 (m, 1H) ; 7,31 (d, 1H, 4 J8-6=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,39 (m, 1H) ; 7,47-7,50 (m,2H) ; 7,73-7,84 (m, 3H) ; 8,19-8,25 (d, 1H, 3J11-12 = 16,1 Hz, H11) ; 8,38 (s, 1H, H3) ; 8,39-8,42 (m, 3H) ; 8,66-8,71 (d, 1H, 3J12-11= 15,9 Hz, H12). Hexafluorophosphate de (E)-5,7-dimthoxy-4-(2-mthoxystyryl)flavylium
3' 2' 2 3 5 a 18 17 16 10 4 12 13 14 15 1' 6' 4' 5'
PF6O
b 6 7
C26H23O4PF6 M=544,42
11
Condensation de 95d et 132o O

c
1
H (300 MHz, CD3CN / 1% CF3COOD) : = 4,04 (s, 3H, Hc) ; 4,11 (s, 3H, Ha ou Hb) ; 4,15 (s,
3H, Ha ou Hb) ; 6,87 (d, 1H, 4J6-8=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,12-7,18 (m, 2H) ; 7,27 (d, 1H, 4 J8-6=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,55-7,59 (m, 1H, partie B dun systme de spins AABMM, H4) ; 7,71-7,74 (m, 2H) ; 7,80-7,82 (m, 2H) ; 8,34 (s, 1H, H3) ; 8,36-8,8,38 (m, 2H) ; 8,42 (d, 1H, 3J11-12 = 16,1 Hz, H11 ou H12) ; 8,92-8,97 (d, 1H, 3J12-11= 16,1 Hz, H11 ou H12) . RMN 13C (500 MHz, CD3CN / 1% CF3COOD) : = 56,7 (Ca ou Cb ou Cc) ; 58,2 (Ca ou Cb ou Cc) ; 58,3 (Ca ou Cb ou Cc) ; 95,4 (C6) ; 101,5 (C8) ; 109,4 (C3) ; 111,8 (C10) ; 113,2 (C15) ; 122,3 (C17) ; 125,1 (C9) ; 126,7 (C18) ; 129,3 (C3+C5) ; 130,4 (C1) ; 130,7 (C2+C6) ; 132,5 (C4) ; 135,3 (C11 ou C12) ; 135,8 (C11 ou C12) ; 145,9 (C16) ; 161,0/161,1/162,5/163,7/167,2/170,9 (C2/C4/C5/C7/C13/C14).
203
SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 367 (100) , 399 (39) C26H2304 [M]+ Calcul : 399,1591 / Trouv : 399,1655 Hexafluorophosphate de (E)-5,7-dimthoxy-4-(4-nitrostyryl)flavylium
PF6O
b 6 5 a 18 17 16 3 10 4 12 13 14 15 7 3' 2' 2 1' 6' 4' 5'
11
C25H20O5NPF6 M=559,39 Condensation de 95d et 133p
NO2
RMN
H (300 MHz, CD3CN / 1% CF3COOD) : = 4,14 (s, 3H, Ha ou Hb) ; 4,18 (s, 3H, Ha ou Hb) ;
6,94 (d, 1H, 4 J6-8=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,37 (d, 1H, 4 J8-6=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,71-7,86 (m, 3H, parties AA et B dun systme de spins AABMM, H3+H4+H5) ; 8,03-8,07 (dd, 2H, 4J15-17=1,8 Hz ; 3J15-14=6,9 Hz, H15+H17) ; 8,20 (d, 1H, 3J11-12 = 16,1 Hz, H11 ou H12) ; 8,35-8,38 (dd, 2H, 4J14-18=1,8 Hz ; 3J1415=6,9 Hz, H14+H18) ; 8,42 (s, 1H, H3) ; 8,43-8,45 (m, 2H, parties MM dun systme de spins AABMM, H2+H6) ; 8,72 (d, 1H, 3J12-11= 16,1 Hz, H12) Hexafluorophosphate de (E)-5,7-dimthoxy-4-(3-nitrostyryl)flavylium
PF6O
b 6 5 a 18 17 16 3 10 4 12 13 14 15 7 3' 2' 2 1' 6' 4' 5'
C25H20O5NPF6 M=559,39 Condensation de 95d et 133m
11
NO2
UV/Vis : max (MeOH / 5% HCl 10%) ( en M-1.cm-1) = 272, 402 (39620), 656 nm RMN
1
H (300 MHz, CD3CN / CF3COOD) : = 4,13 (s, 3H, Ha ou Hb) ; 4,18 (s, 3H, Ha ou Hb) ; 6,92
(d, 1H, J6-8=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,3 (d, 1H, 4J8-6=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,74-7,85 (m, 4H) ; 8,16-8,20 (d, 1H, 3J11-12 = 16,1 Hz, H11) ; 8,34-8,37 (m, 1H) ; 8,39 (s, 1H, H3) ; 8,42-8,44 (m, 2H) ; 8,61 (m, 1H) ; 8,68-8,73 (d, 1H, 3J12-11= 15,9 Hz, H12). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 414 (100) C25H2005N [M]+ Calcul : 414,1336 / Trouv : 414,1270
204
Hexafluorophosphate de (E)-5,7-dimthoxy-4-(2-nitrostyryl)flavylium
PF6O
b 6 5 a 18 17 16 3 10 4 12 13 14 15 7 3' 2' 2 1' 6' 4' 5'
C25H20O5NPF6 M=559,39 Condensation de 95d et 133o
11
NO2
1
H (300 MHz, CD3CN / 1% CF3COOD) : = 4,14 (s, 3H, Ha ou Hb) ; 4,15 (s, 3H, Ha ou Hb) ;
6,93 (d, 1H, 4J8-6=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,37 (d, 1H, 4J8-6=2,2 Hz, H6 ou H8) ; 7,73-7,78 (m, 3H) ; 7,83-7,88 (m, 2H) ; 7,98 (m, 1H, H17 ou H4) ; 8,12-8,15 (m, 1H, H17 ou H4) ; 8,27 (s, 1H, H3) ; 8,28-8,34 (d, 1H, 3J11-12 = 16,1 Hz, H11 ou H12) ; 8,38-8,41 (m, 2H) ; 8,61 (m, 1H) ; 8,47-8,50 (d, 1H, 3J12-11= 15,9 Hz, H11 ou H12). SM (ESI, mode positif) : m/z(%) 414 (100) C25H2005N [M]+ Calcul : 414,1336 / Trouv : 414,1288
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RESUME
Les anthocyanes (du grec anthos : fleur et kyanos : bleu) appartiennent un grand groupe du rgne vgtal : la classe des flavonodes. Les drivs anthocyaniques ont un rle de chromophores et sont ainsi en partie responsables des couleurs oranges ( = 480-490 nm), rouges ( = 490-500 nm), violettes ( = 560-580 nm) et bleues ( = 580-595 nm) des fruits et des fleurs. Ce sont des pigments dorigine vgtale , devenant ce titre de srieux candidats en tant que colorants industriels. Cependant, ils sont sensibles plusieurs facteurs physico-chimiques : pH, temprature, lumire Par exemple, leur instabilit en solution aqueuse est un rel inconvnient pour une utilisation en tant que colorants dans lindustrie. Lorsque nous observons les moyens entrepris par la nature pour conserver la couleur des fruits et des fleurs dans leur environnement cellulaire vgtal, nous pouvons citer plusieurs phnomnes trs ingnieux qui stabilisent et/ou intensifient la coloration au sein de la plante. Outre des processus de stabilisation par copigmentation, celui qui intervient au niveau de la nature de la couleur du vin rouge a attir notre attention. Il a t tabli que les anthocyanes, voluant en milieu hydroalcoolique, disparaissent progressivement de la solution vin selon divers processus chimiques et donnent finalement naissance des molcules plus stables mais aussi plus complexes. On peut notamment citer les anthocyanes-(48)-flavan-3-ols ou encore les vitisines. Ces molcules de type pyranoanthocyane ont particulirement attir notre attention, elles prsentent un cycle D supplmentaire six chanons : il joue le rle de groupe protecteur face aux additions deau en position 2 et 4 du squelette flavylium, leffet msomre stabilisant ces deux sites sensibles. Dans le but daccder des colorants plus stables que les anthocyanes, nous avons dvelopp une mthode de synthse de drivs pyranoanthocyanidiques. Notre principale stratgie est base sur la construction dun intermdiaire incontournable, la structure sel de 4-mthylflavylium, par condensation dune 1-phnyl-butan-1,3dione ou dune 2-O-1-phnyl-butan-1,3-dione avec un phnol. Une vingtaine de drivs pyranoanthocyanidiques ont t ainsi synthtiss, permettant dans un futur proche des tudes comparatives de stabilit entre ces nouveaux pigments et leurs homologues anthocyanidiques. MOTS CLES : Flavonodes - Vin rouge - Squelette flavylium - Pigments
pyranoanthocyanidiques Synthse.
218

Contribution À La Chimie Des Flavonoïdes - Accès À Des Analogues de Pigments Du Vins Rouges

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UNIVERSITE LOUIS PASTEUR DE STRASBOURG ECOLE DOCTORALE DE CHIMIE THESE Prsente en vue de lobtention du grade de DOCTEUR de LUNIVERSITE LOUIS

PASTEUR STRASBOURG I SPECIALITE : CHIMIE ORGANIQUE

Soutenue le 13 dcembre 2007 devant la commission dexamen :

A mes parents, mon frre et Jean-Christophe

Introduction : Prsentation de flavonodes

2.1.1 2.1.2 2.1.3 2.2

2.2.1 2.2.2 2.2.3 2.3

2.3.1 2.3.2 2.3.3 2.4

2.4.1 2.4.2 2.4.3 2.5

2.5.1 2.5.2 2.5.3

p.24 p.24 p.25 p.27 p.29

2.6.1 2.6.2 2.6.3

B. Pigments naturels et leur comportement en solution aqueuse

1.2.1 1.2.2 1.2.3

2. Stabilisation naturelle de la couleur 2.1 Copigmentation Copigmentation intermolculaire Copigmentation intramolculaire

2.1.1 2.1.2 2.2 2.3

Interactions avec les ions mtalliques Utilisation des anthocyanes

3.1.1 3.1.2 3.1.3 3.1.4

p.42 p.43 p.43 p.43 p.44 p.45 p.45 p.46 p.48

Composition en anthocyanes Composition selon le cpage Climat Au cours de la vinification

3.2.1 3.2.2 3.2.3 3.3

3.3.3 Pigments sophistiqus forms partir de la malvidine-3-Oglucoside

Voies daccs des motifs pyranoanthocyanidiques

Accs au motif flavonol

1.3.1 1.3.2 2. Stratgie B2 2.1 2.2

2.2.1 2.2.2 B2B 2.2.3 B2C 2.2.4 3. Stratgie B3 3.1 3.2

-actoxylation par le triactate de manganse: Conditions

p.84 p.84 p.85 p.89

Prsentation et rsultats de la synthse biomimtique B3 Bilan et extension de la stratgie B3

4. Bilan des stratgies B 4.1 4.2 Bilan Perspectives

C. Accs au motif sel de 4-mthylflavylium

1.2.1 1.2.2 1.3

1.3.1 1.3.2 1.3.3 1.3.4 1.4

Accs au motif sel de 4-mthylflavylium

2.2.1 2.2.2 2.3 2.4 2.5

D. Accs au motif pyranoanthocyanidine

1.2.1 1.2.2 1.3

2.1.1 2.1.2 2.1.3 2.2 2.3 3. Bilan

Ac ADP AL APCI Ar ATP Bn

actyle Adnosine DiPhosphate acide de lewis

Atmospheric Pressure Chemical Ionization

cat. CCM DDQ DEPT DMDO DMF DMSO DPPH dr

catalytique Chromatographie sur couche mince 2,3-Dichloro-5,6-DicyanobenzoQuinone

Distortionless Enhancement by Polarization Transfer

ee q. ESI Et g HIV HMDS HR Hz IR L LDA

excs enantiomrique quivalent

Human Immunodeficience Virus

Introduction : Prsentation de flavonodes

B. Pigments naturels et leur comportement en solution aqueuse (p. 29-53)

Structure tricyclique commune aux flavonodes

Figure 1 : Structures des flavonodes : enchanement C6-C3-C6

Une flavanone naturelle: Le mattucinol-7-0-(4",6"-0-(S)-hexahydroxydiphenylglucoside) isol de Miconia myriantha (Melastomataceae)

Figure 2 : Exemple de la complexit dun flavonode naturel

Tableau 1 : Molcules impliques dans la biosynthse des flavonodes

p-coumaroyl CoA + 3 actyl CoA CHS OH HO OH Chalcones OH O Flavanones IFS FS

OH O CHI HO Flavan-4-ol ANS OH HO O F3H FNR OH O

OH OH 3-Doxyanthocyanidines HO O OH FLS HO O OH Flavonols OH HO O OH Anthocyanidines OH O OGlycoside Anthocyanines OH

Dihydroflavonols DFR ANS ou LDOX

Flavane-3,4-diols (Leucoanthocyanes) FDR HO O OH

2.1 Les chalcones 2.1.1 Vers les chalcones : tape biosynthtique

leptobotrys (Verbenaceae), est obtenue par action dune enzyme, la Chalcone

Schma 2 : Formation du squelette C6-C3-C6

Chalcones naturelles et proprits associes