ENZIMAS

 La

enorme variedad de reacciones bioquimicas que comprende la vida son mediadas, en su mayora por una serie de catalizadores biologicos notables conocidos como enzimas. enzimas.

 Las

enzimas son proteinas especializadas en la catalisis de las reacciones biologicas, una de sus caractersticas es que no se consumen, se requieren en pequeas cantidades. cantidades.

 Presentan

inhibicin reversible y no reversible, son altamente especficas

 Se

encuentran entre las mas notables de las biomoleculas conocidas debido a su extraordinaria especificidad y a su poder catalitico, que es mucho mayor y mejor que la de los catalizadores hechos por el hombre. hombre.

 Muchas

enzimas han sido designados anadiendo el sufijo asa al nombre del sustrato, es decir, de la sustrato, molecula sobre la cual la enzima ejerce su accion catalitica. catalitica. ejemplo, la ureasa cataliza la hidrlisis de la urea. urea.

 Por

 Lo

anterior llevo o condujo a la formulacion de su hipotesis de la cerradura y la llave; llave;

 La

especificidad de una enzima (la cerradura) por su sustraro (la llave) procede de sus formas complementarias geometricas. geometricas.

Cofactores Enzimaticos
 La

actividad de algunas enzimas depende solamente de su estructura como proteinas, mientras que otros necesitan, ademas mas de uno o mas componentes no proteicos, llamados cofactores. cofactores. cofactor puede ser un ion metalico, o bien una molecula llamada coenzima; algunas enzimas coenzima; necesitan de ambos. ambos.

 El

 El

complejo enzima-cofactor enzimacataliticamente activo recibe el nombre de holoenzima. holoenzima.

 Cuando

se separa el cofactor, la proteina restante, que por si misma es inactiva cataliticamente, se designa con el nombre de apoenzima. apoenzima.

 Las

enzimas que precisan de iones metalicos se llaman a veces metaloenzimas; metaloenzimas; en algunos de ellos, el componente metalico, pro si solo, ya posee una actividad catalitica primaria. primaria.

 Cada

uno de las coenzimas catalogadas contiene, como parte de su estructura, una molecula de alguna de las vitaminas; estas son vitaminas; sustancias organicas que, en cantidades minimas son vitales para la funcion de todas las celulas. celulas.

 Cuando

la coenzima se halla unido intimamente a la molecula de la enzima recibe, el nombre de grupo prostetico. prostetico.

 Sin

embargo, en algunos casos la coenzima esta unida debilmente y actua esencialemtne, como un de los sustratos especificos de la enzima. enzima.

Caracteristicas generales :


La mayoria est constituida por ms de 100 aminocidos dandoles una masa mayor a 10 kilodaltons y un dimetro mayor a 25 amstrongs Disminuye la energa de activacin. activacin. Alta especificidad. especificidad.

 

 Pueden

ser regulables o alostricas  Son susceptibles de inhibicin. inhibicin.  Modifcan la estructura qumica del sustrato. sustrato.  No alteran el equilibrio de las reacciones. reacciones.  Tienen la capacidad de intercambiar diferentes formas de energa. (Ejm. energa. (Ejm. Fotosntesis)

CONCEPTOS BASICOS
 SUSTRATO:  Sustancia

sobre la que actue una enzima y la transforma

 CATALIZADOR:  Sustancia

que aumenta o disminuye la velocidad de una reaccin

APOENZIMA
 Es

la parte de naturaleza protica del sistema enzimtico , es la que realiza la actividad enzimtica propiamente dicha ya que en ella se encuentra el centro o sitio activo. activo.

 Generalmente

es de peso molecular elevado, termolbil (se desnaturaliza) y no dializable. dializable.

COENZIMA
 Parte

del sistema enzimtico de naturaleza no protica que suele acompaar a la apoenzima para facilitarle su trabajo, es de peso molecular bajo por lo que es dializable, es termoestable, adherida de manera ms o menos laxa a la apoenzima. apoenzima. Si la unin a la apoenzima es fuerte ntima se le denomina grupo prosttico. prosttico.

 HOLOENZIMA: HOLOENZIMA: 

Es la unin de la apoenzima con la coenzima.

 PROENZIMAS: 

Formas inactivas de las enzimas. Ejemplos: Pepsingeno, Tripsingeno, Quimiotripsingeno, Protrombina, Fibringeno, Proinsulina, etc.

ISOENZIMA
 Son

formas fisicamente distintas de una enzima que catalizan la misma reaccin y pueden separse por electroforsis, tiene diferentes propiedades cinticas, se sintetizan en tejidos diferentes. diferentes.

SITIO ACTIVO
 Es

donde el sustrato se une a una regin especfica de la enzima que es una secuencia particular de aminocidos.

 INDUCTOR:

Son de naturaleza hormonal y su funcin es promover la sntesis de la enzima. Inhibe por mecanismos distintos la sntesis de protenas enzimticas. A las sustancia que reprimen o detienen la actividad de una enzima se les llama inhibidor, y es la forma como muchos de los frmacos actan.

 REPRESORES:

 INHIBIDOR:

CLASIFICACION DE LAS ENZIMAS EN BASE A SU FUNCION

Ejemplos de cada una de las principales clases de enzimas

CLASE 1. OXIDORREDUCTASAS
Actuan en la oxidorreduccin (prdida o ganancia de iones hidrgeno) al adicionar o sustraer un hidruro ( H: ) o un in hidronio ( H+ ).  deshidrogenasas , oxidasas , oxigenasas , hidroxilasas , peroxidasas , catalasa .  xantina oxidasa, gliceraldehido 3-P deshidrogenasa  oxidasas de aminocidos  actuan con NADH o NADPH


CLASE 2. TRANSFERASAS:
 Transfieren

tomos o grupos de tomos de un sustrato a otro , que no sean hidrgenos y que los grupos que se estn transfiriendo no queden libres como ejemplo tenemos a las dos transferasas ( ALT Y AST). AST).

 transaminasas

TRANSFERASAS
 Estas

enzimas catalizan la transferencia de una parte de la molecula[dadora]a otra aceptadora.  Su clasificacion se basa en la naturaleza quimica del sustrato atacado y en la del aceptor  Tambien este grupo de enzimas actuan sobre los sustratos mas diversos,transfiriendo grupos metilo,aldehido.glucosilo,amina sulfato etc.

 Transferasas,

transfieren grupos activos (obtenidos de la ruptura de ciertas molculas)a otras sustancias receptoras. receptoras. Suelen actuar en procesos de interconversiones de azucares, de aminocidos. aminocidos.

 Transaldolasas  Transcetolasas  Transaminasas

CLASE 3. HIDROLASAS
 Rompen

las molculas mediante los constituyentes del agua , en stas estn incluidas todas las enzimas digestivas que son un ejemplo caracterstico. caracterstico.

 peptidasas  ureasa

Esta clase de enzimas actan normalmente sobre las grandes molculas del protoplasma, como son la de glicgeno, las grasas y las protenas. La accin cataltica se protenas. expresa en la escisin de los enlaces entre tomos de carbono y nitrgeno (C-N) o (Ccarbono oxigeno (C-O); Simultneamente se (C-O); obtiene la hidrlisis de una molcula de agua. agua.

El hidrgeno y el oxidrilo resultantes de la hidrlisis se unen respectivamente a las dos molculas obtenidas por la ruptura de los mencionados enlaces. La clasificacin de estas enlaces. enzimas se realiza en funcion del tipo de enlace quimico sobre el que actan. actan. A este grupo pertenecen protenas muy conocidas: conocidas: la pepsina, presente en el jugo gstrico, y la tripsina y la quimiotripsina, segregada por el pncreas. pncreas.

HIDROLASAS Catalizan las reacciones de hidrlisis: A-B + H2O AH + B-OH B-

Un ejemplo es la lactasa, que cataliza la reaccin: lactosa + agua glucosa + galactosa

CLASE 4. LIASAS
 Catalizan

el rompimiento de un enlace covalente o su formacin. formacin.  Descarboxilasas,  dehidratasas (aconitasa). (aconitasa).  piruvato descarboxilasa, aldolasa  fumarasa (hidroliasa)

LAS LIASAS VAN A ROMPE UN GRUPO FUNCIONAL PARA FORMAR UN ENLACE DOBLE.

TIPO DE REACCIONES CATALIZADAS

LI
LAS LIASAS CATALIZAN REACCIONES EN LAS QUE SE ELIMINAN GRUPOS, POR EJEMPLOEJEMPLOH2O, CO2 , NH3. PARA FORMAR UN DOBLE ENLACE O SE AADEN A UN DOBLE ENLACE.

LOS EJEMPLOS SON LIASAS

DESCARBOXILASAS HIDRATASAS DESHIDRATASAS DESAMINASAS SINTASAS FUMARASA HIDROLIASA HIDROLIASA

CLASE 5. ISOMERASAS
Catalizan rearreglos intramoleculares, distinguen las diferentes formas de isomeria. isomeria.
 racemasas

- epimerasas  cis - trans isomerasas  oxidorreductasas intramoleculares

CLASE 6. LIGASAS O SINTETASAS

Estas va a unir molculas , pero para unirlas requieren de un donador de energa que en este caso va a ser el ATP. ATP.
 enzimas

activantes de aminocidos  sintetasa de glutamina  acetil CoA carboxilasa, piruvato carboxilasa, citrato sintetasa. sintetasa.

isopentenil fosfato isomerasa, indispensable en el cambio biosintico del escualeno y el colesterol. . Algunas isomerasa actan realizando inversiones muy complejas, como transformar compuestos aldehdos en compuestos cetona, o viceversa. Estas ultimas desarrollan una oxidorreduccin dentro de la propia molcula..

CINETICA QUIMICA

Concepto: Es el movimiento de las reacciones, medir y expresar las velocidades de las reacciones

Cintica Qumica
Las reacciones qumicas pueden clasificarse basndose en el nmero de molculas que en total deben de reaccionar para formar los productos de la reaccin. As tendremos reacciones monomoleculares, biomolecurares y trimoleculares.

Las reacciones qumicas pueden Clasificarse tambin sobre una base cintica, por el orden de reaccin. Orden cero Primer orden Segundo orden Segn como resulte influida la velocidad de reaccin por la concentracin de los reaccionantes bajo un conjunto de condiciones determinado.

Reacciones de primer orden

Son las que tienen lugar a una velocidad exactamente proporcional a la concentracin de un reaccionante

El ejemplo mas sencillo es cuando la velocidad de la reaccin A P es exactamente proporcional a la concentracin de A. En este caso la velocidad de reaccin en cualquier tiempo t viene dada por la ecuacin de primer orden

Reacciones de Segundo orden

ECUACION DE TERCER ORDEN

 Las

reacciones de tercer orden, que son relativamento escasas, son aquellas cuya velocidad es proporcional al producto de tres terminos de concentracion. concentracion.  Algunas reacciones quimicas son independientes de la concentracion de cualquier reactivo; reactivo; son las llamadas reacciones de orden cero. cero.

 Muchas

reacciones catalizadas son de orden cero con respecto a los reactantes. reactantes. Cuando es este el caso, la velocidad de reaccion depende de la concentracion del catalizador o de algun otro factor distinto a la concentracion de las especies moleculares que experimentan la reaccion. reaccion.

 Las

velocidades de reaccion no es preciso que sean necesariamente de primer orden puro o de segundo orden puro; en ciertas condiciones se observan con frecuencia ordenes de reaccion mixtos.

Ecuacion De Michaelis y Menten Michaelis y Mentel propusieron un modelo simple para explicar la mayoria de las reaccines catalizadas por las enzimas. En este modelo, la enzimas. enzima se combina reversiblemenet con su sustrato para formar el complejo enzima-sustrato (ES) que se enzimadesdobla para formar el producto. producto.

k1 k2 ES ES EP k1

 La ecuacin describe como varia la velocidad de reaccin con la concentracin de sustrato:

Vmax ? A S v0 ! La concentracin del sustrato Km  ? A S

es mucho mayor que la de la enzima

El (ES) no cambia con el tiempo, esto quiere decir que la velocidad de formacin del (ES) es igual a la velocidad para su desintegracin. desintegracin.

Velocidad inicial Se utiliza la velocidad inicial de la reaccin para el analisis de reaccines enzimaticas, que es la velocidad ejercida por la ezima inmediatamente despues que se ha puesto en contacto con el sustrato y hasta antes de que se haya consumido el 10% de la 10% concentracin inicial. inicial.

CARACTERISTICAS DE Km la constante de Michaelis - Menten es caracterstica de una enzima y particular para un substrato. Refleja la afinidad de la substrato. enzima por ese substrato. Km es igual a la substrato. concentracin de substrato a la cual la velocidad de reaccin es la mitad de la Vmax (Km = Vmax/2). Este parmetro, Km Vmax/2 no vara con la concentracin de enzima. enzima.

Relacin de la velocidad con la concentracin de enzima La velocidad de la reaccin es directamente proporcional a la concentracin de la enzima a cualquier concentracin de substrato. Por substrato. ejemplo, si la concentracin de enzima es disminuida a la mitad, la velocidad inicial de la reaccin (v0) es reducida tambin a la mitad de (v0 la original. original.

experimento cintico para la actividad enzimtica

El regrfico de Lineweaver- Burke, tambin Lineweaverse denomina de dobles recprocas y se utiliza para calcular la Km y la Vmax as como para determinar el mecanismo de accin de los diversos tipos de inhibidores. La ecuacin que describe a la grfica de LineweaverLineweaver- Burke es: 1 m 1
v0

Vma

Esta, describe una recta en donde el intercepto con el eje de las abscisas es igual a 1/Km y el intercepto con el eje de las ordenadas es igual a 1/Vmax.

?A

Vma

Figura: experimento cintico para la actividad enzimtica. Regrfico de Lineweaver- Burke

Constante de Michaelis, KM y constante de sustrato, KS

 Es

una magnitud determinada experimentalmente y definida operativamente: es la concentracin a la cual la velocidad de la reaccin es la mitad de la velocidad mxima. En el caso ideal en la deduccin anterior, equivale a:

 Pero

en algunas reacciones enzimticas K-1 es muy grande en Kcomparacin con K+2+ en cuyo caso esta ltima puede pasar a ser despreciable, y la ecuacin se simplifica a:

 En

que KM es aproximadamente igual a la constante de disociacin del complejo enzima-sustrato KS, enzimaque tambin se designa como CONSTANTE DE SUSTRATO:

 Puede

trasformarse algebraica mente en otras formas que son ms tiles para la expresin de los datos experimentales una de las trasformaciones mas corrientes se obtiene, sencillamente, tomando los recprocos de ambos miembros de la ecuacin

 Otra

transformacin til de la ecuacin se obtiene multiplicando ambos miembros de la e caucin por redondeando para dar la ecuacin.

 La

representacin de Vo frente a Vo/ [S] llamada representacin de EadieEadieHofstee  No solo da valores de V mx. y de KM en forma muy sencilla sino que tambin amplia las desviaciones del carcter lineal que pueden no aparecer en una represtacin doble reciproca

Efecto del pH sobre la actividad enzimatica

Todas las enzimas tienen dos valores limites de pH entre las cuales son efectivas. efectivas. Traspasados estos valores la enzima se desnaturaliza y deja actuar. actuar. Entre estos dos valores se sita un pH el cual la enzima alcanza una efectividad mxima: mxima: es llamado pH optimo. optimo.

Las formas de las curvas de pH optimo esta determinada por:

1.- Desnaturalizar la enzima a valores de 1.pH altos o bajos. 2.- Alteraciones en el edo. de carga de la 2.enzima del sustrato o de ambos.

Para la enzima los cambios de carga pueden afectar la actividad, ya sea cambiando la estructura la carga en un residuo que funciona para ligar al sustrato. Considerando una enzima con carga negativa que reacciona con un sustrato con carga positiva: EnzEnz- + SH+ EnzSH A pH bajo, la Enz- adquiere protones y pierde su Enzcarga negativa: EnzEnz- + H+ EnzH A valores de pH altos, SH+ se ioniza y pierde su carga positiva: SH+ s + H

Por encima o por debajo de ese pH la actividad disminuye y a veces puede afectar drsticamente su actividad. El pH puede afectar de 2 maneras: 1.- la unin de sustrato es mejor que la de antes. 1.2.- que afecte la velocidad cataltica de la reaccin. 2.Algunas enzimas presentan variaciones peculiares. La Pepsina del estomago, presenta un optimo pH=2, y la Fosfatasa alcalina del intestino, presenta un pH=12. Aunque los perfiles de las curvas de actividad en funcin del pH de muchas enzimas son acampanados, puede variar continuamente.

La forma de la curva de actividad pH varia con la concentracin del sustrato, ya que el valor kM de muchas enzimas varia con el pH. Las mencionadas curvas son mucho mas significativas si la enzima se mantiene saturada con el sustrato, en todos los valores de pH que experimenta. El pH optimo de una enzima no necesariamente es idntico al pH de su entorno intracelular normal, el cual puede hallarse a su vez en la pendiente ascendente o descendente de su curva de pH-actividad. pH-

Efecto de la temperatura sobre las reacciones enzimaticas

 CUALQUIER

FACTOR AMBIENTAL QUE DISTORSIONE LA ESTRUCTURA PROTEICA PUEDE ALTERAR LA ACTIVIDAD ENZIMATICA. ENZIMAS SON ESPECIALMENTE SENCIBLES A LAS VARIACIONES DE LA TEMPERATURA EL PH

 LAS

 LA

TEMPERATURA AFECTA A TODAS LAS REACCIONES QUIMICAS

 CUANTO

MAYOR ES LA TEMPERATURA ,MAYOR ES LA VELOCIDAD DE REACCION

 LA

VELOCIDAD DE REACCION AUMENTA DEBIDO A QUE HAY MAS MOLECULAS CON LA ENERGIA SUFICIENTE PARA ENTRAR EN EL ESTADO DE TRANSICION.

 LAS

VELOCIDADES DE LAS REACCIONES CATALIZADAS POR ENZIMAS AUMENTA TAMBIEN AL INCREMENTAR LA TEMPERATURA

 SIN

EMBARGO LAS ENZIMAS SON PROTEINAS QUE SE DESNATURALIZAN A TEMPERATURAS ELEVADAS. ENZIMA TIENE UNA TEMPERATURA OPTIMA A LA QUE ACTUAN CON SU MAXIMA EFICACIA

 CADA

 LA

TEMPERATURA OPTIMA DE LAS ENZIMAS ESTA CERCA DE LA TEMPERATURA NORMAL DEL ORGANISMO POR EJEMPLO EN LAS ENZIMAS DEL SER HUMANO ESTA PROXIMA A LOS 37 C 37

SI LA TEMPERATURA SE INCREMENTA MAS ALLA DE LA TEMPERATURA OPTIMA, LA ACTIVIDAD ENZIMATICA DESCIENDE BRUSCAMENTE

 DEBIDO

A QUE LAS ENZIMAS SON PROTEINAS, LOS VALORES DE TEMPERATURA OPTIMA DEPENDEN DEL PH DE LA FUERZA IONICA

 LA

APARENTE TEMPERATURA OPTIMA ES POR LO TANTO LA RESULTANTE DE DOS PROCESOS

1- EL INCREMENTO HABITUAL DE LA VELOCIDAD DE REACCION CON LA TEMPERATURA.

2-EL INCREMENTO EN LA VELOCIDAD DE DESNATURALIZACION TERMICA DEL ENZIMA AL SOBRE PASAR UNA TEMPERATURA OPTIMA

 LA

MAYORIA DE ENZIMAS SE INACTIVAN ENTRE 55 Y 60C 60

 ALGUNOS

SON COMPLETAMENTE ESTABLES Y CONSERVAN SU ACTIVIDAD A TEMPERATURAS MUY SUPERIORES POR EJEMPEJEMP-

LOS ENZIMAS DE BACTERIAS TERMOFILICAS (HABITAN EN TERMAS DE AGUA) SIGUE SIENDO ACTIVOS A LOS 85C 85

 ALGUNOS

ENZIMAS COMO LA RIBONUCLEASA, PIERDEN SU ACTIVIDAD POR CALEFACCION, PERO LA RECUPERA RAPIDO POR EL ENFRIAMENTO LO CUAL NOS DICE QUE SU CADENA POLIPEPTIDICA DESPLEGADA VUELVE A ADOPTAR SU CONFORMACION NATIVA

Inhibicion de las enzimas

Los tres tipos principales de inhibicion reversible de los enzimas son competitiva, acompetitiva y no competitiva, y pueden distinguirse experimentalemente por los efectos que produce el inhibidor sobre la cinetica de reaccion de enzima.

Un criterio alternativo para la clasificacion de inhibidores es su sitio de accion. Para la validez del analisis cinetico, el inhibidor debe combinarse rapida y reverreversiblemente con el enzima o con el complejo enzima-sustrato. enzima-

Inhibicion Competitiva:
La caracteristica de la inhibicion competitiva es que el inhibidor puede combinarse con el enzima libre de tal modo que compite con el sustrato normal para unirse al centro activo. Un inhibidor competitivo reacciona reversiblereversible-mente con el enzima para formar un complejo enzima-inhibidor enzima(EI) analogo al complejo enzima-sustrato: enzima-

La presencia de un inhibidor competitivo provoca que se precisen concentraciones de sustrato superiores para que se alcance la velocidad maxima.

La molecula del inhibidor no resulta quimicamente alterada por del enzima.  La inhibicion competitiva se reconoce con facilidad, debido a que el porcentaje de inhibi-dor constante inhibidisminuye al incrementarse la concentracion del sustrato.


Inhibicin Acompetitiva
 Este

tipo de inhibicin , cuya designacin , no es muy adecuada , el inhibidor no se combina con el enzima libre ni afecta a su reaccin con el sustrato normal.

Sin embargo el inhibidor se combina con el complejo enzima sustrato para formar un complejo inactivo , enzimaenzimasustratosustrato-inhibidor , el cual no experimenta su transformacin posterior en el producto habitual de la reaccin . ES + I = ESI

 La

inhibicin acompetitiva es poco frecuente en las reacciones de un solo sustrato , pero es corriente en las reacciones de dos sustratos.

INHIBICION NO COMPETITIVA

 Un

inhibidor no competitivo puede combinarse con el enzima libre, o bien biencon el complejo enzima-sustrato , enzimainterfiriendo con la accin de ambos.

 Los

inhibidores no competitivos se unen a un centro del enzima distinto del centro activo para deformar a la enzima de modo que no pueda formarse el complejo ES a su velocidad normal y que una vez formado no se descomponga a su velocidad habitual para liberar los productos de reaccin.

 En

la inhibicin no competitiva la reaccin con el inhibidor produce dos formas inactivas, EI y ESI: E+I ES+I EI ESI

 El

tipo de inhibicin no competitiva mas corriente es producida por los reactivos que pueden combinarse reversiblemente con algn grupo funcional de la enzima (situado fuera del centro activo) que sea escencial para mantener la conformacion tridimensional catalticamente activa de la molcula de la enzima.

 Algunos

enzimas que poseen un grupo SH escencial, son inhibidos no competitivamente por los iones de metales pesados sugiriendo que tales grupos deben de permanecer intactos para que la enzima conserve su conformacin activa normal.

Algunos enzimas que precisan de iones metlicos para su actividad son inhibidos no competitivamente por agentes capaces de unirse al metal esencial.  Por ejemplo el agente quelante tetratetraacetato de etilendiamina (EDTA) se une reversiblemente al Mg y a otros cationes 2+ divalentes, inhibiendo as de modo no competitivo a algunas enzimas que precisan de tales iones para su actividad.


INHIBICION IRREVERSIBLE: MODIFICACION DE LA ENZIMA



EN LA INHIBICIONE REVERSIBLE DE LAS ENZIMAS EL INHIBIDOR IN TERVIENEN EN UN EQUILIBRIO FACILMENTE REVERSIBLE QUE SE ESTABLECE CON RAPIDEZ CON EL ENZIMA O CON EL COMPLEJO ENZIMA-SUSTRATO QUE SE ENZIMAPUEDE ANALIZAR POR LA FORMULACION DE MICHAELIS MENTEN

 ALGUNAS

ENZIMAS EXPERIMENTAN INACTIVACION IRREVERSIBLE CUANDO SE TRATAN CON AGENTES CAPACES DE UNIRSE COVALENTEMENTE Y QUE MODIFICAN DE MODO PERMANENTE A UN GRUPO FUNCIONAL NECESARIO PARA LA CATALISIS CON LO QUE SE ACTIVA LA MOLECULA DEL ENZIMA

 ESTE

TIPO DE INHIBICION NO PUEDE TRARTARSE POR LOS PRINCIPIOS DE MICHAELIS MENTEN QUE SUPONEN LA FORMACION REVERSIBLE DE LOS COMPLEJOS EI O EIS.

CON FRECUENCIA LA INHIBICION REVERSIBLE SE MANIFIESTA LENTAMENTE EN COMPARACION CON LA CINETICA DE LA REACCION NORMAL DE LA ENZIMA DE MODO QUE AL PRINCIPIO LA INHIBICION ES INCOMPLETA PERO AUMENTA CONTINUAMENTE CON EL TIEMPO DEBIDO QUE SE PRODUCE LA MODIFICACION QUIMICA DE UNA FRACCION CRECIENTE DE LAS MOLECULAS DE LA ENCIMA.

CINTICA ENZIMTICA

La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas

enzimas catalizan reacciones con 2 sustratos; estas reacciones muestran una cintica ms compleja que las recciones de un solo sustrato.  Entre las enzimas que catalizan reacciones bisustrato se halla la numerosa clase de las transferasas.
 Muchas

 La

reaccin se realiza siempre en condiciones ptimas de pH, temperatura, presencia de cofactores,y se utilizan concentraciones saturantes de sustrato.

 Al

seguir la velocidad de aparicin de producto en funcin del tiempo se obtiene la llamada curva de avance de la reaccin, o cintica de la reaccin, reaccin.  A medida que la reaccin transcurre la velocidad del producto va disminuyendo.

Para estudiar la cintica enzimtica se mide el efecto de la concentracin inicial de sustrato (So) sobre la velocidad inicial (Vo) de la reaccin, reaccin, manteniendo la cantidad de enzima constante.

(So) es pequea, la pequea, velocidad inicial es directamente proporcional a la concentracin de sustrato.  A altas (So), la enzima se (So), encuentra saturada por el sustrato, y la velocidad ya no depende de (So).
 Cuando

Michaelis y Maud Menten propusieron una ecuacin de velocidad que explica el comportamiento cintico de las enzimas.  propusieron que las reacciones catalizadas enzimticamente ocurren en dos etapas: etapas:
 Leonor

1era ETAPA: se forma el complejo enzima-sustrato enzima2da ETAPA: el complejo enzima-sustrato da lugar a la enzimaformacin del producto, liberando la enzima producto, libre:

 k1,

k2 y k3 son las constantes cinticas individuales de cada proceso.  La mayora de las reacciones de 2 sustratos pueden incluirse en una de las dos clases siguientes: reacciones de desplazamiento simple y reacc de doble desplazamiento.

Reacciones de desplazamiento simple

EN ESTE TIPO DE REACCIONES LOS DOS SUSTRATOS A Y B, DEBEN HALLARSE PRESENTES SIMULTANEAMENTE SOBRE EL CENTRO ACTIVO DE LA ENZIMA PARA FORMAR UN COMPLEJO TERNARIO *EAB* CON OBJETO QUE TENGA LUGAR LA REACCION

LAS REACCIONESDE DESPLAZAMIENTO SIMPLE SE FORMAN POR DOS FORMAS, AL AZAR Y ORDENADAS ; AMBAS DIFIEREN DE LA SECUENCIA CON QUE AMBOS SUSTRATOS SE UNEN A LA ENZIMA

EN LAS REACCIONES BISUSTRATO AL AZAR, CUALQUIERA DE LOS DOS SUSTRATOS PUEDEN UINIRSE AL ENZIMA EN PRIMER LUGAR, INDICANDO CON ELLO, QUE EL COMPLEJO TERNARIO EAB (LLAMADO TAMBIEN COMPLEJO CENTRAL) PUEDE FORMARSE POR DOS CAMINOS DIFERENTES E+A=EA E+A=EA EA+B=EAB E+B=EB EB+A=EAB

REACCIONES DE DOBLE DESPLAZAMIENTO O PING PONG

Son reacciones bisustrato que se verifican en dos etapas. etapas. En las reacciones bisustrato de este tipo, un sustrato debe hallarse unido a la enzima y debe liberarse un producto antes de que tenga lugar la entrada del segundo sustrato y la partida del segundo producto. producto.

En estas reacciones el primer sustrato reacciona con la enzima y origina una forma modificada del mismo, casi siempre por transferencia de un grupo funcional. funcional. En la segunda etapa de este grupo funcional se transfiere desde la enzima al segundo sustrato. sustrato.

Un ejemplo seria la aspartato-transminasa aspartatoque cataliza la reaccion

El espartato sustrato conductor es el primero que se combina con la enzima, el grupo amino del aspartato se transfiere despues al fosfato de piridoxal que es el grupo prostetico de la enzima al que se halla intimamente unido

Despues el oxalacetato primer producto de la reaccion, abandona el centro activo en el que es sustituido o por el segundo sustrato el alfa-oxoglutarato al cual la alfaenzima transfiere al grupo amino para formar glutamato el cual entonces abandona el centro activo

Determinacion cuantitativa de la actividad enzimatica

La cantidad de una enzima en una disolucion determinada o en un extracto de tejido, puede determinarse cuantitativamente en relacion al efecto catalitico que produce. Para este objeto es necesario saber lo siguiente.

 

1.1.-La estequiometria global de la reaccion catalizada 2.2.-Si la enzima precisa de la adicion de cofactores, tales como los iones metalicos o coenzimas. 3.3.-Su dependencia de las concentraciones de sustrato o de los cofactores ; es decir , el valor de K para el sustrato y para el cafactor. 4.4.-Su ph optimo 5.5.-Una zona de temperatura en que sea estable y muestre actividad elevada. 6.6.-Un procedimiento analitico sencillo para determinar la desaparicion del sustrato o la aparicion de los productos de la reaccion.
m

La determinacion cuantitativa de la actividad enzimatica se efectua del modo mas rapido y conveniente cuando el sustrato o el producto son coloreados o absorben luz en la region del ultravioleta, ya que la velocidad de aparicion o de desaparicion de un producto o de un sustrato que absorbe la luz puede seguirse con un espectofotometro, y permite efectuar un registro continuo del curso de la reaccion si se emplea un registrador provisto de una banda de papel movil.

Por ejemplo, tenemos la medida de la actividad de la enzima lactato-deshidrogenasa, que lactatotransfiere electrones desde el lactato a la forma oxidada del dinucletido de nicotinamida y de adenina (NAD+) y produce piruvato, la coenzima reducida NADH, y un proton: lactato + NAD+ piruvato + NADH + H+

La forma reducida de la coenzima, NADH, absorbe luz en el ultravioleta a 340nm, mientras que la forma oxidad NAD+, el lactato y el piruvato no lo hacen. El progreso de la reaccion puede seguirse midiendo en un espectrofotometro lo cual es mucho mas sencillo que la determinacion quimica de cualquiera de los sustratos o de los productos

PURIFICACION DE ENZIMAS

En la actualidad se han cristalizado o purificado de manera adecuada cerca de unas 200 enzimas (del posible total de unas 5000 )

Para extraer las enzimas de las celulas que las contienen, a menudo es necesario dividir en finos fragmentos, utilizando tecnicas de licuado o de molido con arena, tambien utilizando el congelamiento y descongelamiento, el desecado con calor o el empleo de solventes como la acetona, el ter y el tolueno.

Cuando las enzimas estn asociadas a lpidos, como sucede con las enzimas mitocondriales, es ventajoso el tratamiento con sustancias de tipo detergente o con butanol que disgregan la estructura lipoprotica y permiten la salida de las enzimas

El desecado con acetona y la produccin de los llamados polvos acetnicos constituyen un excelente ejemplo de rotura de la membrana celular y la obtencin de un material rico en enzimas y de fcil conservacin.

Con el empleo del calor a veces se logra la desnaturalizacin y precipitan de material protico inactivo dejando la enzima libre.

El empleo de tcnicas cromatografa en columnas es la tcnica de purificacin mas utilizada debido a su fcil manipulacin y confianza en su resultados, ella que puede retener protenas con peso molecular aproximado de 25 000 hasta 200 000 segn el tipo que se emplee.