LMENTS

DE

MICROBIOLOGIE ET

GNRALE.

D'IMMUNOLOGIE

OUVRAGESDES MEMES AUTEURS

Traitde Technique icrobiologique, M.Nicolle et P. Remlinger. O. Doin, m par Paris, 1902{Epuis). Toxinest Antitoxines, M.Nicolle, E. Csari et G.Jouan, Masson, e par Paris, 1919. e LesAntignes tlesAnticorps, M.Nicolle. Masson, par Paris, 1920. LesMaladies d parasitaires es Plantes,par M.Nicolle et ,T.Magrou, Masson, Paris, 1922. LaLymphangite des d pizooti[ue Solipdes(ContributionVlude es Mycoses), par A. Boquet et L. Ngre. Masson, Paris, 1920. ManuelechniquedeMicrobiologie Srologie, A. Galmette, L. Ngre et . et t par A. Boquet.Masson, Paris, 1925.

Tous droits rserve. ' Copyrightby Gaston Doin, 19J

DE

AVANT-PROPOS DITION LA PREMIRE

L'enseignement, que nous donnons depuis plusieurs annes aux mdecins et aux vtrinaires, comprend trois parties : technique, organismes pathognes, microbiologie gnrale. N'ayant pas le loisir de publier cet enseignement dans sa totalit, nous avons choisi la dernire partie et nous nous sommes efforc de la prsenter d'une faon la fois concise et suffisamment complte. Nous esprons que cet opuscule pourra servir d'introduction aux traits plus tendus, tels que celui de M. Duclaux. ' Le plan suivi est fort simple : anatomie. et physiologie des microbes, anatomie et physiologie des phagocytes, lutte des microbes et des i^hagocytes. Nous prions notre matre, M. le Dr Roux, Membre de l'Institut et Sous-directeur de l'Institut Pasteur, d'agrer l'hommage de ce travail, en reconnaissance de ses bonnes leons et de l'affectueuse amiti qu'il nous a toujours tmoigne. NichanTacli, fvrier 1900.

Microbiologiegnrale, 2edit.

PRFACE

DE

LA DEUXIME

EDITION

Depuis longtemps, j'avais t sollicit de publier une seconde dition de mon livre Elments de Microbiologie gnrale, mais le temps m'avait toujours manqu. Maintenant que ma mauvaise sant s'y oppose, je ne pouvais mme pas envisager un tel projet, lorsque mon excellent ami Boquet mit le dsir de se charger de cette dition, si je n'y voyais point d'inconvnient. Comme j'ai toujours constat, avec plaisir, la parfaite conformit de vues, quant aux questions bactriologiques, entre Boquet et moi, j'acceptai volontiers son offre, en lui faisant cependant remarquer qu'il serait plus naturel de le voir seul signataire de l'ouvrage, tant donn le dur travail que lui imposerait la refonte de celui-ci. A quoi il rpliqua que certaines raisons plaidaient dans le sens oppos : le plan d'ensemble et bien des passages du livre devaient tre conservs ; nombre de mes publications (rsumes) s'encadraient dans les chapitres refondus ; enfin, je pouvais lui donner d'utiles conseils et revoir sa rdaction. Ces arguments (et, surtout, le sentiment qui les dictait) m'ont dcid et fait encore mditer sur ce qui concerne les microbes : in tenui labor. M. N1COLLE. taris, institut Pasteur, oetobre 1925,

ELEMENTS DE MICROBIOLOGIE GNRALE

PREMIRE MORPHOLOGIE

PARTIE DES MICROBES

On dsigne sous le nom de microbes tous les organismes infrieurs qui"ne peuvent tre tudis sans le secours du microscope. Cette dfinition, dpourvue de tout caractre scientifique, permet d'englober dans un mme groupe artificiel,,les ultimes reprsentants du rgne vgtal et du rgne animal.' Les microbes vgtaux comprennent des Champignons (Fungi imperfecti, Ascomyctes et Phycomyctes) et, surtout, les Bactries (Schizomyctes) ; les microbes animaux les Protozoaires (Spirochtes, Rhizopodes, Sporozaifes, Flagells et Infiisoires). Saprophytes, ils constituent les principaux agents de la dcomposition des matires organiques. Parasites, ils attaquent les tres vivants et causent un grand nombre de maladies des plantes, des animaux et de l'homme. Leur rle dans la pathologie gnrale et spciale est d'une extrme importance.

CHAPITRE

PREMIER

CHAMPIGNONS I, Caractres gnraux,

A. Structure. Ce sont des vgtaux uni ou pluricellulaires, dont le protoplasme ne contient pas de pigment chlorophyllien. De ce fait, ils ne peuvent utiliser l'nergie solaire pour l'dification synthtique de leurs propres composs hydrocarbons (sucres, amidon), et doivent se nourrir de substances organiques provenant de la dcomposition des vgtaux.ou des animaux (Champignons saprophytes), ou prleves dans les tissus vivants des htes qui les hbergent {Champignons parasites). Ceux qui nous intressent sont essentiellement constitus par un appareil vgtatif, thalle ou myclium, compos de cellules filamenteuses de longueur et de diamtre variables (1 plusieurs ii.ou millimes de millimtre). Simple et continu, ou divis par des cloisons transversales, ce myclium s'accrot par ses extrmits et donne souvent naissance des ramifications (hyphes), diversement disposes. Le protoplasma vacuolaire ou granuleux des cellules mycliennes, gnralement riche en noyaux est nu, ou entour d'une paroi cellulosique, callosique, ou pectosique rsistante. Chez quelques espces places dans des conditions d'existence dfavorables, il disparat de certains segments filamenteux et se condense dans d'autres, dont les ramifications enchevtres, troitement serres, cutinises leur priphrie, forment des lments arrondis, compacts, d'aspect parenchymateux, les sclrotes. B. Polymorphisme. Un des caractres gnraux des champignons est leur polymorphisme trs tendu, qui est fonction de leur plasticit propre

CHAMPIGNONS

et des conditions physico-chimiques du milieu dans lequel ils voluent. Quand, par exemple, on immerge au sein d'un liquide sucr des Mucor, dont le myclium, dvelopp au contact de l'air, est constitu par de longs filaments continus, ils se transforment en cellules arrondies ou ovodes, isoles ou groupes en chanettes, tout fait comparables des globules de levures Comme les levures encore, ces odies des Mucor, qui vivent d'une vie anarobie dans la profondeur des milieux liquides, se reproduisent par bourgeonnement et font fermenter les sucres. Reportes au contact de l'oxygne, ces pseudo-levures donnent de nouveau naissance des filaments mycliens. C. Modes de reproduction. Les champignons prsentent deux modes de multiplication qui coexistent souvent chez une mme espce : une reproduction sexue (formes parfaites) dans laquelle deux cellules identiques {isogamie) ou diffrentes (htrogamie) se conjugent en formant un oeuf ou zygospore, et une reproduction asexue (formes imparfaites) au moyen de spores constitues aux dpens de l'appareil vgtatif. Ces spores sont endognes, groupes l'intrieur d'un lment renfl en sporange, ou exognes et disposes l'extrmit de filaments dont elles se sparent ensuite pour germer (conidies). Elles sont tout fait distinctes des chlamydospores, ou formes de rsistance, qui rsultent de l'enkystement de cellules terminales ou intercalaires du myclium. Selon le mode sexu de reproduction, on distingue trois grandes classes parmi les champignons : 1 Les Piiycomyctes, dont les lments reproducteurs, les -gamtes, se forment dans les renflements sphriques ou gamtanges, l'un mle (anthridic), l'autre femelle (oogone), des articles terminaux multinucls du myclium. 2 Les Ascomyctes, chez lesquels le cycle sexuel aboutit la production d'appareils clos, les asques, dont le noyau se divise plusieurs reprises pour donner naissance quatre ou huit ascospores qui s'individualisent et s'accroissent en s'entourant d'une couche protoplasmique. Les asques sont nus, isols, ou groups sur des appareils massifs, les pritheces. Us apparaissent parfois sans fcondation pralable (apogami), mais ne se forment jamais dans les tissus des animr.ux parasits,

"MORPHOLOGIE MICROBES DES

3 Chez les Basidiomyctes, des appareils spciaux, les basides, homologues des asques, portent sur des strigmates, des spores exognes ou basidiospores, gnralement au nombre de quatre. lies espces parasites, agents des mycoses de l'homme et des animaux, appartiennent aux Fungi imperfecti, aux Ascomyctes et aux Phycomyctes. Les Basidiomyctes contiennent un certain nombre de parasites des vgtaux (les Urdines agents des rouilles, par exemple). II. Principales espces pathognes.

A. Fungi imperfecti (Moisissures). On dsigne sous ce nom, toutes les espces de champignons dont les formes de reproduction parfaites ou sexues sont inconnues. Ce groupe est, par consquent, artificiel et provisoire. De nombreux reprsentants en ont dj t distraits, et cette limination se poursuivra au fur et mesure des progrs de la mycologie. Parmi les Fungi imperfecti, seuls les Hyphomyctes renferment des espces parasites de l'homme et des animaux suprieurs. On range dans ce groupe : les Microsiphons ou Streptothrics caractriss par de trs fins filaments (1 u.de diamtre, ou moins), dpourvus de noyaux dfinis, souvent ramifis ou dissocis en articles bactrodes ou coccodes, se colorant bien par les couleurs d'aniline, prenant le Gram et, parfois, acido-rsistants. Us comprennent les Cohnistreptotlirix, anarobies, non sporuls dans les cultures, et les Nocardia, arobies et sporuls, qui provoquent les actinomycoses humaines et animales (C. Israeli, N. bonis renfl en massues la priphrie des grains actinomycosiques), les myctomes grains jaunes ou rouges (N. astrodes, N. maduroe du myctome grains blancs de Vincent). On tend de plus en plus classer toutes ces espces parmi les Schizophytes, prs des Corynbactries (bacille diphtrique) et des Mycobactries (bacille tuberculeux), bactries filamenteuses, parfois ramifies, qui prsentent les mmes caractres gnraux et les mmes ractions microchimiques. Aux Thallospors. qui se multiplient par morcellement du thalle, appartiennent les Trichophyton des teignes, les Mierosporon, les Achorion du favus, les Maduretta et les Indiella des myctomes grains noirs, les Malassezia du pityriasis versicolor.

CHAMPIGNONS

Les Conidiospors se reproduisent par conidies. Us contiennent les Rhinocladium des sporotrichoses. B. Ascomyctes. Les Saccharomyctes ou Protoascins constituent une des plus importantes familles de ce groupe. Leurs principaux reprsentants sont les levures, cellules arrondies ou ovodes, isoles ou runies en chapelets. Elles se multiplient par gemmation. Sur un point du globule, on voit natre un petit mamelon qui s'accrot peu peu et devient finalement aussi volumineux que la cellule-mre. Il se spare alors de celle-ci ou lui reste accol. Quelques espces de levures se multiplient par scissiparit, la manire des bactries (Schizosaccharomyctes). Dans certaines conditions, principalement lorsque la nutrition est dfavorable, les levures se reproduisent par des ascospores, corpuscules habituellement sphriques, mais parfois irrguliers, groups, en nombre variable suivant les espces, dans des asques nus, isols, qui se forment aux dpens des globules. Ces ascospores restent contenues dans la cellule-mre, jusqu'au moment de la germination. Alors, la paroi de cette cellule se dchire ou se rsorbe, les spores libres augmentent de volume, puis se transforment en globules de levures. Des phnomnes sexuels prcdent la sporulation des levures appartenant aux genres Schizosccharomyces, Zygosaccharomyces,Debaryomyces (Barkcr, Guilliermond). Plusieurs espces de Saccharomycs sont pathognes : S. granulatus et S. tumefaciens isols de tumeurs chez l'homme, S. anginoe, d'une angine. Bien que leur mode de multiplication par spores ne soit pas encore connu, on range provisoirement dans la famille des Saccharomyctes, les Cryptocoques, cellules globuleuses et bourgeonnantes, qui sont les agents de certaines blastomyeoses. : Cryptococcus farciminosus, de la lymphangite pizootique des solipdes, C. hominis, trouv par Busse dans une osto-arthrite, C. Gilchristi, qui provoque une dermatite chez l'homme, C. Vinguce pilosoe de la langue noire pileuse. Aux Protoascins, se rattache galement Y Endomyccs albicans du muguet, depuis que Vuillemin a dcouvert la formation d'asques dans les cultures. Les champignons des teignes sont souvent classs dans la famille des Gymnoascs, dont les asques sont contenus dans un prithce transparent form d'hyphes enchevtres.

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MORPHOLOGIE MICROBES DES

D'aprs la forme de leurs appareils conidiens, on distingue dans la famille des Prisporiacs, caractrise par un prithce massif, pseudo-parenchymateux : les Aspergillus, dont les conidies, portes par de courts stigmates, sont disposes en goupillon, l'extrmit d'un filament nyclien renfl et non cloisonn; les Sterigmatocystis qui prsentent des chapelets de conidies ports par des strigmates secondaires issus, par division, de strigmates primaires ; les Pnicillium, dont les hyphes conicliennes, ramifies et cloisonnes, termines par des chapelets de conidies globuleuses, ont l'aspect d'un pinceau. ISAspergillus Bouffarcli est l'agent du myctome grains noirs de Bouffard ; VA. jumigatus, de l'aspergillose pulmonaire de l'homme et des oiseaux et de l'otomycose. Les Sterigmatocystis provoquent le myctome grains noirs de C. Nicolle et Pinoy. Les Pnicillium ne sont qu'exceptionnellement pathognes. C. Phycomyctes. Caractriss par leur myclium dpourvu de cloisons, les Phycomyctes se reproduisent gnralement par des oeufs ou zygospores rsultant de la conjugaison de deux lments sexus semblables (isogamie) ou dissemblables (htrogamie). De ce groupe, la famille des Mucorins nous intresse particulirement. Ces champignons se multiplient le plus souvent par des spores endognes formes dans des sporanges qui se dveloppent l'extrmit d'hyphes sporangifres dresses, issues du thalle. Ils prsentent aussi, mais exceptionnellement, une reproduction agame, par conidies. Quelques espces des genres Mucor et Rhizopus sont pathognes pour l'homme et pour les animaux : M. mucecloet, surtout, AI. corymbifer, R. parasiticum, R. equinus, qui provoquent des mycoses pulmonaires et une otomycose

CHAPITRE PROTOZOAIRES

II

Les Protozoaires sont des tres unicellulaires appartenant an rgne animal. Avec Brumpt, nous les diviserons en cinq classes : Spirochtes, Rhizopodes, Sporozoaires, Flagells, Infusoires, I. Spirochtes. Ce groupe, dont la position systmatique n'est pas encore dfinitivement fixe, comprend des organismes spirales, grles, flexibles, souvent effils leurs extrmits, non colorables par la mthode de Gram. Leur chromatine, au lieu d'tre rassemble en un noyau homogne, est dissmine dans le protoplasme que les colorants nuclaires teintent uniformment. Bien que dpourvus de flagelles moteurs, ce qui les diffrencie des spirilles, ils se dplacent par des mouvements actifs. Schmatiquement, ils doivent tre considrs comme constitus par un axe lastique autour duquel le cytoplasme s'enroule en hlice, dpasse le corps aux deux extrmits et forme un pseudoflagelle (Mesnil). Les Spirochtes se multiplient par division transversale ou longitudinale (Noguchi). Leur culture en milieu artificiel a t pour la premire fois ralise par Noguchi. Dans certaines conditions, ils prennent une forme granuleuse, coccode, comparable des spores, parfois mme une forme invisible, puis ils font retour la forme spirale. Quelques espces parasites prsentent une volution cyclique, analogue celle des trypanosomes, et caractrise par un stade avirulent de cinq six jours aprs leur absorption par l'hte vecteur. Brumpt, Mesnil, Duboscq et Lebailly les classent dans un seul genre Treponema, qui comprend de nombreuses espces pathognes : T. recurrentis de la fivrt, rcurrente, dont l'hte

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MORPHOLOGIE ES MICROBES D

intermdiaire est le poux de corps et parfois le poux de tte (Sergent et Foley, Ch. Nicolle, Blaizot et Conseil); T. Duttoni de la fivre rcurrente africaine tiques, transmise par des acariens de la famille des Ixodids : Omithodorus moubata (Dutton et Todd) et O. Savignyi (Brumpt) ; T. Venezuelense inocul l'homme par Omithodorus venezuelensis (Brumpt) ; T. pallidum, qui cause la syphilis (Schaudinn et Hoffmann) ; T. icterohemorragioe de la spirochtose ictro-hmorragique de l'homme et du rat (Inada et Id) ; T. icterodesdel fivre jaune (Noguchi) ; T. morsus mris du sodoku ; T. Vincenti de l'angine de Vincent, etc. II..Rhizopodes. Parmi ces tres, seules les Amibes offrent quelque intrt au point de vue pathologique, car elles sont la cause de plusieurs affections dont la plus redoutable est la dysenterie amibienne de l'homme, due Entamoeba dysenterioe. Les Amibes sont des cellules nues, nucles, de 10 18 \>.de diamtre, d'aspect irrgulier et de rfringence peine suprieure celle du liquide ambiant. Leur protoplasme, parfois creus de vacuoles pulsatiles, est-divis en deux couches: une externe, hyaline, ou ectoplasme, Une interne, granuleuse, ou endoplasme. Il met des prolongements actifs temporaires, des pseudopodes, au moyen desquels les amibes se dplacent et saisissent les particules voisines. La multiplication des Amibes s'effectue suivant un mode sexu, par scissiparit (schizogonie), qui comporte un cycle volutif encore inconnu pour les Amibes parasites de l'homme, et un mode sexu (gamogoiiie). Dans la reproduction asexue, deux cellules-filles naissent par division binaire (bipartition) d'une cellule-mre. La reproduction sexue fait suite la prcdente aprs un nombre variable de gnrations asexues. Elle dbute chez l'hte vertbr par l'enkystement des amibes et la division du noyau en deux, quatre, puis huit lments, l'intrieur des kystes sphriques, ou lgrement ovodes, de 12 14 jj.de diamtre. Ces kystes, rejets au dehors et repris par un hte, donnent naissance des cellules nucles ou gamtes. Les gamtes se fusionnent en un oeufou zygotequi se transforme en amibe par simple accroissement de volume.

PROTOZOAIRES III. Sporozoaires.

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Les Sporozoaires ont mie volution complexe, dont une des phases au moins s'effectue dans les cellules d'un hte (Hmosporidies, Coccidies). Ce sont des tres d'une organisation plus leve que les prcdents. En gnral, ils n'mettent pas de pseudopodes. On les divise en deux grands groupes : 1 les Tlosporidies, dont la reproduction sexue est distincte de la phase de croissance ; 2 les Nosporidies, dont la sporulation se jDroduit au cours de la priode de croissance. A. Tlosporidies. Elles comprennent : 1 Coccidies. Parasites des cellules pitliliales, hrjatiques et intestinales des animaux et, exceptionnellement, de l'homme.. Parvenues au terme de leur croissance intracellulaire, elles se multiplient, suivant le mode asexu, par division du noyau en un grand nombre de noyaux secondaires, qui s'entourent .de protoplasme et constituent les mrozotes.Ces lments, ..librs, pntrent daiis les cellules, et le cycle asexu recommenc. Dans certaines conditions, mal connues,: la reproduction s'effectue suivant le mode sexu-: le noyau se divise comme prcdemment, mais au lieu de produire des mrozotes, il donne naissance des gamtes qui se conjuguent et forment un oeuf, zygote ou oocyste. Le contenu de cet oeuf, bord par une membrane, se divise en petites masses nuclces ou spores. Lorsque l'oeuf est expuls de l'intestin de l'hte, les spores se segmentent leur tour en sporozotes. Absorbes par un animal rceptif, les spores sont attaques par les sucs digestifs, et les sporozotes librs pntrent dans les cellules pitliliales. Les Coccidies du genre Emeria produisent quatre spores deux sporozotes. E. perforons est l'agent de la coccidiose intestinale et E. Stiedi, celui de la coccidiose hpatique des lapins. 2 Hmosporidies. Les Hmosporidies parasitent les globules blancs et, surtout, les globules rouges des Vertbrs. Elles offrent, comme les Coccidies, un mode de reproduction asexu (schizogonie) dans les cellules de l'hte vertbr et un mode de reproduction sexu (sporogonie) qui s'effectue chez un hte intermdiaire invertbr. L'hmosporidie du paludisme (Plasmodium malarioe, P. vivax et P. falciparum), dcouverte par Laveran, se prsente

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MORPHOLOGIE MCKOBS DES

dans les hmaties de l'homme sous l'aspect d'une petite masse protoplasmique, la plasmodie, pourvue d'un noyau, d'un nuclole, le karyosome, et de pigment. A un certain moment, le noyau se divise en mrozotes disposs en rosace (corps en marguerite), qui s'entourent de protoplasma. Au cours de l'accs de fivre, les mrozotes, librs dans le plasma sanguin, pntrent dans de nouvelles hmaties, et le mme cycle asexu recommence. Parfois, les plasmodies subissent, dans le sang, une srie de transformations qui aboutissent la production de gamtes sexus. L'volution ultrieure du parasite s'accomplit dans l'estomac des moustiques du genre Anophles : le macro gamte fcond par un micro gamte devient un oeuf mobile, zygote ou oocinte, puis un oocyste sphrique, dans l'intrieur duquel naissent les sporozotes. Ces sporozotes, librs dans la cavit gnrale de l'anophle, par rupture des parois de l'oocyste, s'accumulent dans les glandes salivaires de l'insecte qui les inocule l'homme par piqre. Les Hmogrgarines, d'aspect vermicul, dpourvues de pigment, parasitent surtout les leucocytes des vertbrs sang froid et, exceptionnellement, les hmaties des mammifres. Au contraire, les Piroplasmes (Piroplasma, Theileria, Nicollia, Nuttallia, Anaplasma) sont uniquement observs dans les globules rouges des vertbrs. Ils se multiplient par division binaire ou par bourgeonnement chez l'hte vertbr et par sporogonie chez les Ixodes, htes intermdiaires. " . Nosporidies. b Sarcosporidies. Parasites du systme musculaire ets parfois, du tissu conjonctif des Vertbrs, les Sarcosporidies ont la forme de tubes allongs (tubes de Rainey ou de Miescher), limits par une cuticule contenant un trs grand nombre de spores nucles, falciformes ou rniformes. Leur volution est mal connue. Il semble cependant que l'infection des animaux rsulte de l'ingestion de spores et qu'un stade intestinal prcde la fixation des sarcosporidies dans les fibres musculaires (Th. .' . Smith, Ngre, Negri). 2 Haplosporidies. Observes presque uniquement chez les Invertbrs, les Haplosporidies sont caractrises par leurs spores pourvues d'un seul noyau volumineux. On les rencontre dans les tissus sous une forme amibode (pansporoblasie). dont le noyau

PROTOZOAIRES

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se divise plusieurs reprises au cours du dveloppement de la cellule et donne naissance un nombre variable de spores qui s'entourent de protoplasme. On range galement parmi les Nosporidies, les Myxosporidies, parasites des organes urinaires, des muscles, du systme nerveux des poissons et les Microsporidies, dont les espces les plus importantes sont : Nosema bombycis de la pbrine du ver soie et, probablement, le microbe de l'encphalite du lapin (J.-H.-Wright et E.-M. Craighead, Doerr et Zdansky), Encephalitozoon cuniuli, de Levaditi, S. Nicolau et R. Schoen, et Encephalitozoon rabiei, agent de la rage (Manoulian et Viala), reprsent par des lments libres ou agglomrs (corps de Negri). IV. Flagells. Ces protozoaires, d'une structure plus complexe que les jjrcdents, sont caractriss par un protoplasma contenant un noyau et une ou plusieurs petites masses chromatiques (kintonucleus, blpharoplaste) sur lesquelles s'insrent les flagelles libres (Herpetomonas, Leptomonas) ou bords par une membrane ondulante. Les flagelles, au nombre de un huit selon les esjces, sont constitus par un axe chromatique entour d'une mince couche de protoplasma contractile. Chez les Trypanosomes, le blpharoplaste est situ en arrire dii noyau ; chez les Crithidia, il se trouve en avant ou au niveau du noyau. Parmi les flagells parasites de l'homme et des animaux, les Trypanosomids sont les plus importants. A cette famille appartiennent : 1 Les Leishmania qui vivent dans les cellules pithliales ou dans les leucocytes et sont la cause des leishmanioses cutanes (clou de Biskra, leishmaniose forestire amricaine) et viscrales de l'homme (KalaAzar, leishmaniose splnique infantile). Leur forme diffre suivant les milieux o elles se dveloppent : ovodes et dpourvues de flagelle libre au cours de leur vie intracellulaire, les Leishmania j:>roduisent des formes flagelles, mobiles dans les milieux artificiels o on a russi les cultiver (Ch. Nieolle). Elles se multiplient par scissiparit et leur cycle volutif,' en dehors de l'hte vertbr, est mal connu. La Leishmania tropica du clou de Biskra est transmise l'homme par des Phlbotomes (Ed. et Et. Sergent, Parrot, Donatien et Bguet)

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MOTIPHOLOGIE MICROBES DES

et la Leishmania infantum de la leishmaniose splnique infantile, par les ectoparasites du chien (Ch. Nicolle). 2 Les Trypanosomes sont des microorganismes fusiformes, dont le protoplasma contient un noyau volumineux, en arrire duquel se trouve le blpliaroplaste o s'insre le flagelle. Celui-ci, .en s'accolant au corps, produit la membrane ondulante. Certains trypanosomes sont cultivables dans les milieux artificiels. Ils se multiplient par scissiparit binair~ou multiple. Ceux des Mammifres sont transmis par des Insectes piqueurs, chez lesquels ils subissent une volution plus ou moins longue, selon la temprature. Trypanosoma gambiense et T. rhodesiense provoquent, chez l'homme, la maladie du sommeil, qui svit dans la rgion du Congo o elle est transmise par les mouches tstss : Glossina palpalis et Glossina morsitans. T. Cruzi, agent de la maladie de Chagas (tryp'anosomose amricaine), dont l'hte vecteur est un rduvide (Triatoma megista). T. Evansi, transmis par des taons et des stomoxes, est la cause d'une maladie des Solipdes, des Bovids et des Chameaux en Asie mridionale : le surra. Le nagana, qui frappe en Afrique du Sud un grand nombre d'espces animales, est d T. Brucei, inocul par les mouches tstss. Une trypanosomose des Solipdes, la dourine, cause par T. eqwiperdum est transmise directement par le cot. 3 Les Herptomonas, parasites des insectes et des acariens, n'ont pas de membrane ondulante. Sur leur blpharoplaste, situ la partie antrieure du corps, s'insre un flagelle bien dvelopp. Les Ttrainids ont un, six flagelles antrieurs et un flagelle dirig en arrire, libre ou formant une membrane ondulante. Cette famille contient, entre autres, les Enter omonas, les Chilomastix (C. Mesnili, parasite de l'intestin de l'homme), les Trichomonas (T. vaginalis et T. intestinalis de l'homme) et les Giardia qui provoquent, chez l'homme, une entrite tenace ( G. intestinalis de la diarrhe de Cochinchine ou sprue) et habitent le tube digestif d'un grand nombre d'animaux. V. Infusoiies. Ce sont des protozoaires cilis. Leur protoplasma, bord d'une cuticule, contient deux noyaux : un macronucleus vgtatif et un micronucleus reproducteur, des vacuoles et des inclusions.

PROTOZOAIRES

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Les Infusoires ont un mode de reproduction asexu, temporaire, auquel fait suite un mode sexu : deux infusoires semblables (isogamie) ou dissemblables (aniso garnie) s'accolent ; leur mieronuclus se divise et les cellules changent un des fragments nuclaires avec l'lment correspondant rest dans le protoplasme. Un noyau mixte, constitu par la substance nuclaire des deux cellules, se forme ainsi. Il se divise son tour en micronuclus et en macronuclus, puis les fleux infusoires se sparent et se reproduisent de nouveau, pendant un nombre variable de gnrations, suivant le mode asexu. Bes formes de rsistance sont reprsentes par des kystes. Une seule espce joue un rle pathogne important, le Balantidium coli de la dysenterie balantidienne de l'homme.

Microbiologie gnrale, 2e clit.

CHAPITRE BACTERIES I. Morphologie

III

gnrale.

A. Caractres gnraux. Microorganismes vgtaux, mobiles ou immobiles, les bactries .sont toujours unicellulaires. Dpourvues de noyau diffrenci, elles se reproduisent par division transversale ou par spores. L'absence de pigment 1 chlorophyllien les rend, comme les champignons, incapables d'utiliser le rayonnement solaire pour l'dification de leur propre substance. Arobies ou anarobies, elles ne peuvent assimiler que des produits complexes dont elles ramnent une partie l'tat dTPO et de CO2, au cours de transformations nergtiques qui entretiennent leurs fonctions vitales. La longueur de ces tres varie de quelques diximes de jj. 8 ou 10 [j. et mme 50 \j.(Sulfobactries). Quelques espces ont des dimensions de mme ordre que les longueurs d'ondes lumineuses ; de ce fait, elles chappent l'examen microscopique. Ces ultra ou inframicrobes traversent les filtres de porcelaine (filtres Chamberland) ou de terre d'infusoires (filtres Berkefeld), d'o leur nom de virus filtrants. Leur existence n'est souponne que par la virulence des humeurs qui les contiennent. Les Bactries se prsentent sous quatre formes principales : sphrique (Cocci), droite et cylindrique (Bacilles), incurve (Vibrions) et spirale (Spirilles). Les Cocci ont parfois un aspect lancol (pneumocoque), ou rniforme (gonocoque) ; les Bacilles sont longs et fins, filamenteux (b. de la tuberculose, b. diphtrique), ou courts et trapus,' peine plus longs que larges, ou encore de forme intermdiaire. De nombreuses bactries sont mobiles, principalement des bacilles, les vibrions et les spirilles, Leur mobilit est due la prsence de cils ou flagelles, dont la quantit et le mode d'insertion sont trs divers

BACTRIES B. Polymorphisme.

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Lorsqu'on caractrise les espces bactriennes par leur forme, on suppose, ou sous-entend, que leurs conditions d'existence sont dfinies et toujours identiques. Car des tres aussi rudimentaires, chez lesquels l'activit formatrice se rduit la croissance et la multiplication sous leurs modes les plus simples, sont exposs des variations trs tendues quand le milieu qui les baigne, les circonstances de leur culture, c'est--dire les facteurs externes mcaniques, physiques et chimiques, et les facteurs biologiques se modifient. Ces variations peuvent tre lgres, et le microbe peut passer pour 'monomorphe ; souvent elles sont considrables, et traduisent une plasticit telle, que le savant allemand Koch se refusait admettre que des formes aussi diffrentes pussent appartenir au mme type initial. Ainsi le B. prodigiosus se prsente sous l'aspect de cocci dans les milieux alcalins et de bacilles droits ou spirales dans le bouillon additionn d'acide lactique ; le b. pyocyanique, btonnet rectiligne dans le bouillon normal, prend la forme sphrique des cocci dans le bouillon crosote 1 p. 1 000, la forme spirillaire dans le bouillon borique 7 p. 100, filamenteuse dans le bouillon additionn de 0,15 p. 1 000 de bichromate de potasse. De mme, l'aspect des bactries pathognes varie quand elles sont transplantes des humeurs de leurs htes dans les milieux de culture artificiels : la bactridie charbonneuse, qui pullule dans le sang et les tissus sous la forme de btonnets isols, trapus, souvent entours d'une membrane, donne 37, dans le bouillon ordinaire, de longs filaments flexueux, enchevtrs, composs d'articles nus, gaux, souds par leurs extrmits. Toutes ces modifications morphologiques s'accompagnent de variations physiologiques qui seront tudies par la suite. Mais, si importantes qu'elles soient, elles n'offrent gnralement aucun caractre de fixit. Elles constituent de simples variations temporaires, traduisant la plasticit structurale et l'instabilit fonctionnelle des bactries", leur troite dpendance du milieu extrieur, et non des phnomnes de mutation comparables aux mutations brusques, dfinitives et hrditaires, dcrites par de Vries chez les esj^ces vgtales suprieures. En effet, reports dans un milieu normal, mme aprs un trs grand nombre de gnrations dans les milieux modifis, les microorganismes font plus ou moins rapidement retour au type originel,

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MORPHOLOGIE MICROBES RPS

Nous verrons cependant, en tudiant la physiologie des microbes, qu'il est possible de provoquer des modifications si p.rp.fqndes dp Jeujs prpprits, qu'ils perjent dfinitivement quelquesTims de leurs caractres essentiels. 0. F-ormes cVinvolution. ouver4, lqrsqu'pllpg cr.piss.ent dans des condition!! dfavo^ rabjes pu qu'elles, spnt ypisjnes du ternie de leur dveloppement, le bactries prsentent des formes anormales, dites f-apnes d'involyiion:- boules gantes ppur les pppci, aspects massues., bossues, fusels, pirifprmes ppur les bapilLes, formes allonges, pseudobacillaires pour, Ips miprpcpques et les vibrion?. On a considr ces formes, d'inyplutiqn. cpjnnie des fprqi.es de dgnres^ cenpe. En npalit, elje cpnpryent toutes les proprits des germes dont elles proviennent et se multiplient activement, en reprpduisant lp type initial, ds qu'elles spnt replaces dans un milieu neuf. II. Structure. Les Bactries sont constitues par une masse protoplasmjque brprle par une nienrbranp plus, pu inoins nettement dlimite. Ules ne possdent pas de npyau dpfmi, c'es.tr,4-dire un petit blpp dp chrpmatjne, cpntqm'S nets, parlajterpent djstinpt du prptoplasma enyirpnnant la fois par spn aspect, sa rfrijygenpe, sa structure, sa comppsitipn p}|jipique, ses ractions tinptprialps et ses paraptr.es fpnctipnnpls. Quelques esppes s'entQurenf; d'une. capule, d'aufres prsentent, ppmme nous, l'ayons yu, des cils, qui assurent leur, mpbilit. A. Membrane. Dans -fpute pe.Uuleplonge dans, un milieu liquide, les constituants protoplasmiques qui abaissent la tension superficielle se condensent la surfacp pu ils dpssinpnt unp membrane limitante. Les lipodes e|; les. graissps ppllulaires, qui diminuent cpnsidrablement la tpnsip.n superfipiellp, jpug.nt un rle importt dans cet^e fprmatiqn ; mais les prptpines n'y sont pas car/ elles subissent; une vritable poagujatipn indiffrentes, sont amenes un certain pleg-rdp cpnpentratipn. lorsqu'elles

isAfrr'ERis

L tir'f de sparation entre M cellule et le milieu liitrtidiaif aux deux pliss (contenu prbtbplsriiicpi et nilii ritbirit) chtierit ddiic tdiis' les lhints de s deux phases qui diminuent l'hrgi superficielle ; sa ebfastitiltioh varie slbn l bmpds'itibh dti milieu environnant et ell du protoplasme iii moment donne: C'est pour cette raison que le coiitbur des amibes se iidhtr instable; et dil'il prsente ds dfdtiiitidhs psiiddpddiqiis cbritirills sdiis la double action du mtabolisme cellulaire et des bh&itibris extrieures.- Ail bhtrair, le protoplasme des bactries est entour par une meriibrane rsistante qui biifre ces organismes l rigidit et assure, dans les Conditions nbrmls; l permanence de leur fdr'iri: Quelquesgr&nds espces prsentent ninie une iiveloppe bien diffrhi une vritable prdi lllir'; dans laquelle luristlr et Busqut dht distingu uti cbli extrri; liyiih; glatineuse et h couch interne^ o buch cticulir'; miri.ee et drise; ghrtri de l prcdente: Apres l plsriidlys dii bntnu cellulaire du l fornitibh de l spdre, tt prbi apptait v une grande tittet: Ii'iivldpp des bactries' est lsticju, dmriie le prouve l flexibilit de rtaifis hiicrbbes mobiles; Bile est parfois' double d'une gin d'paisseur vi'ibl cpi nous retrouverons ii tudiant les' Capsules. B. Contenu. L drith ds petites bactries apparat gnralement homogne, mais, ri ralit, il prsente lili structure cdmpx v un ctdiibl r's prdtdplSniibjtie et nuclaire plus" dii mollis diffrenci et des inclusions' gl-anluss. De mme que le pfdtdpishi cellulaire des tres suprieurs, le pfotoplrn des btriS rprsrit un systme bdllodal ddiit les nombreuses parties cbhsti tuantes; dii phases' sdllds et liqiiids, sdht intimehiiit stiis. Dn quelques sps, il se cbndns aux extrmits' de l lltil. L partie dritfl, plus rfringente, vcfidlir, ihcdlbrbl par les mthtids habituelles' dii lbbrtbif, offre lds I'gpt d'un espace dlir, arrondi du ovalaire (bactries espace clair: Pasteurella, bacille de l peste j: S'il n'existe pas diis les tris^ tiomin diig les Champignons et les Protozoaires,' un noyU bien dntil; M tinM*

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organismes n'chappent cependant pas la loi morphologique gnrale et forment, comme toutes les autres cellules, libres ou groupes en tissus, un couple nuclo-plasmique dont chacun des lments prsente une importance variable suivant les espces. Butschli, le premier, a dcrit, dans les grandes bactries (sulfobactries), un systme chromatique diffus, rticul et granuleux, occupant la partie centrale du microbe (corps central) et bord d'une couche souvent trs rduite de cytoplasme. Au moment de la sporulation, ce rseau nuclaire se disvjoserait en un vritable noyau. .Divers auteurs comme Mencl, Meyer, Pneau attribuent aux bactries un noyau typique, d'autres, un noyau sans cytoplasme (Ruzicka, Ambroy). Pour Schaudinn, Guilliermond, Swellengrebel et surtout Dobell, le noyau des bactries consiste tantt en un filament axial, tantt en un rticulum chromatique, tantt en un systme chromidial. Mais, quelle que soit sa nature, le systme nuclaire des bactries ne peut tre identifi chimiquement, car les ractions microchimiquejs et colorantes, qui lui sont applicables, n'ont aucune spcificit. Seuls les caractres morphologiques prsentent, d'aprs Dobell, une relle valeur scientifique. De ce fait, les grains colorables du protoplasma bactrien peuvent tre assimils un noyau, lorsqu' tel stade du dveloppement ils se disposent en un corps morphologiquement comparable un noyau. Dans la partie centrale de quelques microcoques et sarcines de l'intestin de Mabuia carinata et de Bufo melanosticus, Dobell a observ la prsence, constante d'un corps sphrique, ayant les caractres de coloration de la chromatine nuclaire et se divisant au moment du partage de la cellule. Cette formation nuclaire existe galement dans certains cocci de l'intestin de Lacerta muralis, o l'on rencontre tous les types de transition entre les formes cocciennes et les formes bacillaires. A mesure que les cocci s'allongent en cocco-bacilles, puis en bacilles, leur noyau subit des transformations correspondantes ; il prend l'aspect d'un filament dispos dans l'axe longitudinal de la cellule, court, droit ou recourb dans les. cocco-bacilles ; spirale ou en zigzag dans les bacilles. Ce filament nuclaire participe la division de la cellule. Le Bacillus spirogyra de l'intestin des grenouilles et des crapauds ne possde pas, comme les microbes prcdents, de noyau initial sphrique. On ne distingue, dans la cellule, qu'un filament

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spirale qui, au moment de la sporulation, se condense" un ple en un gros granule chromatique, origine de la spore. Enfin, chez le Bacillus saccobranchi de Saccobranchus fossilis, le noyau, d'abord filamenteux et spirale, se transforme en un rticulum qui se dissocie en un grand nombre de grains dissmins dans la cellule. Ce noyait diffus ou chromidial se condense galement au moment de la sporulation pour former l'bauche de la spore. D'aprs Guilliermond, dont les travaux cytologiques confirment et tendent ceux de Dobell, l'hypothse d'un noyau typique doit tre dfinitivement rejete. Le noyau dcrit par Mencl dans quelques bactries trs spciales du genre Cladothrix correspond, en ralit, aux cloisons transversales qui, au moment de leur formation, ont une affinit trs vive pour les colorants. En dehors des grains chromatiques, on trouve dans le protoplasme de plusieurs espces bactriennes, des inclusions dont les ractions microchimiques diffrent de celles du contenu cellulaire. Les inclusions du bacille diphtrique offrent l'aspect de grains rfringents dissmins dans le cytoplasma. Elles ont une vive affinit pour les colorants basiques et se teintent diffremment du reste de la cellule sous l'action du bleu de mthylne, d'o le nom de corpuscules mtachromatiques qui leur a t donn par Btschli. A l'intrieur du Spirillum volutans, elles constituent les grains de volutine. Le rle de ces lments est d'autant plus mal connu que leur composition diffre d'une espce l'autre : tantt ils se colorent en brun par l'iode, comme s'ils taient constitus par du glycogne ; tantt ils noircissent sous l'action de l'acide osmique, qui dcle la prsence de matires grasses ; tantt, enfin, ils paraissent forms de substances protiques complexes, phosphores. Guilliermond les considre comme des grains de rserve. Les Thiobactries ou Sulfobactries, htes des eaux sulfureuses, ont la proprit de rduire IFS et de librer le soufre qui se condense dans leur protoplasma en grains parfois volumineux. Chez les Bactries pourpres, les inclusions sont formes de grains pigmentaires, rouges, bruns ou violets (grains de bactriopurpurine). C. Capsules. Certaines bactries s'entourent d'une gaine d'aspect muqueux, hyalin, propre un ou deux lments (pneumocoque), ou commune un grand nombre (capsules gantes des Leuconostoc

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ihsenierods cjui eritouf'iit une bii plusieurs Chanettes). Ces productions bactriennes' peuvent nnii englober une ilass hbr'me de hiicfbbes l manire jaune vritable substance intrcllulair Unissante, de consistance varie. On alors affaire Une' zbbgle. Leur ibihitidn Se traduit par un vbil la sriUc des' iriiliitx liquides, par des iiis noConnCux dans leur profondeur. Il y des zbbglees de hiicrbcoqs, de bacilles et de vibribhS; dbiit il est parfois dificile de dcider si la consistance glatineuse qu'elles communiquent aux liojids tiiit la cbalScetice d'ilbfnies capsules ou une trnsfbrmtibii in sii dii substiatrii nutritif. Cette gain riiicfdbiehii jSiit vbir iiii consistance sche, ppyrace, choiidfbid {'cob'o'ccUs Billrthi), graisseuse cliz ls cultives dris des niilittx dditi'orihs de corps gras, organismes cireuse crie i's bacilles idb^sistrits. Ses ftions tinctoriales diffrent de. celles' d bdntri cellulaire et se rapprochent d celles ds ils. te jplli sbveht, elle ehveibpp la totalit du corps d la Bactrie drit elle drive. Parfois elle ii se fdfhi que sr h partie de celle:ci, siif un ct ofnifie chi i S'cterim pdliultum qui produit, iiisi que le LhcriSt, l gomme des sucreries. L'ripsultibri des Bactries parat lie l cbhipositioh ds riliux o lle Se dveloppent et aux circonstances de leur culles ture. JDfiS tis^Us'et les huniurs de l'hte, les bactries pathognes prsentent une cp'si positive coibfble, bu une Capsul ngative ihcblbfbl. Elles en sont dp'burvus dans ls milieux rtifibiis, sauf ldfsqe fcsmilieux sont additionns de liquides tifgnibjS : SrUifi, liquide d'ascitfe. Cependant ii ne semble pas' que les nitifeS lbitminodeS mtrvirineht^ directement dans la production de la ba]3sui: Eii effet, celle de la bactfidi charbonneuse, j3f exemple, ii Sefbiiti bas dans ls Solutions d'lbuliiih srique, iii dans Un srhi dialyse dbiit l'albumin a t rdissdute p'r dditibii de JaCl. Ue jjpafait, au contraire, cdmiri dans le srUm tdtl, dn's l'ii qui servi l dialyse dti suhi et daiis l liquide cphio-rchidiri dilii; pourtant trs pauvre en matires lbuminodes (Rotky). L'enveloppe mUilagineuse du Leuconostoc mcsentcr'des, qui prsente certaines ractions de la callose, ne se forme que dans les milieux renfermant dii saclirOS'dii dii gfuebse. Le L'eVicoii'sio'c produisant de l'inc'est Unibjnhient aux dpens dii vrtih, il est p'rbBBi qii gllicb'se 'djifese constitue l mciige,

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D'aprs Tcennissh, les capsuls du Bacille de Ffidlrider, de nature llydi'dcarbdii' (glcth), ri sont pas fixes par les coagulants Habituels des lburiiiiis. Si dii parvient a les mettre en vidence par des artifices de coloration, cela tient uniquement aux pi'btiris cdlorbls qui se dposent leur surface diis les humeurs di diis les nlilieux aibiriinux. Ces formations ii Constitueraient ddilc pas tin caractre contingent du pnmobacill; niais ii caractre cdnstht, observable seulement dans certaines cbilditidiis de culture, par l'intermdiaire des substances protiqus d'origine externe ddiit il est imprgn. D: Cils. Ce sont de fins nlniiits analogues a ceux des pitliliuiris vibratils 'et des Irifusdirs, qui assurent la iiibbilit des microbes. Leur ldrigur dp'ass souvent celle de la bactrie qui les porte, dbiit ils peuvit atteindre jusqu' vingt fois le plus grand diamtre. tJris', flexibles, ondules, ils apparaissent mal l'xmen mifbsfpicjue direct. Dii ls met ii vidence par des iithods de fcbldfatibii spciales, cbmb'iiies ii mdrdriag. Mais, trs fragiles, siirtdut quand ils pi'oviiihrit de cultures : tm jJeii aiiihiis; ils se brisent facilement au cours des manipulations. P'br qiieiqvles auteurs, bnime Vii Tiglim et Biitscnli, les cils seraient ds dpendances de l membrane d'hvlbpp laquelle ils testeraient dhrnts. Pour 'd'autres (Trnkmiih), ils cdiistitiit de vtitbls expansions protbplasiriiqus travers la membrane. Prenant cbrisTdrfe mme que ls psudbpdds ds Myxomyctes et des Amibes, les flagelles des Protozoaires et ls cils sont trois formes drives successivement l'une de l'autre au cours de la phylbgils. Chez les Irifusbifs; O il est plus facile de les tudier, chaque cil est pourvu d'un corpuscule basai situ dans le- plateau de l ellule et d'une fine racine qui se prolonge dans le cytoplasme, o elle disparat aprs avoir contourn le noyau et s'tre jointe aux racines voisines. Chez une Sulfobactrie tudie par Dangeard : Chr'dniiitim Okhii, les racines du long flagelle insr l'avant manent d'un corps central chromatique, sorte d noyau sans enveloppe. Ce flagell, qui diffre de celui des Bactries et se rapproche du flagelle ds Infusoires, traverse l membrane par fi petit orifice eh s'effilant de la base son extrmit; il comprend iih partie corticale amincie vers la

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pointe et une partie axiale constitue par un grand nombre de fibrilles unies par une substance intercellulaire. C'est la substance corticale qui produit les mouvements, la partie axiale, lastique, sert d'appui (Petschenko). Habituellement, les cils n'apparaissent que lorsque la division cellulaire est dj trs avance. Us croissent alors trs vite, car on n'a pu observer leurs stades de dveloppement. Comme les flagelles des Protozoaires, ce sont des organes moteurs agissant soit directement sur la cellule elle-mme, soit indirectement, en dplaant les liquides dans lesquels elle baigne. Leurs mouvements, dont les variations de la tension superficielle au contact du milieu ambiant paraissent tre la cause essentielle, sont influencs par tous les excitants : mcaniques, calorifiques, lumineux, lectriques et chimiques du protoplasme. Les Microcoques en sont rarement pourvus. On peut citer, titre d'exception, le Micrococcus agilis et le M. agilis flavus, appartenant au type Mrista, ainsi que la Sarcina mobilis. Les bacilles possdent tantt un cil polaire, comme le b. pyocyanique {Bactries monotriches) ; tantt un cil unique ou un faisceau de cils chacun des ples (Bactries amphitrich.es et bactries lophotriches) ; tantt plusieurs cils rpartis sur divers points de leur surface (Bactries pritriches : B.coli,b. typhique, b. tta- nique, Bacterium Chauvoei, B. subtilis, B. proteus, etc.). Sauf quelques espces qui portent deux cils chacune de leurs extrmits (vibrion de Massaouah, par exemple), lesvibrions n'ont, d'ordinaire, qu'un flagelle polaire. Sur les Spirilles, ils sont disposs en buissons chaque extrmit. On les observe galement chez la plupart des bactries pourpres, rondes, longues ou courtes et chez les Cladothrioemobilis. III. Reproduction des bactries.

Elle s'effectue suivant deux modes : 1 par division directe ou scissiparit ; 2 par sporulation observe chez certaines espces seulement. A. Scissiparit. Le dbut de la reproduction est annonc intrieurement par l'apparition d'une ligne claire qui cloisonne le contenu cellulaire et, extrieurement, par un sillon qui trangle peu 4l peu la cellule pour la diviser en deux lments bientt compltement

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distincts. Les cellules-filles se sparent ensuite de la cellulemre et se dispersent dans le milieu. Parfois, elles restent accoles et donnent naissance des chanettes de deux trois lments, ou davantage, qu'on dsigne, suivant leur nombre et leur forme, sous le nom de diplocoques, diplobacilles, streptocoques, streptobaciles. Lorsque dans les formes rondes, la division a lieu suivant une seule direction de PesjDace, les deux moitis, une fois spares, arrondissent leur face plane et deviennent identiques la cellule-mre. Si la scission a lieu dans deux ou trois directions, il en rsulte des groupements d'lments plus ou moins nombreux, plans ou cubodes : ttrades (mrista) ou sarcines. Un mrista, le gonocoque, se prsente donc sous la forme de quatre cocci runis; et une sarcine, sous celle d'un petit cube comprenant seize individus intimement associs. La division des bacilles s'effectue de la mme manire. Elle aboutit la gense de deux cellules-filles, dont les extrmits voisines s'arrondissent, s'effilent ou se sparent par une ligne droite, selon que le microbe est bouts ronds, grles ou carrs. La division par scissiparit se produit toujours transversalement. B. Sporulation. Ce mode de multiplication apparat par intermittence chez un grand nombre de bactries, sous l'influence de conditions extrieures diverses. Il est plus communment observ chez les espces anarobies que chez les espces arobies ; les cocci et les microorganismes spirales ne sporulent jamais. Ordinairement, chaque germe ne donne naissance qu' une seule spore ; quelques espces seulement (B. Btschlii, Metabacterium polyspora, B. caucasicus du Kphir) en produisent deux ; d'autres, un plus grand nombre. 1 Formation des spores. Au sein du protoplasme apparat un point brillant, qui s'accrot peu peu et prend un aspect > arrondi ou ovalaire pendant que sa rfringence augmente. A mesure que le contenu cellulaire se condense ainsi sur une tendue croissante pour engendrer la forme de rsistance, le reste du en matriaux nutritifs et devient protoplasma s'appauvrit Bientt la spore, n'est plus spare de la trouble, granuleux. membrane que par une mince couche de liquide ; finalement, elle est mise en libert par dissolution du reliquat microbien. Les spores constitues par une membrane paisse et un con-

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MORPHOLi ES MICROBES D

tenu trs rfringent, pauvre ri eau, sont tantt situes vi centre de l eellul, tantt ii bu aux deux extrmits. Selon les espces, leur diariitf dpasse du reste infrieur eli de l 'cellul-mr. Quand la spore est plus volumineuse que le corps dti bacille; clui-i prsente; datis l p'afti mdiane de son x, d ses extrmits; un renflement cji; liii donne un aspt singulier: battant de clbch (vibridii Sptibjii); piiigl (b. ttanique). Un bacille disteiitlu par sa spdfe se iioiiifrie Closiriiinn. Des phildifins Beaucoup plus c'diiiplexs, auxquels participe le systri nuclaire clifoiiiidil prdemhiht dcrit, accompagnent l sporulation' endogne de Quelques grandes espces bactriennes. Sciiudiiih ainsi observ; dlis B. BsichliiA'e mode de sporulation suivant; qu'il cdiisidf cdiilm tin processus sxl rudimiitair bii dgni'tif, cdmp'i-bl phiibniri de conjugaison (tdgriii) des levures' et de Certaines ihfusdires. Les ellules destines' p'rddUir des spores ifittiit d'bdfd uri cldisdii mdiane; cdhlrh si elles devaient diviser. Mais cette cldisdh ii tarde pas se rsbrber; et les deux lments qu'elle sparait se confondent de nouveau en un seul qui, par change et fusion des granules chromatiques, produit bientt deux corps sphriques polaires : matrices des spores, pourvues de tous les caractres dii noyau. Les deux cdrps nuclaires s'ntorrit ensuite de protoplasme, se dlimitent rjr tth irimbffi et se transforment ri spdi-s dfinitives'; ihcdldfabls par les mdyiis ordinaires, l mribfii s'bpp'dsant l pritrtidii des ractifs; Dans un dernier stade, le sporange se dsagrge; lat et libre les deux spores. Malgr l'autorit d Scliudinh, il cbriviht de faire toutes rserves sur l'existence O l signification d'un tel jifdbsss d'autogamie. Selon Dobell, riiBhient de l sporulation de B. spifogyr, par exemple, la spirale hrbhiticj centrale se renfle d'abord chacun de ses ples. Ces renflements' ncliret! se transforment ensuite en spdres par' djbiictibh d'une mni- ' bl'e; On observe bien; comme l'a vu Scliudinh, un partage des cellules il voie de sp'Omlf; niais non l fsioh des ellls-filles ; qui dmontrerait le caractre sxl du jjlihbhin: 2 Germination idessp'ores: Elle n'est dhn xdthiht que pour un petit nombre d'spcs: Places diis des cbhditibhs' favorables; les spores germent ii clbiiiiaiit hisSh d hduvx baeilles. Une bactrie hdbspbr est ddiic; pditit de Vue,

BACT^IPS

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comparable une plante suspep/tjbje c[e se rpprqdujre la fpis par graine et par bquture. Tout d'abord, la spprp se gonfle, sqn yplurne s'apprpt et sa rfingpncp diminue. Puis diverses ,yep"j:ualjtps, euvent s.e prqp 'duire. Tantt la membrane jispar.afj;rapidement, pj; le nouveau bacille se substitue la spprp. Tanfpt l'pnyplpppe pprsjstp pendant un temps trs cqurt, mais, apprciable, et lp mjcrpbe fait hernie un des ples, qu au niveau de l'quateur (B. $ipp,tilis), par une troite ouverture, le ijiicrapyle. Tan.{;q{; nfin, et c'pst le e cas pour la baptridie charbonneuse, pjhjs^cpncepplairp, l'issue se fait encore travers la membrane, mais pplle-pi e liqufie ensuite presque immdiatement, et le phnomne dpyient difficilement discernable. , . On ne confondra pas pes spprps yraies, mj sont des, fprmatipns nouvelles, apparaissant dans l'intrieur- mme dp? hapilles, avec certaines formes de rsistanpe pu fi,rtlip,&fl>rs q^s.eryes. hpz divers cocci en chanettes. Ces. faussas s.ppres, assimilables aux chlamydospores des champignons, ne se distinguent des lments normaux de la chanette que par un vplump plus grand et une rsistance un peu plus marque la chaleur. IV. Classification. Les bactries qui forment la classe des Schizomyctes sp relient par plusieurs caractres aux hampignpns, par d'autres aux Algues. Quelques espces sont si peu distinctes cjes Champignons que les Actinomyctales, bactries filamentpuses, produisant parfpis des cpnidies, sont tantt rangpps parmi les, Hyphomyctes, tantt parmi les bactries. Par ailleurs, pluipux bacfprips, de grande taille constituent des types, jntermpliairps, aux Algues cyanqphyces et aux bactries proprement dites. Les Algues cyanpphyces sont des vgtaux infrieurs dpnf chaque lment contient, au sein du prptpplasmej un noyau peu diffrenci, pu chromidium^ dpouryu de mpmbrane et de nuclole, et assimilable au systme chrprnidiai des baptries. Cpmme les Schizomyctes, elles prsentent des, formes, rondes, lpngiies, cpurbes, cls mrista, degsarcines, dps,zqcjglpes.Mais,d'importantps diffrences sparent ces deux classes de vgtaux, par.tipulirement l'existence d'un pigment dissous daps le cytoplasme cortical. Ce pigment, pu pliycohrome, est constitu par un mlange de chlorophylle et de diverses substances colores dsignes spus le

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nom de phycocyanine. Il communique aux Cyanophyces une teinte bleu verdtre, d'o leur nom. Parfois la couleur vire au jaune, au rouge ou au violet. Les Cyanophyces ne produisent ni oeufs, ni spores ; cependant, dans certaines conditions, les Nostoc glatineux donnent naissance des kystes, ou spores de conservation, par hypertrophie de leur protoplasme et cutinisation de leur membrane. Elles se multiplient par division transversale avec partage du systme chromidial, le plus souvent dans une seule direction de l'espace. Chez les Oscillaires, on voit certaines cellules se tumfier, s'entourer d'une membrane paisse, glatineuse et bruntre, puis se dsarticuler pour former une sorte de bouture ou hormogonie. L'hormogonie, d'abord doue de mouvements d'oscillation, perd bientt sa mobilit et reconstitue un nouveau filament. Enfin, les Algues cyanophyces sont presque toujours plus volumineuses que les Bactries et leurs espces mobiles ne possdent pas de cils. Le Comit des bactriologistes amricains distingue six ordres dans la classe des Schizomyctes ou Bactries : A. Les Myxobactriales, avec pseudoplasmodes conduisant des kystes trs diffrencis. B. Les Thiobactriales, avec granules de soufre, ou avec un pigment, la bactriopurpurine. C. Les Chlamydobactriales, entoures d'une gaine gnralement ferrugineuse. D. Les Actinomyctales, filamenteuses, tendant se ramifier. E. Les Eubactriales ou Bactries. F. Les Spirochoetales. De ces six ordres, ce sont les trois derniers qui nous intressent plus particulirement. Elles comprennent deux familles : les Actinomyctales. Actinomyctaces, dont les filaments ramifis portent des conidies, et les Mycobactnaces, peu ramifies et dpourvues de conidies. Dans la famille des Actinomyctaces, on trouve les genres : Actinobacillus, Actinomyces et Erysipelothrix (microbe du rouget du porc) ; dans la famille des Mycobactriaces, les genres Mycobacterium (type bacille tuberculeux), Corynebacterium (type bacille diphtrique), Fusiformis (bacille fusiforme), Pfeifferella (bacille de la morve). Se rpartissent en cinq familles : Eubactriales. 1 Les Nitrobactriaces, formes en boules ou btonnets, parfois mobiles, avec des cils polaires ; ne donnent jamais de spores.

BACTRIES

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Ces microorganismes sont essentiellement caractriss par leur proprit d'oxyder directement le carbone, l'hydrogne, l'azote, ou des composs simples de ces corps. Ils se rpartissent en deux tribus : les N itrobactres avec les genres Ilydrogenomonas, Mthanomonas, Carboxydomonas, Acetobacter, Nitrosomonas, Nitrobacter, Thiobacillus qui oxydent respectivement l'hydrogne le mthane, l'oxyde de carbone, l'acide actique, NH 3,Az203 et le soufre ; les Azotobactres, microbes fixateurs d'azote, les uns libres : Azotobacter, les autres parasites ou symbiotes : Rhizobium. 2 Les Spirillaces, corps spirale, mais non flexueux, avec des cils polaires. Vivent dans l'eau ou l'intestin, mais l'inverse des Spirochtes, ils n'envahissent qu'exceptionnellement les tissus. Vibrio, courts avec un cil ; Spirillum, plus allongs avec touffes de cils polaires. 3 Les Coccaces, microbes sphriques rpartis en trois tribus : a,)Neisseres, aveclegenre Neisseria (gonocoqueet mningocoque), cellules disposes par paires en grains de caf, se dcolorant par le Gram ; b) Streptococces, avec le genre Diplococcus,. microbes disposs par paires, faisant fermenter l'inuline ; le genre Streptococcus, microbes en chanettes ne faisant pas fermenter l'inuline ; le genre Stapliylococcus, microbes disposs en groupes irrguliers, producteurs de pigment ; le genre Leuconostoc, microbes saprophytes, inclus dans les zoogles ; c) Micrococces, caractrises par l'agglomration des individus en masses, la pigmentation et la dcoloration par le Gram ; elles comprennent les genres Micrococcus, pigment jaune, Sarcina, disposes en paquets et Rhodococcus pigment rouge. 4 Les Bactriaces, formes en btonnets ne produisant pas d'endosjaores : onze tribus. a) Chromobactres avec les genres Serratia, Flavobacterium (espce-type F. aquatilis), Chromobacterium et Pseudomonas. b) Achromobactres : genre Achromobacter (espce-type B. liquefariens). c) Cellulomonades : genre Cellulomonas (espce-type B. biazoteus). d) Enoines, parasites des plantes ; deux genres : Erwinia, cils pritriches et Phytomonas, cils polaires ou dpourvus de cils. e) Zopfes, ne se dcolorant pas par le Gram (B. Zopfi). f) Bactres: genres Aerobacter (type B. lactis aerognes) ;

32

MORPHOLOGIE JpES MICROBES

Esclierihiq (type B. cpli) ; Promus ; Ehprthella (type Bt. typhi) ; Alalignes (type B. foealis) ; $almo,nella ayec les espces Shoftviulleri, qertrycke^ typhi tnurium, cohmibusis, epteritidi.^ B,), psittqcosis, siiipestifer, iterples, pqrqtyplii (paratyphique pullorq, Melitensis-qbgrtus, etc. g) Encapsules : genre Encqp$ulqtus (type B. de Medlander). h) Lqtobapilles : genre Lqtabaillus, micrpbes non dcolqr rbles par le Gram. i) B acieroides : genre Bacterodes (type Z?. f);qgilis). j) Pasteurelles : genre Pasteurella, espces avicida, muriseptiq, cuniculicida. suisepticax bovisepficq, tularensi, pestis. \) Hmop]\le: genres Hemophilus (b. de Pfpiffpr) et Dialister (B. pneumosintes). 5 Les Bacillaces qui produisent dps pndpsppres et ne e dcolorent pas, en gnral, par le Gram. Deux genres : IfqiHiis, niir crobes arobies et Clostridium, plus ou moins strictement anarobies. L'ordre des Spirpichcetales comprend les geiir.es Spirqne^q, Trponema, Leptospirq, que nous avons examins au chapitre des Protozoaires. Y. VlRTJS ET INVISIBLES INCULTIVABLES.. UlTRAMICROBES ou ixeramiprobes (. Nlpplle). (Calmette)

Certains germes, dont la prsence est rvle par la virulenpp des humeurs qui les contiennent, spnt invisibles au irner.ppqpp, aussi bien qu' rultramicrpscopp. Ils franchissent les filtres, pje. porcelaine (filtres de Chamberland) pu de terre d'infuspires (filtres de Berkefeld), ce qui permet de les sparer des bactries visibles auxquelles ils sont associs dans les produits pathplor giques, et de les obtenir l'tat de puret. Les principaux d'entre eux sont ceux de la fivre aphteuse (Lpffler et Frosch), de la peste bovine (M. Nicplle et Adil-bey), de la rjeste porcine (Dorset, Bolton et Bryde), de l'anmie pernicieuse du cheval (H. Carr et Valle), du sarcome de la poule (Rous), de la maladie des jeunes chiens (H. Carr), de la clavelg (Borrcl), de la vaccine (M..Nicplle et Adjl-bey, arini, Negri), de la grippe (C. Nicolle pt Lebailly), du trachome (Bertarelli et Cecetti), des oreillons (Granata), de l'herps (G. Blanc), de l'ener phalite lthargique (Levaditi et Harvier). Presque la limite de la visibilit au microscope et l'ultra-

BACTERIES

3g

microscope, mais filtrables sur bougie, se trouvent les virus de la pripneumonie (Nocard et Roux, Borrel, Dujardin-Beaumetz et Salimbeni), de l'agalaxie contagieuse de la brebis et de la chvre (Bridr et Donatien). Enfin, diverses bactries d'assez grandes dimensions, tels le b. tuberculeux (Fontes, Vaudremer, J. Valtis) et le b. dysentrique (Hauduroy), peuvent engendrer, comme le spirochte de la fivre rcurrente (C. Nicolle), des formes filtrables travers les bougies de porcelaine.

Microbiologie gnrale, 2udit.

CHAPITRE COMPOSITION CHIMIQUE DES TINCTORIALES 1. Composition

IV

ET RACTIONS MICROBES chimique.

A. Champignons. L'enveloppe contient de la cellulose ; le corps cellulaire, riche en eau, est constitu par des matires ternaires (hydrates de carbone ou glucides, graisses* ou lipides) et quaternaires (protines ou protides de la nomenclature actuelle) en proportions variables et des sels minraux en petite quantit. Les graisses existent la fois dans le myclium et dans les spores. On en trouve jusqu' 60 p. 100 dans les sclrotes de Claviceps purpurea (ergot de seigle). Les plus communes sont des thers glycriques des acides olique, palmitique et starique. Dans les levures, Mac Lean et Thomas ont galement identifi les acides linolique, laurique et arachidique. La cholestrine existe soit l'tat libre, soit l'tat d'thers d'acides gras. On observe une forte augmentation des matires grasses dans les cellules vieillies, dgnres, et dans les cellules cultives dans des conditions de temprature dfavorables ou en prsence de poisons protoplasmiques, comme l'acide phnique. Une fraction importante de ces substances est combine sous une forme encore inconnue avec le plasma cellulaire (Mac Lean). Chez les levures, le glyeogne forme jusqu' 33 p. 100 du poids sec. Il apparat, s'accumule et disparat souvent avec une grande rapidit. Au dbut de la fermentation, il se prsente sous l'aspect de graini? rfringents dissmins dans le protoplasme ; aprs quelques heures, ces granules font place des vacuoles qui s'tendent rapidement et envahissent la plus grande partie de la cellule. Cette extension de la vacuole parat rsulter de la pr-

COMPOSITION T CHIMIQUEET KACTIONS INCTOIIIALKS 35 sence de gaz, d'acide carbonique principalement, provenant de la dcomposition zymotique du glycogne (Harden et Rowland). Le glycogne ne constitue pas seulement une rserve nutritive. Comme il manque dans les spores des Mucors et dans les sclrotes de certains champignons, et qu'il apparat seulement au moment o le myclium se dveloppe, son laboration semble lie au mtabolisme cellulaire. Chez les levures, certains auteurs le considrent comme un produit intermdiaire de la formation de l'alcool partir des sucres. L'azote total oscille entre 5,5 et 9 p. 100 du poids de la levure sche, prleve au maximum dejla fermentation ; le carbone, entre 32 et 45 p. 100 ; l'hydrogne, entre 6 et 7 p. 100. Parmi les substances minrales, l'acide phosphorique domine et constitue jusqu' 50 p. 100 du poids des cendres ; puis viennent la potasse 30 rj. 100, la magnsie 6 p. 100, la chaux, la silice et le soufre. Une hmicellulose insoluble dans le ractif de Schweitzer a t isole de la membrane des levures. B. Protozoaires. Leur composition chimique est mal connue. C. Bactries. Comme tous les tres vivants, les bactries sont formes de C, II, O, N, combins en substances ternaires (hydrates de carbone, cires, graisses) et quaternaires (protines, nuclo-protines). Elles renferment galement de petites quantits de matires minrales : K, Na, Ca, Mg, Fe, du phosphore, de la silice, du soufre, du chlore et une forte proportion d'eau : 73 85 p. 100. La composition chimique des bactries varie non seulement avec 1,'ge de la culture, la temprature de vgtation, mais encore, et surtout, avec la nature des milieux ensemencs. D'une manire gnrale, les germes jeunes et les bactries cultives 37 sont plus riches en rsidu sec que les cellules vieilles et les cultures entretenues 20. Les matires organiques azotes sont plus abondantes dans les bactries dveloppes en milieu pepton simple que dans les bactries obtenues en milieu pepton additionn de glucides (Cramer et-Lyons). Par contre, les substances extractives : graisses, lipodes, augmentent dans les milieux azots et hydrocarbons.

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MORPHOLOGIE S MICROBES D

1 Membrane. Trs abondante dans la paroi cellulaire des vgtaux suprieurs, la cellulose est rare ou absente dans la membrane des bactries. On l'a cependant signale dans le B. subtilis (Dreyfuss), le b. tuberculeux (Hammerschlag) et le b. diphtrique, l'tat d'hmiceimlose (Tamura). La chitine, uniquement produite par les cellules des animaux, a t identifie dans la membrane de B. xylinum (Emmerling), B. pyocyaneus, B. megatherium et B. anthracis (Iwanoff). 2 Contenu cellulaire. a) Teneur en eau. a. Cultures solides. B. encapsuls : Des cultures sur milieux varis, pendant un temps plus ou moins, long et des tempratures diverses, ont donn, comme chiffres extrmes,. 84,20 et 87,71 p. 100 d'eau. B-.prodigiosus : Teneur en eu allant de 75,85 90,61 p. 100 selon les conditions ralises : maximum dans le cas de culture la temprature ordinaire et de culture prolonge dans un milieu riche en eau ; minimum dans le cas oppos. Notons encore : b. du oeerosis,84,93 p. 100 ; b. charbonneux, 85,44 p. 100 ; b. tuberculeux, 85,90 p. 100. p. Cultures liquides. Vib. cholriques : Voiles obtenus sur des milieux varis (trois jours d'tuve) : 86,94 p. 100 en moyenne; peu de diffrences d'un chantillon un autre. b) Cendres. a. Cultures solides. B. encapsuls : Grandes diffrences selon les chantillons et les milieux ; la quantit de cendres diminue par addition de glucose et proportionnellement celle-ci : 2,97 et 13,94 p. 100 du poids sec* B. Prodigiosus : Maximum dans le cas de culture la temprature ordinaire et de culture prolonge. Les microbes contiennent plus de cendres que les milieux : B. du xerosis, 9;52 p. 100 ; B: coli, 8,5 p. 100 ; b. tuberculeux, 8p. 100. fi. Cultures liquides. Vib. cholriques : Voiles obtenus sur bouillon fortement alcalin ; moyenne, 31 p. 100 ; peu de diffrences d'un chantillon un autre. Voiles obtenus sur le mme milieu additionn de fortes doses de chlorure de sodium et de phosphate de soude : la teneur des germes en cendres augmente avec celle des liquides nutritifs. Les microbes sont toujours moins riches en chlore que les milieux, plus riches en acide sulfurique et en acide phosphorique, moins que les liquides ne contiennent un grand excs de phosphate sodique. Voiles obtenus sur le milieu de Uschinslyi : faible teneur en cendres et grandes diffrences d'un chantillon un, autre. c) Azote total. a. Cultures solides. B. encapsuls : Va-

COMPOSITIONHIMIQUEET RACt'ONS TINCTORIALES 37 C riations trs marques selon les chantillons et les milieux ; la quantit d'azote des germes crot avec celle du milieu, niais bien moins rapidement ; elle diminue par addition du glucose : 23 et 71,81 p. 100 du poids sec (azote valu en matire azote). Il n'existe aucun rapport entre l'abondance des cultures et la teneur des milieux en azote. B. prodigiosus, 71,3 p. 100; b. du xerosis, 75,2 p. 100 ; b. tuberculeux, 56,8 p. 100. p. Cultures liquides. Vib. cholriques : Voiles obtenus sur bouillon fortement alcalin : moyenne, 65 p. 100 ; peu de diffrences d'un chantillon -un autre. Voiles obtenus sur milieu de Uschinski : bien moins d'azote et diffrences marques selon les chantillons (moyenne, 45 p. 100). B. diphtrique, 69,7 p. 100 ; b. de la morve, 87, -5 p. 100 ; b. tuberculeux, 45,3 58,7 p. 100. alcoolique et thr. a. Cultures solides. d) Extraits B. encapsuls: Grandes diffrences selon les chantillons et les milieux; quand on ajoute du glucose, l'extrait thr augmente jusqu' 5 p. 100 de sucre et diminue ensuite, l'extrait alcoolique augmente rgulirement jusqu' 10 p. 100 de sucre au moins. Extrait thr, 1,68 3,84 p. 100 (poids sec), extrait alcoolique, 11,39 29,60 p. 100. |3. Cultures liquides. Vib. cholriques : Voiles obtenus sur bouillon fortement alcalin : extrait thr + extrait alcoolique, 2 3 p. 100. On a isol, de bactries trs diverses', les e) Protides. substances suivantes, plus ou moins bien dfinies : Albumines coagulables dans les sucs de presse (Bucfmer et Hahn), globulines, une protamine (b. tuberculeux, Ruppel) ; protoses (par digestion peptique), glycoprotides, phosphoprotides (bactries trs nombreuses, Buchner, Galotti, Aronson, Vaughan et ses lves) et leurs drivs : nuclines (Klebs, Galotti), acides nucliques (Aronson, Ruppel, Leach), bases xanthiques (Nishimura, Aronson, Wheeler, Leach), bases pyrimidiques (Levehe). Une substance voisine de la chitine ou de la kratine (b. tuberculeux, Ruppel), Produits d'hydrolyse des protines ; amino-acides, bases hexoniques (Leach, Wheeler). f) Glucides. Sucres, en gnral mal caractriss, dont la majeure partie doit provenir de la destruction des glyco et des phosphoprotides. g) Lipides et lipodes phosphores. . Graisses neutres (b. encapsuls, b. diphtrique, b. tuberculeux), acides gras libres; (b. tuberculeux, Aronson, Ruppel), cires (b. tuberculeux,

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D MORPHOLOGIE ES MICROBES

Aronson) ; lcithine (un b. encapsul : 0,68 p. 100 du poids sec, d'aprs Nishimura; bacilles tuberculeux :0,16 p. 100 d'aprs Kresling; B. aceti : 1,56 p. 100 d'aprs Alilaire); graisses phosphores autres que la lcithine (Alilaire, voir le tableau ci-dessous). La teneur du b. tuberculeux en graisses et cires varie selon'les chantillons, l'ge des cultures et surtout la composition des milieux. Les spores ont la mme composition que les bactries dont elles proviennent. Elles contiennent cependant beaucoup moins d'eau et une plus faible proportion de cendres. Compositiongnrale des bactriescultives 37 sur glose-pointe de terre (M. Nicolle et Alilaire). . o a o 3 P3 o T~1^. c >, -oa Pa S ^ So 0^s ~3 ^82 52 S- rt si ^ n a CD = 0.0 '*> -' '3*5 a. o -a; o-*~ O " '-io o S <u. N W a. O,a C3 < B. de la morve . . 76,49 B. du cholra des 79,35 Vib. cholrique (Bombay) .... 73,38 B. de Shiga 78,21 Proteus vulgaris . 79,99 B. typhique .... 78,93 B. charbonneux (asporogne). . 81,74 B. de la pseudotuberculose .. . 78,83 Pneumobacille .. 85,55 73,35 B.Prodigiosuspathogne (de Fortineau) . . . 78,00 B. de la psitta78,05 B. diphtrique . . 84,50 B. pyocyanique . 74,99 B. de la lymphangite (de Nocard) 77,90 Levure (Frohber) 69,25 Chlorella vulga63,60 gans 10,47 11,69 10,79 7,54 8,59 3,10 6,30 1,24 2,530 8,0 2,370 7.5 2,370 1,570 1,580 1,169 7,5 5,0 5,0 3,5

9,79 8,70 6,77 1,93 8,89 12,80 10,57 2,23 10,73 10,87 7,10 3,77 8,28 15,44 10,64 4,80 9,22 6,31 1,48 4,83 10,36 15,63 10,31 5,32 8,33 15,45 7,36 8,06 10,32 15,25 11,77 3,48 10,55 9,00 6,60 2,40

0,948 3,0 0,793 2,5 0,790 2,5 0,790 2,5 0,474 1,5 0,474 1,5 0,158 0,5 0,157 0,5 0,157 0,5 0,000 0,0 0,000 0,0

9,55 11,08 7,03 4,05 7,04 5,23 1,81 9,79 15,77 10,67 5,10 9,17 10,00 6,83 4,22 2,53 4,30 2,92 1,30

3,96 21,10 12,81 8,29

COMPOSITION HIMIQUE RACTIONS ET TINCTORIALES 39 C II. RACTIONS INCTORIALES. T

Sauf de rares exceptions, toutes les matires colorantes utilises en microbiologie sont des sels neutres. Les couleurs dites basiques sont des sels d'une base organique colore et d'un acide inorganique, l'acide chlorhydrique le plus souvent ; les couleurs acides sont des sels d'acide organique color et d'une base inorganique, la soude gnralement. Il s'ensuit que leur effet tinctorial ne peut dpendre de la raction faiblement acide ou basique des constituants cellulaires. En ralit, quand les sels colorants sont dissocis, l'ion positif color de la couleur basique est adsorb par les collodes ngatifs de la cellule, tandis que l'ion ngatif des couleurs dites acides est adsorb par les collodes positifs. A. Champignons. La plupart des champignons, fixs par la chaleur, s'imprgnent en masse des matires colorantes, surtout lorsqu'on emploie la mthode de Gram, dont il sera question plus loin. On ne peut tudier leur structure qu' l'aide de colorations mnages, au bleu coton lacto-phnol, par exemple, qui teinte le contenu protoplasmique ou la membrane quand elle contient de la cellulose. Les matires grasses sont colores lectivement en rouge par le Soudan ; l'amidon, en bleu, et le glycogne, en brun par l'iode. Matruchot a obtenu la coloration vitale d'une Mucorine : Mortierella reticulata par culture mixte avec deux bactries , chromognes : Bacillus violaceus et Bacterium violaceum et un champignon, Fusarium polymorphum ; le pigment violet des bactries et le pigment vert du champignon colorent le proto{)lasma granuleux de la Mortierella ainsi que des inclusions huileuses et des lments assimilables des noyaux, mais ils ne se dposent pas dans la membrane. Les levures fixent par adsorjrtion les couleurs de la srie de l'acridine, la thionine et la safranine, mais non les drivs de la benzidine, sauf la benzopurpurine. B. Protozoaires. En solution trs tendue, les colorants vitaux, le rouge neutre en particulier, soluble dans les lipodes, diffusent assez facilement dans le protoplasme cellulaire et se fixent sur certaines granulations incluses dans les vacuoles. Le noyau des amibes vivantes

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MORPHOLOGIE MICROBES BES

peut tre teint l'aide au violet dahlia et du rouge de ruthnium (Mouton) ; mais les cellules, une fois colores en masse, meurent. On obtient des rsultats tout fait remarquables, aprs avoir fix les prparations par l'alcool, avec les mlanges d'azur de mthylne, d'osinate de violet de mthylne et de bleu de mthylne dissous dans l'alcool mthylique (Romanowsky, Giemsa). L'osinate agit comme mordant et f azur colore en rouge violac avec une extrme sensibilit et d'une manire presque spcifique, la chromatine 'des protozoaires. C. Bactries. Vivantes, elles opposent une rsistance considrable la pntration des substances tinctoriales qui, en gnral, sont toxiques pour les mieroorganismes. Lorsqu'on veut tudier comment les bactries se comportent en prsence des couleurs, il ne faut pas employer des colorants puissants comme le cristal violet. Ces substances, en effet, se fixent trs rapidement et d'une faon massive sur la membrane d'enveloppe ; elles augmentent ainsi le volume du microbe et masquent sa structure. Les solutions trs tendues de composs, qui ne surcolorent pas, permettent, au contraire, de mettre en vidence les plus fins dtails du contenu cellulaire. L'osine en solution faible est inoffensive pour le B. coli et le b. typhique, les bactries pigmentes et le bacille de Friedlander, qui s'en imprgnent. Le b. tyjjhique se laisse mme colorer instantanment par le vert malachite, mais il meurt assez rapidement : sa mobilit disparat d'abord, puis il cesse de se diviser et la mort survient en cinq minutes. De mme, la bactridie charbonneuse succombe aprs s'tre colore. Comme l'osine trs faible dose, le violet dahlia et le bleu Victoria n'empchent pas la division des btonnets, mais ils s'opposent la sporulation. Tues et fixes par la chaleur, ou l'alcool absolu, les bactries adsorbent facilement un grand nombre de colorants. Certaines d'entre elles prsentent une grande affinit pour les drivs basiques de l'aniline. Cette affinit tinctoriale comporte d'ailleurs des degrs selon les espces : la bactridie charbonneuse est aisment teinte par les colorants faibles, tandis que le bacille de la morve exige des colorants plus nergiques ; les bacilles lpreux et tuberculeux ncessitent un contact prolong avec la couleur phnique.

COMPOSITIONHIMIQUEET RACTIONS C TINCTORIALES 41 Une fois teintes, les bactries rsistent plus ou moins l'action des dcolorants. On sait en quoi consiste la mthode de Gravi couramment employe en bactriologie pour la distinction des espces : coloration des germes par des drivs basiques, phniqus de la pararosalinine (violet de.gentiane, violets penta et hexamthyls), suivie d'un contact avec la solution iodo-iodure, d'o rsulte la formation d'un compos iod de teinte bleu-noirtre, plus ou moins alcoolo-rsistant. Pour Guerbet, Mayer et Scheffer, ce sont les acides gras saturs et non saturs des microbes, qui se colorent par le violet d'aniline ; les graisses neutres ne se colorent pas. La proprit de conserver la teinture, aprs traitement par la solution iodo-iodure, tiendrait, d'aprs Deuszen, la prsence, dans les cellules, de certains nuclo-protides. On dit que ces bactries prennent le Gram. Celles qui ne prennent pas le Gram abandonnent l'alcool de lavage la combinaison iodopararosaniline. D'autres germes, comme les b. tuberculeux et l23reux, surcolors par la fuchsine phnique, restent imprgnes de couleur lorsqu'on les traite successivement par l'acide nitrique dilu et par l'alcool absolu. On les qualifie d'acido-rsistants. Les spores sont galement acido-rsistantes. Elles se colorent et se dcolorent difficilement. Sauf pour le vibrion cholrique, un mordanage nergique (tanin ferrique de l'encre de Lffler) doit prcder la coloration des cils. Quant aux capsules, souvent visibles chez les microbes vivants, on les met parfaitement en vidence l'aide de dcolorations mnages.

DEUXIME PHYSIOLOGIE

PARTIE DES MICROBES

Les microbes se trouvent partout ; le sol, l'eau, l'atmosphre, les minraux, les vgtaux, les animaux en contiennent des quantits innombrables. Leurs fonctions chimiques sont trs varies, leur puissance de multiplication extrme, et ils jouent un rle capital dans la circulation de la matire. Parasites, ils tendent dtruire les autres tres organiss, vgtaux ou animaux. Saprophytes, ils rduisent la substance organique morte des termes simples, prparant ainsi les aliments indispensables aux vgtaux suprieurs. La vie des plantes et, par consquent, celle des animaux est subordonne leur activit. Rciproquement, la matire qui a vcu constitue la source presque exclusive de leur nutrition. Ils apparaissent donc comme les intermdiaires obligs entre l'existence qui finit et celle qui commence. Nous examinerons dans l'ordre suivant les diverses fonctions des microorganismes ,: nutrition, production de chaleur et de lumire, chromogense, locomotion et manifestations sensitives, volution et vitalit.

CHAPITRE NUTRITION

Elle est lie : ' 1 A la nature mme des microbes, dont chacun manifeste des souvent trs troites, par suite de la spciexigences particulires, ficit rigoureuse de leurs enzymes. C'est ainsi que certaines moisissures (Pnicillium) dcomposent l'acide racmique en ne consommant que l'acide tartrique droit (Pasteur) ; 2 la nature chimique de l'aliment. Parmi les monosaccharides susceptibles de fermenter sous l'influence des levures, on ne rencontre que des corps trois, six ou neuf atomes de carbone ; de mme pour les hexoses, la structure strochimique commande d'aptitude la dislocation zymotique {Fischer) ; 3 aux influences extrieures : prsence ou absence d'oxygne, temprature, lumire. L'tude des fermentations et des actions diastasiques ne saurait tre spare pratiquement de celle de la nutrition. Nous passerons donc successivement en revue : les aliments des microbes et les milieux de culture, le rle des conditions ambiantes, les fermentations, les actions diastasiques, les changes nutritifs et les modifications des milieux. Il convient d'appeler aliment, toute matire laquelle un microbe donn peut emprunter les matriaux de son organisation et la chaleur ncessaire pour se rendre indjDendant de la chaleur solaire. Le total de l'action protoplasmique doit tre exothermique et mme, d'ordinaire, il reste un peu de chaleur en excs qui lve la temprature du milieu... Mais, dans le dtail, le protoplasma peut parfaitement s'adresser, pour une partie de son alimentation, des substances brles, incapables de fournir de la chaleur par une voie quelconque, la condition de les faire entrer dans une combinaison nutritive o figurent, en quantit suffisante, des transformations exothermiques. Le ferment nitrique peut, comme l'a montr Winogradsky, emprunter son charbon l'acide carbonique, la condition d'oxyder de l'acide

N.tUTK.MIO^

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nitreuix pour lie transformer en acide nitrique (Duclaux). Les. aliments, absorbs, par les microbes sont utiliss par eux au remplacement des produits, de dchets, limins et,, par des processus encore mal connus, l'dficatioa d'une nouvelle quantit de substance vivante, d'o rsulte leur accroissement. Toutes les modifications mternes ou externes, des: cellules,, leur activit pkysieor chimique,, leurs fonctions biologiques et leur reproduction sont troitement subordonnes aux transformations, que subissent, les-; matriaux absorbs.. Parmi les. aliments,, les. uns, comme les protides, les acides amins et les sels ammoniacaux fournissent les lments azots constitutifs de la matire vivante. D'autres, comme les glucides, s'ils participent galement l'dification protoplasmique et nuclaire, sont avant tout des producteurs d'nergie : ils librent, ea se disloquant, les calories ncessaires aux ractions synthtiques, endothermi'ques. Les diastases prsident . la fois la dcomposition des>aliments nergtiques et la synthse du contenu cellulaire. I. Nutrition des champignons.

Raulin, prenant comme'type d'tude VAspergillus. niger,. s'est efforc de raliser, l'aide de composs chimiques- bien dfinis (acide tartrique, sucre et sels minraux), le milieu le plus convenable au dveloppement de ce- champignon. Ses. recherches, vieilles dj de plus de trente ans, ont t confirmes et tendues par de nombreux exprimentateurs. Elles, servent encore d'introduction fondamentale la physiologie microbienne. Le liquide de Raulin fournit une rcolte constante 1/20: prs. Ii comprend les, lments, suivants : Eau Sucre candi Acide tartrique Nitrate d'ammoniaque Phosphate d'ammoniac ue Carbonate de potasse de magnsie Sulfate d'ammoniaque | de zinc. de fer Silicate de potastc 1. 500 centim. cubes. 70 grammes 4 4i 0sr,6 0sr,6 0sr,4 0er,25 ()er,07 0Bf,07 0er,07;

La. raction est acide.. Pour, avoirt des-rcoltes abondantes, il faut ensemencer en couche- mince;, au. large- contact de l'air., et

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PHYSIOLOGIE DES MICROBES

porter les cultures 37, dans une atmosphre bien humide. Aprs vingt-quatre heures, la surface du liquide se recouvre d'une membrane blanchtre, qui s'paissit rapidement, se plisse et prend, ds le quatrime jour, un ton noir d la couleur des spores mres. Si l'on veut valuer le poids de la rcolte, il convient, le troisime jour, de prlever la totalit du voile myclien ; une nouvelle rcolte peut alors tre obtenue aprs trois nouveaux jours. C'est la dernire. Les deux membranes sches et peses reprsentent environ 25 grammes pour 1 500 centimtres cubes de milieu einploy. A. Aliments minraux. En liminant sparment chacun des lments minraux prsents dans le liquide de Raulin, on peut se rendre compte de leur utilit respective. Aprs la suppression de l'acide phosphorique, la rcolte tombe 1/182 ; de la magnsie, 1/91 ; de la potasse, 1/25; de l'acide sulfurique, 1/25, etc.. Ces rsultats sont assez comparables ceux que donnerait un vgtal suprieur cultiv dans des conditions exprimentales analogues. Il n'en est plus de mme pour les suivants. Si l'on supprime l'oxyde de zinc, la rcolte tombe au 1/10 ; l'oxyde de fer, moins de la moiti. Comment expliquer ce rle imprvu de deux substances qui ne reprsentent qu'une minime fraction des constituants chimiques du milieu? Raulin a rpondu cette question par une exprience d'une admirable simplicit. Il cultive YAspergillus sur deux liquides privs respectivement de zinc et de fer. La mucdine pousse mdiocrement. Alors il restitue chaque culture le corps qui lui manquait, et voici ce qu'il observe : la restitution du zinc rtablit l'intensit normale de la vgtation ; la restitution du fer n'a aucun effet. Raulin en conclut que si le zinc reprsente un vritable aliment, le fer ne doit tre considr que comme une sorte d'antidote neutralisant quelque poison, peut-tre l'acide sulfocyanhydrique excrt par YAsipergilus et nuisible son dveloppement. D'aprs Javillier, les cultures d'Aspergillus dans le liquide de Raulin priv de zinc n'atteignent, au bout de quatre jours, que. les 37/100 du poids obtenu dans les conditions normales. En outre, les conidies apparaissent plus rapidement. Parvenue au terme de son dveloppement, la moisissure laisse, inutilis, envion 60 p. 100 du sucre qu'elle aurait consomm en prsence de

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zinc. Mais il suffit d'ajouter 1/10 000 000 de ce mtal au milieu pour que VAspergillus puise tout le sucre mis sa disposition et fournisse la mme rcolte que dans le liquide de Raulin-type. Le zinc favorise aussi la fixation du silicium, du fer et du manganse par VAspergillus, mais non celle de la magnsie, du soufre et de l'azote. Il est lui-mme fix en totalit par la mucdine, lorsque la quantit de mtal est gale ou infrieure 1 milligramme par 250 centimtres cubes de milieu, soit 1/250 000. De mme que certaines substances minrales sont indispensables la croissance de la moisissure des doses extrmement faibles, d'autres se montrent dangereuses l'tat de traces quasi impondrables. Tel est le cas du sublim et du nitrate d'argent, qui empchent la germination des spores, le premier 1/500 000, le second 1/1 600 000. La sensibilit de VAspergillus aux sels d'argent est mme si grande, qu'il ne se dveloppe pas dans un vase de ce mtal. A la dose de 1/25 000, le zinc est galement toxique et il abaisse trs notablement le poids de la rcolte (Javillier). B. Aliments hydrocarbons. L'acide tartrique agit de deux faons dans le liquide de Raulin : d'abord il maintient l'acidit du milieu, condition dfavorable la culture des bactries de souillure, d'o croissance exclusive de VAspergillus, alors mme qu'on n'opre pas aseptiquement ; puis il sert d'aliment la plante quand tout le sucre a disparu. Avant d'tre consomm, le sucre candi est interverti par une diastase, la sucrase que secrte la moisissure. Deux tiers du saccharide assimil fournissent VAspergillus l'nergie ncessaire aux ractions profondes dont il est le sige ; le reste est employ la construction de son contenu protoplasrnique et nuclaire. On a galement tudi la valeur nutritive de divers composs ternaires. Le lactose et la mannite constituent des aliments mdiocres ; l'amidon cru ne convient pas ; l'amidon cuit est assimil aprs avoir subi une hydrolyse diastasique. L'alcool nuit la germination des spores, mais, comme l'acide citrique, il est consomm par le champignon adulte. C. Aliments azots. Dans le liquide Raulin, l'azote se trouve l'tat purement minral ; la suppression de l'ammoniaque fait tomber la rcolte

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. 1/153. Au fur et mesure que l'ammoniaque est consomm, l'acidit du milieu augmente par suite de la libration de l'acide des sels-. Mais, aprs une semaine, cette acidit disparat, soit par l'action neutralisante des produits- de dsassimilation de la moisissure (Wehmer), soit parce que l'acide dissoci est entirement consomm (Ritter). II. Nutrition des levures.

Normalement, les Champignons du type Aspergillus vivent au large contact de l'air, o ils trouvent l'oxygne ncessaire la combustion des-aliments, qu'ils n'utilisent pas directement pour la synthse de leur contenu. Maintenues l'abri de l'air, dans la profondeur des milieux, les levures brlent galement les aliments sucrs, qui! ne participent pas leur entretien et leur dveloppement. Mais cette combustion est alors incomplte et les termes de la dgradation des saccharides n'atteignent pas la simplicit chimique observe dans les cultures d'Aspergillus : CO2 et H 20. De ce fait, pour que le mme nombre de calories ncessaires aux ractions intracellulaires soit nanmoins, obtenu, l'attaque des sucres doit porter sur un plus grand nombre de molcules. Il en rsulte un mode particulier d'activit vitale, une fermentation lie la vie anarobie que nous dfinirons par la suite. Aucune diffrence essentielle n'existe donc quant au fonctionnement intime du protoplasma de ces microorganismes. Seules ls circonstances externes de leur nutrition crent une sorte d'opposition, entre la vie arobie des moisissures et la vie anarobie des levures. Et cette opposition, dont on a voulu faire un caractre distinctif des deux modes fondamentaux de la vie lmentaire, s'vanouit lorsqu'on modifie les conditions de la culture des germes. Qu'on immerge, en effet, une moisissure dans un liquide sucr, elle dterminera, une vritable fermentation. Qu'on cultive les levures au large contact de l'air, elles brleront, les sucres jusqu'aux termes ultimes : acide carbonique et eau. A. Aliments minraux. Pasteur et Mayer ont montr que l'acide phosphorique, le soufre,, le magnsium et le potassium sont indispensables la vie des- levures. En l'absence de soufre sous une forme eonvenable>

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une partie des sulfates est d'abord rduite en EPS qui, dcompos en milieu acide, fournit du soufre assimilable (Stern). La chaux, galement utile, ne peut pas remplacer la magnsie. Elle parat avoir pour effet de neutraliser les acides qui se forment dans le protoplasma de la cellule (Hayduck, Henneberg). Les sels de fer ne sont pas absolument indispensables la nutrition des levures, mais ils acclrent leur multiplication (Molish, Wehmer, Kossowicz). B. Aliments liydrocarbons. Les hexoses constituent l'aliment d'lection, surtout pendant la vie arobie. Les di et trisaccharides sont assimilables aprs transformation en hexoses ; le lactose est peu utilis, sauf par quelques levures spciales. Mais les levures assimilent galement l'alcool thylique (Kayser et Demolon), la glycrine, divers acides organiques : tartrique, pyruvique, malique, citrique, lactique, succinique et leurs sels. Le phnol, la rsorcine, le tanin, les acides galliqueet pyrogalliqe, l'hydroquinone, les aldhydes, les thers, la cellulose ne valent rien. C. Aliments azots. Peuvent servir de source d'azote:les peptones, les acides amins, principalement quand on ajoute au milieu du sucre et, mieux encore, de l'acide pyruvique (F. Ehrlich), l'asparagine, l'actamide, surtout en prsence d'azote ammoniacal, la propionamide et la butyramide en trs petite quantit, la formiamide davantage (Thomas), l'acide urique, l'ure, les sels ammoniacaux. Certaines races assimilent les nitrates de potasse, de manganse ; mais, d'une manire gnrale, les nitrates constituent de mdiocres aliments azots et les nitrites arrtent le dveloppement des levures. Les albuminodes complexes : ovalbumine, fibrine ne sont pas utiliss (Pasteur, Ad. Mayer), Cependant, les levures de bire assimilent lentement la casine du lait, dont elles poussent la dgradation jusqu'au terme ammoniaque (Boullanger).

Microbiologiegnrale; 5J dit.

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III. Nutrition

des protozoaires.

Ce sont les protines qui constituent l'aliment principal des protozoaires. Elles sont fournies aux amibes par des bactries : autour des germes ingrs, une vacuole protoplasmique se forme, dont la raction, d'abord acide, devient ensuite alcaline. Pendant la priode d'acidit, aucun processus digestif ne se produit ; la digestion vraie ne s'effectue gnralement qu'aprs la mort des bactries dans le contenu vacuolaire, et seulement pendant le stade ultrieur d'alcalinit. En effet, les enzymes extraites des amibes n'ont aucune action sur les bactries vivantes, alors qu'en milieu alcalin elles attaquent les bactries mortes et agissent comme une trjrpsine en produisant d a la tyrosine (Mouton). Les amibes des genres Wasileiaskia, Wahlhampfia, Hartmannella vivent mieux aux dpens des microbes Gram-positifs que des autres ; elles n'ingrent ni les spores bactriennes, ni les grains d'amidon (OEhler). Parmi les microbes, certains sont nuisibles aux amibes par les substances toxiques : ammoniaque ou trimthylamine qu'ils laborent. D'autres protozoaires digrent l'amidon cuit, grce une diastase, Yamylase qu'ils scrtent. Mais, si les flagells, comme Polytoma, se nourrissent de produits liquides ou dissous, les cilis (Colpodes) exigent des corps figurs assez volumineux. Ces microorganismes ingrent des bactries vivantes ou mortes ; Colpoda Steinii digre mme des spores de champignons et de levures (OEhler). De mme que les amibes, les infusoires cilis.ne contenant pas de lipase sont incapables de digrer les graisses. Les inclusions graisseuses de leur protoplasma proviendraient de la transformation des protides et des glucides assimils (Staniewicz). Colpidium colpoda (cili) ne se dveloppe qu'en prsence d'ammoniaque ou d'acides amins, de phosphates, de chlorures et de faibles quantits de potasse et de magnsie (Peters). Les glycrophosphates constituent l'lment carbon de choix poules infusoires. Mais la synthse des matires albuminodes par Glaucoma piriformis ne peut tre effectue partir du glycrophosphate d'ammoniaque (Lwoff). Les Leishmania et divers trypanosomes se multiplient activement dans les milieux artificiels additionns de sang frais (Novy,

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Mac Neal, Ch. Nicolle) ou d'extraits filtrs de moelle osseuse rouge et de rate (Legroux et Jimenez). IV. Nutrition des bactries.

Au point de vue de leur nutrition, ces microorganismes diffrent infiniment plus entre eux que les champignons. A. Aliments minraux. Le chlorure de sodium, le sulfate de magnsie et le chlorure de calcium sont ncessaires la majorit des bactries. De fortes proportions de sel marin sont mme indispensables aux microbe, lumineux pour engendrer la phosphorescence. Combin aux nuclo-protides, aux gluco-nuclo-protides, aux acides nucliques et certains lipodes (phosphatides), le phosphore constitue un des lments essentiels du contenu bactrien. Souslaforme de phosphate mono ou dipotassique et sodiques il joue mme un rle trs important dans l'activit cellulaire en maintenant entre des limites troites la raction protoplasmiqe (Henderson). Le soufre intervient galement dans la nutrition des bactries. En dehors des sulfates, il se rencontre, titre accessoire, au sein desmatires albuminodes assimiles par les microbes. Mais, si beaucoup d'entre eux peuvent s'en passer sans dommage, il n'en est plus de mme des sulfobactries. Celles-ci, dont nous tudierons plus loin les modes d'utilisation du soufre, habitent les eaux charges d'hydrogne sulfur. Elles dcomposent ce gaz et fixent le soufre. Quand H2S fait dfaut, elles oxydent leurs propres rserves soufres protoplasmiques, en produisant des sulfates qui se rpandent dans le liquide ambiant (Winogradsky). Le fer est utile divers microorganismes, notamment sous la forme d'hmoglobine. Notons cependant, avec Agulhon et Legroux, que les substances qui favorisent la culture des bactries dites limoglobinophiles, comme le cocco-bacille de Pfeiffer, sont indpendantes des albumines et de la matire colorante du sang. Contenues dans les globules rouges, d'o on peut les extraire facilement au moyen d'une technique spciale, ces substances joueraient, l'gard des microbes, le rle de vitamines ou hormones de croissance. Pour les ferro-bactries, le fer constitue un aliment essentiel;

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elles l'accumulent dans leur gaine l'tat d'oxyde, aprs une laboration intracellulaire ou extracellulaire encore mal connue. Le manganse peut tre substitu au fer (Molish). B. Aliments carbons. Les bactries trouvent gnralement dans les protines et leurs drivs : peptones et acides amins, dans les hydrates de carbone et, parfois, dans les graisses, le carbone ncessaire leur nutrition. Mais elles peuvent galement attaquer des substances organiques de composition plus simple : des acides (actique, tartrique, lactique, pyruvique), des polyalcools (glycrine, mannite), des monalcools (alcoolthylique). On connat, ce point de vue, le rle essentiel jou par la glycrine dans le dveloppement du bacille tuberculeux. Parmi les sucres, dont la dcomposition diastasique fournit aux bactries l'nergie ncessaire aux ractions synthtiques, les hexoses et les bioses, qui contiennent respectivement six et douze atomes de carbone, conviennent particulirement: Les pentoses et, d'une manire gnrale, tous les saccharides dont le nombre d'atomes de carbone ne correspond pas un multiple de 3,, ne sont pas ou rarement attaqus. Quelques bactries dcomposent le mthane, et les germes nitrifiants empruntent directement leur carbone CO2. C. Hydrogne et Oxygne. L'hydrogne est fourni aux bactries en mme temps que le carbone, l'azote et l'oxygne, par les sels organiques et inorganiques ajouts aux milieux de culture, mais non par l'eau qu'elles ne peuvent dcomposer. L'oxygne libre de l'air, ou dissous dans l'eau, prside aux ractions d'oxydation qui constituent poulies bactries arobies un des processus vitaux essentiels. Sous cette forme, au contraire, il est toxique pour les bactries anarobies. Ces microbes ne peuvent utiliser pour leur nutrition que l'oxygne engag dans des combinaisons organiques, des glucides principalement. D. Aliments azots. Certaines bactries, parasites stricts, ne vivent gure que dans les milieux additionns de matires protiques, de srum liquide

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en particulier (gonocoque, microbe de la pripneumonie), d'autres s'accommodent mieux de srum coagul (bacille tuberculeux, bacille diphtrique, bacille de Preisz-Nocard). Mais la plupart des germes pathognes se dveloppent abondamment dans les milieux renfermant des peptones ou des albumoses. Ls acides amins et l'asparagine, dissous dans l'eau glycrine, suffisent au bacille tuberculeux. La plupart des saprophytes empruntent leur azote aux sels ammoniacaux, le Micrococcus ureoe l'ure, les microbes nitrifiants aux nitrates et aux nitrites alcalins ou alcalino-terreux. Enfin les microbes des nodosits des lgumineuses fixent directement l'azote atmosphrique par un mcanisme que nous tudierons dansjunjprochain chapitre.

CHAPITRE MILIEUX DE

VI CULTURE

Ils sont liquides ou solides. Les premiers conviennent surtout l'tude des proprits bio-chimiques des microbes ; les seconds, la sparation des espces. Parmi les milieux liquides, on distingue : les milieux synthtiques, tel le liquide de Raulin, dont tous les constituants sont chimiquement dfinis ; les infusions et dcoctions vgtales (eau de levure, th de foin) et animales (bouillon), vritables milieux empiriques, prcieux pour les manipulations courantes de bactriologie, mais inutilisables pour l'tude prcise de la nutrition et du mtabolisme des microbes les humeurs organiques (sang, lait, srum, liquide d'ascite, urine, humeur aqueuse, sucs de fruits, etc.). Les milieux solides compren. nent les substances nutritives solidifies par coagulation (srum t albumine d'oeuf) ou par addition de glatine, glose, amidon, silice collodale et les milieux solides animaux (tranches de viscres) et vgtaux (pommes de terre, carottes, artichauts, etc.). On cultive les microbes arobies en exposant au large contact de l'air les surfaces ensemences. Pour la culture des microbes anarobies, il est ncessaire de chasser l'air environnant au moyen de la pompe vide ou de la trompe eau, ou de recouvrir les milieux d'huile de paraffine strile. La plupart des champignons et des bactries se dveloppent sur ces diffrents substrats, mais il est souvent difficile de trouver, chimiquement ou empiriquement, les substances qui conviennent le mieux leur culture. De nombreux protozoaires et des bacilles, comme le bacille de la lpre, n'ont pu tre encore cultivs, bien qu'ils trouvent aisment dans les organes et les hum eurs de leurs htes, toutes les conditions favorables une intense pullulation. Nous distinguerons dans les milieux nutritifs trois qualits principales : la consistance, la richesse et la raction.

MILIEUXDE CULTURE I. Consistance.

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Les microorganismes vgtent dans les liquides et sur les solides. Il faut noter que ces derniers, prpars suivant les formules habituelles, sont toujours trs riches en eau. Progressivement desschs, ils deviennent de moins en moins favorables au dveloppement des bactries et des levures. Lorsque la concentration aqueuse ne permet plus la culture de ces germes, la croissance des moisissures est, au contraire, encore possible pendantun certain temps. Une trs petite quantit d'eau suffit, en effet, assurer la vgtation des champignons. On sait qu'ils se.rencontrent d'une faon banale sur les corces sches, les feuilles mortes, etc. II. Richesse. Diverses bactries, notamment celles des eaux, poussent dans des liquides trs pauvres. Micrococcus aquatilis, Bacillus erythrosporus et quelques mucdines se dveloppent mme dans l'eau distille (Meade Bolton). Ils empruntent tous leurs aliments aux gaz ambiants (acide carbonique, ammoniaque) solubles dans l'eau. Mais la trs grande majorit des microbes exige une certaine concentration, extrmement variable du reste, des substances nutritives. Chaque espce a son optimum en de et au del duquel la rcolte ne tarde pas baisser. Cesont les pathognes qui exigent les milieux les plus riches, c'est--dire les plus comparables aux humeurs. III. RACTION. Le dveloppement des microbes, leur mtabolisme, leurs proprits toxigns et zymognes sont influencs au jdIus haut degr par la raction des milieux nutritifs. Pour chaque germe, il existe une raction optimum de culture et des limites d'acidit et d'alcalinit au del desquelles aucune vgtation ne se produit. On a observ, ds le dbut de la microbiologie, que les moisissures et les levures prfrent les milieux acides, et les bactries, les milieux faiblement alcalins ou neutres. Actuellement, grce des mthodes prcises, on est arriv dterminer, pour les diverses espces microbiennes, l'acidit ou l'alcalinit vraies les plus favorables leur pullulation, dresser des courbes de croissance en

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PHYSIOLOGIE DES MICROBES

fonction de la concentration du milieu en ions hydrogne, et tablir des zones optima de dveloppement pour chaque microorganisme envisag. La mesure de la raction des milieux (1), en vue de dterminer la concentration en ions hydrogne est base sur la thorie de la dissociation des lectrolytes, formule en 1887 par Svante Arrhnius. D'aprs cette thorie, les molcules d'lectrolytes en solution aqueuse sont en partie dissocies l'tat d'ions, c'est--dire d'atomes ou de groupes d'atomes chargs lectriquement. Ainsi une solution aqueuse d'HCl renferme des ions H+ chargs positivement et des ions Cl ~ chargs ngativement, ct de molcules HC1 non dissocies. Ce qui caractrise un acide, c'est la prsence, dans sa molcule, d'un ou plusieurs atomes d'H remplaables par un ou plusieurs atomes de mtal, tandis que ce sont les groupements OH qui dterminent la nature basique des alcalis. Une solution normale d'un acide renferme, par litre, un gramme d'H remplaable par des ions mtalliques, quelle que soit la constitution molculaire de l'acide. Une .solution normale d'HCl renferme donc autant de cet hydrogne qu'une solution normale d'acide actique ; elles ont la mme acidit totale et exigent la mme quantit d'alcali pour tre neutralises. C'est cette acidit totale qu'indiquent les mthodes habituelles de titration. Mais la dissociation de ces deux acides est bien diffrente, c'est-dire qu'en solution quimolculaire, le nombre d'atomes d'hydrogne, qui se sparent de leurs molcules respectives l'tat d'ions H, est diffrent. L'intensit de cette dissociation varie selon la concentration et, surtout, la nature de l'lectrolyte envisag.Elle estde 91p. 100, par exemple, pour une solution dcinormale d'HCl et seulement 1,3 p. 100 pour une solution dcinormale d'acide actique. Cela signifie que sur les 100 milligrammes d'H que renferme un litre de solution dcinormale d'HCl, 91 milligrammes se trouvent l'tat d'ions H ; tandis que dans la solution dcinormale d'acide actique, ce chiffre est rduit lmsr3. La force d'un acide est dtermine, non par la quantit totale d'hydrogne remplaable par un mtal, mais seulement par le degr de sa dissociation. Son acidit relle, qui dpend du nombre d'ions H, peut diffrer de son acidit totale. Ainsi l'acidit relle (1) Cesnotionssur la ractiondes milieuxsont extraites des confrences faites par M. Schcen, l'Institut des Hautes tudes de Belgique(Ann. de la Brasserieel dela Distillerie,1924).

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lui donner la valeur 1, ce qui ramne la formule de la dissociation de l'eau H X OH = k. Il s'ensuit que lorsqu'on ajoute l'eau un sel ou un acide, qui augmentent le nombre d'ions H, le nombre d'ions OH diminue. C'est l'inverse qui se produit quand on ajoute l'eau un alcali ou un sel alcalin. Le nombre de l'un des groupes d'ions dtermine donc le nombre de l'autre

D'aprs les mesures de Srensen, la constante de dissociation de l'eau est gale 10- 14' 18. Or, par dfinition, il y a dans 14, l'eau pure et neutre, autant d'ions II que d'ions OH ; elle renferme donc 10-' grammes d'ions H par litre, soit 0er,0000001. Prenons l'exemple de la soude dcinormale dont la concentration en ions OH = 10_1'os.Pour exprimer cette valeur en concentra-

chiffre indique le poids d'ions H contenu dans un litre de solution de soude normale : Pn = 13.06. Une solution neutre est une solution dans laquelle la quantit d'ions H est gale la quantit d'ions OH, c'est--dire dont le PH = 7,07, car 10-'- 07 x 10-7'" 7= 10~14,u.Dans une solution acide, le nombre d'ions II est suprieur au nombre d'ions OH ; inversement, clans une solution alcaline, ce sont les ions OH qui prdominent. L'acidit se trouve ainsi exprime par des Pu infrieurs sept et Valcalinit par des PH suprieurs sept. Le Pn exprimant un exposant ngatif, plus ce chiffre augmente, plus la valeur absolue qu'il indique diminue. A ct des substances acides ou alcalines qui sparent des ions H et OH, et des substances neutres qui ne sparent pas ces ions ou ne se dissocient pas, il existe toute une srie de corps qui fournissent tantt des ions H, tantt des ions OH et parfois les deux simultanment. Ce sont les substances amphotres, qui jouent un rle trs important en biologie. Les matires albuminodes et leurs produits de dgradation sont prcisment des ampholytes et leur dissociation s'effectue soit d'aprs la formule gnrale :

. soit d'aprs l formule :

MILIEUXDE CULTURE

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Or, la nature des ampholytes est en relation troite avec la raction du milieu. Ainsi le caractre acide de ces substances se manifeste avec une intensit d'autant plus grande que le milieu est plus pauvre en ions H, c'est--dire plus alcalin et, inversement, la dissociation alcaline prdomine lorsque le milieu est acide. La concentration en ions H, laquelle cette dissociation atteint son minimum, est le point isolectrique, qui a une valeur constante et caractristique pour chaque substance anrphotre. En ragissant contre l'acidit par leur dissociation basique c'est--dire par la dissociation d'ions OH, et contre l'alcalinit par la sparation d'ions H, les substances ampliotres s'opposent tout changement brusque de la raction du milieu. Elles interviennent comme des tampons amortisseurs (buffers des Anglais), suivant l'expression image de E. Fernbach. Deux mthodes sont employes pour mesurer la concentration en ions. H des milieux : la mthode lectromtrique et la mthode calorimtrique. La premire est base sur le principe suivant. Lorsqu'on plonge une lectrode mtallique dans une solution renfermant des ions quivalents (une lectrode d'argent dans une solution de sel d'argent, par exemple), une diffrence de potentiel s'tablit entre le liquide et l'lectrode, et cette diffrence est projDortionnelle la quantit d'ions mtalliques contenus dans le liquide. Il en est de mme lorsqu'on plonge une lectrode de platine couverte de noir de platine et sature d'hydrogne, dans un liquide renfermant des ions H. La chute de potentiel qui s'tablit au contact de l'lectrode et de la solution est fonction de la concentration en ions H corresjoondante. On la mesure par les mthodes habituelles employes en physique. Plus simple, mais aussi moins prcise, est la mthode colorimtrique ou des indicateurs colors que nous devons Srensen. Elle est fonde sur les changements de coloration que produisent les variations d'acidit ou d'alcalinit sur certaines substances nommes pour cette raison indicateurs. Chaque indicateur vire d'une couleur une autre entre des limites trs troites de concentration en ions H. Entre ces limites, tout changement de teinte correspond une valeur dfinie du PH. Dans la pratique microbiologique, 1' ajustement cles milieux de culture s'effectue en les additionnant d'une quantit d'acide ou de base suffi-

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PHYSIOLOGIE DES MICROBES

sant pour obtenir le virage correspondant au PH cherch. Sauf le rouge de mthyle et le rouge de propyle, les indicateurs colors sont des drivs de la srie des phtalines. Leurs zones utiles de Pn sont les suivantes, d'aprs Clark : Bleu de thymol Bleu de bromophnol Rouge de mthyle Rouge de propyle Pourpre de bromocrsol Bleu de bromothymol Rouge de phnol Rouge de crsol Phtaline du crsol 1,2 2,8 4,4 4,8 5,2 6,0 6,8 7,2 8,2 2,8 4,6 6,0 6,4 6,8 7,6 8,4 8,8 9,8

Les limites d'acidit et d'alcalinit de vgtation des microbes et la valeur optimum du Plr varient avec l'espce considre et les constituants du milieu. Cultives dans un bouillon priv de sucres, la plupart des bactries se dveloppent entre Plr 5,5 et Pn 8,5. Certaines sont plus exigeantes et, du point de vue de leur zone de croissance, Dernby les divise en deux groupes : 1 les bactries qui supportent de grandes variations de la concentration en ions H : B. subtilis, b. paratyphiques A et B, B. coli, b. pyocyanique, staphylocoque, bactridie charbonneuse, b. tuberculeux, B. proteus et de nombreux anarobies. 2 Celles qui ne supportent que d'troites variations : b. typhique, b. de Pfeifjer, Pneumocoque, Vibrion cholrique. Entre ces limites de croissance, la concentration ionique optimum est encore plus prcise. Cet optimum diffre selon la proprit microbienne envisage : rapidit ou abondance de la culture, vitalit, production de toxines, virulence. D'une manire gnrale, il est infrieur P 7 (raction acide), pour le B. coli, le B. proteus, le b. paratyphique A ; voisin de 7 pour le b. typhique et le b. paratyphique B, les b. dysentriques, tuberculeux, pesteux et les anarobies des plaies ; suprieur 7 (raction alca-, line) pour le gonocoque, le mningonocoque, le vibrion cholrique, la bactridie charbonneuse (7,7) et le pneumocoque (8).

CHAPITRE RLE DES CONDITIONS

VII AMBIANTES

Le- dveloppement des microbes et leur activit physiologique sont soumis un certain nombre de conditions mcaniques (agitation), physiques (pression, temprature, lumire, magntisme) et chimiques (dont l'oxygne est le facteur le plus important). I. Agitation. Nombre de bactries et la plupart des champignons ne se multiplient activement qu' la surface des milieux liquides o ils forment, par leur runion, une membrane plus ou moins paisse, d'aspect vari. L'apparition de ce voile, souvent caractristique des espces, exige que les cultures soient maintenues l'tuve dans un repos absolu, l'abri de toute vibration. Lorsque au dbut de son dveloppement, on disloque la membrane superficielle, ses fragments tombent dans le liquide nutritif, puis elle se reforme plus ou moins facilement. Ainsi, pour le bacille tuberculeux, un second voile apparat, mais il s'tend avec lenteur et n'atteint jamais l'paisseur du voile primitif. Priodiquement agit, ce mme microbe s'adapte peu peu aux conditions nouvelles de sa culture au sein du liquide (bacille homogne d'Arloing et Courmont). Dans la nature, c'est l'agitation continuelle de leur masse, autant qu' l'action strilisante de la lumire, qu'il faut attribuer la pauvret relative des eaux vives en germes, comparativement aux eaux stagnantes.II. Pression. Toutes conditions chimiques restant identiques (en vitant la dissolution, dans le milieu, des gaz comprims) l'action de la pression sur la croissance des microbes est ngligeable.

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PHYSIOLOGIE DES MICROBES III. Temprature.

Les microbes se dveloppent des tempratures varies, mais il existe, pour chaque espce, un maximum, un minimum et un optimum. Les tempratures favorables la vgtation des germes sont dites eugensiques ; les tempratures dfavorables, mais encore suffisantes pour la culture, sont dites dysgensiques. Quand la temprature s'lve au-dessus du maximum, la vitalit ne tarde pas tre compromise, quand elle descend audessous du minimum, elle persiste, au contraire, mais le microbe se trouve dans un tat de vie trs ralentie, latente, trs favorable sa conservation. Enfin, au point optimum, la reproduction et la nutrition atteignent leur plus grande intensit. Toutefois, il n'en est pas ncessairement de mme pour les autres fonctions. Chacune de ces fonctions s'exerce, en effet, avec une puissance maximum une temprature qui, suivant les espces, est plus ou moins loigne de l'optimum de dveloppement. Par exemple, 1les bactries chromognes et photognes manifestent, en gnral, leurs proprits caractristiques des tempratures infrieures celles qui fournissent les rcoltes les -plus abondantes. A. Chamjrigncns. Dans les conditions naturelles, ils se multiplient basse temprature : 10-20. Beaucoup d'entre eux cependant prfrent un peu plus de chaleur, et les espces susceptibles de vivre en p&r&sites croissent mieux la temprature du corps. Comme exemples de ces trois catgories, on peut citer des Champignons trs voisins : YAspergillus glaucus, YAspergillus niger, et YAspergittus fumigatus (pathogne), dont les ojDtima sont resjsectivement 10-12, 35-37, 38-40. Les levures tolrent des variations thermiques, trs tendues. Nous indiquerons plus tard ce qu'on entend ce sujet par levures hautes et basses. B. Protozoaires. Conservs 5 ou 7, les trypanosomes non rjathognes restent vivants pendant un mois ou deux. Leur culture est facilement obtenue 31-37, dans les milieux au sang. La temprature

A ROLEDES CONDITIONS MBIANTES

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optimum de dveloppement est de 22 pour les Leishmania (Ch. Nicolle) ; de 40 41 pour Plasmodium vivax et falciparum (Bass et Johns) ; de 30 37 pour Spirochoeta icterohemorragioe (Noguclii). C. Bactrien. La plupart des pathognes ne se dveloppent bien qu'aux environs de 37. Il en est de mme pour certains saprophytes ; les autres ne se multiplient pas, ou se multiplient mal cette temprature, leur maximum thermique oscillant entre 20 et 30 selon les espces. Quelques bactries ne croissent qu'entre des limites trs troites ; tels les bacilles de la tuberculose humaine et de la tuberculose bovine qui exigent une temprature fixe de 38-39 ; le. bacille aviaire tolre, au contraire, des carts relativement tendus. Mais si les facults reproductrices et la nutrition des bactries exigent des conditions thermiques rigoureuses, la vitalit de ces germes n'est gnralement pas atteinte par les froids les plus intenses. B. subtilis, B. anthracis etB. Chauvoei du charbon symptomatique, microbes sporuls, ne sont pas altrs par des froids de 70 jjendant cent huit heures et de 130 pendant vingt heures (Pictet et Young). Des tempratures lgrement infrieures 0, maintenues pendant plusieurs semaines, sont sans action. C'est pour cette raison que la glace j:>eut vhiculer, comme l'eau, des germes pathognes, (b. typhique, vibrion cholrique). Une mention spciale est due aux organismes dits frigoriphiles et thermophiles. On appelle frigoriphiles les microbes qui poussent 10 et, notamment, aux environs de 0. Nous verrons qu' cette dernire temprature, et mme plus bas, plusieurs photobactries dgagent encore de la lumire, indice d'une nutrition suffisante. La transition entre les frigoriphiles et les bactries communes se fait par de nombreux microbes des eaux, qui vgtent de 10 20. Il est bon de"noter, du reste, que les frigoriphiles se dveloppent parfaitement cette temprature. Les bactries thermophiles sont caractrises par la proprit de vivre et de se dvelopper des tempratures leves. La temprature optimum qui convient leur culture varie suivant les espces. Certaines sont susceptibles de se multiplier des tempratures assez basses : 20 30. Ce sont des bactries thermophiles facul-

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PHYSIOLOGIE DES MICROBES

tatives (microbes thermo-tolrants des Allemands) ; pour d'autres, la temprature minimum de culture varie de 30 50. Ce sont des bactries thermophiles strictes ou obligatoires. On les trouve en abondance dans les eaux thermales, dans les couches suprieures du sol, surtout dans les milieux temprature leve, dans les eaux courantes et stagnantes, les eaux d'gout, les fumiers, les poussires, les vgtaux, et les excrments des Vertbrs. Elles jouent un rle trs important dans la fermentation des fumiers, des fourrages ensils (ferments lactiques, B. subtilis, Granulobacter, B. mycodes), des feuilles de tabac (B. tabaci, B. subtilis). Elles appartiennent presque toutes aux genres Bacillus, Bacterium et Streptothrix. Celles des deux premiers genres sont mobiles ou immobiles, de dimensions variables, souvent en courtes chanettes. Beaucoup d'entre elles se multiplient par des spores trs rsistantes la chaleur. Sauf trois espces dcrites par Oprescu, et les anarobies stricts a, |3 et y de Veillon, toutes peuvent vivre en prsence de l'oxygne. D'une manire gnrale, les bactries tliermojDhiles strictes sont en mme temps arobies obligatoires, les bactries thermophiles facultatives sont arobies facultatives. A mesure que la temprature de culture s'lve, l'arobiose devient de plus en plus ncessaire (L. Ngre). Une des particularits les plus remarquables des bactries thermophiles isoles par L. Ngre des sables du Sahara, consiste dans leur rsistance une proportion trs leve de sel marin (6 9 p. 100) dans les milieux de culture ; une concentration leve de sel marin lve, en outre, la rsistance de ces microbes la chaleur. Il est possible d'tendre ou de restreindre les limites thermiques entre lesquelles se dveloppent les bactries. C'est ainsi qu'on a habitu progressivement la bactridie charbonneuse aux tempratures de 10 et de 42,5. Par une culture systmatique 20, on a fait perdre au vibrion de Deneke la facult de pousser dans l'tuve, puis on la lui a rendue, toujours progressivement (Dieudonn). IV. Lumire. La lumire est inutile et mme nuisible le plus souvent la croissance des microbes. Seules quelques bactries pourpres, qui contiennent un pigment capable de dcomposer l'acide carbonique de l'air avec dgagement d'O et fixation de C, sont

ROLE DES CONDITIONS MBIANTES A

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favorablement influences par la lumire. De tous les rayons du spectre, ce sont les rayons chimiques ultra-violets qui sont les plus actifs, mais les rayons infra-rouges ne sont pas indiffrents. V. lectricit. Son action est difficile sparer de celle de la chaleur, du rayonnement lumineux et des modifications chimiques des milieux qui l'accompagnent. Dans les liquides nutritifs additionns de sels, la dissociation lectrolytique cre des variations d'acidit et d'alcalinit assez tendues pour altrer la vitalit des germes. Cependant, sous la seule action lectrique des courants sinusodaux haute ou basse frquence, on peut, d'aprs d'Arsonval et Charrin,' affaiblir les fonctions chromogne et reproductrice du bacille pyocyanique. VI. Oxygne. Respiration. Depuis Lavoisier, on admettait, comme une loi fondamentale, que l'oxygne libre est indispensable la vie. Pasteur, en 1861, ruina, ou plutt largit cette thorie. tudiant la fermentation butyrique du lactate de chaux, il constata qu'elle tait cause par un microorganisme dont le dveloppement ne peut avoir lieu qu' l'abri de Pair, par un microorganisme anarobie, ainsi qu'il le nomma. Une anne aprs, il dcouvrit une autre bactrie dcomposant le tartrate de chaux, puis deux bactries pathognes, le vibrion septique et un petit bacille pyogne isol de l'eau qu'il cultiva galement dans les milieux liquides, totalement privs d'oxygne libre, c'est--dire en anarobiose complte. Cette dcouverte de Pasteur a profondment modifi la physiologie microbienne. -Elle dmontre, notion aujourd'hui familire et tendue toutes les cellules vivantes, qu' ct des tres qui utilisent l'oxygne libre, il en est d'autres qui ne peuvent assimiler que l'oxygne combin. Pour se le procurer, ils disloquent certains corps chimiques par l'intermdiaire de leurs enzymes et deviennent ainsi, le plus souvent, des agents actifs de fermentation. Sans doute, la fermentation ne correspond pas ncessairement la vie sans air et la vie sans air ne prsente pas toujours les caractres que nous attribuons aux fermentations. Mais les deux phnomnes vont si souvent de pair que l'on comprend aisment pourquoi Pasteur voulut jadis les identifier. 8 Microbiologiegnrale. 2edit.

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PHYSIOLOGIE DS MICROBES A. Champignons.

Les moisissures, avons-nous dit, se dveloppent normalement au contact de l'air ; certaines, cependant, comme les Mucor, sont suscejDtibles de vgter en l'absence d'oxygne lorsque, par exemple, on les immerge dans les liquides sucrs. Elles jouent alors le rle de ferments : en mme temps leurs caractres morphologiques se modifient et les rapprochent des levures. Cultives la surface des milieux, au contact de l'air, les levures absorbent l'oxygne libre ncessaire aux ractions profondes de leur protoplasma, et dgagent de l'acide carbonique. Elles se comportent ainsi comme tout tre arobie, et leur activit respiratoire se manifeste par cet change gazeux entre leur contenu et l'atmosphre. Si l'on met du sucre leur disposition, elles en utilisent une partie pour leur entretien et oxydent le reste l'tat de CO2 et dTPO. A l'abri de l'air, elles peuvent galement assimiler l'oxygne faiblement combin et rduire, par exemple, une solution d'hmoglobine sature d'oxygne. Lorsqu'elles sont ensemences dans un liquide sucr, elles se dveloppent dans la profondeur, l'abri de l'air. Leur respiration est alors comparable celle des cellules vgtales en tat d'asphyxie. Elle suffit ce23endant la vie des levures qui trouvent, dans les.molcules de sucre, l'oxygne ncessaire aux processus d'oxydation protoplasmique et empruntent la chaleur dgage au cours de cette raction, l'nergie indispensable leur activit. B. Bactries, Du point de vue de leurs besoins en oxygne, il convient de distinguer trois groupes de bactries : les arobies stricts, les anarobies stricts et les aro-anarobies. Les arobies stricts ne peuvent se dvelopper qu'au contact de l'air libre ou dissous. Dans le premier cas, ils forment des voiles membraneux, plus ou moins pais, la surface des liquides : bacille tuberculeux, Bacillus subtilis, Bacterium aceti. Toutefois, une oxygnation trop intense ou trop prolonge modifie certaines proprits des bactries, comme la Pasteurella du cholra des poules et labactridie charbonneuse, qui perdent ainsi, peu peu, leur virulence primitive. Les anarobies stricts ne vgtent jamais en prsence de T\xy-

HOLDES CONDITIONS AMBIANTES

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gne, qui se comporte vis--vis d'eux (vibrion septique) comme un vritable poison. Par contre, sous la forme sporule, ces mmes germes sont indiffrents l'action de l'air. Les microbes anarobies ne se multiplient que dans le vide ou dans les gaz inertes : H, Az ; mais la prsence de sucres, ou de toute autre substance capable de fournir de l'oxygne en se dcomposant, leur est indispensable. Certains tolrent des traces d'air dissous (bacille " ttanique), surtout lorsqu'on les a soumis une adaptation progressive. On peut mme les cultiver sans prcautions spciales si on leur associe un arobie strict, comme le B. subtilis, qui puise rapidement l'oxygne dissous dans le milieu et fixe l'oxygne libre de l'air. C'est probablement par l'effet de cette symbiose, que les anarobies continuent de se multiplier dans le milieu extrieur, dans les eaux en particulier. L'action des microbes anarobies sur les substances organiques s'exerce par l'intermdiaire de leurs diastases. Elle se traduit par la fermentation pour les matires hydrocarbones et par la putrfaction pour les matires albuminodes. Dans la nature, ces germes provoquent une destruction intense des matires organiques ternaires et quaternaires, dont les termes ultimes, l'acide carbonique, l'eau et l'ammoniaque, font retour l'atmosphre et au sol. Beaucoup sont pathognes et dtruisent les tissus vivants comme ils disloquent les tissus morts. Ils sont la cause des suppurations putrides et des gangrnes. Les aro-anarobies ou anarobies facultatifs constituent la masse principale des bactries communes. La plupart se cultivent mieux l'air, quelques-uns, de prfrence, l'abri de l'air, surtout dans les milieux sucrs. Au cours de leur vie 23arasitaire, les arobies, stricts ou non, vivent compltement l'abri de l'oxygne gazeux. Ils peuvent cependant trouver ce corps dissous dans les humeurs, ou engag dans des combinaisons peu stables comme l'oxyhmoglobine. Arobiose et anarobiose ne sont donc que deux modes d'un mme processus fondamental, dont l'effet est de procurer aux microbes l'oxygne ncessaire leur nutrition. L'activit de ces tres lmentaires ne peut persister que si une certaine quantit d'oxygne les pntre et participe aux ractions protoplsmiques et nuclaires. Mais, comme l'a montr Pasteur, ce corps indispensable la vie est fourni aux microbes sous deux formes : libre ou engag l'tat de combinaisons plus ou moins stables. Quel que soit le mode d'apport de l'oxygne, les oxyda-

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PHYSIOLOGIE DES MICROBES

Lions protoplasmiques exprimes jjar la respiration aboutissent aux mmes produits rsiduels: CO2 et H 20, qui font retour au milieu ambiant. Cette vie sans air, sans oxygne libre, n'est d'ailleurs pas spciale aux microbes. Pour toutes les cellules vivantes, qu'elles appartiennent aux animaux ou aux vgtaux, l'anarobiose est la rgle, suivant la formule de Pasteur, et i'arobiose l'exception. A l'tat d'ozone, surtout dans les milieux liquides, l'oxygne dtruit les bactries, tel point, que le traitement par l'ozone constitue un des meilleurs procds de strilisation des eaux pollues. Parmi les autres substances gazeuses auxquelles les microorganismes sont communment exposs, l'hydrogne, l'azote, l'oxyde de carbone, l'hydrogne phosphore et les carbures d'hydrogne sont sans action. L'acide carbonique parfois nuisible, surtout pour certaines bactries'chroraognes, est assimil par les microbes nitrificateurs. L'hydrogne sulfur est indispensable aux sulfobactries, qui en supportent des quantits considrables dans les eaux sulfureuses.

CHAPITRE

VIII (*)

FERMENTATIONS

Sous le nom de fermentation, on dsignait autrefois toute modification de la matire organique accompagne de boursouflement et de dgagement gazeux, telles les fermentations du mot de raisin et du pain. Puis on gnralisa cette notion et on en fit le synonyme d'altration spontane, avec ou sans effervescence. La digestion, la production du vinaigre, etc., furent considres comme des phnomnes fermentatifs, au mme titre que la transformation des jus sucrs en boissons alcooliques. Pasteur dmontra que toute fermentation est corrlative d'un processus vital, c'est--dire du dveloppement d'un microorganisme dans le milieu fermentescible : levure de bire, bacilles lactiques, actiques, butyriques. Bientt, gnralisant sa thorie de l'anarobiose, il mit cet aphorisme clbre : La fermentation est la vie sans air. Formule la lois trop absolue, car elle englobe tous les actes anarobies parmi les phnomnes fermentatifs, et trop troite, puisqu'elle li.rmie toutes les fermentations produites au contact de l'oxygne, notamment les oxydations zymotiques. Cependant, avant Pasteur, Moritz Traub, en 1858, etBerthelot, en 1860, avaient dj assimil la fermentation alcoolique au ddoublement diastasique de l'amidon en maltose. La dcouverte, par Buchner, de la zymase, ferment soluble extrait par pression de la levure broye et capable de produire, lui seul, de l'alcool partir du glucose, confirma l'hypothse de Berthelot, dj tendue par Claude Bernard toutes les manifestations de la vie vgtative. Mais la doctrine pastorienne restait entire, (I) Noire excellentcollgueM. Schoen,chefdu laboratoiredes fermentations l'Institut Pasteur, a bien voulu relire ce chapitre et nous aider de ses conseils. Il nous est trs agrable de lui en exprimer ici tous nos remerciements..

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PHYSIOLOGIE DES MICROBES

car si le changement chimique produit dans toute fermentation se rsout en une raction fondamentale provoque par un principe dfini, S23cial,de l'ordre des ferments solubles (Berthelot), il n'en rsulte pas moins, en l'espce, de l'activit de microorganismes, et traduit un processus cellulaire, donc vital, de dislocation de la matire organique. Lors de la vie fermentative, les microbes dcomposent incompltement un grand nombre de grosses molcules qui ne leur cdent qu'une faible quantit de calories utilisables pour les ractions protoplasmiques ; lors de la vie arobie, au contraire, ils dgradent profondment ces mmes molcules. Les ractions exothermiques leur fournissent ainsi une quantit d'nergie considrable qui remplace, dans les processus cellulaires synthtiques, l'nergie lumineuse emprunte par les plantes aux radiations solaires. Aussi jouent-ils un rle primordial dans la nature. Ce sont eux qui dcomposent les produits organiques animaux et vgtaux accumuls la surface et dans la profondeur du sol. Ils en simplifient les molcules ternaires et quaternaires et, finalement, les restituent au monde minral, sous les formes dgrades de CO2, H 20, AzH 3, Az, que les plantes lveront de nouveau l'tat de substance vivante, achevant le cycle des transformations biochimiques de la matire. C'est par l'intermdiaire de leurs diastases ou enzymes que les microbes attaquent les substances fermentescibles. Mal dfinies chimiquement, ces diastases agissent comme des catalyseurs, en quantit infime, au prix d'une destruction insignifiante comparativement leurs effets. On est parvenu en extraire un grand nombre des tres vivants qui les laborent. Leur tude spciale fera l'objet d'un prochain chapitre. Chaque microbe scrte plusieurs diastases, mais l'une d'elles domine et imprime la fermentation son caractre spcifique. Les uns, comme les ferments alcooliques, dcomposent les sucres jusqu'au stade alcool ; d'autres, comme le Bacterium aceti, oxydent l'alcool en acide actique, que diffrentes espces brlent finalement en CO2 et I-PO. Par opposition aux diastases ou ferments solubles, on donne souvent le nom de ferments figurs aux microoganismes des fermentations. Ces ferments figurs comprennent des champignons et des bactries. Parmi les champignons, on trouve VAsdorgillus niger, le Pnicillium glaucum, des Monilia, des Citro-

FERMENTATIONS

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myces, divers Mucor et surtout les levures, qui sont les vritables ferments alcooliques. Les bactries, agents des fermentations actique, lactique, butyrique, ammoniacale, formnique et de la putrfaction, jouent un rle plus considrable encore dans la transformation de la matire organique. Comme les levures, elles sont industriellement employes la fabrication de divers produits dont la prparation chimique est irralisable ou trop onreuse. On classe habituellement les fermentations d'aprs le caractre essentiel de la raction effectue, et l'on distingue des fermenta tions : par dcomposition (fermentations alcoolique et lactique), par rduction (f. butyrique, dnitrification), par oxydation (f. actique, nitrification), par hydrolyse (f. ammoniacale). En ralit,, cette division n'est applicable qu'aux diastases, car les phnomnes fermentatifs accomplis par les microorganismes sont extrmement varis et, comme nous le verrons propos de la fermentation alcoolique, les plus lmentaires en apparence ne sauraient se traduire par une seule quation chimique. Dj Pasteur a montr que la formule classique de la fermentation alcoolique a seulement la valeur d'un schma, puisqu' ct de l'alcool et de CO2, les levures donnent naissance ]3lusieurs 'corps en quantit parfaitement apprciable. Nous trouverons, dans la fermentation lactique, une srie de phnomnes plus enchevtrs encore, et la fermentation butyrique nous conduira au seuil de la dislocation polymorphe de la matire organique par les germes microbiens. I. Fermentation alcoolique.

La fermentation alcoolique, ou transformation des sucres en alcool et en acide carbonique, sous l'influence des levures, est connue depuis la plus haute, antiquit. C'est la fermentationtype. Lavoisier en a donn le premier schma. Cagniard-Latour et Schwann en ont dcouvert l'agent entrevu par Leuwenhock. Pasteur, enfin, a tabli que la dislocation des corps sucrs est corrlative de la vie des levures. Depuis, on a reconnu que ce phnomne n'est pas spcial aux levures. Un grand nombre de champignons; dont le Pnicillium glaucum et, surtout, les Mucor disloquent galement les molcules de sucre, et les transforment en alcool lorsqu'ils sont immergs dans les liquides nutritifs. UAmylomyces Rouxii tudi par Calmette et VAsper-

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PHYSIOLOGIE DES MICROBES

gillus oryzoe, dits levures d'Extrme-Orient, transforment l'amidon en alcool. Enfin, cette dernire substance peut encore apparatre, -titre de produit accessoire, dans la dcomposition de divers corps ternaires (sucres, alcools polyatomiques) par les bactries. Les seules diffrences observes rsident dans la vitesse des ractions et la nature des corps intermdiaires. Lorsqu'ils sont privs d'oxygne libre, les tissus des vgtaux suprieurs, les fruits en particulier,- produisent une certaine quantit d'alcool aux dpens de leurs sucres et se comportent comme de vritables ferments. Cette respiration intracellulaire des plantes est, en tous points, comparable la fermentation alcoolique vraie, qui apparat ainsi comme un phnomne trs gnral de la vie cellulaire, probablement li la prsence d'un complexe diastasique, la zymase dcouverte dans les levures par Buchner. A. Ferments alcooliques. Ce sont, avant tout, les levures dont on connat un grand nombre d'espces appartenant aux genres Saccharomyces, TIansenia, Toj'ulaspores, Zygosaccharmnyces, Saccharomycodes, Pichia, Willia, Schizosaccharomyces, Mycoderma, Torula, Monilia, etc.. On distingue, industriellement, parmi les levures de biTe (Scharomyces cerevisioe), deux types : les levures hautes et les levures basses. Les premires, groupes en amas ramifis, fonctionnent 10-20. Elles jjrovoquent rapidement la fermentation des milieux sucrs ; souleves par l'acide carbonique dgag, elles remontent la surface du liquide. Les secondes, formes de cellules isoles ou groupes deux deux, agissent plus lentement, temprature plus basse, G 8, et se dposent au fond de la masse. Levures basses et levures hautes se distinguent encore par la manire dont elles attaquent le raffnose. Mais cette diffrence physiologique ne correspond aucun caractre spcifique. Une mme race de levure contient la fois des cellules hautes et des cellules basses, dont les unes dominent lorsque les irconstances extrieures leur sont favorables. Depuis Pasteur, l'industrie enrploie, pour la fermentation des mots, des levures pures et mme des races slectionnes quant leur fonction fermentative et leurs proprits de communiquer une saveur spciale aux liquides fermentes.

FERMENTATIONS B. Corps fermentescibles.

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Ils appartiennent au groupe des saccharides. Parmi les moiiosacchafides, ne fermentent que des composs possdant trois ou un multiple de trois atomes de carbone (Fischer). Exception devrait tre faite pour Saccharomyces tliermantitonum, s'il fait fermenter rellement les pentoses C5Hl0O 5 (arabinose et xylose). Les sucres en C" (hexses) sont les plus intressants. Leurs reprsentants lvogyres, sauf le fructose, rsistent la fermentation. Au contraire, plusieurs dextrogyres sont attaqus (glucose et mannose). Le galactose ne fermente que par entranement lorsqu'on lui associe un sucre facilement dcomposable, tel le glucose, ou lorsque le milieu est trs riche en matires nutritives . Comme tous les sucres dont le nombre d'atomes de carbone est un multiple de trois, ne sont pas fermentescibles, Fischer mit cette hypothse que l'aptitude fermentative des corps sucrs est lie, non seulement au nombre, mais encore l'arrangement des atomes de carbone dans la molcule de saccharide, et il compara l'action de la zymasc sur les sucres celle d'une clef qui ouvre une serrure. Enfin la fermentation dpend aussi des proprits particulires du microorganisme-ferment et des circonstances extrieures. C'est ainsi que la levure de Sauternes, en agissant sur le sucre interverti, fait fermenter le lvulose d'abord, tandis que la grande majorit des levures font disrjaratre le dextrose plus vite que le lvulose, de telle sorte que vers la fin de la fermentation, le liquide ne renferme plus que du lvulose (Gayon et Dubourg). Cependant, lorsqu'on fait une srie de fermentations comparatives dans un milieu dont on diminue peu peu l'acidit pour l'amener jusqu' la neutralit, et, plus encore, en lui donnant une raction alcaline, la fermentation lective opre comme celle de la levure de Sauternes : partir d'une certaine raction, et d'un bout l'autre de la fermentation, le lvulose disparat plus vite que le glucose (A. Fernbach et N. Schiller). Contrairement aux monosacchafides, les disaccharides (saccharose, maltose, trhalose) ne fermentent pas directement. Ils doivent tre, au pralable, transforms, ddoubls en hexoses, intervertis par une action diastasique spciale, hydrolysante. Grce la sucrase qu'elle labore, la levure de bire hydrolyse et ddouble d'abord le saccharose en glucose et lvulose, puis

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PHYSIOLOGIE DES MICROBES

attaque ces sucres en produisant de l'alcool, et de l'acide carbonique. Une hydrolyse pralable, aboutissant la formation d'hexoses est galement ncessaire la fermentation- alcoolique des trisaccharides : rafflnose, mlibiose, et des polysaccharides condenss : inuline, dextrine, amidon. Cette transformation s'effectue, ici encore, .sous l'action de diastases spciales scrtes, par exemple, par les levures chinoises : Amylomyces Rouxii et Asjjergillus orizoe, qui transforment- l'amidon en maltose (amylase), puis en glucose (maltase) et, finalement, en alcool (zymase). Ainsi se trouve confirme cette loi gnrale suivant laquelle toute cellule ne peut attaquer les saccharides que si elle renferme les enzymes ncessaires leur hydrolyse. Le glycogne ne fermente pas directement. Les levures de bire comme S. cerevisioe, les levures de distillerie et la plupart des levures de vin font fermenter : dextrose, lvulose, sucre interverti, saccharose, maltose ; les levures de boulangerie : saccharose, galactose, sucre interverti, maltose, rafflnose. C'est dans le protoplasma mme des levures, et non dans le milieu que se produit la dislocation diastasique des molcules. Aprs une longue srie de ractions intermdiaires, que nous tudierons propos de la zymase, la fermentation des matires sucres, aboutit la formation d'alcool et d'acide carbonique, suivant la formule gnrale de Gay Lussac : CcHI20g = 2 CaHeO+ 2 CO2

et s'accompagne d'un dgagement de chaleur intense : 21 cal. 4 pour 180 grammes de sucre dtruit (Brown). En ralit, le processus fermentatif ne prsente pas cette simplicit chimique. Outre l'alcool et CO2, la levure, comme Pasteur l'a observ, donn naissance des produits secondaires, dont les principaux sont : la glycrine, 3,5 p. 100 de sucre, l'acide succinique, 0,6 0,8 p. 100, des alcools suprieurs, de l'aldhyde thylique, des acides volatils et des thers en petite quantit. La glycrine est surtout abondante vers la fin des fermenta-tions, quand les conditions de nutrition dviennent dfavorables la levure,ou lorsque la temprature est leve. L'acide succinique se rencontre galement la fin de l'opration. Il provient de l'attaque des substances protiques de la levure elle-mme

FERMENTATIONS

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(F. Ehrlich) ; VAmylomyces Rouxii en produit une quantit importante lorsqu'il est cultiv en prsence de l'air. Quant aux alcools suprieurs (butylique, amylique, propylique, etc.), dont le mlange constitue Vhuile de fusel, ils proviennent, par une srie d'oxydations et de rductions, des acides amins librs au cours de Pautolyse de la levure, ou ajouts au milieu. Ces acides sont d'abord oxyds l'tat d'hydrate d'acide imin qui, aprs limination de NH 3, donne un acide ctonique, l'acide pyruvique. L'ammoniaque est assimile par la levure, et l'acide pyruvique, en perdant CO2, se transforme en aldhyde, qu'une raction ultrieure dgrade l'tat d'alcool (Neubauer et Fromherz), d'aprs le tableau suivant :

L'isoleucine donne l'alcool amylique droit, actif; la tyrosine, l'alcool- paraoxyphnylthylique, et la phnylalanine, l'alcool phnylthylique, principe de l'essence de rose. Un grand nombre de levures produisent un arme qui constitue le bouquet si recherch dans la vinification. Cet arme est d la prsence de corps odorants, des thers dont la formation dpend la fois de la race de la levure et des substances nutritives azotes qui servent sa nutrition. Certaines espces donnent beaucoup d'thers avec l'azote albuminode, tandis que d'autres prfrent l'azote ammoniacal ou pejrton (Kayser), Les thers aromatiques, comme l'actate d'amyle, apparaissent surtout dans les liquides trs ars, pauvres en azote et riches en sucre, ou quand la temprature de fermentation est leve (Lindner). Les aldhydes, parmi lesquels prdomine l'aldhyde formique

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DES MICllOBES PHYSIOLOGIE

prennent naissance en petite quantit au cours de la fermentation dans les milieux trs ars. Ils paraissent provenir de l'oxydation des alcools dj forms (Kayser et Demolon, Trillat et Sauton). Quant aux acides volatils, dont la proportion atteint OSr.I par litre, ils sont reprsents principalement par l'acide actique auquel s'ajoutent parfois des traces d'acides formique, butyrique, valrianique, etc. Ils correspondent un stade intermdiaire de la dislocation des sucres et de certains acides amins (acide formique, acide valrianique pour la leueine), ou rsultent de l'hydrolyse de diverses amides. C. Causes qui influent sur la fermentation. Les levures d'une mme espce diffrent les unes ds autres par l'intensit de leur pouvoir ferment et leur activit. Le pouvoir P ferment s'exprime par le rapport , entre le poids du sucre consomm et le poids de la levure produite. L'activit correspond la quantit de sucre dtruit par l'unit de poids de levure, pendant l'unit de temps. Par slection,on russit obtenir des races trs actives, dont les proprits se transmettent hrditairement. En dehors de leurs variations, apparemment spontanes, les levures se montrent d'une grande sensibilit aux modifications du milieu. Certaines substances, comme les nitrates, qui cependant entravent la multiplication, les sels de manganse, le chlorure d'tain, les fluorures, le sublim corrosif, l'acide chromique, l'acide oxalique, l'acide formique, lorsqu'elles sont ajoutes des doses faibles : 8 milligrammes par litre pour le sublim, 40 milligrammes pour le fluorure d'ammonium, 5 milligrammes pour l'acide formique, exaltent la fonction fermentaire. D'aprs Effront, la concentration efficace des fluorures diffre pour l'activit vgtative et pour la fonction ferment, mais on peut accoutumer les levures supporter des doses croissantes de ces corps, d'acide sulfureux et de sulfites, jusqu' ce que la concentration optimum pour la vgtation et la fermentation concident. Il est galement possible d'habituer des levures normalement sans action sur le galactose, faire fermenter ce sucre (Dinert, Dubourg), et de transformer des levures basses en levures hautes (Hansen). Cette variabilit des caractres fonctionnels des levures correspond, par ailleurs, leur extrme plasticit morphologique. La temprature optimum de fermentation diffre selon les

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races de levures, 30 35 pour les unes, 25 30 pour les autres. Au del de 40-42, sauf de rares exceptions (Musso), toute fermentation cesse. Quelles que soient la concentration des sucres dans les mots et l'activit de la levure, la fermentation diminue lorsque la proportion d'alcool atteint un certain taux, variable selon les espces et mme les races. La dcomposition biochimique des saccharides cesse galement sous l'influence des antiseptiques : l'acide eyanhydrique, par exemple, la dose de O&'^OISpour 5 grammes de levures, l'acide borique 1 p. 100, les acides minraux closes plus faibles, l'acide phnique et le thymol 1 p. 2 500, le sublim lp. 25 000. Une solution sature de chloroforme ralentit simplement la fermentation. En gnral, les acides organiques sont beaucoup mieux supports que les acides minraux : l'acide actique 1 p. 100, l'acide lactique 2 p. 100 sont sans effet. Bien que \a, levure paraisse mener une existence strictement anarobie au sein des liquides sucrs, une petite quantit d'oxygne libre lui est indispensable. Pasteur a observ, en effet, que des fermentations languissantes redeviennent actives la suite d'une aration presque imperceptible, et il rsulte des expriences de D. Cochin, que la fermentation s'arrte compltement en l'absence totale d'oxygne. II. Fermentation panaire.

La farine de bl contient des substances organiques ternaires et quaternaires, de l'eau et une petite quantit de matires minrales. Dlaye avec de l'eau, elle forme une pte qui, largement are pendant l'opration du ptrissage, ne tarde pas fermenter sous l'action des germes microbiens. Les gaz qui apparaissent au cours de cette fermentation restent inclus dans la masse dont le volume augmente. Pour activer la leve du pain,' le boulanger incorpore intimement la pte, de la levure de brasserie ou un peu de levain, qui n'est autre chose que de'la pte en voie de fermentation. Les produits ultimes de cette fermentation sont l'acide carbonique et l'alcool forms aux dpens des sucres, comme dans la fermentation des mots. L'amidon n'est pas attaqu, mais le gluten est parfois peptonis par des microbes de l'eau et de la farine. Parmi ces microbes, on trouve des ferments lactiques

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qui acidifient lgrement la pte et favorisent le dveloppement de la levure ajoute. III. Fermentation du saccharose.

Les jus sucrs, obtenus par compression des betteraves pulpes, ou par diffusion, sont frquemment envahis par un grand nombre de germes qui transforment le saccharose en acides organiques et en alcool et souvent en une matire glaireuse caractristique, Ce sont des espces sporules du genre Granulobacter, des Cocci, des Saccharomyces (S. Zojifi) et surtout le Leuconostoc mesenterodes, qui provoque la gomme des sucreries. Leuconostoc mesenterodes se prsente sous l'aspect de grains sphriques en diplo ou streptocoques, entours d'une gaine commune, paisse et glatineuse. Il se dveloppe, de prfrence, en milieu neutre, des tempratures comprises entre 30 et 45, avec un optimum vers 36. Par la sucrase qu'il scrte, il intervertit rapidement le saccharose et consomme le sucre ainsi form. Sa facult de prolifration et son activit sont prodigieuses, puisque, en l'espace de douze heures, il peut transformer compltement 49 hectolitres de mlasses 10 p. 100 de sucre. On conoit facilement quelles pertes il peut causer l'industrie sucrire, et combien il importe de le combattre. Les deux tiers du glucose assimil par le microbe servent l'dification de la gaine dont la composition se rapproche de celle de la cellulose. De plus, en donnant naissance du sucre interverti, le Leuconostoc empche la cristallisation ultrieure du saccharose. Le lactose et lemaltose sont galement attaqus avec production d'acide lactique, mais ces sucres ne participent pas la formation de la gaine. IV. Fermentation lactique.

Abandonn au contact de l'air, le lait devient acide et se coagule par prcipitation en masse de la casine qu'il contient. Ce phnomne rsulte du ddoublement du lactose en acide lactique par .les microorganismes qui pullulent rapidement dans le lait recueilli et conserv sans prcaution d'asepsie. A. Ferments lactiques. Nombreux sont les microbes capables de produire la fermentation lactique. Mais on rserve le nom de ferments lactiques aux

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' '

germes qui transforment en acide lactique, principalement, les sucres incorpors aux milieux de culture : bacille de Pasteur, Bacterium lactis, B. lactis acicli, B. acidi lactici de Grotenfeld, Micrococcus lactis I de Hueppe, Streptococcus acidi lactici de Grotenfeld. Tous ces microbes produisent de l'acide lactique aux dpens du lactose, dans une proportion qui peut atteindre 95 p. 100. Ils sont immobiles, arobies ou anarobies facultatifs, asporognes, trs sensibles aux agents physiques, la chaleur en particulier. Certains d'entre eux communiquent au lait une grande viscosit. Puis viennent des germes des eaux, de l'air et de la terre et des bactries pathognes dont la fonction ferment, envisage du point de vue de la production d'acide lactique, est secondaire : et paratyphique, Bacterium coli, vibrion bacilles typhique cocco-bacille du cholra des poules, streptocoque de cholrique, la mammite des vaches. Tous les sucres capables de fermenter directement sous l'action des levures peuvent tre transforms en acide lactique par les ferments: Les disaccharides, saccharose, lactose, doivent subir une hydrolyse diastasique pralable. D'autres composs ternaires se prtent galement la fermentation lactique : des pentoses (arabinose, xylose), des polyalcools (mannite, dulcite), des polysaccharides (inuline), des glucosides de synthse et mme des matires quaternaires azotes : peptones, albumine, casine (B. coli, bacille de Friedlander, cocco-bacille du cholra des poules). B. Produits de la fermentation. "Thoriquement, la dislocation de la molcule de glucose plies ferments lactiques s'effectue suivant la formule gnrale : = C6H120G 2C3H6O Mais, en fait, le processus est infiniment plus complexe. L'acide lactique n'est pas l'unique produit de la fermentation. Mme avec des ferments trs actifs, cultivs dans les meilleures conditions, le taux de cet acide ne dfiasse pas 85 p. 100, excef>tionnellement 95 p. 100, du poids du sucre dcompos. Un certain nombre de produits secondaires se forment au cours de la raction : acide butyrique, acide actique, alcool, acide carbonique, quelquefois de l'hydrogne, en proportions variables selon la nature du germe.

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L'acide lactique de fermentation se prsente sous trois formes : droit et gauche, suivant la manire dont il agit sur la lumire polarise, et raemique dont le pouvoir rotatoire est nul. C'est ce dernier que l'on obtient dans la plupart des fermentations lactiques spcifiques. Plusieurs microbes produisent l'un ou l'autre des acides actifs, d'autres un mlange d'acide raemique et d'un acide actif. Il n'existe pas, comme pour la fermentation alcoolique, de relation troite entre la structure strochimique de la molcule attaque et la nature des produits de la fermentation. Un mme ferment agissant sur un mme sucre peut, selon les conditions de sa culture, donner naissance des produits diffrents ou, rciproquement, des produits identiques aux dpens de sucres diffrents. D'aprs Pr, la varit des acides produits partir des sucres par le bacille typhique et les bacilles coliformes tient la fois la proportion et la nature de ces substances fermentescibles, autant qu' la nature et aux proportions de l'aliment azot contenu dans le milieu de culture. Les ferments lactiques jouent un rle important dans un grand nombre d'industries : laiterie, distillerie, tannerie et dans la prparation de divers produits alimentaires (choucroute). Ce serait galement, d'aprs Buchner, par l'intermdiaire d'une diastase, Vacidolactadase, qu'ils transforment le sucre en acide lactique. C. Conditions de la fermentation. Les ferments lactiques arobies n'agissent qu'en prsence d'oxygne libre ; d'autres sont anarobies, d'autres enfin aroanarobies. Une temprature de 30 35 convient particulirement la fermentation. Quelles que soient les prcautions prises, la formation d'acide lactique dans les milieux artificiels s'arrte lorsque le taux de ce corps atteint environ 8 p. 100. Dans le lait, elle se poursuit encore quelque temps, grce la fixation d'une partie de l'acide par la casine et les phosphates. On obtiendra une bonne fermentation lactique dans le milieu suivant, compos de 100 grammes de sucre dissous dans un litre d'eau, 10 grammes de vieux fromage et du carbonate de chaux en excs pour neutraliser l'acide au fur et mesure de son apparition. La culture doit tre maintenue 30-35 dans un vase ouvert qu'on remue de temps en temps. Aprs huit dix jours, la transformation du sucre est accomplie.

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Les ferments lactiques se dveloppent mieux dans les milieux neutres. Ceux du lait produisent, en gnral, 0,4 0,7 p. 100 d'acidit exprime en acide lactique ; dans le yoghourt, cette acidit peut atteindre 2 5 p. 100. La prsence de peptones ou de casine, parfois des deux, est ncessaire la culture des ferments lactiques. Aucune vgtation n'apparat dans les-milieux synthtiques ne renfermant, comme source d'azote, que'des sels ammoniacaux ou des acides amins. V. Fermentation butylneglycolique.

La fermentation butylneglycolique est caractrise par la formation du 2-3 butylneglycol, de Pactylmthylcarbinol et du diactyle. Un ou deux de ces trois produits peuvent manquer. Le plus frquent est l'actylmthycarbinol, le plus rare, le diactyle.

Cette fermentation est produite par un grand nombre de microbes qu'on trouve partout : dans les sols, dans les eaux de rivire ou d'gout, dans les fumiers, etc.. On peut citer les bacilles du groupe du Subtilis, ceux du groupe du B. lactis aerogenes, le B. prodigiosus, le B. proteus, dans certains cas les ferments actiques et, parmi les microbes pathognes, ceux du charbon, de la diphtrie, du cholra et les staphylocoques (M. Lemoigne). La fermentation butylneglycolique s'effectue aux dpens de tous les glucides que ces bactries peuvent attaquer. Elle peut galement tre due la transformation de produits ternaires plus simples, tels que la glycrine, l'acide lactique, l'acide pyruvique et l'aldhyde actique. Son mcanisme est trs obscur. Le schma le plus correct actuellement propos est le suivant :

2e ditr MicrobiologieGsftALE

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La signification physiologique de cette fermentation est tout fait inconnue. N'est-el.le qu'un processus particulier de la dislocation des composs ternaires ou une phase de la synthse de composs plus complexes? On ne peut encore rpondre cette question. Pratiquement, la fermentation butylneglycolique n'a jusqu' ' jDrsent donn lieu aucune application industrielle. Cependant, elle joue un rle trs important dans la dgradation des sucres. On doit la classer ct des fermentations lactique et alcoolique, qui l'accompagnent souvent. VI. Fermentation butyrique et butylique.

Cette fermentation, caractrise par la formation en quantit importante d'acide butyrique ou. d'alcool butylique normal, est trs communment observe. Tantt elle est produite par des microbes arobies, comme le bacille butyrique de Hueppe, tantt. et le plus souvent, elle s'accomplit l'abri de l'air : Vibrion de Pasteur, Closlridium, de Prazmowski ; Amylobacler de van Tieghem, bacille amylozyme de Perdrix, B. orthobulylicuft de Grimbert, etc., anarobies mobiles et sporuls. Trs rpandus dans le lait, les fromages, le sol, les fumiers, les macrations aqueuses de graines riches en matires protiques, etc., ces microbes se dveloppent dans les milieux neutres ou alcalins. Leur temprature optimum d'action est de 35. Frquemment, la fermentation butyrique succde la fermentation lactique, par dcomposition des lactates forms au cours du phnomne zymotique initial. Il n'est donc pas tonnant que dans son travail fondamental, Pasteur ait dcrit, pour la premire fois, comme fermentation butyrique, la transformation microbienne du lactate de chaux. Les substances attaques sont trs diverses : certaines celluloses ; des polysaecharides, amidon, dextrine, inuline ; des sucres, glucose, lactose, saccharose ; des sels organiques,'lactate de chaux; des albuminodes et jusqu'aux matires grasses contenues dans le lait. La dcomposition du lactate de chaux s'effectue selon la formule :

Di et polysaecharides sont galement hydrolyses avant subir la fermentation.

de

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De mme, les produits de la fermentation sont extrmement varis. Ils dpendent de la matire fermentescible, du ferment et de l'ge de la fermentation. Ce sont, en dehors de l'acide butyrique qui domine, de l'alcool butyrique normal, de petites quantits de CO2, H, acide' actique, acide formique, etc. Dans la fermentation butylique, il y a production de quantits trs apprciables d'actone (A. Fernbach). Il est absolument impossible, tant les phnomnes sont complexes, de donner une ide gnrale de la fermentation, ou plutt des fermentations butyriques, qui se relient d'une j>art aux altrations bactriennes de la cellulose et, d'autre part, la rduction desels organiques relativement simples, commele lactate de chaux, en passant par les dislocations varies des sucres. On ralise facilement cette fermentation en ensemenant, avec de la terre ou du vieux fromage, un milieu compos de 100 grammes d'amidon ou de dextrine, 1 gramme de sel ammoniac et 50 grammes de carbonate de chaux dans deux litres d'eau. VII. Fermentation des corps pectiques.

Les faisceaux fibreux du chanvre et du lin contiennent une grande quantit de matires pectiques, qui donnent, par hydrolyse, des pentoses et des hexoses. Pendant l'opration du rouissage, divers microbes de l'eau, comme le Bacterium amylobacter (van- Tieghem), le Bacillus subtilis (Marinier), le Granulobacier pectinovorum (Beijerinck et V. Delden), le Plectridium pectinovorum (Stormer) attaquent les pectines des fibres, grce leur diastase la pectosinase, et les transforment en sucres, qui sont ensuite dtruits. Les tiges de chanvre et le lin ainsi dissocis forment la filasse souple et lastique. Selon les microbes qui interviennent, les produits de cette fermentation sont les acides ' lactique, actique et surtout butyrique. Lorsque les eaux de rouissage sont riches en sels calcaires, une partie de la pectine coagule par la pectase reste sur la fibre vgtale o elle forme un vernis brillant. Limite jusqu'en ces dernires annes quelques rgions, dont les eaux sont particulirement favorables, l'industrie du rouissage a t considrablement amliore, comme l'industrie de la brasserie, par l'introduction des cultures microbiennes pures. Le Plectridium pectinovorum et le Granulobacter pectinovorum sont, cet effet, largement employs.

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PHYSIOLOGIE DES MICROBES Fermentation

VIII.

de la

cellulose.

Dans es fumiers et l'eau stagnante des marais, riches en dbris vgtaux de toutes sortes, des fermentations se produisent continuellement. Un abondant dgagement gazeux les accompagne, qui se traduit par l'mission- de bulles au sein des eaux. Non seulement les sucres rducteurs, les tanins et les gommes, mais encore la cellulose des fibres vgtales sont ainsi dcomposs, et leurs constituants font retour au milieu extrieur sous la forme simplifie de carbures d'hydrogne, de CO2, d'EPO. Cette destruction est l'oeuvre de microbes arobies et de microbes anarobies, de bactries principalement, qui pullulent dans l sol, dans les djections animales et les limons. Suivant la nature trs varie des celluloses et les microorgansmesqiii interviennent, la marche et les produits de la fermentation diffrent. La fermentation anarobie dcrite par HoppcSeyler s'effectue en deux stades, dont le premier est une hydrolyse :

Dans certaines circonstances, surtout lors de fermentation anarobie, il se forme, avec de l'hydrogne et de l'acide carbonique, des acides actique et butyrique et des produits volatils : alcool, acide valrianique, etc... La fermentation arobie de la cellulose est produite par des champignons : Mucor stolonifer, Dematium pullulons, Botrytis vulgaris, Cladosporium -herbarum dans les milieux acides, et par des bactries dans les milieux neutres ou alcalins. Omliansky a cultiv deux espces de bactries anarobies qui attaquent la cellulose du papier Berzlius en dgageant l'une de l'hydrogne, l'autre du mthane. Toutes deux agissent en l'absence de nitrates. Pans la nature, la fermentation formnique semble se greffer

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, sur les fermentations actique et butyrique dont les produits sont assimils par les ferments de la cellulose. IX. Fermentation actique.

Souvent, lorsqu'on les expose l'air, les boissons alcooliques, le vin notamment, se recouvrent d'un voile mince, gras, velout, et dgagent une odeur caractristique de vinaigre, pendant que le liquide alcoolique sous-jacent se transforme en s'acidifiant de plus en plus. A. Ferments actiques. Kitzing, le premier, a observ que le voile, mre du vinaigre, est constitu par un amas de microcoques. Mais c'est Pasteur que nous devons la description prcise de ces germes et l'tude du phnomne de l'actification qu'ils provoquent. Les bactries actiques de Pasteur sont des organismes arobies de 0,3 ij. 1 \j. de large. Ordinairement disposs en chanettes de diplobactries, elles se reproduisent par division transversale. Trs polymorphes, elles prennent les formes les plus varies et les plus monstrueuses lorsque leurs conditions d'existence viennent changer : formes d'involution renfles, filamenteuses, atteignant jusqu' 200 p. de long. D'autres espces microbiennes jouissent galement de proprits actifiantes trs marques, en ce sens que l'acide actique reprsente le produit principal de leur action sur l'alcool : Bacterium Pasfeurianum et B. Kutzingianum de Hansen, B. oeylinum et B. rances. Elles se distinguent par l'aspect de leur voile, leur pouvoir ferment, leur mode de nutrition et leur optimum thermique d'action, qui varie de 20 30. Le chauffage en milieu humide les tue rapidement, mais, dessches, elles rsistent l'bullition. Ces microbes, trs rpandus dans le milieu extrieur, sont souvent transports dans les liquides actifiables par un insecte, la mouche du vinaigre : Drosojjhila altaris. On les cultive facilement dans les milieux additionns d'un peu d'acide actique ; mais les acides propionique et butyrique, lactique, succinique, malique, tartrique leur sont nuisibles, mme la faible dose de 0,4 1 p. 100.

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PHYSIOLOGIE DES MICROBES B. Mcanisme de la fermentation.

La fermentation actique consiste essentiellement en une oxydation de l'alcool thylique. Tous les alcools et les composs hydrocarbons renferment, dans leur molcule, un ou plusieurs groupements susceptibles d'une oxydation plus ou moins complte. Cependant, les divers microbes oxydants se comportent diffremment vis--vis des alcools homologues de l'alcool thylique : B. aceti, B. Pasteurianum et B. Kutzingianum oxydent plus ou moins facilement l'alcool propylique, mais seules les deux dernires espces attaquent l'alcool butylique normal et l'alcool isobutylique. L'alcool amylique n'est attaqu que par B^ Kutzingianum. Le mcanisme gnral des oxydations microbiennes est mieux connu depuis les travaux de G. Bertrand sur la bactrie du sorbose. Cette bactrie oxyde la sorbite, alcool polyatomique, et la transforme en un sucre rducteur, le sorbose. Parmi les alcools polyatomiques et les sucres qui renferment tous, dans leur molcule, une ou plusieurs fonctions alcool primaire ou secondaire, formant, selon la position des lments II et OIT, des composs stroisomres, la bactrie du sorbose attaque uniquement les

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des corps ctoniques. Dans les mmes conditions, la glycrine est d'abord transforme en dioxyactone. |f Tous les sucres possdant une fonction aldhyde ou ctone sont galement susceptibles d'tre oxyds par voie biochimique. La bactrie du sorbose transforme en acide correspondant, les sucres .aldhydiques :

Sous l'action de B. aceii, B. oxydons, B. xxjlinum, B. Pasteurianum, le glucose passe ainsi l'tat d'acide gluconique. Les ferments actiques attaquent non seulement l'alcool thylique, 'mais encore ses homologues, l'alcool propylique, l'alcool butylique normal, l'alcool isobutylique, en donnant naissance l'acide correspondant. Ils oxydent de mme l'rythrite, la sorbite, la mannite, en produisant principalement des sucres, rythrose, sorbose, mannose, transforms ultrieurement en acides : le glucose en acide gluconique, le galactose en acide galactonique. Les autres saccharides ne sont pas ou peu attaqus. C. Conditions de la fermentation. Une forte aration est ncessaire pour l'oxydation de l'alcool en acide actique par les ferments. Si l'apport d'oxygne est insuffisant, l'alcool, au lieu de s'acidifier, se transforme en aldhyde. La teneur en alcool doit atteindre 10 p. 100 pour viter que l'aldhyde intermdiaire (thanal) apparaisse seul dans le liquide. Si l'alcool fait dfaut et si l'oxydation est trop intense, l'acide est finalement dcompos en CO2 et H20.

L'actification se produit de prfrence entre 20 et 30 ; elle cesse lorsque la quantit d'acide form atteint 10 12 p. 100. A ct du B. aceti, on observe parfois, dans le voile qui recouvre le liquide fermentescible, un microorganisme assez volumineux, analogue la levure de bire, c'est le Mycoderma vini, qui brle la fois l'acide actique et l'alcool en CO2et Ii 20. Il convient donc d'viter toute contamination par ce germe. On -y parvient en additionnant les milieux de 2 p. 100 de vinaigre avant l'ensemencement du B. aceti. C'est ainsi qu'on procde dans la fabrication

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industrielle du vinaigre, dont les procds sont au nombre de trois : 1 Procd de Pasteur. Il consiste dposer en couche mince de 20 25 centimtres, un mlange de deux parties de vin et d'une partie de vinaigre, et ensemencer la surface avec un fragment de voile provenant d'un milieu en fermentation. On are largement et, de temps en temps, en vitant de dchirer le voile, on ajoute du vin dans la partie infrieure, jusqu' ce que la fermentation se ralentisse. On la laisse ensuite s'achever. 2 Procd d'Orlans. L'actification du vin se fait en couche profonde, dans des tonneaux ars par des bondes ; aussi est-elle plus lente et plus frquemment interrompue par les maladies du vinaigre causes surtout par des anguillules. Mais la simplicit du procd est telle, que, malgr ses inconvnients, il ne cesse d'tre employ. Il permet d'obtenir un rendement, d'ailleurs assez faible en vinaigre trs apprci pour son bouquet. 3 Procd allemand ou de Schtzenbach. On fait couler lentement les liquides alcooliques (flegmes de distillerie additionnes d'un peu de bire tourne) sur des copeaux de htre, la surface desquels s'est dvelopp le B. aceti. Ces copeaux sont disposs dans des tonneaux constamment traverss par un courant d'air. La mthode est trs rapide, mais dispendieuse, cause de l'norme perte d'alcool, jusqu' 25 p. 100, qu'elle entrane. L'oxydation de l'alcool est favorise par la prsence de doses 1 infimes : de sulfate de manganse, > par l'uranium et s i 40 000 certaines substances collodales. L'addition d'oxyde de fer ou de noir animal au ferment augmente son rendement de 30 40 p. 100 (Sohngen). X. Fermentation gluconique et oxygluconique.

Due un microcoque : M, oblongus (Boutroux), elle peut tre galement provoque, comme nous l'avons vu, par B. aceti, B. xylinum, B. oxydans, B. Pasteurianum. Elle est caractrise par l'oxydation du glucose, XI. Fermentation ammoniacale.

Abandonne l'air, l'urine se trouble et devient alcaline par transformation de l'ure en carbonate d'ammoniaque. En mme

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temps, il se forme un dpt de phosphate et de matires organiques. Pasteur a dmontr, en 1860, que la fermentation ammoniacale est ordinairement due l'action d'un microcoque en chapelet que van Tieghem tudia ensuite sous le nom de Micrococcus urese. On a reconnu depuis qu'un-grand nombre de germes jouissent de la mme proprit : Urobacilles sporuls, Urococci, Vrosarcines et jusqu' des moisissures. Ces microorganismes se dveloppent facilement dans l'urine et dans les milieux additionns d'ure ou d'acides amins. Ils sont arobies, bien que de petites quantits d'oxygne leur suffisent gnralement, et se montrent trs sensibles la lumire. Leur temprature optimum d'action oscille entre 30 et 33. Une raction acide des milieux est prjudiciable leur culture. Par contre, ils supportent une alcalinit ammoniacale trs, forte, correspondant 12 p. 100 de carbonate d'ammoniaque. Les ferments ammoniacaux peuvent trouver dans les humtes les substances hydrocarbones ncessaires leur nutrition. Certains d'entre eux dcomposent l'acide hippurique en acide benzoque et glycocolle, puis le glycocolle en ammoniaque. D'autres, l'acide urique en CO2 et NH 3, avec production intermdiaire d'ure, d'allantone et d'acide oxalique. Tous hydrolysent l'ure, grce une diastase, Vurase, suivant la formule gnrale :

Mais le carbonate d'ammoniaque ainsi form, trs instable, s'altre presque immdiatement et se transforme en sesquicarbonate et en bicarbonate, avec dgagement de NH 8. Le rle des ferments de l'ure dans la dgradation de la matire organique est d'une extrme importance. En simplifiant, jusqu'au stade ammoniacal, les matires azotes d'origine animale, ils crent une abondante source d'azote utilisable par les vgtaux. Les sels ammoniacaux, attaqus leur tour par les microbes nitrificateurs, sont transforms en nitrates directement assimils par les plantes, pour l'dification de leurs tissus.

CHAPITRE NITRIFICATION I. ET

IX

DNITRIFICATION

NlTItlFICATION.

Il existe, en divers points du globe, d'immenses gisements de nitrates qui constituent une prcieuse source d'engrais minral pour l'agriculture : efflorescences de nitrate de potasse des Indes, de l'Egypte, etc., bancs de nitrate de soude du Chili et du Prou ; nitrate de chaux des terres nitres de l'Amrique du Sud. A une plus petite chelle, on peut observer la formation des nitrates alcalins sur les murs humides et dans les caves, o ils s'accumulent l'tat de salptre. Enfin le sol est le sige d'une incessante et invisible formation de sels ammoniacaux, dont le rle est capital, car elle prpare aux vgtaux suprieurs leurs aliments azots essentiels. D'abord attribue des phnomnes catalytiques, ou l'action de l'ozone sur l'ammoniaque,- la nitrification est provoque par des mieroorganismes spcifiques, comme Sehloesing et Muntz, Warrington l'avaient, les premiers, suppos. Trs active dans la terre frache, elle ne se produit plus, en effet, dans la terre chauffe 70 ou additionne d'antiseptiques, et elle est favorise, la temprature de 37, par des matires organiques : glucides, glycrine, alcool, blanc d'ceuf. Un excs de base alcaline l'entrave. Mais si leur prsence tait logiquement dmontre par les prcdents auteurs, la nature des germes nitrificateurs restait ignore. Elle devait tre bientt connue, grce aux belles recherches de Winogradsky. Dans un milieu purement minral compos de : Sulfate d'ammoniaque Biphosphate de potasse Carbonate de magnsie Eau !" : 1 1 . 5 1 gramme. gramme. 10 gr." 000 c.c.

NITEIFICATION DNITRIFICATION ET

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ensemenc d'un peu de terre, le savant russe observa l'apparition successive de nitr-ites et de nitrates aux dpens du sel ammoniacal. En mme temps, une abondante flore microbienne se dveloppait dans le liquide et formait un voile sa surface. Winogradsky reconnut ds lors que cette double dcomposition du sulfate d'ammoniaque tait l'oeuvre de deux espces microbiennes distinctes : un ferment nitreux qui amne NH 3 l'tat de nitrite et un ferment nitrique qui transforme le nitrite en nitrate. Grce aux travaux ultrieurs du mme auteur, d'Omliansky, de Boullanger, de Massol, de Beijerinck, la purification de ces germes nitrificateurs et leur culture peuvent tre aujourd'hui aisment ralises sur des milieux slectifs base de silice glatineuse ou de glose, auxquels on incorpore diverses substances minrales. Plusieurs espces de ferments nitreux ont t ainsi isoles dans ]es diverses, parties du monde. Ce sont des bactries qui appartiennent deux genres : les Nitrosococci, petits lments arrondis, immobiles, de 3 \i. de diamtre (N. de Quito et N. du Brsil) et les Nitrosomonas, btonnets courts, cilis et mobiles, dont les principales espces sont : r. Europem des terres d'Europe, Afrique et Japon, caractris par la prsence d'un cil court, et N. Javanica pourvu d'un cil long, qui affectent souvent, dans les cultures, la forme zooglique. Tous sont arobies et trs sensibles la chaleur ; un chauffage 40-42 les tue en cinq minutes. Leur aspect, surtout celui des ferments europens varie avec la composition du milieu et l'ge de la culture. Us poussent facilement 37, temprature optimum, dans les solutions minrales additionnes d'une base alcalino-terreuse (carbonate de chaux). L'ammoniaque et les nitrites en excs suspendent leur activit. Seul l'azote ammoniacal subit la nitrification ; l'azote des protides, des amins, des amides et de l'ure n'est pas directe ment transform par les ferments; les peptones, des doses suprieures 0,025 p. 100, retardent ou empchent le phnomne, de mme le glucose. L'oxydation de l'ammoniaque s'accompagne d'un.' dgagement de chaleur que les ferments utilisent pour dcomposer l'acide carbonique et les carbonates, dont ils assimilent le carbone. On ne connat qu'un ferment nitrique, la Nitrobactrie isole, en 1891, d'une terre de Quito, par Winogradsky. C'est un btonnet immobile, 'arobie, qui se dveloppe abondamment 37, mais ne rsiste pas un chauffage 55 prolong pendant cinq minutes. La nitrobactrie n'agit que sur les nitrites, dont elle oxyde

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jusqu' 20 grammes par litre, quand on ajoute le sel progressivement (Boullanger et Massol). Elle est moins sensible aux matires organiques que les ferments nitreux, beaucoup plus aux sels de l'ammoniaque. Toutefois, ces sels ne sont nuisibles qu'en prsence de substances capables de librer NH 3 en quantits apprciables. L'ammoniaque n'agit d'ailleurs qu'en entravant la prolifration des microbes ; elle est sans effet sur les germes adultes. Comme les ferments nitreux, la nitrobactrie assimile le carbone de CO2 et des carbonates, grce la chaleur produite par l'oxydation de l'acide nitreux. Ferments nitreux et ferments nitriques sont trs abondamment rpandus dans la terre qu'ils enrichissent incessamment en azote. Une bonne aration du sol convient leur dveloppement et leur dissmination. Si l'apport d'oxygne libre est insuffisant, la nitrification est suspendue et se trouve remplace par le processus microbien antagoniste de dnitrification. L'humidit doit tre modre : 18 p. 100 environ, d'aprs Coleman ; excessive, elle favorise la dnitrification ; insuffisante, la multiplication des bactries s'en trouve gne. La lumire est galement nuisible. Exprimentalement, l'optimum thermique d'action des germes nitrifiants est de 37. Dans les conditions naturelles, l'oxydation de l'ammoniaque commence 5 et atteint son maximum entre 24 et 30 suivant les terrains (Muntz et Laine). Une bonne nitrification ne se produit que dans les sols lgrement alcalins; des terres acides, comme la terre de bruyre et la terre de certaines forts, sont dfavorables, de mme que les sols rendus trop alcalins par un chaulage trop abondant. Les sels de manganse dose modre (112 kilogrammes par hectare) activent l'oxydation de l'azote ammoniacal (Brown et Minze), de mme les composs arsenicaux dose minime. Mais les sels de sodium : NaCl 0,9 p. 1 000, SO4 Na 2 p. 1 000, C08Na 2,5 p. 1 000, et des doses plus faibles lorsqu'ils sont associs, se montrent toxiques. Trs sensibles, dans les milieux artificiels, la prsence des matires organiques qui paralysent leur action, les ferments nitreux ne sont pas incommods par l'humus des sols lorsque l'humidit est convenable et la temprature optimum. Nous avons vu que, dans les liquides nutritifs, l'oxydation de l'azote, s'effectue en deux stades :transformation de l'azote ammoniacal en azote nitreux par les ferments ' nitreux, puis formation de nitrates par les ferments nitriques. Dans la nature,

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au contraire, les deux phnomnes paraissent se produire simultanment : les deux espces nitrifiantes vivent en contact, de telle sorte que la phase nitreuse passe souvent inaperue. En outre, les microbes nitrifiants, incapables d'oxyder l'azote protique, sont aids dans leur action par les germes qui disloquent la matire organique et en librent l'azote ammoniacal. Ainsi est complt le cycle de la dgradation microbienne des matires azotes, depuis la matire vivante jusqu'au stade minral, depuis les protides complexes jusqu'aux nitrates qui, assimils par les vgtaux suprieurs, serviront l'dification de leur propre substance et l'entretien de leur activit. II. DNITRIFICATION.

Par un processus inverse des prcdents, d'autres microorganismes dcomposent les nitrates : ce sont les germes dnitrifiants qui se rpartissent en deux groupes, selon le terme de leur action sur les matires azotes : 1 les bactries dnitrifiantes vraies, qui dcomposent les nitrates et les nitrites jusqu'au terme azote ; 2 les bactries dnitrifiantes indirectes, qui n'attaquent les nitrates que par l'intermdiaire des substances amides et dont l'action s'arrte au stade nitrite. Toutes ces bactries pullulent dans l'air, l'eau, le sol, les dbris organiques. Gayon et Dupetit (1886) en ont isol les premires espces : Bacillus denitrifians a et fi, arobies, trs avides d'oxygne qu'ils empruntent aux nitrates lorsque l'aration de leurs milieux est insuffisante. Dans le bouillon nitrate, additionn d'asparagine, elles produisent NO. D'autres microorganismes comme B. denitrifians de Giltay et Aberson, B. denitrifians II de Brri et Stzer donnent naissance de l'azote pur, indemne de protoxyde d'azote. La proprit dnitrifiante, trs commune chez les microbes saprophytes, ne leur est pas spciale. De nombreux germes pathognes comme Stayhylococcus citreus, le bacille pyocyanique, le vibrion cholrique, la bactridie charbonneuse, le microbe du cholra des poules dcomposent galement lesnitrates en nitrites, ammoniaque et azote. Le Bacterium coli ne rduit les nitrates en nitrites que lorsque le milieu o ils se dveloppent contient la fois des substances amines o.u amides et des aliments carbons fermentescibles, dont les produits de transformation acidifient les milieux.

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PHYSIOLOGIE DES MICROBES

Pour librer l'azote de ses combinaisons, il est ncessaire que les microbes dnitrifiants disposent d'une certaine quantit d'nergie. Celle-ci leur est fournie principalement par des composs hydrocarbons : alcools polyatomiques (glycrine, mannite) ; sucres ; acides organiques (lactique, citrique, malique, butyrique, propionique) et leurs sels calciques ; amidon ; pentosanes ; celluloses. Les acides organiques sont utiliss directement, mais les glucides doivent tre disloqus, au pralable, par les bactries de la putrfaction. Dans les conditions naturelles, les glucides sont apports par les fumiers. Quelques microbes dnitrifiants, comme Thiobacillus denitrifians, trouvent, dans les combinaisons du soufre, les calories ncessaires la dcomposition des nitrates. Une temprature et une aration modres du sol favorisent le dveloppement et l'action ' des bactries dnitrifiantes : 63,9 p. 100 des nitrates sont dcomposs 17,5, au lieu de 10 p. 100 32, et 23,3 p. 100 9P (Guistani). La dni tri fication est particulirement intense dans les sols trs humides et en prsence de fumiers frais. Un tel processus, en librant sous sa forme gazeuse l'azote minral indispensable la nutrition des vgtaux suprieurs, est fort prjudiciable l'agriculture. On le combat surtout par l'incorporation au sol de superphosphates, dont la raction acide est nuisible aux germes dnitrifiants, et par- l'addition de chaux qui jouit d'un pouvoir antiseptique assez marqu. Il convient galement de ne pas associer les fumiers frais aux nitrates employs comme engrais et, surtout, de favoriser l'action antagoniste des microbes nitrifiants par l'ameublissement des terres.

CHAPITRE PUTRFACTION

Les diverses actions microbiennes que nous venons d'envisager ont pour rsultat de restituer au sol, aux eaux et l'atmosphre, sous forme d'aliments simples, l'oxygne, l'hydrogne, le carbone et l'azote primitivement engags dans descombinaisons organiques ' complexes. Schmatiquement, les matires mortes, animales et vgtales, sont formes de glucides (hydrates de carbone), de lipides (matires grasses), de protides (substances protiques) et de sels minraux en j^roportions variables. L'tude des diverses fermentations nous a prcdemment montr les modes multiples de la dislocation des matires hydrocarbones. Repris par des bactries et des moisissures, les produits de ces fermentations sont finalement rduits l'tat de CO2 et d'H 20. Les matires grasses rsistent davantage la destruction. Elles doivent d'abord subir un ddoublement en glycrine et en acides gras ; la glycrine ainsi libre est facilement dcompose par de nombreux microorganismes et les acides gras disparaissent sous l'action des moisissures, principalement. Quant aux substances protiques, dont la dislocation rpond plus spcialement l'ide vulgaire de putrfaction, elles sont dgrades par de nombreux microbes arobies et anarobies, qui les attaquent au moyen de diastases et entrent en jeu successivement. I. Putrfaction des tissus animaux.

Parmi les germes putrfiants, Tissier distingue des ferments simples qui trouvent, surtout dans les matires protiques, leurs aliments plastiques et leurs aliments,nergtiques, et des ferments mixtes qui dcomposent, la fois, les protides, les glucides et les lipides.

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, Les ferments simples attaquent peu ou pas les sucres et dtruisent lesmatires albuminodes en produisant de l'ammoniaque qui communique au milieu une raction alcaline croissante (alcalinitd'arrt). On les classe en trois groupes: protolytiques, peptolytiques et acidaminolytiques, suivant qu'ils attaquent les matires albuminodes et leurs drivs l'tat de protines, de peptones ou d'acides amins. Ce sont les premiers qui dtruisent les plus grandes quantits d'albuminodes ; les uns, anarobies : B. putrificus, B. colicogenes, B. histolyticus hydrolysent rapidement la molcule protique avec dgagement gazeux, ftide, en albumoses d'abord, puis en acides amins, sans produire d'indol ni de phnol; les autres, arobies': b. pyoayanique,[B. mesentericus dcomposent lentement les protides jusqu'au stade ammoniacal avec un dgagement gazeux trs faible ou nul. Dans les ferments simples peptolytiques, on range des microbes anarobies : Diplococcus orbiculus, B. proecutus, B. ventricosus, etc., dont les proprits sont assez mal connues. Ils utilisent surtout les peptones et peu les sucres, en acidifiant faiblement les milieux. Les ferments simples pepto-aminolytiques : B. foecalis aerogenes, Proteus Zenkeri assimilent les dchets des prcdents microbes et donnent naissance une grande quantit d'ammoniaque. Les ferments mixtes se divisent galement en protolytiques, peptolytiques et peptoaminolytiques. Ils attaquent avec une intensit particulire, les glucides qu'ils transforment en acides organiques. Sous leur action, l'acidit des milieux crot ainsi jusqu' un maximum ou acidit d'arrt qui suspend la fermentation putride. D'aprs leurs caractres biologiques, Tissier distingue trois groupes de ferments mixtes protolytiques : le groupe des pyo-. gnes, celui du B. perfringens et celui du Vibrion septique. Parmi les pyogenes, on rencontre : Streptoeoecus pyogenes, Staphylococcus pyogenes et Proteus vulgaris ; les deux premiers agissent au dbut ds putrfactions, surtout en prsence de matires sucres. -Ils ne donnent pas de gaz, tandis que le Proteus dcompose les matires albuminodes jusqu'au stade NH 3. Le groupe du B. perfringens comprend : B. perfringens et B. bifermentans, tous deux anarobies stricts et ferments puissants des graisses et des sucres. Dans le troisime groupe, figurent les microbes anarobies de la gangrne et B sporogenes. Ils hydrolysent beaucoup plus activement les matires albuminodes que les prcdents et attaquent galement les sucres,

PUTEFACTION

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Les jermcnls mixtes peptolytiques n'agissent qu'en prsence d'une forte proportion de sucre. Leur acidit d'arrt est, en gnral, plus leve. Suivant l'acide qu'ils produisent en plus ou moins grande abondance, on les classe en : Ferments actiques (B. bifidus, B. acidophilus, Enterocoque, etc.) ; Ferments lactiques (B. acidiparalactici) ; Ferments butyriques (B. saccharobutyricus, B. lactopropylbutyricus). Les ferments mixtes peptoaminolytiques assimilent la fois les peptones et surtout les acides amins. Ils attaquent moins les sucres que les prcdents, mais produisent beaucoup de NH 3. Certains : B. lactis aero gnes et B. amiiiophilus de A. Berthelot et Bertrand donnent des phnols aux dpens de la tyrosine, d'autres comme le B. coli, donnent de l'indol aux dpens du tryptophane. Voici, d'aprs Fffront, les principaux' corps- qui prennent raissanoe au cours de la fermentation putride ds matires albmiod-es : de l'ammoniaque et des amins (thyl, pr'pyl et trimthylamine) ; des acides volatils normaux et leurs isomres, comprenant tous les termes de la srie grasse jusqu' l'acide caproqu-e (les plus frquents sont les acides actique et bty rique) ; des acides et oxyacides aromatiques (acides phnylpfo pionique, oxyplinylactique et oxyphnylpropionique) ; du phnol, de l'indol, du scatol, du pyrrol et ses drivs en proportions parfois trs faibles ; des drives sulfurs (mthylmercap tan) ; des acides amins divers (leucinc, tyrosine, tryptophane, glyeocolle quelquefois) ; enfin des ptomanes varies .(putrescine, cadavrine, guanidine, choline, neuriiie, pyri dine, etc.). De mme que les microbes des fermentations, les germes de la putrfaction agissent par l'intermdiaire de diastases : protases, trypsine, repsine, amidase pour les matires albuminodes et leurs drivs ; lipases pour les graisses, enzymes diverses pour les sucres. Ils interviennent successivement dans la dcomposition des tissus animaux : d'abord les ferments mixtes arobies, qui produisent des acides aux dpens des sucres ; puis le B. coli, qui donne NH 3 et neutralise l'acidit primitive. Plus tard, les anarobies augmentent la formation de peptones et de.NI\Vi! saponifient les graisses et dtruisent la glycrine. En neimier lieu, apparaissent les ferments simples protolytiques qtoTaecp-j ' Microbiologie, gnrale, 2 dit. \ " 1

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PHYSIOLOGIE DES MICROBES

lrent la dgradation des protides, et les ferments simples pepto* lytiques et peptoaminolytiques qui l'achvent (Tissier); II. Putrfaction intestinale.

Strile au moment de la naissance, le tube digestif ds animaux est immdiatement envahi par les microorganismes ingrs avec le lait. Ces germes ne tardent pas pulluler, surtout dans le gros intestin. Ils attaquent les produits de la digestion gastrointestinale et les aliments eux-mmes. Une fermentation bactrienne mthanique dcompose la cellulose des aliments vgtaux en acides actique, propionique, butyrique, etc.. CO2,H, CH4. Les matires amylaces sont saccharifies, les sucres ddoubls et les graisses saponifies. Les matires protiques se trouvent galement en partie dgrades ; leur putrfaction dans le gros intestin est moins active lorsque les fermentations acides des glucides, la fermentation lactique principalement, sont trs abondantes. Cette action antiputride des ferments lactiques a t utilise en thrapeutique par Mctchnikoff. Les produits ultimes de la putrfaction intestinale des matires protiques sont NIF, IPS, CO2, H, des phnols, des acides oxyaromatiques, de Pindol, du scatol et un grand nombre de corps toxiques mal connus. Les produits aromatiques auxquels Mctchnikoff attribue un rle pathogne considrable (sclrose, dgnrescence athromateuse de l'aorte), drivent des acides amins : les corps phnoliques, de la tyrosine ; les corps phnyliques, de la phnylalanine et les corps indoliques, du tryptophane. 13. perfringens (Welch, lissier et Martelly) est un actif producteur de phnols; B. plwnolognes, isol par A. Berthelot de l'intestin d'un malade en fournit jusqu' 500 et 800 milligrammes par litre dans les milieux contenant de la tyrosine ou des polypeptides tyrosine. Bacterium coli, S. pyogencs, B. proteus donnent naissance de l'indol. On sait que le foie transforme les phnols et l'indol en composs sulfoconjugus atoxiques : les phnols en phnylsulfates, l'indol en indoxylsulfate. Parmi les substances toxiques de la putrfaction des protides sous l'influence des microbes intestinaux, on a identifi la p. oxyphnylthylamine qui provient de la tyrosine (A. Gautier)3 la putrescine ou ttramthylne-diamine, la cadavrine ou pentamthylne-diamine que fournissent respectivement l'ornithinc, Parginine et la lysine. Le B. aminophilus, qui se dve-

PUTREFACTION

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loppe dans l'intestin de certains sujets atteints d'entrite, donne naissance de l'imidazothylamine ou histamineen dcarboxylant l'histidine (A. Berthelot). III. Putrfaction des matires vgtales.

Les vgtaux morts sont immdiatement attaqus par les microorganismes qui pullulent leur surface, transforms peu peu en une matire collodale complexe, l'humus et, finalement, brls l'tat de CO2, I-FO et NIP. Phase intermdiaire de la putrfaction, l'humification est produite par des microbes arobies qui empruntent aux glucides l'nergie ncessaire leur mtabolisme. Sous leur action, les sels organiques sont transforms en carbonates ; ceux qui contiennent du soufre, en sulfates ; une partie des matires quaternaires azotes passe successivement l'tat d'azote amid, puis d'azote ammoniacal repris par les germes nitrifiants ; une autre partie persiste sous la forme de composs stables. En prsence de l'eau, les germes anarobies interviennent activement dans cette dcomposition. Les pailles des litires et les djections des herbivores domes= tiques constituent les fumiers employs comme engrais pour la fertilisation des sols. Ces fumiers contiennent des glucides : celluloses, sucres, amidon, gommes, des tanins, des sels et acides organiques et des matires albuminodes avec leurs drivs (acide urique, acide hippurique, ure, etc.). Accumuls en tas, ils subissent des actions chimiques et microbiennes : les moisissures et bactries arobies agissent en surface ; les anarobies, surtout dans la profondeur. Les sucres et les tanins hydrolyses sont brls en CO2 et H 20 ; les matires grasses oxydes par l'air sont saponifies : la glycrine libre est dtruite, et les acides gras volatils disparaissent par oxydation microbienne ou s'chappent dans l'air. La cellulose fermente en CH4, H, CO2, I-PO ; les matires albuminodes passent l'tat de CO2, H 20 et NH 3, sous l'influence des microbes arobies, de CH1, EPS, NH 3 et d'acides gras quand les anarobies interviennent ; l'ure, les acides urique et hippurique donnent des sels ammoniacaux, dont une partie est 3 dcompose avec production de NH gazeux, pendant que l'autre, reprise par les germes nitrifiants, est transforme en nitrites et nitrates assimilables.

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PHYSIOLOGIE DES MICROBES

IV. puration

biologique

des eaux

d'gout

La dislocation des. matires, organiques, contenues dans les eaux d'gout s'effectue en plusieurs stades sous l'action des microbes- arobies et anarobies. Ce sont surtout l'es afiarobies qui interviennent dans la destruction ds matires ternaires : celluloses, sucres, amidon, acides organiques, en donnant naissance H, CO2 et CH4. Les matires zotfes quaternaires sont d'-bbr liqttfte'es', peptonses, puis dcomposes en acides. amins (lettrine, tyroshe, acide gutamiqu), en arirdes et en -ure. Finalement, les ferments ammoniacaux donnent naissance de l'ammoniaque que les germes nitrifiants oxydent en nitrites et en nitrates". Cette- puration petit tre ralise dans un systme de fosses dites septiqnes ou les' eaux d'gout s'accumulent pendant que l'es microbes" s'y mntipfeHt aTtivmn't. Apres un temps variable, toutes ls-nTatfres organiques Sont liqli'Kes o gazifies. Un fait alors passer la masse rsiduelle sur des lits 'arobies- ou s'achve l'oxydation, arrs-fa-pratiqu, l dgradation pralable des matires organiques-par les anarobies n'est pas ncessaire: les lite-arobies, cm bas'siiis d'oxydation, Constitus par de vastes rservoirs- Ouverts, garnis de eoke, de scories ou de mchefer, suffisent l'puration- complte des eaux d'gout. On l'ait d'abortl passer les liquides grossirement dcants sur un premier lit arobie, on les laisse en corrtact pendant d'eux heures, puis on les dverse sur un deuxime lit plac un niveau infrieur. Aprs un--nouveau sjour de d'eux heures, l'opration est trs avance. Bans le premier lit, dj plus de 50 p. LQO'des matires organiques en suspension ou dissoutes sont transformes en nitrates et en NH 3. On remplace avantageusement ces lits dits de contact par ds lits dit-s..percolateurs de lm6 d'paisseur, forms de scories, mchefer ou briques concasses, qui multiplient les surfaces d'oxydation. La masse liquide, pralablement dcante, est distribue sur ces lits, par intermittence, an moyen de pulvrisateurs pression ou de siphons. Les matires organiques y sont parfaitement retenues, la nitrification se montre trs intense et le liquide se charge rapidement de nitrates (Calmette). Les microbes dni-

PUTRFACTION trifcateurs agissent simultanment sur les nitrates forms, un dgagement d'azote libre. Ainsi pures, les eaux ne tiennent plus de composs azots putrescibles, elles peuvent sans danger, rejetes dans' une rivire, ou tre envoyes l'agriculture, aprs contrle bactriologique.

101 d'o contre, pour

CHAPITRE DIASTASES ET. ACTIONS

XI DIASTASIQUES des diastases.

I. Caractres

gnraux

Ce qui caractrise les diastases, ferments solubles ou enzymes, c'est la proprit qu'elles possdent de modifier, sous un poids impossible prciser, mais certainement trs minime, des quantits considrables de matires. A l'oppos des substances chimiques, les diastases ne se dtruisent pas au cours des ractions qu'elles provoquent et ne se combinent pas, tout au moins d'une manire stable, avec les substances attaques. Toutefois, leurs effets s'affaiblissent sous l'influence des corps forms. Elles effectuent un travail positif de dislocation ou de synthse qui s'accompagne d'un dgagement de chaleur. Si leur composition exacte est encore mal connue, leurs caractres ractionnels les rapprochent des catalyseurs inorganiques, et l'on peut dire avec J. Duclaux, que les enzymes sont des catalyseurs naturels labors par les tres vivants. Le rle des diastases est multiple : tantt elles transforment les substances non directement nutritives en lments assimilables ; tantt elles disloquent les composs fermentescibles, engendrant ainsi l'nergie utilisable pour d'autres ractions protoplasmiques ; tantt, enfin, elles prsident aux actions synthtiques qui permettent aux cellules de construire et de renouveler leur propre matire vivante. En pathologie, le rle des diastases apparat d'une grande importance. On l'apprcie facilement quand on tudie les maladies des animaux et des plantes dues des parasites trs divers. C'est par leurs enzymes que ces parasites attaquent et spolient les htes envahis. C'est par elles qu'ils disloquent les tissus, engendrant ainsi les pourritures sches ou humides qui succdent aux escarres sches ou humides. C'est encore par les enzymes que l'conomie prpare la rsorption des exsudats et des

ET DTASTASES ACTIONS DIASTASIQUES

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lments dtruits et que les microbes, une fois morts, sont digrs. Par ailleurs, les modifications qualitatives et quantitatives des diastases rendent compte de nombreux troubles de la nutrition. Bref, les tres vivants se dbarrassent au moyen d'actions zymotiques de ce que Sydenham appelait, si heureusement, les htrognes . On n'a pu, jusqu'ici, obtenir les diastases l'tat de puret. Quels que soient les. modes de leur prparation, elles renferment toujours des substances trangres qu'on ne peut liminer sans faire disparatre, en mme temps,leurs proprits caractristiques. Solubles dans l'eau (la lipase des graines de ricin excepte) et dans les solutions salines dilues, elles dialysent, en gnral, fort mal, ce qui permet de les ranger parmi les substances collodales. Elles adhrent aux prcipits (phosphate de chaux) qu'on provoque au sein du liquide qui les contient ; la poudre de charbon et le kaolin les extraient de leurs solutions. L'instabilit des diastases, leur sensibilit aux agents physiques et chimiques rsultent de leur structure complexe. Dans les cendres de la laccase, diastase oxydante extraite de l'arbre laque, lihus vernicifera, G. Bertrand a observ la prsence constance de manganse, dou, comme on le sait, de proprits oxydantes. Cette diastase est d'autant plus active qu'elle est plus riche en manganse, et tout se passe comme si elle reprsentait un sel manganeux acide faible. D'o l'hypothse qu'une diastase est forme de deux substances complmentaires, l'une inorganique ou complmentaire active, capable de produire elle seule la raction considre, l'autre organique, collodale, altrable par la chaleur ou complmentaire activante, dont le rle consiste multiplier l'action de la premire par l'effet de sa division extrme et de son immense surface. La premire ou co-ferment peut tre une substance organique comme Venterokinase, qui active le trypsinogne ; ou un acide dans la sucrase, la pepsine, Vamylase, la lipase; ou une combinaison phosphore, dans la zymase ; ou enfin un mtal : manganse dans la laccase, calcium dans la prsure, la pectase et le suc pancratique, sodium (chlorure) dans les protases des vgtaux, etc. Cependant Willstatter et A. Pollinger ont dmontr que la peroxydase vgtale, purifie par adsorption, conserve ses proprits mme lorsqu'elle est prive de la plus grande partie de la substance ferrugineuse laquelle elle est naturellement associe. L'activit de cette diastase est donc indpendante de sa teneur en fer,

104

* PHYSIOLOGIE DES MICROBES

Un mme microbe peut scrter plusieurs diastases : Sierigmatocystis nigra, par exemple, fournit de la .tucrane, de Vinulase, de la malta-ie, de la trypsinc, de la lipasc, une chymosine qui coagule la casine et une casasc qui dissout le caillot. Pnicillium gl.aucum produit une invertine, une maltase, une trhalase, une inulase, une ehymosine, une casase et une lipase (Bourquelot, E. Gley). Inversement, des microbes diffrents laborent des diastases identiques. C'est ainsi qu'un grand nombre de germes liqufient la glatine, attaquent le srum coagul, hydrolysent les glucides (hydrates de carbone) et les graisses, dcomposent les sucres. Mais chaque diastase a son individualit propre,, sa spcificit, et n'agit que sur une substance donne en formant parfois avec elle, comme certains catalyseurs, une combinaison instable. 1511e facilement libre de cette combinaison interest mdiaire sans subir elle-mme aucune altration. Comme dans les phnomnes d'thrification par les acides, les ractions diastasiques s'arrtent ds qu'un certain quilibre est atteint entre les substances ddoublablcs et les produits forms qui s'accumulent. Souvent mme, leur action est rversible. C'est ainsi que la lipase et les protaxes, la fois dcomposantes et synthtisantes, jouent un rle considrable dans l'activit biochimique du protoplasma cellulaire. II. laboration, des diastases.

Les diastases sont labores dans le protoplasma des cellules. Comme les pigments microbiens et les toxines, elles peuvent rester l'intrieur du protoplasma ou diffuser dans le milieu ambiant. Leur diffusion travers la membrane cellulaire est d'observation facile. Si l'on veut tudier, par exemple, les enzymes de Sterigmastocystis migra en pleine vgtation, on emploiera le procd suivant d A. Fernbach. Aprs avoir cultiv la moisissure sur le liquide de Raulin, prlever le myclium, le laver plusieurs reprises dans l'eau distille et le laisser macrer pendant quelques heures dans l'eau laquelle elle abandonne ses enzymes. Par cette mthode, Fernbach a recherch paralllement la suerase demeure dans le champignon et celle qu'il abandonne au liquide. Il a constat que les cellules jeunes renferment plus de diastase que le milieu, tandis que le myclium.vieilli en contient moins. Ainsi la dgnrescence du myclium favorise la

DASTASES ACTIONS ET DASTASIQUES

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diffusion de la diastase. Par consquent, on doit admettre qu'au dbut de la croissance, l'hydrolyse du saccharose se produit surtout dans les cellules et, la fin, en dehors d'elles. De mme, d'aprs Malfitano, la protase du Stcrigmatocystis atteint son maximum au moment de la sporulation ; puis le protoplasma myclien s'altre, se solubilise en partie et diffuse avec la diastase. Au contraire, la Monilia candida et diverses levures n'intervertissent le saccharose qu'au sein de leur protoplasma. On dmontre la prsence de la sucrase dans ces cellules en les soumettant au broyage ou la macration. L'laboration zymotique est intimement lie la composition des milieux de culture. Toutefois les diastases peuvent se former dans les solutions nutritives qui ne contiennent pas de corps sensibles leur action. C'est ainsi qu'en prsence de lactate de chaux et de sels minraux, VAspergillus glaucus donne de l'amylase et le Pnicillium glauciim, une sucrase. Monilia candida scrte de la sucrase quelles que soient le.s substances nutritives dissoutes dans les milieux ensemencs. A l'abri de l'air, les anarobies facultatifs produisent en moindre quantit certaines de leurs enzymes. III. Extraction des diastases.

On extrait les diastases intracellulaires en faisant macrer les microbes dans l'eau ou la glycrine, l'ther ou le chloroforme, ou encore en les broyant ayec du sable. On peut aussi les traiter par l'alcool-ther ou l'actqne aprs dessiccation modre. Lorsque ces moyens sont insuffisants, on provoque l'clatement des cellules en les comprimant en masse dans une presse puissante, comme l'a fait Buchner pour isoler la zymase de la levure. Pour purifier les enzymes et les concentrer, on les entrane mcaniquement de leurs solutions au moyen du phosphate de chaux, de cholestrine ou de fulmi-coton, ou en les prcipitant plusieurs reprises par de l'alcool aprs redissolution dans l'eau. Selon L, Michaelis et M. Ehrenreich, Iscovesco et Willsttter, certaines enzymes possdent des proprits la fois basiques, et acides, ce qui permet de les sjDarerpar adsorption. A cet effet, on emploie le kaolin qui adsorbe les substances basiques et l'hydroxyde d'aluminium qui adsorbe les substances acides, ou des adsorbants organiques comme la cholestrine et la tristarine.

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DES MICROBES PHYSIOLOGIE

On obtient alors des prparations diastasiques trs concentres et prives en grande partie des substances trangres qui les accompagnent ordinairement : la sucrase, purifie par ce procd, est exempte de protides et de glucides, et son activit se montre 1 600 1 700 fois plus grande que dans la levure (Willsttter). IV. Causes qui influent sur les actions diastasiques.

A. Temprature. Il existe pour chaque diastase un maximum, un minimum et un optimum thermique d'action. La temprature optimum, en gnral assez basse, varie avec la nature de l'enzyme, la temprature qu'elle a antrieurement subie et les substances trangres auxquelles elle est associe. Faible ou nulle 0 , l'intensit du phnomne diastasique augmente avec la temprature jusqu' un maximum, puis dcrot et, finalement, redevient nulle. Pourtant, ce moment, la diastase n'est pas compltement dtruite, comme on peut s'en assurer en la mettant en contact, la temprature optimum, avec la substance transformable. La destruction des enzymes se produit des tempratures trs varies, selon leur nature, leur concentration, la prsence ou l'absence d'eau, d'lectrolytes et de matires transformables. Le froid, mme, pouss jusqu' 190, est sans effet. La temprature mortelle peut tre suprieure (amylase)ou gale (sucrase) la temprature optimum d'action. Pralablement dessches, les diastases sont infiniment moins sensibles la chaleur qu'en solution aqueuse. La trypsine, par exemple, dtruite 70 ' l'tat humide, rsiste jusqu' 160 l'tat sec. . B. Lumire. Les effets nuisibles de la lumire sur les diastases sont souvent lis aux oxydations qu'elle dtermine, mais les phnomnes observs diffrent suivant la nature et le mode d'action des rayons lumineux. La sucrase de Sterigmatocystis migra, par exemple, est compltement dtruite par une exposition de quelques heures aux rayons solaires dans le vide ; elle s'altre plus rapidement si on la dissout dans l'eau insole que dans l'eau

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conserve l'obscurit. Enfin, une solution de sucrase conserve dans un flacon insol s'affaiblit plus vite que dans un flacon laiss l'ombre. Du point de vue de l'action de la lumire on peut classer les diastases en trois groupes (Agulhon) : 1 Celles qui sont attaques seulement en prsence d'oxygne molculaire par formation d'eau oxygne. La destruction est rapide par les rayons visibles, plus lente par les rayons ultraviolets seuls : sucrase, laccase, tyrosinase. 2 Celles qui sont dtruites dans le vide par toutes les radiations : mulsine, catalase. 3 La -prsure, qui est insensible aux rayons visibles du spectre, mais est attaque par les rayons ultra-violets en prsence ou en l'absence d'oxygne. C. Agents chimiques. Quelques-uns acclrent les actions diastasiques, d'autres les ralentissent, d'autres encore les suppriment totalement. Tantt les enzymes manifestent leurs proprits en milieu acide (sucrase, pepsine), tantt en milieu alcalin (trypsine), mais il existe pour toutes un degr optimum de raction qui correspond aune certaine concentration en ions H. Le rle des sels, nous l'avons dj vu propos de la composition des diastases, est trs important. Vis--vis de chaque action zymotique, on trouve des sels inorganiques ou organiques favorisants, comme les sels de chaux pour la prsure et la pectase, les sels-de manganse pour la laccase ; ou empchants, comme le citrate de soude pour les diastases coagulantes. Mais un mme corps peut se comporter d'une faon diamtralement oppose en prsence de diastases diffrentes : par exemple les sels de chaux, qui favorisent l'action de la prsure et entravent celle de Famylase. Rappelons enfin que les actions diastasiques engendrent des substances inhibantes dont l'influence se manifeste plus ou moins suivant les cas. En solution concentre, les acides et les alcalis dtruisent les enzymes ; les acides et les sels minraux sont plus efficaces que les acides et les sels organiques.

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PHYSIOLOGIE DES MICllOBES D. Antiseptiques..

11 n'y a aucun rapport entre les proprits antiseptiques d'un compos l'gard des cellules zymognes et son pouvoir antidiastasique. Le thymol, le chloroforme, l'essence de moutarde, l'acide phnique, l'acide salicylique, qui dtruisent les germes, n'ont aucun, effet sur les diastases. V. Caractres des principales diastases.

S.elonleur mode d'action sur les matires organiques, on rpartit J.es diastases en quatre groupes. A. Diastases hydbolysantes. I. Des sucres et de leurs drivs.

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A-. Diastases hydroiysants des sucres et de leurs drivs. 1 Sucrase ou invertine. Elle ddouble le saccharose en une molcule de glucose et une molcule d lvulose. Trs diffusible, elle est produite par diverses moisissures dont Stm-igna tocystis nigra,. Amylomyces Rouoeii;:par diverses levures du type S. Cerevisioe et S. ellipsodeus; des bactries, b. de Kiel, B. megatherium, Proteus vulgaris, B. fluorescens liquefaciens,. etc. Dj activ 0, son optimum thermique est de 52,5 ; elle est dtruite 55-75 l'tat humide, 160 l'tat sec. Le pouvoir hydrolysant de la sucrase ne se manifeste qu'en milieu

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acide ; il augmente quand elle provient de levures cultives en eau de levure (Euler). 2 Maltase. Peu diffusible, existe dans toutes les levures de brasserie, de vin et plusieurs moisissures, sauf dans quelques levures apicules et dans le Saccharomyces Marxianus. Dcompose le maltose et les a glucosides en deux molcules de glucose. Son optimum thermique est de 40". Elle agit en milieu neutre ou trs lgrement acide. Tout excs d'alcalinit ou d'acidit lui est galement dfavorable. Son action est rversible dans certaines conditions (Croft Hill.) 3 Mlibiase. Dcompose le mlibiose provenant du rafllnose pralablement hydrolyse par la raffinase. Elle est produite par les levures basses de brasserie, certaines levures de vin et de boulangerie. Temprature optimum 45. 4 Trhalase. Produite par plusieurs moisissures. Hydrolyse le trhalose en glucose. 5 Lactase. Transforme le sucre de lait ou lactose en dglucose et galactose. Existe dans Odium lactis, Amylomyces Rouxii, Pnicillium glaucum et les levures dites levures du lactose. Son action, le plus souvent intracellulaire, est rversible. Temprature optimum 89. 6 Amylase etdextrinase. V amylase est labore par de nombreux microbes. Elle transforme l'amidon en dextrine aprs que l'amidon a t solubilis par une diastase liqufiante. La dextrinase convertit la dextrine en maltose. L'amidon des industries de fermentation, compos de 90 92 p. 100 d'amylose et de 8 10 p. 100 d'amylopectine (Maquenne et Roux), doit subir, pour tre totalement hydrolyse, l'action de Y amylase, d'une amyloet de la dextrinase. Les levures d'Extrme-Orient pectinase poussent la transformation de l'amidon jusqu'au terme alcool. Amylase et dextrinase agissent en milieu lgrement acide (PH = 4,4 4,6), aussi sont-elles trs sensibles aux alcalis. Le chlorure de calcium et le sublim les paralysent. Le phosphate d'ammoniaque, le chlorure de potassium, l'actate d'alumine et l'asparagine favorisent leurs effets. 7 Inulase. Dcouverte par Green en 1888. Existe dans les moisissures (Pnicillium et Sterigmatocystis nigra). Hydrolyse l'inuline. 8 Cellulase. Les parois cellulaires des vgtaux sont attaques par cette diastase que scrtent des bactries et. des moisissures, ferments hydrolysants de la cellulose.. Temprature

DIASTASES ACTIONS KT DIASTASIQUES

ll

Optimum 35 50. Temprature mortelle 70. La glose solubilise la glose. 9BEmulsine. Cette diastase, qui hydrolyse les (3glucosides en donnant naissance de l'aldhyde benzoque et de l'acide cyanhydrique, se trouve dans un grand nombre de moisissures : A. glaucus, orizoe, fumigatus, niger, etc.. Elle attaque galement le lactose. Temprature mortelle, 70' l'tat humide, 100 l'tat sec. Temprature optimum, 40 45. Elle agit en milieu neutre, mme en prsence de l'alcool qui la prcipite. Les acides minraux lui sont nuisibles. D'aprs Fischer, G. Bertrand et Compton, elle serait constitue par deux diastases, VamygdaLinase, qui spare le disaccharide du nitrile de l'acide phnylglycolique, et Y-amygdalasequi ddouble le biose ainsi form. 10 Myrosine. Ddouble le myronate de potassium. Elle est contenue dans les tguments de Lunaria biennis, alors que le myronate de potassium se trouve dans les cotyldons (Guigna rd). 11 Tannase. Un mycoderme, M. tani,en secrte une quantit suffisante pour dcomposer 30 p. 100 de tanin. Le tanin des jus tannants donne naissance de l'acide gallique sous l'action de la tannase (Fernbach) de diverses moisissures dont les plus communes sont Sterigmatocystis nigra et P. glaucum. Pour viter la dgradation jusqu' l'tat de CO2 et H20 des substances attaques, il est ncessaire d'immerger constamment le feutrage myclien au fur et mesure de sa formation. B. Diastases hydrolysantes des 'protides. Certaines, comme Vendotryptase de la levure, agissent en milieu acide ; d'autres, comme la trypsine, agissent en milieu alcalin ; d'autres, enfin, en milieu neutre, comme la casase. Pepsine, trypsine, casase, fibrinase, glatinase, protases diverses. Liqufient, puis ddoublent les protides et donnent naissance des peptones solubles formes de polypeptides en proportions varies. Ces 23eptonesjouent un grand rle dans la nutrition des microbes et constituent leur principale source d'azote. La trypsine et Vrepsine les attaquent et les transforment en polypeptides puis en acides amins. Nombre de moisissures, levures et bactries (B. anthracis, B. prodigiosus, B. fiuorescens, B. mgatherium, B. pyocyaneus, vibrion cholrique) produisent des protases diverses : exoenzymes traversant la paroi cellulaire et

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endoenzymes agissant uniquement dans le corps de la cellule. Une diastase microbienne trs commune, la glatinase, glutinase ou glatase liqufie et dgrade plus ou moins profondment la glatine. La temprature optimum de ces protases varie de 30 40. En milieu humide, elles sont gnralement dtruites 70 ; dessches, certaines rsistent jusqu' 120. L'intensit de leur action protolytique dpend de la raction et de la composition des milieux et de l'ge de la culture. G. Diastases hydrolysantes des lipides. 1 Lvpase. Ddouble les matires grasses en glycrine et acides gras. Elle est scrte par des champignons : Aspergills glaucus, jwnigatus, des levures et des bactries : B. fluorescens, B. pyocyaneus, B. prodigiosus, etc. Temprature optimum i&\ Temprature mortelle 60 en milieu aqueux. La raction se produit en milieu acide ; elle est favorise par les. sels-alcalins neutres (chlorures, sulfats), le sulfate de manganse. He-est retarde-par les sels de fia, Sr, Ca, l'asparagine, la leucine (Tank). Ls bases alcalines l'empchent. Son action estrversible'. 2 Monobutyrase. Hydrolyse uniquement les- monothers-. D. Diaslase-a coagulantes. Prsure, Chyn]psine ou Lab. Coagule le lait. Trs rpandue chez les animaux (caillette des jeunes mammifres) et chez les vgtaux (fleurs d'artichaut, feuilles de figuier, ivraie, etc.). Elle est galement produite par de nombreux microbes, des moisissures : Aspergills, Pnicillium, des levures et des bactries, B. mesentericus vulgatus, B. fluorescens liquejaciens, B. indiens, B. prodigiosus, Proteus vulgaris. Il ne faut pas confondre la coagulation diastasique que provoquent ces microbes avec la prcipitation de la casine qui rsulte de la fermentation acide du lactose sous l'influence, par exemple, d B. coli. L'optimum thermique del prsure est de 36. Elle est dtruite en milieu aqueux vers 56 ; l'tat sec, celle de la levure rsiste pendant une heure 110. Son action, retarde par les alcalis, est favorise par l'acidit du lait due la fermentation lactique. Elle consiste dans la prcipitation des miceles cdUodales de la casine. Mais une partie de celle-ci, dissoute l'tat de phospho-

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casinate de chaux, reste dans le srum avec les albumines. Le temps de la coagulation dpend d'un grand nombre de facteurs : quantit de la prsure, nature et quantit du lait, traitements qu'il a subis antrieurement. Les laits chauffs, puis refroidis, se coagulent plus lentement que les laits frais, par suite de la prcipitation des sels de chaux, adjuvants de la raction. E. Diastases oxydantes ou oxydases. Dcouvertes par G. Bertrand, elles provoquent des oxydations nergiques en fixant l'oxygne sur divers composs phnoliques. Nous avons vu que ce savant les considre comme formes par un anion organique et un cation manganeux. 1 Laecase. : Extraite de l'arbre laque Rhus vemicifera, elle existe galement chez certaines bactries, des levures et des moisissures (Aspergillus). Sa temprature optimum est de 20, mais elle rsiste 100 ; les acides la paralysent. Elle agit en fixant l'oxygne de l'air aussi bien sur le accol de l'arbre laque que sur les phnols susceptibles de donner une quinonqe hydroquinone, pyrogallol. 2 Tyrosinase. Oxyde la tyrosine qui vire au rouge brun, puis au noir, pour former les mlanines. On la trouve dans un grand nombre de champignons : russules, lactaires, bolets : de bactries : B. pyocyaneus et B. fluorescens liquejaciens et dans certains insectes (Gessard). S0 Peroxydases. Dcomposent l'eau oxygne et fixent l'oxygne sur divers phnols : TPO2 + 0 = II 20 + O2. F. Diastases dcomposantes. 1 Catalase. Dcompose directement l'eau oxygne : I-PO2 = H20 + Q. 2 Zymase ou alcoolase. Ddouble les hexoses en .alcool et acide carbonique dans la fermentation alcoolique. Sa dcouverte est due Buchner qui l'obtint en soumettant des pressions considrables la levure pralablement broye. Il est plus facile de la prparer en faisant macrer avec deux ou trois parties d'eau 25-80, de la levure de bire de fermentation basse, dessche (Lebedeff). Le suc de levure est un mlange complexe de matires albuminodes, de diastases, dont un ferment trypsique qui l'autodigre Microbiologiegnrale, 2e dit. S

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(endotryptase), et de sels. Au contact d'une solution sucre, il produit presque instantanment une vritable fermentation akoolique avec formation d'alcool et CO2, d'un peu de glycrine et d'acide lactique. La zymase qu'il contient ne dialyse pas. Celleci s'altre rapidement et perd son activit 40. En milieu liquide elle est dtruite 55. Beaucoup de substances gnent son action ; d'autres la favorisent. La prsence de phosphates dans le milieu est indispensable la dcomposition du sucre. Cette dcomposition est accompagne de la formation d'un hexosephosphate qui, libr par une diastase, Yhexosephosphatase, interviendrait indfiniment dans la raction. L'addition de suc de levure bouilli la zymase augmente considrablement les quantits d'alcool et deCO 2 qu'elle produit. D'autre part, quand on filtre du suc de levure sur bougie Chamberland enduite de glatine, le filtrat obtenu et le rsidu sont inactifs sparment ; runis, ils provoquent la fermentation comme le suc total. Le rsidu non dialysable, ou zymase proprement dite, est coagulable par la chaleur ; le filtrat, ou coenzyme, contient le coferment dialysable, thermostabile, hydrolysablej par la lipase des graines du ricin (Harden et Young). Comme nous l'avons indiqu propos de la fermentation alcoolique, le ddoublement du sucre en alcool par la zymase s'effectue par stades successifs, avec formation de corps intermdiaires dont on commence connatre exactement la nature. Parmi ces corps intermdiaires, l'acide pyruvique et l'aldhyde actique jouent un rle prpondrant. La levure renferme, en effet, une diastase spciale la carboxylase qui dcompose trs facilement l'acide pyruvique et le transforme en aldhyde actique et CO2. suivant la formule :

Finalement, l'aldhyde actique est transforme en alcool thylique par hydrognation.

La carboxylase n'est dtruite qu' 70. Son pouvoir ferment crot, comme celui de la zymase, jusqu' 60, mais elle est beaucoup plus rsistante au vieillissement et l'action des antiseptiques. Elle est active par les phosphates et divers acides.

DIASTASES ACTIONS ET DIASTAsIQUS

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Dans! e complexe d'enzymes contenus dans la levure, il existe encore une diastase synthtisante, la carboligase, dcouverte par Neuberg. Cette diastase est capable de souder entre elles des chanes carbones. Ainsi, dans la fermentation du sucre ou de l'acide pyruvique par la levure, en prsence d'aldhyde benzoque, la carboligase produit un corps ctonique en C9 constitu par la soudure de l'aldhyde benzoque ajoute et de l'aldhyde actique qui a pris naissance au cours de la fermentation comme * corps intermdiaire.

CHAPITRE ECHANGES

XII

MODIFICATIONS NUTRITIFS, DES MILIEUX I. Assimilation.

A. Assimilation de l'azote organique. Du point de vue chimique, ou distingue deux phases dans le mtabolisme microbien, une phase anabolujue et une phase catabolique. L'anabolisme est l'ensemble des processus synthtiques qui aboutissent l'dification de substances complexes caractrises par un potentiel nergtique lev ; le catabolisine correspond aux j^i'ocessus inverses, analytiques et destructeurs qui librent des molcules simplifies, en mme temps qu'une quantit considrable d'nergie. Les vgtaux suprieurs dits autotrophes assimilent directement l'acide carbonique, l'eau et les nitrates, et les synthtisent sous la forme de molcules organiques, donc de matire vivante, grce l'nergie lumineuse solaire capte et utilise par le chlorophylle de leurs feuilles. Au contraire, les champignons et les bactries htrotrophes, dpourvus de pigment chlorophyllien, empruntent gnralement l'azote, le carbone, l'oxygne et l'hydrogne "des molcules complexes, amides, acides amins, peptides, protines, glucides, les dsintgrent d'abord au moyen de leurs diastases, puis construisent leur propre substance en regroupant par synthse les molcules simplifies. Le Sterigmatocystis nigra, les levures et de nombreuses bactries, qui se dveloppent sur des milieux contenant des acides amins ou des peptides comme unique source d'azote, difient aux dpens de ces substances leurs propres matires protiques dont la composition reste constante, quelle que soit la nature de l'aliment amin (Abderhalden et Rna). On peut admettre, avec P. Thomas, que chez les vgtaux htrotrophes, l'assimilation de l'azote, que celui-ci soit donn sous forme minrale (sels amrr.c-

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niacaux, nitrates) ou organiques (protiques, peptides, acides amins, amides, amins, noyaux divers), revient toujours, en dfinitive, une formation de NH 3 qui se fixe ensuite sur le sucre ou un de ses produits de transformation . Nous verrons, par la suite, qu'un certain nombre de germes fixent directement l'azote atmosphrique. Le mtabolisme intime des corps azots diffre pour chaque espce microbienne. C'est ainsi que Alternaria tennis, Mucor racemosus, Asyergillus glaucus,B. pyocyafteusprfrent les nitrates aux sels ammoniacaux et que B. coli, B. subtilis assimilent les nitrates en prsence de glucose et ne peuvent utiliser les sels ammoniacaux qu'en prsence de glycrine (A. Fischer). D'une manire gnrale, la transformation des acides amins s'effectue au cours d'une srie de ractions, dont les principales, d'aprs Kcndall, sont les suivantes : 1" Dsamination rductrice des acides amins en acides gras ayant le mme nombre d'atomes de carbone :

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De mme, la levure attaque les acides amins avec formation de NH 3 dans les ractions intermdiaires (Neubauer et Fromherz) : 1 Formation d'un acide ctonique par perte de NH 3 ; 2^ Dcarboxylation et formation d'aldhyde pyruvique; 3 Transformation de cet aldhyde pyruvique en alcool par fixation d'hydrogne. L'ammoniaque libre au deuxime stade se combine avec des substances ternaires drives des sucres, sous l'influence des enzymes. Les composs azots sont ensuite synthtiss en polypeptides, en peptones et, finalement, en matires protiques. Il rsulte des expriences de P. Thomas que la levure assimile galement l'azote de l'ure. Cette assimilation est prcde de la dcomposition de l'ure en NH 3, car la marche des fermentations d'une mme levure, dans un milieu donn, est constante, que l'azote soit fourni l'tat d'ure ou de sels ammoniacaux. Notons encore que le bacille tuberculeux, cultiv sur des milieux synthtiques ne contenant comme source d'azote que de l'asparagine ou du succinate d'ammoniaque, ralise la synthse du tryptophane (Wollman). B. Assimilation de l'azote atmosphrique. Beaucoup de terrains, comme les prairies des montagnes et les forts, qui ne reoivent qu'une fumure ngligeable, continuent cependant se couvrir d'une luxuriante vgtation herbace. Tout se passe comme s'ils ne perdaient pas d'azote. Plusieurs espces vgtales, les lgumineuses en particulier, fixent mme une quantit d'azote suprieure l'azote minral du sol o elles se dveloppent, de telle sorte que, loin d'puiser la terre, elles contribuent, au contraire, l'enrichir. 1 Bactries des nodosits. Depuis longtemps on avait observ sur les racines des lgumineuses, de petits tubercules que Malpighi considrait comme des productions pathologiques (galles) ; et dj Ville avait mis l'ide que les pois assimilent l'azote atmosphrique. Berthelot, le premier, a montr que les microbes jouent un rle capital dans l'enrichissement du sol; mais ce furent Hellriegel et Wilfarth qui tablirent une relation fondamentale entre la fixation de l'azote et la prsence de bactries dans les nodosits radicales des lgumineuses. Nous ne pouvons rapporter ici les belles expriences des savants allemands et'nous nous bor-

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nerons exposer les points suivants qui les rsument. Dans les sols striliss et protgs contre les germes de l'air, il n'y a jamais produetion de tubercules sur les racines des pois, et ces plantes y dprissent rapidement. Si l'on arrose les sols striliss avec de la dlayure de terre frache, provenant d'un champ ensemenc de lgumineuses, les nodosits apparaissent et le dveloppement des pois se poursuit normalement. L'bullition de la dlayure de terre lui fait perdre cette proprit. L'isolement et la culture des microbes radicicoles (B. radicicola) ont t raliss par Prazmowski et Beijerinck. Bral parvint les inoculer des racines de lgumineuses indemnes, en les piquant avec une aiguille trempe dans une nodosit frache. On les cultive in vitro en ensemenant le contenu d'une nodosit dans une infusion de feuilles de lgumineuses additionne de 7 8 p. 100 de glatine, de 0,25 p. 100 d'asparagine et de 5 p. 100 de saccharose. La temprature optimum varie entre 10 et 38 suivant les types. Ce sont des microorganismes arobies, mobiles et cilis. Trs sensibles l'action de la. chaleur qui les tue vers 40 dans les nodosits, ils rsistent, au contraire, jusqu' 70-75 dans les milieux artificiels. Leur polymorphisme est trs marqu ; dans les vieilles cultures ils se transforment en bactrodes souvent ramifis en Y ou T, de grandes dimensions. Quand ils pntrent dans les poils radicaux des lgumineuses, ils se propagent jusqu'aux cellules corticales ; ils se multiplient dans une sorte de tissu form par la segmentation des cellules des poils et s'entourent d'une masse glaireuse que la sve rsorbe peu peu. mesure que les nodosits se dveloppent, elles s'enrichissent en matires azotes assimilables par la plante, pendant que les btonnets se transforment en bactrodes polymorphes. Toutes les bactries des nodosits n'ont pas le mme pouvoir infectant. Leur aptitude plus ou moins grande se multiplier dans les racines des lgumineuses rappelle ainsi en tous points la virulence des germes pathognes. Certaines ne peuvent se fixer dans les poils radiculaires faute de diastases capables de provoquer la formation, aux dpens de la membrane du poil, de la matire glaireuse dont elles s'entourent '; d'autres sont rsorbes peu aprs leur pntration et ne russissent qu' crer des tubercules avorts ; d'autres, enfin, produisent des nodosits plus ou moins volumineuses et une grande quantit de matire glaireuse.

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A partir du moment o les bactries s'implantent dans les racines.o s'difie une vritable lsion nodulaire, des changes actifs et rciproques s'tablissent entre la plante et ses commensaux. Ceux-ci utilisent les glucides du vgtal et les transforment en aliments azots, en les combinant avec l'azote qu'ils fixent. Mais ces produits synthtiques du mtabolisme microbien ne sont absorbs et utiliss par les lgumineuses que s'ils sont finalement dsassimils sous une forme spciale. Seules sont aptes cette ultime transformation profitable la plante, les bactries qui affectent le type ramifi de bactrode normal, riche en amidon et en azote. 2 Microbes du sol fixateurs d'azote. Outre ces bactries des nodosits, les sols renferment d'autres microorganismes fixateurs de l'azote atmosphrique qui agissent soit directement, soit en symbiose avec des algues. Les fixateurs directs comprennent des microbes anarobies et des microbes arobies. Parmi les premiers, les plus importants sont les Clostridium de 1 \j.5 2 a de long, sporuls et encapsuls, voisins des ferments butyriques : C. Pasteurianum (Winogradsky). C. americanum, C. giganteum et de nombreuses espces d'Amylobacfer. Les fixateurs directs arobies appartiennent au genre Azotobacter. Ils dominent dans les sols riches en carbonate de chaux o ils pntrent jusqu'une profondeur de 0m,50 0m,60. On les rpartit en quatre groupes : A. chroococcum: faiblement mobile, produit un pigment allant du brun au noir. A. Beijerinckii : faiblement mobile, produit un pigment jaune. A. agile: trs mobile, fluorescent. Ai vitreum: immobile, sphrique. Les microbes des trois premires espces sont trs polymorphes : sphriques, cocco-bacillaires, btonnets fins et trapus. Certains sont sporuls. Des champignons comme Pnicillium glaucum, Sterigmatocystis nigra, Mucor stolonifer, Mqnilia candida, Odium lactis et des Saccharomyces assimilent galement, mais en assez faible quantit, l'azote atmosphrique. : Enfin, un troisime groupe de microbes fixateurs d'azote est constitu par des germes qui vivent au contact des algues : Chorella, Stichococcus, Cystococcus et desJ'Nostocs. Celles-ci fournissent aux bactries, sous la forme de glucides- qu'elles laissent diffuser, le carbone qu'elles utilisent pour leurs synthses proto-

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plasmiques ; les bactries apportent aux algues de l'azote assimilable. 3 Culture et dveloppement des microbes fixateurs d'azote. Dans les milieux artificiels, le dveloppement des bactries des nodosits exige la prsence de glucides, d'oxygne et d'un peu d'azote combin pour amorcer la nutrition. Au sein des vgtaux, ces bactries trouvent les matires hydrocarbones ncessaires ; dans la sve ou dans le sol, l'oxygne ; dans le parenchyme radical, l'azote combin. Si, comme l'a fait Maz, on ensemence les microbes des nodosits sur de la glose au bouillon de haricots ne contenant pas moins de 2 p. 100 de saccharose et 0sr,0005 d'azote par litre et si, maintenant la temprature 20-25, on fait passer un courant d'air sur ces cultures, on observera la fois la disparition d'une certaine quantit d'azote combin eotla formation d'un dpt glaireux exubrant, semblable celui des nodosits. Cette matire glaireuse renferme l'azote fix, combin avec les produits de transformation du saccharose. Dans les meilleures expriences, les bactries des nodosits fixent 1 gramme d'azote libre pour 100 grammes de saccharose consomm. Les Clostridium se dveloppent bien dans le vide, sur pomme de terre et sur carotte. Ils attaquent les sucres, la glycrine, la mannite et trouvent, dans la " destruction de ces substances, l'nergie ncessaire leurs ractions synthtiques. De mme les Azotobacter arobies ne peuvent fixer l'azote en l'absence de glucides dans leurs milieux de culture. Ils attaquent aussi la cellulose ; l'humus du sol et les humtes favorisent leur dveloppement, grce aux composs ferriques qu'ils contiennent. Les sels de calcium, le phosphore, le soufre et surtout l'oxygne leur sont ncessaires. L'arsenic stimule leur action. L'assimilation de l'azote par ces germes dbute vers 15 et atteint son maximum entre 18 et 30 suivant les espces. Les composs azots solubles, que laissent diffuser dans le sol les Clostridium et les Azotobacter; deviennent directement assimilables par les vgtaux suprieurs aprs qu'ils ont t dcomposs par les ferments ammoniacaux et oxyds par les ferments nitrificateurs, La dcouverte de la fixation bactrienne de l'azote et la possibilit de cultiver les microbes spcifiques devaient conduire des applications pratiques. Nobbe et Hiltner tentrent d'abord de fertiliser les sols au moyen de cultures artificielles de microbes radicicoles dsignes sous le nom de nitragine-. Les rsultats furent

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trs mdiocres, ce qui ne saurait surprendre, tant donn la complexit du problme : influence des sols, de leur composition, de leur structure, de leurs ractions, influence des espces vgtales ensemences, etc. Aussi les auteurs allemands s'efforcrent-ils de perfectionner leur mthode en renforant l'activit vgtative in vivo du microbe, sa virulence, si l'on veut, en les entretenant sur des substrats mieux appropris et en effectuant un grand nombre de passages par inoculation des lgumineuses de mme espce. Ils assurent y avoir russi. 82 p. 100 des essais de Hiltner auraient t favorables, surtout pour la culture des lupins qui produiraient une rcolte six fois suprieure en prsence de nitragine. La tourbe strilise, ensemence avec les fixateurs de l'azote, jouit galement de hautes proprits fertilisantes (Chittenden). Elle contiendrait, d'aprs Bottomley, des auximones de synthse labores par les microbes, trs efficaces la fois pour la nutrition des vgtaux et la multiplication des bactries nitrifiantes, mais dpourvues d'action activante sur les germes dnitrifiants. C. Assimilation du soufre. Les matires albuminodes en voie de putrfaction, les eaux stagnantes, les boues riches en dbris organiques dgagent, en abondance, de l'hydrogne sulfur. Cette production d'H2S rsulte la fois de processus chimiques et de processus biologiques : action des sulfates sur le mthane, par exemple, et dislocation des matires albuminodes par les microbes de la putrfaction. L'H2S apparat encore sous l'action de diastases, par un phnomne de rduction des combinaisons oxygnes, li la prsence d'hydrogne naissant. Selon de Rey Pailhade, le philothion, diastase labore par la levure alcoolique cultive dans un milieu renfermant du soufre, jouirait de cette proprit. De mme que les ferments nitreux et nitriques transforment l'azote ammoniacal en nitrites et en. nitrates, diverses bactries rduisent H2S, fixent le soufre dans leur protoplasma et, finalement, oxydent ce corps l'tat de sulfates. Ces bactries vgtent abondamment dans les eaux sulfureuses o elles constituent des amas dsigns sous le nom de sulfuraires, glairine, bargine. Elles appartiennent principalement deux genres de bactries filamenteuses : Beggiatoa et Thiothriw essentiellement arobies. Mais certains cocci, des vibrions et des bacilles prsentent la mme proprit de rduire BPS et d'accumuler sous la forme

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de grains rfringents le soufre libr. Lors de disette d'H2S, le soufre est oxyd, puis transform en acide sulfurique et en sulfates par combinaison avec le carbonate de chaux. Pendant la phase d'oxydation, les bactries se nourrissent aux dpens de leurs rserves (Jacobsen). Les bactries sulfureuses puisent l'azote et le carbone ncessaires leur dveloppement dans les sels ammoniacaux et les carbonates alcalins. CO2 libre ne parat pas assimilable. Les nitrates sont rduits l'tat d'azote libre, mais les nitrites ne peuvent les remplacer. Les combinaisons sulfures : BPS et hyposulfite de soude, offertes comme source d'nergie pour l'assimilation de CO2 des carbonates, sont graduellement oxydes jusqu' l'tat de sulfates avec formation de corps intermdiaires instables (Leisk). Beggiatoa alba, une des principales espces, forme des flocons blancs dans les eaux sulfureuses ou stagnantes. Elle offre l'aspect de filaments longs de 3 6ix, larges de 3 jx,segments, dont chaque article est mobile. Des grains de soufre trs rfringents sont observs en grand nombre, surtout dans les articles terminaux. Beggiatoa mutabilis atteint jusqu' 30 \x de long. Les TMothrix sont immobiles, fixs une de leurs extrmits aux parois du vase qui les contient et forms d'articles d'autant plus longs qu'ils sont plus proches de l'extrmit libre du filament. Les Thiophysa contiennent, dans leur protoplasme, des grains de soufre et, dans une vacuole centrale, de petits corpuscules (oxalites) constitus par de l'acide oxalique. En prsence d'une grande quantit d'oxygne, les grains de soufre disparaissent et les oxalites persistent. En prsence d'H2S et d'une petite quantit d'oxygne, les grains de soufre s'accumulent seuls (Nadson). Quelques espces de sulfuraires sont pigmentes : Beggiatoa rosea persicina scrte une matire colorante, une bactriopurpurine dont la teinte varie du rose au violet et au brun, suivant l'ge de la culture. Monas Okenii s'tend en taches rouges sur les objets immergs. D. Assimilation du fer. On trouve souvent dans les eaux des marcages et les eaux ferrugineuses, des masses glaireuses, parfois colores en jaune, riches en sels de fer, qui sont constitues par des filaments bact-

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riens entours d'une gaine. Ce sont.des jerrobactries. Ces singuliers microbes ne se multiplient que dans les liquides additionns de carbonate de fer qu'ils oxydent l'tat de protoxyde, puis de peroxyde, en utilisant la chaleur dveloppe au cours de ces transformations (Winogradsky). Le fer peut tre remplac par le manganse (Molish et Adler) qui semble mme plus favorable la croissance des ferrobactries. Celles-ci sont facilement cultivables, mme en l'absence de matires organiques, surtout quand on ajoute un peu d'actate de soude au milieu. Elles appartiennent un grand nombre d'espces : Crenothrix Kuhniana constitu par des articles inclus dans une membrane glifie, charge d'oxyde de fer, Cladothrix dichotoma ramifi, Leptothrioe ochracea filamenteux, cylindrique, Spirillum ferrugineum contourn en hlice. Un actinomycs A. odorifer jouit galement de la proprit d'oxyder les sels de fer ; il se multiplie dans le sol et produit l'odeur spciale que dgage la terre laboure. Les oxydes de fer forms par tous ces germes peuvent tre ensuite rduits au cours de fermentations anarobies, comme la fermentation cellulosique, et transforms en carbonates jmr CO2 de l'air. Mais une certaine proportion de ces oxydes, en se combinant aux phosphates et aux silicates du sol, devient directement utilisable par les vgtaux suprieurs. II. DSASSIMILATION.

La dsintgration de la matire organique par les microbes s'effectue suivant des modes trs complexes, souvent peu connus. Elle aboutit la formation de substances multiples, associes aux reliquats des actions zymotiques, aux toxines, aux dchets de Pautolyse protoplasmiqUe dont la sparation, par l'analyse chimique, prsente les plus grandes difficults. Comme nous l'avons vu propos de la putrfaction, diverses bactries de l'intestin produisent de l'indol aux dpens du tryptophane de la molcule protique. B. proteus dgrade le tryptophane, tantt jusqu' l'indol, tantt seulement jusqu' l'acide indolactique (Herter, A. Berthelot, Vall, Miranda). La tyrosine dgrade aprs une srie de ractions analogues . donne naissance des corps phnoliques. Comme l'indol, ces corps sont inassimilbles par les bactries j on les retrouve intacts dans ls milieux de cultures.

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Indol et corps phrioliques ne sont labors par les bactries aux dpens du tryptophane et de la tyrosine qu'en l'absence de glucides assimilables. III, Modifications des milieux.

A. Changements de consistance. Sous l'action de certains microbes, les milieux protiques solides : glatine, srum coagul, casine coagule subissent une hydrolyse, vritable digestion, qui aboutit la formation d'albumoses, de peptones et de produits solubles plus simples encore : polypeptides et acides amins assimilables directement. Le milieu se ramollit et se creuse d'une dpression qui, peu peu, s'agrandit et s'tend parfois toute la masse, Cette action liqufiante des microbes est due aux enzymes digestiyes qu'ils laborent. Un grand nombre de bactries scrtent une glatinase, exqenzyme difiusible. Toutefois l'laboration de cette di&stase est subordonne la composition du milieu de culture. Le B,'pro* teus et le vibrion cholrique,par exemple, qui hydrolysent la glatine solidifie, cessent de produire la glatinase en prsence de glucides assimilables. Cette actioninhibitrice des glucides s'exerce bien sur la fonction zymogne et non sur la diastase elle-mme, car l'addition de sucre aux filtrats de culture ne diminue pas leur pouvoir hydrolysant. 1 B. Changements de raction. ~

Rappelons tout d'abord les deux exemples classiques : le bacille lactique acidifie fortement le lait primitivement alcalin ; le Microooccus weas aloalinise l'urine acide. Tous les microbes susceptibles de dterminer les fermentations lactique, butyrique, actique, etc., acidifient les milieux lorsque ceux-ci contiennent des sucres ou des alcools. Parmi les saccharides, aucun n'est attaqu par un plus grand nombre de microor^ ganismes que le glucose avec production d'acides varis. Les viandes employes pour la prparation des milieux nutritifs renferment gnralement des sucres fermenteseibles. Aussi les cultures en bouillon dit simple sont-elles, en ralit, des cultures en bouillon sucr. Lorsqu'on veut liminer ces sucres de la

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viande, pour la prparation de la toxine diphtrique, par exemple, il convient de les faire consommer, au pralable, par la levure de bire (Martin), le B. coli (Smith), ou plus simplement, par une lgre putrfaction (Spronk). La production d'alcali, dont le terme le plus simple est l'ammoniaque, rsulte de la dcomposition des matires azotes par l'intermdiaire d'une oxydation initiale. Elle atteint son maximum chez les arobies, surtout chez ceux qui se dveloppent en voile la surface des liquides (B. subtilis, Tyrothrix tenuis). Comme ces microbes jouissent galement de proprits fermentatives l'gard des sucres, il s'ensuit que, selon le germe ensemenc, la composition du milieu, l'ge et les conditions de la culture, la raction observe peut varier de l'acidit la plus franche une forte alcalinit. Lorsqu'on cultive le vibrion cholrique sous une certaine paisseur dans le petit lait additionn de tournesol bleu, on constate la formation de trois couches diffremment teintes (Dionys Hellin). la partie suprieure, coloration bleu fonc (oxydation intense et dsamination des. matires protiques) ; au-dessous, teinte rouge vif (fermentation du lactose, acidit non neutralise) ; profondment, dcoloration (rduction lie la vie anarobie). Semons, comme l'indique Eeyerinck, le B. prodigioms la surface d'une glose sucre, dans l'paisseur de laquelle on a incorpor de la craie finement pulvrise. Le microbe met bientt des vapeurs ammoniacales, et la couche bactrienne se montre fortement alcaline. Cependant, autour de chaque colonie, on voit apparatre un halo transparent indiquant la dcomposition du C03Ca par un acide qui rsulte de la fermentation du sucre. - Quelques microorganismes, bactries et levures, prsentent cette proprit curieuse d'acidifier les milieux de culture trop alcalins et de les alcaliniser lorsqu'ils sont trop acides (Fernbach). Les quantits d'acides qu'ils produisent se trouvent ainsi dtermines par la raction initiale, par le Pn des milieux ensemencs. Ce phnomne est particulirement net chez le bacille diphtrique qui provoque une raction diffrente pendant les premiers jours de la culture, selon que le PHinitial est suprieur ou infrieur 7,2 : acidification des milieux trop alcalins, alcalinisation des milieux trop acides, comme si le bacille corrigeait la raction du milieu (G. Abt et Loiseau).

CHANGES NUTRITIFS IV. Phnomnes d'oxydation et de rduction.

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Les microbes arotaies sont susceptibles d'oxyder non seulement les substances organiques azotes et ternaires, mais encore les composs minraux. Nous en connaissons dj plusieurs exemples avec les bactries nitrifiantes, les sulfo et les ferrobactries. C'est galement par un phnomne d'oxydation que des microorganismes comme B. manganicus, des moisissures appartenant aux genres Botrytis, Trichocladium, dont la glose peut tre l'unique aliment carbon, attaquent le carbonate et le lictate de manganse (Beyerinck). Dans les milieux alcalins, B. fluorescens, Azotobacter, B. coli transforment les sels manganiques en hydroxyde de manganse. Sous leur action, les sels organiques de manganse passent l'tat de carbonates, les sulfures l'tat de sulfates et l'azote nitreux l'tat d'azote nitrique assimilable sous la forme de nitrate de manganse (Sohngen). On est fond croire que cette fixation d'oxygne libre sur un substratum minral ou organique plus ou moins complexe est lie la prsence d'oxydases labores par les microbes. Les anarobies constituent de puissants rducteurs et, par cela mme, de puissants oxydants indirects. Ils peuvent, eux aussi, attaquer les corps inorganiques. La dnitrification, la dcomposition des sulfates sous l'influence de divers microbes, en particulier de Spirillum desulfuricans de Beyerinck, le dmontrent suffisamment. Mais les arobies ne sont pas incapables de provoquer des phnomnes rducteurs identiques. Ainsi le Pnicillium brevicaule, tudi par Abba et Bujwid, dcompose l'acide arsnieux et dgage de l'hydrogne arsni reconnaissable son odeur alliace. L'activit de la moisissure est telle que son emploi peut rendre des services dans certains cas o les mthodes chimiques d'analyse se rvlent insuffisantes. Comme il ressort surtout des recherches de Gosio, les phnomnes de rduction sont dus tantt la production d'hydrogne naissant, notamment lors d'anarobiose, tantt l'action d'une diastase, le philothion de la levure, par exemple, qui transforme le soufre et certains de ses composs en H2S (de Rey Pailhade). V. changes gazeux.

Chez les microbes, respiration et nutrition se confondent. Nous avons vu que les arobies absorbent l'oxygne gazeux ou

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DES MICROBES PHYSIOLOGIE

dissous et liminent CO2. Cet change est d'autant plus nergique que les conditions du dveloppement sont plus favorables. Poulies organismes volution rapide, on peut distinguer trois phases : pendant la croissance, la quantit d'oxygne fixe dpasse la 2 quantit de CO dgag; pendant la priode stationnaire, l'quirtablit ; enfin lors du dclin, il se rompt en faveur de libre se CO2. Les an-arobies n'assimilent que l'oxygne combin.

CHAPITRE PRODUCTION et )E

XI LUMIRE

DE CHALEUR, DE Matires colorantes de chaleur.

I. Production

Chez les levures, que nous prenons comme exemple^ ls actes vitaux simples, mme lorsqu'ils s'accomplissent en prsence de gaz inertes, s'accompagnent d*un dgagement de chaleur. Us en produisent davantage quand les cellules sont en Contact avec une atmosphre oxygne et, plus encore, lorsque, prives d'air, elles font fermenter les matires sucres. D'aprs des expriences, dj anciennes, d'Eriksson : la levure, dans un courant d'H lve la temprature de 0 9 - l'air libre 12 < S09 pendant la fermentation Ces chiffres n'ont videmment rien d'absolu, mais ils mettent clairement en vidence le bilan exothermique des ractions intracellulaires > Diverses fermentations s'accompagnent d'un dgagement de chaleur si considrable (chauffement des fumiers), qu'elles peuvent provoquer des combustions en apparence spontanes (inflammation des balles de coton, etc.). II. Production d lumire ou photo-Gense.

Les eaux, les eaux marines surtout, les poissons morts, la viande, le bois, mettent parfois de la lumire et luisent dans l'obscurit. Cette phosphorescence est due, dans de nombreux cas, la prsence de microorganismes, ainsi que Pflger l'a dmontr le premier. En 1878, Cohn, confirmant une hypothse d'Heller nonce 9 Microbiologie gnrale, 2"dit.

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PHYSIOLOGIE DES MICKOIEK

en 1843, isola du saumon cuit, le Micrococcus phosphoreux. Dunbar et Kutscher ont fait connatre ensuite les vibrions phosphorescents de l'Elbe, et d'autres auteurs ont rencontr des bactries photognes sur divers poissons morts, des animaux marins, dans l'eau de mer, dans les muscles de petits crustacs marins vivants, les talitres (Giard) et mme sur des articuls terrestres : des gorjfhles (Mac) et les eourtilires (Ludwig). Quelques espces de champignons, dont Agaricus mettais et Armllara mellea, communiquent au bois mort la phosphorescence qu'on observe frquemment ; et de nombreuses infusoires, comme les Noctiluques, qui provoquent le phnomne de la mer phosphorescente, jouissent d'une luminosit propre, indpendante de toute infection bactrienne. La plupart des bactries photo gnes appartiennent au type bacille ; des microcoques et des formes vibrioniennes (Photobacter splendidum) ont t galement signals. Ce sont, en gnral, des microbes courts, arobies, asporognes et mobiles, grce la prsence d'un cil vibratil. Us peuvent trs bien vgter sans mettre de lumire, car la fonction photogne est soumise des conditions spciales qui ne se confondent pas avec les conditions gnrales de la vie cellulaire. La phosphorescence affecte une intensit variable. Souvent, la lumire mise est faible et se prsente comme une lueur indcise la surface des milieux. Barfois, au contraire, sa puissance est telle qu'elle claire la faon d'une veilleuse, permettant la lecture courte distance et mme la photographie (lumire froide de R. Dubois). Elle revt des teintes diverses : bleutre, jauntre, verdtre, ou parfaitement blanche quand elle contient toutes les radiations" du spectre. Lorsqu'elles sont abondantes, les bactries luminescentes peuvent dterminer un tropisme net sur les plantes en germination ; mais leur action sur la fonction chlorophyllienne n'est pas encore dfinitivement prouve. Cultives la surface des viandes, les photobactries mettent une lueur verdtre qui s'tend rapidement et persiste jusqu'au moment o les tissus sont envahis par les agents de la putrfaction. Dans les milieux de culture, cette phosphorescence crot pendant quelques jours, puis s'attnue et persiste un temps plus ou moins long, jusqu' une anne.

COLORANTES (JJIALKUR, LUMIERE,MATIERES A. Conditions qui influent sur la luminescence.

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Ce sont surtout la temprature, la composition du milieu nutritif, l'aration. L'optimum thermique n'a rien de constant. Il oscille entre 0 et 10, 10 et 15, 15 et 20, 20 et 25, 25 et S0f> suivant les espces. D'une faon gnrale, il est en rapport avec les conditions naturelles du dveloppement des bactries. Cet optimum est donc plus lev chez les espces tropicales que chez les espces provenant des rgions froides. La plupart de ces germes supportent bien les basses tempratures : sur la viande de veau, ils mettent encore leurs radiations 14 (Ludwig). Mac Fadyen a mme russi les conserver vivants et lumineux aprs une exposition dans l'air liquide prolonge pendant six mois 190 ou dans l'hydrogne liquide pendant dix heures 252. Les bactries de Fischer cessent de luire au-dessous de 25, mais des microbes de la viande restent lumineux jusqu' 80. Aucune relation n'existe entre l'optimum thermique de phosphorescence et la vgtabilit des bactries luminescentes. Cependant toutes les influences qui diminuent la vitalit de ces microbes altrent en mme temps leur fonction photogne. L'optimum thermique de Plwtobacter splendidum des eaux de la mer et du sable des plages est de 24 pour la luminosit, et 30 pour la multiplication (Beyerinek). Cultivs en srie une temprature assez leve, les microbes photognes continuent de se multiplier, mais perdent peu peu leurs proprits caractristiques. On obtient facilement la culture de ces germes sur les milieux artificiels ; toutefois l'mission de lumire ne se produit qu'en prsence de certains corps. La glatine au bouillon de poisson, additionne de 10 p. 100 de sel marin; convient parfaitement. Beyerinek ajoute de la glycrine, de la peptone et de l'asparagine dans les proportions suivantes : Bouillon de poisson de mer Glatine : Asparagine Peptone Glycrine 1 000 , 80 5 5 10

'

Selon la composition des milieux, la lumire mise varie de teinte. Il n'existe pas de bactries lumineuses dans l'eau douce et il

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semble que le sel marin soit ncessaire leur dveloppement. Les alcalis et surtout les acides teignent la phosphorescence des taux assez faibles^ Les iedols la suspendent, mais ne la suppriment pas (E. N. Harvey), de mme que le chloroforme lorsque le contact n'excde pas ttiite minutes (R. Dubois). L'ther, la benzine, le xylol, l'oxygne sous pression, l'acide cai'bonique, le sublim, sont nocifs ; la saponine, bien que souvent eytolytiqu, se montre sans action. L'oxygne est indispensable la photogense ; seules luisent les parties des cultures exposes l'air. Cependant, si le milieu est liquide, une vive agitation peut le rendre momentanment phosphorescent dans toute sa masse. Aucune radiation n'est mise dans le vide. Le sel marin active nettement la luminescence ; l'ion Cl de NaCl peut tre remplac par d'autres anions, mais l'ion Na ne peut tre remplac que par l'ion Mg (Gerresten). La peptone sert de source d'azote .et de carbone : c'est le seul aliment azot essentiel la phosphorescence. Une raction alcaline ou au moins neutre est ncessaire la culture. Ds que l'acidit apparat, par suite de l'attaque des sucres, la luminosit dcrot sans que la vitalit du microbe soit altre. En transplantant en Srie les colonies les plus lumineuses, on obtient, par cette sorte de slection, des races chez lesquelles la phosphorescence atteint son maximum. B. Causes de la luminescence. La luminescence parat limite au protoplasma du microbe ; elle ne se manifeste jamais dans les cultures filtres ; sa production exige mme l'intgrit des cellules bactriennes. Broyes dans Pair (liquide, celles-ci perdent, en effets leurs proprits caractristiques (Mac Fadyen). Cependant, chez les Insectes, la substance phosphorescente a pu tre isole aprs destruction des organes lumineux ; elle serait de nature collodale, forme de granulations de volume variable, assez fines parfois pour traverser les filtres de porcelaine. R. Dubois suppose que la production de lumire rsulte de la rencontre, en prsence de I-PO et d'oxygne, de deux substances : la lucijrine et la lcifrase. Celle-ci serait une diastase, l'autre un corps fermentescible produit par l'action d'une substance destructible par la chaleur, la colucifrast sur une substance rsistante cet agent, la prlucifrin.

COLORANTES CHALEUR, UMRE,MATIRES L Colucifrase -\- prlucifrine = lucifrine = oxylucifrine Lucifrase -j- lucifrine = lumire Oxylucifrine -j- oxygne

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La taurine, la peptone de Byla, Pesculine et l'ovolcithine peuvent jouer le rle de prlucifrine. Comme R. Dubois, N. Harvey appelle lucifrine la, substance luminescente oxydable et lucifrase le ferment excitateur. Cette lucifrine est lie aux protines ; elle en diffre pourtant par sa solubilit dans l'alcool, les thers, l'acide actique glacial et sa rsistance la digestion trypsique. La lucifrase serait une oxydase ; elle dterminerait la luminescence en agissant spcifiquement sur la lucifrine ; les oxydases ou peroxydases ordinaires ne peuvent la remplacer dans la photogense. III. Production de matires gense, colorantes on chromo-

A. Caractres gnraux des microbes chromognes et des pigments. Un grand nombre de microbes produisent des pigments de. tejntes varies, les uns, solubles et diffusant dans les milieux de culture, pendant la vie PU aprs la mort et l'aut;olyse des germes; les autres, insolubles et restant adhrents aux cellules comme les ndotoxims et les endoenzymes. Ces pigments ragissent en preV sehce de la lumire et des gaz de l'air \ mais ils ne doivent pas tre confondus, avec la chlorophylle et la batrippurpurine qui jouissent de proprits physiologiques particulires et jouent le rle que l'on sait dans l'assimilation d(? CO? atmosphrique. Cependant, on a dcrit un certain nombre de bactries, B, viride, B. virens, B- chlorinum (Engelmann), dont le pigment, comme celui des Algues cyanophyees, e rapproche de la chlorophylle, La chromogense est une proprit contingente des microbes, susceptible de 's'accrotre, de diminuer et de disparatre selon les conditions, de la culture, SUereprsente un des agpects de l'aet!-* vite protoplasmique et du mtabolisme, mais son mcanisme intime reste mal connu. Certaines levures sont chromognes : levures noires, brunes, roses. Il en est de mme des Oospora.;-l'agent du pied de Madura scrte un pigment rouge reflets mtalliques ; deux espces d'Aspergillus produisent galement une matire colorante rouge (Sartory et Barner) ; enfin divers Streptothria;, (iS,violace, armg.

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PHYSIOLOGIE DES JITCKOISES

aurantiaca) tirent leur nom de la teinte de leurs colonies. Les bactries chromognes sont trs rpandues dans le milieu extrieur. Il en est de parasites, tels les staphylocoques et les bacilles pyocyaniques ; mais le plus grand nombre appartient aux espces saprophytes. Les pigments qu'elles laborent prsentent des teintes trs diverses : Jaune citron : Sarchia lutea, Micmcoccus luteus, M. ccreus flavui-, St. citreus. Jaune d'or : B. luteus, Staph. aureus. Rouge vif : Bactries pourpres. Rose : B. prodigiosus. Violac : Beggiatoa rosea persicina. Cinabre : M. cinn&bareus. Bleu clair : B. syncyaneus du lait bleu. Bleu verdtre : B. pyocyaneus du pus bleu. Brune : B. bruneus, B. mesentericux niger. Verte : B. de la diarrhe verte des nourrissons, B. chlororapliis. B. fluorescent liquejaciens et B. fluorescens putridus produisent une fluorescence verte. Une mme bactrie peut scrter des pigments diffrents. Souvent cette diffrence rsulte des conditions de la culture, de la concentration de la couleur, de la composition et de la raction du milieu (le bacille polychrome de Mac, par exemple, donne, selon les circonstances, du vert, du jaune, du bleu, du rouge ou du violet), mais elle .peut galement tenir la coexistence d'autres pigments dans la cellule (b. pyocyanique). On connat mal encore la nature chimique de ces substances pigmentaires. Les unes sont solubles dans l'eau. D'autres, insolubles clans ce liquide, se dissolvent clans les alcools thylique et mthylique, l'actone, l'ther, le chloroforme, la benzine, le sulfure de carbone ; c'est--dire dans les solvants des matires gTasses. Elles ont t rapproches, pour cette raison, des lipochromes. Ces lipochromes microbiens sont saponifiables chaud par la lessive de soude ; ils sont rouges : liporhodines; ou jaunes : lipoxanthine. En prsence de S04H 2 et de N03PI, ils prennent une teinte verte ou bleu sombre (raction de la lipocyanine). Au spectroscope ils offrent deux bandes d'absorption, l'une vers F, l'autre entre F et G. La chlororaphine et la pyocyanine, qui sont cristallisables, se rapprochent, au contraire, par leur constitution, des alcalodes.

COLORANTES CHALEUR, LUMIRE,MATIRES

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Avec Sullivan, dont la classification est uniquement base sur les caractres de coloration des pigments, nous distinguerons trois groupes de ces substances : 1 Pigments bleus ou bleu verdtre, produits par le bacille pyocyanique et des germes analogues ; 2 Pigments rouges et violets; 3 Pigments jaunes et oranges ; 4 Pigments de couleurs varies, comme ceux du B. roseus, M. mycodes roseus et le pigment noir du b. cyaneo-fluorescens ; 5 Pigments fluorescents des bactries fluorescentes. 1 Pigments bleus. La varit la plus intressante est la pyocyanine scrte par B. pyocyaneus, improprement appel bacille du pus bleu parce que, en se dveloppant dans les plaies, il communique au linge des blesss, mais non au pus, une teinte bleue ou bleu verdtre. En 1860, Fordos montra que cette teinte est due une matire parfaitement dfinie, la 'pyocyanine, qu'il obtint l'tat cristallis et dont il fit connatre les ractions. La pyocyanine, de formule C1J-H14N se dissout non seule20, ment dans l'eau, mais dans le chloroforme. Les acides la transforment en un compos rose, soluble dans l'eau et insoluble dans le chloroforme. On utilise cette proprit quand on veut extraire le pigment des cultures qui contiennent, en outre, un pigment vert fluorescent. On traite d'abord le bouillon de culture renfermant les bacilles pyocyaniques par le chloroforme qui dissout le colorant bleu ; l'autre pigment reste en solution. On dcante le bouillon et, pour sparer les matires grasses que le chloroforme a pu entraner, on l'additionne d'un peu d'eau acidule par SO*H2 ou HC1, et on agite. La pyocyanine transforme en sulfate ou chlorhydrate rose passe dans l'eau. On dcante cette eau et on Palcalinise pour rgnrer le pigment bleu qu'on redissout dans le chloroforme. En recommenant plusieurs . reprises ces oprations, on obtient finalement une solution chloroformique de pyocyanine pure qu'on laisse cristalliser par vaporation. En solution alcaline ou en cristaux, la pyocyanine s'oxyde, jaunit et se transforme en pyoxanthose (Fordos). Les rducteurs la dcolorent. D'aprs Ledcerhosc, elle serait scrte sous la forme d'une leucobase, puis transforme en pigment par oxydation. Mais cette hypothse ne parat pas justifie (Aubel). Le pigment bleu scrt par B. Le Monnieri, tudi parPh.Lasseur et P. Vernier, est un vritable colorant. En effet, il

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bleuit la soie immerge dans sa culture en milieu liquide. Cette teinte persiste aprs lavage de la soie l'eau ; elle vire au violet dans une solution ammoniacale ; elle verdit et disparat peu peu dans un acide fort. La matire colorante de B. Le Monnieri imprgne le corps bactrien et les cristaux minraux et organiques ; elle existe en outre sous }a forme de grains traversant les filtres de papier, mais non les bougies F et L. Lgrement soluble dans l'e'au l'tat naissant, puisqu'elle teinte la soie, elle devient ensuite compltement insoluble dans ce liquide et les solvants neutres. Elle se dissout 4an les acides lactique et actique qui se colorent en bleu, puis en vert, par oxydation ; la solution actique traite par NH 3 ou KOH donne un prcipit violet^bleu. La pyridine est un excellent solvant. Lasseur et Vernier estiment que le pigment de B, Le Monnieri a pour origine, comme tous les pigments bactriens, une substance mre produite par la cellule, 2 Pigments rouges et violets. Les premiers sont labors par B. prodigiosus, B, rosaceus mtallodes, B. ruber hatiens. Les pigments violets de B. violaceus et B. janthirvus n'apparaissent que lorsque les milieux contiennent du sulfate de magn= sie et un phosphate, en particulier Je phosphate de potasse. La matire colorante rouge de la varit rythrogne du bacille pyocyanique es^ insoluble dans l'ther, l'alcool amylique, l'actone, le xylol, lgrement soluble dans l'alcool thylique et, davantage, dans l'alcool mthylique, B. prodigiosus scrte un pigment rouge, soluble dans l'alcool t le chloroforme, On sait que ce microbe, trs rpandu, se manifeste de temps en temps par l'apparition de maculatures sanglantes sur diverses substances alimentaires, les hosties particulirement, Sette, en 1819, puis Ehrenberg, en 1848, ont reconnu la nature de ces taches dans lesquelles on voyait un phnomne surnaturel de mauvais augure, Dans les cultures, le pigment, d'abord d'un rouge clatant, devient de plus en plus fonc et se recouvre d'une pellicule reflets fuchsinodes. Pour l'extraire, on dessche la couche dveloppe sur milieu solide, on puise par l'alcool acidifi et on prcipite par l'eau, Le dpt de matire colorante ainsi obtenu ne contient ni soufre, ni phosphore* ni azote- H est soluble dans l'ther, le xylol, la trbenthine, l'huile d'olive, le sulfure de carbone, et,.; Il se comporte comme une leucobasg, jaunit par les alcaliSj vire.au rouge-violet sous Faction des acides, et se dcolore par les rducteurs. Il teint la laine et la

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soie i la couleur ple qu'il leur communique rsiste la lessive, mais s'efface la lumire. Au spectroseope, la solution prsente deux bandes caractristiques, une forte dans le vert, une moins intense dans le bleu. Un certain nombre de bactries, dcrites ou non comme B. prodigiosus, n'en sont que de simples varits :b. de Kiel, B. ruber, B. indiens, etc. Cependant, on note parfois quelques diffrences dans les caractres de solubilit de leur pigment. Celui du bacille de Kiel, par exemple, est lgrement soluble dans l'eau, plus soluble dans les alcools thyliqye et mthylique, insoluble dans l'alcool amylique, dans l'essence de trbenthine, la chloroforme et le sulfure de carbone; l'therle dcolore, mais l'acide chlqrhydrique le fait reparatre. 3 Pigments jaunes et oranges. La pyoxanthose (Fordos) du bacille pyocyanique est un produit d'oxydation de la pyocy^ nine. De mme, le pigment jaune feuille-morte, qui apparat dans, les cultures de ce microbe, rsulte de l'oxydation du pigment fluorescent. B. clilororaphis scrte une matire colorante, la osanthorapliine, susceptible de verdir et de se prcipiter sous la forme de cristaux verts de ohlororaphine lorsqu'elle se trouve en quantit suffisante dans les liquides nutritifs. La xanthoraphine est une substance jaune, trs soluble dans les acides, soluble dans l'eau, l'alcool amylique et le chloroforme, peu soluble dans l'actone, insoluble dans l'alcool thylique. Sa solution aqueuge rduite par le zinc et l'acide chlorhydrique prsente une teinte verte, tandis que sa rduction en milieu alcalin par le zinc, le'fer et le sulfate d'ammoniaque, permet d'obtenir des cristaux verts de ohlororaphine. La chlororaphine cristallise fond $25.9.Elle, est insoluble dans l'eau, le sulfure de carbone, le chloroforme, les carbures d'hydrogne et les alcalis, faiblement soluble dans les alcools mthylique et thylique, trs soluhle dans l'actone, Je phnol et les acides. Par oxydation, elle donne d Voychloro^ raphine de couleur jaune, cristallisant facilement, soluble dan l'alcool, l'ther, le chloroforme et les acides minraux concentrs et prcipitant de ses solutions en prsence de tous les ractifs des alcalodes. Sa composition rponde la formule brute C^JF'PQ (Lasseur). 40 pigments de couleurs varies. Ceux de M. roseus et de M. mycodes .roseus ne se forment qu'en prsence d'acide lactique. Ils sont insolubles dans l'eau, l'alcool, le chloroforme et l'ther. Le pigment noir observ dans les cultures de bacille

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pyocyanique contenant de la tyrosine est d l'action d'une diastase, la tyrosinase, sur cette substance. Les cultures de Sporotrichum sur carotte, pomme de terre, glose peptone, glycose ou maltose 3 p. 100 prennent galement une teinte brune ou noire aprs une ou deux semaines ; elles restent blanches si elles sont insuffisamment oxygnes. La matire colorante est insoluble dans l'eau, les acides, les alcalis et les solvants des matires grasses ; elle parat se former uniquement clans les spores et la surface du milieu (D. J. Davis). 5 Pigments fluorescents. Quand on examine une solution d'osine la lumire, on observe un dichrosme trs marqu. Expose dans une chambre noire, l'action d'un rayon lumineux, cette solution met une lueur qui diffuse autour d'elle et disparat en mme temps que la cause excitatrice. C'est cette extinction rapide qui distingue la fluorescence de la phosphorescence durable produite par certains microorganismes, bien que ces deux modes d'mission lumineuse aient la mme origine physique et un dterminisme commun. B. fluorescens liquefaciens, B. fluorescens putridus, B. pyocyaneus, B. chlororaphis et de nombreux autres germes mettent, dans leurs milieux de culture, une fluorescence due des matires colorantes dissoutes. Le pigment fluorescent du bacille pyocyanique est soluble dans l'eau et dans le chloroforme ; les acides le font disparatre, les alcalis le rgnrent et l'avivent ; par oxydation il se transforme en un pigment feuille-morte. La fluorescence de B. chlororaphis s'observe dans les milieux synthtiques dpourvus de fer, mais elle s'vanouit pour faire place une coloration jaune brun, puis brune, quand on ajoute une quantit suffisante de ce mtal. Lorsqu'on prcipite l'aide de l'ammoniaque ou du sulfhydrate d'ammoniaque le fer de ces liquides brunis, la fluorescence se manifeste de nouveau, comme si sa disparition rsultait de la combinaison du fer et du ehromogne qui le produit. D'aprs Lasseur, les proprits fluorescignes du B. chlororaphis dpendent non de la prsence de tel ou tel minral, mais de la nature des aliments azots et carbons-' et de la proportion relative de ces aliments et des corps minraux contenus dans les milieux.

COLORANTES L CHALEUR, UMIRE.MATIRES B. Conditions qui influent sur la chromogense. .

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Les pigments bactriens sont vraisemblablement labors au sein des cellules l'tat de leuco-drivs. Leur production est lie une srie de facteurs que nous allons passer en revue : temprature, lumire, pression, raction et composition des milieux, aration, passages par l'organisme animal. 1" Temprature. L'optimum thermique varie selon les espces; le plus souvent, il correspond 20-25. B. prodigiosus et les types voisins croissent abondamment 37-40, mais sans donner de pigment ; Erythrobacillus pyosepticus prsente seulement une faible teinte rose. Le pigment du bacille rouge de Thvenin se dveloppe surtout 38, mais il apparat galement 12. A 42 la teinte est rose ple (Fortineau). Transplant dans des milieux la temprature optimum, le microbe scrte immdiatement la matire colorante caractristique. Cependant, par cultures successives de ces divers germes 37, on obtient des races dfinitivement incolores (Schottlius). Le chauffage rpt 50 pendant cinq minutes fait galement perdre aux microbes leurs proprits chromognes ; mais celles-ci rapparaissent, aprs un temps plus ou moins long, dans des conditions favorables. En cultivant le B. prodigiosus des tempratures croissantes, Dieudonn est parvenu lui faire produire son pigment vers 37 exclusivement. Il en serait de mme pour B. fluorescens putridus, dont la temprature optimum de dveloppement et de scrtion pigmentaire est de 22. A 35, la culture est pauvre et incolore ; aprs dix-huit passages 35, on obtient des colonies vigoureuses, pigmentes (Dieudonn). Si l'on reporte alors les bacilles 22, ils poussent mdiocrement et leurs colonies restent blanches. . On ne connat pas exactement le mcanisme de cette variation qui rsulte peut-tre d'un accroissement de l'activit diastasique des bactries et de la modification corrlative de leur mtabolisme. < D'autres bactries comme B. pyocyaneus, B. indiens, B. mesentericus niger produisent leur pigment la temprature de l'tuve : 37". 2 Lumire. La plupart des microbes qui nous occupent sont indiffrents .un clairage modr. B. prodigiosus et B. violaceus prsentent les mmes proprits chromognes au grand jour et

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l'obscurit. Cependant M. ochroleucus ne donnerait de pigment qu' la lumire (Prove), et l'insolation transforme le bacille de Kiel en un organisme incolore (Laurent). Une longue exposition la lumire diffuse dcolore les cultures d'Erythrobacillus pyospticus ; la lumire solaire totale ou les seuls rayons rouges provoquent Je rome gffet en soixante-dix heures seulement. Un clairage diffus ne modifie pas l'laboration de la chlororaphine (Lasseur). 3 Pfssion, '-*- Qn fait perdre toute proprit chromogne au bacille pyoeyanique, en soumettant ses cultures pendant quatre heures, l'acide carbonique, sous la pression de 50 atmosphres (d'Arsonyal t Charrin). 4- Bmtion des milieux. D'une manire gnrale, l'alcalinit entrave la chromQgense, tandis que la neutralit ou une lgre acidit des milieux se montrent souvent favorables. Par cultures $ueQivesdans les liquides nutritifs trs alcalins, surtout 37?, le B, prodigiosus peut mme devenir incolore. Au contraire, le bacille pyoeyanique et les bacilles fluorescents exigent une raer tion basique. L/alcalinit et l'acidit des milieux paraissent modifier la hromogense par simple action chimique sur le pigment. La, matire colorante du bacille du lait bleu, par exemple, grise en bouillon neutre, vire au bleu ciel dans les milieux acides et au rouge dans les milieux alcalins. Un grand nombre d'autres bactries changent galement de teinte avec le temps, par suite des variations ractionnelles qu'elles communiquent leurs milieux de culture. Mais il n'est pas impossible que l'acidit agisse sur la cellule mme et entrave directement l'laboration pigmentaire, C'est ainsi que certains microbes chromognes, cultivs dans des liquides contenant 1 p. 100 de dextrine, ne forment pas ou trs peu de matire colorante et que celle-ci n'apparat pas davantage quand on neutralise la culture. 59 Composition des milieu. Habituellement, les milieux trop riches ne conviennent gure, et les milieux amylacs constituent le terrain d'lection. Aussi, bien des microorganismes pigments, comme le B, JMithiiyiis isol des eaux, prsentent des colonies incolores sur glatine et teintes sur ponime de terre. Mais ces observations portant sur des milieux trs complexes sont empiriques et d'un intrt restreint. On ne peut en effet tudier les variations de la chromogense en fonction des substances nutritives offertes aux microbes qu'en, employant des milieux

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synthtiques o se trouvent dissous des corps chimiquement dfinis^ en quantits dtermines sacides amins1,- niides,- hydrats de Crbnj acideg; bases et Sels organiques ou inorganiques, Gssard a utilis dans ses recherchs sur la pyocyngfise un milieu renfermant dli sUCCinate d'ammoniaque, du sulfate de magnsie et du phosphat d'ammoniaque; Eh 1906s Sullivan tj plus rcemment, Aubl et Liot ont prcis ls rlatiQns qui existent entre- la composition des liquids riutritif et l nrofiiogens du bacille pyocyaniqtie. Cultiv en prsence de formiates ammoniacaux, le bacille pyoeyaniqu lie forme pas sa matire colorante Caractristique ; avec le sulfate et le chlorhydrate d'ammoniaque, la chrmogense est inconstante ; avec le nitrate d'ammoniaque la teinte verte fluorescente apparat. L'alanine, la tyrsine et l'acide glutamique favorisent l'laboration des pigments, de mme que l'acide aspartique gauche et l'asparagine, mais non l'acide aspartique inactif et le glycocolle. Les acides et les alcalis n suppriment la fonction chromogne du microbe qu'aux doses nuisibles pour la culture ; le glucose l'entrave ; le saccharose, la mannite lS.p. 100 l'empchent totalement, bien que ces substances ne produisent pas d'acide (Aubel). D'aprs Liot, la prsence d'un sel organique ammoniacal est ncessaire l vgtation du microbe et indispensable l'laboration du pigment. Les sels ammoniacaux ds acides gras Saturs mnobsiques, principalement les actate, propiont, butyrate, valriantes et cproateS sont favorables ; les formiates sont dfavorables ainsi que les Sels ammoniacaux d'aeids gras non saturs moiiobasiques, Sauf les Srbats et ls sels d'acides aromatiques mnobsiques. Parmi les substances organiques azotes, les amins Ptt de chlorhydrate, les amides, seules ou en prsence de glucides, lie conviennent pas l production de la pyocyanin. Si l'ure fait exception cette rgle, cela tient ce qu'elle est transforme en carbonate d'ammoniaque et se combine aux acides organiques provenant de la dcomposition des sucres. Les acides amins sont moins efficaces que les sels ammoniacaux ; l tyrosine est sans effet ; le glycocolle inctif seul, devient actif au contact des glucides. Comme pour l'ure, l'ammoniaque dgage l cours de l dsamination de ces corps se combine avec les eides organiques qui rsultent de l dislocation des alcools polyatomiques ou des sucres ajouts au milieu. Les sels ammonia-

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eaux seuls, les glucides (monoses, polyoses) et les alcools polyatomiques ne peuvent servir la nutrition du bacille pyocyanique et la chromogense. Mais le microbe se dveloppe et labore la pyocyanine en prsence de glycrine, mamiite, glucose ou lvulose dans les milieux qui renferment, en mme temps, du carbonate ou de l'azotate d'ammoniaque. L'uranium collodal, dose infime, active la culture du bacille pyocyanique et la formation de la pyocyanine, mais ce mtal ne peut faire apparatre la matire colorante chez les races dpourvues de fonction chromogne (Agulhon et Robert). En cultivant divers microbes dans le milieu synthtique suivant : Asparagine Succinate d'ammonium Glycrine Glucose . . . Phosphate dipotassique Sulfate de magnsium Chlorure de calcium Sulfate ferreux Eau O'r,90 Oer,l() 2 grammes. 1 gramme. 0sr,25 0sr,5() 0sr,04 Oer,OI 100cent, cubes

Lasseur et Thiry ont observ des variations qualitatives et quantitatives trs tendues de la scrtion pigmentaire et mme la formation de matires colorantes par des bactries naturellement achromognes. Lorsqu'on supprime le sulfate ferreux dans le liquide nutritif, on obtient, des cultures incolores ; la teinte caractristique reparat instantanment quand on restitue le sel de fer. Les proprits chromognes des microbes considrs dpendent donc troitement de la prsence du sel de fer, en particulier de sa base, car le sulfate de fer peut tre remplac par un sel organique ou inorganique du mme mtal, mais non par les sels de manganse, nickel, cobalt, zinc et chrome. Il semble que la matire colorante ainsi produite rsulte de la combinaison du sel de fer avec une substance primitivement incolore labore par les bactries. 6 Aration. La chromogense bactrienne est nulle l'abri de l'air, sauf pour quelques espces comme Spirttlum rubrum, S. nigrum et Diplococcus pyogenes, de teinte orange. La pyocyanine bleue, la chlororaphine verte, les matires colorantes scrtes par les bacilles violets et certains bacilles rouges . s'oxydent trs facilement. C'est probablement en raison de cette

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oxydabilit intense que les pigments de Sp.rubrum n'apparaissent que dans le vide ou dans les gaz inertes. Les cultures de B. clororaphis effectues en prsence de 35 p. 100 d'oxygne sont d'une couleur jaune plus ou moins fonc ; les cristaux verts de chlororaphine se constituent rapidement quand l'atmosphre contient de 35 65 p. 100 d'oxygne* Au-dessus de 65 p. 100, leur prcipitation est retarde; 85 p. 100, leur formation est ralentie (Lasseur). 7 Antiseptiques. Us peuvent engendrer des races achromognes (B. prodigiosus). En ajoutant aux cultures de bacille pyocyanique des quantits croissantes de sublim corrosif, on diminue de plus en plus et on finit par supprimer la scrtion de la pyocyanine (Charrin et Roger). L'acide benzoque 4 p. 100, l'anhydride sulfureux 6 p. 100, l'acide salicylique 2 p. 100 exaltent la fonction chromogne d'Erythrobacillus pyosepticus ; l'acide picrique 1 p. 100 et le permanganate de potasse, au contraire, l'entravent. 8 Age des cultures. Les vieilles cultures se dcolorent ou changent de teinte pour les raisons que nous avons dj indiques ; elles peuvent aussi abandonner moins facilement leurs pigments ou les concentrer leur surface (B. prodigiosus). C. Production naturelle et exprimentale de races varies de bactries chromognes. Les microbes qui ne scrtent qu'une seule couleur se transiforment parfois, la longue, en races incolores. Ce phnomne est frquemment observ* chez le B. prodigiosus et le B. violaceus ; il se manifeste -moins souvent chez les fluorescents et devient presque une exception chez les bactries lipochromes. Il convient d'ailleurs de distinguer les variations de l'espce des variations individuelles. Celles-ci sont banales et se traduisent pour le B. prodigiosus, par exemple, par l'apparition de colonies blanches au milieu de colonies pigmentes. Toutefois ces variations spontanes semblent plus apparentes que relles, car elles peuvent rsulter, ainsi que le fait justement remarquer Ph. Lasseur, du mlange de plusieurs races dans la colonie repique sur les milieux solides pour l'isolement. Exprimentalement, avons-nous dit, on obtient des varits incolores d'un germe chromogne quelconque en faisant varier la temprature de culture, la raction et la composition du mi-

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lieu, etc. Inversement, des bactries naturellement achromognes comme B. subtiliSf B. inesentei'icus, B; megatherium produisent, dans un liquide spcial, un voile color en rose ou rouge et teintent le milieu en rose, rouge ou violet-rouge (Lassur et Thiry ). Ls bactries qui laborent plusieurs pigments se jDrtent particulirement bien l'tude de ces variations, comme le montrent les belles recherches de Gessard sur le bacille cyanogne et le bacille pyocyanique. 1 Races d bacille cyanogne. *Ce bacille, dcrit par Ehrenberg, donn un pigment gris dans le lait, Un pigment gris et un pigment fluorescent dans le bouillon et uniquement ie pigment fluorescent dans l'albumine d'oeuf. Par cultures successives en milieu albuminex, on cre une varit qui, reporte dans le bouillon, n'y scrte que le pignlent gris. En chauffant la race normale, on obtient dans l bouillon un type exclusivement fluorescign. Enfin, en chauffant ce type fluorescigne, on aboutit une varit incolore. Reportes sur un milieu glucose additionn de lactate d'ammoniaque, toutes ces varits recouvrent leurs proprits originelles, 2 Races du bacille pyocyanique. L'espce pyocyanique est caractrise par la production de pyocyanine, mais elle englobe diffrentes varits stables qui diffrent par la nature de leurs pigments secondaires. A ce point de vue, Gessard distingue : ' La varit Pe, pyocyano gne normale, qui scrte de la pyocyanine et un pigment jaune-rouge, avec prdominance de la pyocyanin.La Varit E, rythgn-,qui produit les mmes pigments avec prdominance du jn-rouge. L varit M, mlanogn) qui produit du pigment noir et de la fycynin. 8"BcilluS L Mnhiri (Lssur). -Sur la glatine 15 p* 100, glticos 1 pi 100, B. Le Monniefi forme de petites colonies arrondies, bleues au centr, jaunes ou verdtres la priphrie. Aprs quatre passages' l temprature du laboratoire sur glatine 15 p. 100, glcse 1 p, 100, on observe deux sortes de colonies, ls unes vertes, ls plus nombreuses ; les autres bleues, plus petites. 20, la culture est plus rapide. Aprs trois jours, les colonies dveloppes sont blu-lir ou jaune-verdtre. Les jus guivantSs l nrribre ds colonies bleues augmente par transformation ds colonies vrdtrs ; ll mme temps la protolyse s'accrot autour des colonies bleues.-

CHAPITRE LOCOMOTION

XIV

ET MANIFESTATIONS SENSITIVES I. MOTILIT.

Toute particule solide, en suspension dans l'eau ou dans un liquide peu visqueux, prsente des mouvements trmulatoires, rapides ou lents, plus ou moins tendus, dont la forme et l'amplitude dpendent du diamtre et de la composition des granulations, de la temprature et de la composition chimique du milieu ambiant. Cette agitation des particules est lie aux mouvements molculaires ; elle constitue le mouvement brownien. Toutes les bactries vivantes ou mortes, examines dans un liquide aqueux, manifestent cette mobilit passive : mais seules les espces cilies sont capables de se dplacer activement. Qu'on examine au microscope, entre lame et lamelle, une macration quelconque abandonne l'air et l'on constatera combien sont variables les mouvements des germes qui la peuplent. Certains traversent rapidement le champ microscopique, d'autres sont anims de lentes oscillations ; il en est qui vont et viennent, s'arrtent et repartent ; quelques-uns manifestent une sorte de trpidation incessante ou tournent sur eux-mmes; les spirilles se meuvent en hlice, etc. Un examen systmatique des grandes espces microbiennes permet d'analyser leurs mouvements, surtout lorsqu'ils ne sont pas trop rapides. On peut en distinguer deux formes principales : progression et. mobilit sur place. L'tude des gros spirilles montre que la progression est due une rotation autour de l'axe longitudinal. Cette rotation se mesure en prenant comme points de repre des granulations protoplasmiques ou des corpuscules qui adhrent mcaniquement la surface des microbes. Produit par l'agitation des cils polaires, le mouvement se propage de l'extrMlCROBIOLOGIE 2'-(Mit. 10 GNRALE,

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mit des flagelles vers leur base et, de l, gagne le corps mme fle la bactrie. Il est hlicodal et non ondulatoire (Migula). La mobilit in situ se constate principalement chez les bacilles garnis de cils sur toute leur tendue ; mais comme ces organismes sont peu volumineux, il est difficile de prciser le phnomne. Migula a vu tourner sur eux-mmes des paquets de Sarcina mobilis. Bien que dpourvues de flagelles, les Beggiatoa sont cependant susceptibles de se dplacer, comme les Oscilfaires, en glissant la surface des liquides ou des corpuscules s