PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO ESPECIAL PARA AISLAR MICROORGANISMOS

M. ALVARADO, E. RUIZ, M. SAYRE Facultad de Ingeniera Qumica y Textil, Universidad Nacional de Ingeniera 23 de Setiembre, 2009

RESUMEN Uno de los pasos ms importantes para la identificacin de los microorganismos es observar el campo de crecimiento el hbitat y su desenvolvimiento en alimentos artificiales preparado en el laboratorio. Para darnos una visin ms general llamaremos al material alimenticio donde crecen los microorganismos el medio de cultivo y el hecho de que crezca nuestros microorganismos el cultivo. Luego para que nuestro cultivo salga satisfactoriamente estos microorganismos deben tener las condiciones adecuadas para su crecimiento, algunos de estos son: temperatura, grado de humedad, presin de oxigeno, pH adecuado, nutrientes adecuados en el medio de cultivo y alta esterilidad. El agar como medio solido para la preparacin del medio de cultivo es el ms utilizado. Con mnimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en l.

PROCEDIMIENTO PARA LA ELABORACIN DEL MEDIO DE CULTIVO El medio de cultivo tiene una concentracin de 39 g/l preparado est compuesta por: 15g de agar 2 g de almidn 17 g de peptona

Para prepararlo empezamos pesando 3 g del medio de cultivo solido, luego lo rehidratamos en 60 ml de agua destilada(des ionizada)el erlenmeyer, tapamos el erlenmeyer con una tapa de gasa y algodn, como el medio de cultivo que preparamos fue un medio solido entonces tapamos el matraz y lo calentamos en bao mara agitando para homogenizar la solucin(durante unos 15 min aproximadamente)hasta observar que ya no haya ningn grumo en el erlenmeyer, una vez homogenizada la solucin(el medio de cultivo), se debera dejar enfriar hasta 50 C y medir el pH que tiene q ser igual a 5.5, pero por razones de tiempo, y por tener un medio de cultivo fresco(un ao desde la adquisicin) ya no realizamos estos pasos. Una vez homogenizada la solucin pasamos a distribuir cierta

cantidad(aproximadamente 15 ml) en cada tubo de ensayo(2 tubos ), una vez distribuida la solucin tapamos los tubos con la tapa rosca (pero no muy cerradas para evitar que revienten) y el matraz con la tapa de algodn, y los colocamos en la autoclave para esterilizarlos (121C ,10psi y 30 min) pero cerciorndonos de que la autoclave este bien cerrada, pasado el tiempo de esterilizacin sacamos los tubos (antes de sacarlos cerrar bien las tapas roscas) y los matraces del autoclave y colocamos los tubos inclinados sobre un papel o una franela (para creas mayor superficie dentro del tubo) y los dejamos enfriar. Despus procedimos a distribuir el medio de cultivo en las placas petri ,para ello antes tuvimos que desinfectar el rea de trabajo, con alcohol y prendimos el mechero unos minutos antes de de proceder a la distribucin, para la distribucin cada miembro del grupo restante realizo la distribucin en cada placa petri, se realizo dicha distribucin sujetando con la mano derecha la placa petri y con la mano izquierda el matraz con el medio de cultivo, colocando delante de ellos el mechero encendido, llenando las tres cuartas partes de la placa petri(tapada ), y dejndola enfriar a lado del mechero hasta q se solidifique , una ves solidificada el medio de cultivo cubrimos las placas petri con el papel craft, les colocamos la fecha y su contenido(medio de cultivo para aislar microorganismos) para guardarlos hasta la siguiente semana,(los tubos de ensayo sern guardados colocndolos inclinados sobre una franela y no verticales en la gradilla)

MATERIALES Y METODO Hay que analizar primero con que tipo de microorganismo estamos tratando y tomando las condiciones fsicas donde estas se desenvuelvan de manera espontanea, los gases que afectan el desarrollo microbiano en su mayora es el oxigeno y dixido de carbono calificndolos as en cuatro grupos: aerbicas (que son las que se desarrollan libre en presente de oxigeno), anaerbicas ( que se desarrollan en ausencia de oxgeno), anaerbicas facultativas (que se desarrollan en presencia como en ausencia del oxigeno) y microaerofilas (que crecen en pequeas cantidades de oxigeno). El medio de cultivo que utilizaremos como esta preparado para una levadura esta no es patgena lo que significa no utilizaremos infusin de carne, sangre; en nuestro medio de cultivo solo utilizaremos peptonas. La utilizacin de los tubos de ensayo y la caja petri permitirn aumentar la regin de cultivo y har que los microorganismos consuman y consigan rpidamente el alimento, antes de ello la esterilidad del material es muy importante ya que cualquier impureza no permitir que el cultivo sea satisfactorio. Por ultimo la autoclave es tan necesaria para la solidificacin y esterilizacin de los materiales para luego introducir nuestro microorganismo.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS AMELIA SANTOS Macas, CIENCIA COMBINADA, Editorial Reverte S.A, Pg. 118. GMEZ PERAL P, Fernndez Ruiz-Pereda c, Villanueva Pelayo P. Garanta de calidad en la central de esterilizacin. La Autoclave 1999; 2: Pg. 47-49. http://www.biologia.edu.ar/microind/crecimiento%20bacteriano.htm Fecha de consulta 12/09/2009 http://es.encarta.msn.com/media_461536440/Levadura_del_pan.html

ANEXO NUEVO MEDIO DE CULTIVO, LOGRO DE BIOCEN Guantnamo, CUBA 26 agosto (Redaccin Central).- Un nuevo medio de cultivo de ltima generacin que permite reducir hasta en cuatro veces el tiempo de diagnstico de la salmonella, figura entre los logros ms recientes del Centro Nacional de Biopreparados (BioCen). Este producto del tipo cromognico resulta adems ms preciso que los tradicionales en la identificacin de ese microorganismo, lo cual facilita poner de inmediato el tratamiento adecuado e impide el desarrollo de la enfermedad conocida como salmonelosis. BioCen es el nico fabricante en Cuba de medios de cultivos, con ms de 130 renglones, entre estos varios de nuevo tipo utilizados en anlisis clnicos, la industria alimentaria y la preservacin del medio ambiente. La investigadora Meyln Ortega dijo a la AIN que los esfuerzos en la obtencin de productos de mayor calidad contribuyen a la salud de la poblacin, as como a la sustitucin de importaciones y la ruptura del bloqueo impuesto a Cuba por los Estados Unidos. Puesto en marcha hace ahora 17 aos, BioCen comenz elaborando solo 14 medios de cultivos, cifra incrementada casi 10 veces, con calidad avalada por las normas internacionales ISO 9000. FOTOS DE LA PRCTICA DE LABORATORIO REALIZADA

Figura N 1: Calentamiento de nuestro medio cultivo para homogenizarlo.

Figura N 2: Colocando en la canastilla del autoclave nuestros tubos y matraz.

Figura N 3: En la primera: Ya colocado el medio de cultivo en la caja petri. En la segunda dndole un ngulo a los tubos de ensayo para aumentar la superficie del cultivo.