BIOTECNOLOGIA

As enzimas, importantes componentes do metabolismo de todos os seres vivos, tm a capacidade de promover e acelerar reaes qumicas. Microrganismos ou substncias com essa propriedade j eram usados por populaes humanas muito antigas para modificar alimentos fermentar uvas e fabricar o vinho, ou alterar o leite e produzir queijo, por exemplo. Depois que os cientistas desvendaram a atuao das enzimas, estas passaram a ser cada vez mais empregadas, com variadas finalidades. Hoje, essas protenas especiais so teis inclusive na indstria, no apenas na rea de alimentos, mas em muitos outros setores.
Solange Ins Mussatto, Marcela Fernandes e Adriane Maria Ferreira Milagres Departamento de Biotecnologia, Escola de Engenharia de Lorena, Universidade de So Paulo

EN
PODEROSA
PHILIP GOULD/CORBIS/LATINSTOCK

Produtos naturais encontrados em abundncia no corpo humano e na natureza, as enzimas so protenas capazes de promover e acelerar reaes qumicas, que regulam grande nmero de processos biolgicos. Presentes em microrganismos, animais e vegetais, elas so usadas direta ou indiretamente pela humanidade h milhares de anos, mas sua importncia s foi reconhecida em meados do sculo 19, quando cientistas descobriram como atuam. A partir de ento, e sobretudo no sculo 20, aumentou rapidamente o conhecimento sobre tais substncias, e foram determinados os mecanismos de ao e as estruturas de milhares delas. Essa maior compreenso possibilitou o emprego dessas protenas especiais em processos industriais de diferentes reas: mdica, alimentcia, txtil, qumica, de papel e celulose e muitas outras. vantajoso usar enzimas na indstria, porque elas so naturais, no txicas e especficas para determinadas aes. Alm disso, so capazes de alterar as caractersticas de variados tipos de resduos, contribuindo para reduzir a poluio ambiental. O mercado brasileiro de enzimas, embora pequeno diante do mundial, apresenta grande potencial, em funo da enorme disponibilidade de resduos agroindustriais
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e do dinamismo dos setores industriais citados acima. Nas clulas, as enzimas esto envolvidas em todos os processos bioqumicos. Para atuar corretamente, porm, precisam de condies especficas, pois so ativas apenas em uma faixa estreita de acidez-alcalinidade (pH) e so sensveis a mudanas nesse fator e na temperatura do meio. Os microrganismos so a principal fonte de enzimas de aplicao industrial, mas diversas podem ser obtidas de animais (pancreatina, tripsina, quimotripsina, pepsina, renina e outras) ou vegetais (papana, bromelina, ficina e outras). Hoje, porm, como possvel modificar geneticamente os microrganismos para que forneam qualquer enzima, a tendncia substituir as produzidas por vegetais e animais pelas de origem microbiana. O uso de enzimas em processos industriais de grande interesse, em especial devido facilidade de obteno (por biotecnologia) e s vantagens em relao aos catalisadores (aceleradores de reaes) qumicos, como maior especificidade, menor consumo energtico e maior velocidade de reao. Alm disso, a catlise enzimtica tem outros benefcios, como o aumento da qualidade dos produtos, em relao

NZIMAS
FERRAMENTA NA INDSTRIA
MORTON BEEBE/CORBIS/LATINSTOCK

BIOTECNOLOGIA

catlise qumica; a reduo dos custos de laboratrio e de maquinrio, graas melhoria do processo; ou a fabricao controlada de pequenas quantidades.

Medicamentos e anlises clnicas Vrias enzimas tm propriedades que permitem seu uso como medicamentos. So exemplos as que tm ao antibitica ou antiinflamatria (lisozima, bromelina, hialuronidase e outras), as que auxiliam a terapia da leucemia (L-asparaginase) ou facilitam a digesto (papana, bromelina, tripsina e outras). Em geral, enzimas utilizadas com essa finalidade devem ter pureza e especificidade altas, antigenicidade baixa (para evitar reaes imunolgicas) e estabilidade em condies fisiolgicas. Alm das aplicaes teraputicas, diversas enzimas so empregadas na sntese de frmacos (penicilina, por exemplo). As lipases, que degradam gorduras, so teis em reaes qumicas necessrias produo de remdios. Na rea mdica, aplicaes de grande interesse so o diagnstico e prognstico de doenas e o acompanhamento do tratamento, por meio da deteco de enzimas em anlises laboratoriais. Alguns desses diagnsticos so feitos, por exemplo, com dosagens de enzimas como amilase (pancreatite aguda), aspartato-aminotransferase e transaminase glutmico-oxalactica (infarto, doenas hepticas e musculares), aldolase (doenas musculares), creati- 4

Atuao na produo de alimentos As

enzimas tm destacado papel no setor alimentcio, pois podem influir na composio, no processamento e na deteriorao dos alimentos. Elas s vezes so indesejveis: provocam, por exemplo, o escurecimento de frutas e vegetais ( o caso das polifenoloxidases), o rano de farinhas (lipases e lipoxigenases) e o amolecimento de tecidos vegetais (enzimas pcticas). Em certas situaes, porm, a deteco da atividade prejudicial de uma enzima em um produto pode servir como indicador da eficincia de uma operao. No leite pasteurizado, por exemplo, a constatao da atividade de fosfatase indica que o processo trmico no foi bem executado. Da mesma forma, se a peroxidase est ativa em vegetais que passaram pelo mtodo de secagem conhecido como branqueamento, o processo foi ineficaz. Por outro lado, existem vrios exemplos do uso de enzimas com o objetivo de modificar matrias-primas e/ou obter produtos especficos (ver Aplicaes em variados processos).

A fermentao de malte ( esquerda) e de uva, para a fabricao de bebidas, realizada por enzimas de microrganismos

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APLICAES EM VARIADOS PROCESSOS

Na panificao, a enzima alfa-amilase promove a decomposio do amido,
que leva produo de maltose, aumentando a maciez e a textura da massa e do miolo e mantendo o po fresco por mais tempo. J a amilase maltognica e a xilanase do estabilidade massa, enquanto a protease altera a elasticidade e a textura do glten e melhora a cor e o sabor do po. No processamento de amidos, enzimas como glicose isomerase, alfa-amilase, beta-amilase, pululanase e isoamilase convertem o amido em dextrose ou xaropes ricos em acares simples.

Na indstria de laticnios, a quimosina promove a coagulao do leite (para a produo de queijos), a lactase decompe a lactose em acares mais simples, a protease quebra protenas de soro. Neste e em outros setores, as lipases decompem gorduras.

nacinase e creatina-fosfotransferase (infarto e doenas musculares), fosfatase cida (cncer da prstata e metstase) e fosfatase alcalina (doenas hepticas e sseas), entre muitas outras. A anlise enzimtica muito importante, em alguns casos, para o estabelecimento da causa, da localizao e da extenso da leso, para o controle do tratamento e para a constatao da cura.

enzimas mais complexo (as hemicelulases) para sua degradao. Tais enzimas incluem xilanases, que rompem ligaes entre molculas de xilose; mananases, que quebram ligaes entre molculas de manose; glucuronidases, que rompem ligaes entre cidos urnicos e molculas de acares (como xilose e manose), e outras.

Enzimas, celulose e papel Muitas enzimas

interessam indstria de papel e celulose. Para produzir papel, composto basicamente de fibras de celulose, preciso picar a madeira, transform-la em polpa, por processos qumicos, e retirar dessa polpa a hemicelulose, a lignina, certas resinas e outros componentes. Enzimas capazes de realizar algumas dessas tarefas permitem, nessa indstria, substituir produtos qumicos responsveis por srios problemas ambientais. Fungos e outros organismos que obtm alimento (glicose) da madeira degradam a celulose por meio da ao conjunta de trs grupos de enzimas denominadas celulases: (1) as endo-1,4-beta-glucanases, que quebram a longa molcula de celulose, ao acaso, em variados fragmentos; (2) as exo-1,4-beta-glucanases, que dividem os fragmentos em pedaos ainda menores; e (3) as 1,4-beta-D-glucosidases, que degradam tais pedaos, liberando molculas simples de glicose (ver figura). J a hemicelulose, por ter estrutura qumica diferente, requer um conjunto de

Celulose

Endo - 1,4 - - glucanases

A quebra das longas molculas da celulose, um dos componentes da madeira, em fragmentos cada vez menores pode ser feita em etapas, por meio da utilizao de diferentes enzimas

Exo - 1,4 - - glucanases

1,4 - - D - glucosidases

) Molcula de glicose

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Enzimas como papana, bromelina e ficina ajudam a amaciar carnes, e outras so empregadas nos processos de produo de bebidas alcolicas. No caso das bebidas destiladas, a alfa-amilase e a glicoamilase decompem o amido. No caso dos vinhos, a pectinase facilita a prensagem, a filtrao e a clarificao e reduz o tempo de processamento. Nos dois tipos de bebidas, as proteases quebram protenas. As cervejarias usam diferentes enzimas para liquefazer e fermentar a matriaprima (alfa-amilase), aumentar o teor de certos acares (glicoamilase), aumentar a velocidade de filtrao (glucanase), remover compostos indesejveis (pentosanases) e evitar a turbidez do produto final (papana, bromelina ou ficina).

sucos de frutas,

Na rea de

a pectinase facilita a extrao, clarificao e filtrao do suco, a celulase liquefaz o tecido vegetal e permite extrair pigmentos do fruto e a glicoamilase decompe o amido, evitando turvao e gelatinizao durante o processamento.

FOTOS SXC.HU

A lignina, por sua vez, degradada por duas classes de enzimas: algumas que produzem perxido de hidrognio e outras (as fenoloxidases, divididas em peroxidases e lacases) que precisam dessa substncia para atuar. Essa degradao contribui para o branqueamento da polpa de celulose (ver Operrios microscpicos em ao). Diversas outras enzimas tm aplicao na indstria de papel e celulose, em especial as lipases, que ajudam a remover impurezas (resinas e outras), aumentando a produtividade do processo e elevando a qualidade do produto final.

de absoro de tintas por fibras sintticas, e amilases eliminam gomas usadas para aumentar a resistncia dos fios no processo de tear. Outras enzimas (peroxidases e catalases) reduzem os resduos de substncias usadas no alvejamento de tecidos.

Aumento do poder de limpeza cada

vez maior o nmero de produtos de limpeza que contm enzimas, em especial amilases, proteases, lipases e celulases. Cada uma delas ataca um tipo de substncia, tornando-a solvel em gua e facilitando sua remoo: as amilases atuam sobre o amido (presente em manchas de molhos, frutas, chocolate e outras), as proteases quebram protenas, as lipases degradam gorduras e as celulases ajudam a remover fibrilas de celulose que aparecem com o tempo nos tecidos (essa remoo melhora o brilho e a maciez das roupas). A atuao conjunta dessas enzimas amplia muito a ao dos detergentes. A combinao, por exemplo, de lipases com proteases e celulases facilita a remoo de manchas como as de batom, frituras, manteiga, azeite, molhos, e mesmo os difceis pontos encardidos de colarinhos e punhos. Quando adicionadas a detergentes de uso hospitalar, domstico e industrial, tais enzimas agem digerindo e dissolvendo resduos orgnicos (sangue, fezes, urina, vmitos e outros), higienizando instrumentos cirrgicos e partes (tubos e outras) de aparelhos (endoscpios e outros), e removendo contaminantes das roupas hospitalares. Esses resduos podem ser re- 4
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Tecidos com maior requinte Na indstria

txtil, a presena das enzimas tem crescido nas ltimas dcadas. Elas podem atuar nas fases de fiao, tingimento e acabamento dos tecidos. Nesse ltimo caso, ajudam a limpar a superfcie do material, a reduzir as pilosidades e a melhorar a aparncia, o brilho, o caimento, a resistncia e a estabilidade. Em outra aplicao relevante, certas enzimas (proteases) conferem resistncia ao encolhimento s fibras da l. Em muitos processos txteis, substncias qumicas sintticas podem ser substitudas por enzimas, que tm ao mais especfica e geram benefcios ambientais, pois so biodegradveis e dependem de menor consumo de energia. A celulase, por exemplo, torna os tecidos mais lisos e macios. Pode ainda produzir a aparncia lavada dos jeans, destruindo menos as fibras do que a pedra-pomes, tambm empregada com esse fim. Lipases, proteases e nitrilases melhoram a capacidade

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movidos com lavagem a altas temperaturas, sem enzimas, mas o emprego destas permite reduzir a temperatura, o consumo de gua e a energia mecnica na limpeza e aumenta sua eficcia. Detergentes com enzimas podem ainda substituir produtos custicos, cidos e solventes txicos (que agridem o ambiente e desgastam materiais e instrumentos).

Novos cosmticos no mercado

Outra rea em que as enzimas vm ganhando espao a de cosmticos. J h enzimas incorporadas formulao de vrios produtos presentes no mercado, como tinturas, depilatrios, alisantes de cabelo, sais de banho, dentifrcios, desodorantes, produtos anticaspa, curativos e outros, ou aplicadas em limpezas de pele (descamao) e produtos aromticos. Enzimas

que quebram protenas tm recebido ateno especial da cosmetologia, com destaque para a papana, capaz de promover a penetrao de compostos na pele e atuar como agente de raspagem e depilao em produtos de uso local. importante, no desenvolvimento do cosmtico, conhecer as caractersticas da enzima usada, dos demais componentes da frmula e do recipiente onde acondicionado, alm das condies de armazenamento, para evitar reaes entre essas substncias, que prejudicariam a eficcia e a segurana do produto.

Uso no tratamento de efluentes O desenvolvimento das chamadas tecnologias limpas, ou seja, que reduzem o impacto ambiental de uma atividade industrial, tambm conta com a participao de enzimas. Um exemplo o uso na produo de polpa de celulose e no branqueamento desta. Combinadas com tcnicas de processamento, as enzimas permitem reduzir ou at eliminar o uso de cloro nessas atividades industriais, evitando a emisso de substncias organocloradas altamente txicas e mesmo cancergenas para o ambiente. Enzimas so aplicadas ainda no tratamento de efluentes e resduos industriais. As guas residuais das indstrias alimentcias, por exemplo, contm gorduras slidas ou lquidas (graxas e leos), que causam srios problemas de poluio, ao formar filmes na superfcie dos corpos receptores (impedindo o fluxo do oxignio necessrio vida aqutica) e ao causar entupimentos. A adio de lipases a esses efluentes gera substncias mais simples, facilmente degradadas, evitando tais problemas. A indstria txtil uma das maiores geradoras de efluentes lquidos, em geral txicos e contendo corantes. Tais resduos so normalmente tratados por processos fsico-qumicos que precipitam e/ou coagulam parcialmente os resduos, seguidos de tratamento biolgico com lodos ativados, que contm bactrias capazes de degradar as substncias orgnicas ainda no removidas. Embora esse sistema retire at cerca de 80% dos compostos poluentes, o lodo acumulado, com elevada concentrao de corantes, no pode ser reaproveitado. Por isso, tm sido estudados vrios microrganismos capazes de degradar poluentes txteis com eficincia e baixo custo. Entre eles esto Bacillus subtillis (que oxida certos corantes), Phanerochaete chrysosporium, Pleorotus ostreatus, Trametes (versicolor e hirsuta), Coriolus versicolor, Pycnoporus (sanguineus e cinnabarinus), Phlebia tremellosa, Neurospora crassa e Geotrichum candidum (todos degradam variados corantes e mineralizam poluentes resistentes degradao), Agaricus bispora (produz a enzima tirosinase, que altera a estrutura dos corantes, levando sua precipitao, o que facilita a remoo).

OPERRIOS MICROSCPICOS EM AO
A busca por microrganismos que produzem enzimas capazes de decompor a celulose (celulases), a hemicelulose (hemicelulases) e a lignina (ligninases) e que, por ter caractersticas variadas, possam ser usadas em processos industriais, vem sendo feita pelo grupo de pesquisas em microbiologia e bioqumica do Departamento de Biotecnologia da Escola de Engenharia de Lorena (EEL/ USP). Esses estudos visam determinar com preciso como as enzimas encontradas atuam sobre os materiais lignocelulsicos, contribuindo para o desenvolvimento de tecnologias biolgicas de polpao da madeira e branqueamento de polpas celulsicas no Brasil. Em 1998, um dos trabalhos revelou que a capacidade degradadora da cepa brasileira do fungo Thermoascus aurantiacus, isolada de pilhas de cavacos de eucalipto em uma empresa de polpa e papel, tem caractersticas diferentes das observadas na maioria das cepas desse fungo conhecidas anteriormente. Em 1999, outros trabalhos revelaram que essa cepa apresenta alta produo da enzima xilanase (2.880 micromoles por minuto e por grama de substrato) durante a fermentao em estado slido de bagao de cana-de-acar. J no farelo de trigo, esse fungo produziu cerca de 2.700 micromoles/min da enzima por grama de substrato. Em 2004 foi demonstrado que a produo de xilanase por T. aurantiacus depende principalmente da natureza e concentrao do substrato. No ano passado, estudo sobre a biodegradao de madeira de eucalipto (Eucalyptus grandis) e pinho (Pinus taeda) pelo fungo Ceriporiopsis subvermispora revelou nveis diferenciados (para cada tipo de rvore) de secreo de hemicelulases e celulases. Em sntese, alguns trabalhos desenvolvidos pelo grupo de pesquisa da EEL/USP indicaram que, quanto mais extensa a degradao da biomassa vegetal (ou seja, a infestao pelo fungo), maior a taxa de produo das enzimas pelo fungo.

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As pesquisas feitas em uma grande empresa produtora de enzimas industriais utilizam sofisticados mtodos computacionais

NOVO NORDISK

SUGESTES PARA LEITURA

AQUARONE, E., BORZANI, W., SCHMIDELL, W., LIMA, U.A. Biotecnologia industrial, volume 3 (Processos fermentativos e enzimticos) e volume 4 (Biotecnologia na produo de alimentos). So Paulo, Editora Edgard Blcher, 2001. CASTRO, H. F.; MENDES, A. A.; SANTOS, J. C. e outros. Modificao de leos e gorduras por biotransformao, in Qumica Nova, v. 27-1, p. 146, 2004. COSTA, R. B.; SILVA, M. V. A.; FREITAS, S. P. e outros. Enzimas industriais: avaliao do mercado nacional (disponvel na internet em http:/ /www.im.ufrj.br/ ~biazutti/jic/ programacoes/ SESSAO_PAINEL_ IQP-08.pdf ). LEMOS, J. L. S. Seleo de microrganismo para produo de xilanases em bagao de cana-de-acar, in Srie Tecnologia Ambiental, v. 35, 2006 (disponvel na internet em http://www. cetem.gov.br/ publicacao/ cetem_sta_ 35.pdf ).

Essenciais nos biocombustveis

Os exemplos mais comuns de biocombustveis, que podem ser empregados nos motores de forma isolada ou misturados com combustveis convencionais, so o biodiesel, o bioetanol e o biogs. A utilizao dessas fontes de energia renovveis, biodegradveis e no txicas vem crescendo em todo o mundo, o que aumenta a importncia do uso de enzimas em sua produo. O primeiro pode ser produzido a partir de variadas fontes, como leos vegetais crus e refinados, resduos da extrao de leos vegetais, leos usados em cozinha e gorduras animais, com o uso de enzimas do tipo lipases, com alto rendimento. No caso do bioetanol, usado h dcadas no Brasil como combustvel para automveis, a degradao enzimtica da biomassa vegetal (principalmente bagao e palha de cana-de-acar) bastante estudada hoje. Tal processo consiste no uso de celulases para quebrar as longas molculas de celulose, gerando molculas menores (acares) que em seguida so fermentadas e transformadas em etanol. O bioetanol considerado mais potente que o lcool comum e at 20% menos poluente. No entanto, o custo das enzimas empregadas no processo precisa ser reduzido para tornar a produo de bioetanol de celulose economicamente vivel. O biogs uma mistura gasosa combustvel que pode ser produzida a partir de diversos resduos orgnicos (esterco de animais, lodo de esgoto, lixo domstico, resduos agrcolas, efluentes industriais e plantas aquticas) por digesto anaerbia, ou seja, por degradao de matria orgnica pela ao de

bactrias na ausncia de oxignio. O biogs um combustvel muito menos poluente que o carvo, a gasolina e o diesel, pois sua combusto no libera fuligem nem monxido de carbono.

O mercado de enzimas O mercado mundial

de enzimas industriais estimado hoje em US$ 2,3 bilhes anuais e tem trs segmentos: enzimas tcnicas (destinadas a indstrias de tecidos e de produtos de limpeza), enzimas para alimentos e bebidas e enzimas para rao animal. As principais enzimas de aplicao industrial so proteases, amilases, lipases, celulases, xilanases e fitases, e as maiores empresas produtoras so europias: Gist-Brocades (Holanda), Genencor International (Finlndia) e Novo Nordisk (Dinamarca). A ltima detm, sozinha, cerca de metade do mercado mundial de enzimas industriais. No Brasil, em 2005, as importaes de enzimas chegaram a US$ 31 milhes e as exportaes a US$ 3 milhes. As mais importadas foram amilases (US$ 4 milhes), seguidas de proteases (US$ 2,5 milhes). O mercado brasileiro de enzimas, embora ainda pouco representativo (cerca de 2% do total mundial), revela grande potencial, devido enorme gerao de resduos agroindustriais e ao dinamismo das indstrias de alimentos, medicamentos, tecidos e celulose/papel. A reduo do custo de produo de enzimas favorecida, no pas, pela possibilidade de bioconverso de subprodutos agrcolas como farelo de trigo, farelo de algodo, casca de soja e outros. Acredita-se, por isso, em um aumento rpido do uso de enzimas, de forma geral, e em particular em processos industriais, no pas.

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