PONIENDO LOS MICROBIOS A TRABAJAR

Poniendo los microbios a trabajar

PONIENDO LOS MICROBIOS A TRABAJAR

Quin se molestar en fabricar un producto qumico cuando puede hacerlo un microbio? J. B. S. Haldane, 1929

INTRODUCCIN
Aunque la biotecnologa es considera por muchos un desarrollo reciente, se encuentra presente en la vida cotidiana ms de lo que la gente se imagina, desde hace muchos aos. Por ejemplo, la produccin de antibiticos que se inici a mediados del siglo XX, es considerada como la primera aplicacin de la biotecnologa a la vida cotidiana de las personas. Para comprender mejor esta afirmacin es necesario, previamente, establecer que se entiende por biotecnologa y definir qu es un antibitico. La biotecnologa se define tradicionalmente como el empleo de organismos vivos para la obtencin de un bien o servicio til para el hombre. Actualmente, la biotecnologa moderna emplea tcnicas de ingeniera gentica, e incluye la produccin de protenas recombinantes, el mejoramiento de cultivos vegetales y del ganado, el empleo de organismos para limpiar el medio ambiente, y otras aplicaciones industriales. Los antibiticos pueden definirse como molculas con actividad antimicrobiana y, originalmente, eran el producto del metabolismo de hongos y bacterias. De lo anterior se desprende que los antibiticos para uso humano, que se obtienen a partir de los microorganismos, son productos biotecnolgicos, y se consideran la primera aplicacin de la biotecnologa a la industria farmacutica. Ahora bien, todas las investigaciones que han permitido el descubrimiento de microorganismos tiles tendran escasa importancia en biotecnologa, si no fuera por los procesos de fermentacin. Este trmino se aplica a cualquier proceso en que se cultivan microorganismos en grandes cantidades para producir algn tipo de sustancia y su xito depende, tanto de la eleccin del microorganismo ms apto para procesos de fermentacin a gran escala, como de la eleccin del que produce la mayor cantidad del producto requerido. Aunque el trmino biotecnologa no se haba an acuado en aquella poca, el descubrimiento y el desarrollo de la penicilina contienen muchos de los ms importantes elementos que caracterizan a la biotecnologa actual. La historia acerca de las circunstancias que rodearon el descubrimiento de la penicilina y de cmo lleg a ser el primer antibitico fabricado en cantidades suficientes para salvar la vida de millones de personas se utiliza, por aquel motivo, para ilustrar los principios generales de la seleccin y la fermentacin.

Prof.: Mara del Carmen Zanaboni

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DEL LABORATORIO A LA INDUSTRIA

El efecto letal del filtrado de un cultivo de Penicillium sobre las bacterias Gram-positivas fue descrito en primer lugar por Fleming en 1928. Aunque l se dio cuenta de las posibilidades mdicas de la penicilina, el estmulo para su produccin a gran escala fue la guerra mundial de 1939/45. Se dispona ya de la mayor parte de la experiencia tecnolgica necesaria, especialmente a partir de las fermentaciones de la levadura de panificacin y de la acetonabutanol pero, an as, el rpido desarrollo de la fermentacin de la penicilina, su extraccin y purificacin a gran escala fue un logro impresionante. De hecho, los equipos modernos de fermentacin con agitacin y aireacin se desarrollaron simultneamente con la fermentacin de la penicilina. En la fabricacin moderna de penicilina pueden distinguirse distintas etapas:

Propagacin de cultivos: Las tcnicas tradicionales para la mejora de organismos estn relacionadas con procedimientos aleatorios mediante pruebas que proporciona la naturaleza. Mediante el empleo de rayos X, rayos ultravioletas o sustancias mutagnicas se inducen mutaciones que conducen al mejoramiento de las cepas hasta encontrar aquella que resulte ms adecuada. El hongo utilizado industrialmente para la produccin de penicilina es Penicillium chrysogenum. El primer sistema de produccin de penicilina fue el conocido como mtodo de superficie, donde el hongo creca en la superficie de una capa de medio de cultivo en bandejas. Pero despus de 1944, el desarrollo del mtodo de fermentacin sumergida permiti disminuir los requerimientos de espacio y, consecuentemente, los costos de produccin. En la actualidad se utilizan tanques fermentadores que alcanzan los 20.000 a 115.000 litros de capacidad llamados biorreactores. Como en la mayora de los procesos fermentativos, el microorganismo debe
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ser cultivado especialmente antes de ser inoculado en el biorreactor, hasta alcanzar un volumen conveniente, en cada proceso de fermentacin.

BIORREACTOR

Aporte de nutrientes: El moho requiere del suministro de nutrientes como fuente de energa y materias primas para que sus clulas sean capaces se sintetizar sus productos. El caldo de cultivo para la fermentacin se obtiene por infusin acuosa de maz, lactosa y compuestos inorgnicos conteniendo hidrgeno, oxgeno, fsforo y nitrgeno (necesario para la formacin de ADN, ARN, membranas), azufre (para formas protenas), hierro, cobre y zinc.
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El Penicillium consume con gran avidez la glucosa, que ocasiona un gran crecimiento, aunque escasa produccin de penicilina, y lactosa que produce menor crecimiento pero mayor produccin de penicilina. Por lo tanto, con un suministro de ambos azcares se obtiene un equilibrio entre crecimiento y produccin. Del macerado del maz se obtiene el cido fenilactico que proporciona el grupo bencilo de la molcula de bencil penicilina mejorando el rendimiento de la penicilina y la actividad metablica. En el transcurso de crecimiento del cultivo, la glucosa y otros compuestos fcilmente metabolizables proporcionan los nutrientes para la fase de crecimiento logartmico y los sacridos superiores, cidos orgnicos y otros compuestos lentamente metabolizables, mantienen la actividad durante la fase de produccin de penicilina. El Penicillium casi no elabora penicilina durante la mayor parte de su ciclo biolgico, la sntesis de dicho antibitico parece estar limitada al perodo en que cesa el crecimiento de las clulas del moho.

Aporte de oxgeno: El moho, requiere del aporte de oxgeno para la obtencin de energa, de ah la importancia del control de la cantidad de oxgeno disponible en el ambiente (biorreactor). Cuando se cultiva en pequeos recipientes el oxgeno es aportado por la atmsfera ya que puede difundirse en la masa de clulas en crecimiento, pero esto no es posible a largas distancias como ocurre en los tanques fermentadores, por lo cual, si no se insufla aire estril en los mismos las clulas prximas al fondo podran morir por carencia de oxgeno. La agitacin vertical dentro del fermentador facilita su distribucin en el fermentador. Mantenimiento de un ambiente uniforme: Control de pH La produccin de penicilina es muy sensible a la acidez del ambiente, si es demasiado baja o demasiado elevada disminuye considerablemente la produccin del antibitico. El pH debe ajustarse entre 4,5 y 5 mediante la incorporacin de cidos o bases.
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Control de temperatura El Penicillium genera calor a medida que consume los nutrientes, por lo tanto se debe controlar constantemente la temperatura del tanque, aplicando cuando sea necesario ligeras refrigeraciones o calefacciones para mantener una temperatura entre los 23 C y 25 C. Si las temperaturas se elevan demasiado se altera la estructura de las protenas, el ADN u otras molculas esenciales para la vida del moho, y si disminuye rpidamente lo hace tambin el efecto catalizador de las enzimas. Esterilizacin: En casi todos los procesos biotecnolgicos se utiliza una sola especie. De existir otras especies dentro del tanque estas competiran por los nutrientes y podra retrasar el crecimiento del Penicillium o excretar alguna sustancia txica que contamine el producto. Por lo tanto, resulta indispensable la esterilizacin de todo el equipo como as tambin de los materiales introducidos en el biorreactor. Por esta razn la mayora de los procesos biotecnolgicos se realiza por ciclos. Las fermentaciones de penicilina y la produccin de la mayora del resto de los antibiticos requieren de 7 a 8 das para un rendimiento mximo. Una vez transcurrido este tiempo, se vaca el tanque y se limpia antes de reiniciar un nuevo ciclo. Purificacin del producto: La penicilina es un metabolito secundario asociado al metabolismo del nitrgeno. Es una molcula pequea que permite que la extraccin y purificacin no resulten procesos demasiado complejos. En primer lugar se separan las clulas por filtrado del lquido que contiene penicilina y se eliminan. Cuando se aaden compuestos de potasio al lquido, la penicilina forma cristales que precipitan al fondo del recipiente, de donde posteriormente se recogen. Esta forma fundamental de penicilina se denomina penicilina G, la cual se puede modificar qumicamente y convertirla en una amplia gama de penicilinas semisintticas.
PENICILINAS SEMISINTTICAS Aunque fue el primer antibitico que se desarroll, la penicilina contina siendo uno de los mejores disponibles. Su alto cociente quimioterpico (toxicidad para el patgeno diana / toxicidad para el hombre) permite una administracin segura a altas dosis y son raras las reacciones secundarias. Presentaba, sin embargo, un cierto nmero de inconvenientes: La penicilina slo era efectiva contra los patgenos Gram-positivos, en los que inhiba la sntesis de la estructura especfica de su pared celular. No obstante, en el momento de su introduccin, los Gram-positvos causaban, con mucho, las infecciones ms graves. La estructura de la penicilina se destruye a pH bajo y, con gran rapidez, a 37 C. Salvo para el tratamiento de infecciones de la boca o la garganta no se poda administrar oralmente, ya que se inactivaba en el medio cido del estmago.
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La inactivacin por penicilinazas constitua un peligro, tanto durante la fermentacin, en la que los contaminantes productores de penicilinasa (por ej.: Bacillus, spp.) destruan por completo la produccin, como en el tratamiento, pues los patgenos productores de penicilinasa eran resistentes. Algunos de estos inconvenientes se han solventado con el desarrollo de las penicilinas semisintticas. La produccin de varias penicilinas semisintticas constituye una combinacin interesante de sntesis qumica y microbiologa. El material de partida es la penicilina, producida por fermentacin, que se degrada enzimticamente a cido 6-aminopenicilnico (6-APA). Seguidamente, la reaccin con cloruro de amino bencilo produce ampicilina (aminobencil penicilina) la cual reacciona de forma diferente a la bencil penicilina y posee actividad contra las bacterias Gram-negativas (pero a expensas de una actividad ms dbil contra las Gram-positivas) y es resistente a los cidos. La produccin de una variedad de antibiticos semisintticos de amplio espectro que se pueden ingerir oralmente, en vez de inyectados como la propia penicilina, ha mantenido la posicin de la fermentacin de la penicilina como la fermentacin antibitica ms importante.

Esquema general del funcionamiento de un biorreactor

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BIBLIOGRAFA
(2004). Biotecnologa y produccin de antibiticos, Disponible en:
Y OTROS.

http://www.porquebiotecnologia.com.ar/educacion/cuaderno/ec_51.asp?cuaderno=51

BROWN, C. M. Acribia. Zaragoza.

(1989). Introduccin a la biotecnologa.

COUTOULY, G. (COORDINADOR) Y OTROS (2000). Biotecnologa: pasado y presente. Disponible en: http://www.eibe.info KOSS, A. Buenos Aires.
Y IUSEM,

N. (1998). Biologa y biotecnologa. El Ateneo.

ONNA, A. Y OTROS (1996). Biologa molecular y biotecnologa. Del laboratorio a la bioindustria. CONICET. Buenos Aires. PICKERING, W. Y bachillerato. Oxford. Madrid.
OTROS

(1998). Repasa con esquemas. Biologa

PRENTIS, S. (1993). Biotecnologa. Una nueva revolucin industrial. Salvat. Barcelona.

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