Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
Колония rII-мутанта
Колония дикого
типа rII+
Система rII-мутантов фага Т4
• rII-мутанты не дают потомства, когда они инфицируют клетки
Е.coli К (содержащие профаг лямбда), тогда как фаг Т4 дикого типа
(rII+) нормально размножается в Е.coli К.
Система rII-мутантов фага Т4
• rII-мутанты не дают потомства, когда они инфицируют клетки
Е.coli К (содержащие профаг лямбда), тогда как фаг Т4 дикого типа
(rII+) нормально размножается в Е.coli К.
Е.coli В Е.coli К
Система rII-мутантов фага Т4
Эксперимент по скрещиванию двух
rII-мутантов фага Т4:
Клетки пермиссивного хозяина (Е.coli В)
заражают двумя различными rII-
мутантами.
Затем высевают полученных потомков на
клетки Е.coli В и параллельно на клетки
Е.coli К.
Е.coli В Е.coli К
Система rII-мутантов фага Т4
Эксперимент по скрещиванию двух
rII-мутантов фага Т4:
Клетки пермиссивного хозяина (Е.coli В)
заражают двумя различными rII-
мутантами.
Затем высевают полученных потомков на
клетки Е.coli В и параллельно на клетки
Е.coli К.
Подсчитывают количество колоний на
среде с Е.coli В – получают общее
количество потомков от скрещивания.
Е.coli В Е.coli К
Система rII-мутантов фага Т4
Эксперимент по скрещиванию двух
rII-мутантов фага Т4:
Клетки пермиссивного хозяина (Е.coli В)
заражают двумя различными rII-
мутантами.
Затем высевают полученных потомков на
клетки Е.coli В и параллельно на клетки
Е.coli К.
Подсчитывают количество колоний на
среде с Е.coli В – получают общее
количество потомков от скрещивания.
Подсчитывают количество колоний на
среде с Е.coli К – получают число rII+-
рекомбинантов.
Е.coli В Е.coli К
Система rII-мутантов фага Т4
Эксперимент по скрещиванию двух
rII-мутантов фага Т4:
Клетки пермиссивного хозяина (Е.coli В)
заражают двумя различными rII-
мутантами.
Затем высевают полученных потомков на
клетки Е.coli В и параллельно на клетки
Е.coli К.
Подсчитывают количество колоний на
среде с Е.coli В – получают общее
количество потомков от скрещивания.
Подсчитывают количество колоний на
среде с Е.coli К – получают число rII+-
рекомбинантов.
Вычисляют расстояние между двумя
исходными мутациями.
Е.coli В Е.coli К
Почему использована именно система rII-мутантов фага Т4?
Аналоги нуклеиновых
оснований
Профлавин-индуцируемые мутации
Мутагены
Аналоги нуклеиновых
оснований
замещение отдельных
эффект
оснований
2-аминопурин и 5-
примеры
бромурацил
способность к реверсии в
есть реверсия дикий тип под действием
2-аминопурина
Профлавин-индуцируемые мутации
Мутагены
Аналоги нуклеиновых
оснований
замещение отдельных
эффект
оснований
2-аминопурин и 5-
примеры профлавин и акридин
бромурацил
способность к реверсии в
есть реверсия дикий тип под действием нет реверсии
2-аминопурина
Профлавин-индуцируемые мутации
Мутагены
замещение отдельных
эффект ?сдвиг рамки считывания?
оснований
2-аминопурин и 5-
примеры профлавин и акридин
бромурацил
способность к реверсии в
есть реверсия дикий тип под действием нет реверсии
2-аминопурина
Профлавин-индуцируемые мутации
Мутагены
замещение отдельных
эффект сдвиг рамки считывания
оснований
2-аминопурин и 5-
примеры профлавин и акридин
бромурацил
способность к реверсии в
есть реверсия дикий тип под действием нет реверсии
2-аминопурина
Отбор псевдоревертантов
на непермиссивном
хозяине Е.coli К
• Аналогичным образом исследовали поведение новых rII-мутаций FC1. .
Отбор псевдоревертантов
на непермиссивном
хозяине Е.coli К
Получение расщепления в
потомстве от скрещивания
псевдоревертантов и фага
дикого типа
• Аналогичным образом исследовали поведение новых rII-мутаций FC1. .
Отбор псевдоревертантов
на непермиссивном
хозяине Е.coli К
Получение расщепления в
Анализ расщепления и
потомстве от скрещивания
отбор новых
псевдоревертантов и фага
мутантов
дикого типа
• Аналогичным образом исследовали поведение новых rII-мутаций FC1. .
Отбор псевдоревертантов
на непермиссивном
хозяине Е.coli К
Получение расщепления в
Анализ расщепления и
потомстве от скрещивания
отбор новых
псевдоревертантов и фага
мутантов
дикого типа
• Аналогичным образом исследовали поведение новых rII-мутаций FC1. .
Отбор псевдоревертантов
на непермиссивном
хозяине Е.coli К
Получение расщепления в
Анализ расщепления и
потомстве от скрещивания
отбор новых
псевдоревертантов и фага
мутантов
дикого типа
• Аналогичным образом исследовали поведение новых rII-мутаций FC1. .
Отбор псевдоревертантов
на непермиссивном
хозяине Е.coli К
FC(N)FC(N+1)
Получение расщепления в
Анализ расщепления и
потомстве от скрещивания
отбор новых
псевдоревертантов и фага
мутантов
дикого типа
• Аналогичным образом исследовали поведение новых rII-мутаций FC1. .
Отбор псевдоревертантов
на непермиссивном
хозяине Е.coli К
FC(N)FC(N+1)
FC(N)
Получение расщепления в
Анализ расщепления и
потомстве от скрещивания
отбор новых FC(N+1) псевдоревертантов и фага
мутантов
дикого типа
rII+
• Аналогичным образом исследовали поведение новых rII-мутаций FC1. .
Отбор псевдоревертантов
на непермиссивном
хозяине Е.coli К
FC(N)FC(N+1)
FC(N)
FC(N+1)
Получение расщепления в
Анализ расщепления и
потомстве от скрещивания
отбор новых FC(N+1) псевдоревертантов и фага
мутантов
дикого типа
rII+
• Многократно повторив аналогичные серии опытов, Крик и Бреннер
получили целый ряд rII-мутантов этого типа: FC3, FC4, FC5 и т.д.
• Каждая мутация FC(N) способна к взаимной внутригенной супрессии с
мутациями FC(N-1) и FC(N+1).
• Рекомбинация между различными мутантами в серии FC позволяет
получить различные варианты двойных мутантов.
• Многократно повторив аналогичные серии опытов, Крик и Бреннер
получили целый ряд rII-мутантов этого типа: FC3, FC4, FC5 и т.д.
• Каждая мутация FC(N) способна к взаимной внутригенной супрессии с
мутациями FC(N-1) и FC(N+1).
• Рекомбинация между различными мутантами в серии FC позволяет
получить различные варианты двойных мутантов.
Выводы:
• Комбинация двух мутаций - одной четной и одной нечетной
приводит к проявлению дикого фенотипа (взаимная супрессия).
• Комбинация пары четных или пары нечетных мутаций дает
мутантный фенотип (отсутствие супрессии).
Тройные rII-мутанты
Выводы:
• Комбинация трех четных или трех нечетных мутаций приводит к
проявлению дикого фенотипа.
• Комбинации из одной четной и двух нечетных или одной нечетной
и двух четных мутаций приводит к проявлению мутантного
фенотипа.
Тройные rII-мутанты
Выводы:
• Комбинация трех четных или трех нечетных мутаций приводит к
проявлению дикого фенотипа.
• Комбинации из одной четной и двух нечетных или одной нечетной
и двух четных мутаций приводит к проявлению мутантного
фенотипа.
Дикий тип CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU
His – His – His – His – His – His – His – His – His – His – His – His – His
• В группе Крика и Бреннера была изучена индуцированная профлавином rII-
мутация, обозначенная ими как FC0.
• Эта мутация картируется в В-цистроне недалеко от границы с А-цистроном.
Дикий тип CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU
His – His – His – His – His – His – His – His – His – His – His – His – His
Мутация
FC0 CAU CUC AUC AUC AUC AUC AUC AUC AUC AUC AUC AUC AUC
His – Leu – Ile – Ile – Ile – Ile – Ile – Ile – Ile – Ile – Ile – Ile – Ile
• При росте FC0-мутанта на Е. coli В с низкой частотой возникают спонтанные
ревертанты, которые обнаруживаются по образованию колоний на
рестриктивном хозяине Е. coli К.
• Скрещивание 1: Родители: rII<<+>> Х rII+
Потомство: rII+, rIIа и rIIb
• Т.О. большинство таких «ревертантов» не являются истинными –
псевдоревертанты.
Мутация
FC0 CAU CUC AUC AUC AUC AUC AUC AUC AUC AUC AUC AUC AUC
Ревертант CAU CUC AUC AUU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU
His – Leu – Ile – Ile – His – His – His – His – His – His – His – His – His
• Дочерние rII-мутанты, возникающие при скрещивании 1 расщепляются на
два класса - rIIа и rIIb.
• Скрещивание 2: Родители: rIIa Х rIIFC0
Потомство: отсутствие rII+ -ревертантов.
• Скрещивание 3: Родители: rIIb Х rIIFC0
Потомство: образование rII+ -ревертантов.
Т.О. мутанты rIIа – являются собственно мутантами FC0, а мутанты rIIb-
представляет собой новый класс мутаций, которые мы будем называть FC1.
Следовательно, псевдоревертанты rII<<+>> являются не истинными ревертантами,
а двойными мутантами типа FC0 FC1, имеющими дикий фенотип.
Ревертант CAU CUC AUC AUU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU
Дикий тип CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU
• Дочерние rII-мутанты, возникающие при скрещивании 1 расщепляются на
два класса - rIIа и rIIb.
• Скрещивание 2: Родители: rIIa Х rIIFC0
Потомство: отсутствие rII+ -ревертантов.
• Скрещивание 3: Родители: rIIb Х rIIFC0
Потомство: образование rII+ -ревертантов.
Т.О. мутанты rIIа – являются собственно мутантами FC0, а мутанты rIIb-
представляет собой новый класс мутаций, которые мы будем называть FC1.
Следовательно, псевдоревертанты rII<<+>> являются не истинными ревертантами,
а двойными мутантами типа FC0 FC1, имеющими дикий фенотип.
Ревертант CAU CUC AUC AUU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU
РЕКОМБИНАЦИЯ
Дикий тип CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU
Мутация
FC0 CAU CUC AUC AUC AUC AUC AUC AUC AUC AUC AUC AUC AUC
Мутация
FC1 CAU CAU CAU CAU UCA UCA UCA UCA UCA UCA UCA UCA UCA
His – His – His – His – Ser – Ser – Ser – Ser – Ser – Ser – Ser – Ser – Ser
Тройные rII-мутанты Выводы:
• Комбинация трех четных или трех
нечетных мутаций приводит к
проявлению дикого фенотипа.
• Комбинации из одной четной и двух
нечетных или одной нечетной и двух
четных мутаций приводит к
проявлению мутантного фенотипа.
При сочетании трех нуклеотидных делеций или трех вставок на достаточно близком
расстоянии друг от друга рамка считывания остается неизменной практически для
всей матрицы. Например, делеция второго, третьего и четвертого А приводит к
следующей структуре мРНК:
Дикий тип CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU
Тройной
мутант CAU CUC UCU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU CAU
His –Leu – Ser – His – His – His – His – His – His – His – His – His – His
• Цель: Доказательство гипотезы, о том что элементарной единицей в
составе нуклеиновой кислоты, принимающей участие в кодировании
одной аминокислоты в последовательности белка, является триплет
нуклеотидов.