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Chromatographie chirale :

La chromatographie chirale est une technique de chromatographie qui consiste en la formation de liaisons non covalentes entre les nantiomres du substrat et l'absorbant chromatographique chiraldonnant des complexes diastroisomres ayant des affinits de liaisons diffrentes. On ne peut parler dnantiomres sans voquer la chiralit qui caractrise le monde vivant. Deux molcules sont dites chirales si, tout comme deux mains, elles sont images lune de lautre dans un miroir, tout en ntant pas superposables. Elles ont la mme structure chimique mais des activits optiques diffrentes. Les deux formes, notes R et S, sont dites isomres optiques ou nantiomres. La sparation de celles-ci est possible notamment grce la chromatographie chirale.

Principe :
Pour comprendre le fonctionnement de ce type de chromatographie, il faut comprendre les grands principes de la chromatographie. La sparation chromatographique est base sur les diffrences de distribution de soluts entre deux phases non miscibles (dont lune est solide), ce qui se traduit, au niveau macroscopique, par une diffrence de vitesses de migration des diffrents constituants du mlange. Cette vitesse est dtermine par un coefficient de partage K : K = concentration du solut dans la phase stationnaire / concentration du solut dans la phase mobile. La thorie thermodynamique est une des thories labore pour expliquer le mcanisme de la chromatographie. Pour une bonne sparation, il faut une colonne efficace (dpend du nombre de plateaux thoriques), cest--dire capable de donner des pics troits, et une bonne rsolution, cest--dire une bonne sparation des deux pics sur le chromatogramme, correspondant aux soluts que lon veut sparer. Tout cela est valable pour la chromatographie chirale, et cette dernire prsente en plus des caractristiques spcifiques. Dans cette technique, le mlange racmique sparer est introduit et va interagir avec la phase stationnaire chirale (PSC). Lobtention de la sparation des nantiomres passe par la formation rversible de complexes diastroisomres dans la colonne de chromatographie (par liaison de van Der Waals entre les soluts que lon veut sparer et le slecteur chiral). Lintrt est que les complexes diastroisomres ainsi forms possdent des proprits physiques diffrentes ; ainsi lun des isomres sera plus accroch que lautre et migrera donc plus lentement, permettant leur sparation physique. Daprs la rgle des trois points, pour une bonne sparation, il doit exister trois points dattache entre la PSC et

un des isomres, avec au moins un des trois dpendant de la strochimie. Les cyclodextrines sont des slecteurs chiraux trs utiliss ; leur intrt provient du caractre hydrophobe de leur cavit permettant laccueil dune molcule et donc la formation dun complexe.

VI.5. LA CHROMATOGRAPHIE CHIRALE :


(ARMSTRONG D.W., Current issues in HPLC Technology, LC.GC International, april 1998, 22-31).Cest W. PIRKLE (PIRKLE W.H. and HYUN M.H., J. Chromatography, 1985, 322 , 309) qui est un desprincipaux initiateurs des ces mthodes analytiques.Traditionnellement cest la sparation des nantiomres qui est considre comme le problme le plusdifficile rsoudre en chromatographie. Avant 1980 aucune solution ntait disponible. Entre 1980 et1990 de nombreuses mthodes ont t mises au point pour atteindre de tels objectifs.Ce sont surtout les sparations des acides amins D et L qui ont suscit le plus de travaux. DAVANKOVet al. (Advances in Chromatpgraphy, Giddings et al. Eds, M. Dekker, New York, 1983, vol 22, p 71) ontainsi propos une phase stationnaire avec de la L-proline greffe. En prsence de Cu 2+ dans la phasemobile, les interactions qui stablissent varient en fonction de lnantiomre.Il en est de mme avec desphases stationnaires silice greffe C8 en prsence de compos amphipolaire C asymtrique

Un exemple de sparation de D et L tyrosine et de D et L tryptophane est prsent ci-dessous.

Remarque : La phase mobile est constitue dun mlange eau/mthanol (85/15) contenant 2 mM de CuSO4. Le dbit est de 1 ml/ min. La colonne de15 x 0,4 cm est remplie de particules de 5 m de diamtre. La dtection est ralise 254 nm . En dehors de cette mthode de sparation par change de ligand, des phases stationnaires chirales ont tdveloppes comme par exemple les phases polythers (formule indique cidessous) ou encore les phasesqui contiennent des molcules complexes comme certains antibiotiques glycopeptidiques (ticoplanine parexemple). Elles permettent entre autre la sparation des D et L acides amins.

LIPKOWITZ K.B. (Intern. Lab., 1993, 15 , 8-12) a propos une modlisation molculaire enchromatographie chirale qui aboutit :k =

avec A = constante, bi moindre carr des coefficients de rgression multiple. Dans cette quation tous les changes phase stationnaire - analyte sont pris en considration. Selon lesconformation relatives des deux structures, la somme de ces changes sera variable en fonction despossibilits striques dtablissement de liaisons et k sera diffrent selon la structure spatiale des analytes.Avec des phases comportant des carbones asymtriques, il sera alors possible de sparer des analytes quisont des diastroisomres

Les changes sont qualifis par PIRKLE de : donneur dlectron: analyse de sulfoxydes, lactames etc accepteur dlectron: analyse damines, alcools, acides amins thiols etc. Le schma danalyse des composs isomres est le suivant :

Il existe une classification des phases chirales base sur les mcanismes impliqus dans la sparation desnantiomres qui est la suivante :