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RECOLECCION, TRANSPORTE Y CONSERVACION DE MUESTRAS PARA ESTUDIOS
PARASITOLOGICOS
A- MATERIA FECAL:
-Ficha Tipo: Nombre y apellido. Edad. Residencia actual. Lugar de nacimiento. Residencias anteriores.
Viajes recientes. Existencia de letrinas. Origen del agua de bebida. Costumbre de caminar descalzo
sobre barro y tierra. Ingesta de vegetales crudos. Presencia de animales domésticos. Geofagia.
Parasitados en la casa. Parasitosis padecidas anteriormente. Expulsión actual de parásitos. Motivo del
estudio. Síntomas dominantes. Prurito anal.
-Preparación del enfermo: El paciente debe someterse a una preparación correcta, mínima e
indispensable para evitar Exámenes falsamente negativos o positivos. Por eso se recomienda evitar:
1) Medicamentos opacos no absorbibles. Su presencia en heces hace el examen difícil o imposible:
a- compuestos farmacéuticos: carbón vegetal, sales de bismuto o de magnesio, caolín, creta
o benzonaftol.
b- productos opacos para radiología como compuestos baritados por vía rectal u oral, etc.
c- sustancias grasas, aceites laxantes, supositorios.
2) Alimentos que dejan demasiados residuos. Conviene descartarlos parcial o totalmente durante
los tres días previos y durante el examen: legumbres secas, legumbres verdes, frutos de cutícula
gruesa, granos de envolturas endurecidas, frutas de granos numerosos y de pequeño tamaño.
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Examen de heces frescas con técnicas de Neghme. Se recolecta una sola muestra de materia fecal en
solución fisiológica; debe remitirse rápidamente al laboratorio. Ventajas: Se pueden reconocer las formas
vegetativas de los protozoarios. Desventajas: No es seriado.
3 - Métodos de recolección para detección de antígenos en materia fecal y/o para PCR (recomendaciones
del CDC):
ü Detección de antígenos de protozoarios en materia fecal: Consultar las instrucciones del kit
diagnóstico para la selección de la toma de muestra más adecuada en cada caso (materia fecal fresca,
congelada o fijada). Se desaconseja el uso de PVA. También se desaconseja el uso de métodos de
enriquecimiento en el caso de detección de antígenos de Giardia por ELISA.
ü Diagnóstico por métodos de biología molecular: Las muestras deben recogerse en ausencia de
fijadores y enviadas refrigeradas o congeladas (hielo seco). Como alternativa, las muestras se pueden
mezclar en proporción 1:1 con dicromato de potasio o etanol absoluto y enviarse refrigeradas. Para
protozoarios intestinales, se recomienda previamente hacer tinciones y examinarlas microscópicamente;
en caso de identificar al parásito por morfología, la PCR no se realiza. Es necesario realizar la extracción
del ADN de la muestra de materia fecal previo a la realización de la PCR.
B- SANGRE:
- Ficha tipo: Nombre y apellido. Edad. Residencia actual. Lugar de nacimiento. Residencias anteriores.
Viajes recientes. Tipo de vivienda y características de los alrededores. Animales domésticos. Personas
parasitadas en la vivienda (si es niño, es de especial interés conocer los antecedentes maternos). Ingesta
de carnes mal cocidas. Origen del agua. Reconocimiento de vectores y su presencia en el domicilio o
alrededores. Fecha de comienzo de la enfermedad y diagnóstico clínico presuntivo.Recolección de la
muestra:
- Por punción digital: Limpieza del pulpejo del dedo medio (mano izquierda si el paciente es diestro o
viceversa), con alcohol 70%, dejar evaporar y punzar con lanceta o aguja estéril (de preferencia en la
cara lateral del pulpejo). Con la sangre que se obtenga de esta pequeña herida se procederá a realizar:
ü Gota fresca (si se sospecha una tripanosomosis o filariosis): Colocar una gota entre porta y cubre-objeto
y revisar ordenadamente al microscopio recorriendo toda la preparación. Si la muestra no se observara de
manera inmediata, conviene recoger sangre heparinizada (o con otro anticoagulante) en un tubo (ver más
adelante), y preparar la gota fresca en el momento de realizar la observación. El reconocimiento de los
parásitos se basan principalmente en sus movimientos. Esta técnica carece de coloración por lo que debe
ser observada únicamente en 10X y 40X.
ü Gota gruesa (para tripanosomosis, filariosis y paludismo): Colocar sobre el centro del porta una gota de
sangre bastante grande; sobre ella se agregarán 1 a 3 más, según el espesor de las gotas que se
extraigan. Con el ángulo de otro porta efectuar sobre la gota un movimiento circular raspando la
superficie del portaobjeto. Extender la superficie de las gotas con un movimiento en espiral durante uno a
dos minutos. De esta manera se desfibrinará la sangre y se extenderá la gota con un diámetro de 2 a 2,5
cm. Dejar secar y enviar al laboratorio para su tinción.
ü Microhematocrito: Tomar sangre del pulpejo del dedo (o del talón) y cargar varios capilares
heparinizados. Sellar un extremo con plastilina y centrifugar a 1500-2500 rpm por 5 minutos. Si no se
puede proceder a centrifugar inmediatamente, conviene tomar una muestra de sangre heparinizada en
tubo y preparar con ella los microhematocritos en el momento de procesarlos. Luego de centrifugado se
obtiene 3 capas (suero-GB-GR), se corta el capilar a la altura de los GB y se analiza entre porta y
cubreobjetos. Es una técnica muy usada en la enfermedad de Chagas, y de elección en los neonatos, ya
que los tripomastigotes circulantes sedimentan con los GB.
- Por punción venosa: Se recogen dos muestras, una sin anticoagulantes habitualmente para estudios
serológicos y otra con anticoagulante en condiciones estériles (se empleará para inocular animales y /o
cultivos, realizar gota fresca y/o microhematocrito) y con este material se podrá también realizar el
método de concentración de Strout. NOTA: Las muestras para la determinación directa de un parásito
deberán ser remitidas al laboratorio lo más pronto posible. Materiales necesarios: Lanceta de Franke,
agujas y jeringas descartables estériles, capilares heparinizados, tubos de ensayo, heparina, portas,
plastilina, algodón , alcohol.
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- Por xenodiagnóstico (se utiliza para T. cruzi): Se utilizan ninfas de T.infestans de tercer estadio, con
ayuno previo de 15 días, repartidas en 4 cajas (10 vinchucas por caja). Las cajas se cubren con una gasa
bien fijada y se colocan durante 30 min. sobre el antebrazo del paciente, simultáneamente. Luego se
remiten al laboratorio (sólo se usa en casos especiales, pues el método es engorroso y caro). Materiales
necesarios: ninfas de tercer estadio de T.infestans, cajas para insectos, gasa, bandas elásticas.
C- MATERIAL DE BIOPSIAS:
-Por punción con agujas finas: Esta técnica se utiliza habitualmente para el diagnóstico de
leishmaniosis, en donde se obtiene muestras por punción-aspiración generalmente de médula osea
(esternón o cresta ilíaca) y excepcionalmente de bazo, ganglios o hígado. Una vez obtenido la muestra se
puede colocar en medios de cultivo selectivo para leishmania o realizar frotis y tinción de la muestra.
-Por biopsias de órganos: Se pueden obtener muestras de todo tipo de órganos (pulmón, ganglios,
hígado, bazo, piel, tejido celular subcutáneo, etc dependiendo del parásito sospechado) y luego
procesarlos básicamente por 3 vías: a) enviar material para cultivo; b) realizar improntas directamente
del material sobre los portaobjetos, previamente secado la sangre por aposición sobre un papel filtro
limpio, y luego teñir; c) realizar cortes histológicos para microscopia común o electrónica. Actualmente se
realiza tambien técnicas de biología molecular sobre los tejidos biopsiados.
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GLOSARIO
PARASITO: Todo ser vivo que habita en la superficie o en el interior de otro denominado hospedero, del
que obtiene sustancias nutritivas y el medio ambiente adecuado para su desarrollo y/o multiplicación, y
al que puede llegar a producir daño.
PARASITOLOGIA: Rama de la biología que estudia parásitos eucariontes, tanto protozoarios como
metazoarios (helmintos y artrópodos).
SIMBIOSIS: la asociación entre dos seres vivos independientemente de su duración y del beneficio
obtenido.
GRADOS DE SIMBIOSIS:
Comensalismo: asociación en la cual sólo uno de los seres vivos se beneficia (comensal);el otro
(hospedero) no sufre daño ni beneficio.
Mutualismo: ambos individuos se benefician con la asociación.
Parasitismo: es el resultado de las interrelaciones entre dos organismos, uno denominado hospedero y
el otro parásito. Esta asociación biológica implica dependencia metabólica unidireccional, asociación
íntima y daño potencial al hospedero.
TIPOS DE HOSPEDEROS:
DEFINITIVO: es aquél en el cual el parásito alcanza la madurez y se reproduce sexualmente. En el caso
de parásitos que se reproducen sólo asexualmente pero en más de un hospedero diferente, se
considera hospedero definitivo aquél cuya especie es la más evolucionada filogenéticamente.
INTERMEDIARIO: es aquél en el que el parásito no alcanza la madurez sexual, albergando formas
intermedias (ej. larvas) y/o se multiplica asexualmente.
HABITUAL: es aquel hospedero en el que el parásito desarrolla normalmente su ciclo de vida.
ACCIDENTAL: es aquel hospedero que es parasitado excepcionalmente. Se clasifica en:
a) Vicariante: Cuando permite el desarrollo del ciclo biológico de igual manera que el hospedero
habitual.
b) Paraténico: Cuando no le permite al parásito desarrollar su ciclo como lo hace el hospedero
habitual. En general actúa como diseminador del parásito.
TIPOS DE PARASITO:
Monoxeno: Realiza su ciclo biológico en un solo hospedero.
Heteroxeno: Para completar el ciclo biológico requiere dos o más hospederos.
TIPOS DE CICLO:
Directo: Es aquél en el que interviene un solo hospedero.
Indirecto: Es aquél en el que interviene más de un hospedero.
CICLO BIOLOGICO = CICLO EVOLUTIVO = CICLO DE VIDA: Etapas secuenciales del desarrollo de un
parásito. Si existen fases sexuales, comprenden desde el cigoto hasta la generación de gametas
(potozoarios), o desde el huevo hasta el estadío adulto (helmintos y artrópodos).
CICLO DE TRANSMISION: Ciclo evolutivo más el ecosistema que facilita la llegada del parásito al
hospedero.
VECTOR: Invertebrado que propaga la enfermedad entre un vertebrado infectado y otro sano.
Mecánico: Transporta pasivamente al parásito. Este no sufre ningún desarrollo en el vector.
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Biológico: Artrópodo hematófago que transmite parásitos durante el proceso de alimentación, ya sea
por inoculación o por deyección. El parásito cumple parte del ciclo de vida en él.
RESERVORIOS: Habitat normal donde un agente infeccioso vive, se multiplica y/o crece. Sirve como
fuente de infección para hospederos susceptibles.
EPIDEMIA: Condición en la que ocurre un número elevado de casos de una enfermedad, en un tiempo
limitado y en una área determinada.
PORTADOR: Persona (o animal) infectado, que alberga un agente infeccioso específico de una
enfermedad, sin presentar síntomas clínicos. Es una fuente potencial de infección.
INCIDENCIA: Razón porcentual del número de casos nuevos que aparecen en la población en un período
determinado (tasa de incidencia).
PREVALENCIA: Razón porcentual del número de individuos infectados que existen en una población en
un momento determinado sin distinguir si son nuevos o antiguos (se indica como tasa de prevalencia).
PARASITEMIA: Presencia de parásitos en la sangre. Las parasitemias pueden ser medidas, y en dicho
caso se expresa en n parásitos/ml.
CARGA PARASITARIA: Expresa la cantidad de parásitos estimativos en el tubo digestivo u otro aparatos
o sistemas (usualmente para helmintos), mediante la determinación de su índice de fecundidad.
ICTERICIA: Coloración amarillenta que toma la piel y mucosas por aumento de la bilirrubina en sangre.
COLURIA: Coloración oscura que toma la orina por la presencia patológica de pigmentos y sales biliares.