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Travaux pratiques de Chimie Analytique Electrophorse

Gibbons Andrew - Husson Arnaud - Iacobellis Nicolas Oppitz Gwenal - Raghamy Amir Octobre 2011

Brve introduction thorique


Llectrophorse est une mthode de sparation qualitative utilise pour sparer des espces porteuses de charge, et en particulier des acides amins, base sur leur migration dans un champ lectrique. Les acides amins sont chargs diremment selon le pH du milieu dans lequel ils se trouvent : A pH plus faible que son pH isolectrique (pHiso ), lacide amin se trouve sous forme acide et va migrer vers la borne ngative de la plaque. (1) A pH gal au pHiso , lacide amin est sous forme de zwitterion, cest--dire quil est ionis, mais a une charge globale nulle ; il ne migre donc pas sous linuence du champ lectrique. (2) A pH suprieur son pHiso , lacide amin est sous forme basique et va migrer vers la borne positive de la plaque. (3)

Structure gnrale dun acide amin Source : http ://www.lzlexikon.de/llex/wolle/chemie/gif/zwitterion.gif

Le pHiso est donc un des paramtres qui dtermine la migration de lacide amin, mais il nest pas le seul : la masse molaire joue galement un rle dans cette migration. En eet, plus la molcule a une masse molaire leve, plus la force de friction quelle subira sera importante et moins loin elle migrera. Dans notre cas, le support utilis est une plaque de silice sur laquelle on trace une ligne horizontale lendroit o on va dposer les direntes solutions dacides amins, an de pouvoir mesurer leur dplacement. Nous soumettons ensuite ces acides amins une dirence de potentiel de 150V pendant 15 minutes pour les sparer (grce lappareil SEBIA GD 61 E). La ninhydrine est utilise en tant que rvlateur.

Analyse des solutions dacides amins


Dans les photos qui suivent, la colonne 4 contient la solution inconnue et les colonnes 1 3 contiennent chacune 2 ou 3 acides amins qui ont des Phiso et des masses molaires trs dirents an de bien pouvoir observer chaque tache. Lassociation de chaque tache des talons un acide amin donn est donc dtermine sur base de ces deux proprits, qui rgissent la distance que va parcourir la molcule sur la plaque. Lanalyse qualitative des solutions inconnues est ensuite ralise par comparaison de la distance de migration et de la couleur. 1

1 2 3

Composition de chaque colonne L-Acide aspartique, Glycine, L-Arginine L-Acide glutamique, L-Alanine L-Hydroxyproline, L-Lysine

Solution 3

Acides amins dtects :

L-Acide aspartique L-Acide glutamique L-Alanine

Solution 4

Acides amins dtects :

L-Acide aspartique Glycine L-Alanine

Solution 7

Acides amins dtects :

L-Acide aspartique L-Acide glutamique L-Lysine

N.B. : La solution inconnue est bien dans la colonne de gauche sur cette plaque.

Solution 8

Acides amins dtects :

L-Acide glutamique L-Hydroxyproline L-Arginine

Solution 9

Acides amins dtects :

L-Acide glutamique Glycine L-Alanine

Discussion du sens de migration


Comme dit prcdemment dans lintroduction thorique, les dirents acides amins vont migrer jusqu atteindre un point o le pH est gal leur pHiso . Pour raliser notre exprience, nous avons utilis un tampon de pH 6,86 comme milieu porteur, ce qui signie que le pH sera uniforme et que les acides amins migreront jusqu ce quils atteignent lextrmit de la plaque ou que la tension est leve. Ainsi, les espces dont le pHiso est infrieur au pH du tampon (6,86) vont migrer vers la borne positive et ceux dont le pHiso lui est infrieur vers la borne ngative. On pourrait nanmoins sattendre au fait que le L-Acide aspartique et la LArginine migrent dune distance environ gale vers leur borne respective tant donn que leurs pHiso sont tous deux identiquement dirents du pH du tampon ; On observe que ce nest pas le cas. On sattendrait galement trouver les acides amins de pHiso 6 (L-Hydroxyproline, Glycine et L-Alanine) du ct positif de la plaque et non du ct ngatif. Ces deux observations sexpliquent par le fait que la migration des acides amins sur la plaque nest pas uniquement gouverne par le ux lectro-phortique (migration des ions dans le champ lectrique), mais galement par le ux lectroosmotique, qui va entraner lentiret de la solution vers la borne ngative. Les groupements -SiOH de la plaque de silice, au-dessus de pH = 3 sont dprotons en -SiO- qui vont attirer les cations K+ et Na+ prsents en solution. Ceux-ci migrent naturellement vers la borne ngative et entranent avec eux, par le biais de la couche dhydratation, toute la solution lectrolytique, ce qui explique le dcalage de tous les acides amins vers cette borne. Notons par ailleurs que la L-Lysine migre plus loin sur la plaque que la LArginine qui a pourtant un pHiso plus lev que cette premire. Cest un exemple de la dpendance de la migration en la masse molaire des ions : la L-Arginine a une masse molaire plus leve que la L-Lysine et migre donc plus lentement sur la plaque.

Calcul de la mobilit lectrophortique


La mobilit lectrophortique dun ion donn est donn par la relation = O v est la vitesse de migration de lacide amin, E est le champ lectrique. et est directement accessible ds lors quon mesure la distance parcourue par lion et la longueur de la plaque grce aux relations suivantes v=
d t

v E

E=

V L

O d est la distance parcourue par lacide amin sous linuence des ux lectro-phortique et lectro-osmotique, t est le temps durant lequel les acides amins sont soumis la dirence de potentiel, V est la dirence de potentiel applique, L est la longueur totale de la plaque de silice. Voici un exemple de calcul pour le L-Acide glutamique : = dL 0, 85 7, 5 v = = = 4, 7 105 cm2 V1 s1 E tV 900 150

On trouve de cette manire, pour chacun des acides amins, les valeurs suivantes de mobilit lectrophortique : Acide amin L-Acide aspartique L-Acide glutamique L-Hydroxyproline Glycine L-Alanine L-Lysine L-Arginine d (cm) 1,1 0,85 0,85 0,9 0,85 1,75 1,5 (cm2V-1s-1) 6,1105 4,7105 4,7105 5,0105 4,7105 9,7105 8,3105

Conclusion
Nous avons pu dterminer que llectrophorse est une mthode qui permet de sparer et didentier des acides amins en solution.

Annexe : Donnes concernant les acides amins tudis


Acide amin L-Acide aspartique L-Acide glutamique L-Hydroxyproline Glycine L-Alanine L-Lysine L-Arginine pHiso 2,98 3,08 5,82 6,06 6,11 9,87 10,76 MM (gmol-1) 133,10 147,13 131,13 75,07 89,09 182,65 210,66