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Universit Mohammed V

Agdal
SVI
Cours de
Microbiologie Gnrale
Prpar par
Laboratoire de Microbiologie et Biologie Molculaire, B.P. 1014, Rabat
Tl. (212) 37 77 54 61, e-
Pr El Bekkay BERRAHO
Automne 2009
Facult des Sciences
Rabat
S3
Cours de
Microbiologie Gnrale
Prpar par
Laboratoire de Microbiologie et Biologie Molculaire, B.P. 1014, Rabat Maroc.
-mail: berrahobek@hotmail.com
Pr El Bekkay BERRAHO
Automne 2009
Introduction
I. Historique
Dcouverte rattache l'invention du microscope
Le hollandais Antony Van LEEUWENHOEK (1632 Le hollandais Antony Van LEEUWENHOEK (1632
1. L'poque pasteurienne Louis PASTEUR (1822
Chute de la thorie de la gnration spontane
Infusion de foin
frachement prpare
(milieu de culture)
Couder le col du ballon
Sous leffet de la chaleur
Introduction
Dcouverte rattache l'invention du microscope
Le hollandais Antony Van LEEUWENHOEK (1632-1723) Le hollandais Antony Van LEEUWENHOEK (1632-1723)
Louis PASTEUR (1822-1895)
Chute de la thorie de la gnration spontane
Vapeur
Couder le col du ballon
Sous leffet de la chaleur
Strilisation du milieu
Par la chaleur
Poussire
Aprs un temps trs long
(plusieurs annes)
Refroidissement de linfusion
Aprs un temps trs cout
(quelques heures)
Contact entre poussire
et liquide strile
(quelques heures)
- -organismes existent partout
- Strilisation / chaleur humide
Conclusions:
Extrmit ouverte
Aprs un temps trs long
(plusieurs annes)
Liquide reste strile
Aprs un temps trs cout
(quelques heures) (quelques heures)
Dveloppement des
microorganismes
existent partout
Strilisation / chaleur humide
Pasteur et les fermentations
1857: f. lactique: sucre
Micro
plus petit qu'une levure
1860: f. alcoolique: sucre
1861: f. butyrique: sucre
1866-1876: Maladies du vin et de la bire
La bactriologie mdicale
Louis Pasteur et Robert KOCH (1843 Louis Pasteur et Robert KOCH (1843
Maladie du charbon
Mise au point des techniques d'isolement et d'identification sur
milieu de culture solide
Pasteur et les fermentations (1857-1877)
Acide lactique
Micro-organisme globuleux
plus petit qu'une levure
Ethanol, glycrol
+ CO
2
levures
Acide butirique
Vibrions
(-O
2
)
anarobiose
Maladies du vin et de la bire pasteurisation
La bactriologie mdicale
Louis Pasteur et Robert KOCH (1843-1910) Louis Pasteur et Robert KOCH (1843-1910)
Mise au point des techniques d'isolement et d'identification sur
Bacillus anthracis
2. Lpoque actuelle
La vaccination (1880 1885)
- 1885: la rage
- 1880: cholra des poules,
- 1881: maladie du charbon,
(Joseph Meister : 1er tre humain vaccin contre la rage)
2. Lpoque actuelle
Il y a longtemps: microbiologie = tude des microbes
Actuellement: microbiologie = tude de tous les micro
(les algues, les protozoaires, les champignons et les bactries)
Reproduction rapide
naissance de la gnie gntique
outil privilgi
- tudes gntiques
- tudes biochimiques
1885)
1880: cholra des poules,
1881: maladie du charbon,
(Joseph Meister : 1er tre humain vaccin contre la rage)
Il y a longtemps: microbiologie = tude des microbes
Actuellement: microbiologie = tude de tous les micro-organismes
les protozoaires, les champignons et les bactries)
populations normes et homognes
gntique et des biotechnologies
tudes gntiques
tudes biochimiques
II. Place des -organismes dans le monde vivant
les animaux
les vgtaux
1. Classification contemporaine
les vgtaux
les protistes: englobent tous les
Protistes suprieurs ou eucaryotes
- les algues (sauf les algues bleu
Selon l'organisation cellulaire, les protistes
- les algues (sauf les algues bleu
Protistes infrieurs ou procaryotes:
- Les algues bleu-vert ou Cyanophyces
- les protozoaires,
- les champignons
- les bactries
organismes dans le monde vivant
1. Classification contemporaine
les protistes: englobent tous les -organismes
Protistes suprieurs ou eucaryotes ( cellules volues) :
(sauf les algues bleu-vert),
- les bactries
- les algues,
- les protozoaires,
- les champignons,
protistes se subdivisent en:
(sauf les algues bleu-vert),
Protistes infrieurs ou procaryotes: (cellules de type rudimentaire)
vert ou Cyanophyces

phylogntiquement
procaryotiques
les virus: organismes acellulaires
Archbactries

procaryotiques
eucaryotiques
les virus: organismes acellulaires
Archobactries
parasites obligatoires
2. Comparaison entre cellules eucaryote et procaryote 2. Comparaison entre cellules eucaryote et procaryote
Proprits Procaryotes
Groupes
Bactries, archobactries
Taille Diamtre < 2 m
Structure nuclaire:
Comparaison entre les cellules Procaryote et Eucaryote
Absente
Absents
- Membrane nuclaire
- Nucloles
Unique - Chromosome
Association DNA-histones Non
- prsence d'autre ADN Plasmidique
- Division cellulaire Amitose
- Recombinaison gntique Partielle
Structure membranaire et cytoplasmique:
- Membrane plasmique Prsente
- Mitochondries
- Appareil de Golgi
- Chloroplastes
- Ergastoplasme
Absentes
Absent
Absentes
Absent
- Membrane plasmique Prsente
- Ribosomes
70 S
Procaryotes Eucaryotes
Algues, champignons, protozoaires
plantes, animaux
Bactries, archobactries
Diamtre < 2 m 2 m < diamtre < 100 m
Comparaison entre les cellules Procaryote et Eucaryote
Prsente
Prsents
Plusieurs
Oui
Mitochondriale et chloroplastique
Mitose
Totale
Prsente Prsente
Prsentes
Prsentes
Prsent
Prsent
80 S
Proprits Procaryotes
- Paroi
Prsente
(compose de peptidoglycane) (compose de peptidoglycane)
Systme respiratoire:
Membrane cytoplasmique
Photosynthse:
chromatophores ou chlorosomes
(systme membranaire interne)
Mobilit
- pas de mouvement amibode
(paroi rigide).
- mouvement flagellaire - mouvement flagellaire
Procaryotes Eucaryotes
Prsente
(compose de peptidoglycane)
- Prsente
- Absente
chez animaux et protozoaires;
(compose de peptidoglycane)
- Prsente
chez plantes, champignons et algues
(polysaccharides)
Membrane cytoplasmique Membrane mitochondriale
chloroplastes
chromatophores ou chlorosomes
(systme membranaire interne)
pas de mouvement amibode
(paroi rigide).
mouvement flagellaire
- Mouvement amibode
(eucaryotes sans paroi).
- Mouvement flagellaire.
mouvement flagellaire
- Mouvement flagellaire.
I. Morphologie bactrienne
1. Les coques (Cocci):
Selon le plan de division:
La cellule bactrienne
Selon le plan de division:
Streptocoques
diplocoques
1
Tetrades
1
2
I. Morphologie bactrienne
La cellule bactrienne
Streptococcus
Sarcina sp
Grappes
1 3
2
Grappes
de
raisin
Staphylococcus aureus
Staphylococcus
2. Les btonnets:
- Btonnets droits =
Bacilles
Regroupements: Regroupements:
Diplobacilles
Bacillus subtilis
Bacilles isols
Streptobacilles
Rhodospirillum sodomense
Bacillus subtilis
Lactobacillus delbrueckii
- Bacilles incurvs:
3. Les formes spirales: 3. Les formes spirales:
Treponema pallidum Treponema pallidum
Vibrio cholerae
Spirochaeta zuelzerae
II. Paroi bactrienne
Enveloppe caractristique des procaryotes
Rigide "exosquelette"
Maintient de la forme
Rsistance la forte P.O.i
Permable l'eau et aux Permable l'eau et aux
petites molcules
Peptidoglycane
Gram
Enveloppe caractristique des procaryotes
"exosquelette"
Division cellulaire
Rsistance la forte P.O.i
Support de nombreux Support de nombreux
antignes
Gram
+
Gram
-
1. Composition chimique
a- Les osamines (sucres amins)
OLa N-actylglucosamine
O
CH
2
OH
OH
OH
HO
NH C CH
3
H
H
H
O La galactosamine
NH C CH
3
O
H
Existe chez certaines espces seulement et en faible quantit
OL'acide N-actylmuramique
O
CH
2
OH
O
OH
HO
NH C CH
3
H
H
H
galactosamine:
CH COOH H
3
C
NH C CH
3
O
Existe chez certaines espces seulement et en faible quantit
b- Les acides amins
COOH
NH
2
C H
CH
3
COOH
C
H
CH
3
L-Alanine
COOH
NH
2
C H
CH
2
CH
2
COOH
C
CH
CH
NH
2
ou
D-Alanine
CH
2
CH
2
CH
2
NH
2
L-Lysine
Acide Diamino
COOH
CH
CH
CH NH
2
( Meso)
ou
COOH
NH
2
C
H
CH
2
CH2
COOH
COOH
NH
2
3
Acide D-Glutamique
COOH
C H
CH
2
CH
2
COOH
C H
CH
2
CH
2
NH
2
Alanine
Acide Diamino-Pimlique (DAP)
COOH
CH
2
CH
2
CH
( Meso)
COOH
CH
2
CH
2
CH NH
2
( L )
c- Les acides teichoques
Glycine
Acide aspartique
c- Les acides teichoques
uniquement chez les bactries Gram+
localiss l'extrieur de la paroi
peuvent avoir un rle antignique.
Staphylococcus aureus
Lactobacillus acidophilus
uniquement chez les bactries Gram+
localiss l'extrieur de la paroi
peuvent avoir un rle antignique.
O
CH
2
OH
OH
HO
NH
C
CH3
O
H
H
- Polyribitol phosphate
(Staphylococcus aureus)
CH3
N actyl
Glucosamine
Ribitol
(liaison au peptidoglycane)
O
NH
CH3
O
H
CH
CH
2
HC OH
HC OH
CH
2
O
O
P OH
Ribitol
o=
CH3
P OH
O
CH2
HC OH
HC OH
HC O CO
CH
CH3
2
HN
CH2
O
P O = OH
D-Alanine
Glucosamine
Ribitol
o=
O
CH
2
O
OH
O
O
NH
CO
CH3 H
H
H
N-Actylglucosamine
(liaison au peptidoglycane)
O
CH
2
OH
OH
O
HO
OH
H
H
H
O
b- Polyglycrol-phosphate
(Bacillus subtilis)
OH
H
O
O
Glycrol
Glucose
O
H
(liaison au peptidoglycane)
CH
CH
2
CH
2
O
O
P OH O
Glycrol
P OH O
O
CH
2
HC O CO
CH CH
3
2
HN
CH
2
O
P O OH
O
CH
2
D-Alanine
CH
2
O
OH
O
NH CO CH
3
H
H
N-Actylglucosamine
(liaison au peptidoglycane)
d- Les oses simples
Glucose Galactose
Certains sont spcifiques (Rhamnose chez les
Leurs nature et type dassociation
e- Les lipides
faibles quantit chez les Gram
-
presque absents chez les Gram
+
f- Les acides mycoliques
prsents chez certaines espces particulires (les mycobactries) prsents chez certaines espces particulires (les mycobactries)
acides gras longues chanes (C=
CH
3
(CH2)
17
CH CH
CH
(CH2)
10
CH
Mannose, etc
(Rhamnose chez les Streptococcus du groupe A)
Leurs nature et type dassociation spcificit des antignes
-
(10 22%)
+
(1 2,5%).
prsents chez certaines espces particulires (les mycobactries) prsents chez certaines espces particulires (les mycobactries)
(C=60)
Ex. Acide -mycolique
CH CH
CH
(CH2)
17,19
C
OH
H
CH C
OH
O
(CH2)
23
CH
3
g- Comparaison de la composition
les bactries Gram
+
et
Gram
Abondants
24 - 35 %
4 10
Prsent sans lysine
Prsents
1. Osamines
2. Acides amins
Nombre
DAP
Acides Teichoques
20 60 %
1 2,5 %
Oses
Lipides
composition chimique globale de la paroi chez
et les bactries Gram
-
Gram
+
Gram
-
Abondants Peu
35 %
50 %
4 10 16 17
Prsent sans lysine Prsent avec lysine
Prsents Absents
20 60 % 20 60 %
1 2,5 % 10 22 %
2. Structure molculaire
Le peptidoglycane
Lunit structurale du peptidoglycane, u
- Murine
- Mucocomplexe
- mucopeptide
Lunit structurale du peptidoglycane, u
Glycane
La N-actylglucosamine
O
CH
2
OH
OH
HO
H
H
O
(1-4)
NH C CH
3
O
H
Acide D
Lunit structurale du peptidoglycane, un glucosaminopeptide
Murine
Mucocomplexe
mucopeptide
Lunit structurale du peptidoglycane, un glucosaminopeptide
Glycane
L'acide N-actylmuramique
O
4)
O
CH
2
OH
O
OH
H
H
H
CH
NH C CH
3
O
H
CH 3
C = O
L-Alanine
Acide D-Glutamique
D-Alanine
Lysine ou DAP
Chanon peptidique
L'acide N-actylmuramique joue un
des units glycanes
Structure en rseau du peptidoglycane
rle central dans la polymrisation
La N-actylglucosamine La N-actylglucosamine G
L'acide N-actylmuramique M
Chanon peptidique
Liaison interpeptidique
Structure en rseau du peptidoglycane
Cette structure de polymre en rseau, qui donne la cellule sa
rigidit, est caractrise par:
les (1,4) entre l'acide N-actylmuramique et la N
l'ordre invariable des acides amins qui forment le ttrapeptide
le pontage entre la D-alanine d'un
la liaison -glucosidique qui
teichoque au rsidu N-actylglucosamine
le pontage entre la D-alanine d'un
le DAP d'un ttrapeptide voisin
Cette structure de polymre en rseau, qui donne la cellule sa
actylmuramique et la N-ctylglucosamine
l'ordre invariable des acides amins qui forment le ttrapeptide
d'un ttrapeptide et la L-lysine ou
unie chez les Gram+, l'acide
actylglucosamine
d'un ttrapeptide et la L-lysine ou
voisin
Le peptidoglycane peut diffrer selon
secondaires, en particulier par:
les acides amins du tetrapeptide
la nature des ponts interpeptidiques
Cette dernre diffrence dtermine un rseau plus ou moins serr (compact): Cette dernre diffrence dtermine un rseau plus ou moins serr (compact):
Compact pour les forme bacillaires (liaisons interpeptidiques directes).

L-ala
D-glu
T
D-glu
D A P
D-ala
T
D
D-
DAP
L-
selon les cas par des constituants
les acides amins du tetrapeptide
la nature des ponts interpeptidiques
Cette dernre diffrence dtermine un rseau plus ou moins serr (compact): Cette dernre diffrence dtermine un rseau plus ou moins serr (compact):
Compact pour les forme bacillaires (liaisons interpeptidiques directes).
Pont
Escherichia . Coli
D-ala
-glu
DAP
-ala
Lche pour les formes sphriques

Pont
L-ala
D-glu
L-lys
D-ala
D-ala
D-glu
L-lys
L-ala
L-ala
D-glu
L-lys
D-ala
L-lys-
(Gly)
5

Staphylococcus aureus
sphriques (liaisons interpeptidiques longues),
D-ala
D-glu
L-lys
L-ala
L-lys-
D-ala L-lys D-glu L-ala
L-lys
Micrococcus lysodeikticus
3. Diffrences structurales entres les parois des bactries
Gram + et Gram
En microscopie lectronique:
Nette diffrence structurale entres les
parois des bactries Gram + et Gram
Chez Gram + : paroi paisse (15 80 nm), Chez Gram + : paroi paisse (15 80 nm),
aspect homogne.
Chez Gram - : paroi fine (6 15 nm),
aspect stratifi et htrogne.
3. Diffrences structurales entres les parois des bactries
Gram + et Gram -
Nette diffrence structurale entres les
parois des bactries Gram + et Gram -
Chez Gram + : paroi paisse (15 80 nm), Chez Gram + : paroi paisse (15 80 nm),
aspect homogne.
: paroi fine (6 15 nm),
aspect stratifi et htrogne.
a. Chez les bactries Gram+
Les acides teichoques : deuxime composant
bactries Gram+ ( 50% du PS de la paroi
Leur localisation exacte au niveau des enveloppes est mal connue.
Acides tchoques
Reprsentation des acides tchoques
Chez les Gram+ selon le modle de
Van Driel et al. (1971)
Acides lipotchoques
composant essentiel de la paroi des
paroi et 10% du PS de la cellule totale).
Leur localisation exacte au niveau des enveloppes est mal connue.
P
a
r
o
i
P
a
r
o
i
M
e
m
;

c
y
t
b. Chez les bactries Gram -
En plus du peptidoglycane, on insiste sur la prsence de 2 autres couches
b.1. Lespace priplasmique ou priplasme
Exoenzymes bactries Gram+ :
Priplasme retient les protines labores
dans le cytoplasme:
Un rle dans la dgradation des
(nuclases, phosphatases, pnicillinases
(Colicines) (Exotoxines)
Bactries Gram- :
Un rle dans le transport de certaines
l'intrieur de la cellule (protines
certaines protines peuvent tre
En plus du peptidoglycane, on insiste sur la prsence de 2 autres couches
b.1. Lespace priplasmique ou priplasme
(Protases) (Pnicillinase)
Priplasme retient les protines labores
dans le cytoplasme:
des molcules venant de l'extrieur
pnicillinases...);
certaines substances nutritives vers
(protines de liaisons ou binding proteins);
tre impliques dans la chimiotaxie
b.2. La membrane externe
b.2.1. des protines majeures:
70% des protines de la membrane externe;
groupes pour former des pores
traversent toute la membrane externe et sont fortement lies au
peptidoglycane;
transport des molcules de PM
prfrence les molcules neutres
b.2.2. des protines mineures:
transport spcifique de petites transport spcifique de petites
travers les porines (ex. la vitamine
oligosaccharides comme le maltose)
servent aussi de rcepteurs pour
spcifique au transport du maltose
70% des protines de la membrane externe;
groupes pour former des pores
porines
traversent toute la membrane externe et sont fortement lies au
PM < 600 da; sans spcificit mais de
neutres et les cations.
petites molcules incapables de passer petites molcules incapables de passer
vitamine B12, les nuclosides ou les
maltose);
pour des bactriophages (ex. Lam B est
maltose et la fixation du phage ).
b.2.3. Les lipoprotines
protines lipidiques libres ou fortement lies au peptidoglycane
Ex. lipoprotine de Braun
petite molcule polypeptidique
Chez E. coli 7.5 10
5
lipoprotines/cellule dont les 2/3 sont l'tat
libre et le 1/3 sont lies au peptidoglycane.
petite molcule polypeptidique
extrmit N-terminale des constituants
La partie lipidique est enchsse
des liaisons hydrophobes avec les
Les lipoprotines assurent une cohsion solide de l'ensemble de la
structure.
des liaisons hydrophobes avec les
La partie protinique est associe
liaisons covalentes au niveau du
protines lipidiques libres ou fortement lies au peptidoglycane
de 58 acides amins, portant son
lipoprotines/cellule dont les 2/3 sont l'tat
libre et le 1/3 sont lies au peptidoglycane.
de 58 acides amins, portant son
constituants lipidiques
enchsse dans la membrane externe par
les phospholipides,
Les lipoprotines assurent une cohsion solide de l'ensemble de la
les phospholipides,
associe au peptidoglycane par des
DAP du chanon peptidique.
b.2.4. Les lipopolysaccharides (LPS)
. lipide A:
LPS = Endotoxines
. lipide A:
units disaccharidiques de glucosamine relies entre elles par des ponts
pyrophosphates;
-
considr comme le support de la toxicit,
le lipide A est un glycophospholipide c
longues chanes d'acides gras parmi
constante de l'acide -hydroxymyristique
spcifique et caractristique du
-
Les lipopolysaccharides (LPS)
LPS = Endotoxines
units disaccharidiques de glucosamine relies entre elles par des ponts
considr comme le support de la toxicit,
le lipide A est un glycophospholipide c--d polymre compos de:
parmi lesquelles on note la prsence
hydroxymyristique (un acide gras en C14)
du lipide A.
. Le polysaccharide du LPS:
Composition en sucres variable selon les espces. Cependant on y trouve
toujours un sucre particulier en C8, le ctodsoxyoctonate (KDO).
core (partie centrale du LPS),
Ex. chez Salmonella, le core est compos de
Chane latrale du LPS
chaque chane contient les mmes squences rptitives (jusqu 40);
chaque squences est constitue de 3, 4 ou 5 sucres ;
chez les entrobactries, cette chane latrale est appele antigne O;
chaque squences est constitue de 3, 4 ou 5 sucres ;
cet antigne O comprend quatre hexoses:
Composition en sucres variable selon les espces. Cependant on y trouve
toujours un sucre particulier en C8, le ctodsoxyoctonate (KDO).
- cinq hexoses,
, le core est compos de
- cinq hexoses,
- deux heptoses
- trois KDO.
chaque chane contient les mmes squences rptitives (jusqu 40);
chaque squences est constitue de 3, 4 ou 5 sucres ;
chez les entrobactries, cette chane latrale est appele antigne O;
chaque squences est constitue de 3, 4 ou 5 sucres ;
cet antigne O comprend quatre hexoses:
- Galactose
- Glucose
- Rhamnose
- mannose.
Diffrences structurales entres les parois
des bactries Gram
Peptidoglycane
Prot. Majeures
(Porines)
Acides tchoques
P
a
r
o
i
M
e
m
b
r
a
n
e
Peptidoglycane
(Porines)
Lipoprotine de
Braun
M
e
m
b
r
a
n
e
Phospholipides
Protine
intgrale
Protine
priphriques
Gram +
Diffrences structurales entres les parois
des bactries Gram
+
et Gram
-
LPS
Antigne O
Sucre
Heptose
Ctodesoxy
Octanate (KDO)
LPS
Core
N-Actyl
Glucosamine
Acides gras
Espace
Lipide A

Phosphate
Espace
priplasmique
Gram -
c. Autre types de paroi
Chez les entrobactries, les trois feuillets paritaux sont
intimement souds l'un l'autre.
-
Par contre chez les bactries spirales
-
Par contre chez les bactries spirales
-
-
Chez les Archobactries, l'lment
pseudopeptidoglycane.
N-actyl D-glucosamine ou N
N-actyl D-Talosaminuronique
Les tetrapeptides associes
Chez les mycobactries -
Les tetrapeptides associes
l'acide glutamique et la lysine
Mycobacterium
les acides mycoliques
Chez les entrobactries, les trois feuillets paritaux sont
spirales
Spirochtes
spirales
l'lment structural de la paroi est un
glucosamine ou N-actyl D-galactosamine
Talosaminuronique
associes comprennent l'alanine (L et D),
Spirochtes
-1,3
associes comprennent l'alanine (L et D),
lysine.
Mycobacterium tuberculosis
les acides mycoliques
4. Fonctions de la paroi
a. Maintient de la forme et rsistance la POi
Bacillus subtilis
Gram +
+
*
+
Lysozyme
( dtruit les
Milieu
hypotonique
Gonflement et clatement Gonflement et clatement
de la cellule
NB. le protoplaste a perdu ses proprits
ne fixe plus les bactriophages et ne
a. Maintient de la forme et rsistance la POi
subtilis
Gram +
Lyzosyme
Lysozyme
( dtruit les (1-4))
Milieu isotonique
(1 de saccharose)
Cellule sphrique sans
Paroi = Protoplaste
proprits antigniques,
ne se divise plus
Rgnration
Escherichia
Gram -
+
Lyzosyme
( dtruit les (1
Milieu
*
( dtruit les (1
Milieu
hypotonique
Gonflement et clatement
de la cellule
NB. le sphroplaste conserve toutes
coli
Lyzosyme
(1-4))
Milieu isotonique
(1-4))
Milieu isotonique
(1 de saccharose)
Cellule sphrique avec fragments Cellule sphrique avec fragments
de paroi = Sphroplaste
toutes les proprits de la cellule initiale.
-diffrence entre protoplaste et sphroplaste est logique: lysozyme agit au
niveau des (1,4) du peptidoglycane.
-rle de la paroi: forme de la cellule et rsistance la POi -rle de la paroi: forme de la cellule et rsistance la POi
-Le peptidoglycane ne joue aucun rle
division cellulaire et la fixation des
b. Proprits antigniques
*Chez les bactries Gram
+
:
les acides teichoques ou leurs sous
principaux antignes
Chez les streptocoques, deux catgories d'antignes ont t isols:
diffrence entre protoplaste et sphroplaste est logique: lysozyme agit au
niveau des (1,4) du peptidoglycane.
rle de la paroi: forme de la cellule et rsistance la POi rle de la paroi: forme de la cellule et rsistance la POi
rle dans les proprits antigniques, la
des bactriophages
les acides teichoques ou leurs sous-units osidiques constituent les
, deux catgories d'antignes ont t isols:
bDes antignes de nature polyosidiques: appels antignes C
Classification antignique de LANCE
groupes srologiques: A, B, C, D,
Chaque groupe est caractris par
plusieurs polyosides diffrents. plusieurs polyosides diffrents.
Exemples:
- le groupe srologique A
antigne C
- le groupe srologique G
antigne C
Des antignes de nature polyosidiques: appels antignes C
LANCE-FIELD qui a dfinit plusieurs
D, E, ... O
par un antigne C compos de un ou de
Le rhamnose
streptocoques pathognes pour l'homme
La N-actyl glucosamine
Le rhamnose
La N-actyl galactosamine
bDes antignes de nature protiques: appels antignes M, T, R
La protine M importante sur le plan
Elle permet de diffrencier l'intrieur du groupe A, 56 types
srologiques.
Donc
Un groupe srologique = ensemble de Un groupe srologique = ensemble de
Un type srologique = ensemble de bactries
et une protine
Des antignes de nature protiques: appels antignes M, T, R
plan srologique et physiopathologique.
Elle permet de diffrencier l'intrieur du groupe A, 56 types
de bactries ayant le mme antigne C de bactries ayant le mme antigne C
bactries ayant le mme antigne C
protine M identique
*Chez les bactries Gram
-
:
La plus part des Enterobacteriaceae
Deux principaux antignes:
un antigne somatique
un antigne flagellaire
La spcificit antignique dpend de
leur mode de liaison.
En se basant sur la diversit des
WHITE ont pu classer les Salmonella
srotypes.
un antigne flagellaire
WHITE ont pu classer les Salmonella
srotypes.
Enterobacteriaceae, les Salmonella en particulier,
un antigne somatique O
un antigne flagellaire H
de la nature des sucres ainsi que de
des facteurs O et H, KAUFFMAN et
Salmonella en groupes srologiques puis en
un antigne flagellaire H
Salmonella en groupes srologiques puis en
Le groupe srologique D regroupe
espces de Salmonella ayant en commun
Exemple:
c. Fixation des bactriophages
Proprit lie la paroi o sont localiss les rcepteurs spcifiques.
Ce groupe srologiques se subdivise
( selon la diversit de lantigne
Proprit lie la paroi o sont localiss les rcepteurs spcifiques.
Chez les bactries Gram-, les rcepteurs sont en majorit des
protines mineurs de la membrane externe.
Chez les bactries Gram+, rcepteurs localiss au niveau des acides
teichoques.
regroupe toutes les souches de diffrentes
commun l'antigne O9.
Proprit lie la paroi o sont localiss les rcepteurs spcifiques.
subdivise son tour en srotypes
( selon la diversit de lantigne H)
Proprit lie la paroi o sont localiss les rcepteurs spcifiques.
, les rcepteurs sont en majorit des
protines mineurs de la membrane externe.
Chez les bactries Gram+, rcepteurs localiss au niveau des acides
Fixation des phages est une proprit
lysotypes.
B 1
1 2 3 4 5 6
+ + - + + -
Un lysotype est groupe de bactries
phages
B 1
B 2
B 3
B 4
B 5
+ + - + + -
- - + + + +
+ + - + + -
- - + + - +
+ + + + + +
d. Coloration de Gram
Gram, mdecin danois (1884) une coloration
proprit utilise pour identifier des
7
8
+ -
lysotype I =
lysotype II =
[B1, B3]
[B2]
bactries capables de fixer le ou les mmes
+ -
+ +
+ -
+ +
+ +
lysotype II =
lysotype III =
lysotype IV =
[B2]
[B4]
[B5]
coloration diffrentielle
Frottis
A
Coloration avec violet de Gentiane
( 60 secondes)
Rinage suivi dun traitement
avec le Luguol ( 30 s)
Traitement avec un mlange
dalcool/actone ( 30 s)
Coloration avec la fushine ou
safranine ( 60 s)
Gram +
Frottis
B
Coloration avec violet de Gentiane
( 60 secondes)
Rinage suivi dun traitement
avec le Luguol ( 30 s)
Traitement avec un mlange
dalcool/actone ( 30 s)
Coloration avec la fushine ou
safranine ( 60 s)
Gram -
III. Membrane cytoplasmique
1. Composition chimique et structure molculaire
intgrales
Protines
Phospholipides
30 40 % du PS Protines 30 40 % du PS
a. Les phospholipides:
raret des phosphatidyl-cholines
phosphatidyl-thanolamine (PE)
phosphatidyl-glycrol (PG)
III. Membrane cytoplasmique
1. Composition chimique et structure molculaire
priphriques
Protines: 60 70 % du PS Protines: 60 70 % du PS
cholines
- Brucella
- Agrobactrium tumefaciens
G -
G +
b. Les protines:
Protines extrinsques (priphriques)
Protines intrinsques (intgrales)
c. Les glucides:
faiblement reprsents (2 12
- Enzymes de la chane respiratoire c
- Coenzymes: cytochromes, les cytochromes oxydases ect
faiblement reprsents (2 12
on y trouve particulirement: glucose
c. Les enzymes:
2. Fonctions de la membrane 2. Fonctions de la membrane
- Membrane cytoplasmique = support des enzymes de la respiratoire
- Elle est aussi le sige de la phosphorylation oxydative
(priphriques)
(intgrales)
12%),
Enzymes de la chane respiratoire c--d les dshydrognases
Coenzymes: cytochromes, les cytochromes oxydases ect
12%),
glucose et glucosamine.
Membrane cytoplasmique = support des enzymes de la respiratoire
Elle est aussi le sige de la phosphorylation oxydative ATP
Protines
H
+ Lactose
H
+
Transport
+ + + + + + + + + +
Cytoplasme
Na
+
Substrat
- -
H
+
ADP + Pi
ATP
Membrane
Phosphorylation ATP-synthtase
F
0
F
1
H
+
Lactose
Respiration
+ + + + + + + + + +
Respiration
Substrat
NADH
2e
-
2e
-
2e
-
2e
-
2e
-
H
+
H
+
H
+
[H
+
int]
[H
+
ext]
- - - - - - - - - - -
ATP
2H
+
H
+
3H
2
O 3OH
-
2e
-
H
+
H
2
O 2H
+
+ 1/2 O
2
Phosphorylation
2.1. Respiration
circulation d'lectrons le long d'une chane de transporteurs
source d'lectrons: substance organique ou inorganique
rcepteur terminal:
O
2
arobiose
corps organique (fumarate)
Corps inorganique (nitrate)
corps organique (fumarate)

transporteurs d'lectrons sont trs diversifis:


ubiquinones flavoprotines
Mtalloprotines (Cu ou Mo)
consquence de cette respiration : consquence de cette respiration :
cration de part et d'autre de la membrane dune ddp
cration de part et d'autre de la membrane dune
gradient lectrochimique de protons
=
force protomotrice
circulation d'lectrons le long d'une chane de transporteurs
source d'lectrons: substance organique ou inorganique
arobiose
corps organique (fumarate)
anarobiose
Corps inorganique (nitrate)
corps organique (fumarate)
transporteurs d'lectrons sont trs diversifis:
flavoprotines ferroprotines
Mtalloprotines (Cu ou Mo)
cytochromes
hydrognases
consquence de cette respiration : consquence de cette respiration :
cration de part et d'autre de la membrane dune ddp
cration de part et d'autre de la membrane dune de pH
gradient lectrochimique de protons
force protomotrice
force protomotrice
=
Energie lectrique transmembranaire
H
+
= F - 2,3 RT
2. 2. Phosphorylation oxydative
Chez E. coli :
- Le est lorigine dun champs
mV (l'extrieur tant le ct positif)
- Le pH est denviron 2 units
2. 2. Phosphorylation oxydative
Au niveau de la membrane, l'ATP est
ATP-synthtase) utilisant la force
respiratoire.
Cette ATP-synthtase est constitue
force protomotrice
Energie lectrique transmembranaire
2,3 RT pH
champs lectrostatique denviron 70
positif).
(l'extrieur tant plus acide).
est synthtise par une H
+
-ATPase (ou
force protomotrice cre par la chane
constitue de deux parties distinctes:
Ces ATP-synthtases sont aussi appeles
la partie F0: une protine intgrale
membrane en crant un canal protons
la partie F1: une protine priphrique
ct du cytoplasme,

Consquence de la respiration et de la phosphorylation oxydative


Ces ATP-synthtases sont aussi appeles
semblables chez les mitochondries,
Oune nergie chimique : ATP
Oune nergie lectrique transmembranaire: H
2. 3. Transport
appeles F1, F0-ATP-ase et sont toutes
intgrale (intrinsque) qui traverse la
protons.
priphrique (extrinsque) localise du
Consquence de la respiration et de la phosphorylation oxydative
appeles F1, F0-ATP-ase et sont toutes
mitochondries, les chloroplastes et les bactries..
une nergie chimique : ATP
une nergie lectrique transmembranaire: H
+
Substances
liposolubles
Glycrol
B.P
Maltose
Glutamine
Glucose
Substances
liposolubles
Glycrol
Transport actif primaire
Maltose
Glutamine
Transport sensible
Au choc osmotique.
Transporteur mobile
(Binding protein)
Glucose
6-
Systme PTS:
Protines membranaires
Protines cytoplasmiques
D~P
D+Pi
Simple
Facilit
Transport passif Transport passif
- -- - Pas daccumulation de substrat
- -- - Pas besoin dnergie
ATP
Transport actif primaire
ou chimio-osmotique
II
Glucose
Proline
Lactose
H
+
Mlibiose
Na
+
Transport actif primaire
III
Glucose-
-P
PEP
Pyruvate
Systme PTS:
Protines membranaires
Protines cytoplasmiques
Transport actif secondaire
Proline
Lactose
H
+
Mlibiose
Na
+
Symport
Mlib/ Na+
Symport
Lact/ H+
Transport actif Transport actif
- -- - Accumulation de substrat
- -- - Besoin dnergie
H
+
Transport actif primaire
osmotique
Transport actif secondaire
ou osmo-osmotique
a. Transport passif
Suit le gradient de concentration avec
entre les concentrations intra et extracellulaires
Ne ncessite aucune nergie et n'entrane

Transport simple:
b. Transport actif
Concerne les substances liposolubles
substances traversent la membrane

Transport simple:

Transport facilit:
Concerne les molcules de taille
travers une protine membranaire(
b. Transport actif
Se fait contre le gradient de concentration
vers le plus concentr.
Ncessite une nergie et entrane
avec la tendance d'tablir un quilibre
extracellulaires d'un substrat donn.
n'entrane aucune accumulation.
liposolubles et de petites tailles. Ces
membrane sans l'aide d'aucune protine.
taille relativement importante et se fait
membranaire( facilitateur).
concentration c--d du moins concentr
entrane une forte accumulation du substrat

Transport actif primaire ou chimio osmotique


sensible au choc osmotique
fait intervenir l'ATP comme source d'nergie
et plusieurs protines de transport diffrentes: et plusieurs protines de transport diffrentes:
au moins une, traverse la membrane pour former un canal
les autres font partie soit
(porines et protines mineures)
priplasmique (protines de
encore des protines solubles
chimio osmotique
fait intervenir l'ATP comme source d'nergie
plusieurs protines de transport diffrentes: plusieurs protines de transport diffrentes:
au moins une, traverse la membrane pour former un canal
soit de la membrane externe
mineures) soit de l'espace
liaison ou binding protein) ou
solubles du cytoplasme.
Ex.1. transport du maltose chez
Maltose
protines
Mal F & G
Signal de
chimiotaxie
Hydrolyse et
mtabolisme
Protine Mal K
Ex.1. transport du maltose chez E. coli
Lam B
extrieur
membrane
externe
space
priplasmique
membrane
Mal E: Binding protein
Mal Tar
membrane
cytoplasqmique
cytoplasme
Signal de
chimiotaxie
Ex.2. transport des sucres par le systme
PTS (= Systmes Phosphotransfrases)
- Un type de transport actif primaire (
- Concerne en particulier les sucres
mannitol, N-actylglucosamine et
- La caractristique de ce transport
qui a lieu au niveau de la membrane
- La source d'nergie chimique = phospho
Chez E. coli, le systme PTS est compos
Les protines cytoplasmiques, communes
I et prot. Hpr, toutes les deux sont
Les protines membranaires :

Ex.2. transport des sucres par le systme


PTS (= Systmes Phosphotransfrases)
Un type de transport actif primaire ( transport par translocation)
sucres (glucose, mannose, fructose,
et quelques -glucosides)
transport cest la phosphorylation du substrat
membrane cytoplasmique
phospho-nol-pyruvate (PEP)
compos de deux types de protines:
communes tous les systmes PTS, prot.
sont solubles dans le cytoplasme.
la prot. II
la prot. III
Protines cytoplasmiques
Protines membranaires
Transport des sucres par le systme PTS
(= Systmes Phosphotransfrases)
Prot.II
(glucose)
Prot.III
Hpr
Prot.III-P
Mannitol
(glucose)
Hpr
Glucose
Protines cytoplasmiques
Transport des sucres par le systme PTS
(= Systmes Phosphotransfrases)
hpr
Prot.I
Hpr -P
Mannitol-1- phosphate
Mtabolisme
PEP
Prot.I-P
Pyruvate
Hpr -P
Glucose6-phosphate
Mtabolisme
Glycolyse

Transport actif secondaire ou osmo osmotique


fait intervenir le (H
+
) comme source d'nergie,
plus souvent une seule protine de transport,
caractris par le fait que la pntration du substrat est couple
celle d'un proton, celle d'un proton,
Ex. Transport du lactose
Chez E. coli
extrieur
intrieur
les deux lments sont vhiculs par une protine intrinsque (permase lac y),
la synthse de cette permase est induite
milieu extracellulaire ( voir plus loin S6).
osmo osmotique
) comme source d'nergie,
plus souvent une seule protine de transport,
caractris par le fait que la pntration du substrat est couple
Lactose
H
+
extrieur
intrieur
les deux lments sont vhiculs par une protine intrinsque (permase lac y),
induite par la prsence du lactose dans le
Lactose
H
+

Mthodes d'tude du transport chez les bactries


Bactrie
+
Substance X
14
C
t0 Filtration
+
Substance X
14
C
[C1]
t0 Filtration
t1 Filtration
t2 Filtration
.
.
.
.
.
.
.
.
tx
Filtration
. .
Mthodes d'tude du transport chez les bactries
Filtration
Quantit de la radioactivit
dans la bactrie
Q0
Filtration
Filtration
Q1
Filtration
dans la bactrie
Q0
Q2
.
.
.
.
Filtration
Qx
.
Quantit de la radioactivit
dans la bactrie
Q max 1
[C1]
Q max 2
Temps
Q max 4
Q max 3
[C3]
Temps
Q max 3
[C3]
Q max 2 [C2]
Temps
Q max 4 [C4]
Temps
Q x
.
[
S
]

i
n
t
r
a
c
e
l
l
u
l
a
i
r
e
Transport actif
Q 1
Q 2
.
.
.
[
S
]

i
n
t
r
a
c
e
l
l
u
l
a
i
r
e
OU
[S] extracellulaire
Co C1 C2 . . .
Q 0
Transport actif
Transport passif
[S] extracellulaire
. . Cx
Comment distinguer entre les diffrents types de transport actif ?
inhibiteurs mtaboliques : Ce sont
spcifique permettant d'liminer une
dtermine. dtermine.
Les inhibiteurs de la chane respiratoire
cytochrome oxydase.

Les inhibiteurs de l'ATPase membranaire


(Dicyclohexylcarbodiimide) qui ragissent (Dicyclohexylcarbodiimide) qui ragissent
la composante F0 de l'ATPase.

Les inhibiteurs de l'ATP cellulaire


l'ATP intracellulaire.
Comment distinguer entre les diffrents types de transport actif ?
des substances chimiques action
une source d'nergie cellulaire bien
respiratoire: cyanure qui inhibe la
membranaire : azoture (1mM) et le DCCD
ragissent de manire covalente avec ragissent de manire covalente avec
cellulaire: arsniate: analogue du Pi qui puise

Les inhibiteurs du gradient lectrochimique


composantes.
ionophores
substances chimiques qui s'intercalent dans la double couche
lipidique de la membrane, crant des pores travers lesquels
vont passer des ions. vont passer des ions.
le 2,4-DNP (2,4-Dinitrophnol)
dcouple la phosphorylation
totalit.
la valinomycine et la monoactine
qui permettent ce cation qui permettent ce cation
entrane un quilibre des
faces de la membrane, ce
la nigricine: ionophore qui rduit le pH en changeant le K+
contre H+.
lectrochimique (H+) ou de l'une de ses
ionophores
substances chimiques qui s'intercalent dans la double couche
lipidique de la membrane, crant des pores travers lesquels
vont passer des ions. vont passer des ions.
Dinitrophnol): ionophore protons qui
phosphorylation oxydative et inhibe le H+ en
monoactine: ionophores potassium (K+)
cation dentrer dans la cellule, ce qui cation dentrer dans la cellule, ce qui
des charges positives sur les deux
ce qui affecte spcifiquement le .
la nigricine: ionophore qui rduit le pH en changeant le K+
IV. Cytoplasme
une solution de sels minraux et de composs solubles de nature
lipoprotique , de nucloprotines et de lipides
hydrogel collodal compos de:
lipoprotique , de nucloprotines et de lipides
les ribosomes et les acides ribonucliques qui leur sont associs
7 < pH < 7.2
Les principaux constituants du cytoplasme sont:
matriel hrditaire,
les substances de rserve
certains organites spcialiss
une solution de sels minraux et de composs solubles de nature
lipoprotique , de nucloprotines et de lipides lipoprotique , de nucloprotines et de lipides
les ribosomes et les acides ribonucliques qui leur sont associs
Les principaux constituants du cytoplasme sont:
certains organites spcialiss
1. Ribosomes
Granulations sphriques qui occupent tout le cytoplasme,
Coefficient de sdimentation est de 70 S, PM = 3.10
Constitus exclusivement d'ARN (63%) et de protines (37%) Constitus exclusivement d'ARN (63%) et de protines (37%)
Ces particules peuvent se dissocier
La grande sous unit 50 S de PM= 2.10
23 S et 5 S et de protines L (Large = grande);
la petite sous-unit 30 S de PM= 10 la petite sous-unit 30 S de PM= 10
16 S et de protine S (Small = petit).
Les deux sous units sont relies
liaisons ARN - protine et protine
Structure en chapelets qu'on appelle
Granulations sphriques qui occupent tout le cytoplasme,
Coefficient de sdimentation est de 70 S, PM = 3.10
6
daltons
Constitus exclusivement d'ARN (63%) et de protines (37%) Constitus exclusivement d'ARN (63%) et de protines (37%)
dissocier en deux sous-units:
a grande sous unit 50 S de PM= 2.10
6
daltons, constitue d'ARN
23 S et 5 S et de protines L (Large = grande);
unit 30 S de PM= 10
6
daltons, constitue d'ARN unit 30 S de PM= 10
6
daltons, constitue d'ARN
16 S et de protine S (Small = petit).
relies entre elles par l'intermdiaire de
protine - protine.
appelle polysomes.
2. Granulations et substances de rserve
Amidon et glycogne
Acide poly -hydroxybutirique
Granulations mtachromatiques
- soufre chez les thiobactries
- oxyde de fer (Fe
- fer chez les sidrobactries
3. Chromatophores et pigments
inclusions de
Chez les bactries photosynthtiques,
Dont l'ultrastructure est diffrente de celle des chloroplastes des
vgtaux suprieurs.
Leurs pigments photosynthtiques = des bactriochlorophylles.
Granulations et substances de rserve
Corynebacterium diphterieae
hydroxybutirique
Granulations mtachromatiques
soufre chez les thiobactries
oxyde de fer (Fe
3
O
4
): bactries << magntiques >>.
fer chez les sidrobactries
Chromatophores et pigments
Chez les bactries photosynthtiques, chromatophores
Dont l'ultrastructure est diffrente de celle des chloroplastes des
vgtaux suprieurs.
Leurs pigments photosynthtiques = des bactriochlorophylles.
Halobacterium halobium
vitamine K2 chez Bacillus subtilis
carotnode, protecteur anti-UV, chez les corynbactries
bactriorhodopsine
Certains pigments confrent aux colonies bactriennes une teinte
caractristique:
Zeaxanthne, pigment jaune chez
pyocyanine, pigment ayant une activit antibiotique, chez
Chromatobacterium violaceum ;
pyocyanine bleue et pyoverdine bleu
aeruginosa.
Zeaxanthne, pigment jaune chez
Xantophylle, pigment rouge chez Sarcina
subtilis;
UV, chez les corynbactries;
bactriorhodopsine
Certains pigments confrent aux colonies bactriennes une teinte
caractristique:
Zeaxanthne, pigment jaune chez Staphylococcus aureus;
pyocyanine, pigment ayant une activit antibiotique, chez
pyocyanine bleue et pyoverdine bleu-vert fluorescent chez Pseudomonas
Zeaxanthne, pigment jaune chez Staphylococcus aureus;
Sarcina;
V. Matriel hrditaire
1. Chromosome bactrien
filament unique, continu et circulaire, form d'une double chane d'ADN
PM 3.10 da, avec environ 5.10 paires de bases
dans la cellule, la molcules dADN
et finement entrelaces, donnant une
nuclode.
toute linformation gntique est
forme dun code bien dtermin / la
PM 3.10
9
da, avec environ 5.10
6
paires de bases
forme dun code bien dtermin / la
Par le processus de la transcription,
fidlement sous forme d'un ARN
processus de la traduction, en
formeront les protines de structure
filament unique, continu et circulaire, form d'une double chane d'ADN
paires de bases
dADN est forme de boucles resserres
une structure compacte mais fragile =
stocke au niveau de l'ADN sous
succession des nuclotides,
paires de bases
succession des nuclotides,
transcription, le message est copi
messager puis exprim, par le
squences polypeptidiques qui
structure et les enzymes.
l'information gntique au
spontanment (faible frquence) ou
Agents chimiques : acide nitreux
2. Plasmides
lments gntiques extra-chromosomiques
petite taille (1/100me environ da la taille du chromosome) petite taille (1/100me environ da la taille du chromosome)
structure torsade (super enroule)
leur nombre varie de 1 100/ cellule
0.5 10
6
< PM < 400 10
6
,
niveau de l'ADN peut changer
ou artificiellement par mutagense
nitreux ou physique : UV
chromosomiques capables d'autoreproduction
petite taille (1/100me environ da la taille du chromosome) petite taille (1/100me environ da la taille du chromosome)
structure torsade (super enroule)
leur nombre varie de 1 100/ cellule
Rles des plasmides:
Rsistance aux antibiotiques (streptomycine, ttracycline,
chloramphnicol).
Rsistance aux mtaux lourds comme le Hg, cd, pb
Intervention dans la production des substances rle pathogne.
Intervention dans la production de bactriocines.
Rsistance aux mtaux lourds comme le Hg, cd, pb
Intervention dans la dgradation
Intervention dans la production de bactriocines.
Rsistance aux antibiotiques (streptomycine, ttracycline,
Rsistance aux mtaux lourds comme le Hg, cd, pb
Intervention dans la production des substances rle pathogne.
Intervention dans la production de bactriocines.
Rsistance aux mtaux lourds comme le Hg, cd, pb
dgradation de certains composs aromatiques
Intervention dans la production de bactriocines.
VI. Elments inconstants
1. Capsule
Couche organique visqueuse labore par certaines bactries
dans certaines conditions de culture,
Gnralement, elle entoure une cellule bactrienne. Gnralement, elle entoure une cellule bactrienne.
a. Composition chimique
souvent polyholosidique, quelquefois polypeptidique,
chez le pneumocoque (Gram
-
), la capsule est polyholosidique
forme de longues chanes d'acides aldobioniques,
Couche organique visqueuse labore par certaines bactries
certaines conditions de culture,
Gnralement, elle entoure une cellule bactrienne. Gnralement, elle entoure une cellule bactrienne.
souvent polyholosidique, quelquefois polypeptidique,
), la capsule est polyholosidique
forme de longues chanes d'acides aldobioniques,
Acide uronique
O
COOH
OH
H
OH
H
HO
H
O
(1-4)
selon les espces et les souches bactriennes, la nature chimique
de la capsule peut varier au niveau:
- acide glucuronique
des acides uroniques:
- acide galacturonique
Acide uronique
Acide aldobionique
- acide glucuronique
-acide cellobiuronique,
des acides uroniques:
des oses: - galactose
- glucose
-rhamnose,
O
4)
Ose
O
CH
2
OH
O
OH
OH
H
H
H
selon les espces et les souches bactriennes, la nature chimique
de la capsule peut varier au niveau:
acide glucuronique
acide galacturonique
Ose
Acide aldobionique
acide glucuronique
acide cellobiuronique,
galactose
glucose
rhamnose,
La capsule est galement de nature polyholosidique chez de
nombreuses bactries Gram
-
:
Klebsiella pneumoniae E. Coli
Chez les Gram
+
, les constituants capsulaires sont de nature polypeptides,
constitus d'un seul acide amin: l'acide D
Bacillus megaterium
Bacillus anthracis
constitus d'un seul acide amin: l'acide D
b. fonctions
Support de proprits physiopathologiques et immunologiques, Support de proprits physiopathologiques et immunologiques,
vritables facteurs de virulence,
protge la bactrie contre la phagocytose,
La capsule est galement de nature polyholosidique chez de
Klebsiella pneumoniae Hemophilus influenzae
, les constituants capsulaires sont de nature polypeptides,
l'acide D-glutamique.
Bacillus megaterium
Bacillus subtilis
l'acide D-glutamique.
Support de proprits physiopathologiques et immunologiques, Support de proprits physiopathologiques et immunologiques,
vritables facteurs de virulence,
protge la bactrie contre la phagocytose,
support dantignicit:
La nature des polyholosides constitutifs
leur enchanement, dterminent la spcificit
70 types srologiques sont actuellement
pneumocoques. pneumocoques.
dans environnement, la capsule protge la bactrie contre:
la dessiccation.
le pouvoir agressif des agents chimiques et physiques.
empche la fixation des bactriophages sur la bactrie. empche la fixation des bactriophages sur la bactrie.
2. Flagelles ou cils
2 types de mouvement:
constitutifs de la capsule et de
spcificit srologique.
actuellement reconnus chez les
dans environnement, la capsule protge la bactrie contre:
le pouvoir agressif des agents chimiques et physiques.
empche la fixation des bactriophages sur la bactrie. empche la fixation des bactriophages sur la bactrie.
Chez les spirochtes, mouvement
Chez les myxobactries: dplacement par glissement,
Chez les eubactries et les
par des organes locomoteurs
Chez les spirochtes, mouvement
Spirochaeta zuelzerae
mouvement assur par un filament axial.
Chez les myxobactries: dplacement par glissement,
spirochtes, mouvement assur
spcialiss,
mouvement assur par un filament axial.
Spirochaeta zuelzerae
Invisibles en microscopie optique
vidence par des colorations spcifiques.
Chez les eubactries, la mobilit est assure par des flagelles.
Proteus mirabilis
Invisibles en microscopie optique, mais peuvent tre mis en
vidence par des colorations spcifiques.
Chez les eubactries, la mobilit est assure par des flagelles.
En microscopie lectronique, ils apparaissent
simples, filamenteux, sinueux, gnralement
elle mme, de l'ordre de 6 20 m.
Methanococcus jannaschii
apparaissent sous forme d'organites
gnralement plus long que la bactrie
Alcaligenes eutrophus
on distingue deux principaux types d'insertion:
Insertion polaire:

Le nombre et le mode d'insertion


constituent un critre de classification
Monotriche
Amphitriche
Lophotriche Lophotriche
Insertion pritriche :

on distingue deux principaux types d'insertion:


d'insertion des flagelles sur la bactrie,
classification.
Flagelle constitu dune protine,
flagelline qui fait partie de la famille
La croissance du flagelle est
base, mais par un prolongement base, mais par un prolongement
En effet les molcules de
cytoplasme, traversent la partie
sadditionnent lextrmit terminale
Ce processus de synthse
lorsquune fraction de lextrmit
La destruction de la paroi par
formation de protoplaste ou sphroplaste
lorsquune fraction de lextrmit
rgnre.
protine, de PM de 30 40 Kda, la
famille des Kratomyosines.
assure non pas partir de la
prolongement de lextrmit. prolongement de lextrmit.
de flagelline formes dans le
partie centrale creuse du flagelle et
terminale.
est appel auto-assemblage et
lextrmit est brise, elle est
par des lysozymes aboutit la
sphroplaste cili.
lextrmit est brise, elle est
Lyzosyme
(dtruit les
Bacille cili
Origine du cil est au niveau du cytoplasme et non pas la paroi.
Microscopie lectronique montre
paroi et prend racine dans le cytoplasme
basal de structure complexe, li
Bacille cili
Ce corps basal comprend deux
est li la membrane cytoplasmique,
chez les bactries Gram
-
, est li
* ** *
basal de structure complexe, li
Lyzosyme
(dtruit les (1-4))
Protoplaste ou sphroplaste
Origine du cil est au niveau du cytoplasme et non pas la paroi.
montre que le flagelle traverse la
cytoplasme au niveau dun granule
li lenveloppe bactrienne.
Protoplaste ou sphroplaste
cili
anneaux protiques, le plus interne
cytoplasmique, le plus externe visible surtout
li aux LPS et au peptidoglycane.
li lenveloppe bactrienne.
*
Le dplacement est assur par rotation du flagelle la manire
d'une hlice.
L'nergie ncessaire au mouvement
lectrochimique de protons.
*
*
Autres fonctions du flagelle
*
Autres fonctions du flagelle

Chimiotactisme
sucres et acides amins les attirent
phnols, acides et bases les repoussent
La rponse cellulaire vis--vis de
gradient d'informations transmis de gradient d'informations transmis de
la cellule par l'intermdiaire de rcepteurs
Les rcepteurs par lesquels la bactrie
substance dans son environnement
paritales et/ou priplasmiques.
Le dplacement est assur par rotation du flagelle la manire
mouvement provient du gradient
sucres et acides amins les attirent
chimiotaxie positive
phnols, acides et bases les repoussent chimiotaxie ngative
ces substances serait due un
de l'extrieur vers l'intrieur de de l'extrieur vers l'intrieur de
rcepteurs chimiques.
bactrie peroit la prsence d'une
environnement sont des protines spcifiques

Proprits antigniques
La spcificit des antignes flagellaires repose sur le nombre et la
squence des acides amins de la flagelline.
Ces diffrences ont t exploites
immunologique des types bactriens
Salmonella par Kauffman & Withe) Salmonella par Kauffman & Withe)
3. Pili et fimbriae
frquents chez les Gram
-
, rares chez les Gram

appendices filiformes diffrentes des flagelles,

les Pili communs (de type I)

les Pili communs (de type I)

grand nombre autour de la bactrie (100

courts, rigides et cassants,

rle dans l'adhrence des bactries Gram

La spcificit des antignes flagellaires repose sur le nombre et la


squence des acides amins de la flagelline.
exploites pour la caractrisation
bactriens (Ex. classification des
Withe). Withe).
, rares chez les Gram
+
.
appendices filiformes diffrentes des flagelles,
grand nombre autour de la bactrie (100
aine
),
rle dans l'adhrence des bactries Gram
-
sur les cellules eucaryotes.
les Pili sexuels

Sont plus longs, se terminent par un renflement.

Leur nombre varie de 1 4 /cellule.

jouent un rle important dans le transfert du matriel hrditaire

jouent un rle important dans le transfert du matriel hrditaire


entre deux bactries par le phnomne de conjugaison

l'extrmit renfle de ces pili, peuvent se fixer certains phages


et injecter leur matriel gntique par le canal du pili.
En fin, lanalyse chimique de ces pili a montr quils sont constitus
d'une protine appele piline d'un PM 17000 daltons, associant des
Ces dernires se dissocient par chauffage ou par traitement acide,
et peuvent reformer froid et pH neutre la structure protique
originale.
d'une protine appele piline d'un PM 17000 daltons, associant des
sous units.
Sont plus longs, se terminent par un renflement.
Leur nombre varie de 1 4 /cellule.
jouent un rle important dans le transfert du matriel hrditaire jouent un rle important dans le transfert du matriel hrditaire
entre deux bactries par le phnomne de conjugaison.
l'extrmit renfle de ces pili, peuvent se fixer certains phages
et injecter leur matriel gntique par le canal du pili.
En fin, lanalyse chimique de ces pili a montr quils sont constitus
d'une protine appele piline d'un PM 17000 daltons, associant des
Ces dernires se dissocient par chauffage ou par traitement acide,
et peuvent reformer froid et pH neutre la structure protique
d'une protine appele piline d'un PM 17000 daltons, associant des
La nutrition La nutrition
bactrienne
La nutrition La nutrition
bactrienne
Pour vivre et se multiplier
Elments nutritifs de base =
milieu minimum :
Eau
Source d'nergie
Source de carbone
Source d'azote
Elments minraux Elments minraux
Cependant, l'apport de nutriments supplmentaires est ncessaire
groupes nutritionnels = types trophiques
Elments nutritifs de base = Besoins lmentaires
Eau
Source d'nergie
Source de carbone
Source d'azote
Elments minraux Elments minraux
Cependant, l'apport de nutriments supplmentaires est ncessaire
types trophiques
*La source de carbone
Selon la nature de cet lment
jusqu' 50 % de la cellule,
O Besoins lmentaires
- Les autotrophes:
Bactries capables de se dvelopper en
(milieu minimum source de carbone),
le CO2 tant l'unique source de carbone.
- Les htrotrophes:
NB. Parmi les htrotrophes, certaines
strictes. Ex. Pseudomonas methanica
le mthanol.
- Les htrotrophes:
Bactries exigeant des composs organiques
La source de carbone
lment essentiel pouvant constituer
Bactries capables de se dvelopper en milieu purement minral
le CO2 tant l'unique source de carbone.
certaines espces ont des exigences
methanica n'utilise que le mthane ou
composs organiques.
*La source d'nergie
- Les phototrophes ou photosynthtiques
Energie partir des rayons lumineux Energie partir des rayons lumineux
synthse d'ATP partir de l'ADP
- organes photosynthtiques =
- pigments = bactriochlorophylles,
- donneur d'lectrons: minral
Chez les vgtaux, le donneur est H
Source d'Energie = oxydation de
- Les chimiotrophes ou chimiosynthtiques
photosynthtiques
lumineux : espces photosynthtiques lumineux : espces photosynthtiques
l'ADP et du Pi :
= chromatophores
bactriochlorophylles,
minral ou organique (sans libration d O
2
).
Chez les vgtaux, le donneur est H
2
O (avec libration dO
2
).
de composs organiques ou minraux.
chimiosynthtiques
* La source dlectrons
- Chez les phototrophes
Les photolithotrophes: Donneur
Bactries sulfureuses vertes
et les bactries pourpres (Thiorodaceae et les bactries pourpres (Thiorodaceae
Les photoorganotrophes: Donneur
Bactries pourpres non sulfureuses
- Chez les chimiotrophes
Les chimiolithotrophes:
Donneur
Les chimiolithotrophes:
Donneur
Bactries vivant gnralement
Exp. Nitrosomonas : oxydant
Nitrobacter : oxydant
Les chimioorganotrophes:
Donneur
La majorit des bactries entrent
dlectrons
Donneur d'lectrons minral (milieu minral)
vertes (Chlorobacteriaceae)
Thiorodaceae). Thiorodaceae).
Donneur d'lectrons organique.
sulfureuses (Athiorodaceae).
Donneur d'lectrons minral Donneur d'lectrons minral
gnralement dans le sol ou l'eau.
oxydant l'ammoniaque
oxydant les nitrites
Donneur d'lectrons organique
entrent dans cette catgorie
* La source d'azote
Ncessaire la synthse des protines (10% du poids sec).
L'azote peut tre d'origine:
- minrale : - minrale :
* NH
4
+
et NO
3
-
utiliss par
* NO
2
-
utilis par les bactries
* N
2
utilis par les bactries
(Azotobacter) ou symbiotiques
- Organique : - Organique :
Protines, acides amins (R-
A partir de ces composs,
librs aprs dsamination
transamination.
Ncessaire la synthse des protines (10% du poids sec).
la plupart des bactries
bactries du genre Nitrobacter
bactries fixatrices d'azote libres
symbiotiques (Rhizobium)
-NH
2
).
composs, il y a incorporation des NH
4
+
ou utilisation du radical NH
2
par
* Le soufre et le phosphore
Le souffre se retrouve dans les
des groupements thiols (-SH)
cystine).
Il est incorpor sous forme de sulfates ou sous forme organique.
Le phosphore, incorpor sous la forme
fait partie des acides nucliques,
l'ATP.
*Autres lments minraux
Il est incorpor sous forme de sulfates ou sous forme organique.
Macro-lments:
Co, Cu, Mo, Mn et autres: Cofacteurs ou activateurs d'enzymes.
Macro-lments:
Na, K, Mg, Cl: rle dans lquilibre physicochimique
Micro-lments:
Fe: pour les Cytochromes Mg: pour la Chlorophylle
Le soufre et le phosphore
protines, prcisment au niveau
SH) des AA souffrs (cystine et
Il est incorpor sous forme de sulfates ou sous forme organique.
forme de phosphate inorganique,
nucliques, de certains coenzymes et de
Autres lments minraux
Il est incorpor sous forme de sulfates ou sous forme organique.
Co, Cu, Mo, Mn et autres: Cofacteurs ou activateurs d'enzymes.
Na, K, Mg, Cl: rle dans lquilibre physicochimique
Mg: pour la Chlorophylle
O Facteurs de croissance
Substances organiques, indispensables la croissance, non synthtises
Nature des facteurs de croissance :
Microorganismes dits auxotrophes
- Acide amin: synthse des protines,
Proprits des facteurs de croissance :
- Action trs faible concentration
- Base azote puriques ou pyrimidiques: acides nucliques,
- Vitamine: rle de coenzyme ou de prcurseurs de coenzyme.
25 mg/l dans le cas des acides amins.
1 24 g/ l pour les vitamines,
-Spcificit stricte:
10 mg/l pour les bases azotes,
25 mg/l dans le cas des acides amins.
un simple changement de position dun groupement te son rle au facteur
de croissance.
Facteurs de croissance
Substances organiques, indispensables la croissance, non synthtises
Nature des facteurs de croissance :
par opposition aux prototrophes.
Acide amin: synthse des protines,
Proprits des facteurs de croissance :
Action trs faible concentration:
Base azote puriques ou pyrimidiques: acides nucliques,
Vitamine: rle de coenzyme ou de prcurseurs de coenzyme.
25 mg/l dans le cas des acides amins.
1 24 g/ l pour les vitamines,
10 mg/l pour les bases azotes,
25 mg/l dans le cas des acides amins.
un simple changement de position dun groupement te son rle au facteur
La croissance La croissance
bactrienne
La croissance La croissance
bactrienne
O Dfinition de la Croissance
Gnralement cest laccroissement
organisme.
Chez les organismes pluricellulaires, il y a augmentation de taille.
Chez les bactries augmentation du nombre de cellules.
Cet accroissement est donc synonyme d'une Cet accroissement est donc synonyme d'une
Chez Escherichia coli , toutes les
naissance 2 bactries identiques
Dfinition de la Croissance
laccroissement de tous les composants d'un
Chez les organismes pluricellulaires, il y a augmentation de taille.
augmentation du nombre de cellules.
Cet accroissement est donc synonyme d'une multiplication bactrienne. Cet accroissement est donc synonyme d'une multiplication bactrienne.
les 20 min environ, 1 bactrie donne
identiques
t0
Dtermination du Nombre
ou de la masse bactrienne
O Mthodes de mesure de la croissance
1- Principe
Bactrie
t0
ou de la masse bactrienne
t1
t2
.
.
.
.
tn
.
Milieu de
culture
N.B. Durant la croissance la TC et laration
Dtermination du Nombre
ou de la masse bactrienne
N
0
Mthodes de mesure de la croissance
ou de la masse bactrienne
N
1
N
0
.
.
.
.
.
.
.
.
N
2
. .
N
n
laration doivent tre respectes
2-1. Mesure du nombre de cellules
- Cellule de Thomas
Nombre de cellules totales
- Dispositif lectronique (Compteur Coulter)
Nombre de cellules viables
2-2. Mesure de la masse
- Sur milieu liquide
- Sur milieu solide
Mesure du poids sec: (P. frais d'1 bact.= 1,5 10
Dosage de l'azote total (14% du poids sec).
La turbidimtrie: consiste mesurer le trouble bactrien.
1. Mesure du nombre de cellules
Nombre de cellules totales
Dispositif lectronique (Compteur Coulter)
viables
(P. frais d'1 bact.= 1,5 10
-12
g)
Dosage de l'azote total (14% du poids sec).
: consiste mesurer le trouble bactrien.
La turbidimtrie
Une suspension cellulaire, traverse par un rayon lumineux, disperse la
lumire (absorbe) et la quantit transmise est rduite par rapport la
quantit mise.
Ceci est mesur l'aide d'un spectrophotomtre.
La turbidimtrie
Une suspension cellulaire, traverse par un rayon lumineux, disperse la
lumire (absorbe) et la quantit transmise est rduite par rapport la
Ceci est mesur l'aide d'un spectrophotomtre.
Cuve
spectrophotomtre
I
0
I

.
.
.
.
.
. .
.
.
.

.
.
.
.
.
.
.
.
.
.
..
.
.
Source de
lumire

.
.
.
.
.
.
.
.
.

.
.
.
.
.
.
Lumire rflchie
(absorbe)
=
l = distance traverse par le rayon (1 cm) l = distance traverse par le rayon (1 cm)
et l sont constantes, donc
La longueur d'onde utilise pour la suspension bactrienne est
comprise entre 550 et 660 nm (
I < I
0
I < I
0
Toute suspension bactrienne
obit la Loi de Beer Lambert :
D.O = log I
0
/ I = l C = K C
= constante dabsorbance
= distance traverse par le rayon (1 cm) = distance traverse par le rayon (1 cm)
et l sont constantes, donc DO proportionnelle C
La longueur d'onde utilise pour la suspension bactrienne est
nm (spectre d'absorbance).
O Constantes et expression de la croissance
La croissance d'une bactrie est dfinie par 2 constantes:
Le temps de gnration
C'est le temps qui spare 2 C'est le temps qui spare 2
ncessaire au doublement de
G = t/n
t = temps de croissance (connu) et n = nombre de divisions
Le taux de croissance Le taux de croissance
C'est le nombre de divisions par unit de temps.
= n/t donc
est exprim en nombre de divisions/unit de temps
Constantes et expression de la croissance
La croissance d'une bactrie est dfinie par 2 constantes:
2 divisions successives (= temps 2 divisions successives (= temps
de la population).
G = t/n
(connu) et n = nombre de divisions
Ex. chez E. coli : G = 20 min
C'est le nombre de divisions par unit de temps.
donc = 1/G
est exprim en nombre de divisions/unit de temps
Ex. chez E. coli : = 3 div /h
O Expression mathmatique de la croissance
Temps nombre de Bactries
t
0
N
0
= 1N
t
1
N
1
= 2N
.
.
.
.
.
.
N
1
= 2N
t
2
N
2
= 2
t
3
N
3
= 2
t
4
N
4
= 2
t
n
N
n
= 2
(n = nombre divisions et N
N = 2
n
N
0
(avec = n/t et
N
n
= 2
Expression mathmatique de la croissance
nombre de Bactries
= 1N
0
2
0
N
0
= 2N
0
2
1
N
0
= 2N
0
2
N
0
= 2 x 2 x N
0
2
2
N
0
= 2 x 2 x 2 x N
0
2
3
N
0
= 2 x 2 x 2 x 2 x N
0
2
4
N
0
2
n
N
0
= 2 x 2 x 2 x 2 x .. N
0
(n = nombre divisions et N
0
= nombre de bactries t
0
)
et n = t) donc N = 2
t
N
0
2
N
0
= 2 x 2 x 2 x 2 x .. N
0
n fois
O Reprsentation graphique de la Courbe de
croissance
La croissance bactrienne est reprsente par un graphe :
N = f(t) ou DO = f(t) ou autres N = f(t) ou DO = f(t) ou autres
Reprsentation arithmtique
A t
0
correspond N
0
(ordre 10
5
A t
1
correspond N
1
= 2N
0
(2 10
A t
2
correspond N
2
= 4N
0
(4 10
Nombre levs posent un problme pour une chelle arithmtique
A t
2
correspond N
2
= 4N
0
(4 10
Courbe:
Reprsentation graphique de la Courbe de
croissance
La croissance bactrienne est reprsente par un graphe :
(t) ou autres (t) ou autres
arithmtique:
N = f (t)
10
6
)
5
2 10
6
) avec t
1
- t
0
= G
(4 10
5
4 10
6
) avec t
2
- t
1
= G
Nombre levs posent un problme pour une chelle arithmtique
(4 10 4 10 ) avec t
2
- t
1
= G
Expression logarithmique
N = 2
n
N
0
(avec = n/t et
(n = t)
log N = log 2
n
N
(n = t)
log N = log 2
n
N
0
log N = log 2
t
+ log N
0
quation dune droite
y = a x + b
P = a = log 2 Pente de la droite:
log N - log N
t log 2
=
logarithmique
et n = t) donc N = 2
t
N
0
log N = log 2
t
N log N = log 2
t
N
0
log N = t log 2 + log N
0
Constante
quation dune droite
P = a = log 2 = P / log 2
log N
0
t log 2
Reprsentation logarithmique
Courbe: log N = f (temps)
log N
log N
Echelle
logarithmique
log N
1
log N
x
.
.
to t1 t2
.
log N
0
OTracer la courbe sur un papier semi
logarithmique
Courbe: log N = f (temps)
Echelle
temps
. . .
tx
Echelle
arithmtique
Tracer la courbe sur un papier semi-logarithmique
Log N






Log 10
9
0 5 10 15 20 25 30 35 40 50 60

Log 10
8
Temps
en heure
(H)
Nombre bactries/
ml
(H)
0 1,1 10
8
5 1,8 10
8
10 3,1 10
8
15 5,4 10
8
20 9,2 10
8
25 1,2 10
9
30 1,4 10
9
30 1,4 10
9
35 1,55 10
9
40 1,6 10
9
50 1,65 10
9
60 1,65 10
9
temps
O Dtermination thorique des paramtres
log N
2
= 2 x log N
1
log N
log N
0
log N
1
log N
2
= 2 x log N
1
t 1
t 2
Eviter de prendre en considration le N
Pour calculer :
log N2 -
(t2 - t1)
=
t 1
t 2
Dtermination thorique des paramtres
Pour G, prendre N2 = 2 N1
G = t2 - t1 on a alors G = t2 - t1
temps
Eviter de prendre en considration le N0.
log N1
1) log 2
temps
Ou
= 1/G
%La croissance n'est pas toujours exponentielle.
Justification:
E. coli, 37C, G est de 20 min
= 1/G = 1/20 = 0,05 div / min = 3 div / heure
Aprs 48 heures de croissance exponentielle et si on part
au t0 d'une seule bactrie (N
0
Log N = t log 2 + log No
Le nombre de bactries est: N = 2,2 10
(poids de la terre = 5 10
21
tonnes)
Le nombre de bactries est: N = 2,2 10
Le poids 1 bactrie = 1,5 10
-12
la masse bactrienne = 3,3 10
La croissance n'est pas toujours exponentielle.
C, G est de 20 min
= 1/G = 1/20 = 0,05 div / min = 3 div / heure
Aprs 48 heures de croissance exponentielle et si on part
0
= 1):
Log N = 3 x 48 x 0,301 = 43,344
Le nombre de bactries est: N = 2,2 10
43
bactries.
tonnes)
Le nombre de bactries est: N = 2,2 10 bactries.
12
g
la masse bactrienne = 3,3 10
31
g soit 3,3 10
25
tonnes
O Les phases de croissance
log N
Phase exponentielle
Phase de latence
Les phases de croissance
Phase stationnaire
phase de dclin phase de dclin
Phase de dcclration
Phase d'acclration
temps
La phase de latence
Pas de croissance, N0 = Constant et
Causes:
- L'ge des bactries
Causes:
- L'ge des bactries
- La composition du milieu de culture
La phase d'acclration
Dbut de croissance, le nombre bactrien augmente Dbut de croissance, le nombre bactrien augmente
Causes:
dbut d'adaptation des bactries au milieu
= Constant et donc :
L'ge des bactries
= 0
L'ge des bactries
La composition du milieu de culture
La phase d'acclration
Dbut de croissance, le nombre bactrien augmente > >> > 0 00 0
Dbut de croissance, le nombre bactrien augmente
dbut d'adaptation des bactries au milieu
> >> > 0 00 0
La phase exponentielle
C'est la phase physiologique idale pour la croissance
Le temps de gnration G est minimal
Le taux de croissance
Sur papier semi logarithmique:
(relation proportionnelle entre le log N et le temps).
Log N = t log 2 + log No

La phase exponentielle dure


Log N = t log 2 + log No
(quation dune droite:
C'est la phase physiologique idale pour la croissance
G est minimal
Sur papier semi logarithmique: phase exponentielle = droite
(relation proportionnelle entre le log N et le temps).
Log N = t log 2 + log No
> 0, maximal et constant
dure gnralement quelques heures.
Log N = t log 2 + log No
(quation dune droite: Y = ax + b)
La phase de ralentissement
Taux de croissance
L'augmentation de N dans le temps est
durant la phase exponentielle,

durant la phase exponentielle,


Le milieu devient moins favorable la croissance.
La phase stationnaire
Il ny a plus de croissance
Nombre de cellules viables est constant
Equilibre entre cellules qui Equilibre entre cellules qui
ou mme nombre de cellules
Causes:
- l'puisement du milieu de culture,
- l'accumulation de mtabolites toxiques,
- l'volution dfavorable des conditions physico
La phase de ralentissement
L'augmentation de N dans le temps est plus faible que
durant la phase exponentielle,
diminue
durant la phase exponentielle,
Le milieu devient moins favorable la croissance.
l ny a plus de croissance:
Nombre de cellules viables est constant:
qui meurent et celles qui apparaissent
= 0
qui meurent et celles qui apparaissent
cellules viables sans division ni disparition.
l'puisement du milieu de culture,
l'accumulation de mtabolites toxiques,
l'volution dfavorable des conditions physico-chimiques
La phase de dclin
Le taux de croissance est
Les bactries ne se divisent plus Les bactries ne se divisent plus
et certaines sont lyses
Cette phase est visible ou pas selon la mthode dtude:
nb bactries viables (toujours) /turbidimtrie (si lyse)
est ngatif ( < 0).
bactries ne se divisent plus, beaucoup meurent bactries ne se divisent plus, beaucoup meurent
Cette phase est visible ou pas selon la mthode dtude:
nb bactries viables (toujours) /turbidimtrie (si lyse)
Variation de pendant les
= f(t)

( > 0)
( = max et Constant)
( = 0)
les phases de croissance
= f(t)
( > 0) mais en diminution
( = 0)
( < 0)
t
9.1. Cas de la diauxie
O Cas particuliers de croissance
Croissance dans 1 milieu synthtique en prsence de 2 substrats carbones.
Exemple: croissance dE. coli en prsence de glucose et de lactose
log N
Courbe de croissance diphasique (diauxie)
Glucose
9.1. Cas de la diauxie
Cas particuliers de croissance
Croissance dans 1 milieu synthtique en prsence de 2 substrats carbones.
en prsence de glucose et de lactose
lactose
Synthse denzymes
temps
Courbe de croissance diphasique (diauxie)
Synthse denzymes
(Opron lactose)
On peut amener les bactries se diviser au mme moment, ce qui
donnerait une croissance synchrone.
9.2. Croissance synchrone
Par choc thermique chez Salmonella
incubes alternativement une temprature incubes alternativement une temprature
puis 37C pendant 8 min
log N
25C

C
La courbe montre une srie de paliers successifs
correspondant chacun
28 8 8 28 28
3
7

C
25C
25C
3
7

On peut amener les bactries se diviser au mme moment, ce qui


donnerait une croissance synchrone.
9.2. Croissance synchrone
Salmonella typhimurium : les bactries sont
temprature de 25C pendant 28 min, temprature de 25C pendant 28 min,
C
25C
3
7

C
3
7

C
La courbe montre une srie de paliers successifs
correspondant chacun un doublement.
temps
8 8 28 28
9.3. Croissance continue
Dans les conditions habituelles de croissance, la phase exponentielle
ne peut durer que quelques heures.
Exprimentalement, on peut maintenir
exponentielle pendant plusieurs heures
Pour cela, il faut renouveler constamment
en liminant les produits rsultant
C'est le principe des fermenteurs
9.3. Croissance continue
Dans les conditions habituelles de croissance, la phase exponentielle
ne peut durer que quelques heures.
maintenir une culture en croissance
heures voir plusieurs jours.
constamment le milieu de culture tout
rsultant du mtabolisme cellulaire.
fermenteurs industriels.
Fermenteur de laboratoire
Fermenteurs industriels
: taux de croissance maximal et N : population constante
N est choisi en phase exponentielle
renouvellement du milieu
log N
NB. rgulation du taux de dilution qui doit tre gal au taux de croissance
: taux de croissance maximal et N : population constante
exponentielle et est maintenu constant par
Milieu non renouvel
Turbidostat
ou
Milieu renouvel
rgulation du taux de dilution qui doit tre gal au taux de croissance
temps
Milieu renouvel
10. Facteurs influenant la croissance bactrienne
- Composition du milieu de culture
- Facteurs physico-chimiques: pH, temprature, oxygne
- Agents antimicrobiens: les antibiotiques - Agents antimicrobiens: les antibiotiques
10.1. Composition du milieu de culture
Le taux de croissance d'une bactrie Le taux de croissance d'une bactrie
Ex. Bacillus subtilis: = 0,3 div/h
= 3 div/h
Facteurs influenant la croissance bactrienne
Composition du milieu de culture
chimiques: pH, temprature, oxygne
Agents antimicrobiens: les antibiotiques Agents antimicrobiens: les antibiotiques
10.1. Composition du milieu de culture
bactrie dpend du milieu de culture: bactrie dpend du milieu de culture:
div/h sur milieu synthtique
div/h sur bouillon nutritif.

chez E. coli, augmente proportionnellement la quantit de glucose


jusqu' une valeur partir de laquelle il est inutile daugmenter la
concentration du glucose (C optimale).
Cas de leffet de la concentration
max
0 C
1
C
2
C
3
C
4
NB: Un substrat fourni en concentration
bactriostatique (arrt de croissance) ou
augmente proportionnellement la quantit de glucose
jusqu' une valeur partir de laquelle il est inutile daugmenter la
concentration du glucose (C optimale).
concentration du substrat carbon
[Glucose]
C
5
concentration trop leve peut avoir un effet
ou bactricide (mort des bactries).
Substrat/rendement
En phase stationnaire, la biomasse
proportionnelle la concentration
Cette biomasse dtermine le rendement:
R = X -
C
avec: X0= P.S. des bact. t
X = P.S. des bact. phase stat. X = P.S. des bact. phase stat.
C = Quantit substrat consomm
A la concentration optimale, le taux de croissance est optimal mais
le rendement peut continuer augmenter
Substrat/rendement
biomasse cellulaire est directement
concentration de la source de carbone.
Cette biomasse dtermine le rendement:
- X
0
x 100
C
= P.S. des bact. t0 (en g)
X = P.S. des bact. phase stat. X = P.S. des bact. phase stat.
C = Quantit substrat consomm
A la concentration optimale, le taux de croissance est optimal mais
le rendement peut continuer augmenter
*Effet du pH sur la croissance
La majorit des bactries prolifrent
lgrement alcalins. (tampons /exp
10.2. Facteurs physico-chimiques:
lgrement alcalins. (tampons /exp
Il existe des bactries prsentant
Certaines exigent des pH bas: on
cas de Thiobacillus thiooxydans qui
Inversement, les bactries qui exigent
basophiles exp: Vibrio a un pH optimal
Inversement, les bactries qui exigent
basophiles exp: Vibrio a un pH optimal
Les bactries ne se dveloppant
dites neutrophiles.
Effet du pH sur la croissance
prolifrent en milieux neutres ou
/exp: K2HPO4 et KH2PO4).
chimiques:
/exp: K2HPO4 et KH2PO4).
prsentant des tolrances particulires au pH:
on parle de bactries acidophiles
qui a un pH optimal de l'ordre de 2
exigent un pH lev sont dites des
optimal de 9
exigent un pH lev sont dites des
optimal de 9
qu'au voisinage de la neutralit sont
Les limites de temprature entre lesquelles les organismes vivants
peuvent crotre sont:
- 5C : point de conglation de l'eau dans les cellules vivantes
*Effet de la temprature sur la croissance
- 5C : point de conglation de l'eau dans les cellules vivantes
+ 80C : thermolabilit des protines et des acides nucliques
Selon la temprature optimale de dveloppement,
Types T min
Psychrophiles -15C Psychrophiles -15C
Msophiles 5 10C
Thermophiles 40C
A 37C: G de E. coli est de 20 mn,
Les limites de temprature entre lesquelles les organismes vivants
C : point de conglation de l'eau dans les cellules vivantes
Effet de la temprature sur la croissance
C : point de conglation de l'eau dans les cellules vivantes
C : thermolabilit des protines et des acides nucliques
dveloppement, on distingue:
T opt T max
+ 10C + 20C + 10C + 20C
30 37C 40 43C
42 55C 60 80C
mn, A 42C: G devient 50 mn
*Effet de la pression osmotique sur la croissance
La bactrie accumule dans le cytoplasme une concentration leve
en substrats
PO int > PO ext
Si forte augmentation de l'osmolarit du milieu extracellulaire
risque defflux d'eau
inhibition de processus vitaux: biosynthse de macromolcules,
rplication de l'ADN etc : arrt de croissance,
pour viter cela, la bactrie doit ajuster sa pression osmotique
interne une valeur suprieure celle du milieu externe,
Cest losmorgulation: accumulation de K+, dacides amins, sucres etc
Effet de la pression osmotique sur la croissance
La bactrie accumule dans le cytoplasme une concentration leve
en substrats
PO ext
forte augmentation de l'osmolarit du milieu extracellulaire
risque defflux d'eau
plasmolyse
inhibition de processus vitaux: biosynthse de macromolcules,
rplication de l'ADN etc : arrt de croissance,
la bactrie doit ajuster sa pression osmotique
interne une valeur suprieure celle du milieu externe,
accumulation de K+, dacides amins, sucres etc
Groupe Exemple
Selon ce pouvoir dosmorgulation, on distingue 4 groupes de bactries
Groupe Exemple
Non Halophiles E. coli
Halophiles Pseudomonas
Halophiles modrs Pediococcus
Halophiles extrmes Halobacterium Halophiles extrmes Halobacterium
Exemple [NaCl] tolre
Selon ce pouvoir dosmorgulation, on distingue 4 groupes de bactries
Exemple [NaCl] tolre
0 4 %
Pseudomonas marina 0,2 5 %
Pediococcus halophilus 2,3 20,5 %
Halobacterium 5 36 % Halobacterium 5 36 %
10.3. Agents antimicrobiens:
Au sens strict:
Agents chimiothrapeutiques:
Au sens strict:
Agent antimicrobien, produit par
dautres microorganismes.
Au sens large:
Toute Toute molcule molcule de de faible faible PM PM dorigine dorigine Toute Toute molcule molcule de de faible faible PM PM dorigine dorigine
synthtique synthtique ou ou hmisynthtique hmisynthtique (les (les
ltal ltal (bactricide) (bactricide) ou ou statique statique ( ( bactriostatique) bactriostatique)
La toxicit est slective
10.3. Agents antimicrobiens:
Agents chimiothrapeutiques:
des microorganisme, tue ou inhibe
dorigine dorigine naturelle naturelle (les (les antibiotiques),, dorigine dorigine naturelle naturelle (les (les antibiotiques),,
(les (les sulfamides) sulfamides) pouvant pouvant avoir avoir un un effet effet
bactriostatique) bactriostatique). .
1
0
9
Modalit daction:
c
f
u
/
m
l
Temps (h) 24 h
1
0
5
Tmoin
Bactriostatique
inhibe la croissance
1 mg / l
Temps (h) 24 h
2 mg / l
1
0
5
Tmoin
Bactricide
tue les bactries
c
f
u
/
m
l
Tmoin
Temps
1
0
2
2 mg / l
Concentration - dpendant
Temps (h) 24 h
1 mg / l
Temps - dpendant
2 mg / l
dpendant
Mode daction
- Action sur la synthse de la paroi
- Action sur la membrane cytoplasmique
- Action sur la synthse des protiques
- Action sur les acides nucliques
Action sur la synthse de la paroi
Action sur la membrane cytoplasmique
Action sur la synthse des protiques
Action sur les acides nucliques
Action sur la synthse de la paroi:
Ex. la Pnicilline = analogue structural
empche son incorporation dans
Il y a multiplication mais clatement
labsence de la paroi.
Action pendant la phase active
labsence de la paroi.
Action sur la membrane cytoplasmique:
Ex. la polymixine = Antibiotique
altrent altrent la la membrane membrane plasmique plasmique
Ex. la polymixine = Antibiotique
altrent altrent la la membrane membrane plasmique plasmique
seront seront lorigine lorigine de de perturbation perturbation
Action pendant et en dehors de la croissance.
Action sur la synthse de la paroi:
structural du dipeptide D-alanine, il
dans le chanon peptidique.
clatement cellulaire par suite de
active de croissance: Effet bactricide
Action sur la membrane cytoplasmique:
Antibiotique de nature polypeptidique qui qui
plasmique plasmique en en yy formant formant des des pores pores qui qui
Antibiotique de nature polypeptidique qui qui
plasmique plasmique en en yy formant formant des des pores pores qui qui
perturbation perturbation des des changes changes membranaires membranaires. .
Action pendant et en dehors de la croissance. Effet bactricide
Action sur la synthse des protines:
Les antibiotiques agissent sur les
lecture du code ou la fausser.
Ex. 1: Lerythromycine se fixe au
Elle empche la fixation du complexe
Action pendant la phase active de croissance
inhibition de la synthse protique
Ex. 2: La streptomycine se fixe au
Il y a des erreurs de lecture du Il y a des erreurs de lecture du
dacides amins ne correspondant
Il y a synthse de protines non sens
Action pendant la phase active de
Action sur la synthse des protines:
les ribosomes pour empcher la
au niveau de lunit 50 S du ribosome
complexe acides amins-ARNt,
croissance. Effet bactriostatique
protique.
au niveau de lunit 30 S du ribosome
du code gntique et lincorporation du code gntique et lincorporation
pas linformation des ARNm,
sens (lthales).
croissance. Effet bactricide
Action sur les acides nucliques
Action sur lADN:
Ex. la mitomycine forme des ponts entre les hlices de lADN Ex. la mitomycine forme des ponts entre les hlices de lADN
Elle empche la rplication par la polymrase et bloque la croissance
Action pendant la phase active de croissance.
Action sur lARN:
Ex. lactinomycine bloque lARN polymrase Ex. lactinomycine bloque lARN polymrase
Action sur les acides nucliques
Ex. la mitomycine forme des ponts entre les hlices de lADN Ex. la mitomycine forme des ponts entre les hlices de lADN
Elle empche la rplication par la polymrase et bloque la croissance
Action pendant la phase active de croissance. Effet bactriostatique
Ex. lactinomycine bloque lARN polymrase Ex. lactinomycine bloque lARN polymrase
Taxonomie bactrienne Taxonomie bactrienne
Principe
- tout individu appartient une espce
- les espces proches sont groupes - les espces proches sont groupes
- les genres rapprochs sont runis
- les familles prsentant des similitudes
- les ordres apparents sont rangs
- les classes semblables sont runies
espce,
groupes en un genre, groupes en un genre,
runis en une famille,
similitudes forment un ordre,
rangs en une classe,
runies en une division ou phylum.
Taxonomie = Systmatique: science
tres vivants ainsi que les relations
Elle consiste :
Caractriser les bactries, Caractriser les bactries,
Les classer sur la base de leur similitude,
(genres, espces...),
Appliquer le code international
pour les nommer (Exp: Escherichia
Identifier de nouveaux organismes
ou non lune des espces connues
pour les nommer (Exp: Escherichia
science qui tudie la diversit des
relations qui existent entre eux.
similitude, en groupes ou taxons
de la nomenclature bactrienne
Escherichia coli),
organismes et dterminer leur appartenance
connues.
Escherichia coli),
L'unit taxonomique = l'espce
Une espce biologique est un ensemble
un haut degr de ressemblance phnotypique
Chez les organismes suprieurs, la
l'interfcondit des individus: patrimoine
Or: bactries = microorganismes
voie asexue, gnralement par division
Pour dfinir une espce bactrienne Pour dfinir une espce bactrienne
amens fixer une limite arbitraire
laquelle deux types doivent tre
diffrentes .
ensemble d'individus qui prsentent
phnotypique.
la notion d'espce est fonde sur
patrimoine hrditaire.
microorganismes haplodes, se reproduisant par
division binaire.
bactrienne les taxonomistes sont bactrienne les taxonomistes sont
arbitraire de diffrences partir de
tre classs en deux espces
LWOFF dfinit un biotype: "un
mme patrimoine hrditaire
majorit de leurs caractres".
Le biotype drive du clone Le biotype drive du clone
bactrienne issue d'une mme
multiplie par divisions binaires
Cette population bactrienne issue
bactrienne. Les individus
identiques sauf en cas de mutation identiques sauf en cas de mutation
Une espce regroupe les
une grande similitude de caractres
"un groupe d'individus possdant le
hrditaire et ont en commun la grande
.
clone qui reprsente la population clone qui reprsente la population
mme et unique cellule qui s'est
binaires.
issue d'un clone est appele souche
d'une souche sont en principe
mutation. mutation.
souches bactriennes prsentant
caractres.
OLa taxonomie classique
Critres morphologiques et structuraux
Insuffisants mais un premier
Cependant, certains caractres sont
Critres biochimiques
-Fermentation des glucides /exp
Voges Prauskauer)
Cependant, certains caractres sont
Exp: les Gram+ gs prennent l'aspect
Cas particuliers: catalases (H
2
O
2
)
- Dgradation des protines /exp
- Dgradation des lipides
classique
Critres morphologiques et structuraux
regroupement simple et pratique,
sont sujets des variations:
la Fermentation du glucose (test
sont sujets des variations:
l'aspect des Gram- (Bacillus subtilis)
et coagulases (plasma)
exp Dgradation de la peptone
Critres immunologiques
Chaque srotype tant un groupe de
avec un mme anticorps ou un groupe
L'tablissement de la carte antignique
Critres de lysotypie
Le site de fixation est une protine
Les souches du mme srotype peuvent
La fixation des bactriophages
bactrienne.
Le site de fixation est une protine
Deux souches capables de fixer les
cycles lytiques appartiennent au
appartenir la mme espce.
Si phage virulent: lyse bactrienne
de souches prsentant une raction
groupe d'anticorps.
antignique = srotypage.
protine spcifique d'un phage.
peuvent appartenir la mme espce
est lie des sites sur la paroi
protine spcifique d'un phage.
les mmes phages et dveloppant des
au mme lysotype et peuvent
(cycle lytique).
OLa taxonomie molculaire
Dans la taxonomie classique, l'tude
qu'une information incomplte
morphologiques, biochimiques,
traduisent qu'une faible proportion traduisent qu'une faible proportion
C'est pourquoi une approche
taxonomie bactrienne. Elle concerne
chimique du gnome bactrien.
Le %GC ou le coefficient de Chargaff
L'hybridation ADN / ADN
Lanalyse et squenage des ARN ribosomaux
molculaire
l'tude des phnotypes ne donne
incomplte: les caractres
biochimiques, srologiques etc ne
proportion du gnome. proportion du gnome.
gntique est ncessaire en
concerne la nature physico-
Chargaff
Lanalyse et squenage des ARN ribosomaux
2.1. Le GC% ou le coefficient de Chargaff
La technique de Chargaff est base
deux groupes de bases azotes (GC
UV (260 nm).
Pour que deux souches soient considres
la mme espce, il faut que la
UV (260 nm).
Le coefficient GC% = nombre de
100 couples de bases dans l'ADN de
Chez les bactries, le GC% varie de 30 75 %
la mme espce, il faut que la
leur ADN soit infrieur 5%.
Chargaff
base sur l'valuation quantitative des
(GC et AT) en spectrophotomtrie
considres comme appartenant
la diffrence entre les GC% de
de couples (guanine+cytosine) pour
de la bactrie tudie.
Chez les bactries, le GC% varie de 30 75 %
la diffrence entre les GC% de
Mais: si le %GC est une information
comporte des limites:
Deux bactries peuvent avoir le mme
les mmes squences nuclotidiques
trs loignes. trs loignes.
10 30 50
ADN bactrien : GC%
Steptococcus
Staphylococcus
information importante en taxonomie, il
mme %GC mais ne pas prsenter
nuclotidiques et tre donc gntiquement
70 90%
ADN bactrien : GC%
Steptococcus
Staphylococcus
2.2. Lanalyse des ADN ribosomaux
IGS
ADNr 16S
Promoteur
ADNr 23S
ADNr 16S
5
ADNr 23S
Outil phylogntique rpondant aux
volutive, en particulier la stabilit
Analyse du gne rDNA-16S
- Amplification et analyse du
de restriction: PCR/RFLP
- Squenage total ou partiel
2.2. Lanalyse des ADN ribosomaux
3
IGS
5S
Terminaison
ADNr 23S
3
5S
ADNr
ADNr 23S
aux critres ncessaires une tude
stabilit
du polymorphisme des fragments
partiel
M
.
m
e
d
i
t
e
r
r
a
n
e
u
m
R
.
t
r
o
p
i
c
i
M

I
I
I
M

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R
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l
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B
.
j
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c
u
m
R
.
m
e
l
i
l
o
t
i
M
.
c
i
c
e
r
i
R
c
h

2
4
R
c
h

9
8
6
8
R
c
h

9
8
1
3
R
c
h

9
8
4
1
R
c
h

9
8
6
5
R
c
h

9
8
5
R
c
h

9
8
4
21226 pb
1584 pb
3530 pb
21226 pb
Electrophorse sur gel polyachrylamide
du 16 S amplifi
1
0
0

p
b
R
c
h

9
8
1
R
c
h

9
8
4
R
c
h

6
0
R
c
h

9
8
2
1
R
c
h

9
8
6
5
R
c
h

9
8
1
5
R
c
h

9
8
4
0
R
c
h

9
8
1
9
R
c
h

9
8
5
R
c
h

9
8
1
6
R
c
h

9
8
2
MspI
800 pb
200 pb
Gel des profils de restriction
du 16 S par MspI
2.3. L'hybridation ADN / ADN
- Le chauffage d'un ADN bicatnaire
squences complmentaires: cest
- Un refroidissement entrane
d'ADN: c'est la renaturation in vitro
Un refroidissement entrane
d'ADN: c'est la renaturation in vitro
- Si on mlange deux ADN dnaturs
bactriennes, l'ADN monobrin d'une
rassocier avec le monobrin issu
former un ADN bicatnaire hybride
- Ainsi, plus deux espces sont proches - Ainsi, plus deux espces sont proches
squences de bases se ressemblent
plus il est facile de former des ADN
- Chez les Enterobacteriaceae,
la mme espce si le taux dhybridation
100%.
bicatnaire donne deux brins homologues
cest la dnaturation.
un rappariement des deux brins
vitro.
un rappariement des deux brins
vitro.
dnaturs provenant de deux espces
d'une espce peut ventuellement se
issu de la deuxime bactrie pour
hybride: c'est l'hybridation.
proches gntiquement, cd plus leur proches gntiquement, cd plus leur
ressemblent (degr d'homologie important)
ADN hybrides.
on considre que 2 souches sont de
dhybridation ADN/ADN est de 70
OLa taxonomie numrique
Pour construire une classification
phnotypiques et/ou molculaires,
plus d'importance certains d'entre
arbitraire et donc peu fiable.
Pour s'y soustraire, Adonson (botaniste)
tous les caractres le mme poids.
numrique ou adansonnienne (Adonson
Principe: Tous les caractres phnotypiques
mme valeur. mme valeur.
Les distances taxonomiques entre
par un coefficient de similitude
caractres partags par rapport
examins.
Exp programme:
classification l'aide des caractres
le chercheur est amen donner
d'entre eux. Cette conception est
(botaniste) a propos d'affecter
. De ce fait on parle de taxonomie
Adonson).
phnotypiques d'un organisme ont la
entre deux organismes sont exprimes
similitude calcul d'aprs le nombre de
rapport au nombre total de caractres
Exp programme: UPGMA
48 souches de rhizobium:
nodulant le pois-chiche
Performance symbiotique (nodulation et fixation dazote) Performance symbiotique (nodulation et fixation dazote)
Croissance sur milieu YEM (taux de croissance)
Tolrance la salinit
Tolrance aux pHs
Tolrance la temprature
(de 4 9,5)
Tolrance la temprature
Rsistance intrinsque : antibiotiques, mtaux lourds
Analyse numrique :
Assimilation de 49 carbohydrates
48 souches de rhizobium:
nodosits racinaires
13 rgions du Maroc
tages bioclimatiques
(nodulation et fixation dazote) (nodulation et fixation dazote)
(taux de croissance)
(NaCl, KCl, CaCl
2
, Na
2
SO
4
, K
2
SO
4
, CaSO
4
)
(de 4 9,5)
(de 5 45C)
antibiotiques, mtaux lourds
Assimilation de 49 carbohydrates
(de 5 45C)
UPGMA
0,90 0,85 0,80 0,75 0,70 0,65 0,60
Niveau de similarit
Phnogramme reprsentant la similarit phnotypique entre les
rhizobia du pois chiche de diffrentes rgions du Maroc.
Rch 9869
Rch 9868
Rch 9871
Rch 9813
Rch 9835
Rch 9832
1,00 0,95
Rch 984
Rch 985
Rch 9819
Rch 9820
Rch 9861
Rch 9862
Rch 9863
Rch 9865
GroupeIII
100%
Kala
Groupe II
100%
Ben Slimane
Rch 7
Rch 128
Rch 102
Rch 10
Rch 28
Rch 35
Rch 18
Rch 30
Rch 2
Rch 5
Rch 14
Rch 16
Rch 161
Rch 134
Rch 94
Rch 60
Rch 19
Rch 24
Rch 13
Rch 984
Rch 125
Rch
126
Groupe I
isolats de
diffrentes
rgions
Rch 982
Rch 983
Rch 988
Rch 989
Rch 9821
Rch 9822
Rch 9840
Rch 9841
Rch 9842
Rch 8
Rch 9815
Rch 9816
Rch 2
Rch 981
Phnogramme reprsentant la similarit phnotypique entre les
rhizobia du pois chiche de diffrentes rgions du Maroc.
M
.
m
e
d
i
t
e
r
r
a
n
e
u
m
R
.
t
r
o
p
i
c
i
M

I
I
I
M

I
I
I
R
.
e
t
l
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B
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j
a
p
o
n
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c
u
m
R
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m
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l
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l
o
t
i
M
.
c
i
c
e
r
i
R
c
h

2
4
R
c
h

9
8
6
8
R
c
h

9
8
1
3
R
c
h

9
8
4
1
R
c
h

9
8
6
5
R
c
h

9
8
5
R
c
h

9
8
4
21226 pb
1584 pb
3530 pb
21226 pb
Gel polyachrylamide
du 16 S amplifi
1
0
0

p
b
R
c
h

9
8
1
R
c
h

9
8
4
R
c
h

6
0
R
c
h

9
8
2
1
R
c
h

9
8
6
5
R
c
h

9
8
1
5
R
c
h

9
8
4
0
R
c
h

9
8
1
9
R
c
h

9
8
5
R
c
h

9
8
1
6
R
c
h

9
8
2
MspI
800 pb
200 pb
Gel des profils de restriction
du 16 S par MspI
0.006
Dendrogramme, bas sur la PCR/RFLP du
16S, montrant la position phylogntique des
nodulant le pois chiche au Maroc, par rapport
souches de rfrence.
Groupe 4
Groupe 3
Rch9835
Rch9861
Rch9862
Rch9863
Rch9865
Rch9813
Rch9868
Rch9869
Rch9871
S. Meliloti GR4
S. fredii USDA 205
R. tropici IIb Ciat 899
R. etli CFN42
R. leguminosarum bv viciae VF 39
B. japonicum USDA 110
Agrobacterium sp. 348
M. mediterraneum IC60
Groupe 3
Groupe 2
Rch7
Rch8
Rch102
Rch128
Rch981
Rch982
Rch983
Rch988
Rch989
Rch9821
Rch9822
Rch9840
Rch9841
Rch9842
Rch984
Rch985
Rch9819
Rch9820
Rch9832
M. ciceri IC2091
M. loti
NZP2213
Groupe 1
Rch5
Rch10
Rch13
Rch14
Rch16
Rch18
Rch19
Rch24
Rch28
Rch30
Rch35
Rch60
Rch94
Rch125
Rch126
Rch134
Rch161
Rch9815
Rch9816
M. ciceri IC2091
gne rDNA
des rhizobia
rapport aux
A. caulinodans
88
100
100
58
100
100
73
98
100
100
96
61
88
0.01
96
50
100
97
100
Arbre phylogntique bas sur le
G4
S
i
n
o
r
h
i
z
o
b
i
u
m
S. meliloti
A. caulinodans
S. medicae
Rch9813, Rch9868
S. terangae
S. saheli
S. fredii
S. xinjiangensis
R. giardinii
A. rhizogenes
R. tropici
R. etli
R. leguminosarum
R. hainanense
58
77
100
G1
+
G2
M
e
s
o
r
h
i
z
o
b
i
u
m
Rch9816
Rch2B, Rch10B, Rch19B
M. loti
A. vitis
R. hainanense
R. gallicum
R. mongolense
A. rubi
A. tumefaciens
R. galegae
R. huautlense
M. tianshanense
M. chacoense
M. ciceri
Rch981
99
85
100
100
G2
G3
M
e
s
o
r
h
i
z
o
b
i
u
m
M. mediterraneum
Rch9816
Rch9815
Rch7B
M. amorphae
M. huakuii
M. plurifarium
Rch984, Rch9865
B. elkanii
B. japonicum
100
97
68
Arbre phylogntique bas sur le squenage des rDNA-16
M. ciceri
M. loti
G 1: Rch 9816, 2, 10, 19
Espces de rfrence Groupes et souches
Rch 9815
M. Mediterraneum
M. tianshanense
G 3: Rch 984, Rch 9865
M. Ciceri
M. Loti
G 2: Rch 7, 981
M. loti
S. Meliloti
Sinorhizobium sp
G 4: Rch 9813, Rch9868
% de similitude des squences des ADNr 16S entre les groupes de rhizobia de pois chiche
et les espces des genres Mesorhizobium
2 bases
4 bases
Nombre de bases diffrentes Taux de similitude
Espces de rfrence
99.8%
99.6%
1 base
6 bases
99.9%
99.4%
Mediterraneum
2 bases
4 bases
99,8%
98.6%
3 bases
4 bases
99.7%
99.6%
% de similitude des squences des ADNr 16S entre les groupes de rhizobia de pois chiche
Mesorhizobium et Sinorhizobium