Odat cu creterea numrului de enzime descoperite i studiate sub aspectele structurii lor chimice i mecanismului reaciei catalizate, a aprut

necesitatea unei clasificri tiinifice a acestora. Astzi este valabil clasificarea propus n 1964 de ctre Comisia de Enzimologie a Uniunii Internaionale de Biochimie care are la baz tipul i mecanismul reaciei catalizate (fig. 2). Conform acestui criteriu, enzimele cunoscute pn n prezent se clasific n ase clase principale, enzimele cuprinse ntr-o clas cataliznd acelai tip de reacie: 1) oxidoreductazele - enzime ce catalizeaz reaciile de oxidoreducere ce au loc n organismele vii; 2) transferazele - enzime ce catalizeaz reacii de transfer ale unor grupe de atomi ce pot fi i grupe funcionale de la un substrat la altul, fr ca aceste grupri s existe libere n timpul procesului; 3) hidrolazele - enzime ce catalizeaz scindarea diferitelor legturi covalente din molecula substratului cu participarea moleculelor de ap; 4) liazele - enzime ce catalizeaz reacii de adiie a unor grupe de atomi la molecula substratului sau clivarea acestor grupri cu rearanjarea ulterioar a valenelor; 5) izomerazele - enzime care catalizeaz diferite reacii de izomerizare a substratelor; 6) ligazele sau sintetazele - enzime ce catalizeaz formarea unor noi legturi chimice carbon carbon sau carbon heteroatom, n majoritatea cazurilor utilizndu-se energia stocat n legturile macroergice ale moleculelor de ATP. La rndul lor enzimele din fiecare clas se mpart n subclase i subsubclase, n funcie de mecanismul de reacie, natura cofactorului, tipul de legtur chimic din substrat asupra creia acioneaz etc. n cadrul fiecrei subsubclase, enzimele sunt aranjate ntr-o anumit ordine, n special cronologic (cartea cu nomenclatura enzimelor). Conform acestei clasificri, fiecare enzim este caracterizat nu numai de o denumire ci i de un cod specific format din patru cifre: prima cifr reprezint clasa, a doua subclasa, a treia cifr arat subsubclasa, iar ultima cifr a codului indic numrul de ordine din subsubclasa respectiv. Acest cod este precedat de prescurtarea E.C. (Enzyme Commission). De exemplu, denumirea corect i complet a catalazei este H2O2: H2O2-oxidoreductaza (EC 1.11.1.6), iar cea a enzimei cu denumirea trivial dihidroorotaza este L-5,6-dihidroorotat-amidohidrolaza (EC 3.5.2.3). II.2.3.1 Caracterizarea clasei oxidoreductazelor

Din numrul total de enzime cunoscute pn n prezent, aproximativ 25 % sunt enzime ce catalizeaz diferite reacii de oxidare i reducere biologic, aparinnd clasei oxidoreductazelor. Acestea sunt implicate, n principal, n procesele de oxidare biologic i catalizeaz reacii bimoleculare:

Aox + Bred

Ared + Box

Denumirea sistemic a oxidoreductazelor se alctuiete prin includerea denumirii donorului i acceptorului de hidrogen urmate de termenul oxidoreductaza (donor:acceptoroxidoreductaza). Atunci cnd acceptorul de hidrogen este oxigenul, se folosete termenul de oxidaz. De exemplu, denumirea sistemic a alcooldehidrogenazei este alcool:NAD+ oxidoreductaza (EC 1.1.1.1), catalaza are denumirea sistemic H2O2:H2O2-oxidoreduc-taza (EC 1.11.1.6). n acelai timp, Uniunea Internaional de Biochimie permite i utilizarea aanumitelor denumiri de lucru prescurtate: alcooldehidrogenaza, malat - dehidrogenaza etc. O enzim important din aceast clas este lactat - dehidrogenaza (L-lactat:NAD+oxidoreductaza EC 1.1.1.27) ce catalizeaz reacia de conversie a acidului lactic n acid piruvic:
NAD COOH H C OH CH3 D(+)lactat
+

NADH+H

COOH C O L.D.H CH3 piruvat

Aceast reacie este implicat n fermentaiile lactice precum i n procesul anaerob de degradare a glucidelor prin glicoliz. Determinarea activitii acestei enzime n snge este utilizat n practica medical pentru diagnosticul infarctului de miocard, a hepatitei virale, a anemiei pernicioase etc. Reaciile enzimatice catalizate de oxidoreductaze care posed n calitate de coenzim NAD+ sau NADP+ sunt de obicei reacii reversibile i sunt cuplate cu alte reacii de regenerare a coenzimei. n prima reacie coenzima, care are i rol de cosubstrat, se reduce, iar n reacia cuplat (conjugat) se regenereaz forma oxidat a coenzimei:
Gliceraldehid-3-fosfat NAD
+

Acetaldehid

Gliceraldehidfosfatdehidrogenaza

Alcool-dehidrogenaza

Acid 1-3-difosfogliceric

NADH+H

Etanol

Aceste reacii conjugate prezint o deosebit importan pentru procesele redox ce au loc n celulele vii deoarece permit refacerea continu a acceptorilor de hidrogen. II.2.3.2 Caracterizarea clasei transferazelor n transformrile biochimice catalizate de enzimele aparinnd acestei clase, are loc clivarea unei grupe de atomi R (ce poate fi i grupare funcional) din structura substratului A-R i fixarea acesteia pe cel de-al doilea substrat:

A R + B

transferaz

A +

B R

Reaciile catalizate de transferaze sunt prin urmare reacii bimoleculare, n care un substrat joac rol de donor, iar cellalt rol de acceptor al gruprii transferate. Din aceast cauz, denumirea sistemic a acestor enzime este de tipul donor:acceptor-transferaza. Dintre enzimele cunoscute pn n prezent, aproximativ 30% sunt transferaze. Din aceast clas de enzime fac parte, de exemplu aminotransferazele, enzime ce catalizeaz reacia unui -aminoacid cu un -cetoacid, conducnd la formarea unui nou aminoacid i a unui nou cetoacid. Din punctul de vedere al mecanismului de reacie, aceast transformare poate fi considerat ca fiind o dezaminare oxidativ a donorului (aminoacidul) cuplat cu aminarea reductiv a acceptorului (cetoacidul) iar aminotransferazele ar putea fi considerate i ca
COOH oxidoreductaze: H C NH 2 R1 COOH COOH H C NH 2 Aminotransferaz R2 R2 R1 COOH

C=O

C=O

-Aminoacid I

-Cetoacid I

-Aminoacid II

-Cetoacid II

II.2.3.3 Caracterizarea clasei hidrolazelor Aceast clas conine aproximativ 24 % din enzimele cunoscute pn n prezent, enzime ce catalizeaz reacia de scindare a substratului cu participarea apei:
S R + H2O S OH + R H

Dei reaciile sunt reversibile, in vivo echilibrele sunt deplasate n sensul hidrolizei, n timp ce procesele inverse au loc, de regul, pe alte ci metabolice. Reacii hidrolitice se ntlnesc n aproape toate cile metabolice, hidrolazele participnd att la metabolismul glucidelor, lipidelor i proteinelor, ct i n metabolismul produilor secundari.

Clasificarea hidrolazelor n subclase i subsubclase se face n funcie de natura legturii chimice ce urmeaz a fi scindat. Pentru hidrolazele implicate n scindarea hidrolitic a diferitelor tipuri de esteri este intrat n uz denumirea generic de esteraze. O esteraz foarte cunoscut este lipaza a crei denumire sistemic este triacilglicerol-acil-hidrolaza (EC 3.1.1.3) i care este implicat n scindarea hidrolitic a triacilglicerolilor:

CH 2 O CO R1 lipaza CH O CO R2 + 3 H 2O CH 2 O CO R3 triacilglicerol

CH 2 OH CH OH CH 2 OH glicerol

R1 COOH R2 COOH R3 COOH acizi grasi ,

Spre deosebire de celelalte enzime, lipaza prezint o particularitate legat de natura substratului asupra cruia acioneaz, mai exact a lipidelor care sunt insolubile n ap. In vivo are loc mai nti o emulsionare a grsimilor (care n cazul animalelor se realizeaz cu ajutorul bilei secretat de ficat) i n felul acesta crete suprafaa de contact dintre faza liposolubil a substratului i cea hidrosolubil a enzimei. Din aceast cauz, viteza iniial de reacie este dependent de numrul de molecule enzimatice adsorbite la interfaz, fiind, n general, mic. Ulterior, dup formarea primelor molecule de acizi grai, viteza de reacie crete datorit emulsionrii mai rapide a substratului, moleculele de acizi grai avnd zone cu proprieti hidrofobe i hidrofile (R-COO). Din aceeai clas fac parte cele dou fosfomonoesteraze (fosfataze), alcalin i acid cu denumirile sistemice ortofosfat-monoester-fosfohidrolaza (pH optim alcalin) (EC 3.1.3.1) i respectiv ortofosfat-monoester-fosfohidrolaza (pH optim acid) (EC 3.1.3.2). Fosfataza alcalin catalizeaz scindarea hidrolitic a esterilor acidului ortofosforic ai alcoolilor primari, secundari i ciclici, fenolilor etc., dar nu i fosfodiesterii. Fosfataza acid hidrolizeaz un mare numr de fosfomonoesteri, fosfoproteine i altele:

CH 2 OH CH O PO 3H2 CH 2 OH - Glicerofosfat

H2O fosfataz

CH 2 OH CH OH CH 2 OH Glicerol + H3PO4

Aceste dou enzime prezint o importan deosebit i din punct de vedere medical, activitatea lor fiind determinat n snge n scopul diagnosticrii litiazelor biliare i a diferitelor afeciuni hepatice, respectiv a unor boli ale prostatei.

Un rol extrem de important n procesul complex de rennoire a proteinelor structurale l joac o serie de proteinaze tisulare reunite sub numele de catepsine. n prezent se cunosc mai multe catepsine notate cu majuscule ale alfabetului latin (A, B, C, D, E etc.) ce se deosebesc ntre ele dup specificitatea de substrat, pH-ul optim de aciune i alte criterii. O grup de enzime proteolitice extrem de intens studiat n ultima vreme o reprezint caspazele (cysteinil aspartate cleaving proteases), cistein-proteinase responsabile de distrugerea progresiv a celulei prin apoptoz. Moartea celular programat este parte integrat a fiziologiei normale a unui organism. Astfel, n cursul numeroaselor mitoze i diferenieri celulare care permit crearea unui organism pornind de la stadiul de ou, este necesar eliminarea celulelor inutile sau potenial periculoase. Acest fenomen de eliminare selectiv a celulelor este mediat printr-un proces denumit apoptoz (termenul provine de la grecescul , ce nseamn cderea frunzelor).

Noiunea de apoptoz a fost introdus n 1972 de ctre Kerr i et al.. pentru a indica o form de moarte celular total diferit de necroz att din punct de vedere morfologic ct i biochimic. Apoptoza se ntlnete la toate tipurile de celule vegetale sau animale, uni- sau pluricelulare, pn la nivelul mamiferelor superioare. O dereglare de la moartea celular programat poate sta la originea numeroaselor stri patologice; unele sunt legate de o inhibiie a apoptozei (cancer, sindrom limfoproliferativ etc), n timp ce altele sunt asociate cu o stimulare a acestui fenomen (SIDA, maladiile neurodegenerative, maladiile auto-imune etc.). n cursul apoptozei, celulele pun n eviden un mecanism de sinucidere care se traduce prin numeroase schimbri morfologice: membranele plasmatice se dezorganizeaz i exprim semnale pro-fagocitare alctuind corpii apoptotici, cromatina se condenseaz nainte de a fi degradat ntr-un profil caracteristic numit treptele scrii. Corpii apoptotici formai sunt apoi rapid eliminai de ctre celulele adiacente. Aceast eliminare este primordial deoarece ea nu permite lsarea nici unei urme n esutul unde survine apoptoza, n particular, previnenind toate necrozele secundare care vor avea drept consecin eliberarea aleatorie a coninutului celular i va permite astfel limitarea stabilirii unei reacii inflamatorii. Necroza i apoptoza. Necroza este considerat ca o moarte celular dezordonat. n fapt n cursul necrozei celulele acumuleaz ap astfel nct antreneaz liza membranei plasmatice. Aceast veritabil explozie celular conduce la redetaarea n mediul nconjurtor a coninutului citoplasmatic. Organitele vor avea, de asemenea, tendina de a se gonfla, iar ADN-ul nuclear va fi degradat n manier aleatorie de endoglucanaze activate (mai ales serin-proteinaze). n opoziie cu necroza, apoptoza este considerat ca o moarte celular ordonat, acionnd n

diferite faze. Mai nti celulele n apoptoz vor fi izolate de alte celule (dispare contactul ntre celule). Unul din punctele morfologice caracteristice al apoptozei este importana condensrii simultane a nucleului i a citoplasmei ce induce o diminuare semnificativ a volumului celular. Mitocondriile celulelor apoptotice vor suferi mai multe modificri majore, dintre acestea amintim detaarea citocromului c n citoplasm, diminuarea potenialului membranar i modificarea permeabilitii mitocondriale care permite deschiderea porilor specializai. Nucleul se condenseaz, apoi cromatina este clivat n fragmente regulate de aproximativ 180 pb. Membrana plasmatic va nmuguri i va conduce la formarea corpilor apoptotici renchiznd o parte din citoplasm n celul. n scopul de a facilita recunoaterea corpilor apoptotici prin fagocitoz, celulele vor semnala starea lor apoptotic graie schimbrilor de localizare a moleculelor de fosfatidilserin care trec de la o orientare citoplasmatic la una extracelular. Moartea celular programat este un proces rapid cteva ore. Unul din punctele majore ale apoptozei este integritatea membranei plasmatice care nu este niciodat alterat n cursul procesului, ceea ce permite evitarea deversrii coninutului celular i astfel, prevenirea tuturor deteriorrilor esuturilor din jur. Totui, inflamarea nu este total absent n timpul apoptozei (avnd n vedere externalizarea IL-1 i IL -18 n mediul nconjurtor) ns este vorba de o inflamare regulat. II.2.3.4 Caracterizarea clasei liazelor Din aceast clas fac parte enzimele ce catalizeaz reacii de rupere a unor legturi carbon-carbon sau carbon-heteroatom din molecula substratului, fr participarea apei, cu rearanjarea ulterioar a valenelor. Pentru majoritatea enzimelor din aceast clas, denumirea sistemic se face prin adugarea termenului liaza la numele substratului asupra cruia acioneaz enzima respectiv. Atunci cnd reacia invers este mai important din punct de vedere metabolic, sau atunci cnd s-a demonstrat doar existena acesteia, se poate utiliza i denumirea de sintaz (dar nu sintetaz). Pentru liazele ce catalizeaz unele reacii particulare, sunt utilizate denumirile triviale: decarboxilaz, aldolaz, dehidrataz etc. Dintre enzimele cunoscute pn n prezent, liazele reprezint aproximativ 13 %. mprirea liazelor n subclase se face n funcie de natura legturii chimice pe care acestea o scindeaz. Astfel, subclasa 4.1. cuprinde enzimele ce catalizeaz ruperea legturilor carboncarbon: decarboxilazele (4.1.1), aldehid-liazele (4.1.2), hidroxiacid-liazele (4.1.3) etc. n mod similar, subclasa 4.2. conine carbon-oxigen-liazele, subclasa 4.3. - carbon-azot-liazele .a.m.d. O categorie important de enzime din aceast clas o reprezint aldolazele, enzime ce catalizeaz diferite reacii de condensare aldolic. Astfel, fructozo-difosfat-aldolaza, a crei

denumire sistemic este D-fructozo 1 , 6 difosfat D gliceraldehid 3 fosfat - liaza (EC 4.1.2.13) catalizeaz o reacie important a cii glicolitice i a fotosintezei:

O CH2 O

CH2 O

CH2 O C O CH2 OH

P +

H C O H C OH CH2 O P

D-frutozo1,6-difosfat

dihidroxiacetonfosfat

D-gliceraldehidfosfat

II.2.3.5 Caracterizarea clasei izomerazelor Aceast clas reunete aproximativ 3% din enzimele cunoscute pn n prezent, enzime ce catalizeaz diferite reacii de izomerizare. Procesul catalitic propriu-zis const n inducerea unor rearanjri interne ale atomilor din molecula substratului n urma crora au loc modificri geometrice sau structurale. n funcie de tipul reaciei de izomerizare catalizat, izomerazele pot fi mprite n racemaze, epimeraze, cis-trans-izomeraze, tautomeraze etc. Este cunoscut faptul c marea majoritate a organismelor vii conin monozaharidele aparinnd seriei D, respectiv L-aminoacizii. Deoarece unele microorganisme conin i antipozii optici ai acestor compui, pentru acestea racemazele joac un rol deosebit. Astfel, au fost descoperite i studiate alanin-racemaza (EC 5.1.1.1), metionin-racemaza (EC 5.1.1.2), glutamat-racemaza (EC 5.1.1.3) etc. Dou izomeraze extrem de importante pentru participarea vitaminei A n procesul vederii sunt retinal-izomeraza cu denumirea sistemic all-trans-retinal-11-cis-trans-izomeraza (EC 5.2.1.3) i respectiv retinol-izomeraza, sau all-trans-retinol-11-cis-trans-izomeraza (EC 5.2.1.7) ce catalizeaz conversia formei trans a retinalului n izomerul 11-cis i respectiv izomerul trans al retinolului n forma 11-cis. O etap important a secvenei metabolice Embden-Meyerhof-Parnas o constituie izomerizarea reversibil a celor dou trioze fosforilate rezultate prin scindarea fructozo-1,6difosfatului sub aciunea aldolazei. Sub aciunea triozo-fosfat-izomerazei are loc conversia permanent a dihidroxiaceton-fosfatului n aldehida 3-fosfogliceric. Denumirea sistemic a enzimei este D-gliceraldehid-3-fosfat-cetol-izomeraza (EC 5.3.1.1).

CH2 O C O CH2 OH

H H

C O C OH CH2 O P

dihidroxiacetonfosfat

D-gliceraldehidfosfat

II.2.3.6 Caracterizarea clasei ligazelor (sintetazelor) Aceast clas cuprinde aproximativ 5% din enzimele cunoscute pn n prezent, liazele cataliznd reacii de formare a unor noi legturi carbon-carbon sau carbon-heteroatom. De regul, aceste reacii au loc cu consum de energie, ele fiind cuplate cu reacii de hidroliz ale ATP-ului sau ale altor nucleozidtrifosfai. Denumirea sistemic se face prin adugarea termenului ligaza la numele substratului, sau a termenului sintetaza la numele produsului de reacie. O grup important de enzime ce fac parte din aceast clas o constituie aminoacilARNt-sintetazele, enzime ce catalizeaz reaciile de activare ale aminoacizilor din procesul de biosintez a proteinelor. Aceste enzime prezint o nalt specificitate de substrat, existnd cte o sintetaz pentru fiecare aminoacid proteinogen: tirozil-ARNt-sintetaza sau L-tirozin-ARNttyrligaza (EC 6.1.11), triptofan-ARNt-sintetaza cu denumirea sistemic L-triptofanil-ARNttrpligaza (EC 6.1.1.2), treonin-ARNt-sintetaza sau L-treonil-ARNtthr- ligaza (EC 6.1.1.3) .a.m.d. Formarea complexului aminoacil-ARNt este un proces complex ce se realizeaz n dou etape catalizate de aceeai enzim. Procesul debuteaz prin activarea aminoacidului cu ajutorul energiei din ATP:
H2NCHCOOH R aminoacid aminoacil-ARNt -sintetaza ATP PPi O E [H2NCHC ~ OAMP] R aminoacil-AMP (complex ES)

Se formeaz deci complexul hiperreactiv dintre enzim i dou din cele trei substraturi, adic aminoacidul ce urmeaz a se activa i molecula de ATP. Acest complex interacioneaz n etapa urmtoare cu cel de-al treilea substrat care este ARNt ul specific aminoacidului activat:

O E [H2NCHC ~ OAMP] R aminoacil-AMP (complex ES)

ARN t

Enzim AMP R

O H2NCHC ~ ARN t

aminoacil-ARNt -sintetaza

aminoacil-ARN t