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EFECTO DE LA PRESIN OSMTICA SOBRE LA VIABILIDAD Y EL CRECIMIENTO DE LOS MICROORGANISMOS

Prctica No 13 Nombre Del Alumno:_________________________________Semestre______ Grupo______ Nombre del titular_____________________________________Fecha____________________ Nombre del Profr. de Laboratorio_________________________________ Calif:___________

OBJETIVO:
El alumno manejar las tcnicas para observar el efecto de la presin osmtica que ejerce el Cloruro de sodio y la Sacarosa sobre el crecimiento microbiano

MATERIAL:
3 Tubos de 16X 150 . En cada uno 10 ml de caldo nutritivo adicionado con: 2ml de cloruro de sodio al 1%, 2ml de cloruro de sodio al 10%, 2ml de cloruro de sodio al 20% 3 Tubos de 16X 150. En cada tubo 10 ml de caldo nutritivo adicionado con: 2ml de Sacarosa al 1%, 2 ml de Sacarosa al 10%, 2 ml de Sacarosa al 20% Nefelmetro de Mac Farland Pipetas de 5 ml , y de 1 ml estriles Agua destilada estril CEPAS: Escherichia Coli Staphylococcus aureus Klebsiella pneumoniae INTRODUCCIN: A) PRESIN: La osmosis es la difusin a travs de una membrana semipermeable que separa a dos soluciones con distintas concentraciones de sustrato. El proceso tiende a igualar la concentracin de soluto a ambos lados de la memoran. Cuando a ciertas clulas bacterianas se les suspende en una solucin que contiene una concentracin elevada de cloruro de sodio (20%), el agua pasar desde la regin de menor concentracin de sustancia disuelta ( el interior de la clula tiene una baja concentracin salina) a travs de la membrana citoplasmtica que es semipermeable a la solucin que rodea a la clula. As la clula se deshidrata producindose plasmlisis. Si las bacterias se colocan en una solucin que contiene AGARES * Agar sangre * Agar Nutritivo * Caldo nutritivo

menos del 1% de cloruro de sodio, el flujo de agua se invertir, es decir ocurrir la difusin, ya que fluir el agua desde la solucin externa al interior de la clula y originar la plasmotipsis. Dentro de la clula se establece una presin osmtica a causa de la gran cantidad de agua que se acumula all, esta presin har que se hinchen e incluso las clulas pueden reventar. El mecanismo de inhibicin microbiana es la plasmlisis: las clulas se deshidratan y por lo tanto Son incapaces de metabolizar o crecer, pueden morir o permanecer vivas pero en condiciones durmientes. Sin embargo tambin existen microorganismos que requieren altas concentraciones salinas y son denominadas halfilos, y los que requieren presiones osmticas elevadas se les conoce como osmfilos. La mayor parte de las bacterias pueden tolerar una amplia gama de presiones osmticas externas y fuerzas inicas debido a su capacidad de regular la osmolaridad interna y la concentracin inica. La osmolaridad est regulada por el transporte activo de iones potasio al interior de la clula A) En medios hipotnicos (con una aw>aw del citoplasma) es la pared celular la que ejerce todo el papel: su rigidez se opone a la entrada de agua, y por lo tanto, evita que la membrana citoplsmica tienda a sufrir una presin de turgor excesiva. B) En medios hipertnicos (cuando la aw del exterior es menor que la del citoplasma). Las bacterias poseen mecanismos compensatorios por los que tienden a aumentar la osmolaridad interior por encima de la del medio (para garantizar la entrada de agua del ambiente y mantener su metabolismo). Ello se logra esencialmente aumentando la concentracin de un soluto muy soluble en agua en el interior celular, soluto llamado genricamente soluto compatible, lo cual se puede lograr por varios posibles mecanismos: bombeando iones al interior; sintetizando una molcula orgnica osmticamente activa; bombeando sustancias osmoprotectoras.

PROCEDIMIENTO:
PREPARACIN DE LA CEPA A ESTUDIAR Suspender la cepa bacteriana en agua destilada logrado obtener una turbiedad del No 10 del nefelmetro de Mac- Farland. En caso de no tener el nefelmetro solo cuidar la turbiedad a manera de suspensin. A) EFECTO DEL CLORURO DE SODIO 1.- Colocar en una gradilla en orden creciente de concentracin una serie de 3 tubos con 10 ml cada uno con caldo nutritivo y adiciona 2 ml de cloruro de sodio con las distintas concentraciones ( al 1%, 10% y 20 % de NaCl) 2.-Rotularlas de acuerdo a la concentracin y nombre de la cepa que se va a inocular en ellos 3.- Inocular en cada tubo 0.l ml de la suspensin bacteriana correspondiente 4.- repetir los pasos del 1 al 4 para cada cepa proporcionada

5.- Incubar los tubos a 37C durante 24- 48C6.- Homogenizar el cultivo y leer el resultado de cada tubo en base a su turbiedad, comparndola con las ampolletas del nefelmetro de Mac- Farland

B) EFECTO DE LA SACAROSA 1.- Colocar en una gradilla en orden creciente de concentracin una serie de 3 tubos con 10 ml cada uno con caldo nutritivo y adiciona 2 ml de sacarosa con las distintas concentraciones ( al 1%, 10% y20% de Sacarosa) 2.-Rotularlas de acuerdo a la concentracin y nombre de la cepa que se va a inocular en ellos 3.- Inocular en cada tubo 0.l ml de la suspensin bacteriana correspondiente. 4.- repetir los pasos del 1 al 4 para cada cepa proporcionada. 5.- Incubar los tubos a 37C durante 24- 48C. 6.- Homogenizar el cultivo y leer el resultado de cada tubo en base a su turbiedad, comparndola con las ampolletas del nefelmetro de Mac- Farland.

CUESTIONARIO:
1.- Cmo se define la smosis? ______________________________________________________________________ ______________________________________________________________________ ____________________ 2.- Qu es plasmlisis y cuando ocurre? ______________________________________________________________________ ______________________________________________________________________ ____________________ 3.- Qu sucedi con las bacterias al incrementar la concentracin del NaCl y sacarosa en los distintos caldos nutritivos? ______________________________________________________________________ __________ ______________________________________________________________________ __________ 4.- Qu nombre reciben las bacterias que soportan grandes presiones osmticas? ______________________________________________________________________ __________ 5.- Quin es el responsable en la clula bacteriana controlar la presin en medios hipotnicos? ______________________________________________________________________ __________ 6.- Cundo se establece un medio hipotnico? ______________________________________________________________________ ______________________________________________________________________

______________________________________________________________________ ______________________________ 7.- Cundo se establece un medio hipertnico? ______________________________________________________________________ ______________________________________________________________________ ______________________________________________________________________ ______________________________

RESULTADOS:
Anota los resultados del efecto del cloruro de sodio y de la sacarosa sobre el crecimiento, indicando el nmero de ampolleta del nefelmetro a que corresponda dicho crecimiento. En caso de no contar con el Nefelmetro registra a manera de cruces dicho crecimiento bacteriano
CEPAS E.COLI S.AUREUS K.PNEUMONIAE CEPAS E.COLI S.AUREUS K.PNEUMONIAE EFECTO DE LA PRESIN OSMTICA 1% Sacarosa 10% sacarosa 20% Sacarosa EFECTO DE LA PRESIN OSMTICA 1% NaCl 10% NaCl 20% NaCl

OBSERVACIONES
Dibuja a manera de esquema los pasos realizados en la elaboracin de la prctica, as como los resultados obtenidos despus del tiempo de incubacin.

CONCLUSIONES:
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