Fiche de manipulation Multiplication in vitro de la pomme de terre

Principe : on cherche obtenir plusieurs plantes identiques partir dun fragment de germe, plac dans des conditions aseptiques sur un milieu nutritif adapt et strile.
outils / alcool

Plan de travail
mouillant dsinfectant

outils striliss dans papier alu

tubes P1 P2

lampe alcool

eau distille

eau distille

eau distille bote de Petri

I ) Prparation et dsinfection du plan de travail . - Porter une blouse ferme sur un vtement dont les manches pourront se retrousser facilement; attacher les cheveux longs . - Se laver les mains et les avant-bras leau et au savon sans les essuyer. - Nettoyer le plan de travail leau de javel dilue. - Placer la lampe alcool et le matriel ncessaire comme sur le croquis. - Loprateur ne parle pas pendant toute la dure de la manipulation. Son assistant le guide pendant le droulement des oprations successives en suivant la fiche. - La lampe alcool est allume; les instruments sont placs dans lalcool et passs la flamme avant et aprs chaque utilisation. -Vous travaillerez assis et chaque utilisation de verrerie ou dinstruments vous les passerez rapidement dans la flamme avant et aprs usage. II) Dsinfection du germe de pomme de terre . scalpel - Laver le germe prlev sous leau du robinet. - Le germe est ensuite manipul la pince. haut -Effectuer les passages suivants: 1. solution dsinfectante: 15 min. 2. 1er Bain eau distille strile: 5 min. 3. 2e Bain deau distille strile: 5 min. 4. 3e Bain deau distille strile: 5 min 2 cm 5. Poser le germe dans la bote de Ptri strile. bas 6. A laide dun scalpel strile, dcouper (comme sur le schma ci-contre) le germe en tronons de 2cm en reprant le bas et le haut les tronons contenir au moins un bourgeonIII) Mise en culture . 1. ouvrir le tube de culture proximit de la flamme et poser le bouchon retourn sur le couvercle de la bote de Ptri. 2. flamber louverture du tube. Attention de ne pas dformer le plastique du tube. 3. avec la pince strile, enfoncer le germe orient (tte en haut) dans la glose dun tiers de sa longueur dans 2 tubes P1, P2 ou P3, P4. 4. flamber louverture du tube et le reboucher. 5. tiqueter le tube; Classe, nom et date ; 6. placer le tube de culture dans larmoire de culture (20C et lumire contrle) IV) suivre lvolution de la culture chaque semaine et noter les modifications Comptences : T2 (suivre un protocole) , DC ( citoyennet)