[EFECTO DEL PH Y LA TEMPERATURA EN EL CRECIMIENTO MICROBIANO]

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Prctica. Efecto del pH y la temperatura en el crecimiento microbiano

1. OBJETIVOS y Que el estudiante conozca el efecto del pH y la temperatura como parmetros de control del crecimiento microbiano.

2. INTRODUCCIN

El ambiente donde se desarrolla un microorganismo tiene una gran influencia sobre su crecimiento, al igual que las dems formas de vida. Los factores del medio se pueden clasificar en tres grupos: a) Fsicos: temperatura, presiones externas, humedad. b) Qumicos: pH, disponibilidad de nutrimentos, presencia de productos txicos. c) Biolgicos: las interacciones microbianas entre las especies coexistentes. Algunos microorganismos estn adaptados a los hbitats extremos, donde otros definitivamente no pueden sobrevivir. Pero hay factores ambientales que se controlan en condiciones de laboratorio con mayor frecuencia, adems de los factores nutrimentales son los fisicoqumicos como: la temperatura y el pH. Todos los microorganismos tienen una temperatura ptima de crecimiento que los caracteriza, en la cual muestran su tasa ms alta de crecimiento. Tambin hay lmites de temperatura, como la temperatura mnima a la cual son inactivos y la temperatura mxima, donde el crecimiento ya no es posible. De acuerdo a la temperatura microorganismos se clasifican en: y ptima de crecimiento, los

Psicrfilos: Cuando su crecimiento es a temperaturas entre 0-20 C. Por ejemplo, Polaromonas vacuolata, hallado en el ocano Antrtico, siendo su temperatura ptima es de 4 C.
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y y y

Mesfilos: Cuando su crecimiento es a temperaturas entre 20-40 C. Termfilos: Cuando su crecimiento es a temperaturas entre 40-80 C. Hipermfilos: Cuando su crecimiento es a temperaturas entre 80100 C. La mayora de estos microorganismos son arqueas como Methanococcus igneus.

La concentracin de iones hidrgeno del medio afecta directamente a los microorganismos y las enzimas, e influye tambin en la disociacin y solubilidad de molculas que requieren. Dependiendo del pH en el cual se desarrollen los microorganismos se clasifican en: y Acidfilos: Crecen a pH menores de 5. Por ejemplo, Sulfolobus y Thiobacillus que crece a pH 1-2 oxidando minerales de sulfuro para producir cido sulfrico. Alcalfilos: Crecen a pH mayores a 9, como algunas especies de Rhizobium, bacillus y algunas bacterias entricas.

Cada microorganismo tiene un pH y temperatura ptimos, por lo cual al modificar estos factores la velocidad de crecimiento se puede alterar y causar la muerte de los mismos, por lo que se pueden emplear como factores de control de crecimiento microbiano.

3. MATERIALES y y y y y y y y y 2 Cajas de Petri con Agar Papa Dextrosa ajustado a pH 5. 2 Cajas de Petri con Agar Papa Dextrosa ajustado a pH 7. 2 Cajas de Petri con Agar Papa Dextrosa ajustado a pH 9. 9 tubos con 7 mL de caldo de microinoculacin ajustado sin amortiguar. 3 tubos con 7 mL de caldo de microinoculacin ajustado sin amortiguar. 3 tubos con 7 mL de caldo de microinoculacin ajustado sin amortiguar. 3 tubos con 7 mL de caldo de microinoculacin ajustado con amortiguador. 3 tubos con 7 mL de caldo de microinoculacin ajustado con amortiguador. 3 tubos con 7 mL de caldo de microinoculacin ajustado con amortiguador.
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a pH 7 a pH 5 a pH 9 a pH 7 a pH 5 a pH 9

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y y y y y y

1 asa de inoculacin. 3 pipetas estriles. 1 mechero Fisher. Espectrofotmetro. Microscopio Soluciones amortiguadoras de pH 4, 7 y 10.

4. PROCEDIMIENTO

Se proporcionar a los alumnos, cultivos lquidos de bacterias: Escherichia coli y Lactobacillus sp. Y una suspensin de esporas de los hongos: Aspergillus niger y Penicillium roqueforti. Etiquetando cada uno de las cajas y tubos para su correcta identificacin.

4.1.

EFECTO DE LA TEMPERATURA 1. En 3 cajas de Petri con Agar Papa Dextrosa divididas en 2 secciones, inocular 0.1 mL de la suspensin de esporas de hongos en cada seccin. 2. Incubar una caja de Petri a 15 C, otra a 30 C y la ltima a 45 C en forma invertida durante 72 horas y posteriormente hacer las observaciones macroscpicas y microscpicas. 3. En 6 tubos de caldo de microinoculacin ajustado a pH 7, inocular 3 con cada una de las cepas bacterianas. 4. Incubar 2 tubos de diferente cepa a 15 C, otros 2 tubos a 30 C y los ltimos 2 tubos a 45 C durante 24-48 horas. 5. Medir la D.O.

4.2.

EFECTO DEL pH 1. Preparar tres series de tres tubos de caldo de microinoculacin ajustados a 3 diferentes valores de pH (5, 7 y 9) con solucin de HCl 1 M o NaOH 1 M. 2. Preparar otra tres series de tres tubos ajustados a los mismos valores de pH del punto anterior pero utilizando soluciones amortiguadoras, vase tabla siguiente:

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pH

K2HPO4 0.2 M (mL)

cido ctrico 0.1 M (mL) 1.1 0.1 ----

cido brico 0.2 M (mL) ------1

NaOH 0.2 M (mL)

Caldo nutritivo (mL) 8 8 8

4.4 7.6 10

0.9 1.9 ----

------1

3. Inocular 0.1 mL de cada una de las cepas bacterianas en la serie de 4 tubos de caldo de microinoculacin ajustados a diferentes pH con amortiguador y sin amortiguador, dejando 1 sin inocular como testigo. 4. Incubar los tubos a 35 C durante 24-48 horas y medir la D.O. 5. Inocular tres cajas de Petri con medio Agar Papa Dextrosa ajustado a 3 pH diferentes con cada una de las cepas de hongos. 6. Incubar las cajas de Petri por 72 horas. 7. Realizar observaciones macroscpicas y microscpicas.

5. RESUTADOS A. Reportar los resultados en los siguientes cuadros de acuerdo al convenio: no hay crecimiento (-), crece un poco (+), mayor crecimiento (++), crecimiento abundante (+++). B. Comparar los resultados obtenidos con la bibliografa correspondiente.

CUADRO 1. EFECTO DE LA TEMPERATURA EN EL CRECIMEINTO MICROBIANO (Agar Papa Dextrosa)

Aspergillus niger Morfologa de la colonia Morfologa microscpica

Penicillium roqueforti Morfologa de la colonia Morfologa microscpica

Temperatura

15 C
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30 C

45 C

CUADRO 2. EFECTO DE LA TEMPERATURA EN EL CRECIMEINTO MICROBIANO (Cultivo de Microinoculacin)

Escherichia coli

Lactobacillus sp.

Morfologa Morfologa Morfologa Morfologa Temperatura de la D.O. de la D.O. microscpica microscpica colonia colonia 15 C

30 C

45 C

CUADRO 3. EFECTO DEL pH EN EL CRECIMEINTO MICROBIANO (Agar Papa Dextrosa)

Aspergillus niger Morfologa de la colonia Morfologa microscpica

Penicillium roqueforti Morfologa de la colonia Morfologa microscpica

5

pH

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CUADRO 4a. EFECTO DEL pH EN EL CRECIMIENTO MICROBIANO (Cultivo de Microinoculacin sin amortiguador)

Escherichia coli

Lactobacillus sp.

pH

Morfologa Morfologa Morfologa Morfologa de la D.O. de la D.O. microscpica microscpica colonia colonia

CUADRO 4b. EFECTO DEL pH EN EL CRECIMIENTO MICROBIANO (Cultivo de Microinoculacin con amortiguador)

Escherichia coli

Lactobacillus sp.

pH

Morfologa Morfologa Morfologa Morfologa de la D.O. de la D.O. microscpica microscpica colonia colonia
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6. CUESTIONARIO 1. Segn los resultados obtenidos por el efecto de temperatura, dentro de que clasificacin entra E. coli y Lactobacillus sp.? 2. Cmo influy el pH en el crecimiento de hongos y bacterias? Qu diferencias se observaron en los medios de cultivo amortiguados y sin amortiguar? 3. Explique brevemente cuales son los mecanismos celulares que los microorganismos termfilos extremos y psicrfilos han desarrollado para adaptarse a condiciones extremas de temperatura y pH? 4. Mencione el nombre de 2 microorganismos psicrfilos, 2 mesfilos, 2 termfilos, 2 Acidfilos y 2 alcalfilos. 5. Reporte la bibliografa consultada.

6. REFERENCIAS y Aquiahuatl R., Mara de los Angeles. (2005). Manual de prcticas de microbiologa general. Iztapalapa. Extraido de: http://www.uamenlinea.uam.mx/materiales/licenciatura/diversos/ AQUIAHUATL_RAMOS_MARIA_DE_LOS_ANGELES_Manual_de_pract icas_de.pdf Ramrez , N., Serrano, J. A. y SandovaL, H. (2006). Microorganismo extremfilos, actinomicetos en Mxico. Revista mexicana de ciencias.Vol. 3. Num. 37. Extradido de: http://redalyc.uaemex.mx/pdf/579/57937307.pdf

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