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INTRODUCCIÓN
1
En Latinoamérica han sucedido en los últimos años brotes severos
2
sino por las implicaciones en la movilización y comercialización que
1.3.5. Importancia
1.4. Objetivos
3
II. MARCO TEÓRICO O CONCEPTUAL
2.1.Análisis bibliográfico
su subsiguiente caracterización.
Una de las propiedades más características de las cepas diferentes del virus
base de los signos clínicos observados en los pollos infectados. Estos son:
entérica subclínica.
4
Raramente los agrupamientos en patotipos son claros, e incluso en
adversas.
DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA
ETIOLOGÍA
EPIDEMIOLOGÍA
baja para los pollos, aunque los signos clínicos observados en aves
5
hospedador, la infección con otros organismos, el estrés medioambiental y
con signos clínicos relativamente escasos. Así que los signos clínicos son
variables y están influidos por otros factores de modo que ninguno puede
considerarse patognomónico.
Incluso en los hospedadores susceptibles, tales como los pollos, los virus
PATOGENIA
6
vitro potenciales para establecer la virulencia normalmente relacionada
embriones inoculados.
7
vii) El MDT se ha utilizado para clasificar las cepas del virus de la
período de 8 días.
8
Los virus más virulentos presentarán índices que se aproximan a la
estéril.
ii) Se inyecta por vía intravenosa 0.1ml del virus diluido en diez
aproximarán a 3.0.
9
Se han recomendado algunas variaciones en estas pruebas. El muestreo
neurotrópicos.
prueba ICPI con más frecuencia para tales valoraciones. Sin embargo,
desde 0.00 hasta 2.00, está claro que cualquier valor utilizado para
TÉCNICAS DE DIAGNÓSTICO
10
empleando técnicas moleculares no confirma la ausencia de virus
de otras muestras.
11
fecales) y los frotis traqueales (o tejido traqueal) tanto como los
enfermedad.
12
alantoidea de cada uno de al menos cinco huevos embrionados de aves
EN.
PRUEBAS SEROLÓGICAS
13
El virus de la EN puede emplearse como un antígeno en una variedad
14
procedente de aves no vacunadas que se controlen regularmente y
• Pruebas de hemaglutinación
1/7, etc.
1% (v/v).
15
durante 60 minutos a 4ºC si las temperaturas son altas,
placa.
en volúmenes de 0.025ml.
a 4ºC.
16
torno a 20ºC, o durante unos 60 minutos a 4ºC si las
PBS).
1/8 (23 ó log2 3) o superior. Se debería incluir una nueva titulación del
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antígeno en todas las pruebas para verificar el número de HAU
utilizadas.
virus de la EN.
DIAGNÓSTICO
18
Hitchner-B1, La Sota, V4, NDW, I2 y F, y vacunas mesogénicas, tales
con estos virus entrarían dentro de la definición propuesta para la EN, pero
parte del servicio donde se realice el trabajo debería cumplir los requisitos
para los patógenos del nivel de Contención del Grupo 4 (organismos que
tejidos.
19
ala. Se han preparado vacunas que dan resultados óptimos mediante la
Las vacunas inactivadas se consideran más caras que las vacunas vivas y
20
pollos individuales. Por esta razón, se emplean diversas estrategias. O las
ellos será susceptible, o se vacunan con 1 sólo día de vida por instilación
una infección activa en algunas aves que persistirá hasta que la inmunidad
día totalmente susceptibles, incluso con las vacunas vivas más suaves,
con virus vivos un poco más patogénicos para reforzar la inmunidad de las
emulsión de aceite.
21
Cuando se diseña un programa de vacunación, debería tenerse en
1 día de edad; vacuna viva Hitchner-B1 o La Sota a los 18-21 días de vida
vida con la vacuna viva La Sota en el agua de bebida o como spray; esta
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primaria o secundaria, siendo su patogenicidad la principal
23
primeras ofrecen un riesgo innecesario porque supone la
consiguiente.
b) Método de cultivo
2. Método de producción
24
mediante la expansión de una alícuota del inóculo original hasta un
pase subsiguiente.
de muerte de embriones.
25
conservar todos los líquidos inmediatamente a 4ºC y comprobar la
relación fase oleosa a fase acuosa es de 1:1 hasta 1:4. Los fabricantes
26
vacuna será difícil de inyectar; si es demasiado baja, la vacuna es
inestable.
SPF.
4. Control de lotes
27
su actividad hemaglutinante, que es una indicación de la presencia del
a) Esterilidad
contaminante se multiplique.
28
mediante un método efectivo para tales materiales concretos. El
cada ocasión.
de tales patógenos.
29
la especie que va a ser vacunada, o a cualquier otra especie en
pruebas en animales).
b) Inocuidad
atribuibles a la vacuna.
30
En el caso de vacunas inactivadas se administrará una dosis doble
c) Potencia
por vía intramuscular con 105 LD50 (dosis letal 50%) del virus de
31
días más tarde. Se observan los pollos durante 21 días. La PD50
animal.
d) Duración de la inmunidad
e) Estabilidad
32
El producto o vacuna final, cuando se almacena bajo las
congelar.
f) Conservantes
vacuna.
g) Precauciones (riesgos)
virulentos como los poco virulentos para los pollos, han infectado
33
transitorias y no afectan a la córnea. Las vacunas en emulsión de
34
III. MATERIALES Y MÉTODOS
3.1.Materiales
a) Localización espacial.
Fuente: http://www.munimolina.gob.pe/m1.htm
35
b) Localización temporal.
• Computadora Personal.
• Cámara digital.
• Ovoscopio.
• Agitador de tubos.
• Refrigeradora 4ºC
• Autoclave.
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• Minitaladro.
• Placas petri.
• Tubos de ensayo.
• Propipetas.
• Gradillas
• PBS.
• Caldo BHI.
• Caldo Thioglicolato.
• Agar TSA.
• Agar Sangre.
• Agar Sabouraud.
• Algodón.
• Alcohol.
37
• Lejía.
• Yodo.
• Gorro.
• Mascarilla.
• Guantes estériles.
• Tijera.
• Lápiz.
3.2.Métodos
3.2.1. Muestreo
a) Universo.
Nacionales Extranjeras
2 10
b) Tamaño de la Muestra.
38
Debido al tamaño reducido del universo el tamaño de la muestra
c) Procedimiento de Muestreo.
(esterilidad, titulación).
a) Metodología de la Experimentación.
caldos de cultivo.
ESTERILIDAD:
39
3) Colocar en la cabina de bioseguridad los medios y caldos de
por 15 minutos.
dentro de la cabina.
acaba de sembrar.
10) Con una pipeta distinta para cada vacuna y para cada medio se
40
11) Colocar los medios de cultivo Sabouraud en la estufa de 23ºC
cada tipo para cada caldo de cada vacuna, más uno de cada
por 15 minutos.
17) Extraemos con una pipeta 0.6ml de cada caldo, para colocar
41
19) Colocamos el medio Sabouraud en la estufa de 23ºC, y los
TITULACIÓN:
SPF de pollo.
42
vortex, tijera, algodón, plumón indeleble y alcohol. Los
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10) De acuerdo al título que figura en el frasco de la vacuna se
abundante alcohol.
cada dilución.
44
16) Con el minitaladro se perforará en el lugar marcado
perforado.
45
b) Recopilación de información.
• En el laboratorio:
Titulación.
• En la biblioteca:
temática.
a) Variables independientes.
b) Variables dependientes.
• Presencia de contaminantes.
• Título adecuado.
46
3.3.Evaluación Estadística
3.3.1.1.Unidades experimentales
experimental.
3.4.Análisis estadístico
47
IV. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
4.1.Características Físico-cualitativas
hidrataciónSignos de
fácilmenteDesprende
Buena liofilización
Pastilla liofilizada
Carame-lización
Impurezas
Precinto
Vacuna
Título
Vacío
Dosis
Cepa
No La
N-01 Crema Sí No No No 1000 10-7
gira Sota
No La No
N-02 Crema Sí No No No 1000
gira Sota figura
No Clone
E-01 Crema Sí No No No 1000 10-6
gira 30
No Clone
E-02 Crema Sí No No No 1000 >10-7.2
gira 30
No La
E-03 Azul Sí No No No 1000 ≥10-6.2
gira Sota
No La
E-04 Crema Sí No No No 1000 ≥10-6.5
gira Sota
No La
E-05 Azul Sí No No No 1000 ≥10-5.5
gira Sota
PHY.
No
E-06 Azul Sí No No No 1000 LMV. ≥10-5.5
gira
42
No La
E-07 Crema Sí No No No 2500 10-6.2
gira Sota
No La No
E-08 Crema Sí No No No 1000
gira Sota figura
No VG/
E-09 Crema Sí No No No 2000 ≥10-5.5
gira GA
No Verde
E-10 Sí No No No 5000 B1 ≥10-6.4
gira agua
48
En el cuadro Nº01 se observa que el precinto de todas las vacunas se
04, E-05, E-06 y E-08) contienen una cantidad de dosis total de 1000, una
vacuna (E-09) de 2000 dosis, una (E-07) de 2500 dosis, y por último una
(E-10) de 5000 dosis. Siete de las vacunas muestreadas (N-01, N-02, E-03,
E-04, E-05, E-07 y E-08) son de la cepa La Sota, dos (E-01 y E-02) de la
cepa Clone 30, una (E-10) de la cepa B1, una (E-06) de la cepa
(E-01), una ≥10-6.2 (E-03), una de 10-6.2 (E-07), una ≥10-6.4 (E-10), una ≥10-
6.5
(E-04), una de 10-7 (N-01), una >10-7.2 (E-02), y en el caso de dos de las
49
En el gráfico Nº01 se observa el porcentaje de uso de las cada cepa en las
4.2.Prueba de Esterilidad
Las pruebas de esterilidad son procedimientos que hacen parte del control
Medio de Pasajes
Vacuna 7 días 14 días
cultivo BHI Thyogl.
50
Sabouraud Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
Agar sangre Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
N-01 TSA Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
BHI Sin cambio Sin cambio
Thyoglicolato Sin cambio Sin cambio
Sabouraud Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
Agar sangre Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
N-02 TSA Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
BHI Sin cambio Sin cambio
Thyoglicolato Sin cambio Sin cambio
Sabouraud Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
Agar sangre Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
E-01 TSA Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
BHI Sin cambio Sin cambio
Thyoglicolato Sin cambio Sin cambio
Sabouraud Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
Agar sangre Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
E-02 TSA Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
BHI Sin cambio Sin cambio
Thyoglicolato Sin cambio Sin cambio
Sabouraud Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
Agar sangre Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
E-03 TSA Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
BHI Sin cambio Sin cambio
Thyoglicolato Sin cambio Sin cambio
Sabouraud Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
Agar sangre Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
E-04 TSA Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
BHI Sin cambio Sin cambio
Thyoglicolato Sin cambio Sin cambio
Sabouraud Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
Agar sangre Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
E-05 TSA Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
BHI Sin cambio Sin cambio
Thyoglicolato Sin cambio Sin cambio
Sabouraud Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
Agar sangre Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
E-06 TSA Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
BHI Sin cambio Sin cambio
Thyoglicolato Sin cambio Sin cambio
51
Sabouraud Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
Agar sangre Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
E-07 TSA Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
BHI Sin cambio Sin cambio
Thyoglicolato Sin cambio Sin cambio
Sabouraud Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
Agar sangre Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
E-08 TSA Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
BHI Sin cambio Sin cambio
Thyoglicolato Sin cambio Sin cambio
Sabouraud Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
Agar sangre Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
E-09 TSA Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
BHI Sin cambio Sin cambio
Thyoglicolato Sin cambio Sin cambio
Sabouraud Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
Agar sangre Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
E-10 TSA Sin crec. Sin crec. Sin crec. Sin crec.
BHI Sin cambio Sin cambio
Thyoglicolato Sin cambio Sin cambio
52
Sabouraud 12 0
Agar Sangre 12 0
TSA 12 0
satisfactoriamente.
BHI 12 0
Thyoglicolato 12 0
satisfactoriamente.
53
Queda en evidencia con estos resultados que la totalidad de las vacunas
4.3.Titulación de Virus
de vivosAcumulado
/TotalMuertos
muertos% de
Título (DL50)
# de muertos
# de vivos
Vacuna
DP
54
10-4 5 0 14 0 14/14 100
10-5 5 0 9 0 9/9 100
E-02 10-6 3 2 4 2 4/6 67
0.32 10-6.3
10-7 1 4 1 6 1/7 14
10-8 0 5 0 11 0/11 0
10-4 5 0 14 0 14/14 100
10-5 5 0 9 0 9/9 100
E-03 10-6 4 1 4 1 4/5 80
0.375 10-6.4
10-7 0 5 0 6 0/6 0
10-8 0 5 0 11 0/11 0
10-4 5 0 14 0 14/14 100
10-5 5 0 9 0 9/9 100
E-04 10-6 3 2 4 2 4/6 67
0.32 10-6.3
10-7 1 4 1 6 1/7 14
10-8 0 5 0 11 0/11 0
10-3 5 0 13 0 13/13 100
10-4 5 0 8 0 8/8 100
E-05 10-5 3 2 3 2 3/5 60
0.17 10-5.2
10-6 0 5 0 7 0/7 0
10-7 0 5 0 12 0/12 0
10-3 5 0 13 0 13/13 100
10-4 5 0 8 0 8/8 100
E-06 10-5 3 2 3 2 3/5 60
0.17 10-5.2
10-6 0 5 0 7 0/7 0
10-7 0 5 0 12 0/12 0
10-4 3 2 9 2 9/11 82
10-5 3 2 6 4 6/10 60
0.37 10-5.4
E-07 10-6 3 2 3 6 3/9 33
10-7 0 5 0 11 0/11 0
10-8 0 5 0 16 0/16 0
10-3 5 0 14 0 14/14 100
10-4 5 0 9 0 9/9 100
E-08 10-5 4 1 4 1 4/5 80
0.375 10-5.4
10-6 0 5 0 6 0/6 0
10-7 0 5 0 11 0/11 0
10-3 5 0 16 0 16/16 100
10-4 4 1 11 1 11/12 92
E-09 10-5 4 1 7 2 7/9 78
0.7 10-5.7
10-6 2 3 3 5 3/8 38
10-7 1 4 1 9 1/10 10
10-4 5 0 15 0 15/15 100
10-5 5 0 10 0 10/10 100
E-10 10-6 3 2 5 2 5/7 71
0.46 10-6.5
10-7 1 4 2 6 2/8 25
10-8 1 4 1 10 1/11 9
la vacuna N-01 el título se halla entre las diluciones 10-6 y 10-7, entre ellas
55
la DP es 0.88 (DP= % infectados por encima del 50% - 50% / % infectados
por encima del 50% - % infectados por debajo del 50%), obteniendo como
como título 10-3.3; en la vacuna E-01 el título se halla entre las diluciones
como título 10-6.3; en la vacuna E-03 el título se halla entre las diluciones
como título 10-6.3; en la vacuna E-05 el título se halla entre las diluciones
como título 10-5.2; en la vacuna E-07 el título se halla entre las diluciones
como título 10-5.4; en la vacuna E-09 el título se halla entre las diluciones
56
Cuadro Nº06. Comparación entre el título obtenido y el que figura en el frasco.
En el cuadro Nº05 se observa que cuatro de las vacunas (E-02, E-04, E-05
y E-06) cumplen con el título que figura en su respectivo frasco, seis de las
control.
57
No cumple con el título indicado 6 50%
58
V. CONCLUSIONES
siendo la diferencia con esa misma muy pequeña aún así no cumplen lo que
debido a que no existe un control de calidad obligatorio de cada lote por las
59
VI. RECOMENDACIONES
4. Se sugiere que todos los laboratorios tengan como norma indicar el título
de la vacuna en el frasco.
60
VII. BIBLIOGRAFIA
7.1.Principal
Perú. 1995.
edición. 2004.
Argentina. 2004.
61
7.2.Internet
http://encolombia.com/veterinaria/fenavi9102sanidad.htm
Descargado el 27/11/2006.
http://www.iia.cu/pdf/v27_89.pdf
http://www.ipfsaph.org/cds_upload/kopool_data/FAOLEX_0/es_mex17
848.doc
http://www.buenosaires.gov.ar/areas/salud/a_primaria/programas/inmu
nizacion/archivos/man_eventos_adversos.pdf
http://www.sagarpa.gob.mx/ganaderia/NOM/052zoo.pdf
http://www.saber.ula.ve/db/ssaber/Edocs/pubelectronicas/revistafarmaci
a/vol45/cortes_a.pdf
62
63
GLOSARIO DE ABREVIATURAS
EN : Enfermedad de Newcastle.
HA : Hemaglutinación.
HI : Inhibición de la hemaglutinación.
LD : Dosis letal.
PD : Dosis protectora.
RBC : Eritrocitos.
64
RECOPILACIÓN DE DATOS PARA LA TITULACIÓN DE VIRUS
Vacuna: N-01
Dilución Días post-inoculación (# muertos)
de la Total
1 2 3 4 5 6 7
vacuna
10-5 1 - - - 4 - - 5
10-6 - - - - 5 - - 5
10-7 - - - - 1 - - 1
10-8 - - - - - - - 0
10-9 2 - - - - - - 2
Total 3 0 0 0 10 0 0 13
Vacuna: N-02
Dilución Días post-inoculación (# muertos)
de la Total
1 2 3 4 5 6 7
vacuna
10-3 1 - - - - - - 1
10-4 1 - - - - - - 1
10-5 - - - - 1 - - 1
10-6 1 1 - - - - - 2
10-7 - - - - - - - 0
Total 3 1 0 0 1 0 0 5
65
Cuadro Nº10. Cantidad de embriones muertos tras inoculación de la vacuna E-01.
Vacuna: E-01
Dilución Días post-inoculación (# muertos)
de la Total
1 2 3 4 5 6 7
vacuna
10-3 - - - - 2 2 1 5
10-4 - - - - 3 1 1 5
-5
10 - - - - 2 - 2 4
-6
10 - - - - 2 - - 2
-7
10 - - - - - - - 0
Total 0 0 0 0 9 3 4 16
Vacuna: E-02
Dilución Días post-inoculación (# muertos)
de la Total
1 2 3 4 5 6 7
vacuna
10-4 - - - - 3 1 1 5
10-5 - 1 - - 1 2 1 5
10-6 - - - - 3 - - 3
10-7 - 1 - - - - - 1
10-8 - - - - - - - 0
Total 0 2 0 0 7 3 2 14
66
Cuadro Nº12. Cantidad de embriones muertos tras inoculación de la vacuna E-03.
Vacuna: E-03
Dilución Días post-inoculación (# muertos)
de la Total
1 2 3 4 5 6 7
vacuna
10-4 - - - - 3 - 2 5
10-5 1 - - - 1 2 1 5
-6
10 - - - - 3 1 - 4
-7
10 - - - - - - - 0
-8
10 - - - - - - - 0
Total 1 0 0 0 7 3 3 14
Vacuna: E-04
Dilución Días post-inoculación (# muertos)
de la Total
1 2 3 4 5 6 7
vacuna
10-4 - - - - 2 2 1 5
10-5 1 - - - 2 1 1 5
10-6 2 - - - - 1 - 3
10-7 - - - - 1 - - 1
10-8 - - - - - - - 0
Total 3 0 0 0 5 4 2 14
67
Cuadro Nº14. Cantidad de embriones muertos tras inoculación de la vacuna E-05.
Vacuna: E-05
Dilución Días post-inoculación (# muertos)
de la Total
1 2 3 4 5 6 7
vacuna
10-3 - - - - 1 3 1 5
10-4 - - - - 2 1 2 5
-5
10 - - - - 1 1 1 3
-6
10 - - - - - - - 0
-7
10 - - - - - - - 0
Total 0 0 0 0 4 5 4 13
Vacuna: E-06
Dilución Días post-inoculación (# muertos)
de la Total
1 2 3 4 5 6 7
vacuna
10-3 - - - - 3 1 1 5
10-4 - - - - 1 2 2 5
10-5 - - - - 1 - 2 3
10-6 - - - - - - - 0
10-7 - - - - - - - 0
Total 0 0 0 0 5 3 5 13
68
Cuadro Nº16. Cantidad de embriones muertos tras inoculación de la vacuna E-07.
Vacuna: E-07
Dilución Días post-inoculación (# muertos)
de la Total
1 2 3 4 5 6 7
vacuna
10-4 - - - - - 1 2 3
10-5 - - - - 1 2 - 3
-6
10 - - - - 2 1 - 3
-7
10 - - - - - - - 0
-8
10 - - - - - - - 0
Total 0 0 0 0 3 4 2 9
Vacuna: E-08
Dilución Días post-inoculación (# muertos)
de la Total
1 2 3 4 5 6 7
vacuna
10-3 - - - - 2 1 2 5
10-4 - - - - 2 2 1 5
10-5 - - - - - 4 - 4
10-6 - - - - - - - 0
10-7 - - - - - - - 0
Total 0 0 0 0 4 7 3 14
69
Cuadro Nº18. Cantidad de embriones muertos tras inoculación de la vacuna E-09.
Vacuna: E-09
Dilución Días post-inoculación (# muertos)
de la Total
1 2 3 4 5 6 7
vacuna
10-3 - - - - 1 3 1 5
10-4 - - - - 2 2 - 4
-5
10 - - - - 2 2 - 4
-6
10 - - - - 2 - - 2
-7
10 - - - - 1 - - 1
Total 0 0 0 0 8 7 1 16
Vacuna: E-10
Dilución Días post-inoculación (# muertos)
de la Total
1 2 3 4 5 6 7
vacuna
10-4 - - - - 1 - 4 5
10-5 - - - - 3 2 - 5
10-6 - - - - 1 - 2 3
10-7 - - - - 1 - - 1
10-8 - - - - - - 1 1
Total 0 0 0 0 6 2 7 15
70
FOTOS
71
Foto Nº02. Material listo para empezar la prueba de Esterilidad
72
Foto Nº03. Estufa de medios de 36ºC
73
Foto Nº04. Estufa de medios de 23ºC
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Foto Nº05. Sembrando vacunas en los medios de cultivo.
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Foto Nº06. Caldos de cultivo después de haber sembrado las vacunas.
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Foto Nº07. Incubadora a 37.5ºC
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Foto Nº08. Huevos SPF con el punto de inoculación señalado.
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Foto Nº09. Perforando los huevos en el punto de inoculación.
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Foto Nº10. Inoculando las diluciones de la vacuna en los huevos SPF.
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